Pembuatan Media Dan Inokulasi Bakteri

Pembuatan Media dan Inokulasi Bakteri
BAB I
PENDAHULUAN
A.
Latar Belakang.
Mikroorganisme adalah adalah mahluk hidup yang terbagi 3 yaitu yang
bersifat eukariotik, prokariotik, dan virus. Baik ketiga jenis mikroorganime ini
dalam kehidupannya memerlukan makanan untuk pertumbuhannya. Dalam
percobaan mikrobiologi, tidak dapat diamati suatu mikroorganisme yang
diinginkan
tanpa
adanya
medium,
yang
merupakan
tempat
tumbuh
mikroorganisme tersebut.
Dalam medium harus terpenuhi segala kebutuhan mikroorganisme untuk
melangsungkan kehidupannya, seperti senyawa organik (protein, lemak, mineral
dan vitamin). Untuk mendukung suatu penelitian terhadap mikroorganisme,
diperlukan suatu tempat atau lingkungan bagi pertumbuhan dan perkembangan
mikroorganisme. Mikroorgaisme tentunya memerlukan sumber atau medium
pertumbuhan yang khas sesuai dengan kebutuhan akan zat-zat atau mineral bagi
perkembangan serta reproduksinya.mikroorganisme pada dasarnya dapat hidup
dan tumbuh dimana saja di muka bumi ini.
Namun,
bagi
suatu
riset,
dibutuhkan
suatu
tempat
khusus
agar
mikrooraganisme ini dapat diteliti. Dan disinilah medium pertumbuhan dan

perkembangan organisme memegang peranan yang sangat penting.
Page 1

Perlu diketahui tentang jenis-jeins medium yang biasa digunakan untuk
membiakkan bakteri, mengisolasi, memperbanyak dan menghitung jumlah
bakteri. Oleh karena itu dalam percobaan kali ini, akan dibuat berbagai jenis
medium baik yang sintetik maupun yang alami sebagai wadah / tempat
mikroorganisme tersebut tumbuh.
Ada beberapa cara yang dapat dilakukan untuk memperoleh biakan murni
dari suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan ialah
tehnik cawan gores dan tehnik cawan tuang. Kedua metode ini didasarkan pada
prinsip yang sama yaitu pengenceran organisme sedemikian sehingga individu
spesies dapat dipisahkan dari lainnya, dengan anggapan bahwa setiap koloni
terpisah yang tampak pada cawan Petri setelah inkubasi berasal dari satu sel
tunggal.
Dilingkungan sekitar kita terdapat berbagai macam jenis mikroba yang sangat
beraneka ragam dalam jumlah yang sangat banyak. Secara alami bakteri akan
ditemukan dalam populasi campuran, dimana dalam populasi tersebut terdapat
banyak macam dan jenis bakteri. Hanya dalam keadaan tertentu saja populasi ini
ditemukan dalam keadaan murni. Isolasi adalah cara untuk memisahkan
mikroorganisme tertentu dari lingkungan sehingga diperoleh biakan yang sifatnya
murni. Sedangkan inokulasi adalah proses memindahkan mikroorganisme dari
medium yang lama ke medium yang baru. Dalam setiap perlakuan metode isolasi
dan inokulasi dilakukan secara aseptis.
Page 2

I.2 Rumusan Masalah.
Rumusan masalah pada percobaan ini adalah :
-
Mengetahui medium untuk pertumbuhan bakteri dan jamur serta

mengetahui bagaimana langkah-langkah pembuatan medium Nutrien
Agar (NA), Potato Desktrosa Agar (PDA), Plate Count Agar (PCA), dan
Peptone Water (PW) ?
Bagaimana cara mengisolasi dan melihat mikroorganisme disekitar kita

dan bagaimana cara menginokulasi mikroorganisme yang murni dan
melihat morfologinya ?
I.3 Tujuan Praktikum

Tujuan dari percobaan ini adalah
-
Untuk mengetahui cara pembuatan medium Nutrien Agar (NA), Nutrien

Broth (NB), Potato Dekstrose Agar (PDA), Plate Count Agar (PCA), dan
Peptone Water (PW).
Untuk
mengetahui
dan
memahami
cara
penaman
inokulasi
mikroorganisme yang ada disekitar kita.
Page 3

BAB II
KAJIAN PUSTAKA
II.1 Teori Umum.
Pembiakan diperlukan untuk mempelajari sifat bakteri untuk dapat
mengadakan
identifikasi,
determinasi,
atau
diferensiasi
jenis-jenis
yang
ditemukan. Pertumbuhan ketahanan bakteri tergantung pada pengaruh luar seperti

makanan (nutrisi), atmosfer, suhu, lengas, konsentrasi ion hydrogen, cahaya dan
berbagai zat kimia yang dapat menghambat atau membunuh. (Irianto, 2006)
Lingkungan
kita mengandung beraneka ragam mikroorganisme dalam
jumlah yang berbeda-beda. Keadaan
lingkungan
menentukan jumlah dan
jenis mikroorganisme yang dominan dalam lingkungan tersebut (Rusli, 2008).

Dalam
kehidupan
sehari-hari
selalu kita berhubungan dengan berbagai
macam mikroorganisme, baik bakteri, kapang

mempermudah dalam
mempelajari
maupun khamir. Untuk
jenis dan sifat
mikroorganisme, maka
mikroorganisme terebut harus diisolasi dari lingkungan dipelihara pada

medium yang sesuai untuk pertumbuhan (Rusli, 2008).
Medium yang digunakan untuk mengembangbiakan bakteri dilaboratorium
dapat dibedakan
dalam ; pembiakan dasar, medium
medium pembiakan
selektif,
dimaksud dengan medium
pembiakan penyubur,
dan cara mendapatkan biakan murni. Yang
pembiakan
dasar adalah medium
pembiakan
sederhana yang mengandung zat-zat yang umum diperlukan oleh sebagian besar
Page 4

mikroorganisme. Sedangkan
medium pembiakan penyubur dibuat dari medium
pembiakan dasar dengan penambahan zat-zat lain untuk
mempersubur
pertumbuhan bakteri tertentu yang pada medium pembiakan dasar tidak dapat
tumbuh dengan baik. Dan
medium
pembiakan selektif digunakan untuk
menyeleksi bakteri yang diperlukan dari campuran dengan bakteri-bakteri lain

yang terdapat dalam bahan pemeriksaan (Dwidjoseputro, 1989).
Dalam memperoleh mikroorganisme sebagai sumber biakan murni, ada dua
cara yang sering digunakan yaitu metode goresan atau streak plate methode dan
metode tuang atau pour plate method. Cawan Petri yang mengandung medium
yang dipadatkan dengan penambahan agar. Campuran antara zat makanan atau
nutrient tersebut dengan agar disebut medium. (Djide, 2004)
Dasar makanan yang paling baik bagi pemiaraan bakteri ialah medium yang
mengandung zat-zat organic seperti rebusan daging, sayur-sayuran, sisa-sisa
makanan atau ramuan-ramuan yang dibuat oleh manusia. Medium yang banyak
digunakan dalam pekerjaan rutin dilaboratorium adalah kaldu cair dan kaldu agar.
(Dwidjodeputro , 1989)
Jumlah medium yang digunakan dalam suatu percobaan harus diperhitungkan
sedemikian rupa untuk menghindarai pembuatan medium yang berlebihan karena
pada umumnya medium untuk pekerjaan mikrobiologi harganya sangat mahal.
Jumlah medium yang dibutuhkan dapat ditentukan berdasarkan bentuk medium
yang digunakan dalam jumlah / banyaknya pekerjaan dan banyaknya koloni yang
akan diperiksa. (Rusli, 2008)
Page 5

Medium pembiakan yang digunakan untuk mengembangbiakkan bakteri
dilaboratorium dapat dibedakan dalam medium pembiakan dasar, medium
pembiakan penyubur, medium pembiakan selektif, dan cara mendapatkan biakan
murni. (Irianto, 2006)
Jenis jenis media yang digunakan dalam analisa sel bakteri yaitu ;
1. Media dasar
Secara rutin media ini selalu tersedia di laboratorium, contohnya
nutrient broth, nutrient agar, infusion broth dan lain lain.
2. Media enriched
Media enriched adalah media yang mengandung bahan penambah
pertumbuhan guna meningkatkan kualitas, misalnya agar darah, agar coklat,
lofler medium. Media ini digunakan untuk organisme tertentu yang tidak
dapat tumbuh dalam media umum karena mereka membutuhkan penambahan
darah, serum, glukosa, telur, dll.
3. Media enrichment
Media enrichment adalah media cair yang berisi bahan kimia yang
dapat menghambat beberapa flora normal dan memungkinkan pertumbuhan
bakteri pathogen yang mungkin terdapat dalam jumlah kecil dalam sample.
Jadi media ini digunakan untuk memperbanyak mikroba tersebut. Koloni dari
mikroba ini dapat ditumbuhkan pada media selektif. Contoh adalah BHIB,
BGLB, SCB.
Page 6

4. Media selektif
Media ini secara selektif menumbuhkan bakteri patogen yang
diinginkan sesuai komposisi media dan menghambat bakteri komensal. Jenis
bakteri ini dibedakan berdasarkan warna dan kekeruhan media. Contoh madia
CETA, VJA dsb.
5. Transport madia
Media ini digunakan untuk mengirim sample dari suatu tempat
kelaboratorium pemeriksaan, contoh Carry and Blair, Amies Transport
Medium. (Pakadang, 2009)
Ada beberapa cara untuk menumbuhkan mikroorganisme pada medium, agar
kelihatan koloninya dengan jelas antara lain (Djide, 2003) :
a. Dengan menggunakan ose atau sengkelat, diinokulasikan mikroorganisme
pada permukaan medium dengan cara zig-zag, setelah diinkubasi akan
diperoleh pertumbuhan mikroorganisme, maka diperoleh piaraan lempeng
atau Streak Culture.
b. Dengan cara menggoreskan inokulum dengan ose pada agar miring, maka
diperoleh piaraan agar miring atau Slank Culture.
c. Dengan cara menusukkan inokulum dengan ose lurus ke dalam medium agar
setengah padat dalam tabung reaksi, dan permukaan mediumnya tidak miring,
maka diperoleh piraan tusukan atau Stab Culture.
d. Setetes suspensi mikroorganisme dicampur dengan medium yang masih cair,
dengan demikian diperoleh piraan adukan atau Shake Culture.
Page 7

Pekerjaan memindahkan mikroba dari medium lama ke medium yang baru
harus dilaksanakan secara teliti. Terlebih dahulu harus diusahakan agar semua
alat-alat yang sangkut paut dengan medium dan pekerjaan inokulasi (penanaman)
itu benar-benar steril : Hal ini untuk mgenghindari kontaminasi
yakni
mikroorganisme yang tidak di inginkan.

Ada beberapa cara untuk memperoleh biakan murni yaitu ((Dwidjoseputro,1989)
a. Cara Penggarisan
Cara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan
pada bentuk
lempeng. Bila dilakukan dengan baik cara ini adalah yang paling praktis.
b. Cara Tuang
Isolasi bakteri dengan cara tuang ini umumnya dilakukan untuk
menentukan perkiraan jumlah bakteri hidup dalam suatu cairan, misalnya
air, susu dan lain sebagainya.
c. Cara menanam dalam medium pembiakan miring
Untuk mendapatkan pembiakan miring maka penanaman bahannya diambil
dengan jarum dari koloni pada lempeng pembiakan.
II.2 Uraian Bahan
1. Agar (Dirjen POM, 1979 hal. 74)
Nama resmi
Agar
Sinonim
Agar-Agar
Page 8

Pemerian
Berkas potongan memanjang, berlekatan atau berbentuk

keping, serpih atau butiran, jingga lemah kekuningan
sampai kuning pucat atau berwarna, tidak berbau atau
lemah, rasa berlendir.
Kelarutan
Praktis tidak larut dalam air , dan larut dalam air

mendidih.
Penyimpanan
Dalam wadah tertutup baik.
Kegunaan
Sebagai komposisi medium
3. Dextrosa (Dirjen POM, 1979 hal. 268)

Nama resmi
Dextrosum / Glucosum
Sinonim
Glukosa
RM / BM
C6H12O6.H2O / 198,17
Rumus Bangun :
CH2OH O
OH
OH
OH
Pemerian
OH
Hablur tidak berwarna, serbuk hablur atau butiran putih;

tidak berbau; rasa manis.
Kelarutan
Mudah larut dalam air; sangat mudah larut dalam air

mendidih; agak sukar larut dalam etanol (95%) P
Penyimpanan
Kegunaan

Page 9

4. Peptone (Dirjen POM, 1979 hal. 721)
Nama Resmi
: Peptone
Sinonim
: Peptone Kering
Pemerian
Serbuk; kuning kemerahan sampai coklat; bau khas, tidak

busuk.
Kelarutan
Larut dalam air; memberikan larutan berwarna coklat

kekuningan yang bereaksi agak asam; praktis tidak larut
dalam etanol (95 %) P dan dalam eter P.
Penyimpanan
Kegunaan
Page 10

BAB III
METODE KERJA
A.
Alat dan bahan yang digunakan.

1.
Alat yang digunakan

a. Autoklaf
f. Lampu spiritus
b. Cawan petri
g. Rak tabung
c. Tabung reaksi
h. Spoit
d. Timbangan analitik
i. Tissue roll
e. Ose bulat dan lurus
j. Kapas
f. LAF
2.
Bahan yang digunakan.

a. Medium NA
e. Bakteri Escherichha Coli
b. Medium PCA
f. Bakteri Vibrio Cholera
c. Medium PDA
g. Jamur Aspergillus
d. Medium PW
B. Cara Kerja
1.
Pembuatan medium PDA (Potato Dextrosa Agar)

a. Labu erlenmeyer yang akan digunakan terlebih dahulu dicuci
dengan bersih dan dilap hingga benar benar kering.
b. Di hitung berapa banyak media PDA yang akan kita gunakan.
c. Masukkan PDA yang telah ditimbang kedalam labu Erlenmeyer.
Page 11

d. Kemudiaan dilarutkan dengan aquades secukupnya.
e. Kocok hingga homogen.
f. Sumbat dengan kapas, siap untuk disterilkan (masukan dalam
autoklaf).
Pembuatan Media Miring

1. Media agar yang ada di Labu Erlenmeyer dipanaskan, kemudian
dimasukkan ke dalam tabung reaksi sambil didekatkan di bunsen.
2. Tabung reaksi ditutup dengan kapas lalu, diletakkan pada posisi
miring.
Pembuatan Media Tegak

dimasukkan ke dalam tabung reaksi sambil didekatkan di bunsen.
2. tabung reaksi ditutup dengan kapas lalu, diletakkan pada posisi tegak
di rak tabung reaksi
Pembuatan metode gores

dimasukkan ke dalam cawan petri sambil didekatkan di bunsen,
dinginkan.
2. Setelah dingin, goreskan mikroba diatas medium. Kemudian balik
cawan petri, agar uap yang ada dalam cawan tidak turun ke
percobaan.
Page 12
Pembutan metode tuang

1. Mikroba dimasukkan kedalam cawan petri sebanyak 0,5 ml,
diambil menggunakan spoit.
2. Masukkan medium,digoyang goyangkan
dengan perlahan
lahan agar homogen.
Page 13

BAB IV
PEMBAHASAN
Pembahasan
1. Tabel Pengamatan
Nama Media
Nama Bakteri / jamur
Jumlah koloni yang

tumbuh
Media NA gores
Bakteri Vibrio Cholera
145 koloni bakteri
Media PDA gores
Jamur Aspergillus
85 koloni bakteri
Media PCA tuang
Bakteri Escherichha Coli
Tidak ada (TBUD)
Media PDA tuang
Jamur Aspergillus
Tidak ada ( TBUD)
Media NA miring
Tumbuh
Media NA tegak
Tumbuh
Media PDA miring
Jamur Aspergillus
Tumbuh
Media PDA tegak
Jamur Aspergillus
Tumbuh
Media PW bakteri
Tumbuh
Media PW jamur
Jamur Spergillus
Tumbuh
Medium adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrisi yang
digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya.
Medium pembiakan yang digunakan untuk mengembangbiakkan bakteri
dilaboratorium dapat dibedakan dalam medium pembiakan dasar, medium
pembiakan penyubur, medium pembiakan selektif, dan cara mendapatkan biakan
Page 14

murni.
Sedangkan
inokulasi
adalah
suatu
cara
pengembangbiakan
mikroorganisme pada medium yang cocok.

Pada percobaan inokulasi metode yang digunakan adalah metode agar tegak
yang menggunakan ose lurus untuk mengambil sampel dengan cara dicelupkan
saja, dan agar miring menggunakan ose bulat untuk mengambil sampel dengan
cara bentuk zig-zag.
Untuk menginokulasikan jamur yang digunakan dalam percobaan ini
dibutuhkan waktu 3x24 jam karena proses pertumbuhan jamur membutuhkan
waktu 3 sampai 5 hari untuk tumbuh sempurna sedangkan bakteri
hanya
membutuhkan waktu optimum untuk tumbuh selama 1x24 jam.

Pada percobaan ini medium yang dibuat adalah medium NA, PDA, PCA, dan PW.
Dari keempat medium tersebut memiliki perbedaan satu sama lainnya dan
semuanya memiliki karakteristik dan kegunaan yang berbeda-beda. Seperti pada :
a. Medium PDA
Berdasarkan konsistensinya termasuk medium padat (solid medium), karena
medium dipadatkan dengan agar. Medium PDA termasuk medium umum
berfungsi untuk mengembangbiakkan jamur Bahan-bahan serta fungsi yang
terkandung dalam medium PDA yaitu :
Kentang
Berfungsi sebagai sumber vitamin, nitrogen organik dan

senyawa-senyawa karbon.
Dekstrose
Berfungsi sebagai sumber karbon

Page 15

Agar
Sebagai zat yang memadatkan medium
Aquadest
Sebagai pelarut untuk menghomogenkan
medium dan
sumber O2
b. Medium NA (Nutrien agar)
Medium NA berdasarkan konsistensinya termasuk medium padat (solid
medium), karena berbentuk padat. Sedangkan berdasarkan fungsinya
termasuk dalam medium umum digunakan untuk menumbuhkan bakteri.
Didalamnya terkandung bahan-bahan yang berfungsi sebagai :
Ekstrak beef
Sumber vitamin, asam amino dan garam-garam
Pepton
Sumber utama nitrogen organik
Agar
Sebagai zat yang memadatkan medium
Aquadest
Pelarut untuk menghomogenkan medium dan sebagai

sumber O2.
Pada metode tuang keuntungannya yaitu data yang diperoleh valid dan
kerugiannya yaitu jumlah medium yang digunakan lebih banyak daripada metode
sebar dan metode tabur. Sedangkan pada percobaan inokulasi metode agar miring
dan metode lurus dapat digunakan untuk dapat membandingkan pertumbuhan dari
bakteri.
Dari hasil pengamatan pada percobaan inokulasi yang telah dilakukan
bahwa untuk menumbuhkan mikroba biasanya digunakan medium padat dan
Page 16

medium cair dimana pada medium padat, dibuat medium tegak dan medium
miring. Hal ini dimaksudkan untuk dapat membandingkan pertumbuhan dari
bakteri. Agar miring merupakan suatu bentuk medium yang digunakan untuk
membiakkan mikroba, terutama yang bersifat aerobik atau aerobik fakultatif,
sedangkan agar tegak sering digunakan dalam uji motilitas mikroba sehingga pada
percobaan inokulasi metode ini yang digunakan. Agar digunakan sebagai pemadat
karena agar merupakan sumber protein yang dibutuhkan bakteri untuk melakukan
pertumbuhan.
Pada percobaan ini dilakukan inokulasi biakan bakteri dan jamur, di mana
bakteri yang diinokulasikan adalah bakteri : Escherichha Coli dan Vibrio Cholera
serta jamur Aspergillus. Untuk inokulasi biakan bakteri ditumbuhkan pada
medium NA gores, PCA tuang, NA miring, NA tegak, dan PW sedangkan untuk
jamur ditumbuhkan pada medium PDA tegak, miring dan tuang serta PW di mana
setelah diinokulasi terlihat berbagai bentuk pertumbuhan dari mikroba tersebut.
Page 17

BAB V
PENUTUP
V.1 Kesimpulan.
Mikroba yang tumbuh pada medium PDA berupa jamur, sedangkan
medium NA dan PCA berupa bakteri. Namun pada medium PW ada yang
berupa bakteri, ada juga yang berupa jamur. Tumbuhnya mikroorganisme
pada medium PW ditandai dengan perubahan warnanya dari biru tua menjadi
kuning.
Biakan murni didapat dari suatu biakan bakteri campuran. Biakan murni
tersebut diinokulasikan di dalam medium agar miring. Cara memindahkan
bakteri tersebut dengan menggunakan jarum inokulasi yang dioleskan
kepermukaan medium agar miring tersebut secara zigzag. Jika berhasil maka
dalam tabung yang berisi media tersebut hanya akan terlihat satu jenis bakteri
yang tumbuh dan berkembang.
V.2 Saran.
Dalam percobaan kali ini praktikan sangat mengharapkan petunjuk dari
para asisten, agar dapat berhati hati dalam melakukan praktikum mengingat
bahan percobaan yang mengandung mikroba yang bisa saja mengkontaminasi
praktikan.
Page 18

DAFTAR PUSTAKA
Djide, M.Natsir. 2003 . Mikrobiologi Farmasi Dasar. Fakultas MIPA UNHAS.

Makassar.
Djide. 2004. Mikrobiologi Farmasi Dasar. UNHAS : Makassar.
Dwidjoseputro. 1989. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Penerbit Djambatan. Malang.
Irianto. 2006. Mikrobiologi, Jilid I. Yrama Widya : Bandung.
Pakadang, Sesilia R. 2009. Buku Penuntun Praktikum Mikrobiologi

Farmasi. Jurasan Farmasi Politeknik Kesehatan Depkes Makassar :
Makassar.
Rusli, 2008. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi Dasar. Fak. Farmasi

UMI, Makassar.
Page 19

Lampiran.
Gambar
Laboratorium Mikrobiologi Farmasi
Jurusan Farmasi
Jurusan Farmasi
Politeknik kesehatan Depkes Makassar
Media NA gores
Media PDA gores
Jamur Aspergillus
Jurusan Farmasi
Jurusan Farmasi
Media PCA tuang
Media PDA tuang
Jamur Aspergillus
Page 20

Jurusan Farmasi
Jurusan Farmasi
Media NA miring
Media PDA miring
Jamur Aspergillus
Jurusan Farmasi
Jurusan Farmasi
Media NA tegak
Media PDA tegak
Jamur Aspergillus
Jurusan Farmasi
Jurusan Farmasi
Media PW
Media NA miring
JAmur Aspergillus
Page 21

Pembuatan Media Dan Inokulasi Bakteri

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Pembuatan Media Dan Inokulasi Bakteri

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Pembuatan Media dan Inokulasi Bakteri

mikrooraganisme ini dapat diteliti. Dan disinilah medium pertumbuhan dan