PENETAPAN KADAR PEWARNA SINTETIK TARTRAZIN

DALAM MINUMAN BERENERGI SECARA

SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

OLEH
MUHAMMAD FATHURRACHMAN FAUZI
NPM P2.31.35.0.09.026

JURUSAN ANALISA FARMASI DAN MAKANAN

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES JAKARTA II
2012
PENETAPAN KADAR PEWARNA SINTETIK TARTRAZIN
DALAM MINUMAN BERENERGI SECARA
SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

Karya Tulis Ilmiah Ini Diajukan sebagai Syarat Untuk Memperoleh

Gelar Ahli Madya Analisa Farmasi dan Makanan

OLEH
MUHAMMAD FATHURRACHMAN FAUZI
NPM P2.31.35.0.09.026

JURUSAN ANALISA FARMASI DAN MAKANAN

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES JAKARTA II
2012
 LEMBAR PERSETUJUAN

Karya Tulis Ilmiah (KTI) dengan judul

Penetapan Kadar Pewarna Sintetik Tartrazin dalam Minuman Berenergi
secara Spektrofotometri UV-Vis

Disusun oleh : Muhammad Fathurrachman Fauzi (P2.31.35.0.09.026)

telah disetujui untuk dipertahankan di hadapan Tim Penguji Karya Tulis Ilmiah
Jurusan Analisa Farmasi dan Makanan Politeknik Kesehatan Kemenkes Jakarta II
dalam rangka Ujian Akhir Program untuk memenuhi syarat guna memperoleh
Gelar Ahli Madya Analisa Farmasi dan Makanan.

Jakarta, 27 April 2012

Pembimbing Utama, Pembimbing Pendamping,

Dra. Misde Yola, MPd Drs. I Nyoman Rika, Apt

NIP. 19661008 199403 2 003 NIP. 19450714 196508 1 001

i
 ABSTRAK

Muhammad Fathurrachman Fauzi, Penetapan Kadar Pewarna Sintetik

Tartrazin dalam Minuman Berenergi secara Spektrofotometri UV-Vis, dibawah
bimbingan Dra. Misde Yola, Mpd., dan Drs. I Nyoman Rika, Apt., 2012

Telah dilakukan identifikasi dan penetapan kadar terhadap pewarna sintetik

tartrazin dalam sampel minuman berenergi. Identifikasi dilakukan dengan metode
kromatografi kertas dan didapat hasil sampel positif mengandung tartrazin, maka
pengujian dilanjutkan ke penetapan kadar. Penetapan kadar dilakukan secara
spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 428 nm setelah sampel
diekstraksi terlebih dahulu, dan didapat kadar rata-rata sebesar 34,75 mg/kg.

ii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT yang telah

melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulisan karya tulis ilmiah
dengan judul Penetapan Kadar Pewarna Sintetik Tartrazin dalam Minuman
Berenergi secara Spektrofotometri UV-VIs ini dapat terselesaikan dengan baik.
Adapun karya tulis ilmiah ini penulis selesaikan sebagai salah satu syarat
kelulusan Program Diploma III Jurusan Analisa Farmasi dan Makanan Politeknik
Kesehatan kementerian Kesehatan Jakarta II.
Dalam penyelesaian karya tulis ilmiah ini, penulis menemui beberapa
kesulitan dan hambatan, namun berkat bimbingan, bantuan, dan dukungan dari
berbagai pihak, karya tulis ilmiah ini dapat terselesaikan. Untuk itu penulis
mengucapkan terima kasih kepada :
1. Orang tua penulis, Bapak dan Ibu tercinta yang telah mendoakan dan
memberikan dukungan baik moral maupun materil hingga
terselesaikannya karya tulis ilmiah ini.
2. Bapak Joko Sulistiyo, ST., M.Si., selaku Ketua Jurusan Analisa Farmasi
dan Makanan Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Jakarta II.
3. Ibu Dra. Misde Yola, MPd., selaku pembimbing utama yang telah
membantu dalam penulisan karya tulis ilmiah ini.
4. Bapak Drs. I Nyoman Rika, Apt., selaku pembimbing pendamping yang
telah membantu penulisan karya tulis ilmiah ini.
5. Segenap dosen dan staf pembimbing Jurusan Analisa Farmasi dan
Makanan yang telah memberikan bimbingan selama penulis menuntut
ilmu di kampus Analisa Farmasi dan Makanan.
6. Teman-teman dan semua pihak yang turut membantu dalam penulisan
karya tulis ilmiah ini yang tidak dapat dituliskan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa karya tulis ilmiah ini masih jauh dari sempurna,
oleh karena itu kritik dan saran yang bersifat membangun diharapkan demi
penyempurnaan karya tulis ilmiah ini. Harapan penulis karya tulis ilmiah ini dapat

iii
bermanfaat bagi kita semua, khususnya bagi mahasiswa Analisa Farmasi dan
Makanan Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Jakarta II.

Jakarta, Maret 2012

Penulis

iv
 DAFTAR ISI

LEMBAR PERSETUJUAN .................................................................................. i

ABSTRAK ............................................................................................................. ii

KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii

DAFTAR ISI .......................................................................................................... v

DAFTAR TABEL ................................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. x

B A B I PENDAHULUAN .................................................................................... 1

1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1

1.2 Perumusan Masalah ...................................................................................... 2

1.3 Pembatasan Masalah ..................................................................................... 2

1.4 Tujuan ........................................................................................................... 3

1.4.1 Tujuan Umum ........................................................................................ 3

1.4.2 Tujuan Khusus ....................................................................................... 3

1.5 Manfaat ......................................................................................................... 3

1.5.1 Bagi Mahasiswa ..................................................................................... 3

1.5.2 Bagi Masyarakat..................................................................................... 3

1.6 Waktu dan Lokasi Pengujian ........................................................................ 3

1.6.1 Waktu Pengujian .................................................................................... 3

1.6.2 Lokasi Pengujian .................................................................................... 3

B A B I I TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................... 4

2.1 Kerangka Teori.............................................................................................. 4

2.1.1 Bahan Tambahan Makanan .................................................................... 4

2.1.2 Pewarna .................................................................................................. 5

2.1.2.1 Pewarna Alami ................................................................................ 5

v
 2.1.2.2 Pewarna Sintetis .............................................................................. 6

2.1.2.3 Efek Terhadap Kesehatan ............................................................... 7

2.1.2.4 Tartrazin .......................................................................................... 9

2.1.3 Minuman Berenergi ............................................................................. 10

2.1.4 Ekstraksi ............................................................................................... 11

2.1.4.1 Pengertian ...................................................................................... 11

2.1.4.2 Prinsip Ekstraksi ........................................................................... 12

2.1.4.3 Klasifikasi Ekstraksi ..................................................................... 12

2.1.4.4 Teknik Ekstraksi............................................................................ 13

2.1.5 Kromatografi Kertas............................................................................. 14

2.1.6 Spektrofotometri UV-Vis ..................................................................... 16

2.1.6.1 Definisi .......................................................................................... 16

2.1.6.2 Prinsip Dasar ................................................................................. 16

2.1.6.3 Pelarut yang Baik .......................................................................... 17

2.1.6.4 Analisa Kualitatif .......................................................................... 19

2.1.6.5 Analisa Kuantitatif ........................................................................ 19

2.1.7 Analisis Data secara Statistik ............................................................... 21

2.2 Kerangka Konsep ........................................................................................ 22

B A B I I I METODE PENGUJIAN ..................................................................... 23

3.1 Prosedur ...................................................................................................... 23

3.1.1 Identifikasi Pewarna Sintetik Tartrazin ................................................ 23

3.1.2 Penetapan Kadar Pewarna Sintetik Tartrazin ....................................... 23

3.2 Modifikasi Prosedur .................................................................................... 24

3.2.1 Identifikasi Pewarna Sintetik Tartrazin ................................................ 24

3.2.2 Penetapan Kadar Pewarna Sintetik Tartrazin ....................................... 25

3.3 Alat dan Bahan ............................................................................................ 25

vi
 3.3.1 Alat ....................................................................................................... 25

3.3.2 Bahan ................................................................................................... 25

3.4 Langkah Kerja ............................................................................................. 26

3.4.1 Identifikasi Tartrazin ............................................................................ 26

3.4.2 Penetapan Kadar Tartrazin ................................................................... 27

3.5 Persyaratan .................................................................................................. 28

3.6 Rumus Perhitungan ..................................................................................... 28

3.6.1 Rumus Harga Rf Sampel dan Baku ..................................................... 28

3.6.2 Rumus Penetapan Kadar ...................................................................... 28

3.6.3 Rumus Perhitungan secara Statistik ..................................................... 28

B A B I V HASIL PENGUJIAN DAN PEMBAHASAN .................................... 30

4.1 Data Pengujian ............................................................................................ 30

4.1.1 Data Sampel ......................................................................................... 30

4.1.2 Data Baku ............................................................................................. 30

4.1.3 Data Penimbangan Sampel dan Baku .................................................. 30

4.1.4 Hasil Pengukuran Serapan Maksimum Baku dan Sampel Pewarna

Tartrazin ........................................................................................................ 31

4.2 Perhitungan ................................................................................................. 31

4.2.1 Perhitungan Harga Rf........................................................................... 31

4.2.2 Perhitungan Penetapan Kadar .............................................................. 32

4.2.3 Perhitungan Data secara Statistik ......................................................... 33

4.3 Hasil Pengujian dan Persyaratan ................................................................. 34

4.3.1 Hasil ..................................................................................................... 34

4.3.2 Persyaratan ........................................................................................... 35

4.4 Pembahasan ................................................................................................. 35

B A B V SIMPULAN DAN SARAN .................................................................. 37

vii
 5.1 Simpulan ..................................................................................................... 37

5.2 Saran ............................................................................................................ 37

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 38

LAMPIRAN ......................................................................................................... 39

LAMPIRAN ......................................................................................................... 40

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel 1 Sifat-sifat Bahan Pewarna Alami ............................................................... 6

Tabel 2 Bahan Pewarna Sintetis yang Diizinkan di Indonesia ............................... 7
Tabel 3 Data Penimbangan Sampel dan Baku Pewarna Tartrazin untuk
Identifikasi ............................................................................................... 30
Tabel 4 Data Penimbangan Sampel untuk Penetapan Kadar ................................ 31
Tabel 5 Hasil Pengukuran Serapan Maksimum Baku dan Sampel ....................... 31
Tabel 6 Harga Rf Sampel, Sampel+Baku, Baku ................................................... 34
Tabel 7 Kadar Pewarna Tartrazin dalam Minuman Berenergi ............................. 34

ix
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1 Rumus Bangun Tartrazin (C16H9N4O9S2Na3) ...................................... 10

Gambar 2 Konsep Pengujian................................................................................. 22

x
 B AB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Setiap makhluk hidup pada dasarnya memerlukan energi untuk hidup.
Manusia merupakan makhluk hidup yang tidak dapat menghasilkan energi sendiri
untuk hidupnya, atau biasa disebut makhluk heterotrof. Makhluk heterotrof
memerlukan asupan energi dari lingkungannya, yaitu makanan untuk diubah
menjadi energi.
Setiap orang memerlukan asupan makanan untuk menyediakan energi,
membangun dan memelihara jaringan tubuh, serta mengatur proses-proses
kehidupan dalam tubuh. Proses hilangnya energi tubuh dan perlunya energi
pengganti merupakan proses alamiah yang terjadi pada setiap orang.
Makanan sehari-hari dengan pola diet seimbang pada umumnya dapat
mencukupi kebutuhan energi dalam keadaan normal. Namun demikian jika
orang melakukan aktivitas yang berlebihan maka dibutuhkan tambahan energi
dengan asupan yang sesuai.
Pada saat ini banyak beredar suplemen makanan yang digunakan untuk
pembangkit atau menambah energi. Suplemen makanan, pada dasarnya
merupakan suatu produk yang digunakan untuk melengkapi kebutuhan zat gizi
dan non gizi yang bermanfaat bagi tubuh. Pada dasarnya setiap orang memerlukan
asupan makanan yang cukup untuk melakukan aktivitas sehari-hari, utamanya
para olahragawan dan pekerja berat. Asupan makanan antara lain berfungsi untuk
menggantikan energi tubuh yang hilang akibat beraktivitas. Jika energi tersebut
tidak segera diganti maka orang tersebut akan kekurangan energi, sehingga
tubuhnya akan menjadi lemas, dan kurang bersemangat.
Suplemen makanan merupakan produk yang dapat melengkapi kebutuhan
zat gizi makanan, mengandung satu atau lebih bahan berupa vitamin, mineral,
asam amino atau bahan lain yang mempunyai nilai gizi dan atau efek fisiologis
dalam jumlah terkonsentrasi.

1
 Energy Drink termasuk salah satu suplemen makanan yang terdiri dari
komponen multivitamin, makronutrien (karbohidrat, protein), taurin dengan atau
tanpa kafein dan biasanya ditambahkan herbal seperti ginseng, jahe, dan
sebagainya dengan bentuk sediaan Cairan Obat Dalam (COD) dalam kemasan
botol bervolume 150 mL, 250 mL atau serbuk dan tablet yang dilarutkan menjadi
minuman, yang dalam setiap kemasannya mengandung energi minimal 100 kkal,
serta indikasinya adalah untuk menambah tenaga, kesegaran, stimulasi
metabolisme, memelihara kesehatan dan stamina tubuh, yang diminum pada saat
bekerja keras atau setelah berolah raga.
Minuman berenergi mengandung sumber energi dari sukrosa (gula) atau
maltodextrin. Minuman berenergi juga mengandung vitamin-vitamin yang terlibat
dalam metabolisme tubuh guna menghasilkan energi. (http://www.pom.go.id
diakses pada tanggal 14 Juni 2012 pukul 15.40 WIB)
Selain itu minuman berenergi juga biasa mengandung bahan tambahan lain
guna memperindah dan menampilkan bahwa kualitas yang dimilikinya adalah
yang terbaik. Selain dari sisi luar dan kemasan, minuman berenergi biasa
mengandung pewarna dalam produknya.

1.2 Perumusan Masalah

Masalah yang diangkat dalam pengujian ini adalah apakah kadar pewarna
tartrazin yang terkandung dalam minuman berenergi sesuai dengan persyaratan
Permenkes RI No.722/Menkes/Per/IX/88 ?

1.3 Pembatasan Masalah

Penelitian ini membatasi pengujian dengan melakukan identifikasi pewarna
tartrazin dalam minuman ringan berenergi kemasan gelas secara kromatografi
kertas setelah diisolasi menggunakan benang wool dan dilanjutkan dengan
Penetapan Kadar minuman berenergi secara Spektrofotometri Ultra Violet Cahaya
- tampak.

2
1.4 Tujuan
1.4.1 Tujuan Umum
Mengetahui atau mendapat informasi tentang mutu produk minuman
berenergi sehingga konsumen dapat menentukan pilihannya.

1.4.2 Tujuan Khusus

Mengetahui kadar pewarna tartrazin yang terkandung dalam minuman
ringan berenergi yang diuji memenuhi persyaratan atau tidak.

1.5 Manfaat
1.5.1 Bagi Mahasiswa
Penelitian ini diharapkan dapat menambah wawasan dan pengetahuan,
serta dapat menerapkan ilmu teori dan praktikum yang telah didapatkan
selama pendidikan, sehingga menjadi analis yang terdidik, terlatih dan
mampu melakukan tugas dalam rangka pengawasan mutu.

1.5.2 Bagi Masyarakat

Memberikan informasi kepada masyarakat agar lebih berhati-hati
dalam memilih minuman berenergi yang beredar di pasaran untuk
dikonsumsi.

1.6 Waktu dan Lokasi Pengujian

1.6.1 Waktu Pengujian
9-31 Mei 2012

1.6.2 Lokasi Pengujian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Analisa Makanan dan Minuman
Jurusan Analisa Farmasi dan Makanan Politeknik Kesehatan Kementerian
Kesehatan Jakarta II, Jl Raya Ragunan No. 29 C Pasar Minggu, Jakarta
Selatan.

3
 B AB I I
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kerangka Teori

2.1.1 Bahan Tambahan Makanan
Makanan sebagai pemenuh kebutuhan manusia terdiri dari makanan
jadi dan makanan olahan. Makanan olahan adalah makanan yang secara
sengaja dibuat, dibentuk, dicetak, dan telah mengalami berbagai proses
pengolahan menjadi makanan jadi yang siap dikonsumsi masyarakat. Dalam
proses pengolahannya makanan sering ditambahkan beberapa bahan
tambahan untuk memperindah atau memperbaiki mutu makanan tersebut,
bahan-bahan yang sengaja ditambahkan dalam proses pengolahan makanan
tersebut dinamakan Bahan Tambahan Makanan (BTM).
Menurut Permenkes RI No: 722/MENKES/PER/IX/88 yang disebut
Bahan Tambahan Makanan adalah bahan yang biasanya tidak digunakan
sebagai makanan dan biasanya bukan merupakan ingredien khas makanan,
mempunyai atau tidak mempunyai nilai gizi, yang dengan sengaja
ditambahkan kedalam makanan untuk maksud teknologi (termasuk
organoleptik) pada pembuatan, pengolahan, penyiapan, perlakuan,
pengepakan, pengemasan, penyimpanan atau pengangkutan makanan untuk
menghasilkan atau diharapkan menghasilkan (langsung atau tidak langsung)
suatu komponen atau mempengaruhi sifat khas makanan tersebut.
Bahan tambahan makanan dapat dikelompokkan menjadi : antioksidan
(antioxidant), antikempal (anticaking agent), pengatur keasaman (acidity
regulator), pemanis buatan (artificial sweetener), pemutih dan pematang
tepung (flour treatment agent), penyedap rasa dan aroma (flavour), penguat
rasa (flavuor enhancer), pengemulsi (emulsifier), pemantap (stabilizer),
pengental (thickener), pengawet (preservative), pengeras (firming agent),
pewarna (colour), sekuestran (sequestrant).

4
2.1.2 Pewarna
Kehidupan manusia sehari-hari tidak lepas dari kegiatan konsumsi
makanan. Upaya menentukan pilihan dalam konsumsi makanan tersebut,
manusia sangat memperhatikan mutu dari makanan yang akan ia konsumsi.
Diantara faktor-faktor yang umumnya mempengaruhi mutu makanan, warna
sering kali menjadi faktor yang sangat bisa menentukan pilihan manusia,
selain karena secara visual warna tampil lebih dahulu, warna juga dapat
digunakan sebagai indikator kesegaran atau kematangan.
Ada beberapa hal yang dapat menyebabkan suatu bahan pangan
berwarna, antara lain dengan penambahan zat pewarna. Secara garis besar,
berdasarkan sumbernya dikenal dua jenis zat pewarna yang termasuk dalam
golongan bahan tambahan pangan, yaitu pewarna alami dan pewarna sintetis.

2.1.2.1 Pewarna Alami

Banyak warna cemerlang yang dipunyai oleh tanaman dan
hewan dapat digunakan sebagai pewarna untuk makanan. Beberapa
pewarna alami ikut menyumbangkan nilai nutrisi (karotenoid,
riboflavin, dan kobalamin), merupakan bumbu (kunir, dan paprika)
atau pemberi rasa (karamel) ke bahan olahannya.
Konsumen dewasa ini banyak menginginkan bahan alami
yang masuk dalam daftar diet mereka. Banyak pewarna olahan yang
tadinya menggunakan pewarna sintetik berpindah ke pewarna alami.
Sebagai contohnya serbuk beet menggantikan pewarna merah sintetik
FD & C No. 2. Namun, penggantian dengan pewarna alami secara
keseluruhan masih harus menunggu para ahli untuk dapat
menghilangkan kendala, seperti bagaimana menghilangkan rasa beet-
nya, mencegah penggumpalan dalam penyimpanan. Beberapa pewarna
alami yang berasal dari tanaman dan hewan, diantaranya adalah
klorofil, mioglobin, dan hemoglobin, anthosianin, flavonoid, tannin,
betalain, quinon, dan xanthon, serta karotenoid.

5
 Tabel 1 Sifat-sifat Bahan Pewarna Alami
Kelompok Warna Sumber Kelarutan Stabilitas
Gula
Karamel Cokelat Air Stabil
dipanaskan
Peka
Jingga merah
Anthosianin Tanaman Air terhadap
biru
panas dan pH
Stabil
Flavomoid Tanpa kuning Tanaman Air terhadap
panas
Stabil
Leucanthosi Tidak
Tanaman Air terhadap
anin berwarna
panas
Stabil
Tidak
Tannin Tanaman Air terhadap
berwarna
panas
Stabil
Batalain Kuning, merah Tanaman Air terhadap
panas
Tanaman Stabil
Quinon Kuning-hitam bakteria Air terhadap
lumut panas
Stabil
Xanthon Kuning Tanaman Air terhadap
panas
Stabil
Tanpa kuning- Tanaman/
Karotenoid Lipida terhadap
merah hewan
panas
Sensitif
Lipida
Klorofil Hijau, cokelat Tanaman terhadap
dan air
panas
Sensitif
Heme Merah, cokelat Hewan Air terhadap
panas
(Cahyadi, Wisnu. 2003: 62)

2.1.2.2 Pewarna Sintetis

Pewarna sintetis adalah pewarna yang dibuat dari bahan kimia
sintetis yang telah diciptakan oleh para ahli kimia.
Zat warna yang akan digunakan harus menjalani pengujian
dan prosedur penggunaanya, yang disebut proses sertifikasi. Proses
sertifikasi ini meliputi pengujian kimia, biokimia, toksikologi, dan
analisis media terhadap zat warna tersebut.

6
 Di Indonesia, peraturan mengenai penggunaan zat pewarna
yang diizinkan dan dilarang untuk pangan diatur melalui SK Menteri
Kesehatan RI Nomor 722/Menkes/Per/IX/88 mengenai bahan
tambahan pangan.
Tabel 2 Bahan Pewarna Sintetis yang Diizinkan di Indonesia
Nomor Indeks Batas
Pewarna Warna Maksimum
(C.I.No) Penggunaan
Amaranth: CI
Amaran 16185 Secukupnya
Food Red 9
Brilliant Blue
Biru berlian 42090 Secukupnya
FCF: CI
Food red 2
Eritrosin 45430 Secukupnya
Erithrosin: CI
Food red 14
Hijau FCF Fast green FCF: 42053 Secukupnya
CI
Food green 3
Hijau S Green S: CI. 44090 Secukupnya
Food
Green 4
Indigotin Indigotin: CI. 73015 Secukupnya
Food
Blue I Ponceau
Ponceau 4R 16255 Secukupnya
4R : CI
Kuning Food red 7 74005 Secukupnya
Quineline yellow
Kuinelin CI. Food yellow 15980 Secukupnya
13
Sunset yellow
Kuning FCF FCF CI. Food - Secukupnya
yellow 3
Riboflavin Riboflavina 19140 Secukupnya
Tartrazin Tartrazine Secukupnya
(Cahyadi, Wisnu. 2008: 64)

2.1.2.3 Efek Terhadap Kesehatan

Bahan pewarna sintetis yang telah dihasilkan oleh para ahli
kimia berasal dari coal-tar. Pewarna buatan sangat disenangi oleh para
ahli teknologi untuk pewarnaan barang-barang industri, baik untuk
industri pangan maupun untuk industri nonpangan. Meskipun
sebenarnya beberapa pewarna tersebut bersifat toksik.

7
 Mula-mula para ahli teknologi ini tidak memikirkan pewarna
buatan/sintetis coal-tar ada yang berbahaya bagi kesehatan manusia,
dalam kenyataannya bahkan ada yang bersifat karsinogenik. Oleh
karena itu, perlu diadakan pemisahan antara pewarna yang hanya
digunakan untuk industri non pangan. Akan tetapi masih sering terjadi
penyalahgunaan pewarna sintetis non pangan untuk pangan.
Pemakaian bahan pewarna pangan sintetis dalam pangan
walaupun mempunyai dampak positif bagi produsen dan konsumen,
diantaranya dapat membuat suatu pangan lebih menarik, meratakan
warna pangan, dan mengembalikan warna dari bahan dasar yang
hilang atau berubah selama pengolahan, ternyata dapat pula
menimbulkan hal-hal yang tidak diinginkan dan bahkan mungkin
memberi dampak negatif terhadap kesehatan manusia. Beberapa hal
yang mungkin memberi dampak negatif tersebut terjadi bila:
a. Bahan pewarna sintetis ini dimakan dalam jumlah kecil, namun
berulang.
b. Bahan pewarna sintetis dimakan dalam jangka waktu yang lama.
c. Kelompok masyarakat luas dengan daya tahan yang berbeda-beda,
yaitu tergantung pada umur, jenis kelamin, berat badan, mutu
pangan sehari-hari dan keadaan fisik.
d. Berbagai lapisan masyarakat yang mungkin menggunakan bahan
pewarna sintetis secara berlebihan
e. Penyimpanan bahan pewarna sintetis oleh pedagang bahan kimia
yang tidak memenuhi persyaratan.
Dr. Kinosita telah melihat adanya efek karsinogenik pada
iritasi kimia. Salah satu percobaannya adalah dengan cara memberi
makanan hewan-hewan percobaan di laboratorium dengan senyawa-
senyawa zat warna yang dianggap karsinogen. Untuk dosis 3mg/hari
pada tikus-tikus, sebagian mati sebelum 30 hari, sisanya mampu
bertahan sampai hari ke-150, telah terkena macam-macam tumor hati,
dengan dosis kecil pun ( 1mg/hari) pada semua tikus berkembang
tumor hati, dalam hal ini zat warna yang digunakan adalah butter

8
 yellow. Keadaan kanker pasti terjadi sesudah adanya iritasi pada tubuh
tikus. Tahap demi tahap dicoba dengan sungguh-sungguh meneliti
bagaimana, kapan, dan di mana kanker terjadi. (Cahyadi, Wisnu. 2008:
61-73)

2.1.2.4 Tartrazin
Tartrazin merupakan pewarna kuning lemon sintetik yang umumnya
diigunakan sebagai pewarna makanan. Tartrazin merupakan turunan dari coal
tar, yang merupakan campuran dari senyawa fenol, hidrokarbon polisiklik,
dan heterosiklik. Karena kelarutannya dalam air tartrazin umum digunakan
sebagai bahan pewarna minuman. Pewarna sintetik tartrazin mengandung
tidak kurang dari 85% C16H9N4Na3O9S2. Pewarna sintetik tartrazin berbentuk
butiran berwarna jingga dan tidak berbau. Identifikasi pewarna sintetik
tartrazin dalam suatu zat dilakukan dengan bermacam-macam cara, antara
lain dengan melarutkan 0,1 gram zat dalam 100 ml air maka pewarna
sinteteik tartrazin akan ditandai dengan berubahnya warna larutan zat tersebut
berwarna kuning. Cara lain yaitu dengan melarutkan 0,1 gram zat dalam 100
ml ammonium asetat 0,002 N hingga 100 ml, pewarna sintetik tartrazin
dengan cara ini pada spektrofotometer akan terlihat memberikan serapan
maksimum pada panjang gelombang 4282 nm.
Tartrazin dapat menyebabkan sejumlah reaksi alergi dan intoleransi
bagi orang-orang yang intoleransi terhadap aspirin atau penderita asma.
Kasus ini cukup langka dan menurut FDA, prevalensi intoleransi tartrazin di
Amerika Serikat jatuh pada angka 0,12% (360 ribu dari 200 juta penduduk).
Beberapa referensi lain menyebutkan bahwa penggunaan tartrazin dapat
menyebabkan biduran (urtikaria) dengan prevalensi di bawah 0,01% atau 1
dari 10.000 penderita. Jumlah ini cukup kecil bila dibandingkan dengan
angka prevalensi penderita alergi terhadap udang, yaitu sebesar 0,6-2,8% (1
dari 50 orang).
Gejala alergi tartrazin dapat timbul apabila senyawa ini terhirup
(inhalasi) atau ditelan (ingesti). Reaksi alergi yang timbul berupa sesak napas,
pusing, migrain, depresi, pandangan kabur, dan sulit tidur.

9
 trinatrium 5-hidroksi-1-(sulfofenilazo)-pirazol-3-karboksilat
Gambar 1 Rumus Bangun Tartrazin (C16H9N4O9S2Na3)

2.1.3 Minuman Berenergi

Suplemen Makanan merupakan produk yang dapat melengkapi
kebutuhan zat gizi makanan, mengandung satu atau lebih bahan berupa
vitamin, mineral, asam amino atau bahan lain yang mempunyai nilai gizi dan
atau efek fisiologis dalam jumlah terkonsentrasi.
Energy Drink (minuman berenergi) termasuk salah satu suplemen
makanan yang terdiri dari komponen multivitamin, makronutrien
(karbohidrat, protein), taurin dengan atau tanpa kafein dan biasanya
ditambahkan herbal seperti ginseng, jahe, dan sebagainya dengan bentuk
sediaan Cairan Obat Dalam (COD) dalam kemasan botol bervolume 150 mL,
250 mL atau serbuk dan tablet yang dilarutkan menjadi minuman, yang dalam
setiap kemasannya mengandung energi minimal 100 kkal, serta indikasinya
adalah untuk menambah tenaga, kesegaran, stimulasi metabolisme,
memelihara kesehatan dan stamina tubuh, yang diminum pada saat bekerja
keras atau setelah berolah raga.
Minuman berenergi mengandung sumber energi dari sukrosa (gula)
atau maltodextrin. Minuman berenergi juga mengandung vitamin-vitamin
yang terlibat dalam metabolisme tubuh guna menghasilkan energi.

10
 Yang membedakan minuman berenergi dengan minuman biasa, selain
memiliki khasiat kegunaan tambahan seperti memelihara stamina tubuh,
minuman berenergi mempunyai aturan pakai, yang tercantum pada etiket.
Pada etiket juga mencantumkan : cara pakai, peringatan/perhatian, dan
keterangan-keterangan lain.
Peringatan/perhatian yang biasa dicantumkan pada etiket antara lain
adalah apabila produk mengandung pemanis buatan maka harus ditulis
produk mengandung pemanis buatan. Apabila pemanis yang digunakan
adalah aspartam, maka pada peringatan/perhatian tercantum produk ini
mengandung fenilalanin, tidak boleh digunakan pada penderita fenilketonuria
dan wanita hamil dengan kadar fenilalanin tinggi.
Apabila produk mengandung kafein dan ginseng maka harus
mencantumkan peringatan/perhatian :Produk ini tidak dianjurkan untuk
anak-anak, wanita hamil dan menyusui . Produk ini tidak dianjurkan untuk
penderita hipertensi. Tidak boleh dikonsumsi melebihi dosis yang telah
ditetapkan (Tidak dikonsumsi lebih dari 3 kali sehari dengan kadar maksimal
kafein per takaran 50 mg)
Minuman berenergi aman dikonsumsi dan tidak akan membahayakan
pemakainya apabila digunakan sesuai dengan aturan pakai dan keterangan-
keterangan yang tercantum pada etiket, baik pada penggunaan jangka panjang
maupun jangka pendek. (http://www.pom.go.id diakses pada tanggal 14 Juni 2012
pukul 15.40 WIB)

2.1.4 Ekstraksi
2.1.4.1 Pengertian
Ekstraksi adalah metode pemisahan atau pengambilan zat
terlarut dalam larutan (biasanya dalam air) dengan menggunakan
pelarut lain (biasanya organik). Faktor utama dalam proses ini adalah
melarutnya secara selektif komponen-komponen dalam campuran.
Dalam prosedur ekstraksi, larutan yang mengandung air
biasanya dikocok dengan pelarut organik yang tidak dapat bercampur,
dalam sebuah corong pisah. Zat-zat yang terdapat dalam sampel akan

11
terdistribusi antara lapisan air dan lapisan organik sesuai dengan
perbedaan kelarutannya.

2.1.4.2 Prinsip Ekstraksi

Hubungan zat terlarut yang terdistribusi diantara dua pelarut
yang tidak saling bercampur dinyatakan pertama kali oleh Walter
Nernst (1891), yang dikenal dengan hukum distribusi atau partisi.
Jika solut dilarutkan sekaligus ke dalam dua pelarut yang tidak saling
bercampur, maka solut akan terdistribusi diantara kedua pelarut. Pada
keadaan setimbang perbandingan konsentrasi solute berharga tetap
pada suhu tetap
Secara matematis hubungan tersebut dapat dituliskan :
[2 ]
= =
[1 ]
dimana Kd adalah sebuah tetapan yang dikenal dengan koefisien
distribusi atau partisi. Harga Kd tidak bergantung pada konsentrasi
total solute pada kedua fase, tetapi bergantung pada suhu, jenis kedua
pelarut dan solute. Hukum Nenrst dalam bentuknya yang sederhana
hanya berlaku untuk larutan encer dan keadaan solute sama atau tidak
mengalami perubahan dalam kedua pelarut.

2.1.4.3 Klasifikasi Ekstraksi

Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan substansi atau zat
dari campurannya dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Ekstraksi
dapat digolongkan berdasarkan bentuk campuran yang diekstraksi dan
proses pelaksanaannya.
a. Bentuk campurannya
Berdasarkan bentuk campuran yang diekstraksi, suatu ekstraksi
dibedakan menjadi ekstraksi padat-cair dan ekstraksi cair-cair.
1. Ekstraksi Padat-cair, zat yang diekstraksi terdapat di dalam
campuran yang berbentuk padatan. Ekstraksi jenis ini banyak
dilakukan di dalam usaha mengisolasi zat berkhasiat yang

12
 terkandung di dalam bahan alam seperti steroid, hormone,
antibiotika dan lipida pada biji-bijian.
2. Ekstraksi Cair-cair, zat yang diekstraksi terdapat di dalam
campuran yang berbentuk cair. Ekstraksi cair-cair sering juga
disebut ekstraksi pelarut banyak dilakukan untuk memisahkan zat
seperti iod, atau logam-logam tertentu dalam larutan air.
b. Proses Pelaksanaanya
Menurut proses pelaksanaannya ekstraksi dibedakan menjadi
ekstraksi berkesinambungan (kontinyu) dan ekstraksi bertahap.
1. Ekstraksi kontinyu (Continues Extraction)
Pada ekstraksi kontinyu, pelarut yang sama digunakan secara
berulang-ulang sampai proses ekstraksi selesai. Tersedia berbagai
alat dari jenis ekstraksi ini seperti alat soxhlet atau Craig
Countercurrent.
2. Ekstraksi Bertahap (Batch)
Pada ekstraksi bertahap, setiap kali ekstraksi selalu digunakan
pelarut yang baru sampai proses ekstraksi selesai. Alat yang
biasanya digunakan adalah berupa corong pisah.

2.1.4.4 Teknik Ekstraksi

Pada metode rkstraksi cair-cair, ekstraksi dapat dilakukan
dengan cara bertahap (batch) atau dengan cara kontinyu, Cara paling
sederhana dan banyak dilakukan adalah ekstraksi bertahap. Tekniknya
cukup dengan menambahkan pelarut pengekstrak yag tidak bercampur
dengan pelarut pertama melalui corong pisah kemudian dilakukan
pengocokan. Setelah didiamkan beberapa saat akan terbentuk dua
lapisan dan lapisan yang berada di bawah dengan kerapatan lebih besar
dapat dipisahkan untuk dilakukan analisa selanjutnya.
Kesempurnaan ekstraksi tergantung pada banyaknya ekstraksi
yang dilakukan. Hasil yang paling baik diperoleh jika ekstraksi
dilakukan berulang kali dengan jumlah pelarut sedikit-sedikit daripada
menggunakan seluruh jumlah pelarut itu dalam satu kali ekstraksi. Hal

13
 ini disebabkan setiap kali dilakukan ekstraksi, jumlah zat terlarut
dalam fase air akan selalu berkurang sehingga yang tersisa tinggal
sedikit, meskipun secara teoritis tidak dapat menjadi nol. Dengan kata
lain ekstraksi yang dilakukan secara bertahap atau berulang akan
diperoleh zat terekstrak maksimal.
Untuk n kali ekstraksi, banyaknya zat terlarut yang tersisa
(Xn) dirumuskan :


= [ ]
+
Keterangan:
Xn : banyaknya zat terlarut yang tersisa (g)
W : zat terlarut (g)
Va : volume larutan fase air (ml)
Vo : volume larutan fase organic (ml)
D : perbandingan distribusi

Persamaan ini memperlihatkan bahwa ekstraksi akan sempurna bila Vo

kecil dan n besar. Jadi hasil yang paling baik diperoleh dengan jumlah
ekstraksi yang relative besar dengan jumlah pelarut yang kecil.
Ekstraksi bertahap baik digunakan jika perbandingan
distribusinya besar. Sebaliknya jika perbandingan distribusinya kecil
dapat digunakan ekstraksi kontinyu. Tekniknya menggunakan aliran
kontinyu pelarut melalui larutan yang mengandung zat terlarut yang
akan diekstrak. Pelarut yang mudah menguap di daur ulang (recycle)
dengan penyulingan dan kondensasi lalu didispersikan kembali
kedalam fase air. Tersedia alat-alat dengan cara ini meskipun relative
mahal dan sukar. (Yazid, Estien.2005: 181-186)

2.1.5 Kromatografi Kertas

Kromatografi kertas atau KKt pada hakekatnya ialah kromatografi lapis
tipis (KLT) pada lapisan tipis selulosa atau kertas. Cara ini ditemukan jauh
sebelum KLT dan telah dipakai secara efektif selama bertahun-tahun untuk

14
pemisahan molekul biologi yang polar seperti asam amino, gula, dan
nukleotida. Metode ini merupakan metode KCC (kromatografi cairan-cairan)
dengan fase diam cair, biasanya air, berada pada serabut kertas.
KKt paling baik jika diperbandingkan dengan KLT pada lapisan tipis
serbuk selulosa. KKt tidak memerlukan pelat pendukung, dan kertas dapat
dengan mudah diperoleh dalam bentuk murni sebagai kertas saring. Lapisan
selulosa harus dicetak atau dibeli khusus. Panjang serabut pada kertas lebih
panjang daripada serabut pada lapisan selulosa yang lazim, menyebabkan
lebih banyak terjadi difusi ke samping dan bercak lebih besar. Akhirnya,
lapisan selulosa lebih rapat dan pelarut cenderung mengalir melaluinya lebih
cepat dan menghasilkan pemisahan lebih tajam.
Tahap-tahap ynag dilakukan pada KKt sama dengan tahap pada KLT
partisi. Kertas (biasanya kertas saring Whatman No.1) dipotong-potong
menjadi beberapa carik, dan cuplikan ditotolkan pada salah satu ujung carik
itu. Kromatogram dapat dikembangkan dengan cara menaik atau dengan cara
menurun. Untuk cara menaik, kertas digantungkan pada penggantung
berbentuk kail yang dipasang pada penutup bejana kromatografi. Pelarut
berada di dasar bejana. Untuk cara menurun lazimnya dipakai bejana yang
lebih besar. Bejana dilengkapi dengan sejenis wadah pelarut yang dipasang
pada penopang, dan kertas kromatografi dicelupkan ke dalam pelarut di dalam
wadah itu dan diberi pemberat dengan batang kaca supaya tetap pada
tempatnya. Pada kedua cara itu pengembangan terjadi karena kerja kapiler.
Waktu pengembangan pada KKt berkisar mulai dari 30 menit sampai 12 jam,
bergantung pada sifat kertas dan jarak pengembangan yang diinginkan.
Lembaran kertas diangkat, dikeringkan, dan ditampakkan dengan cara
yang sama seperti pada lapisan tipis. Pereaksi semprot yang terdapat asam
sulfat tidak dapat dipakai karena dapat juga menghanguskan selulosa. (Gritter,
J.Roy. 1991: 157)

15
2.1.6 Spektrofotometri UV-Vis
2.1.6.1 Definisi
Spektrofotometri merupakan pengukuran suatu interaksi
antara radiasi elektromagnetik (REM) dan molekul atau atom dari
suatu zat kimia (Depkes RI, Farmakope Indonesia, Edisi IV, 1995:
1061)
Spektrofotometri UV-Vis adalah anggota teknik analisis
spektroskopik yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultra
violet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan
memakai instrument spektrofotometer.
Radiasi ultraviolet jauh (100-190 nm) tidak dipakai, sebab
pada daerah radiasi terseut diabsorpsi oleh udara. Ada kalanya
spektrofotometer UV-Vis yang beredar diperdagangkan memberikan
rentang pengukuran panjang gelombang 190-1100 nm. Hal ini perlu
diperhatikan lebih seksama sebab di atas panjang gelombang 780 nm
merupakan daerah radiasi infra merah. Oleh sebab itu pengukuran di
atas panjang gelombang 780 nm harus dipakai detektor dengan kualitas
sensitif terhadap radiasi infra merah (infrared sensitive).

2.1.6.2 Prinsip Dasar

Analisis secara spektrofotometri Uv-Vis selalu melibatkan
pembacaan absorban radiasi elektromagnetik oleh molekul atau radiasi
elektromagnetik yang diteruskan. Keduanya dikenal sebagai absorban
(A) tanpa satuan dan transmittan dengan satuan persen (%T).
Apabila suatu radiasi elekromagnetik dikenakan kepada suatu
larutan dengan intensitas radiasi semula (I0), maka sebagian radiasi
tersebut akan diteruskan (It), dipantulkan (Ir), dan diabsorpsi (Ia).
Namun harga It ( 4%) dengan demikian dapat diabaikan. Inilah yang
menjadi dasar perhitungan pada analisa secara spektrofotometri UV-
Vis. (Mulja, Muhammad. 1995: 31)
Berdasarkan hukum Lambert-Beer nilai absorbsi berbanding
lurus dengan ketebalan dan konsentrasi. Semakin tinggi konsentrasi

16
larutan, semakin besar pula larutan itu menyerap cahaya. Hal ini dapat
diaplikasikan dalam rumus:
= . .
Dimana A = besar absorbsi
a = absorbtivitas
b = ketebalan larutan
c = konsentrasi larutan
Apabila seberkas cahaya dikenakan kepada suatu larutan,
maka sebagian cahaya tersebut akan diteruskan (transmisi) dan diserap
(absorpsi). Besarnya cahaya yang ditransmisikan akan berbanding
terbalik dengan besarnya cahaya yang diabsorbsi. Pernyataan ini dapat
dihitung dengan rumus yang berasal dari hukum Lambert-Beer juga,
yaitu:
= log
atau
1
= log

Dimana A = besar absorbsi
T = besar transmisi
(anna-permanasari.staf.upi.edu/files/2011/03/Spektro-UV-Vis.pdf
diakses pada tanggal 30 Maret 2012 pukul 21.54 WIB)

2.1.6.3 Pelarut yang Baik

Spektrofotometri UV-Vis biasa melakukan penentuan
terhadap sampel yang berupa larutan. Perlu diperhatikan beberapa
persyaratan pelarut yang dipakai, antara lain:
a. Pelarut yang dipakai tidak mengandung sistem ikatan rangkap
terkonjugasi pada struktur molekulnya dan tidak berwarna.
b. Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis.
c. Kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk analisis.
Pada umumnya pelarut yang sering dipakai analisis
spektrofotometri UV-Vis adalah air, etanol, sikloheksan, dan
isopropanol. Hal lain yang perlu diperhatikan dalam masalah pemilihan

17
pelarut adalah polaritas pelarut yang dipakai, karena akan sangat
berpengaruh terhadap pergeseran spektrum molekul yang dianalisis.

18
2.1.6.4 Analisa Kualitatif
Pada analisis kualitatif dengan metode spektrofotometri UV-
Vis dapat ditentukan dengan pemeriksaan kemurnian spektrum UV-
Vis, yaitu dilakukan dengan membandingkan kemiripan spektrum UV-
Vis zat yang ditemtukan dengan reference standard dengan melihat
harga MF (Match Factor) yang dirumuskan sebagai:
103 { . . ( . )}2
=
( . ) ( . )
{ 2 } { 2 }

X = absorban spektrum pertama
Y = absorban spektrum kedua
N = banyaknya tempat penentuan
Harga MF = 900 1000 menunjukkan kedua spektra tersebut
identik sedangkan kedua spektra dikatakan tidak identik, kalau
didapatkan harga MF <900.
Walaupun kedua spektra UV-Vis identik, belum tentu kedua
spektra UV-Vis tersebut diberikan oleh molekul yang sama sebab
spektra UV-Vis sangat tidak bergantung pada struktur molekul akan
tetapi bergantung kepada gugus molekul yang mengabsorsi radiasi
UV-Vis (struktur elektronik molekul).

2.1.6.5 Analisa Kuantitatif

Analisa kuantitatif dengan metode spektrofotometri UV-Vis
dapat digolongkan atas tiga macam pelaksanaan pekerjaan, yaitu:
a) Analisa kuantitatif zat tunggal (analisa satu komponen)
b) Analisa kuantitatif campuran dua macam zat (analisa dua
komponen)
c) Analisa kuantitatif campuran tiga macam zat atau lebih (analisa
multi komponen)
Akan tetapi penulis hanya akan membahas analisa kuantitatif zat
tunggal (analisa satu komponen)
Analisa kuantitatif zat tunggal dilakukan pengukuran absorban
pada panjang gelombang maksimum atau dilakukan pengukuran %T

19
pada panjang gelombang minimum. Alasan dilakukan pengukuran
pada panjang gelombang tersebut adalah: perubahan absorban untuk
setiap satuan konsentrasi adalah paling besar pada panjang gelombang
maksimal, sehingga akan diperoleh kepekaan analisis yang maksimal.
Di samping itu pita serapan di sekitar panjang gelombang maksimal
datar dan pengukuran ulang dengan kesalahan yang kecil dengan
demikian akan memenuhi hukum lambert-Beer. Ada empat cara
pelaksanaan analisa kuantitatif zat tunggal, yaitu:
a. Dengan cara membandingkan asorban atau transmittan yang
dianalisa dengan reference standard pada panjang gelombang
maksimal. Persyaratannya pembacaan nilai asorban sampel dan
reference standard tidak jauh berbeda.
() . () = () . ()
A(s) = absorban larutan sampel
C(s) = konsentrasi larutan sampel
A(RS) = Absorban reference standard
C(RS) = konsentrasi reference standard
b. Dengan memakai kurva baku dari larutan reference standard
dengan pelarut tertentu pada panjang gelombang maksimum.
Dibuat grafik sistem koordinat Cartesian dimana sebagai ordinat
adalah absorban dan sebagai absis adalah konsentrasi.
c. Dengan jalan menghitung harga absorbansi larutan sampel
1%
(1 ) pada pelarut tertentu dan dibandingkan dengan
absorbansi zat yang dianalisa yang tertera pada buku resmi.
d. Dengan memakai perhitungan nilai ekstingsi molar (absorbansi
molar ) sama dengan cara yang ketiga hanya saja pada
perhitungan absorbansi molar lebih tepat karena melibatkan massa
molekul relatif (MR). (Mulja, Muhammad 1995: 26-41)
1%
= 1 . . 101

20
2.1.7 Analisis Data secara Statistik
Dari hasil yang didapat dari suatu penetapan kadar terhadap satu
macam sampel, ada kalanya terdapat hasil yang menyimpang bila
dibandingkan dengan yang lainnya, tanpa diketahui kesalahan secara pasti.
Hal ini mengakibatkan timbul kecenderungan untuk menolak hasil yang
menyimpang terssebut.
Hasil yang menyimpang umumnya tidak harus ditolak. Oleh karena itu
perlu dilakukan analisis data secara statistik.
Perbedaan | | 4 boleh digunakan untuk penolakan, yaitu
jika deviasi nilai yang dicurigai terhadap mean paling tidak empat kali deviasi
rata-rata nilai-nilai yang diterima. Beberapa peneliti menggunakan |
| 2,5. Kesalahan nilai yang ditolak dikenal sebagai kesalahan besar
(Khopkar, S.M, 1990: 14)

21
2.2 Kerangka Konsep
Menurut Permenkes RI No.722/Menkes/Per/IX/1988 tentang bahan tambahan
makanan, dinyatakan bahwa batas maksimum penggunaan pewarna sintetik
tartrazin dalam makanan dan minuman sebesar 300 mg/kg

Analisis data/verifikasi terhadap tartrazin

a) Analisa kualitatif secara KKt
b) Analisa kuantitatif secara Spektrofotometri UV-Vis

Bahan makanan memenuhi syarat atau tidak

Gambar 2 Konsep Pengujian
Untuk identifikasi pewarna sintetik dalam mi instan, sampel terlebih dahulu
dihomogenkan dan ditimbang kemudian ditambahkan asam asetat encer 6%
hingga asam jika larutan basa atau netral. Ditambahkan benang wol bebas lemak
sambil dipanaskan diatas tangas air, dicuci benag wol, lalu dilunturkan benang
wol dengan ammonia encer dan dipekatkan dengan pemanasan. Pekatan
ditotolkan pada kertas kromatografi, kemudian dieluasi. Setelah eluasi selesai,
dibandingkan Rf bercak sampel dengan bercak standar. Hasil dikatakan diduga
positif tartrazin apabila harga Rf sampel identik dengan Rf standar.
Untuk penetapan kadar tartrazin secara spektrofotometri sampel terlebih
dahulu dihomogenkan dan ditimbang kemudian ditambahkan 5 ml air dan 3 ml
campuran asam sulfat-air (1:3), diekstraksi 4x dengan 10 ml N-butanol, diambil
fase organic lalu ditambahkan eter minyak bumi dengan volume sama banyak.
Diekstraksi 4x kembali dengan 10 ml air dan diambil fase air, dimasukkan ke
dalam labu ukur 50 ml, ditambahkan aquadest sampai tanda dan dihomogenkan.
Dilanjutkan dengan pengukuran pada alat spektrofotometer UV-Vis menggunakan
air sebagai blangko. Hasil dikatakan posotif apabila spektrum larutan uji identik
dengan larutan baku. Hal ini menunjukkan bahwa makanan tersebut mengandung
tartrazin.

22
 B AB I I I
METODE PENGUJIAN

3.1 Prosedur
3.1.1 Identifikasi Pewarna Sintetik Tartrazin
a. Larutan Uji
Ditimbang seksama 30 sampai dengan 50 ml contoh, dimasukkan ke
dalam gelas piala 100 ml. Diperiksa pH-nya bila basa atau netral asamkan
dengan asam asetat encer 6%, ditambahkan benang wol yang bebas lemak dan
dipanaskan di atas api kecil sambil diaduk-aduk selama lebih kurang 30
menit. Dipisahkan benang wol tersebut dari larutan dan dicuci dengan air
suling berulang-ulang sampai bersih. Dilunturkan benang wol tersebut dengan
menambahkan amoniak encer 10 ml di atas api kecil sampai sempurna lebih
kurang 30 menit dan diangkat, dipekatkan larutan yang berwarna tersebut
sampai bebas asam. (A)
b. Larutan Baku
Larutan baku pembanding dibuat 0,1% b/v dalam air. (B)
c. Identifikasi
Dilakukan kromatografi kertas sebagai berikut :
Fase diam : kertas whatman No.1
Fase gerak : etil metil keton-aseton-air (7:3:3)
Penjenuhan : dengan kertas saring
Volume penotolan : 30 l
Jarak rambat : 15 cm

3.1.2 Penetapan Kadar Pewarna Sintetik Tartrazin

a. Larutan Uji
Dalam corong pisah 3-5 gram cuplikan yang ditimbang seksama ditambah
5 mL air, 1 mL asam sulfat (1:3) dan diekstraksi 4 kali tiap kali dengan 10 mL
n-butanol. Kumpulan fase organik ditambah volume sama eter minyak bumi
dan diekstraksi 4 kali, tiap kali dengan 10 mL air. Kumpulan fase air

23
 dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL dan ditambah air sampai tanda
(A).
b. Larutan Baku
Larutan tartrazin 0,01% dalam air dan diperlakukan sama seperti larutan
uji (B).
c. Cara Penetapan
Serapan larutan A dan B diukur pada panjang gelombang maksimum lebih
kurang 430 nm menggunakan air yang diperlakukan sama seperti larutan uji
sebagai blangko.
Kadar pewarna tartrazin dalam permen adalah :

100%

Au = serapan larutan uji
Ab = serapan larutan baku
Bb = bobot baku pewarna tartrazin yang ditimbang
Bu = bobot cuplikan yang ditimbang

3.2 Modifikasi Prosedur

3.2.1 Identifikasi Pewarna Sintetik Tartrazin
a. Larutan Uji
Ditimbang seksama 30 ml contoh, dimasukkan ke dalam gelas piala 100
ml. Diperiksa pH-nya bila basa atau netral asamkan dengan asam asetat encer
6%, ditambahkan benang wol yang bebas lemak dan dipanaskan di atas api
kecil sambil diaduk-aduk selama lebih kurang 30 menit. Dipisahkan benang
wol tersebut dari larutan dan dicuci dengan air suling berulang-ulang sampai
bersih. Dilunturkan benang wol tersebut dengan menambahkan amoniak
encer 10 ml di atas api kecil sampai sempurna lebih kurang 30 menit dan
diangkat, dipekatkan larutan yang berwarna tersebut sampai bebas asam. (A)
b. Larutan Baku
Larutan baku pembanding dibuat 0,1% b/v dalam air. (B)
c. Identifikasi
Dilakukan kromatografi kertas sebagai berikut :
Fase diam : kertas whatman No.1

24
 Fase gerak : etil metil keton-aseton-air (7:3:3)
Penjenuhan : dengan kertas saring
Volume penotolan : 30 l
Jarak rambat : 15 cm

3.2.2 Penetapan Kadar Pewarna Sintetik Tartrazin

a. Larutan Uji
Dalam corong pisah 15 gram cuplikan yang ditimbang seksama ditambah
5 mL air, 3 mL asam sulfat (1:3) dan diekstraksi 4 kali tiap kali dengan 10
mL n-butanol. Kumpulan fase organik ditambah volume sama eter minyak
bumi dan diekstraksi 4 kali, tiap kali dengan 10 mL air. Kumpulan fase air
dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL dan ditambah air sampai tanda
(A).
b. Larutan Baku
Larutan baku pembanding tartrazin dibuat 0,01% dalam air (B).
c. Cara Penetapan
Serapan larutan A dan B diukur pada panjang gelombang lebih kurang 428
nm menggunakan air sebagai blangko.

3.3 Alat dan Bahan

3.3.1 Alat
Sepektrofotometer Ultraviolet-cahaya tampak Shimadzu 1610, timbangan
analitik Mettler, erlenmeyer 250 ml bersumbat kaca, gelas ukur, waterbath, statif,
labu tentukur, sendok tanduk, batang pengaduk, kertas whatman, chamber, corong
pisah, pipet tetes, ring bulat, dll.

3.3.2 Bahan
Sampel mi instan, etanol, ammonia, petroleum eter, asam asetat, etil metil
keton, baku Tartrazin, kertas Whatman no. 1, kertas saring, aquadest, N-butanol,
asam sulfat, natrium sulfat, benang wool, dll.

25
3.4 Langkah Kerja
3.4.1 Identifikasi Tartrazin
Larutan Uji
Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

Disiapkan benang wool bebas lemak, yaitu benang wool direndam dengan
etanol selama 15 menit

Disiapkan chamber atau bejana kromatografi, yaitu dicuci dan dikeringkan,

lalu dipasang kertas saring untuk indikator penjenuhan

Dibuat eluen etil metil keton aseton air (7:3:3), dimasukkan ke dalam
chamber, dilakukan penjenuhan

Ditimbang sampel sebanyak 30 gram yang telah dihaluskan, dimasukkan ke

dalam beker glass 100 ml
Dicek pH sampel, jika basa
Atau netral diasamkan dengan asam
asetat encer 6%
Dimasukkan benang wool ke dalam larutan, dipanaskan di atas api kecil
sambil diaduk selama 30 menit

Dicuci benang wool beberapa kali dengan air hingga bersih

Benang wool ditambah ammonia 10% sambil dipanaskan di atas tangas air
hingga pewarna larut sempurna

Dipekatkan larutan hingga bebas ammonia

Dilakukan identifikasi secara kromatografi kertas

26
Larutan Baku
Ditimbang seksama 10 mg baku tartrazin, dimasukkan ke dalam labu
tentukur 10,0 ml

Dilarutkan dengan air, diencerkan hingga tanda, dihomogenkan

Dilakukan identifikasi secara kromatografi kertas, diamati bercak baku dan

sampel

Dihitung harga Rf-nya

3.4.2 Penetapan Kadar Tartrazin

Larutan Uji
Ditimbang seksama sampel lebih kurang 15 g
+ 5 ml aquadest
+ 3 mL asam sulfat (1:3)
Dimasukkan ke dalam corong pisah
Wadah dibilas 5 ml air,
Diekstraksi 4 kali, tiap kali dengan 10 ml N-butanol

Fase air Fase organik

Ditambah eter
minyak bumi dg
volume yg sama
Diekstraksi larutan 4 kali, tiap kali dengan 10 ml air

Fase air Fase organik

Dimasukkan ke labu ukur 50 ml, saring

Diencerkan dengan air sampai tanda

27
 Larutan Baku
Ditimbang seksama 10 mg baku tartrazin

Dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml

Diencerkan dengan aquadest hingga tanda

3.5 Persyaratan
Berdasarkan Permenkes RI No: 722/MENKES/PER/IX/88 tahun 1988 kadar
tartrazin dalam makanan dan minuman tidak boleh lebih dari 300 mg/ kg.

3.6 Rumus Perhitungan

3.6.1 Rumus Harga Rf Sampel dan Baku

=

3.6.2 Rumus Penetapan Kadar

= 1000

Keterangan :
Au : Absorbansi (serapan) uji
Ab : Absorbansi (serapan) baku
Bb : Bobot penimbangan baku tartrazin
Bu : Bobot penimbangan uji (sampel)
FPu : Faktor pengenceran uji
FPb : Faktor pengenceran baku

3.6.3 Rumus Perhitungan secara Statistik

2
=
1

= 100%

28
Keterangan :
SD : Simpangan baku
2 : Jumlah tiap simpangan dari tiap kadar
n : jumlah banyaknya sampel
RSD : Simpangan baku relatif
: Nilai rata-rata

29
 B AB I V
HASIL PENGUJIAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Data Pengujian

4.1.1 Data Sampel
Nama : X bentuk gelas
Produksi : Y
No. Registrasi : BPOM RI MD 250010060915
Tgl Kadaluwarsa : 17 April 2013
Komposisi : Air, Gula, Pengatur Keasaman (Asam sitrat dan
Natrium Sitrat), Taurin, Perisa Aneka Buah,
Pemanis Buatan Natrium Siklamat (74 mg/cup)
dan Asesulfam-K (37 mg/cup), Pengawet
Natrium Benzoat, Kafein, Inositol, Pewarna
Makanan (Tartrazin CI 19140)
Netto : 175 mL
Pemerian : Bentuk larutan, Warna kuning, bau wangi, dan
rasa manis.
4.1.2 Data Baku
Nama : Tartrazinum BPFI
Produksi : Pusat Pengujian Obat dan Makanan Jalan
Percetakan Negara No. 25 Jakarta 10569.

4.1.3 Data Penimbangan Sampel dan Baku

Tabel 3 Data Penimbangan Sampel dan Baku Pewarna Tartrazin untuk

Identifikasi
No. Sediaan Bobot (g)
1 SampelX 30,0213
2 Baku 0,0106

30
 Tabel 4 Data Penimbangan Sampel untuk Penetapan Kadar
No Sediaan Bobot (g)
1 Sampel 1 5,1492
2 Sampel 2 15,0439
3 Sampel 3 15,0322
4 Sampel 4 15,0358
5 Sampel 5 15,0329
6 Sampel 6 15,0327

4.1.4 Hasil Pengukuran Serapan Maksimum Baku dan Sampel

Pewarna Tartrazin

Tabel 5 Hasil Pengukuran Serapan Maksimum Baku dan Sampel pada Panjang
Gelombang 428 nm
No. Sediaan Faktor Pengenceran Abs
1 Baku 10,0 ml/1,0 ml x 10,0 ml/1,0 ml x 10,0 ml 0,399
2 Sampel 1 50 ml 0,138
3 Sampel 2 50 ml 0,395
4 Sampel 3 50 ml 0,392
5 Sampel 4 50 ml 0,394
6 Sampel 5 50 ml 0,394
7 Sampel 6 50 ml 0,392

4.2 Perhitungan
4.2.1 Perhitungan Harga Rf
1. Sampel
1,0
= = 0,07
14,5
2. Sampel + baku
1,0
= = 0,07
14,5

31
3. Baku
1,0
= = 0,07
14,5
4.2.2 Perhitungan Penetapan Kadar
1. Sampel 1
0,138 0,0106 50
100% = 0,003559%
0,399 5,1492 10 10 10
1 1 1

= 35,59

2. Sampel 2
0,395 0,0106 50
100% = 0,003487%
0,399 15,0439 101 1 101
10

= 34,87

3. Sampel 3
0,392 0,0106 50
100% = 0,003464%
0,399 15,0322 10 10 10
1 1 1

= 34,64

4. Sampel 4
0,394 0,0106 50
100% = 0,003481%
0,399 15,0358 10 10 10
1 1 1

= 34,81

5. Sampel 5
0,394 0,0106 50
100% = 0,003481%
0,399 15,0329 10 10 10
1 1 1

= 34,81

6. Sampel 6
0,392 0,0106 50
100% = 0,003464%
0,399 15,0327 10 10 10
1 1 1

= 34,64

32
4.2.3 Perhitungan Data secara Statistik
Untuk memastikan apakah hasil yang sangat menyimpang ditolak atau
diterima, perlu dilakukan analisa data secara statistik dan untuk mengetahui
keakuratan pengujian, maka data tersebut harus dihitung dengan
menggunakan Standard Deviation (SD) dan Relative Standard Deviation
(RSD), pengujian dinyatakan akurat apabila RSD lebih kecil dari 2%.
(Harmita, 2006: 160-162)

No. Kadar (x) ( ) ( )2

1 35,59*
2 34,87 0,12 0,0144
3 34,64 0,11 0,0121
4 34,81 0,06 0,0036
5 34,81 0,06 0,0036
6 34,64 0,11 0,0121
173,77 0,46 0,0458
34,75 0,092 0,00916

Hasil yang dicurigai adalah 35,59 mg/kg. Hasil ditolak jika 2,5 ,
35,59 34,75 2,5 . 0,092
0,84 0,23,
Maka hasil kadar sampel No.1 ditolak

No. Kadar (x) ( ) ( )2

2 34,87*
3 34,64 0,08 0,0064
4 34,81 0,09 0,0081
5 34,81 0,09 0,0081
6 34,64 0,08 0,0064
138,9 0,34 0,0029
34,72 0,085 0,00725

Hasil yang dicurigai adalah 34,87 mg/kg. Hasil ditolak jika 2,5 ,
34,87 34,72 2,5 . 0,085

33
 0,15 0,212
Maka hasil kadar sampel No.2 diterima

2
=
1

0,0458
= = 0,1070
51

= 100%

0,1070
= 100% = 0,31%
34,75

Dari hasil perhitungan secara statistik terdapat satu sampel yang

ditolak kemudian dilanjutkan dengan perhitungan RSD yang diperoleh dari
perhitungan SD terhadap kadar rata-rata sampel dan menunjukkan nilai
0,31%. Nilai ini memenuhi syarat keakuratan dari pengujian dengan RSD
yaitu kurang dari 2%.

4.3 Hasil Pengujian dan Persyaratan

4.3.1 Hasil
1. Identifikasi Pewarna Tartrazin dengan Kromatografi Kertas
Tabel 6 Harga Rf Sampel, Sampel+Baku, Baku
No. Sediaan Harga Rf
1. Sampel 0,07
2. Sampel+Baku 0,07
3. Baku 0,07
Dari tabel di atas terlihat bahwa harga Rf sampel sama dengan Rf
sampel + baku dan baku.
2. Penetapan Kadar Pewarna Tartrazin secara Spektrofotometri
Tabel 7 Kadar Pewarna Tartrazin dalam Minuman Berenergi
No. Sediaan Kadar (mg/kg)
1 Sampel 2 34,87
2 Sampel 3 34,64

34
 3 Sampel 4 34,81
4 Sampel 5 34,81
5 Sampel 6 34,64
Kadar raa-rata 34,75
Dari data di atas menunjukkan kadar rata-rata pewarna tartrazin
dalam minuman berenergi adalah 34,75 mg/kg.

4.3.2 Persyaratan
Menurut Permenkes No. 722/Menkes/Per/IX/1988 terntang Bahan
Tambahan Makanan, dinyatakan bahwa batas maksimum penggunaan
pewarna sintetik tartrazin dalam makanan dan minuman adalah 300 mg/kg.

4.4 Pembahasan
Isolasi zat warna dilakukan dengan menggunakan dua metode yaitu isolasi
menggunakan benang wol bebas lemak untuk identifikasi warna dan metode
ekstraksi cair-cair untuk penetapan kadar secara spektrofotometri UV-cahaya
tampak.
Isolasi zat warna dengan benang wol merupakan metode yang baik karena
benang wol mempunyai sifat mudah menyerap dan melepaskan zat warna.
Pemisahan dengan kromatografi kertas pada pengujian ini menggunakan kertas
Whatman No.1 dan dipilih proses pengembangan menaik. Metode menaik
dilakukan dengan cara mencelupkan kertas Whatman No.1 ke dalam chamber
yang telah jenuh dan berisi eluen pada dasar bejana dan bagian atas dikaitkan pada
bagian atas chamber.
Pelarut atau eluen bergerak melalui serat-serat dari kertas oleh gaya kapiler
dan membawa komponen dari sampel yang diuji. Setelah permukaan eluen
bergerak sampai jarak yang ditentukan, kertas diangkat dan dikeringkan,
kemudian segera dideteksi secara visual karena noda-noda tersebut terlihat
sebagai noda berwarna pada akhir pengembangan.
Untuk memastikan apakah sampel tersebut mengandung zat pewarna sintetik
tartrazin pengujian dilanjutkan dengan uji konfirmasi dengan metode
spektrofotometri UV-cahaya tampak.

35
 Pengujian dengan metode spektrofotometri UV-Vis hasilnya sampel
memberikan spektrum puncak yang sama dibandingkan dengan baku tartrazin,
artinya sampel mengandung zat pewarna tartrazin.
Pada penetapan kadar secara spektrofotometri UV-Vis sampel diencerkan
dan ditambah 3 mL campuran asam sulfat air (1:3) yang berfungsi agar zat warna
sintetik tartrazin mudah ditarik ke dalam fase organik. Diekstraksi sampai zat
warna tertarik ke dalam fase organik (fase n-butanol) semua, kumpulan fase
organik ditambahkan eter minyak bumi sama banyak yang bertujuan untuk
memisahkan sampel dari zat-zat lain dan untuk mengurangi kelarutan pewarna
dalam n-butanol yaitu mengurangi sifat polar dari n-butanol dengan eter minyak
bumi yang bersifat non polar sehingga pada waktu ekstraksi dengan air, fase
berwarna berpindah ke dalam fase air. Kemudian dilanjutkan ke pengukuran
sampel dan baku dengan spekrofotometer.
Diantara hasil yang diperoleh dari satu seri penetapan kadar secara
spektrofotometri UV-Vis pada 6 sampel yang dianalisa, terdapat kadar sampel
yang berbeda dan hasil ditolak, yaitu sampel no.1. Hal ini disebabkan oleh
beberapa faktor yaitu diantaranya sampel yang kurang homogen dan cara
pemisahan yang kurang teliti sehingga diperoleh kadar yang berbeda, terhadap
satu macam sampel adakalanya hasilnya yang sangat menyimpang sehingga
timbul kecenderungan untuk menolak hasil yaitu sampel.
Untuk memastikan apakah hasil yang sangat menyimpang tadi ditolak atau
diterima, perlu dilakukan analisa data secara statistik dimana hasil analisa ditolak
jika 2,5 . RSD dihitung untuk mengetahui keakuratan pengujian yang
dilakukan. Pengujian dikatakan akurat jika diperoleh RSD lebih kecil dari 2%.
Pewarna sintetik tartrazin ditambahkan pada minuman berenergi untuk
memberi warna agar lebih menarik. Kadar pewarna sintetik tartrazin dalam
minuman berenergi tersebut sesuai dengan persyaratan yang ditentukan maka
minuman berenergi tersebut aman untuk dikonsumsi dan diizinkan peredarannya.

36
 B AB V
SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan
Berdasarkan pengujian kadar zat pewarna tartrazin dalam minuman berenergi
dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis adalah 34,75 mg/kg.
Berdasarkan hasil tersebut sampel minuman berenergi memenuhi syarat sesuai
dengan Permenkes RI No. 722/Menkes/Per/IX/1988 tentang Bahan Tambahan
Makanan.

5.2 Saran
1. Untuk yang akan datang agar difokuskan pada bahan percobaan dengan
berbagai metode agar bisa membandingkan metode mana yang terbaik yang
digunakan untuk identifikasi maupun penetapan kadar.
2. Sebaiknya masyarakat lebih memperhatikan pola konsumsi minuman
berenergi, khususnya bagi para pekerja berat yang menjadikan munuman
berenergi pilihan instan untuk memulihkan tenaga dan kondisi tubuhnya,
karena dalam minuman berenergi terdapat bahan pewarna yang jika
dikonsumsi secara berlebihan akan dapat menimbulkan resiko toksik
walaupun kronik.
3. Diharapkan kepada pemerintah agar lebih memperketat lagi pengawasan
penggunaan pewarna sintetik untuk makanan dan minuman dan memberikan
penyuluhan kepada masyarakat tentang bahayanya menggunakan pewarna
tekstil dan kulit untuk makanan dan minuman.

37
 DAFTAR PUSTAKA

Cahyadi, Wisnu. 2006. Analisis dan Aspek Bahan Tambahan Pangan. Jakarta:
Bumi Aksara.

Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. 1988 Peraturan Menteri

Kesehatan Republik Indonesia Nomor:722/MENKES/PER/IX/88. Jakarta:
DEPKES RI

Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. 1979. Kodeks Makanan

Indonesia tentang Bahan Tambahan Makanan. Jakarta: DEPKES RI

Gritter, Roy J.,dkk. 1991. Pengantar Kromatografi Terbitan Kedua. Bandung:

Institut Teknologi Bandung

Khopkar, S.M.1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: Universitas Indonesia

Mulja, Muhammad dan Suharman. 1995. Analisa Instrumental. Surabaya:

Airlangga University Press.

Sudjadi, drs.1988.Metode Pemisahan. Yogyakarta: Kanisius

Yazid,Estien. Kimia Fisika untuk Paramedis. Yogyakarta:Andi Yogyakarta

anna-permanasari.staf.upi.edu/files/2011/03/Spektro-UV-Vis.pdf

http://www.pom.go.id

38
 LAMPIRAN

Data kromatogram kromatografi kertasdengan eluen etil metil keton-aseton-air

(7:3:3)

39
 LAMPIRAN

Data Pengukuran spectrum serapan sampel dan baku dengan Spektrofotometer

balngko air

40