PRAKTIKUM

PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Dalam bidang Mikrobiologi dikenal beberapa teknik pewarnaan terhadap bakteri yang pada
dasarnya adalah merupakan reaksi ikatan antara zat warna dengan komponen-komponen pada
bakteri terutama yang terdapat pada dinding sel dan sitoplasma. Di antara sekian banyak teknik
pewarnaan terhadap bakteri yang sering dipakai dalam pelayanan medis adalah Pewarnaan Basil
Tahan Asam (BTA​). ​Oleh sebab itu diharapkan sekali mahasiswa kedokteran paham sekali akan
kedua teknik pewarnaan ini, baik dari segi dasar teoritis, aplikasi maupun interpretasinya untuk
pemanfaatan di bidang klinis.

Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) adalah termasuk teknik pewarnaan bakteri yang umum
dipakai untuk membantu penegakan diagnosa tuberculosis, lepra, dan penyakit infeksi akibat
Mycobacterium lainnya. Dua jenis penyakit utama yang disebabkan oleh Mycobacterium patogen
pada manusia adalah tuberkulosis dan kusta. Selain kedua penyakit ini dikenal pula beberapa
penyakit lain misalnya Mycobacterium bovis dengan hospes utamanya sapi, Mycobacterium avium
yang patogen terhadap burung, bahkan dikenal pula mikobakteria atipik yang merupakan kuman
oportunistik yang tidak jarang menimbulkan penyakit pula pada manusia.

Dasar pewarnaan ini yaitu adanya kemampuan genus Mycobacterium yang tetap
mempertahankan zat warna utama (​Carbol fuchsin​) dan tidak luntur (​decolorized​) walaupun dicuci
dengan alkohol dan asam (HCl). Sifat tahan terhadap pelunturan (​decolorization​) dengan asam inilah
yang mendasari keluarnya istilah Tahan Asam (​Acid Fastness​). Sedangkan bakteri maupun sel lain
termasuk sel-sel darah merah,sel-sel darah putih serta sisa-sisa jaringan akan melepaskan zat warna
utama ini. Bakteri genus ​Mycobacterium a​ kan tampak berwarna merah sedangkan selain bakteri ini
akan diwarnai oleh zat warna latar belakang (​counter stain)​ yaitu berwarna biru (​Methylen Blue​).
Kemampuan mempertahankan zat warna utama (​carbol fuchsin​) pada genus ​Mycobacterium
disebabkan bakteri-bakteri ini mempunyai struktur dinding sel yang unik yaitu banyak mengandung
ikatan lemak (lipid) yang tebal.

Bahan pemeriksaan TB biasanya berupa sputum yang diambil dari pasien tersangka KP (Koch
pulmonum), tetapi dapat pula diambil dari lokasi lain seperti cairan otak (Liquor Cerebro Spinalis),
getah lambung, urine, ulkus, dll.
 Hasil pemeriksaan BTA ini dilaporkan berdasarkan IUATLD (​International Unit Associated
Treatment Lung Disease​). Kriterianya adalah sebagai berikut:

● Tidak ada BTA/100 LP: tidak ada BTA

● 1-9 BTA / 100 LP: hasil dilaporkan
● 10 – 99 BTA / 100 LP BTA: + (satu positif)
● 1-10 BTA /LP BTA: ++ (dua positif)
● 10 BTA /LP BTA: +++ (tiga positif)

Pewarnaan Ziehl Neelsen

Pewarnaan diferensial yang membedakan bakteri tahan asam dengan bakteri yang bukan tahan
asam.

Prinsip pewarnaan :

Bakteri tahan asam (BTA) tahan terhadap pencucian dengan alkohol asam, walau telah dicuci dengan
alkohol asam bakteri tahan asam tidak melepaskan zat warna yang telah diikatnya.

Bakteri tahan asam akan berwarna merah, dan bakteri tidak tahan asam berwarna biru.

Alat dan bahan :

1. Mikroskop
2. Objek gelas
3. Carbol Fuchsin 0,3 %
4. Alkohol Asam 3 % ( Alkohol + HCl konsentrasi 3 %)
5. Methylen Blue 0,3 %
6. Ose
7. Lampu Bunsen/Lampu spiritus
8. Oil Immersi

Cara membuat sediaan :

1. Bersihkan objek gelas, beri label

2. Sterilkan ose, dinginkan
 3. Ambil 1 ose sputum yang kental (hijau kuning) letakkan diatas objek gelas, ratakan.
4. Sediaan biarkan kering pada suhu kamar.
5. Setelah kering fiksasi denga melewatkkan diatas nyala api sebanyak 3 x, sediaan siap
untuk diwarnai.

Cara Pewarnaan :

1. Sediaan dituangi Carbol Fuchsin sampai penuh

2. Panaskan selama 3-5 menit sampai keluar uap pertama jangan sampai mendidih.
3. Biarkan dingin selama 5 menit
4. Cuci dengan air
5. Dekolorisasi dengan alkohol asam 10-30 detik.
6. Cuci dengan air
7. Tuangi dengan methylen blue selama 20-30 detik
8. Cuci dengan air

Tugas :

1. Melakukan pewarnaan
2. Mengamati dengan mikroskop
3. Menggambar hasil pengamatan.
 LEMBAR HASIL PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN
05 Februari 2020

NAMA : NIM :
TANGGAL : KELAS :

1.

2. Langkah-langkah pewarnaan ziehl neelsen