PRAKTIKUM

PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Dalam bidang Mikrobiologi dikenal beberapa teknik

pewarnaan terhadap bakteri yang pada dasarnya adalah
merupakan reaksi ikatan antara zat warna dengan komponen-
komponen pada bakteri terutama yang terdapat pada dinding
sel dan sitoplasma. Di antara sekian banyak teknik pewarnaan
terhadap bakteri yang sering dipakai dalam pelayanan medis
adalah Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA). Oleh sebab itu
diharapkan sekali mahasiswa kedokteran paham sekali akan
kedua teknik pewarnaan ini, baik dari segi dasar teoritis,
aplikasi maupun interpretasinya untuk pemanfaatan di bidang
klinis.
Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) adalah termasuk
teknik pewarnaan bakteri yang umum dipakai untuk
membantu penegakan diagnosa tuberculosis, lepra, dan
penyakit infeksi akibat Mycobacterium lainnya. Dua jenis
penyakit utama yang disebabkan oleh Mycobacterium patogen
pada manusia adalah tuberkulosis dan kusta. Selain kedua
penyakit ini dikenal pula beberapa penyakit lain misalnya
Mycobacterium bovis dengan hospes utamanya sapi,
Mycobacterium avium yang patogen terhadap burung, bahkan
dikenal pula Mycobacterium atipik yang merupakan kuman
oportunistik yang tidak jarang menimbulkan penyakit pula
pada manusia.
Dasar pewarnaan ini yaitu adanya kemampuan genus
Mycobacterium yang tetap mempertahankan zat warna utama
(Carbol fuchsin) dan tidak luntur (decolorized) walaupun
dicuci dengan alkohol dan asam (HCl). Sifat tahan terhadap
pelunturan (decolorization) dengan asam inilah yang
mendasari keluarnya istilah Tahan Asam (Acid Fastness).
Sedangkan bakteri maupun sel lain termasuk sel-sel darah
merah,sel-sel darah putih serta sisa-sisa jaringan akan
melepaskan zat warna utama ini. Bakteri genus
Mycobacterium akan tampak berwarna merah sedangkan
selain bakteri ini akan diwarnai oleh zat warna latar belakang
(counter stain) yaitu berwarna biru (Methylen Blue).
Kemampuan mempertahankan zat warna utama (carbol
fuchsin) pada genus Mycobacterium disebabkan bakteri-
bakteri ini mempunyai struktur dinding sel yang unik yaitu
banyak mengandung ikatan lemak (lipid) yang tebal.
Bahan pemeriksaan TB biasanya berupa sputum yang
diambil dari pasien tersangka KP (Koch pulmonum), tetapi
dapat pula diambil dari lokasi lain seperti cairan otak (Liquor
Cerebro Spinalis), getah lambung, urine, ulkus, dll.
Hasil pemeriksaan BTA ini dilaporkan berdasarkan
IUATLD (International Unit Associated Treatment Lung
Disease). Kriterianya adalah sebagai berikut:
• Tidak ada BTA/100 LP: tidak ada BTA
• 1-9 BTA / 100 LP: hasil dilaporkan
• 10 – 99 BTA / 100 LP BTA: + (satu positif)
• 1-10 BTA /LP BTA: ++ (dua positif)
• 10 BTA /LP BTA: +++ (tiga positif)

Pewarnaan Ziehl Neelsen

Pewarnaan diferensial yang membedakan bakteri tahan asam
dengan bakteri yang bukan tahan asam.
Prinsip pewarnaan :
Bakteri tahan asam (BTA) tahan terhadap pencucian dengan
alkohol asam, walau telah dicuci dengan alkohol asam bakteri
tahan asam tidak melepaskan zat warna yang telah diikatnya.
Bakteri tahan asam akan berwarna merah, dan bakteri tidak
tahan asam berwarna biru.

Alat dan bahan :

1. Mikroskop
2. Objek gelas
3. Carbol Fuchsin 0,3 %
4. Alkohol Asam 3 % ( Alkohol + HCl konsentrasi 3 %)
5. Methylen Blue 0,3 %
6. Ose
7. Lampu Bunsen/Lampu spiritus
8. Oil Immersi

Cara membuat sediaan :

1. Bersihkan objek gelas, beri label
2. Sterilkan ose, dinginkan
3. Ambil 1 ose sputum yang kental (hijau kuning)
letakkan diatas objek gelas, ratakan.
4. Sediaan biarkan kering pada suhu kamar.
5. Setelah kering fiksasi denga melewatkkan diatas nyala
api sebanyak 3 x, sediaan siap untuk diwarnai.

Cara Pewarnaan :
1. Sediaan dituangi Carbol Fuchsin sampai penuh
2. Panaskan selama 3-5 menit sampai keluar uap pertama
jangan sampai mendidih.
3. Biarkan dingin selama 5 menit
4. Cuci dengan air
5. Dekolorisasi dengan alkohol asam 10-30 detik.
6. Cuci dengan air
7. Tuangi dengan methylen blue selama 20-30 detik
8. Cuci dengan air
Tugas :
1. Melakukan pewarnaan
2. Mengamati dengan mikroskop
3. Menggambar hasil pengamatan.

LEMBAR HASIL PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI - PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN
14 Juli 2021

NAMA : NIM :
TANGGAL : KELAS :

1. Gambar Basil Tahan Asam (BTA)

2. Cara Kerja Pewarnaan Ziehl-Nelseen