PRAKTIKUM

PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Dalam bidang Mikrobiologi dikenal beberapa teknik pewarnaan terhadap

bakteri yang pada dasarnya adalah merupakan reaksi ikatan antara zat warna
dengan komponen-komponen pada bakteri terutama yang terdapat pada dinding
sel dan sitoplasma. Di antara sekian banyak teknik pewarnaan terhadap bakteri
yang sering dipakai dalam pelayanan medis adalah Pewarnaan Basil Tahan Asam
( BTA ). Oleh sebab itu diharapkan sekali mahasiswa kedokteran paham sekali
akan kedua teknik pewarnaan ini, baik dari segi dasar teoritis, aplikasi maupun
interpretasinya untuk pemanfaatan di bidang klinis.
Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) adalah termasuk teknik pewarnaan
bakteri yang umum dipakai untuk membantu penegakan diagnosa tuberculosis,
lepra, dan penyakit infeksi akibat Mycobacterium lainnya. Dua jenis penyakit
utama yang disebabkan oleh Mycobacterium patogen pada manusia adalah
tuberkulosis dan kusta. Selain kedua penyakit ini dikenal pula beberapa penyakit
lain

misalnya

Mycobacterium

bovis

dengan

hospes

utamanya

sapi,

Mycobacterium avium yang patogen terhadap burung, bahkan dikenal pula

mikobakteria atipik yang merupakan kuman oportunistik yang tidak jarang
menimbulkan penyakit pula pada manusia.
Dasar pewarnaan ini yaitu adanya kemampuan genus Mycobacterium
yang tetap mempertahankan zat warna utama (Carbol fuchsin) dan tidak luntur
(decolorized) walaupun dicuci dengan alkohol dan asam (HCl). Sifat tahan
terhadap pelunturan (decolorization) dengan asam inilah yang mendasari
keluarnya istilah Tahan Asam (Acid Fastness). Sedangkan bakteri maupun sel lain
termasuk sel-sel darah merah,sel-sel darah putih serta sisa-sisa jaringan akan
melepaskan zat warna utama ini. Bakteri genus Mycobacterium akan tampak
berwarna merah sedangkan selain bakteri ini akan diwarnai oleh zat warna latar
belakang (counter stain) yaitu berwarna biru (Methylen Blue). Kemampuan
mempertahankan zat warna utama (carbol fuchsin) pada genus Mycobacterium
disebabkan bakteri-bakteri ini mempunyai struktur dinding sel yang unik yaitu
banyak mengandung ikatan lemak (lipid) yang tebal.

Bahan pemeriksaan TB biasanya berupa sputum yang diambil dari pasien

tersangka KP (Koch pulmonum), tetapi dapat pula diambil dari lokasi lain seperti
cairan otak (Liquor Cerebro Spinalis), getah lambung, urine, ulkus, dll.
Hasil pemeriksaan BTA ini dilaporkan berdasarkan IUATLD (International Unit
Associated Treatment Lung Disease). Kriterianya adalah sebagai berikut:

Tidak ada BTA/100 LP: tidak ada BTA

1-9 BTA / 100 LP: hasil dilaporkan
10 99 BTA / 100 LP BTA: + (satu positif)
1-10 BTA /LP BTA: ++ (dua positif)
10 BTA /LP BTA: +++ (tiga positif)

Pewarnaan Ziehl Neelsen

Pewarnaan diferensial yang membedakan bakteri tahan asam dengan bakteri
yang bukan tahan asam.
Prinsip pewarnaan :
Bakteri tahan asam (BTA) tahan terhadap pencucian dengan alkohol asam, walau
telah dicuci dengan alkohol asam bakteri tahan asam tidak melepaskan zat
warna yang telah diikatnya.
Bakteri tahan asam akan berwarna merah, dan bakteri tidak tahan asam
berwarna biru.

Alat dan bahan :

1. Mikroskop
2. Objek gelas
3. Carbol Fuchsin 0,3 %
4. Alkohol Asam 3 % ( Alkohol + HCl konsentrasi 3 %)
5. Methylen Blue 0,3 %
6. Ose
7. Lampu Bunsen/Lampu spiritus
8. Oil Immersi

Cara membuat sediaan :

1. Bersihkan objek gelas, beri label
2. Sterilkan ose, dinginkan
3. Ambil 1 ose sputum yang kental (hijau kuning) letakkan diatas objek
gelas, ratakan.
4. Sediaan biarkan kering pada suhu kamar.
5. Setelah kering fiksasi denga melewatkkan diatas nyala api sebanyak 3
x, sediaan siap untuk diwarnai.

Cara Pewarnaan :
1. Sediaan dituangi Carbol Fuchsin sampai penuh
2. Panaskan selama 3-5 menit sampai keluar uap pertama jangan sampai
mendidih.
3. Biarkan dingin selama 5 menit
4. Cuci dengan air
5. Dekolorisasi dengan alkohol asam 10-30 detik.
6. Cuci dengan air
7. Tuangi dengan methylen blue selama 20-30 detik
8. Cuci dengan air

Tugas :
1. Melakukan pewarnaan
2. Mengamati dengan mikroskop
3. Menggambar hasil pengamatan.

LEMBAR HASIL PRAKTIKUM

BLOK 10 : MIKROBIOLOGI - PEWARNAAN
ZIEHL NEELSEN
5 SEPTEMBER 2016

NAMA
:
TANGGAL :

1.

2.

NIM
:
KELAS :