ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA

AKTIF PADA CURCUMAE DOMESTICAE RHIZOMA

LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM FARMAKOGNOSI FITOKIMIA

Disusun oleh:
Krispina Priska Adriani 138114067
Benedicta Fidelia Putranti 138114068
Ignasia Handipta Mahardika 138114069
Albertin Gilang Kristanti 138114070
Asti Aprilia Putri 138114071
Edwin Tesalonika 138114072
Michael Ryanda Estianto Hadi 138114073

LABORATORIUM FARMAKOGNOSI FITOKIMIA

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2014
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis haturkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa karena

atas berkat dan rahmat kasih-Nya penulis dapat menyelesaikan mini skripsi

Isolasi dan Uji Aktivitas Antioksidan Senyawa Aktif pada Curcumae Domesticae

Rhizoma dengan baik dan lancar. Mini skripsi ini disusun sebagai tugas akhir

praktikum Farmakognosi Fitokimia.

Melalui mini skripsi ini, penulis berharap agar dapat berguna bagi para

pembaca, menjadi sumber referensi dalam melakukan isolasi dan uji aktivitas

antioksidan senyawa aktif pada simplisia dan menjadi inspirasi untuk melakukan

penelitian yang lebih berkembang nantinya.

Penulisan mini skripsi ini tidak lepas dari banyak bantuan, dukungan,

semangat, dan saran dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada pihak-pihak yang telah membantu dalam

pengerjaan.

Penulis sadar bahwa dalam penulisan mini skripsi ini masih jauh dari

sempurna. Untuk itu, penulis mohon maaf dan mengharapkan adanya kritik dan

saran yang membangun dari pembaca.

Akhir kata, semoga mini skripsi ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Yogyakarta, 06 Desember 2014

Tim Penulis

| ii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................................... i

KATA PENGANTAR ........................................................................................................ ii

DAFTAR ISI...................................................................................................................... iii

DAFTAR TABEL............................................................................................................. vii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................................... viii

DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................................... ix

ABSTRAKSI ..................................................................................................................... xi

BAB I: PENDAHULUAN ................................................................................................ 13

A. LATAR BELAKANG ................................................................................... 13

B. RUMUSAN MASALAH .............................................................................. 15

C. MANFAAT ................................................................................................... 15

D. TUJUAN ....................................................................................................... 16

BAB II: PENELAAHAN PUSTAKA .............................................................................. 17

A. Uraian Tanaman Kunyit ................................................................................ 17

B. Simplisia ........................................................................................................ 26

C. Ekstrak ........................................................................................................... 27

D. Metode Ekstraksi ........................................................................................... 27

E. Fraksinasi ...................................................................................................... 29

| iii
 F. Pemurnian Senyawa ...................................................................................... 29

G. Antioksidan ................................................................................................... 34

H. DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) ......................................................... 37

I. Landasan Teori .............................................................................................. 39

J. Hipotesis ........................................................................................................ 42

BAB III: METODE PENELITIAN .................................................................................. 44

A. Jenis dan Rancangan Penelitian..................................................................... 44

B. Variabel penelitian ........................................................................................ 44

1. Variabel bebas......................................................................................... 44

2. Variabel tergantung................................................................................. 44

3. Variabel pengacau................................................................................... 44

C. Definisi operasional ....................................................................................... 45

1. EC50 ......................................................................................................... 45

2. Ekstrak etanol ......................................................................................... 45

3. Ekstrak hexane ........................................................................................ 45

4. Ekstrak kunyit ......................................................................................... 45

5. Fraksi aktif .............................................................................................. 45

6. Infudasi ................................................................................................... 45

7. Isolat fraksi aktif ..................................................................................... 45

8. Maserasi .................................................................................................. 46

9. Perkolasi.................................................................................................. 46

| iv
 D. Alat dan Bahan Penelitian ............................................................................. 46

E. Tata Cara Penelitian ...................................................................................... 48

1. Uji Kemurnian Simplisia ........................................................................ 48

2. Penapisan (Skrinning) Fitokimia ............................................................ 50

3. Ekstraksi Simplisia dan Uji Antioksidan secara Kualitatif ..................... 57

4. Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi .................................................... 58

5. Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ........................................................... 60

6. Analisis Hasil ................................................................................................ 61

BAB IV: HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................................... 63

A. Uji Kemurnian Simplisia ............................................................................... 63

1. Penetapan kadar abu ............................................................................... 63

2. Penetapan kadar abu tidak larut asam ..................................................... 64

3. Penetapan kadar abu larut air .................................................................. 64

4. Penetapan kadar sari larut air .................................................................. 65

5. Penetapan kadar sari larut etanol ............................................................ 65

6. Penetapan bahan organik asing ............................................................... 66

7. Penetapan kadar air dengan destilasi toluene.......................................... 66

B. Penapisan (Skrining) Fitokimia ..................................................................... 67

1. Uji Kualitatif secara Kimiawi ................................................................. 67

2. Uji Kualitatif secara KLT ....................................................................... 74

3. Uji kualitatif secara KLT untuk Alkaloida ............................................. 80

|v
 C. Ekstraksi Simplisia dan Uji Antioksidan Secara Kualitatif ........................... 82

D. Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi .......................................................... 89

E. Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ................................................................. 96

BAB V: KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 102

A. Kesimpulan.................................................................................................. 102

B. Saran ............................................................................................................ 103

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................................... 104

LAMPIRAN.................................................................................................................... 107

| vi
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Total warna dan identitas komponen pigmen pada rimpang kunyit

(Krisnamurthy et al., 1976) ............................................................................ 23

Tabel 2. Kandungan minyak atsiri dalam rimpang kunyit (Jaya Prakasha, dkk,

2005).................................................................................................................. 24

Tabel 3. Komposisi kimia rimpang kunyit, kunyit kering, dan bubuk kunyit per

100 gram bahan yang dapat dimakan (Farrel, 1990 dan Shankaracharya,

Natarajan, 1977)............................................................................................... 25

Tabel 4. Hasil pengukuran spektrofotometer visibel fraksi kunyit ......................... 95

| vii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Struktur kimia kurkumin, demetoksikurkumin, dan bis-

demetoksikurkumin (Jayaprakasha,2005). .............................................. 23

Gambar 2. Struktur DPPH (Li, 2009) .......................................................................... 88

Gambar 3. Reaksi radikal DPPH dengan antioksidan (Witt, Lalk, Hager, and

Voigt, 2010) ................................................................................................. 88

Gambar 4. Kurkumin (Ahmad, Patong, 2006) ........................................................... 89

Gambar 5. Demetoksi Kurkumin (Ahmad, Patong, 2006) ....................................... 90

Gambar 6. Bis-demetoksi Kurkumin (Ahmad, Patong, 2006) ................................. 90

Gambar 7. Reaksi radikal DPPH dengan antioksidan (Kumalaningsih, 2006)...... 91

Gambar 8. Struktur DMSO (Walker, 1993) ............................................................... 92

Gambar 9. Auxokrom dan kromofor DPPH (Witt, Lalk, Hager, dan Voigt, 2010)

....................................................................................................................... 93

Gambar 10. 3 jenis kurkumin (Rahayu, 2010) ........................................................... 97

| viii
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Data Penimbangan Uji Kemurnian Simplisia Rimpang Kunyit ................ 107

Lampiran 2. Data Perhitungan Uji Kemurnian Simplisia Rimpang Kunyit .................. 109

Lampiran 3. Foto Uji Kemurnian Simplisia Rimpang Kunyit ....................................... 110

Lampiran 4. Data Penimbangan Penapisan (Skrining) Fitokimia Rimpang Kunyit ...... 111

Lampiran 5. Foto Penapisan (Skrining) Fitokimia Rimpang Kunyit ............................. 112

Lampiran 4. Data Pengamatan KLT Penapisan (Skrining) Fitokimia Rimpang Kunyit 114

Lampiran 7. Data Perhitungan KLT Penapisan (Skrining) Fitokimia Rimpang Kunyit . 120

Lampiran 8. Data Penimbangan Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit dan Uji Antioksidan

Secara Kualitatif ........................................................................................ 121

Lampiran 9. Foto Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit dan Uji Antioksidan Secara

Kualitatif .................................................................................................... 122

Lampiran 10. Data Pengamatan KLT Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit dan Uji

Antioksidan Secara Kualitatif .................................................................... 125

Lampiran 11. Data Perhitungan KLT Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit dan Uji

Antioksidan Secara Kualitatif .................................................................... 129

Lampiran 12. Data Penimbangan Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi ...................... 132

Lampiran 13. Data Perhitungan Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi......................... 133

Lampiran 14. Kurva Sampel 3 Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi .......................... 140

Lampiran 15. Kurva Sampel 4 & 5 Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi ................... 141

| ix
Lampiran 16. Kurva OT Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi .................................... 142

Lampiran 17. Data Penimbangan Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ............................. 143

Lampiran 18. Data Perhitungan Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ................................ 144

Lampiran 19. Data Pengamatan KLT Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ....................... 147

Lampiran 20. Kurva Isolat 1 Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ..................................... 149

Lampiran 21. Kurva Isolat 2 Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ..................................... 150

Lampiran 22. Kurva Isolat 3 Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ..................................... 151

Lampiran 23. Kurva OT Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ........................................... 152

Lampiran 24. Kurva Larutan Standar Kurkumin Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat ..... 153

Lampiran 25. Kurva Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Uji Fraksinasi .......... 154

Lampiran 26. Kurva Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Uji Isolat .................. 155

|x
 ABSTRAKSI

Seiring dengan kemajuan jaman, banyak penyakit yang dapat timbul di

kalangan masyarakat modern. Hal tersebut semakin banyak terjadi terlebih dengan

adanya peningkatan gaya hidup dan kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi

yang naasnya berdampak pada kerusakan lingkungan. Perusakan lingkungan yang

terjadi terbukti dengan adanya global warming yang memberi dampak buruk

pada kesehatan.

Salah satu dampak buruk yang sering dijumpai adalah penyakit-penyakit

akibat radikal bebas seperti kanker dan penyakit degeneratif lainnya. Antioksidan

sebagai satu-satunya senyawa yang dapat menurunkan dan menghambat aktivitas

radikal bebas menjadi sesuatu yang sangat berharga dan dicari oleh banyak orang.

Sebenarnya, banyak tanaman yang memiliki kandungan antioksidan yang

berkhasiat bagi tubuh. Salah satunya adalah tanaman Curcuma domestica atau

yang lebih dikenal dengan kunyit. Secara teori, kunyit memiliki kandungan

kurkumin yang dapat menghambat aktivitas antioksidan. Penelitian ini bertujuan

untuk mengidentifikasi senyawa aktif kurkumin dan mengisolasi senyawa tersebut

serta melakukan uji aktivitas antioksidan untuk mengetahui aktivitasnya dalam

menghambat aktivitas radikal bebas.

Isolasi dilakukan dengan cara ekstraksi, fraksinasi dan isolasi itu sendiri.

Sedangkan pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan uji penangkapan

| xi
radikal DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) yang kemudian diukur secara

spektrofotometri dengan spektrofotometer visibel. Nilai aktivitas antioksidan

dinyatakan dengan EC50 yaitu konsentrasi antioksidan yang dapat menurunkan

50% aktivitas radikal bebas.

Hasil penelitian yang didapat adalah didapat 3 isolat dari fraksi rimpang

kunyit yaitu kurkumin., demetoksi kurkumin, dan bis-demetoksi kurkumin.

Kemudian dari hasil pengujian aktivitas antioksidan didapatkan EC50 dari

kurkumin pada isolat sebesar 0,186 mg/ml. Kemudian didapat EC50 dari

demetoksi kurkumin sebesar 0,544 mg/ml. sedangkan pada bis-demetoksi

kurkumin didapat EC50 sebesar 3,30 mg/ml.

Kata kunci: antioksidan, radikal bebas, DPPH, Curcuma domestica, Curcumae

Domesticae Rhizoma, kurkumin, demetoksi kurkumin,

bisdemetoksi kurkumin.

| xii
 BAB I

PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG

Salah satu kemajuan penting di bidang kedokteran yang muncul 10

tahun terakhir abad kedua puluh satu ini adalah pemahaman baru tentang cara

berbagai penyakit dan bahan-bahan lain merusak tubuh manusia. Informasi

penting yang diperoleh dari penelitian tersebut adalah bahwa kerusakan pada

sel dan jaringan yang merupakan akar dari sebagian besar penyakit disebabkan

oleh kelompok kimia yang sangat aktif dan berbahaya yang disebut radikal

bebas. Radikal bebas terbentuk dalam tubuh sebagai akibat dari proses dasar

penyakit, dapat juga terbentuk setelah pemejanan terhadap asap rokok,

knalpot, gas industry, dan hamper semua bentuk radiasi (Youngson, 2003).

Sebagian penyakit diawali dengan reaksi oksidasi yang berlebihan

dalam tubuh. Oksigen merupakan sesuatu yang penting dalam kehidupan,

namun pada kondisi tertentu keberadaannya dapat berimplikasi pada berbagai

penyakit dan kondisi degeneratif, seperti aging, artritis, kanker, dan lain-lain

(Winarsi, 2007).

Reaksi oksidasi terjadi setiap saat, bahkan ketika manusia bernafas.

Reaksi ini mencetuskan terbentuknya radikal bebas yang sangat aktif, yang

dapat merusak struktur serta fungsi sel. Namun, reaktivitas radikal bebas itu

dapat dihambat oleh sistem antioksidan yang melengkapi sistem kekebalan

tubuh (Winarsi, 2007).

| 13
 Antioksidan bekerja dengan mendonorkan atom hidrogen ke radikal

hidroksil. Pada dasarnyam tubuh memiliki antioksidan alami yang mencakup

senyawa seperti sistein, glutation, dan D-penicillamin, serta isi darah,

misalnya molekul transferrin yang mengandung zat besi dan seloplasmin

protein. Tubuh juga mengandung enzim antioksidan seperti dismutase

superoksida (SOD) (Youngson, 2003).

Banyak produk makanan dan minuman yang berlabel antioksidan

beredar di pasaran dengan harga relatif mahal. Padahal, komponen antioksidan

terdapat di alam secxara melimpah, baik dalam sayur-sayuran maupun buah-

buahan. Namun banyak yang belum paham dengan hal tersebut (Winarsi,

2007).

Kunyit termasuk salah satu tanaman suku temu-temuan

(Zingiberaceae). Kunyit sering dimanfaatkan sebagai ramuan obat tradisional

untuk menyembuhkan berbagai penyakit (Winarto, 2004). Komponen kimia

yang terdapat dalam rimpang kunyit adalah minyak atsiri, pati, zat pahit,

resim, selulosa, dan beberapa mineral. Terdapat pula komponen zat warna

pada kunyit yaitu kurkumin (Said, 2007).

Komponen utama pada rimpang kunyit yang berkhasiat obat adalah

minyak atsiri dan zat warna kuning (kurkuminoid). Kadar minyak atsiri pada

rimpang kunyit sekitar 3% sedangkan kadar kurkuminoid mencapai 10%

(Rukmana, 1994).

Dalam penelitian laboratorium, kurkumin dapat menghambat

pertumbuhan sejumlah besar kanker, yaitu kanker kolon, prostat, paru-paru,

hati, lambung, payudara, ovarium, otakm dan leukemia. Kunyit pun

| 14
 menghambat angiogenesis dan memaksa sel-sel kanker untuk mati melalui

proses bunuh diri sel (apoptosis). Pada penelitian yang dilakukan pada mencit,

kurkumin dapat mencegah perkembangan beberapa tumor yang disebabkan

oleh senyawa karsinogenik dan juga menghambat pertumbuhan tumor

manusia yang sudah dicangkokkan pada mencit (Servan-Schreiber, 2009).

Berangkat dari hal-hal tersebut, maka penulis ingin melakukan uji pada

rimpang kunyit untuk membuktikan apakah terdapat aktivitas senyawa

antioksidan pada rimpang kunyit, khususnya pada senyawa kurkuminoid.

B. RUMUSAN MASALAH

1. Apa saja kandungan senyawa yang terdapat pada rimpang kunyit.

2. Dari fraksi yang didapat, manakah fraksi yang memiliki aktivitas

antioksidan paling besar.

3. Bagaimana cara mengisolasi senyawa aktif dari fraksi yang memiliki

aktivitas antioksidan terbesar.

4. Bagaimana cara menguji aktivitas antioksidan dari senyawa aktif isolat

rimpang kunyit

5. Berapa EC50 dari senyawa aktif isolat pada rimpang kunyit.

C. MANFAAT

1. Memberikan informasi mengenai kandungan kurkuminoid pada kunyit

yang memiliki aktivitas antioksidan.

2. Mendukung penggunaan kunyit sebagai salah satu obat tradisional

penangkal radikal bebas.

| 15
D. TUJUAN

1. Mengidentifikasi senyawa yang terdapat pada rimpang kunyit.

2. Mengetahui fraksi yang memilliki aktivitas atioksidan paling besar

pada rimpang kunyit.

3. Mengisolasi senyawa aktif dari fraksi yang memiliki aktivitas

antioksidan terbesar pada rimpang kunyit.

4. Menguji aktivitas antioksidan dari senyawa aktif isolat rimpang

kunyit,.

5. Mengetahui seberapa besar aktivitas antioksidan dari senyawa aktif

isolate rimpang kunyit yang diukur dengan nilai EC50.

| 16
 BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Uraian Tanaman Kunyit

1. Sistematika Tanaman

Divisio : Spermatophyta

Sub-diviso : Angiospermae

Kelas : Monocotyledoneae

Ordo : Zingiberales

Famili : Zungiberaceae

Genus : Curcuma

Species : Curcuma domestica Val.

(Depkes RI, 1997).

2. Nama Daerah

Kunyit mempunyai berbagai nama daerah yang berbeda diantaranya :

o Sumatra: Kakunye (Enggano), Kunyet (Adoh), Kuning (Gayo),

Kunyet (Alas), Hunik (Batak), Odil (Simalur), Undre, (Nias), Kunyit

(Lampung), Kunyit (Melayu).

o Jawa: Kunyir (Sunda), Kunir (Jawa Tengah), Temo koneng (Madura)

o Kalimantan: Kunit (Banjar), Henda (Ngayu), Kunyit (Olon Manyan),

Cahang (Dayak Panyambung), Dio (Panihing), Kalesiau (Kenya),

Kunyit (Tidung)

| 17
 o Nusa Tenggara: Kunyit (Sasak), Huni (Bima), Kaungi (Sumba

Timur), Kunyi (Sumba Barat), Kewunyi (Sawu), Koneh, (Flores),

Kuma (Solor), Kumeh (Alor), Kunik (Roti), Hunik kunir (Timor)

o Sulawesi: Uinida (Talaud), Kuni (Sangir), Alawaha (Gorontalo),

Kolalagu (Buol), Pagidon (Toli-toli), Kuni (Toraja), Kunyi

(Ujungpandang), Kunyi (Selayar), Unyi (Bugis), Kuni (Mandar).

o Maluku: Kurlai (Leti), Lulu malai (Babar), Ulin (Tanimbar), Tun

(Kayi), Unin (Ceram), Kunin (Seram Timur), Unin, (Ambon), Gurai

(Halmanera), Garaci (Ternate).

o Irian: Rame (Kapaur), Kandeifa (Nufor), Nikwai (Windesi),

Mingguai (Wandamen), Yaw (Arso).

(Depkes RI, 1997).

3. Uraian Tanaman

Kunyit merupakan tanaman terna, berbatang semu, tinggi dapat

mencapai 40 100 cm. Bentuk batangnya semu, tegak, bulat dan basah,

membentuk rimpang dengan warna hijau kekuningan dan tersusun dari

pelepah daun (agak lunak). Daun tunggal, bentuk bulat telur (lanset)

memanjang hingga 10-40 cm, lebar 8-12,5 cm dan pertulangan menyirip

dengan warna hijau pucat. Berbunga majemuk yang berambut dan

bersisik dari pucuk batang semu, panjang 10-15 cm dengan mahkota

sekitar 3 cm dan lebar 1,5 cm, berwarna putih/kekuningan. Ujung dan

pangkal daun runcing, tepi daun yang rata. Kulit luar rimpang berwarna

jingga kecoklatan, daging buah merah jingga kekuning-kuningan

(Sumiati, 2004).

| 18
 Kunyit mampu membentuk rimpang, berwarna oranye, bila tua dan

tunas mudanya berwarna putih, membentuk rumpun yang rapat. Berakar

serabut berwarna coklat muda. Setiap tanaman berdaun 3 10 helai,

panjang daun beserta pelepahnya sampai 70 cm, helaian daun berbentuk

lanset memanjang, berwarna hijau dan hanya bagian atas dekat

pelepahnya berwarna agak keunguan, panjang 28 85 cm, lebar 10 25

cm. Bunga muncul dari batang semu panjang 10 15 cm. Bunga

warnanya putih/kuning pucat, pangkal bunga warnanya putih (Sumiati,

2004).

Kunyit yang mempunyai nama latin Curcuma domestica

Val. merupakan tanaman yang mudah diperbanyak dengan stek rimpang

dengan ukuran 20-25 gram stek. Bibit rimpang harus cukup tua. Kunyit

tumbuh dengan baik di tanah yang tata pengairannya baik, curah hujan

2.000 mm sampai 4.000 mm tiap tahun dan di tempat yang sedikit

terlindung. Tapi untuk menghasilkan rimpang yang lebih besar

diperlukan tempat yang lebih terbuka. Rimpang kunyit berwarna kuning

sampai kuning jingga (Sumiati, 2004.)

Tanaman kunyit tumbuh bercabang dengan ketinggian 40-100 cm.

Batang merupakan batang semu, tegak, bulat, membentuk rimpang

dengan warna hijau kekuningan dan tersusun dari pelepah daun ( agak

lunak). Daun tunggal, bentuk bulat telur ( lanset) memanjang hingga 10-

40 cm, lebar 8-12.5 cm dan pertulangan menyirip dengan warna hijau

pucat. Berbunga majemuk, berambut, dan bersisik dari pucuk batang

semu, panjang 10-15 cm dengan mahkota sekitar 3 cm dan lebar 1.5 cm,

| 19
serta berwrna putih/ kekuningan. Ujung dan pangkal daun runcing serta

tepi daun rata. Kulit luar rimpang berwarna jingga kecoklatan dan

daging buah merah jingga kekuning-kuningan (Johani, 2002).

Tanaman yang termasuk family Zingiberaceae ini merupakan

tanaman herba menahun dengan akar rimpang. Batang tegak. Daun

kerap kali jelas 2 baris dengan pelepah yang memeluk batang dan lidah

diantara batas pelepah dan helain daun. Bunga zygomorph, berkelamin

2. Kelopak berbentuk tabung dengan ujung yang bertaju kerap kali

terbelah serupa pelepah. Daun mahkota 3, pada pangkalnya melekat.

Benang sari sempurna 1, penghubung benang sari kerap kali lebar, ruang

sari 2. Staminodia hampir selalu 3. Bakal buah tenggelam tenggelam,

beruang 3 atau 1. Tangkai putik sangat langsing, dengan ujung terjepit di

antara kedua benang sari. Kepala sari melebar. Buah kotak kebanyakan

berkatup 3, kadang-kadang tidak pecah (Steenis,2006).

Rimpang ( rhizoma ) sesungguhnya adalah batang beserta daunnya

yang terdapat di dalam tanah, bercabang-cabang dan tumbuh mendatar

dan dari ujungnya dapat tumbuh tunas yang muncul di atas tanah dan

dapat merupakan suatu tumbuhan baru. Rimpang disamping digunakan

sebagai alat perkembangbiakan juga merupakan tempat penimbunan zat-

zat makanan cadangan. Akar tinggal pada kunyit memiliki ciri-ciri yaitu

berbentuk bulat atau jorong, bergaris tengah 5 cm, panjangnya sekitar 2

cm sampai 6 cm, lebar sekitar 1 cm sampai 3 cm (Tjitrosoepomo 2005).

Bagian tepi akar tersebut berkeriput, bagian luar bewarna coklat

muda kemerah-merahan ( Kartasapoetra, 1996).

| 20
4. Ekologi dan Penyebarannya

Tumbuh dan ditanam di Asia Selatan, Cina Selatan, Taiwan, Indonesia

dan Filipina. Tanaman kunyit tumbuh dengan baik di tanah yang baik tata

pengairannya, curah hujan yang cukup banyak 2000-4000 tiap tahun

dan di tempat yang sedikit kenaungan, tetapi untuk menghasilkan

rimpang yang lebih besar dan baik ditanam di tempat yang terbuka.

Tanah ringan seperti tanah lempung berpasir, baik untuk pertumbuhan

rimpang. (Depkes RI. 1997 halaman 49)

5. Kandungan Kimia

Kurkuminoid adalah kelompok senyawa fenolik yang terkandung

dalam rimpang tanaman famili Zingiberceae antara lain : Curcuma longa

syn. Curcuma domestica (kunyit) dan Curcuma xanthorhiza

(temulawak). Kurkuminoid bermanfaat untuk mencegah timbulnya

infeksi berbagai penyakit Kurkuminoid berkhasiat menetralkan racun,

menurunkan kadar kolesterol, dan trigliserida darah, antibakteri,

analgetik, dan antiinflamasi. Sekarang telah banyak diteliti bahwa

kurkuminoid dapat digunakan sebagai antioksidan dan inhibitor virus

HIV (Kristina, 2006). Beberapa kandungan kimia dari rimpang

kunyit yang telah diketahui yaitu minyak atsiri sebanyak 6% yang terdiri

dari golongan senyawa monoterpen dan sesquiterpen (meliputi

zingiberen, alfa dan beta-turmerone), zat warna kuning yang

disebut kurkuminoid sebanyak 5% (meliputi kurkumin 50-60%, mono

desmetoksi kurkumin dan bidesmetoksikurkumin), protein, fosfor,

kalium, besi dan vitamin C. Dari ketiga senyawa

| 21
kurkuminoid tersebut, kurkumin merupakan komponen terbesar. Sering

kadar total kurkuminoid dihitung sebagai % kurkumin, karena kandungan

kurkumin paling besar dibanding komponen kurkuminoid lainnya.

Karena alasan tersebut beberapa penelitian baik fitokimia maupun

farmakologi lebih ditekankan pada kurkumin. (Sumiati , 2004).

Menurut Jayaprakasha et all (2005),kurkumin merupakan molekul

dengan kadar polifenol yang rendah namun memiliki aktivitas biologi

yang tinggi antara lain memiliki potensi sebagai antioksidan. Gugus

hidroksil dan metoksil pada cincin fenil dan substituen 1,3 diketon

memiliki peran yang sangat signifikan dalam kemampuan kurkumin

sebagai antioksidan. Aktivitas antioksidan meningkat dengan

meningkatnya gugus hidroksil pada cincin fenil pada posisi orto dengan

gugus metoksi.

Kurkumin mempunyai sifat fisika yaitu bentuknya serbuk dan

warna kuning terang atau kuning kemerahan. Selain sifat fisika,

kurkumin juga mempunyai sifat kimia yaitu rumus strukturnya

C21H20O6, titik lelehnya yaitu 361.40, F (183C), massa Molar 368.38

g/mol, dan kelarutannya yaitu tidak larut di dalam air dan eter tetapi larut

di dalam alkohol. Kunyit juga mempunyai kandungan kimia seperti

minyak atsiri, phellandrene, sabinene, cineol, borneol, zingiberene,

curcumene, turmeron, camphene, camphor, sesquiterpene, caprilic acid,

methoxinnamic acid, dan tholymethy carbinol. Selain itu, zat warna

rimpang kunyit mengandung alkoloid curcumin. (Muhlisah, Ir. Fauziah.

2008).

| 22
Gambar 1. Struktur kimia kurkumin, demetoksikurkumin, dan bis-

demetoksikurkumin (Jayaprakasha,2005).

Tabel 1. Total warna dan identitas komponen pigmen pada rimpang

kunyit (Krisnamurthy et al., 1976)

Selain kurkumin, kunyit juga mengandung minyak atsiri yang

menentukan aroma dan cita rasa kunyit. Dalam perdagangan

Internasional, minyak ini dikenal sebagai turmeric oil atau turmerol

(Purseglove, 1981).

Kandungan lengkap dari minyak atsiri, yaitu (1) monoterpen

yang terdiri dari pesimen, 1:8-sineol, -feladren, sabinen, borneol dan

| 23
(2) sesquiterpen yang terdiri dari turmeron, ar-turmeron, zingiberen, -

atlanton, -atlanton, dan -sesquifeladren (Purseglove et al., 1981).

Kedua komponen di atas terdapat dalam empat bentuk yaitu

monoterpen hidrokarbon, monoterpen teroksigenasi, sesquiterpen

hidrokarbon, dan sesquiterpen teroksigenasi. Komponen yang paling

dominan adalah sesquiterpen teroksigenasi. Komponen utama dari

minyak atsiri ini adalah turmerol yaitu suatu alkohol dengan rumus

molekul C13H18O atau C14H10O (Pursegloveet al., 1981).

Tabel 2. Kandungan minyak atsiri dalam rimpang kunyit (Jaya

Prakasha, dkk, 2005)

| 24
 Tabel 3. Komposisi kimia rimpang kunyit, kunyit kering, dan bubuk

kunyit per 100 gram bahan yang dapat dimakan (Farrel, 1990

dan Shankaracharya, Natarajan, 1977)

6. Khasiat dan Kegunaan

Khasiat dan Kegunaan di Masyarakat Kunyit memiliki banyak

khasiat dan kegunaan terutama pada rimpangnya. Rimpang kunyit

merupakan obat. Dalam pengobatan herbal, sudah banyak jenis

penyakit yang dapat disembuhkan dengan rimpang kunyit seperti

demam, pilek dengan hidung tersumbat, rematik, diare, disentri, gatal-

gatal pada kulit, bengkak, bau badan, malaria, panas dalam atau

sariawan usus atau sariawan mulut. Di samping itu, kunyit juga dapat

menurunkan kadar lemak tinggi (hyperlipidemia), menyembuhkan nyeri

dada, asma, rasa tidak enak di perut (dispepsia), rasa baal di bahu,

| 25
 terlambat haid karena darah tidak lancar, haid tidak teratur, sakit perut

sehabis melahirkan, radang hidung, radang telinga, radang gusi, radang

rahim, keputihan, radang usus buntu, radang amandel (tonsilitis),

penyakit kuning (jaudice), hepatitis, batu empedu (cholelithiasis), dan

tekanan darah tinggi (Winarto, W.P. 2008).

Aktivitas Farmakologi Menghilangkan sumbatan peluruh haid

(emmenogue), antiradang (antiinflamasi), mempermudah persalinan,

peluruh kentut (carminative), antibakteri, memperlancar pengeluaran

empedu (kolagogum), dan pelembab (astringent) (Winarto, W.P. 2008).

B. Simplisia

1. Pengertian simplisia

Simplisia merupakan bahan alam yang digunakan sebagai bahan

obat dan belum mengalami pengolahan apapun juga, kecuali dinyatakan

lain, berupa bahan yang telah dikeringkan. Seimplisia dibedakan menjad

simplisia nabati, simplisia hewani dan simplisia pelican (mineral).

Simplisia nabati adalah yang berupa tumbuhan utuh, bagian tumbuhan

atau eksudat tumbuhan. Eksudat tumbuhan adalah sis sel yang secara

spontan keluar dari tumbuhan atau isis sel yang dengan cara tertentu

dipisahkan dari tumbuhannyayang belum berupa senyawa kimia murni

(Depkes RI, 2000).

Ukuran perajangan tergantung dari bahan yang digunakan dan

berpengaruh terhadap kualitas simplisia yang dihasilkan. Perajangan

terlalu tipis dapat mengurangi zat aktif yang terkandung dalam bahan.

Sedangkan jika terlalu tebal, maka pengurangan kadar air dalam bahan

| 26
 agak sulit dan memerlukan waktu yang lama dalam penjemuran dan

kemungkinan besar bahan mudah ditumbuhi oleh jamur (Sembiring,

2007).

Kualitas simplisia sangat dipengaruhi oleh kandungan bahan aktif,

warna, kontaminasi mikroba dan metabolit sekunder seperti minyak atsiri,

flavonoid, fenolat, dan klorofil. Pada penentuan kualitas simplisia terbagi

atas analisa secara fisik dan kimia. Secara fisik biasanya termasuk

penampakannya secara visual terhadap warna, kotoran dan lainnya,

sedangkan secara kimia adalah analisa kandungan bahan aktifnya. Bahan

tanaman harus langsung dikeringkan setelah dikecilkan ukurannya.

Apabila tertunda, akan terjadi proses ermentasi, pemucatan, dan

dekomposisi kimia bahan aktifnya (Hernani dan Rahmawati, 2009).

C. Ekstrak

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat

aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai,

kemudian semua atau hamper semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk

yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang ditetapkan.

Ekstraksi merupakan proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari

jaringan tumbuhan ataupun hewan dengan menggunakan penyari tertentu

(Depkes RI, 1995).

D. Metode Ekstraksi

Terdapat beberapa metode yang digunakan utuk penyarian, antara lain :

1. Cara dingin

a. Maserasi

| 27
 Maserasi Maserasi adalah proses pengekstraksi simplisia

dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengadukan

pada temperatur ruangan (Depkes RI, 2000).

b. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut sampai sempurna

(exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur

ruangan. Proses ini terdiri dari tahapan pengembangan bahan,

tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya

(penetasan/penampungan ekstrak) (Depkes RI, 2000).

2. Cara Panas

a. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur

titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas

yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya

dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali

sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna (Depkes RI,

2000).

b. Soxhlet

Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi

kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya

pendingin balik (Depkes RI, 2000).

c. Digesti

| 28
 Digesti adalah maserasi dengan pengadukan kontinu pada

temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara

umum dilakukan pada temperatur 40-50oC (Depkes RI, 2000).

d. Infus

Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari

simplisia nabati dengan air pada suhu 900C selama 15 menit

(Depkes RI, 1979).

e. Dekok

Dekok adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari

simplisia nabati dengan air pada waktu yang lebih lama 30 menit

dan temperatur sampai titik didih air (Depkes RI, 2000).

E. Fraksinasi

Fraksinasi merupakan metode yang digunakan untuk memisahkan suatu

komponen dari komponen lainnya dari campuran komponen. Dalam

penyulingan, fraksinasi dilakukan dengan banuan suatu kolam tempat ua yang

naik bertemu dengan cairan yang turun. Komponen-komponen makromolekul

dapat dipisahkan dengan sejumlah metode misalnya elektroforesis,

penyaringan gel, kromatografi, pemusingan, fraksinasi dan partisi

(Pudjaatmaka, 2002).

F. Pemurnian Senyawa

1. Kromatografi Lapis tipis (KLT)

Kromatografi merupakan suatu metode fisik untuk pemisahan yang

didasarkan atas perbedaan afinitas senyawa-senyawa yang sedang

dianalisis terhadap dua fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak. Campuran

| 29
senyawa dapat mengalami adsorpsi dan desorpsi oleh fasa diam secara

berturut-turut sehingga secara berurutan fasa gerak juga akan melarutkan

senyawa-senyawa tersebut dan proses pemisahan dapat terjadi karena

campuran memiliki kelarutan yang berbeda di antara dua fasa tersebut

(Kristanti dkk, 2008).

Ditinjau secara fisik, kromatografi lapis tipis merupakan salah satu

jenis kromatografi planar. KLT memiliki banyak kesamaan dengan

kromatografi kertas dalam penotolan sampel, pengembangan

kromatogram dan cara deteksinya, tapi proses pemisahan yang terjadi

pada KLT dan kromatografi kertas berbeda. Pada KLT, pemisahan yang

terjadi secara adsorpsi sedangkan dalam kromatografi kertas proses

pemisahan terjadi secara partisi. Fase diam dalam KLT berupa padatan

penyerap yang dihasilkan pada sebuah plat datar dari gelas, plastik atau

alumina sehingga membentuk lapisan tipis dengan ketebalan tertentu.

Fase diam atau penyerap yang bisa digunakan sebagai pelapis plat adalah

silika gel (SiO2), selulosa, alumina (Al2O3) dan kieselgur (tanah

diatome). Kebanyakan penyerap yang digunakan adalah silika gel, dimana

telah tersedia plat yang siap pakai (Padmawinata, 1991).

Pelarut sebagai fasa gerak atau eluen merupakan faktor yag

menentukan gerakan komponen-komponen dalam campuran. Pemilihan

pelarut tergantung pada sifat kelarutan komponen tersebut terhadap

pelarut yang digunakan. Kekuatan elusi dari deret-deret pelarut untuk

senyawa-senyawa dalam KLT dengan menggunakan silika gel akan turun

dengan urutan sebagai berikut: air murni > metanol > etanol > propanol >

| 30
aseton > etil asetat > kloroform > metil klorida > benzena > toluen >

trikloroetilena > tetraklorida > sikloheksana > heksana. Fasa gerak yang

bersifat lebih polar digunakan untuk mengelusi senyawa-senyawa yang

adsorbsinya kuat, sedangkan fasa gerak yang kurang polar digunakan untk

mengelusi senyawa yang adsorbsinya lemah (Sastrohamidjojo, 1995).

Analisis suatu senyawa dalam KLT biasanya dilakukan dengan

dibandingkan terhadap senyawa standarnya. Pengamatan yang lazim

berdasarkan pada kedudukan noda relatif terhadap batas pelarut yang

dikenal sebagai Rf (Retardation factor) yang didefinisikan sebagai:

Rf =

Identifikasi senyawa pada kromatgram dapat dilakukan dengan

melihat warna noda di bawah sinar UV atau dengan menyemprotkan

pereaksi warna sesuai dengan jenis atau kelas senyawa yang dianalisis.

Karena prosenya yang mudah dan cepat, KLT banyak digunakan untuk

melihat kemurnian senyawa organik. Jika analisis dilakukan dengan

mengubah pelarut beberapa kali (minimum 3 macam) dan hasil elusi tetap

menampakkan satu noda maka dapat dikatakan bahwa sampel yang

ditotolkan adalah murni. Secara ringkas, KLT berguna untuk tujuan:

mencari pelarut yang sesuai untuk kromatografi kolom, analisis fraksi-

fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom dan identifikasi senyawa/uji

kemurnian (Kristanti dkk, 2008).

Senyawa santon biasanya dapat dipisahkan dengan KLT pada

silika gel dengan fasa gerak CHCl3 : CH3COOH (4 : 1), CHCl3 : benzena

| 31
 (7 : 3) atau CHCl3 : EtOAc (berbagai perbandingan). Senyawa ini dapat

dideteksi memakai sinar UV yang menghasilkan warna dengan atau tanpa

amonia atau dengan penyemprot fenol umum (Padmawinata, 1987).

2. Kromatografi Vakum Cair (KVC)

Kromatografi vakum cair merupakan salah satu kromatografi

kolom khusus yang biasanya juga menggunakan silika gel sebagai

adsorben ( biasanya silika gel G60, 63-200 m. Fraksi-fraksi yang

ditampung dari proses kromatografi vakum cair biasanya bervolume jauh

lebih besar dibandingkan dengan fraksi- fraksi yang diperoleh dari

kromatografi kolom biasa. Langkah pemisahan menggunakan

kromatografi vakum cair biasanya dilakukan pada tahap awal pemisahan

(pemisahan terhadap ekstrak kasar yang diperoleh langsung dari proses

ekstraksi).

Pada kromatografi vakum cair, bagian atasnya terbuka sehingga

untuk mengotak-atik kolom atau untuk penggantian pelarut mudah

dilakukan (meskipun kromatografi vakum cair juga menggunakan tekanan

rendah untuk meningkatkan laju aliran fasa gerak) (Kristanti dkk, 2008).

Penggunaan kromatografi vakum cair untuk pemurnian suatu

senyawa sudah banyak digunakan. Hal ini dikarenakan pada metode ini

penggantian pelarut lebih mudah dilakukan karena bagian atas kolom

terbuka. Penelitian yang menggunakan kromatografi vakum cair dalam

tahap fraksinasi diantaranya isolasi senyawa santon dari akar C.

| 32
 inophyllum (linuma et al., 1995), isolasi senyawa inophynon dari daun C.

inophyllum (Ali et al., 1999), isolasi senyawa pyranokumarin dari kulit

batang C. lanigerum (Mc Kee et al., 1996), isolasi senyawa 4-fenil

furanokumarin dari kulit batang C. dispar (Guilet et al., 2001) dan isolasi

senyawa kromanon dari batang C. brasiliense (Cottiglia et al., 2004).

3. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Kromatografi lapis tipis (KLT) preparatif merupakan salah satu

metode pemisahan dengan menggunakan peralatan sederhana. Ketebalan

penjerap yang sering dipakai adalah 0,5 - 2 mm. ukuran plat kromatografi

biasanya 20 x 20 cm. Pembatasan ketebalan lapisan dan ukuran plat sudah

tentu mengurangi jumlah bahan yang dapat dipisahkan dengan KLT

preparatif. Penjerap yang paling umum digunakan adalah silika gel.

Penotolan cuplikan dilakukan dengan melarutkan cuplikan dalam sedikit

pelarut. Cuplikan ditotolkan berupa pita dengan jarak sesempit mungkin

karena pemisahan tergantung pada lebar pita. Penotolan dapat dilakukan

dengan pipet tetapi lebih baik dengan penotol otomatis. Pelarut yang baik

untuk melarutkan cuplikan adalah pelarut yang atsiri. Pengembangan plat

KLT preparatif dilakukan dalam bejana kaca yang dapat menampung

beberapa plat. Bejana dijaga tetap jenuh dengan pelarut pengembang

dengan bantuan kertas saring yang diletakkan berdiri disekeliling

permukaan bagian dalam bejana (Hostettmann, et al, 1995).

Kebanyakan Penjerap KLT preparatif mengandung indikator

fluorosensi yang membantu mendeteksi letak pita yang terpisah pada

| 33
 senyawa yang menyerap sinar ultraviolet. Untuk mendeteksi senyawa

yang tidak menyerap sinar ultraviolet yaitu dengan cara menutup plat

dengan sepotong kaca lalu menyemprot kedua sisi dengan penyemprot

(Hostettmann, et al, 1995).

Setelah pita ditampakkan dengan cara yang tidak merusak maka

senyawa yang tidak berwarna dengan penjerap dikerok dari plat kaca.

Cara ini berguna untuk memisahkan campuran beberapa senyawa

sehingga diperoleh senyawa murni (Gritter, et al, 1991).

G. Antioksidan

Radikal bebas adalah atom atau molekul yang tidak stabil dan sangat

reaktif karena mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada

orbital terluarnya. Untuk mencapai kestabilan atom atau molekul, radikal

bebas akan bereaksi dengan molekul disekitarnya untuk memperoleh pasangan

elektron. Reaksi ini akan berlangsung terus-menerus dalam tubuh dan bila

tidak dihentikan akan menimbulkan berbagai penyakit seperti kanker, jantung,

katarak, penuaan dini, serta penyakit degeneratif lainnya. Oleh karena

itu,tubuh memerlukan suatu substansi penting yaitu antioksidan yang mampu

menangkap radikal bebas tersebut sehingga tidak dapat menginduksi suatu

penyakit (Kikuzaki, et al.,2002; Sibuea, 2003;dan Halliwell, 2000 dalam

Andayani, 2008).

Antioksidan adalah zat yang berfungsi melindungi tubuh dari serangan

radikal bebas. Yang termasuk ke dalam golongan zat ini antara lain vitamin,

polifenol, karoten dan mineral. Secara alami, zat ini sangat besar peranannya

| 34
pada manusia untuk mencegah terjadinya penyakit. Antioksidan melakukan

semua itu dengan cara menekan kerusakan sel yang terjadi akibat proses

oksidasi radikal bebas. Radikal bebas sebenarnya berasal dari molekul oksigen

yang secara kimia strukturnya berubah akibat dari aktivitas lingkungan.

Aktivitas lingkungan yang dapat memunculkan radikal bebas antara lain

radiasi, polusi, merokok dan lain sebagainya (Anonim, 2008).

Menurut Kochar dan Tossel dalam Hudson (1990) dalam Yuswantina

(2009) berkaitan dengan fungsinya senyawa-senyawa antioksidan dapat

diklasifikasikan dalam 5 tipe antioksidan yaitu:

1. Primary Antioxidant, yaitu senyawa-senyawa, terutama senyawa-senyawa

fenol yang mampu memutus rantai reaksi pembentukan radikal bebas

asam lemak. Dalam hal ini memberikan atom hidrogen yang berasal dari

gugus hidroksi senyawa fenol sehingga terbentuk senyawa yang stabil.

Senyawa antioksidan yang termasuk kelompok ini misalnya: BHA, BHT,

TBHQ, PG dan tokoferol.

2. Oxygen Scavengers,yaitu senyawa-senyawa yang berperan sebagai

pengikat oksigen sehingga tidak mendukung reaksi oksidasi. Dalam hal

ini, senyawa tersebut akan mengadakan reaksi dengan oksigen yang

berada dalam sistem sehingga jumlah oksigen akan berkurang. Contoh

dari senyawa-senyawa kelompok ini adalah vitamin C (asam askorbat)

askorbil palmitat, asam eritorbat dan sulfit.

3. Secondary Antioxydant,yaitu senyawa-senyawa yang mempunyai

kemampuan untuk mendekomposisi hidroperoksida menjadi produk akhir

yang stabil. Pada umumnya tipe antioksidan ini digunakan untuk

| 35
 menstabilkan polyoefin resin contohnya adalah asam tiodipropionat dan

dilauril tipropionat.

4. Antioxidant Enzyme, yaitu enzim yang berperan mencegah terbentuknya

radikal bebas. Contohnya: glukosaoksidase, superoksida dismutase

(SOD) glutation perioksidase dan katalase.

5. Chelator Sequestrants,yaitu senyawa-senyawa yang mampu mengikat

logam seperti besi (Fe) dan tembaga (Cu) yang mampu mengkatalisa

reaksi oksidasi lemak. Senyawa antioksidan yang termasuk didalamnya

adalah asam sitrat, asam amino, etylenediaminetetra aceticacid (EDTA)

dan fosfolipid.

(Prakash, 2001).

Berdasarkan sumbernya antioksidan digolongkan menjadi 2 macam,yaitu

antioksidan alami dan antioksidan buatan (sintetik). Antioksidan alami mampu

melindungi tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan spesies oksigen reaktif,

mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif serta mampu

menghambat peroksidasi lipid pada makanan. Peroksidasi lipid merupakan

salah satu faktor yang cukup berperan dalam kerusakan selama dalam

penyimpanan dan pengolahan makanan. Antioksidan tidak hanya digunakan

dalam industri farmasi, tetapi juga digunakan secara luas dalam industri

makanan, industri petroleum, industri karet,dan sebagainya (Prakash, 2001).

Fungsi utama antioksidan digunakan sebagai upaya untuk memperkecil

terjadinya proses oksidasi dari lemak dan minyak, memperkecil terjadinya

proses kerusakan dalam makanan, memperpanjang masa pemakaian dalam

industri makanan, meningkatkan stabilitas lemak yang terkandung dalam

| 36
 makanan serta mencegah hilangnya kualitas sensori dan nutrisi. Peroksidasi

lipid merupakan salah satu faktor yang cukup berperan dalam kerusakan

selama dalam penyimpanan dan pengolahan makanan (Cahyadi, 2008.

H. DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)

Senyawa DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) (Mr=394,33) memiliki

karakter sebagai radikal bebas yang stabil. Hal ini disebabkan oleh adanya

delokaliasi dari electron cadangan yang melingkupi seluruh molekulnya

sehngga molekul tersebut tidak dapat mengalami dimerisasi sebagaimana yang

sering terjadi pada senyawa-senyawa radikal bebas yang lain. Delokalisasi

juga menyebabkan timbulnya warna ungu yang cukup gelap. Metode

pengukuran aktivitas antioksidan menggunakan DPPH telah ditemukan sejak

tahun 1958 oleh Marsden Blois seorang pengajar dari Standfor University (

Nur, 2001).

Parameter yang digunakan utuk mengintrepetasikan hasil dari metode

DPPH adalah dengan mengukur nilai efficient concentration atau EC50.

Nilai ini memberikan hasil perbedaan warna dan serapan pada substrat yang

telah kehilangan 50% aktivitas DPPH (Songklanakarin, 2004).

Spektrofotometri

1. Spektroskopi Inframerah

Spektrofotometri inframerah (IR) merupakan salah satu jenis

spektrofotometri vibrasional yang didasarkan pada serapan molekul

terhadap radiasi inframerah. Daerah IR terdiri dari tiga bagian yakni

daerah IR jauh (400-40 cm-1), daerah IR tengah (4000-400 cm-1), dan

| 37
 daerah IR dekat (14000-4000 cm-1). Umumnya analisis senyawa

dilakukan pada daerah IR tengah (Tanaka dkk, 2008).

Penyerapan radiasi IR merupakan proses kuantisasi. Hanya

frekuensi tertentu dari radiasi IR yang akan diserap oleh molekul.

Frekuensi radiasi IR yang dapat diserap adalah frekuensi yang sesuai

dengan kisaran frekuensi vibrasi ulur dan tekuk ikatan dalam kebanyakan

ikatan kovalen molekul. Setelah diserap, frekuensi radiasi IR tersebut

akan meningkatkan amplitudo gerakan vibrasional ikatan dalam molekul.

Meski demikian, tidak semua ikatan dalam molekul dapat menyerap

energi IR meskipun frekuensi radiasi sudah sesuai dengan gerakan ikatan.

Hanya ikatan yang memiliki momen dipol yang dapat bervibrasi saat

menyerap radiasi IR. Semakin besar perubahan momen dipol, maka

serapan akan semakin intens (Stuart, 2004).

2. Spektrofotometer Visibel

Prinsip spektrofotometri visible adalah interaksi radiasi

elektromagnetik dengan suatu sampel maka molekul dalam sampel

menyerap radiasi elektromagnetik dengan panjang gelombang yang

sesuai dengan sinar visible. Interaksi ini menyebabkan electron pada

molekul tereksitasi dari ground state ke exited state, pada exited state

electron mengalami ketidakstabilan sehingga electron akan berpindah dari

exited state ke ground state kembali dengan disertai absorpsi energy oleh

molekul tersebut. Serapan atau absorbansi ini akan diukur alat sesuai

dengan konsentrasi sampel. Cahaya panjang gelombang visible yaitu 400-

| 38
 800 nm. Sumber monokromator sampel detektor pembacaan

detector ( Christian, 2008).

Pengukuran serapan cahaya oleh larutan molekul diatur dengan

hokum Lambert-Beer dimana tertulis Io/It = A = bc. Io adalah intensitas

radiasi yang masuk ; It adalah intensitas radiasi yang ditransmisikan ; A

adalah absorbansi dan ukuran jumlah cahaya yang diserap sampel ;

adalah tetapan dan absorbansi larutan 1 N solute ; b panjang jalur sel

dalam satuan cm ; c adalah konsentrasi analit per liter. Syarat pengukuran

sampel menggunakan spektrofotometri visible yaitu larutan harus jernih,

memiliki gugus kromofor yang panjang dan merupakan senyawa

berwarna (Christian, 2008).

I. Landasan Teori

Kunyit mengandung 1 turunan kurkuminoid lagi yakni bis-demetoksi

kurkumin.Kurkumin memiliki beragam aktivitas farmakologis yang baik bagi

kesehatan. Kurkumin diperoleh melalui ekstraksi kunyit. Senyawa ini larut

dalam etanol sehingga proses ekstraksinya dapat menggunakan pelarut etanol.

Di Indonesia sendiri, kunyit mempunyai nama tersendiri di setiap daerah.

Kunyit termasuk tanaman herba menahun,tumbuh baik di dataran rendah,

mempunyai rimpang dalam tanah, rimpang ini sering digunakan sebagai bahan

untuk pengobatan. Salah satu contoh aktivitas farmakologi dari kunyit adalah

dapat menghilangkan sumbatan peluruh haid, dapat sbagai antioksidan.

| 39
Rimpang kunyit mempunyai banyak kandungan kimia di dalamnya, antara

lain minyak atsiri, kurkuminoid, protein, fosfor, besi dan vitamin C.

Isolasi kurkumin dilakukan dengan beberapa proses. Isolasi merupakan

pemisahan senyawa kimia dari senyawa campurannya. Sebelum dilakukan

ekstraksi, harus dibuat dalam bentuk simplisia. Pengambilan kurkumin dari

rimpangnya adalah dengan cara ekstraksi. Ekstraksi merupakan salah satu

metode pemisahan berdasarkan perbedaan kelarutan. Secara umum ekstraksi

dapat didefinisikan sebagai proses pemisahan dan isolasi zat dari suatu zat

dengan penambahan pelarut tertentu untuk mengeluarkan komponen

campuran dari zat padat atau zat cair. Dalam hal ini fraksi padat yang

diinginkan bersifat larut dalam pelarut (solvent), sedangkan fraksi padat

lainnya tidak dapat larut. Proses tersebut akan menjadi sempurna jika solute

dipisahkan dari pelarutnya, misalnya dengan cara distilasi/penguapan.

Ada beberapa cara ekstraksi yang dapat dilakukan, antara lain cara dingin

dan cara panas. Cara dingin meliputi maserasi, perlokasi. Cara panas

dilakukan dengan penambahan temperatur saat proses ekstraksi, cara panas

meliputi digesti, infus,dekok, sokhlet dan refluks. Dilakukan fraksinasi ekstrak

untuk mendapatkan senyawa aktif dari ekstrak tanaman. Fraksinasi merupakan

proses pemisahan berdasarkan tingkat kepolaran suatu senyawa. Fraksinasi

yang banyak digunakan adalah fraksinasi cai-cair, dimana metode ini

menggunakan dua cairan pelarut yang tidak saling bercampur, sehingga

senyawa tertentu terpisahkan menurut kesesuaian sifat dengan cairan pelarut

(prinsip silve dissolve like).

| 40
 Pemurnian senyawa dapat dilakukan dengan metode kromatografi.

Kromatografi merupakan metode untuk memisahkan senyawa berdasarkan

perbedaan afinitasnya, menggunakan fase gera dan fase diam. Pemisahan yang

terjadi kromatografi lapis tipis secara adsorbsi. Sampel ditotolkan pada plat

KLT, kemudian dikembangkan dalam fase gerak KLT. Salah satu fase gerak

yang dilakukan pada KLT ini adalah metanol-kloroform, dan fase diamnya

adalah silika gel GF254. Identifikasi senyawa dilakukan dengan melihat warna

totolan dengan menggunakan sinar UV atau pereaksi warna yang

disemprotkan. Kromatografi vakum cair mempunyai keuntungan yang utama

dibandingkan dengan kolom konvensional yaitu :

1. Konsumsi fase gerak KCV hanya 80% atau lebih kecil dibanding dengan

kolom konvensional karena pada kolom mikrobor kecepatan alir fase

gerak lebih lambat (10-100l/menit)

2. Adanya aliran fase gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih

ideal jika digabung dengan spectrometer massa.

3. Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih pekat

karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel terbatas

missal sampel klinis.

Kerugian KCV (Kromatogravi Vakum Cair) :

1. Membutuhkan waktu yang cukup lama

2. Sampel yang dapat digunakan terbatas

Kromatografi cair vakum menggunakan tekanan rendah untuk

meningkatkan laju aliran fase gerak. Kromatografi lapis tipis preparatif

merupakan proses isolasi yang terjadi berdasarkan perbedaan daya serap dan

| 41
 daya partisi serta kelarutan dari komponen-komponen kimia yang akan

bergerak mengikuti kepolaran eluen, oleh karena daya serap adsorben

terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen bergerak dengan

kecepatan yang berbeda sehingga hal inilah yang menyebabkan pemisahan.

Analisis senyawa kurkumin dapat dilakukan dengan menggunaka

instrumen spektrofotometer. Instrumen spektrofotometer mempunyai prinsip

kerja adanya interaksi cahaya atau radiasi elektromagnetik dengan sampel.

Interaksi inilah yang menyebabkan elektron pada molekul senyawa tereksitasi

dari ground state ke exited state lalu melepaskan energi, karena energi pada

exited state tidak stabil maka akan kembali ke ground state. Oleh adanya

absorbsi energi oleh molekul senyawa, sebagian energ akan diteruskan menuju

detektor (transmittan), cahaya transmittan akan ditangkap oleh detektor dan

diukur sebagai nilai absorbansi.

Senyawa kurkumin yang terdapat dalam rimpang kunyit bermanfaat

sebagai antioksidan. Antioksidan adalah mikronutrien yang mempunyai

kemampuan unutk menetralkan radikal bebas dengan menyumbangkan

elektronnya ke radikal bebas, sehingga menjadi non radikal. Antioksidan

mempunyai fungsi, diantaranya untuk mencegah terbentuknya radikal bebas

yang baru, menangkap radikal bebas dan mencegah efek berbahaya

selanjutnya, memperbaiki jaringan yang rusak akibat adanya radikal bebas.

J. Hipotesis

1. Kunyit mengandung polifenol, tannin, dan minyak atsiri.

2. Terdapat 1 fraksi dari rimpang kunyit yang memiliki aktivitas antioksidan

paling besar.

| 42
3. Didapat isolat senyawa aktif dari fraksi yang memiliki aktivitas

antioksidan terbesar pada rimpang kunyit yaitu kurkuminoid.

4. Uji aktivitas antioksidan kurkuminoid menunjukkan bahwa kurkuminoid

memiliki aktivitas antioksidan

5. EC50 dari kurkumin adalah 0,04357 mg/ml.

| 43
 BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian non eksperimental

karena tidak ada perlakuan pada subyek uji dan bersifat eksploratif karena

untuk mencari senyawa aktif dalam tanaman rimpang kunyit.

Penelitian ini dilakukan di dalam laboratorium Farmakognosi

Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Rancangan percobaan yang dilakukan antara lain: pembuatan serbuk,

ekstraksi, fraksinasi, dan isolasi.

B. Variabel penelitian

1. Variabel bebas

Variabel bebas pada percobaan ini adalah fraksi aktif antioksidan, fase

gerak, dan fase diam pada sistem kromatografi (kromatografi lapis tipis,

kromatografi vakum cair, dan KLT preparatif).

2. Variabel tergantung

Variabel tergantung pada percobaan ini adalah bercak yang dihasilkan

pada kromatografi lapis tipis, KLT preparatif, nilai Rf, dan warna bercak.

3. Variabel pengacau

Variabel pengacau pada percobaan ini adalah varietas tanaman,

lingkungan tempat tumbuh, dan umur tanaman saat dipanen.

| 44
C. Definisi operasional

1. EC50

EC50 adalah nilai konsentrasi substrat yang menyebabkan 50% hilangnya

aktivitas DPPH.

2. Ekstrak etanol

Ekstrak etanol adalah ekstrak kental yang diperoleh dari hasil ekstraksi

serbuk bagian tanaman dengan cara soxhletasi menggunakan larutan

penyari etanol.

3. Ekstrak hexane

Ekstrak hexane adalah ekstrak kental yang diperoleh dari hasil ekstraksi

serbuk bagian tanaman dengan cara soxhletasi menggunakan larutan

penyari hexane.

4. Ekstrak kunyit

Ekstrak kunyit adalah ekstrak yang diperoleh dari penyarian serbuk

simplisia secara soxhletasi dari rimpang kunyit dengan penyari yang

sesuai dan diuapkan sampai berat serbuk simplisia semula.

5. Fraksi aktif

Fraksi aktif adalah fraksi yang mempunyai kemampuan daya antioksidan.

6. Infudasi

Infudasi adalah metode penyarian dengan menggunakan penyari air

dengan pemanasan pada suhu 90oC selama 15 menit.

7. Isolat fraksi aktif

| 45
 Isolat fraksi aktif adalah proses pemisahan campuran yang mengandung

fraksi aktif dengan menggunakan metode kromatografi vakum cair.

8. Maserasi

Maserasi adalah penyarian yang dilakukan dengan cara merendam serbuk

simplisia dalam cairan penyari.

9. Perkolasi

Perkolasi adalah penyarian yang dilakukan dengan cara mengalirkan

cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi.

D. Alat dan Bahan Penelitian

1. Uji Kemurnian Simplisia

ALAT :

Neraca analitik (Mettler toledo), krus platina (silikat), krus masir, hot

plate (), kertas saring bebas abu, alat-alat gelas, cawan porselen,

pendingin tegak, penjepit, dan shaker (Innova 2100).

BAHAN :

Curcumae domesticae Rhizoma (Rimpang kunyit), HCl encer, kloroform,

etanol 95%, aquadest, dan toluen.

2. Penapisan (Skrining) Fitokimia

ALAT :

Seperangkat kromatografi lapis tipis (KLT), neraca analitik (Mettler

toledo), waterbath (Memmert), kertas saring, alat-alat gelas.

BAHAN :

| 46
 Curcumae domesticae Rhizoma (Simplisia rimpang kunyit), etanol 95%,

metanol, asam 3,5-dinitro benzoat, eter petronelum, aquadest, HCl 1%,

pereaksi dregendorff, pereaksi mayer, natrium karbonat, kloroform,

CH3COOH, kalium hidroksida 0.5N, larutan hydrogen peroksida, asam

asetat glasial, toluene, etanol 80%, pereaksi Fe3Cl, larutan NaCl 2%, dan

larutan gelatin.

3. Ekstraksi Simplisia dan Uji Antioksidan Secara Kualitatif

ALAT :

Neraca analitik (Mettler toledo), seperangkat kromatografi lapis tipis

(KLT), vacuum liquid chromatography (VLC), vacuum (Gast), rotary

evaporator (Buchi, Rotavapor R-3) dan alat-alat gelas.

BAHAN :

Curcumae domesticae Rhizoma (Simplisia rimpang kunyit), etanol 95%,

silica gel, kloroform, toluene, metanol, etil asetat, asam asetat glasial, uap

ammonia, pereaksi vanillin, H2SO4, larutan kurkumin, larutan DPPH,

larutan standar kurkumin, dan larutan DPPH (19.6mg/ml).

4. Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi

ALAT :

Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu), aluminium foil, glass firn, vortex

(Genie-wilton), dan alat-alat gelas.

BAHAN :

Ekstrak kering kunyit, fraksi kering kunyit, larutan 10 mg/10ml metanol,

larutan DPPH, metanol p.a, kolom (silica gel GF254, dan DMSO.

5. Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

| 47
 ALAT :

Seperangkat kromatografi lapis tipis (KLT), spektrofotometer UV-Vis

(Shimadzu), glassfirn, vortex (Genie-wilton), dan alat-alat gelas.

BAHAN :

Fraksi aktif kunyit, silica gel GF254, kloroform, etanol 95%, metanol, dan

DMSO.

E. Tata Cara Penelitian

1. Uji Kemurnian Simplisia

a. Penetapan kadar abu

2-3 zat yang telah digerus dan ditimbang seksama, masukkan ke

dalam krus platina atau krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara,

ratakan. Pijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, dinginkan, timbang.

Jika dengan cara ini arang tidak dapat dihilangkan, tambahkan air panas,

saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa dan kertas saring

dalam krus yang sama. Masukkan filtrate ke dalam krus, uapkan, pijarkan

hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar abu terhadap bahan yang telah

dikeringkan di udara.

b. Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam

Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu, didihkan dengan 25

ml asam klorida encer P selama 5 menit, kumpulkan bagian yang tidak

larut dalam asam, saring melalui krus masir atau kertas saring bebas abu,

cuci dengan air panas, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar

abu yang tidak larut dalam asam terhadap bahan yang dikeringkan di

udara.

| 48
c. Penetapan kadar abu yang larut dalam air

Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu, didihkan dengan 25

ml air selama 5 menit, kumpulkan bagian yang tidak larut, saring melalui

krus kaca masir atau kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas dan

pijarkan selama 15 menit pada suhu tidak lebih dari 4500C, hingga bobot

tetap, timbang. Perbedaan bobot sesuai dengan jumlah abu yang larut

dalam air. Hitung kadar abuyang larut dalam air terhadap bahan yang

dikeringkan di udara.

d. Penetapan kadar asari yang larut dalam air

Keringkan serbuk (4/18) di udara, maserasi 5,0 g serbuk dengan

100 ml air kloroform P dalam labu bersumbat. Selama 6 jam pertama

sekali-kali dikocok selama agar homogen, selanjutnya dibiarkan selama 18

jam. Saring, uapkan 20 ml filtrate hingga kering dalam cawan dangkal

berdasar rata yang telah ditra, panaskan pada suhu 1050C hingga bobot

tetap. Hitung kadar dalam persen sari yang larut dalam air, dihitung

terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara.

e. Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol

Keringkan serbuk (4/18) di udara, maserasi 5,0 g serbuk dengan

100 ml air kloroform P dalam labu bersumbat. Selama 6 jam pertama

sekali-kali dikocok selama agar homogen, selanjutnya dibiarkan selama 18

jam. Saring cepat dengan menghindarkan penguapan etanol (95%), uapkan

20 ml filtrate hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah

ditara, panaskan pada suhu 1050C hingga bobot tetap. Hitung kadar dalam

| 49
 persen sari yang larut dalam etanol (95%), dihitung terhadap bahan yang

telah dikeringkan di udara.

f. Penetapan bahan organik asing

Timbang antara 25-50 g simplisia, ratakan. Pisahkan

sesempurna mungkin bahan organik asing, timbang dan tetapkan

jumlahnya dalam persen terhadap simplisia yang digunakan.

g. Penetapan kadar air dengan destilasi toluen.

Masukkan sejumlah simplisia (10 g serbuk) yang setara dengan

kandungan air 2 sampai 4 ml ke dalam labu alas bulat 500 ml.

kemudian masukkan 200 ml toluene dalam labu alas bulat dan

hungkan dengan destilator dan pendingin tegak. Setelah itu tuang

sejumlah toluene dalam tabung penerima melalui pendingin. Pemanas

(heating mantle) dihidupkan, atur panas hingga toluene mendidih dan

mulai ada tetesa toluene dan air. Atur kecepatan destilasi 4 tetes per

detik, lanjutkan destilasi sampai tidak ada lagi tetesan air (kira-kira 3

jam). Hitung kadar air dalam %v/b.

2. Penapisan (Skrinning) Fitokimia

a. Uji Kualitatif Secara Kimiawi

- Uji Alkaloida

Serbuk simpleks (2 g) dimasukka ke dalam tabung reaksi besar,

tambahkan HCl 1% (10 ml) panaskan selama 30 menit dalam penangas

air mendidih. Suspense disaring dengan kapas ke dalam tabung reaksi

A dan tabung reaksi B sama banyak. Larutan A dibagi 2 sama banyak,

lalu ke dalam laruta A-1 ditambah perekasi Dragendorff (3 tetes) dan

| 50
 larutan A-2 ditambah pereaksi Mayer (3 tetes). Terbentuknya endapan

dengan kedua pereaksi tersebut menunjukkan adanya alakaloida.

Keberadaan alkaloida dai baa tertier taua kuartener dapat ditunjukkan

dengan penambahan serbuk natrium karbonat sampa pH 8-9, kemudian

dicampur dengan klorofrom (4ml), aduk pelan-pelan. Setelah

kloroform memisah, diambil denna pipet Pasteur dan ditambahkan

asam cuka 5% sampai pH 5, diaduk lalu dipisahkan lapisan atas

dengan pipet. Kemudian ditambahkan pereakasi Dragendorff (5 tetes)

untuk lapisan atas. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya

alkaloida dari basakuartener. Kemudia lapisan bawah ditambah asam

klorida 1% (10 tetes) diaduk, akan terbentuk 2 lapisan. Ambil lapisan

atas sserta tambahakn perekasi Dragendorff (2 tetes), terbentuknya

endapan menunjukkan adany alakaloida dari basa tertier.

- Uji Antrakinon

Serbuk simpleks (300 mg) ditmabah KOH 0,5 N (10 ml) dan

larutan hydrogen peroksida (1 ml), dididihkan selama 2 menit. Setelah

dingin suspense diasing melalui kapas. Filtrate (5 ml) ditambah asam

asetat glasial (10 tetes) sampai pH 5, lalu ditambahkan toluena (0 ml).

lapisan atas (5 ml) dipisahkan dengan dipipet dan dimasukkan ke

dalam tabung rekasi, kemudia ditambah 0,5 1 ml KOH 0,5 N. Warna

merah yang terjadi pada lapisan air (basa) menunjukkan adanya

senyawa antrakinon.

- Uji Polifenol

| 51
 Serbuk simpleks (2g) ditambah 10 ml air, panaskan selama 10

menit dalam penangas air mendidih. Lakukan juga terhadap 2 g serbuk

bahan lagi dengn penyari etanol 80% 10 ml. Keduanya disaring panas-

panas, setelah dingin masing- masing dtambah 3 tetes perekaksi besi

(III) klorida. Terjadinya warna hijau-biru menunjukkan adanya

polifenolat.

- Uji Tanin (Zat Samak)

Serbuk simpleks (2 g) ditambah 10 ml air, anaskan selama 10

menit dala peangas air mendidih. Lakukan juga terhadap 2 g srbuk

bahan lagi dengan penyari etanol 80% 10 ml. keduanya disaing

melalui kertas saring, kemudia filtrate ditambah lartan gelatin 1% (5

ml). terbentuknya endapan menunjukkan adanya tanin.

- Uji Steroid

Filtrat (2ml) dari hasil pemasan serbuk tumbuhan (2 g) dengan air

(10 ml) selama 30 ment di atas tangas air tadi (point 6), ditambah asam

3,5 dinitrobenzoat (0,4 ml) dan 0,6 ml KOH 1 N dalam metanol.

Terjadinya warna biru-ungu menunjukkan adanya kardenolida

(glikosida jantung). Untuk penegasan lebih lanjut, filtrate yang lain

(2ml) dicampur dengan kloroform (2 ml). lapisan atas diambil dengan

pipet, lapisan bawah ditambah aam 3,5 dinitrobenzoat (0,5 ml).

terjadinya warna biru-ungu menunjukkan adnya kardenolida.

- Uji Saponin

Masukkan 300 mg serbuk simpleks ke dalam tabung reaksi,

tambahkan 10 ml air, tutup dan kocok kuat-kuat slama 30 detik.

| 52
 Biarkan tabung dalam posisi tegak sealam 30 menit. Apabila terbentuk

buih setinggi 3 cm dari permukaan cairan, menunjukkan adanya

saponin. Uji lain dilakukan dengan menghunakan pipa kapiler

(diameter 1 mm, panjang 12,5 c). larutan hasil peman serbuk

tumbuhan (2 g) dengn air (10 ml) selama 30 menit di atas tangas air

(point 6) setelah disaring, filtrate diasukkan ke dalam pipa kapiler

penuh-penuh. Kapiler diletakkan dalam posisi tegak (vertikal),

kemudian cairan dibiarkan mengalir bebas. Sebagai pembanding,

dikerjakan hal serupa untuk air suling.

Tinggi cairan tertinggal dibandingkan dengan tinggi air suling

(pembanding). Bila tinggi cairan yang diuji setengah atau kurang dari

tinggi air suling, maka adanya saponin akan diperhitungkan.

- Uji Minyak Atsiri

Sebanyak 10 g serbuk simpleks ditabah 20 ml eter, kocok, saring.

Filtrat dikeringuapkan bila berbau sedikit aromatik, larutkan residu

dengan sedikit etanol, uapkan lagi sampai kering. Bila terjadi bau

aromatic spesifik, menunjukkan adanya minyak atsiri.

b. Uji Kualitatif secara KLT

Simplisia ditimbang 2 3 gram disari dengan petroleum eter, pada

suhu 50C selama 5 menit, didapatkan fraksi petroeleum eter dan

residunya. Sisa fraksi petroleum eter disbuang, kemudian residunya

disari dengan kloroform : asam asetat (99:1) 10 ml, pada suhu 50C,

selama 5 menit, dan didapatkan residu dan fraksi kloroform dan asam

asetat yang dianggap sebagai larutan I. Residunya kemudian disari

| 53
dengan metanol : kloroform : asam asetat (49,5 : 49,5 : 1) 10 ml, pada

suhu 50C, selama 5 menit, diperoleh residu dan fraksi metanol-

kloroform- asam asetat yang dianggap sebagai larutan II, residunya

disari dengan metanol : air (1 : 1) 10 ml, pada suhu 50C, selama 5

menit, diperoleh residu dan fraksi metanol-air. Fraksi metanol-air

dianggap sebagai larutan III.

Kemungkinan golongan senyawa yang tersari :

- Larutan I : antrakinon, fenolat, flavonoida, kumarin, steroida

- Larutan II : glikosida antrakinon, glikosida kumarin, saponin,

tannin

- Larutan III : kardenolida, saponin, glikosida antrakinon, glikosida

flavonoida

Sistem KLT yang digunakan :

1. Larutan I

Fase diam : silika gel

Fase gerak : etil asetat benzena (9:1), atau etil asetat toluene

(9:1)

Pembanding : antrakinon, flaonoida, kumarin, steroid

Deteksi : besi (III) klorida, vanillin asam sulft (panaskan 120,

1-2 menit)

2. Larutan II

Fase diam : a. silika gel

b. silika gel

c. silika gel

| 54
 Fase gerak :a. n butanol-asam asetat-air (5:1:4) v/v fase atas

b. etil asetat-asam formiat-asam asetat- air

(100:11:11:27) v/v

c. etil asetat-metanol-air (100:13,5:10) v/v

Pembanding : a. tanin

b. kumarin

c. antrakinon

Deteksi : a. besi (III) klorida, aluminium klorida

b. sitroborat

c. KOH etanolis

3. Larutan III

Fase diam : a. silika gel

b. silika gel

c. selulosa

Fase gerak :a. butanol-asam asetat-air (5:1:4) v/v fase atas

b. kloroform-metanol-air (64:50:10) v/v

c. t butanol-asam asetat-air (4:1:5) v/v fase atas

Pembanding : a. saponin, kardenolida

b. saponin, kardenolida, antrakinon

c. glikosida flavonoid

Deteksi : a. Liebermann - Burchard

b. vanillin asam sufat; panaskan pada suhu 120, 5-

10 menit (setiap menit diamati warna yang

timbul, jangan sampai gosong)

| 55
 c. uap ammonia, aluminium klorida

Larutan pembanding yang digunakan :

a. Glikosida flavonoida : larutan rutin 0,1% dala metanol

b. Flavonoida : larutan kuersetin 0,1% dalam metanol

c. Antrakinon : larutan antrakinon 0,1% dalam metanol

d. Saponin : larutan saponin 0,1% dalam etanol 75%

e. Kumarin : larutan kumarin 0,1% dalam metanol

f. Tanin : larutan asam tanat 0,05% dalam etanol 70%

g. Kardenolida : larutan glikosida lanatosida C 5 mg dalam metanol

h. Alkaloida : larutan alkaloida 1 % dalam etanol

c. Uji Kualiatif secara KLT untuk alkaloid

Simplisia disari dengan petroleum eter 10 ml, selama 5 menit,

diperoleh residu dan fraksi petroleum eter. Residu disari dengan HCl

1%, pada suhu 50C, selama 5 menit hingga diperoleh fraksi asam

klorida dan residu. Residu disingkirkan dan fraksi asam klorida diuji

dengan Dragendorff, bila (+) ditambahkan natrium karbonat 1M

sampai pH 8-9, lalu disari kloroform 10 ml. Hasilnya diperoleh 2

lapisan yaitu lapisan atas dan bawah. Lapisan atas dinetralkan dengan

asam asetat dan dianggap sebagai larutan I, sementara lapisan bawah

disari dengan HCl 1% diperoleh 2 lapisan dimana lapisan bawah

dibuang, kemudian lapisan atas dianggap sebagai larutan II.

- Larutan I : untuk uji alkaloida tertier

- Larutan II : untuk uji alkaloida kuartener

Sistem KLT yang digunakan :

| 56
 Fase diam : silika gel

Fase gerak :sikloheksana-dietilamina (9:1) v/v, atau tertier butanol-

kloroform- dietilamina (2:7:1) v/v

Deteksi : pereaksi Dragendorff KLT LP

3. Ekstraksi Simplisia dan Uji Antioksidan secara Kualitatif

a. Ekstraksi

Serbuk simplisia kering ditimbang 50 gram dan dimasukkan dalam

erlenmeyer 500 ml, kemudian ditambahkan etanol 95% sebanyak 300

ml, campuran didiamkan selama 6 jam sambil diaduk sesekali dan

didiamkan lagi tanpa pengadukan sampai 24 jam. Setelah pendiaman,

simplisia disaring, dan diambil filtrat hasil maserasi dan dipekatkan

sampai kering dan dibuat replikasi sebanyak 2 kali.

Ekstrak kering diambil 0,1 gram dan dilarutkan dalam 1 ml etanol,

kemudian larutan ditotolkan pada fase diam silika gel GF254 sebanyak

5l dan dikembangkan dalam fase gerak:

Kloroform : metanol (95 : 5)

Toluen : etil asetat (93 : 7)

Kloroform : etanol : asam asetat glasial (94 : 5 : 1)

Plat dikembangkan sampai 10 cm, dan setelah selesai, diambil

kemudian dikeringkan. Kemudian dilakukan deteksi dengan sinar UV

254 dan 365 nm, uap amonia dan pereaksi vanilin-asam sulfat, dan

dikeringkan pada suhu 105oC selama 5 menit.

b. Uji Kualitatif Aktivitas Antioksidan secara KLT

| 57
 Ekstrak kental dilarutkan sebanyak 1 tetes dalam 1 ml etanol, dan

ditotolkan pada plat KLT menggunakan pipa kapiler. Pembanding

dibuat dengan larutan kurkumin, selanjutnya dikembangkan dalam

chamber KLT. Setelah elusi mencapai 10 cm, plat diangkat dan

dikeringkan. Replikasi dibuat 2 kali dengan plat yang berbeda.

Plat diperiksa dengan lampu UV 254 dan 365 nm, dan diberi tanda

letak bercak yang terdeteksi dan dicatat warnanya. Kemudian, larutan

DPPH disemprotkan pada salah satu plat, dan dilihat apakah terbentuk

warna kuning yang menunjukkan aktivitas antioksidan. Kekuatan daya

antioksidan senyawa pada bercak kromatogram tersebut dicerminkan

dari lama waktu warna kuning tertahan.

4. Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi

Fraksinasi ekstrak.

Siapkan satu set alat VLC, masukan Silica Gel GF254 dalam kolom

dengan bantuan vacuum setinggi 5cm. Kemudian tempatkan kertas

saring diatas Silica Gel GF254 tersebut dan letakan ekstrak kering yang

dicampur dengan Silica Gel GF254, dan letakan kertas sari diatasnya

disertakan selanjutkan Silica Gel GF254. Masukan 100ml pelarut guna

penjenuhan, lalu lakukan fraksinasi dengan pelarut 50ml sebanyak 7

kali. Profil KLT dibuat dari fraksi yang diperoleh dengan sistem KLT.

Kelompokan sesuai dengan profil KLTnya, dan uapkan sampai kering

dan timbang hingga bobot tetap.

Pembuatan larutan DPPH.

| 58
 Timbang DPPH sebanyak 19.6mg dan kemudian larutkan dengan

metanol p.a. dan 1.0ml DMSO. Kemudian tutup larutan dengan

aluminium foil. Pembuatan larutan harus selalu baru dikarenakan

larutan fotosensitif.

Pembuatan larutan stok kurkumin

Timbang kurkumin sebanyak 10.0mg dan campur dengan 1.0ml

DMSO, kemudian tambahkan dengan metanol p.a. hingga 10.0ml.

Pembuatan larutan standar kurkumin.

Ambil stok kurkumin yang dudah dibuat sebanyak 0.1ml dan tambah

dengan metanol p.a. sampai 5.0ml.

Pembuatan larutan uji

Menimbang fraksi sebanyak 20mg, kemudian tambah 1.0ml DMSO.

Tambah metanol p.a. hingga 10.0ml. Mengambil sebanyak 0.1ml;

0.2ml; 0.3ml; 0.5ml; 0.7ml dari larutan, kemudian larutkan dalam

metanol p.a. hingga 5.0ml.

Optimasi metode

o Penentuan max larutan DPPH

Masukan larutan DPPH pada kuvet spektrofotometri visible

kemudian discanning pada range 400-600 nm. yang

terbentuk ditetapkan sebagai maksimum yang digunakan.

o Penentian reaction time

Masukan DPPH 3.8ml pada tabung reaksi tertutup, kemudian

tambah 0.2ml larutan standar rutin, dan dikocok. Kemudian

| 59
 baca absorbansinya dengan spektrofotometer visible pada

maksimum sampai 60 menit hingga penurunan Abs nyata

Pengukuran absorbansi larutan uji

Memasukan DPPH 3.8ml pada tabung reaksi tertutup, kemudian

tambah 0.2ml larutan uji dengan berbagai konsentrasi yang sudah

dibuat sebelumnya. Homogenkan pada vortex, kemudian diamkan

selama OT, dan baca absorbansinya yang dilakukan dengan replikasi

sebanyak 5 kali.

Analisis hasil

Aktivitas penangkapan radikal dihitung (%S)

5. Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

Isolasi senyawa dari fraksi aktif

Memurnikan fraksi aktif yang didapat dengan menggunakan

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan sistem yang sama seperti

yang digunakan untuk fraksi aktif. Menimbang fraksi yang didapat

sebanyak 0.1g dan larutkan dalam 1ml etanol dalam flakon, kemudian

totolkan sepanjang plat. Masukanlah plat untuk dikembangkan dalam

sistem KLT, keringkan, kemudian hasil pita diisolasi dengan cara

dikerok. Larutkan isolat dengan etanol dan saring dengan sintered

glass filter. Masukan filtrat ke cawan porselin dan keringkan dengan

waterbath kemudian ditimbang.

Pembuatan larutan uji isolate

| 60
 Menimbang isolat yang didapat kemudian larutkan dalam DMSO.

Kemudian tambahkan methanol hingga 10.0ml. Ambil sebanyak

0.1ml; 0.2ml; 0.3ml; 0.5ml; 0.7ml untuk membuat larutan seri dan

larutkan dalam metanol hingga 5.0ml.

Penentuan panjang gelombang () maksimum

Masukan larutan DPPH yang sudah dibuat pada kuvet

spektrofotometri UV-Vis. Lakukan scanning pada range panjang

gelombang () 400-600 nm. Panjang gelombang terjadinya serapan

maksimum ditetapkan sebagai panjang gelombang () maksimum

yang digunakan.

Pengukuran absorbansi larutan uji isolate

Masukan konsentrasi larutan uji ke tabung sebanyak 0.2ml,

tambahkan larutan DPPH 3.8ml. Homogenkan dengan cara divortex,

dan tutup aluminium foil dan diamkan selama OT (20 menit). Baca

absorbansi pada spektrofotometer visible.

Analisis hasil

Aktivitas penangkapan radikal dihitung (%S)

6. Analisis Hasil

Aktivitas penangkapan radikal dihitung (%S)

| 61
Hasil penghitungan regresi linear digunakan untuk menentukan EC50. Nilai x

merupakan konsentrasi laurtan uji ataupun pembanding dan nilai y yang

didapat disebut sebagai nilai EC50 nya.

| 62
 BAB VI

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Uji Kemurnian Simplisia

Tujuan penelitian kali ini adalah mampu melakukan uji kemurnian

simplisia yang meliputi penetapan kadar abu, penetapan kadar abu tidak

larut asam, penetapankadar abu larut air, penetapan kadar sari larut air,

penetapan kadar sari larut etanol, penetapan bahan organic asing, penetapan

kadar air dengan destilasi toluene.

Simplisia yang digunakan merupakan tanaman kunyit yang

mempunyai nama latin Curcumae Domesticae Rhizoma dengan nama

tanaman asalnya Curcuma domestica dari keluarga Zingiberaceae. Pertama-

tama simplisia diserbuk dahulu, lalu dilakukan uji kemurnian terhadap

simplisia dengan tujuan untuk mengetahui apakah simplisia tersebut murni

atau tidak.

Berikut ini uji-uji yang dilakukan dan hasilnya :

1. Penetapan kadar abu

Tujuan dari menetapkan kadar abu adalah untuk mengetahui

kadar pengotor organic (logam/non logam). Pada percobaan kali ini

diperoleh kadar abu 8%. Abu yang diperoleh peneliti berwarna khas

(biru). Hal ini disebabkan karena pada hasil pembakaran rimpang

ditemukan adanya kandungan mineral (fosfor & zat besi) dan

| 63
 kurkuminoid. Kadar abu yang diperoleh sudah sesuai dengan teori

yaitu tidak lebih dari 9% (Depkes RI, 1979).

2. Penetapan kadar abu tidak larut asam

Tujuan dari penetapan kadar abu tidak larut asam adalah untuk

mengetahui kadar pengotor non-logam, seperti silika, tanah, pasir, dan

mikroba. Abu yang digunakan adalah abu hasil dari penetapan kadar

abu. Pada percobaan kali ini diperoleh kadar abu tidak larut asam

0,066% b/b dengan bobot sebesar 0,001 gram. Kadar abu yang

diperoleh sudah sesuai dengan teori yaitu tidak lebih dari 1,6%

(Depkes RI, 1979).

3. Penetapan kadar abu larut air

Tujuan dari penetapan kadar abu larut air adalah untuk

mengetahui kadar pengotor logam, seperti timbal (Pb), besi (Fe), dan

fosfor. Abu yang digunakan adalah abu hasil dari penetapan kadar abu.

Pada percobaan kali ini diperoleh kadar abu larut air yaitu 6,226% b/b

dengan bobot sebesar 0,0934 gram. Hal tersebut membuktikan bahwa

masih terdapat pengotor logam dalam simplisia.

Saat percobaan, mulai dari penetapan kadar abu hingga kadar

abu larut air, dilakukan pemijaran pada abu dengan tujuan untuk

destruksi/penghancuran. Senyawa karcob sehingga yang tersisa adalah

senyawa anorganik baik logam maupun non-logam. HCl juga

digunakan saat penetapan kadar abu tidak larut asam dengan tujuan

untuk membunuh mikroba yang ada pada simplisia.

| 64
4. Penetapan kadar sari larut air

Tujuan dari penetapan kadar sari larut air adalah untuk

mengetahui kandungan terendah zat yang terekstrasi dan larut air yang

ada pada simplisia. Hasil percobaan yang didapat merupakan

persentase kadar sari larut air yaitu 17,63% b/b, dengan bobot sebesar

0,18 gram. Pelarut yang digunakan pada percobaan ini yaitu air

kloroform dengan tujuan untuk membunuh mikroba. Kloroform yang

digunakan mempunyai sifat mudah menguap. Berdasarkan percobaan

hasil yang didapat telah sesuai dengan teori yaitu tidak kurang dari

15% (Depkes RI, 1979).

5. Penetapan kadar sari larut etanol

Tujuan dari penetapan kadar sari larut etanol adalah untuk

mengetahui kandungan terendah zat yang terekstraksi dan larut etanol

yang ada pada simplisia. Hasil percobaan yang didapat merupakan

persentase kadar sari larut etanol dan tidak larut air yaitu 14,65% b/b,

dengan bobot sebesar 0,1497 gram. Pelarut yang digunakan pada

percobaan ini yaitu etanol dengan tujuan supaya mikroba dapat

dihambat pertumbuhannya serta dapat melarutkan zat aktif dalam

simplisia lalu menariknya keluar dari simplisia. Berdasarkan

percobaan hasil yang didapat telah sesuai dengan teori yaitu tidak

kurang dari 10% (Depkes RI, 1979).

Kedua percobaan tersebut menggunakan metode maserasi,

prinsipnya yaitu pemisahan senyawa dengan ekstraksi pelarut. Saat

penggojokan digunakan elektrik shaker (Innova 2100) dengan tujuan

| 65
 agar penggojokan maksimal dan konstan sehingga zat & pelarut dapat

homogen dengan waktu yang tidak lama.

6. Penetapan bahan organik asing

Tujuan dari penetapan bahan organik asing adalah untuk

mengetahui cemaran bahan organik yang dijadikan parameter untuk

mengetahui apakah simplisia tersebut tercampur atau tergantikan oleh

kulit simplisia, bagian-bagian lain dari simplisia yang tidak diinginkan

(akar). Hasil yang diperoleh merupakan persentase ceamran bahan

organic asing 1,69% b/b dengan bobot sebesar 0,49 gram. Hasil

tersebut telah sesuai dengan teori yaitu tidak lebih dari dua persen

(Depkes RI, 1979).

7. Penetapan kadar air dengan destilasi toluene

Tujuan dari penetapan kadr air dengan destilasi toluene adalah

untuk menetapkan kadar air yang ada dalam simplisia. Karena

simplisia yang digunakan (kunyit) mengandung minyak atsiri maka

metode yang digunakan adalah destilasi dengan prinsip pemisahan

senyawa berdasarkan perbedaan titik didih. Toluen digunakan karena

lebih tidak toksik dibanding eter. Toluene yang dimasukkan sebanyak

1 ml pada tabung tegak digunakan untuk membilas dinding tabung

dengan tujuan supaya kadar air yang diperoleh benar-benar murni,

bukan merupakan pengotor. Hasil diamati dari bagian jernih di bawah

tabung tegak yaitu air dan bagian atasnya toluene, di mana BJ toluene

< BJ air. Persentase kadar air yang didapat yaitu 7,00% v/b, dengan air

sebanyak 0,7 ml.

| 66
B. Penapisan (Skrining) Fitokimia

Tujuan penelitian kali ini yaitu agar peneliti mampu

mengidentifikasi senyawa golongan flavonoida, antrakinon, saponin

(steroid dan triterpenoid), alkaloida, dan golongan fenolik dan polifenolik.

Pada percobaan kali ini simplisia yang digunakan berasal dari

rimpang kunyit dengan nama latin Curcuma domestica yang telah

diserbuk terlebih dahulu. Uji yang dilakukan dalam percobaan skrining

fitokimia ini bertujuan untuk mensurvei tumbuhan untuk mendapatkan

kandungan bioaktif atau kandungan yang berguna dalam pengobatan.

Uji yang dilakukan meliputi : uji kualitatif kimiawi yaitu uji

alkaloida, antrakinon, flavonoida, glikosida jantung, kumarin, saponin

(steroida dan triterpenoid), minyak tasiri, irinoid dan lainnya. Selain itu,

dilakukan uji kualitatif secara KLT dan uji kualitatif secara KLT untuk

alkaloid.

Uji yang dilakukan :

1. Uji Kualitatif secara Kimiawi

1.1. Uji Alkaloida

Tujuan uji ini adalah untuk mengetahui adanya alkaloida

dari bas tersier dan basa kuartener pasa zat uji. Alkaoida adalah

senyawa nitrogen yang terdapat dalam tumbuhan, dan merupakan

metabolit sekunder. Oleh sebab itu alkaloida bersifat basa, maka

langkah pertama yang dilakukan pada uji ini adalah menambahkan

larutan HCl 1% untuk membentuk garam dari alkaloid tersebut,

reaksi ini diprcepat dengan poses pemanasan. Larutan tersebut

| 67
disaring dengan menggunakan kapas dengan tujuan agar proses

penyaringan berlangsung lebih capet. Filtrat yang didapat dibagi ke

dalam 2 tabung reaksi (A dn B), kemudian diberi perlakuan

berbeda.

Tabung A, dibagi 2 sama banyak dimasukkan pereaksi

Dragendorff dan Mayer yang berfungsi sebagai pengidentifikasi

alkaloid dengan cara melarutkan kemudian mengendapkan larutan

alkaloid tersebut. Hasil positif menurut uji ini adalah endapan

berwarna jingga yang berupa kompleks pada tabung Dragendorff,

sementara pada tabung Mayer, membentuk endapan kuning muda.

Dari hasil percobaan yang dilakukan oleh peneliti terdapat endapan

ada tabung Dragendorff. Hal ini tidak sesuai dengan teori dimana

secara teori kunyit tidak mengandung alkaloid (Soegihardjo, 2013).

Kemungkinan endapan yang terbentuk adalah hasil dari warna

pereaksi yang terlalu pekat sehingga seolah-olah terbentuk endapan

merah pekat, berikut reaksinya :

o Reaksi dengan Dragendorff

Bi [ + 3KI Bi + 3KN

Bi + KI K

(kalium tetraiodobismutat)

Alkaloid + K endapan kalium alkaloid + (jingga)

o Reaksi dengan Mayer

Hg + 2KI Hg + 2 KCl

| 68
 Hg + 2KI

(kalium tetraiodomerkurat)

Alkaoid + endapan kalium alkaloid +

Ket. : KI yang ditambahkan adalah KI berlebih

(Achmad, 1986).

Hasil percobaan : (-), tidak ada endapan

Tabung B, diekstraksi dengan klorofor, yang bertujuan

untuk memutuskan ikatan antara asam tanin dan alakaloid terkait

secara ioni. Dengan terputusnya ikatan, alakaloid akan bebas,

sementara tanin akan terikat kloroform, selain itu juga berfungsi

melarutkan zat pengotor yang mungkin dapat mengganggu

pengamatan, sebelum itu ditambahkan natrium karbonat dengan

tujuan pembasaan, agar melepaskan alkaloid basa dari garamnya.

Ditambahkan asam cuka dengan tujuan untuk mengikat kembali

alkaloid alkaloid menjadi gara agar dapat bereaksi dengan pereaksi

sehingga menghasilkan kompleks garam anorganik yang tidak larut

sehingga terpisah.

Penambahan asam cuka mengakibatkan terbentuknya 2 fase

larutan dimana 2 fase tersebut terbentuk karena ada perbedan

tingkat kepolaran antara fase aqueous yang polar dan kloroform

yang non polar, garam alkaloid akan larut di bagian atas. Jika

terbentuk ednapan di lapisan atas, yang ditambah Dragendorff,

maka simplisia yang diuji murni mengandung alkaloid basa

| 69
 kuartener, sementara jika endapan terbentuk di lapisan bawah,

maka alkaloid yang terkandung adalah alkaloid dari basa tersier.

Percobaan menunjukkan hasil negatif, dimana pada lapisan kedua

tidak terbentuk endapan, sementara pada lapisan pertama terbentuk

endapan, yang mungkin disebabkan karena warna pereaksi yang

terlalu pekat, sehingga seharusnya tidak ada endapan. Secara teori

kunyit memang tidak mengandung alkaloid.

1.2. Uji Antrakinon

Tujuan diakukan uji antrakinon adalah untuk mengetahui

adanya senyawa antrakinon dalam serbuk simplisia atau tidak.

Pertama serbu simplisia ditambah KOH dengan tujuan menjadikan

suasana basa dan juga menghidrolisis glukosida antrakinon, setelah

itu ditambahkan hidrogen peroksida untuk memberikan suasana

asam sehingga diperoleh pH yang netral,kemudian dilakukan

proses pemanasan dengan tujuan mempercepat reaksi, karena hasil

dari pemanasan sangat sedikit maka hasil ekstraksi tersebut

didinginkan kemudian disaring dengan kapas agar filtrat lebih

banyak.

Kemudian ditambahkan asam asetat glasial sebagai

penyumbang asam dan toluene yang bertujuan menghilangkan zat

pengotor yang mungkin dapat mengganggu pengamatan.

Terbentuk 2 lapisan dimana lapisan bawah berwana kuning dan

lapisan atas berwarna bening, hasil tersebut menunjukkan hasil

negatif, karena hasil positif untuk uji antrakinon adalah adanya

| 70
 wana merah pada lapisan air (basa). Rimpang kunyit tidak

mengandung antrakinon.

1.3. Uji Polifenol

Tujuan dilakukan uji polifenol adalah untuk mengetahui

ada atau tidaknya senyawa polifenol pada simplisia yang diuji.

Pemanasan pada uji ini bertujuan untuk mempercepat reaksi dan

juga melarutkan polifenol, kemudian dilakukan penyarian dengan

etanol 80% untuk menghilangkan pengotor, penambahan besi (III)

klorida dilakukan setelah ekstrak dingin, karena besi (III) klorida

dapat teroksidasi menjadi zat toksik dalam suhu yang tinggi.

Menurut teori, hasil positif uji ini adlah terbentuknya warna hijau-

biru. Sementara hasil percobaan yang diperoleh adalah negatif,

karena tidak terbentuk warna hijau biru. Polifenol merupakan

senyawa flavonoida. Hasil yang diperoleh tidak sesuai dengan

teori, dimana kunyit seharusnya mengandung senyawa polifenol

yaitu kurkumin beserta derivatnya, yaitu senyawa kurkuminoid

(Soegihardjo, 2013).

1.4. Uji Tanin

Tujuan dilakukannya uji tanin adalah untuk mengetahu ada

atau tidaknya tanin dalam simplisia rimpang kunyit. Dalam

percobaan ini dilakukan pemanasan dengan tujuan untuk

mempercepat reaksi dan diperoleh hasil yang maksimal. Tanin

adalah suatu senyawa golongan terbesar dari senyawa kompleks

yang terdapat di dalam tumbuhan. Filtrat pada uji ini dapat disaring

| 71
 lagi menggunakan kertas saring, karena filtrat yang dihasilkan

cukup banyak. Filtrat ini kemudian ditambahkan NaCl untuk

menghasilkan endapan yang mungkin merupakan hasil positif

palsu pada uji ini karena endapan tersebut berasal dari protein,

sehingga setelah itu ditambahkan larutan gelatin untuk

memperjelas endapan. Hasil positif pada uji ini menurut teori

adalah terbentuknya endapan, sementara hasil yang diperoleh

peneliti adalah hasil negatif karena tidak terbentuk endapan. Hasil

ini tidak sesuai dengan teori dimana seharusnya kunyit

menghasilkan hasil positif pada uji kandungan tanin Karena kunyit

mengandung tanin (Sudarsono, dkk., 1996).

1.5. Uji Steroid

Tujuan uji steroid adalah untuk mengetahui ada tidaknya

senyawa kardenolida dalam simplisia yang diuji. Kardenolida atau

glikosida jantung adalah senyawa aktif yang bekerja pada sistem

kardiovaskular. Pada percobaan ini, digunakan filtrat yang telah

dipersiapkan dari uji sebelumnya. Penambahan asam 3,5

dinitrobenzoat bertujuan untuk memperpanjang gugus kromofor.

Terjadinya warna biru ungu, menunjukkan adanya senyawa

kardenolida (glikosida jantung), hasil yang diperoleh peneliti

adalah negatif, karena warna yang terbentuk adalah merah

kehitaman.

Kemudian dilakukan kembali uji penegasan dengan

penambahan kloroform pada filtrat lain dan setelah terbentuk 2

| 72
 lapisan, lapisan bawah ditambahkan asam 3,5 dinitrobenzoat,

maka yang terbentuk adalah warna kuning. Hal tersebut

menunjukkan dan menegaskan bahwa reaksi yang terjadi benar

adanya. Dimana hasil negatif tersebut telah sesuai dengan teori

yaitu kunyit tidak mengandung steroid (gikosida jantung).

1.6. Uji Saponin

Tujuan dar uji saponin adalah untuk mengetahui adanya

senyawa saponin pada serbuk simplisia tersebut.serbuk

dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudai ditambahkan air, dan

dikocok kuat selama 30 detik dengan tujuan mempermudah

pengujian selanjutnya (penghomogenan serbuk dan air), kemudian

didiamkan selaa 30 menit dengan tujuan agar reaksi yang terbentuk

maksimal dan valid. Apabila terbenuk buih setinggi 3 cm dari

permukaan cairan, maka simplisia positif mengandung saponin,

dimana hasil yang diperoleh peneliti adalah negative karena tidak

terbentuk buih.

Uji lain dapat dilakukan dengan pipa kapile, air digunakan

sebagi pembanding karena komposisinya telah diketahui (senyawa

pembanding yang pasti). Hail positif dari uji ini adalah jika tinggi

cairan uji setengah atau kurang dari tinggi air suling, sementara

hasil yang diperoleh peneliti adalah tingi cairan uji hampir sama

dengan tinggi cairan pembanding, sehingga dapat disimpulkan

bahwa kunyit tidak mengandung saponin, hal ini telah sesuai

dengan teori.

| 73
 1.7. Uji Minyak Atsiri

Tujuan uji ini adalah untuk mengetahui kandungan minyak

atsiri pada simplisia. Pada percobaan kali ini serbuk simplisia

ditambahkan eter sebagai penyari, dikocok, lalu disaring, filtrat

dikeringuapkan, hasilnya muncul bau aromatic khas kunyit, setelah

itu residu dilarutkan dan dikeringkan kembali. Hasil yang

diperoleh peneliti adalah timbulnya bau khas dari kunyit, dimna

hasil ini menunjukkan bahwa kunyit memiliki kandungan minyak

atsiri. Berdasarkan teori, yaitu minyak atsiri berupa oleoresin

(5ml/kg). fraksi non polar mengandung kurkumera dan fraksi

semipolar mengandung xantorizol (Soegihardjo, 2013).

2. Uji Kualitatif secara KLT

Tujuan percobaan kali ini adalah untuk mengidentifikasi

kandungan kimia dalam simplisia rimpang kunyit secara Kromatografi

Lapis Tipis (KLT). Kromatografi terbentuk apabila terdapat fase diam

dan fase gerak. Fase diam dapat berupa padatan atau kombinasi cairan-

padatan, sedangkan fas gas berupa cairan/gas.

Fase diam merupakan fase yang menyerap senyawa yang akan

diidentifikasi, dimana fase ini digunakan untuk menahan senyawa,

sekaligus digunakan untuk tempata jalannya senyawa. Fase iam yang

digunakan adalah silika gel 60 yang artinya silica gel yang dapat

berfluoresensi pada panjang gelombang 254 nm di bawah pendar sinar

UV. Sementara GF singkatan dari Gypsum Fluorosens. Gypsum

adalag senyawa kalsium sulfat yang berfungsi sebagai pengikat zat uji.

| 74
Fluorosens adalah peristiwa yang dilami senyawa anorganik dengan

kerusakan radiasi emisi pada detik setelah eksitasi radias

dihentikan. Angka 60 berarti ukuran partikel pada silika gel tesebut

adalah 60 A.

Selain silika gel, ada percbaan kali ini digunakan juga selulosa

sebagai fase diam, karena terdapat senyawa uji yang sifatnya asam.

Silika gel yang digunakan bersifat asam juga , sehingga ditakutkan

terjadi rekasi yang dapat menggagalkan elusi, sehingga elusi tidak

terlihat.

Sementara fase gerak merupakan fase yang digunakan utnuk

melarutkan zat uji. Fase gerak bergerak mengalir melalui fase diam

dan membawa komponen yang terdapat di dalam campuran, komponen

yang berbeda akan bergerak dengan laju yang berbeda.

Prinsip kerja KLT adalah pemisahan sampel berdasarkan pada

pebedaan kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan.

Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai

dengan jenis sampel yang ingin dipisahkan. Semakin dekat kepolaran

antara sampel dengan campuran larutan, maka sampel akan semakin

terbawa oleh fas gerak. Campuran senyawa pada fase gerak emiliki

perbandingan yang seusai dengan tujuan agar senyawa tidak terelusi

terus menerus dan terbawa oleh fase gerak, namun dapat berhenti di

tengah, sehingga diperoleh nilai Rf antara 0,2-0,8. Jumlah fas gerak

yang digunakan tergantung nilai Rf besarnya wadah chamber, serta

volumenya (biasanya 20 ml).

| 75
 Dalam uji KLT, digunakan standar yang digunakan untuk

pembanding dengan senyawa uji. Apabila simplisia yang kita gukan

memiliki kandungan sekunder bioaktif, maka sampel dan standar akan

memiliki warna yang sama di bawah sinar UV, serta nilai Rf yang

sama. Penotolan dilakukan 3 kali bertujuan agar dapat terlihat jelas di

bawah sinar UV, dan pergerakan atau jarak elusi dapat terlihat jelas.

Antara penotolan satu dengan penotolan lain, harus ditunggu

kering terlebih dahulu, agar warna cairan pada silika gel terlihat tebal

sehingga mempermudah pengamatan elusi, karena jika tidak ditunggu

keriing, maka cairan akan tersrap lagi pada kapiler, ataupun kuantitas

cairan pasa silika tidak bertambah. Jarak penotolan dan lainnya harus

saling berjauhan agar tidak saling bertabrakan (pergerakan cairan).

Penotolan juga jangan terlalu banyak karena akan mempersempit

ruang gerak senyawa untuk berelusi, sehingga ditakutkan akan

bertabrakan satu dengan yang lain.

Alasan perlunya uji KLT karena pasa prses KLT ini, teradi

pemisahan dari ekstrak yang memiliki banyak kandungan yang

bermacam-macam dan kandungan ini dpaat terpisah-pisah sehingga

kandungan tertentu yang ingin digunakan dapat diabil ataupun

diketahui lebih mudah. Proses pemisahan ini dapat terjadi karena

adanya perbedaan afinitas antara senyawa uji, fase diam dan fae

geraknya. Fase diam yaitu silika perlu dioven dengan alasan agar

serbuk silika dapat merekat pada plat kaca sehingga tdak musah

tersebar dan terhirup, karena serbuk silika bersifat karsinogenik, jika

| 76
tidak merekat pada plat kaca, maka srbuk akan terhirup dan

menimbukan kanker (karsinogenik). Pada uji KLT digunakan 3

larutan, yaitu:

o Larutan I

Larutan I didapat dari fraksi kloroform asetat, yang

sebelunya telah disaring dengan tujuan memishakan kadungan

yang akan identifikasi yaitu glikosida antrakinon, standar yang

digunakan adalah kuarsetin, fase gerak : etil asetat- toluene

(9:1), dan fase diam silika gel . Agar fase gerak tetap

jenuh, maka dinding bejana ditutup dan dilapisi kertas saring

yang sebelumnya telah dijenuhkan dengan sistem pelarut.

Chamber dijaga kejenuhannya agar dapat mempercepat

jalannya fase gerak (perambatan). Deteksi yang digunakan

adalah vanillin asam sulfat.

Hasil percobaan yang diperoleh terjadi tailing ada

larutan pembanding kuarsetin. Tailing adalah proses dimana 1

totolan membentuk garis panjang, hal ini disebabkan saat

proses penotolan, tidak ditunggu hingga benar- benar kering,

sehingga totolan melebar dan memanajang. Rf yang didapat

sampel adalah 0,85, dimaan Rf merupakan jarak yang ditempuh

substansi pelarut yang digunakan, semakin besar nilai Rf maka

semakin besar jarak gerakan senyawa pada KLT. Nilai Rf yang

besar menunjukkan senyawa yang kurang polar dan kurang

interaksi dengan bagian polar dari plat.

| 77
 Apabila nilai Rf hampir sama atau mendekati standar

maka dapat disimpulkan zat uji mengandung senyawa yang

diidentifikasi yaitu glikosida antrakinon. Dari data perobaan

tidak dapat disimpulkan kunyit mengandung glikosida

antrakinon atau tidak karena larutan pembandng mengalami

tailing, harga Rf sampel adalah 85.

o Larutan II

Larutan II didaat dri fraksi kloroform-metanol-asam

asetat, yang didapat dari hasil penyarian filtrat I. Senyawa yang

diidentifikasi dalam percobaan ini adalah terdapat tanin atau

tidak. Pada larutan II ini dilakuakn 3 kali percobaan, yang

pertama dilakukan dengan standar tanin dan fase gerak yaitu n-

butanol-aam asetat-air (5:1:4) v/v dan fase diam : silika gel

. Dari percobaan kali ini didapat Rf sampel adalah 0,83,

dan hRf sampel adalah 83. Deteksi menggunakan besi (III)

klorida dan menimbulkan warna coklat untuk bayangan elusi

sampel, hal ini disebabkan adanya rekasi kompleks ataupun

pemajangan gugus kromofor. Diperoleh nilai Rf tanin sebesar

0,16, berarti sampel kunyit tidak mengandung tanin, namun

secara teori sampel kunyit seharusnya mengandung tanin.

Ketidaksesuaian ini dapat diakibatkan oleh beberapa hal seperti

chamber yang kurang jenuh, dan fase gerak yang tidak sesuai

sehingga senyawa tidak dapat merambat sempurna, ataupun

terjadinya kontaminasi dari senyawa-senyawa yang lain yang

| 78
 masih menempel pada alat-alat yang digunakan dalam sistem

KLT ini.

Sementara, untuk 2 larutan II lainnya tidak dapat

ditentukan hasilnya karena zat pembanding tidak merambat

ataupun tidak menunjukkan pergerakan.

o Larutan III

Larutan III didapat dari fraksi methanol-air yang berasal

dari penyarian larutan II. Senyawa yang diidentifikasi dalam

percobaan ini adalah kardenolida (glikosida jantung), standar

yang digunakan yaitu saponin dan kardenolida. Percobaan

larutan III ini dilakukan 3 kali, yang pertama dengan fase gerak

butanol-asam asetat-air (5 : 1 : 4) v/v fase atas, fase diamnya

silika gel dan pembanding glukosida serta saponin.

Dari hasil percobaan diperoleh Rf sampel rata-rata

adalah 0,855, setelah dilihat di bawah sinar UV terlihat totolan

saponin saja, namun saponin dan kardenolida tidak berelusi,

setelah dideteksi dengan Liebermann-Burchard, didapatkan

warna sampel berubah menjadi kecoklatan. Nilai Rf dan hRf

standar tidak dapat dihitung karena standar tidak mengalami

pergerakan, hal ini disebabkan karena ketidak cocokan fase

gerak dan larutan standar, begitu juga dengan percobaan ke-2

dan ke-3 larutan III. Hasil tidak pasti karena terjadi proses

tailing.

| 79
3. Uji kualitatif secara KLT untuk Alkaloida

Larutan untuk uji KLT alkaloida didapatkan dari hasil penyarian &

penyaringan, yang kemudian diambil fraksi asam klorida (untuk

deteksi alkaloid basa kuartener). Fraksi ini kemudian ditetesi pereaksi

Dragendorff, dengan hasil positif ditunjukkan berubahnya warna

kuning menjadi merah pekat, kemudian ditambahkan NaHCO3 dengan

tujuan pembasaan untuk menarik garam alkaloida, saat penambahan

NaHCO3 terbentuk buih. Proses penyarian dilakukan di corong pisah

untuk menghilangkan gas yang terbentuk, selain itu berguna juga

untuk memisahkan 2 fase yang terbentuk.

Lapisan atas dinetralkan dengan asam asetat dan menjadi larutan I

alkaloida, dan lapisan bawah disari HCl 1%, dimana digunakan

sebagai larutan alkaloida II. Pada larutan tersebut terbentuk 2 lapisan

dimana lapisan atas digunakan sebagai larutan II untuk identifikasi

alkaloid dalam ekstrak.

Dari hasil percobaan dengan fase diam silika gel , dan fase

gerak tertier butanol : kloroform : dietil amina (2 : 7 : 1) v/v, pada KLT

larutan II alkaloid tidak didapatkan data apapun (tidak menginggalkan

bercak), sementara larutan I alkaloid meninggalkan bercak. Setelah

dideteksi dengan pereaksi Dragendorff, larutan I alkaloid tidak terlihat

bercaknya, dimana artinya sampel kunyit tidak memiliki alkaloid basa

tersier maupun kuartener.

Sementara tidak adanya elusi pada percobaan ini dapat disebabkan

karena sampel tidak memiliki kandungan alkaloid, (baik tersier

| 80
maupun kuartener), pelarut tidak senyawa, ataupun senyawa tidak larut

dalam fase gerak.

Kelebihan metode KLT adalah metode ini relatif mudah dilakukan,

murah, dan spesifik untuk senyawa yang dipisahkan. Kekurangan

metode ini adalah pemilihan fase diam yang harus sesuai dengan

kepolaran fase gerak, waktu yang diperlukan cukup lama, serta jarak

dan warna yang sama antara 1 totolan dengan 1 totolan lain, belum

tentu mengandung senyawa yang sama (sulitnya pengamatan).

Setelah itu dilakukan ekstraksi untuk percobaan berikutnya.

Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan alat rotary evaporator

(Buchi, rotavapor R3) untuk diambil ekstrak kering yang akan

digunakan dalam uji KLT. Hal pertama yang dilakukan adalah

menimbang serbuk simplisia, kemudian menambahkan etanol 95% ke

dalam campran erlenmeyer yang berisi serbuk simplisia tersebut.

Diamkan selama 6 jam dengan pengadukan menggunakan shaker

(Innova 2100). Didiamkan lagi selama 24 jam tanpa pengadukan,

kemudian ditambahkan campuran metanol dan serbuk simplisia itu

disaring, filtrat hasil proses maserasi tersebut diambil dan dipekatkan

smapai kering. Pemekatan dilakukan dengan proses pengeringan

(penguapan) menggunakan instrument rotary evaporator (Buchi,

rotavapor R3).

Rotary evaporator (Buchi, rotavapor R3) bekerja dengan

memanfaatkan peristiwa evaporasi, diimana evaporasi adalah peristiwa

menguapnya pelarut dari campuran yang terdiri atas zat telarut yang

| 81
 tidak mudah menguap dan pelarut yang mudah menguap (dalam

percobaan ini, pelarut yang digunakan adalah etanol 95%).

C. Ekstraksi Simplisia dan Uji Antioksidan Secara Kualitatif

Tujuan penelitian kali ini adalah melakukan penyarian simplisia

dengan metode maserasi dan skrinning bahan yang berpotensi antioksidan

secara cepat dengan KLT pada simplisia kunyit. Antioksidan merupakan

senyawa yang mampu menghambat oksidasi yang diperantarai oleh

oksigen yang dapat mempengaruhi penetralan radikal bebas.

Ekstraksi merupakan suatu proses penyarian suatu senyawa kimia

dari suatu bahan alam dengan menggunakan pelarut tertentu. Ekstraksi

bisa dilakukan dengan berbagai metode yang sesuai dengan sifat dan

tujuan ekstraksi, metode tersebut antara lain: maserasi dan remaserasi,

perkolasi, infudasi, penyarian berkesinambungan, dan sokhletasi. Maserasi

dipilih karena metode ini pengerjaannya mudah dan sederhana, selain itu,

juga tidak memakan biaya yang besar, di mana pelarut yang digunakan

tidak banyak, maka relatif hemat. Maserasi juga cocok untuk kunyit yang

memiliki struktur simplisia yang tidak keras dan tidak kompak, selain itu,

cocok untuk bahan yang tidak tahan panas. Maserasi adalah metode

penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam

cairan penyari atau pelarut, tidak mengandung benzoin, sitrak, dan bahan

sejenis yang mudah mengembang. Prinsip dari maserasi adalah ekstraksi

zat aktif yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam

cairan penyari atau pelarut yang sesuai pada temperatur ruangan dengan

sesekali pengadukan. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan

| 82
masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif tersebut

akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam sel

dengan di luar sel. Larutan yang konsentrasinya tinggi akan terdesak

keluar dan diganti oleh pelarut dengan konsentrasi rendah (difusi).

Peristiwa tersebut berulang sampai terjadi keseimbangan konsentrasi

antara larutan di luar sel dan di dalam sel.

Proses ekstraksi dilakukan dengan menambahkan etanol 95% pada

erlenmeyer dengan simplisia. Etanol 95% digunakan sebagai pelarut

simplisia, atau cairan penyari. Pemilihan cairan penyari saat melakukan

ekstraksi harus memenuhi syarat yaitu cocok dengan bahan yang

diekstraksi, selektif, stabil secara fisik dan kimia, ekonomis, aman, titik

didih rendah, dan viskositas rendah, selain itu pelarut juga harus terpisah

dengan cepat setelah pengocokan.

Maserasi ini dilakukan selama 3 jam dengan penggojogan atau

pengadukan , dimaksudkan agar proses difusi berjalan sempurna da

maksimal. Penggojogan menyebabkan pemecahan dinding sel dan

membran sel karena perbedaan tekanan di dalam dan di luar sel sehingga

metabolit sekunder yang ada di sitoplasma akan terlarut dalam senyawa

organik. Waktu lamanya penggojogan merupakan estimasi atau perkiraan

waktu yang sesuai untuk penelitian ini. Maserasi dihentikan setelah 3 jam

(dengan pengadukan), dan dilanjutkan dengan pendiaman selama 24 jam

(atau lebih) dengan tujuan untuk mengendapkan serbuk-serbuk yang ada.

Keuntungan dari maserasi di antaranya:

1. Biayan operasionalnya relatif rendah

| 83
 2. Penyari yang digunakan relatif hemat

3. Unit alat yang digunakan lebih sederhana

4. Prosesnya menguntungkan dalam isolasi bahan alam karena selama

proses perendaman sampel akan terjadi proses pemecahan dinding

dan membran sel akibat oerbedaan tekanan antara di dalam dan di

luar selnya sehingga metabolit sekunder yang ada dalan sitoplasma

akan terlarut dalam pelarut organik dan senyawa akan tereksitasi

sempurna karena dapat diatur lama perendaman.

Kelemahan maserasi:

1. Prosesnya membutuhkan waktu yang relatif lama karena adanya

pendiaman perendaman.

Proses selanjutnya adalah penyaringan, pada proses penyaringan

didapatkan filtrat atau residu. Penyaringan dilakuakan dengan

menggunakan labu atau erlenmeyer tersumbat yang disambungkan pada

vakum agar penyaringan berjalan lebih cepat. Filtrat dari penyaringan

simplisia yang didapat, diambil lalu dipekatkan. Pemekatan dilakukan

dengan menggunakan rotary vaccum evaporator sehingga didapatkan

ekstrak yang kental. Prinsip dari rotary vaccum evaporator adalah kurang

lebih mirip dengan destilasi yakni proses pemisahan ekstrak dari cairan

penyarinya dengan pemanasan yang dipercepat oleh perputaran dan juga

karena adanya penurunan tekanan yang menyebabkan cairan penyari dapat

menguap lebih cepat. Pemekatan dilakukan kurang lebih selama 30 menit,

karena waktu tersebut dianggap waktu optimum. Ekstrak pekat

kemmudian diletakkan pada cawan porselen, dan dikering uapkan hingga

| 84
didapat bobot tetap. Proses selanjutnya, ekstrak pekat tersebut yang

didapat, diuji dengan KLT terhadap antioksidan dalam metabolit sekunder

tersebut.

KLT adalah pemisahan senyawa berdasarkan polaritasnya

dibandingkan dengan polaritas fase gerak. Prinsip KLT yaitu pemisahan

suatu senyawa berdasarkan kepolarannya serta afinitas sampel (senyawa

uji) terhadap fase diam dan fase geraknya. Pemilihan fase diam dan fase

gerak didasarkan pada polaritas senyawa. Fase diam yang digunakan

dalam KLT merupakan penyerap berukuran kecil, semakin kecil ukuran

partikel rata-rata fase diam dan sempit kisaran ukuran fase diam, maka

semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya, yang perlu

diperhatikan dalam fase diam adalah ukuran molekul yang digunakanm

kemurnian, ketebalan, serta perlu tidaknya zat tambahan. Fase diam yang

digunakan adalah silika gel GF254 yang bersifat polar, di mana sesuai

dengan sifat polar antioksidan. Fase gerak merupakan campuran pelarut

organik yang memiliki polaritas rendah dengan menghindari lebih tinggi

dari tiga campuran.

Kelebihan deteksi menggunakan KLT adalah:

1. Sederhana, mudah, dan dapat dihentikan kapan saja

2. Fleksibilitas dalam memilih fase gerak

3. Semua komponen dalam sampel dapat dideteksi selama ada

pembanding

4. Pemakaian sampel dalam jumlah kecil

| 85
 5. Bisa digunakan untuk uji kualitatif maupun kuantitatif

Kekurangan deteksi menggunakan KLT adalah:

1. Memerlukan waktu yang lama

2. Terkadang fase diam yang digunakan karsinogenik (silika gel

GF254)

3. Susah mendapatkan bercak hasil elusi yang baik

Plat yang digunakan untuk uji adalah silika gel GF254 (Gypsum

Fluorescence 254 nm). Gipsum di sini berupa CaSO4.1/2H2O yang berlaku

sebagai pengikat. Fluorescence merupakan bahan fluorescence yang

ditambahkan, sedangkan angka 254 menandakan panjang gelombang

eksitasi dari bahan fluorescence yang ditambahkan, maka penulisannya

berada dibelakang huruf F. Fluorescence merupakan senyawa organik.

Uji KLT dilakukan dengan penotolan sampel larutan standar pada

fase diam, di mana jarak harus diatur agar tidak terjadi overlaping saat

pengujian. Sampel ditotolkan sebanyak 3 kali untk mempermudah

pengamatan saat terelusi. Setiap penotolan ditunggu hingga kering agar

tidak terjadi pengekoran dan tidak menyebar dalam fase gerak. Fase gerak

sebelumnya juga harus jenuh, dilakukan dengan meletakkan kertas saring

dalam chamber, dan membiarkan fase gerak terserap pada kertas saring

hingga batas. Titik awal penotolan 2 cm dari tepi bawah, hal ini

dimaksudkan agar totolan tidak tercelup dalam genangan fase gerak. Elusi

dilakukan sepanjang 10 cm dari titik awal penotolan karena pada jarak ini

sampel dianggap sudah terpisah dengan baik dan dapat diamati. Larutan

| 86
sampel direplikasi 3 kali untuk melihat kevalidan data. Larutan standar

digunakan dengan tujuan sebagai pembanding dan mengindentifikasi

senyawa yang dikandung oleh sampel, larutan standar yang digunakan

adalah larutan kurkumin. Larutan kurkumin merupakan senyawa golongan

polifenol yang terbukti mempunyai aktivitas antioksidan.

Plat fase diam diangkat ketika sudah selesai dan dikeringkan,

kemudian diperiksa di bawah lampu UV pada panjang gelombang 254 nm

dan 365 nm dan salah satu plat disemprot dengan larutan DPPH (2,3-

difenil-1-metil-hidrazil). DPPH merupakan senyawa radikal sintetik yang

bisa bereaksi dengan radikal lain membentuk senyawa stabil atau bereaksi

dengan atom hidrogen membentuk DPPH tereduksi (DPPH-H). Pereaksi

tersebut (DPPH) berfungsi untuk mempercepat reaksi yang mampu

menghasilkan warna tertentu, apabila saat dideteksi sinar UV tidak

menampilkan bercak, maka dilakukan dengan penyemprotan DPPH

supaya dapat terdeteksi. Pengujian potensi aktivitas antioksidan ekstrak

dilakukan dengan menggunakan metode KLT seperti yang telah

dijelaskan, juga digunakan DPPH sebagai detektor untuk mengetahui ada

atau tidaknya daya antioksidan dari simplisia. DPPH sendiri merupakan

suatu senyawa yang memiliki satu elektron tidak berpasangan atau radikal

bebas pada atom N.

Senyawa DPPH dapat berikatan dengan flavonoid membentuk

senyawa berkromofor. Larutan ini memiliki warna sehingga dapat

digunakan untuk mengamati daya antioksidan senyawa yang diuji di mana

semakin jernih warna larutan maka DPPH yang terkandung semakin

| 87
sedikit dan daya antioksidannya semakin kuat. Senyawa antioksidan

bereaksi dengan radikal DPPH dengan donasi elektron dan warna DPPH

berubah dari ungu menjadi kuning, warna kuning yang terlihat jelas

menandakan besarnya daya antioksidan, dan semakin lama warna kuning

bertahan, semakin besar daya antioksidannya. Struktur DPPH:

Gambar 2. Struktur DPPH (Li, 2009)

Sedangkan reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 3. Reaksi radikal DPPH dengan antioksidan (Witt, Lalk, Hager,

and Voigt, 2010)

Uji KLT ini digunakan fase gerak optimal, yaitu kloroform :

metanol (95 : 5), karena pada profil KLT yang dibuat, didapatkan bahwa

pada pengembangan dengan fase gerak tersebut menunjukkan hasil yang

| 88
 paling baik dengan jarak elusi terpanjang dibandingkan dengan 2 fase

gerak lainnya. Deteksi sinar UV digunakan untuk melihat bercak yang

tidak nampak jika dilihat secara kasat mata. Hasil optimalisasi ini

digunakan pula pendeteksi uap amonia yang berfungsi memberikan

suasana basa pada bercak eluen. Deteksi vanilin-asam sulfat digunakan

untuk mendeteksi senyawa atsiri (terpenoid, fenol, dan derivatnya) dengan

cara abstraksi H+ dan membentuk senyawa dengan ikatan rangkap

terkonjugasi, yang menyebabkan perubahan warna pada eluen.

D. Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi

Tujuan dari percobaan kali ini yaitu melakukan salah satu cara

fraksinasi ekstrak dari tanaman untuk mendapatkan senyawa aktif, dan

menentukan nilai EC50 fraksi dari ekstrak tanaman. Ekstrak yang

digunakan kali ini yaitu berasal dari tanaman kunyit yang mengandung

senyawa kurkumin.

Senyawa yang dilihat kali ini yaitu senyawa kurkumin yang

terkandung dalam tanaman kunyit. Senyawa kurkumin memiliki gugus

OH yang mampu mendonorkan ion H+ untuk menetralkan senyawa radikal

bebas, selain itu juga memiliki gugus fenolik dan 1.3-diketon. Macam-

macam kurkumin yaitu :

Gambar 4. Kurkumin (Ahmad, Patong, 2006)

| 89
 Gambar 5. Demetoksi Kurkumin (Ahmad, Patong, 2006)

Gambar 6. Bis-demetoksi Kurkumin (Ahmad, Patong, 2006)

Fraksinasi memiliki prinsip sebagai pemisahan senyawa

berdasarkan tingkat kepolaran dari senyawa dengan tujuan mendapatkan

senyawa murni yang akan diambil atau diinginkan yang kemudian akan

diisolasi. Fraksinasi memiliki 2 macam jenis yaitu fraksinasi normal, fase

diam lebih polar dibanding fase geraknya, dan fraksinasi terbalik, fase

geraknya lebih polar dibanding fase diamnya. Vacuum Liquid

Chromatography (VLC) yang digunakan merupakan sistem normal dengan

fase diam Silica Gel GF254 yang lebih polar dari fase geraknya yaitu

kloroform. Kolom diisi dengan campuran ekstrak dengan silica gel dan

silica gel yang dijenuhkan dengan kloroform. Fraksinasi dilakukan

sebanyak 7 kali, sehingga didapatkan fraksi sebanyak 7 fraksi. Fraksi

kemudian dilakukan dalam KLT, kemudian profil KLT-nya digunakan

sebagai acuan pengelompokan fraksi, yang profil KLT-nya mirip fraksi

| 90
 disatukan. Hasilnya didapatkan 5 pengelompokan fraksi yaitu fraksi 1, 2,

3, 4 dan 5, 6 dan 7. Kemudian fraksi dimasukan oven untuk

diuapkeringkan.

Uji kuantitatif dilakukan terhadap fraksi kering untuk mengetahui

aktivitas antioksidan dengan uji penangkapan radikal dengan DPPH

sebagai senyawa radikalnya. Prinsipnya yaitu penangkapan radikal DPPH

oleh atom hydrogen dari komponen uji dalam pelarut organic polar di suhu

kamar. Perubahan warna linear dengan kemampuan antioksidannya, warna

ungu pekat menandakan daya antioksidannya tinggi, semakin kuning maka

daya antioksidannya rendah. Aktioksidan sendiri memiliki pengertian

sebagai senyawa yang mampu menyumbangkan ion H+ nya pada senyawa

radikal sehingga mampu menetralkan senyawa radikal tersebut menjadi

tidak radikal

DPPH (1,1-dipenyl-2-picrylhydrazil) merupakan suatu radikal

bebas yang akan menerima elektron atau hydrogen yang membentuk

DPPH tereduksi. Reaksinya:

+ RH

Gambar 7. Reaksi radikal DPPH dengan antioksidan (Kumalaningsih, 2006)

Larutan yang dibuat dan digunakan dalam percobaan ini yaitu

larutan DPPH, berisi DPPH yang dilarutkan dalam DMSO dan metanol

| 91
p.a., pembuatan larutan tersebut harus tertutup dikarenakan DPPH yang

sangat fotosensitif yang akan rusak jika terkena cahaya. Larutan stok

kurkumin berisi kurkumin yang dilarutkan dengan DMSO dan metanol

p.a., pada percobaan kali ini stok sudah disediakan. Larutan standar berisi

5.0ml stok kurkumin yang dilarutkan dalam DMSO dan metanol p.a.,

dibuat sebagai pembanding efek antioksidan sampel. Larutan sampel berisi

20mg fraksi kering yang dilarutkan dalam DMSO dan metanol p.a ad

10ml. dari masing-masing fraksi yang didapat dibuat 5 seri konsentrasi

yaitu 0.1ml; 0.2ml; 0.3ml; 0.5ml; dan 0.7ml dalam metanol p.a. ad 5ml.

DMSO (Dimetil Sulfoksida) merupakan pelarut universal yang

mampu melarutkan senyawa polar-nonpolar dan organik-nonorganik.

Strukturnya yaitu :

Gambar 8. Struktur DMSO (Walker, 1993)

Instrument yang digunakan yaitu spektrofotometer visible

(Shimadzu) yang memiliki prinsip cahaya polikromatis berasal dari lampu

tungsten diubah menjadi cahaya monokromatis oleh monokromator,

kemudian diteruskan pada sampel sehingga membuat elektron pada

sampel naik dari ground state menuju excited state. Dikarenakan tidak

| 92
stabil maka elektron akan turun kembali menuju excited state dengan

mengeluarkan emisi. Cahaya yang diteruskan (transmisi) akan dibaca oleh

detektor dan diubah menjadi absorbansi. Syarat senyawa mampu diukur

pada spektrofotometer visibel yaitu harus berwarna sehingga memiliki

gugus auxokrom dan kromoform, lalu memiliki dalam range 400-800nm,

tidak bergelembung karena dapat menganggu pengukuran. DPPH

memiliki auksokrom dan kromoform sehingga mampu diukur dalam

spektrofotometer visibel (Shimadzu).

Kromofor

Auksokro
m

Gambar 9. Auxokrom dan kromofor DPPH (Witt, Lalk, Hager, dan

Voigt, 2010)

Pengukuran pertama yaitu untuk mengukur panjang gelombang ()

maksimum yang akan digunakan. Panjang gelombang () maksimum

diperlukan karena dalam kondisi tersebut memiliki sensitivitas tinggi

sehingga perubahan konsentrasi sekecil apapun mampu terbaca. Pada

pengukuran maksimum ini digunakan larutan DPPH. Kemudian

| 93
dilakukan penghitungan OT yang akan digunakan. OT berfungsi sebagai

waktu reagen bereaksi optimum dengan analitnya. Pengukuran OT ini

menggunakan larutan DPPH yang dicampur dengan larutan standar

kurkumin dan sudah divortex sebelumnya. Pengukuran ini dilakukan

setiap 5 menit selama 60 menit. Kondisi waktu saat absorbansi sudah stabil

maka dapat disimpulkan sebagai OT yang akan digunakan. Seluruh

pengukuran absorbansi yang baik yaitu yang berada dalam range 0.2-0.8,

karena diluar itu merupakan absorbansi dari pelarut yang dapat

menganggu pengukuran senyawanya.

Selanjutnya langkah yang dilakukan yaitu pengukuran sampel.

Sampel yang sudah dibuat dan dicamput DPPH sesuai OT yang sudah

ditetapkan diukur absorbansinya. Sebelum pengukuran sampel, digunakan

larutan blanko guna mengkalibrasi alat. Hasil pengukuran sampel yang

didapat yaitu sebagai berikut:

Abs kontrol fraksi 3 DPPH : 0.811

Abs kontrol fraksi 4&5 DPPH : 0.799

Fraksi 3 Fraksi 4&5

Volume Konsentrasi Volume Konsentrasi

Abs Abs
(ml) (mg/ml) (ml) (mg/ml)

0.1 0.0402 0.687 0.1 0.0402 0.688

0.2 0.0804 0.600 0.2 0.0804 0.614

0.3 0.1206 0.401 0.3 0.1206 0.520

0.5 0.2010 0.356 0.5 0.2010 0.417

0.7 0.2814 0.275 0.7 0.2814 0.324

| 94
 Tabel 4. Hasil pengukuran spektrofotometer visibel fraksi kunyit

Hasil absorbansi yang didapat dimasukan pada rumus %S yang

menandakan aktivitas penangkapan radikal, senyawa yang didapat

memiliki aktivitas antioksidan jika %S diatas 50%. Hasilnya yag didapat

pada fraksi 3 yaitu 15.29%; 26.02%; 43.15%; 56.10%; 66.10% dengan

kurva baku y=210.16x + 10.92 dan r = 0.97, sedangkan fraksi 3 dan 5

yaitu 13.88%; 23.15%; 34.92%; 47.81%; 59.45%, dengan kurva baku

y=187.59x + 8.69 dengan r = 0.990. Persamaan kurva yang memiliki

linearitas mendekati 1 maka data dianggap presisi. Hasil yang didapat bisa

dikatakan presisi. Persamaan digunakan untuk mencari EC50 yang

merupakan konsentrasi senyawa yang dapat menurunkan 50% aktivitas

radukan bebas, semakin kecil nilai maka EC50 dayanya semakin besar.

Penggolongan EC50 :

Sangat kuat : < 0.05 mg/ml

Kuat : 0.05 mg/ml - 0.1 mg/ml

Sedang : 0.1 mg/ml - 0.15 mg/ml

Lemah : 0.15 mg/ml - 0.2 mg/ml

EC50 fraksi 3 yang didapat yaitu 0.186mg/ml dan fraksi 4&5 0.22mg/ml.

Dari hasil yang didapat, kunyit merupakan senyawa antioksidan

lemah, namun menurut Rachman, dkk. dalam jurnal Aktivitas

Antioksidan Ekstrak dan Kombinasinya dari Tanaman Curcuma Spp.

didapat nilai EC50 kurkumin 0.04357 yang menandakan antioksidan kuat.

Hasil yang didapat tidak sesuai dengan jurnal tersebut dikarenakan kunyit

| 95
 yang didapat tidak diketahui tempat penanaman, umur, dan banyaknya

kontaminan sehingga dapat berpengaruh terhadap kandungan kurkumin

didalamnya.

E. Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

Tujuan dilakukan penelitian kali ini adalah memahami prosedur

isolasi senyawa aktif dari bahan laam. Isolasi dilakukan untuk

mendapatkan senyawa aktif dari suatu bahan alam yang akan digunakan

sebagai bahan untuk proses selanjutnya yaitu elusidasi struktur. Sebelum

proses tersebut, isolat akan diuji aktivitas anti oksidannya. Metode isolasi

yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode KLT preparative. KLT

preparative digunakan karena peralatan yang digunakan sederhana dan

dapat menghasilkan senyawa tunggal.

Proses isolasi terjadi karena perbedaan daya serap dan daya partisi

serta perbedaan kelarutan dari komponen kimia yang akan bergerak seiring

dengan kepolaran eluen. Perbedaan daya serap adsorben dan komponen

kimia menyebabkan komponen bergerak dengan kecepatan yang berbeda

pula sehingga terpisah. KLT yang digunakan dalam penelitian kali ini

adalah KLT preparative. Perbedaan KLT preparative dari KLT

konvensional :

1. Totolan sampel berbentuk pita (melebar)

2. Digunakan multi elusi untuk mendapatkan pemisahan yang

maksimal dari sampel.

3. Lapisan plat KLT lebih tebal 0,5 mm

(Koleva, 2002)

| 96
 Prinsip KLT (kromatografi Lapis Tipis) yaitu pemisahan

komponen yang didasari perbedaan absorbs atau partisi oleh fase diam di

bawah gerkan pengembang. Fase diam yang digunakan adalah silica gel

GF 254 sedangkan fase geraknya adalah kloroform : methanol (95 : 5).

Berdasarkan pengamatan, terdapat tiga bercak, bercak pertama

yaitu kurkumin, demetoksi kurkumin, dan bismetoksi kurkumin.

Pemisahan tersebut terjadi karena perbedaan kepolarannya, semakin polar

suatu senyawa maka niai Rf senyawa tersebut akan semakin kecil, dengan

kata lain bercak barada di posisi paling bawah dari lempeng. Begitu juga

sebaliknya. Berikut struktur dari 3 jenis kurkumin :

Gambar 10. 3 jenis kurkumin (Rahayu, 2010)

Deteksi bercak dilakukan di bawah sinar UV dengan = 365 nm.

Mayoritas senyawa peenjerap dalam KLT preparatif sendiri mengandung

indikator fluorosensi yang membantu dalam pendeteksian bercak yang

terpisah pada senyawa yang menyerap sinar UV. Setelah pendeteksian di

bawah sinar UV, bercak tersebut dikerok/diluruhkan terpisah yang berguna

untuk memisahkan campuran senyawa sehingga diperoleh senyawa yang

| 97
 murni. Bercak/silika hasil kerokan tersebut kemudian dilarutkan dengan

methanol p.a. sampel yang digunakan dalam KLT preparative merupakan

fraksi aktif dengan konsentrasi terendah yang menghasilkan EC50.

Larutan isolat dengan methanol tersebut diuji aktivitas anti

oksidannya dengan radikal DPPH. Sebelumnya larutan tersebut diuapkan

hingga kering, lalu dilarutkan dengan DMSO. DMSO ditambahkan dengan

tujuan agar senyawa polar & non polar yang terdapat dalam isolat dapat

melarut. KLT yang dilakukan merupakan KLT normal karena fase diam

yang digunakan adalah silica gel bukan silica api serta fase gerak yang

digunakan lebih non polar dari fase diamnya.

Larutan diuji aktivitas anti oksidannya. DPPH (1,1-difenil-2

pikrilhidrazil) adalah radikal bebas stabil yang erwarna ungu. Larutan

DPPH stabil pada suhu kamar dan hanya bertahan 6 jam setelah

pembuatan. Warna dari larutan DPPH akan tereduksi menjadi kuning

pucat ketika dicampur dengan senyawa yang dapat memberikan atom

hidrogennya. Reaksinya adalah sebagai berikut :

DPPH radikal (ungu) + antioksidan DPPH non-radikal (kuning pucat) + radikal

(Molyneux, 2004)

Parameter dari uji ini adalah efficient concentration 50 (EC50) yaitu

konsentrasi zat uji dimana dapat menyebabkan kehilangan 50% aktivitas

radikal bebas. Pengukuran dilakukan dengan lat spektrofotometer visible

(Shimadzu). Prinsip dari spektrofotometer visible (Shimadzu) yaitu cahaya

diserap sampel, kemudian electron akan tereksitasi karena energy menjadi

tinggi, electron tersebut tidak stabil sehingga cenderung kembali ke tingkat

| 98
dasar dengan melepaskan emisi, cahaya dari sumber sinar ada yang

diteruskan da nada yang diabsorpsi sampel, tetapi yang ditangkap detector

adalah sinar yang diteruskan, sinar tersebut akan diubah oleh detector yang

mempunyai system read-out. Panjang gelombang larutanDPPH ditentukan

untuk mendapatkan maksimum karena dengan maksimum, serapan akan

maksimum pula sehingga data yang diperoleh lebih akurat. maksimum

yang diperoleh peneliti yaitu 514 nm. OT yang digunakan peneliti yaitu 20

menit, OT (Operating Time) ditentukan supaya sampel dapat bereaksi

optimum dengan reagen sehingga pengukuran pada larutan dapat optimal

(Knopan, 2002).

Data yang diperoleh peneliti untuk 3 isolat yaitu rendemen isolat I

sebesar 87,30%, isolat II sebesar 16,10%, dan isolat III sebesar 54,18%.

Secara teori rendemen yang baik adalah yang semakin mendekati 100%.

Konsentrasi isolat I diperoleh sebesar 0,544 mg/ml, isolat II sebesar 0,248

mg/ml, isolat III sebesar 3,30 mg/ml. semakin besar rendemen maka

semakin banyak sampel yang tidak terbuang saat proses.

Secara teori, ada 3 jenis senyawa kurkuminoid. Dimana yang

aktivitas anti oksidannya paling tinggi adalah kurkumin, namun pada

senyawa uji (kunit) mengandung ke-3 jenis tersebut dengan kandungan

kurkumin pada kunyit paling tinggi yaitu >5% (Depkes RI, 1995).

Berdasarkan hasil KLT preparative pada kunyit, yang merupakan senyawa

kurkumin adalah line 1 dengan EC50 sebesar 0,544 mg/ml. Secara teori

kunyit merupakan senyawa antioksidan kuat (range 0,05 0,1 mg/ml).

| 99
 Berdasarkan hasil pengamatan peneliti, line I (isolat I) adalah

kurkumin dengan IC 50 sebesar 0,544 mg/ml, line II (isolat II) adalah

demetoksi kurkumin dengan EC50 sebesar 0,248 mg/ml, dan line III

(isolat III) adalah bisdemetoksi kurkumin dengan EC50 sebesar 3,30

mg/ml. Dapat dilihat bahwa EC50 demetoksi kurkumin lebih rendah

dibanding EC50 kurkumin yang menandakan bahwa aktivitas antioksidan

demetoksi kurkumin lebih tinggi dibanding aktivitas antioksidan

kurkumin, hal tersebut dapat disebabkan karena adanya kontaminasi fase

diam (silica gel) saat proses pelarutan dari plat KLT, proses penyaringan

yang kurang sempurna, serta proses pemisahan yang kurang sempurna saat

KLT. Menurut teori urutan dari aktivitas antioksidannya paling tinggi

yaitu kurkumin (isolat I) > demetoksi kurkumin (isolat II) > bisdemetoksi

kurkumin (isolat III) (Rahayu, 2010).

EC50 kurkumin yang didapat peneliti yaitu 0,544 mg/ml, hal

tersebut tidak sesuai dengan EC50 kurkumin teoritis yaitu 0,04357 mg/ml

(Rachman, Hegartika, dan Simanjuntak, 2008). Hal tersebut dapat

disebabkan karena kesalahan dalam teknik panen, pengeringan maupun

pengolahan simplisia yang tercemar oleh senyawa organic asing pada

tanaman.

Berdasarkan data yang diperoleh untuk EC50, tidak ada isolat yang

dapat digunakan untuk proses selanjutnya (elusidasi struktur) yang

ditujukan untuk melihat struktur senyawa antioksidan pada kunyit karena

tidak ada isolat yang EC50nya mencapai 50% sehingga dapat disimpulkan

bahwa isolat yang diperoleh peneliti bukan merupakan isolat murni.

| 100
 Kelebihan dari metode KLT preparative ini adalah biayanya yang

murah, serta peralatan yang digunakan sederhana. Sedangkan kekurangan

metode ini yaitu waktu yang dibutuhkan cukup lama, risiko kontaminasi

fase diam saat proses peluruhan dan rendemen yang terus berkurang

selama proses isolasi.

| 101
 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

A. Pada uji kimiawi kunyit teridentifikasi mengandung alkaloid basa

kuartener, dan minyak atsiri. Hasil negatif pada senyawa golongan

antrakinon, polifenol, tanin, steroid dan saponin. Pada uji kualitatif

KLT kunyit teridentifikasi mengandung senyawa golongan flavonoid.

Hasil negatif pada tanin, antrakinon, kumarin, saponin, kardenolida

dan alkaloida.

B. Hasil fraksinasi yang didapat berjumalh 5 kelompok fraksi dengan satu

kelompok fraksi yang berpotensi memiliki aktivitas antioksidan, yaitu

fraksi 3.

C. Isolasi fraksi 3 pada KLT menghasilkan 3 bercak yang manunjukkan 3

jenis senyawa kurkuminoid yang terkandung dalam kunyit yaitu

bisdemetekosikurkumin, demetoksikurkumin, dan kurkumin.

D. Senyawa kurkuminoid diuji dengan menggunakan metode

penangkapan radikal, DPPH sebagai radikal bebas dan diukur

absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV Visibel.

E. Senyawa kurkumin memiliki EC50 sebesar 0, 544 mg/ ml, dan

tergolong memiliki aktivitas antioksidan yang lemah.

Demetoksikurkumin memiliki EC50 sebesar 0, 248 mg/ ml, tergolong

memiliki aktivitas antioksidan yang lemah. Bisdemetoksikurkumin

| 102
 memiliki EC50 sebesar 3, 30 mg/ ml, tergolong memiliki aktivitas

antioksidan yang lemah.

B. Saran

Saran untuk penelitian selanjutnya adalah:

1. Bahan baku sampel lebih diperhatikan dalam pengadaannya, mulai dari

sumber bahan baku sampai waktu dalam memanen, karena metabolit

akan bergantung pada lingkungan hidupnya, sehingga didapat hasil

yang maksimal.

2. Isolasi dapat dilakukan hingga menemukan struktur senyawa bahan,

agar dapat diketahui secara pasti yang menjadi senyawa aktif dari

bahan tersebut.

| 103
 DAFTAR PUSTAKA

Achmad, S. A., 1986, Buku Materi Pokok Kimia Organik Bahan Alam, Jakarta,

Karunika Universitas Terbuka, hal. 147, 149.

Ahmad, A., Patong, R., Aktivitas Antikanker Senyawa Bahan Alam Kurkumin

dan Analognya pada Tingkat Molekuler, Jurnal Kedokteran Yarsi, Volume

14, hal.2.

Cahyadi, W., Analisis Dan Aspek Kesehatan, Bumi Aksara, Jakarta, 2008.

Christian, G.D., 2008, Analytical Chemistry, 6th Ed, John Wiley and Sons Inc,

USA, p.458.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1977. Materi Medika Indonesia, Jilid

Departemen Kesehatan RI, 1979, Materia Medika Indonesia, Jilid III, Departemen

Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal.xv, xvi, xx, xxii,47-52.

Farrell, K.T. 1990. Spices, Condiments, and Seasonings. The AVI Publishing

Company Inc. Westport Connecticut, India, p.264.

Jayaprakasha, G.K., Jagan Mohan Rao, L., dan Sakariah, K.K., 2005, Chemistry

and Biological Activities of C. longa, Trends and Food Science and

Technology, Texas A and M University, USA, p.304.

Johani, Erman. 2008. Tanaman Pakarangan. Karya Kita, Bandung, hal.46.

Kartasapoetra, G.1996. Budidaya Tanaman Berkhasiat Obat : Meningkatkan

Apotik Hidup dan Pendapatan Para Keluarga Petani dan PKK, Rineka

Cipta, Jakarta, hal. 152.

| 104
Krisnamurthy,N., A.G. Matthew, E.S. Nambudiri, S. Shivashankar, Y.S. Lewis

dan C.P. Natarajan, 1976, Oil and Oleoresin of Turmeric, Science Inc,

India, p.208

Kristina,2006, Manfaat Kunyit, Bintang Penabur, Jakarta, hal.99.

Kumalaningsih, S., 2006, Antioksidan Alami, Trubus Agrisaranan, Surabaya,

hal.24-25.

Li, Q., 2009, Note to User, Proquest LLC, USA, p. 105.

Muhlisah, Ir. Fauziah. 2008. Tanaman Obat Keluarga (TOGA). Penebar Swadaya

Revathy, Jakarta, hal.102.

Nur A., 2001, Isolasi dan Studi AktvitasAntioksidan dari Rimpang Lembayung

Wangi (Zingiber aromaticum Val), Karya Utama Sarjana Kimia FMIPA UI,

Depok, hal.93.

Prakash, A., Antioxidant Activity, Medallion Laboratories : Analithycal Progres ,

2001, Vol 19 No : 2. 1 4.

Pudjaatmaka,H., 2002, Kamus Kimia, Balai Pustaka, Jakarta, ha.257-771.

Rukmana, R., 1994, Kunyit, Penerbit Kanisius, Yogyakarta, hal. 28.

Said, A., 2007, Khasiat dan Manfaat Kunyit, Sinar Wadja Lestari, Jakarta, hal. 11-

12.

Servan-Schreiber, D., 2009, Hidup Bebas Kanker: Terobosan Baru Mencegah,

Melawan, dan Mengobati Kanker, Penerbit Qanita, Bandung, hal. 158.

Shankaracharya, N.B. dan C.P. Natarajan, 1977, Role of Spices in Health, J.

Health Sci III, India, p.99.

Soegihardjo, C. J., 2013, Farmakognosi, PT Citra Aji Parama, Yogyakarta, hal.77.

| 105
Songklanakarin, 2004, The Use of The Stable Free Radical

Diphenyilpicrylhidrazyl (DPPH) for Estimating Atioxidant Activity, J.Scie

Tech, USA, p.211.

Steenis, Dkk. 2006. Flora untuk Sekolah di Indonesia. Jakarta : Pradnya

Paramitha.

Sudarsono, P. A., Gunawan, D., Wahyuono, S., Donatus, I. A. Drajad, M.,

Wibowo, S. dan Ngatidjan, 1996, Tumbuhan Obat, Hasil Penelitian, Sifat-

Sifat dan Penggunaan, UGM Press, Yogyakarta, hal. 14-22.

Sumiati, A. 2004. Khasiat Kunyit. (http://www.annehira.com)

Tjitrosoepomo, Gembong., 2005, Morfologi Tumbuhan, UGM University

Press,Yogyakarta, hal. 20.

Walker, M., 1993, DMSO : Natures Healer, Pimguin Group, UA, p.34.

Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal, Penerbit Kanisius,

Yogyakarta, hal. 11-12.

Winarto, W.P., 2008, Khasiat & Manfaat Kunyit, Agro Media Pustaka, Jakarta,

hal.102.

Winarto,W. P., 2004, Khasiat dan Manfaat Kunyit, Agro Media Pustaka, Jakarta,

hal. 104.

Witt, S., Lalk, M., Hager,C., dan Voigt, B., 2010, DPPH-Test : Determination of

Scavenger Properties, http://www.baltic-analytics.de/index, diakses tanggal

16 November 2014.

Youngson, R., Antioksidan: Manfaat Vitamin C dan E Bagi Kesehatan, Penerbit

Arcan, Jakarta, hal. vi, 18-19.

| 106
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Data Penimbangan Uji Kemurnian Simplisia Rimpang

Kunyit

1. Kadar abu 4. Kadar sari larut air

Berat cawan : 49,25 g Cawan : 43,5092 g
Cawan + serbuk : 52,26 g Cawan + simplisia : 48,6142 g
Pemijaran Simplisia : 5,105 g
Cawan + abu I : 49,49 g Pemijaran : 43,5092 g
Cawan + abu II : 49,49 g ditambah 20 ml filtrat
Abu : 0,24 g Pemijaran I : 43,6982 g
2. Kadar abu tidak larut asam & Cawan + filtrat II : 43,6893 g
larut air Cawan + filtrat III : 43,6892 g
Kertas : 0,2552 g Cawan + filtrat IV : 43,6892 g
Kertas + abu : 0,4940 g Hasil pemijaran : 0,1798 g
Kertas + sisa : 0,2552 g 5. Kadar sari larut etanol
Abu : 0,2388 g Cawan : 32,1986 g
Abu dibagi 2 (@0,1994 g) Cawan + simplisia : 37,3086 g
Kertas : 0,2598 g Simplisia : 5,110 g
Kertas + bahan : 0,3792 g Pemijaran : 32,1986 g
Kertas + sisa : 0,2598 g + 20 ml filtrat
Abu : 0,1194 g Pemijaran I : 32,3637 g
3. Kadar abu tidak larut asam Pemijaran II : 32,3485 g
Cawan : 49,336 g Pemijaran III : 32,3483 g
15 menit I : 49,346 g Pemijaran IV : 32,3483 g
15 menit II : 49,319 g Hasil pemijaran : 0,1497 g
Abu : 0,001 g 6. Penetapan kadar bahan organik
Kadar abu larut air asing
Cawan : 51,689 g Cawan I : 51,789 g
15 menit I : 51,759 g Cawan + simplisia
15 menit II : 51,670 g dan pengotor : 82,239 g
Abu : 0,026 g Cawan II : 52,279 g

| 107
Simplisia : 29,96 g
Bobot awal : 30,45 g
Pengotor : 30,45 g
29,96 g = 0,49 g
7. Kadar air (toluen)
Cawan : 57,4488 g
Cawan+simplisia : 67,4488 g
Simplisia : 10,0000 g

| 108
Lampiran 2. Data Perhitungan Uji Kemurnian Simplisia Rimpang Kunyit

1. Kadar abu
=

2. Kadar abu tidak larut asam

=

3. Kadar abu larut air

4. Kadar sari larut air

=

5. Kadar sari larut etanol

=

6. Penetapan bahan organik asing

7. Kadar air
=

| 109
Lampiran 3. Foto Uji Kemurnian Simplisia Rimpang Kunyit

Gambar 1. Simplisia rimpang kunyit

Gambar 2. Maserasi sampel

Gambar 3. Kadar abu tidak larut asam dan kadar abu larut air

| 110
Lampiran 4. Data Penimbangan Penapisan (Skrining) Fitokimia Rimpang
Kunyit

Uji Kertas Kertas + isi Kertas + Bahan

(gram) (gram) sisa (gram) (gram)

Alkaloida 0, 4513 2, 4761 0, 4513 2, 0248

Antrakinon 0, 5370 0, 8385 0,5370 0, 3015

Polifenol 0, 6910 2, 6095 0, 6091 2, 0004

Tanin 0, 4881 2, 4889 0, 4881 2, 0008

Steroid 0, 2494 2, 2497 0, 2494 2, 0003

Saponin 0, 2474 0, 5474 0,2474 0, 3001

Minyak Atsiri 33, 0291 43, 0312 33, 0291 10, 0021

Uji KLT

KLT 1 0, 2453 3, 2435 0, 2452 2, 9983

KLT Alkaloid 0, 5500 3, 5500 0, 5500 3, 0000

| 111
Lampiran 5. Foto Penapisan (Skrining) Fitokimia Rimpang Kunyit

Gambar 9. Uji Alkaloid (sebelum & sesudah) Gambar 8. Uji Antrakinon

Gambar 7. Uji Polifenol Air Gambar 6. Uji Polifenol Etanol (sebelum & sesudah)

Gambar 4. Uji Steroid & Penegasan

Gambar 5. Uji Tanin

| 112
Gambar 11. Uji Saponin Gambar 10. Uji Minyak
Atsiri

KLT

Gambar 13. Larutan 2a

Gambar 12. Larutan 1

Gambar 15. Larutan 2c

Gambar 14. Larutan 2b

| 113
 Gambar 14. Larutan 3A
Gambar 12. Larutan 3B Gambar 13. Larutan 3C

Gambar 15. KLT alkaloid 1

Gambar 16. KLT alkaloid 2

| 114
Lampiran 4. Data Pengamatan KLT Penapisan (Skrining) Fitokimia
Rimpang Kunyit
1 2A

10 cm 10 cm

S1 kuarsetin 2 cm S1 S2 S3 Tanin

Fase Diam : Silika Gel GF254 Fase Diam : Silika Gel

GF254
Fase Gerak : Etil aseat : toluena
(9:1) Fase Gerak : n butanol :
asam asetat : air (5:1:4) v/v
Fase Atas

| 115
2b

10 cm
10 cm

2 cm 2 cm
S1 S2 S1 S2
S3

Fase Diam : Silika gel GF254 Fase Diam : Silika Gel GF254

Fase Gerak : etil asetat: asam formiat: Fase Gerak : etil asetat :
asam asetat:Air metanol air :air(100:13,5: 10)
( 100:11:11:27) v/v

| 116
 3a 3b

10 cm 10 cm

S1 S2 saponin 2 cm S1 Antrakinon 2 cm
kardenolida saponin

Fase Diam : silika gel GF24 Fase Diam : silika gel GF254
Fase Gerak :butanol : asam
asetat: Air ( Fase Gerak : kloroform : :
5:1:4) v/v metanol : air
Fase Atas
(64: 50: 10) v/v

| 117
3c Untuk uji alkaloid tersier

ALKALOID 1

10 cm 10 cm

Glikosida 2 cm S1 S2 2 cm
S1 S2
Flavonoid

Fase Diam : Selulosa Fase Diam : Silika gel GF 254

Fase Gerak : t butanol : Fase Gerak : Sikloheksana-

asam uji
Untuk asetat : air kuartener
alkaloid dietil amina (9:1) v/v atau
tertier butanol-kloroform-
dietil amina (2: 7 : 1) v/v

Atau

| 118
ALKALOID II

S1 S2

Fase Diam : Silika gel GF 254

Fase Gerak : Sikloheksana-

dietilamina (9:1:) v/v atau
tersier butanol-kloroform-
dietil amina (2:7:1) v/v

| 119
Lampiran 7. Data Perhitungan KLT Penapisan (Skrining) Fitokimia
Rimpang Kunyit
Rf =

Hf = Rf x 100

Larutan Nilai
Rf Hf
Larutan 1 Sampel 0,85 85
Kuarsetin 0,87 87
Larutan 2A Sampel 1 0,81 81
Sampel 2 0,83 83
Sampel 3 0,85 85
Pembanding 0,16 16
Larutan 2B Sampel 1 0,97 97
Sampel 2 0,96 96
Larutan 2C Sampel 1 0,63 63
Sampel 2 0,61 61
Sampel 3 0,60 60
Larutan 3A Sampel 1 0,86 86
Sampel 2 0,85 85
Larutan 3B Sampel 1 0,85 85
Antrakinon 0,99 99
Kardenolida 1,02 102
Saponin 0,94 94
Larutan 3C Sampel 1 1,02 102
Sampel 2 1,04 104
Rutin 1,01 101

| 120
Lampiran 8. Data Penimbangan Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit dan
Uji Antioksidan Secara Kualitatif
Bahan Wadah (g) Wadah+isi (g) Bahan (g)
Ekstrak 1 (0,1 g) 45,1050 45,2048 0,0998
Ekstrak 2 (5 g) 38,2993 43,3201 5,0208
Silika gel 153,2867 193,2831 39,9964

Ekstrak

Cawan Cawan+isi (g) Cawan kosong Ekstrak (g)

(g)
I 58,4096 51,1894 7,2202
II 55,6898 38,3001 17,3897
III 37,8768 35,7980 2,0878
TOTAL 26,6977

| 121
Lampiran 9. Foto Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit dan Uji
Antioksidan Secara Kualitatif

KLOROFORM :
METANOL

Di bawah UV Setelah diberi pendeteksi,

dioven

KLOROFORM :
ETANOL : ASAM
ASETAT GLASIAL

Di bawah UV Setelah diberi pendeteksi,

dioven

TOLUEN : ETIL
ASETAT

Di bawah UV Setelah diberi pendeteksi,

dioven

| 122
 Di bawah UV:

UJI ANTIOKSIDAN
DPPH + DPPH Sebelum ditambah DPPH

-. DPPH Tanpa penambahan DPPH

KLT FRAKSI (1, 2,

3)

Di bawah UV

KLT FRAKSI (4, 5,

6)

Di bawah UV
KLT FRAKSI 7

| 123
Di bawah UV

| 124
Lampiran 10. Data Pengamatan KLT Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit
dan Uji Antioksidan Secara Kualitatif
PLAT 1 PLAT 2

Berp
enda
r di
baw
10 cm ah
10 cm
sinar
UV

S1 S2 kurkumin S1 S2 kurkumin
2 cm 2 cm

Sistem KLT: Sistem KLT:

Fae diam : silika gel GF254 Fase diam : silika gel GF254

Fase gerak : toluene : etil asetat (93:7) Fase gerak : kloroform : metanol
(95:5)

Tanpa deteksi DPPH

| 125
 PLAT 3 PLAT 4

Berpendar di bawah
sinar UV

10 cm 10 cm

S1 S2 kurkumin Ekstrak f3 f2 f1
2 cm 2 cm

Sistem KLT: Sistem KLT:

Fase diam : silika gel GF254 Fase diam : silika gel GF254

Fase gerak : klorofrorm : etanol : asam Fase gerak : kloroform : metanol

asetat glasial (94:5:1) (95:5)

| 126
PLAT 5 PLAT 6

Ber
pen
dar
di
baw
ah
10 cm 10 cm
sina
r
UV

S1 S2 S1 S2 kurkumin
2 cm 2 cm
kurkumin

Sistem KLT: Sistem KLT:

Fase diam : silika gel GF254 Fase diam : silika gel GF254

Fase gerak : kloroform : metanol (95 : 5) Fase gerak : kloroform :

metanol (95 : 5)

Dengan deteksi DPPH

| 127
PLAT 7 PLAT 8

Berpendar ungu Berpendar ungu

di bawah sinar di bawah sinar
UV UV

10cm 10cm

Ekstrak f6 f5 f4 Kurkumin sampel f7

2 cm 2 cm

Sistem KLT: Sistem KLT:

Fase diam : silika gel GF254 Fase diam : silika gel GF254

Fase gerak : kloroform : metanol (95 : 5) Fase gerak : kloroform : metanol

(95 : 5)

| 128
Lampiran 11. Data Perhitungan KLT Ekstraksi Simplisia Rimpang Kunyit
dan Uji Antioksidan Secara Kualitatif
Rf = ; hRf = Rf x 100

PLAT 1
Senyawa Bercak Rf hRf
Sampel 1 1 0, 54 54
2 0, 75 75
Sampel 2 1 0, 55 55
2 0, 76 76
Kurkumin 1 0, 54 54
PLAT 2
Senyawa Bercak Rf hRf
Sampel 1 1 0, 10 10
2 0, 37 37
3 0, 41 41
4 0, 52 52
5 0, 59 59
6 0, 81 81
Sampel 2 1 0, 10 10
2 0, 36 36
3 0, 40 40
4 0, 50 50
5 0, 57 57
6 0, 77 77
Kurkumin 1 0, 90 90
PLAT 3
Senyawa Bercak Rf hRf
Sampel 1 1 0, 09 9
2 0, 18 18
3 0, 33 33
4 0, 68 68
5 0, 74 74
Sampel 2 1 0, 09 9
2 0, 17 17
3 0, 33 33
4 0, 68 68
5 0, 72 72
Kurkumin 1 0, 17 17
2 0, 31 31

| 129
PLAT 4

Senyawa Bercak Rf hRf

Fraksi 1 1 0, 70 70
Fraksi 2 1 0, 25 25
2 0, 44 44
3 0, 72 72
Fraksi 3 1 0, 14 14
2 0, 26 26
3 0, 44 44
4 0, 75 75
Ekstrak Sampel 1 0, 21 21
\2 0, 35 35
3 0, 53 53
4 0, 80 80
PLAT 5

Senyawa Bercak Rf hRf

Sampel 1 1 0, 26 26
2 0, 38 38
3 0, 53 53
4 0, 77 77
Sampel 2 1 0, 24 24
2 0, 36 36
3 0, 52 52
4 0, 77 77
Kurkumin 1 1 0, 35 35
Kurkumin 2 1 0, 52 52
PLAT 6

Senyawa Bercak Rf hRf

Sampel 1 1 0, 13 13
2 0, 40 40
3 0, 60 60
4 0, 77 77
Sampel 2 1 0, 12 12
2 0, 43 43
3 0, 61 61
4 0, 80 80
Kurkumin 1 0, 11 11

| 130
PLAT 7

Senyawa Bercak Rf hRf

Sampel Ekstrak 1 0, 18 18
2 0, 34 34
3 0, 51 51
4 0, 77 77
Fraksi 4 1 0, 18 18
2 0, 33 33
3 0, 52 52
Fraksi 5 1 0, 17 17
2 0, 31 31
3 0, 50 50
Fraksi 6 1 0, 16 16
2 0, 31 31
3 0, 49 49
4 0, 76 76
PLAT 8

Senyawa Bercak Rf hRf

Kurkumin 1 1 0, 39 39
2 0, 57 57
Sampel 1 1 0, 24 24
2 0, 38 38
3 0, 56 56
4 0, 79 79
Fraksi 1 1 0, 23 23
2 0, 38 38
3 0, 57 57
4 0, 78 78

| 131
Lampiran 12. Data Penimbangan Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi
Botol fraksi Berat (g) Botol + isi (g) Isi (g)
1 61,9763 63,2626 1,2863
2 61,7896 62,7931 1,0035
3 57,5544 58,8145 1,2601
4,5 57,9633 58,8172 0,8539
6,7 62,4763 62,6082 0,1319

Bahan Wadah (g) Wadah + isi (g) Isi (g)

Ekstrak I 45,1050 45,2048 0,0958
Ekstrak II 38,2993 43,3201 5,0208
Silika 153,2867 193,2831 39,9964

Ekstrak total
Cawan Cawan + isi (g) Cawan kosong Ekstrak (g)
(g)
I 58,4096 51,1894 7,2202
II 55,6898 38,3001 17,3897
III 34,8768 35,7890 2,0878
Ekstrak total = 26,6977 g
Penimbangan fraksi
Fraksi Wadah (g) Wadah + isi (g) Isi (g)
1 64,3597 64,3798 0,0201
2 70,2529 70,2731 0,0202
3 61,9090 61,9291 0,0201
4,5 72,0231 72,0432 0,0201
6,7 64,3587 64,3790 0,0203

| 132
Lampiran 13. Data Perhitungan Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi
Sampel 1
Bobot = 0,0201 g = 20,1 mg
C sampel 1 = = 2,01 mg/ml = 2010 g/ml

o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,1 ml . 2010 g/ml
C1 = 40,2 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,2 ml . 2010 g/ml
C1 = 80,4 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,3 ml . 2010 g/ml
C1 = 120,6 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,5 ml . 2010 g/ml
C1 = 201,0 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,7 ml . 2010 g/ml
C1 = 281,4 g/ml

- % 0,1 = 100% = 4,21%

- % 0,2 = 100% = 3,59%

- % 0,3 = 100% = 4,21%

- % 0,5 = 100% = 3,72%

- % 0,7 = 100% = 4,70%

Sampel 2
Bobot = 0,0202 g = 20,2 mg
C sampel 2 = = 2,02 mg/ml = 2020 g/ml

| 133
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,1 ml . 2020 g/ml
C1 = 40,4 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,2 ml . 2020 g/ml
C1 = 80,8 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,3 ml . 2020 g/ml
C1 = 121,2 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,5 ml . 2020 g/ml
C1 = 202,0 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,7 ml . 2020 g/ml
C1 = 282,8 g/ml

- % 0,1 = 100% = 6,15%

- % 0,2 = 100% = 16,73%

- % 0,3 = 100% = 25,58%

- % 0,5 = 100% = 35,18%

- % 0,7 = 100% = 45,51%

Sampel 3
Bobot = 0,0201 g = 20,1 mg
C sampel 3 = = 2,01 mg/ml = 2010 g/ml

o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,1 ml . 2010 g/ml
C1 = 40,2 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2

| 134
 5 ml . C1 = 0,2 ml . 2010 g/ml
C1 = 80,4 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,3 ml . 2010 g/ml
C1 = 120,6 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,5 ml . 2010 g/ml
C1 = 201,0 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,7 ml . 2010 g/ml
C1 = 281,4 g/ml

- % 0,1 = 100% = 15,29%

- % 0,2 = 100% = 26,02%

- % 0,3 = 100% = 43,15%

- % 0,5 = 100% = 56,10%

- % 0,7 = 100% = 66,10%

Regresi linear
y = bx + a
a = 10,92
b = 210,16
r = 0,97
y = 210,16x + 10,92
50 = 210,16x + 10,92
x = 0,186 mg/ml c = 0,186 mg/ml = 186 g/ml
Sampel 4,5
Bobot = 0,0201 g = 20,1 mg
C sampel 4,5 = = 2,01 mg/ml = 2010 g/ml

| 135
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,1 ml . 2010 g/ml
C1 = 40,2 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,2 ml . 2010 g/ml
C1 = 80,4 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,3 ml . 2010 g/ml
C1 = 120,6 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,5 ml . 2010 g/ml
C1 = 201,0 g/ml

| 136
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,7 ml . 2010 g/ml
C1 = 281,4 g/ml

- % 0,1 = 100% = 13,89%

- % 0,2 = 100% = 23,15%

- % 0,3 = 100% = 34,92%

- % 0,5 = 100% = 47,81%

- % 0,7 = 100% = 59,45%

Regresi linear
y = bx + a
a = 8,69
b = 187,59
r = 0,990
y = 187,59x + 8,69
50 = 187,59x + 8,69
x = 0,22 mg/ml c = 0,22 mg/ml = 220 g/ml

Sampel 6,7
Bobot = 0,0203 g = 20,3 mg
C sampel 6,7 = = 2,03 mg/ml = 2030 g/ml

o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,1 ml . 2030 g/ml
C1 = 40,6 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,2 ml . 2030 g/ml
C1 = 81,2 g/ml

| 137
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,3 ml . 2030 g/ml
C1 = 121,8g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,5 ml . 2030 g/ml
C1 = 203,0 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C 2
5 ml . C1 = 0,7 ml . 2030 g/ml
C1 = 284,2 g/ml
- % 0,1 = 100% = 11,08%

- % 0,2 = 100% = 16,81%

- % 0,3 = 100% = 27,27%

- % 0,5 = 100% = 34,37%

- % 0,7 = 100% = 43,71%

Kurkumin
Bobot = -
C kurkumin = 1 mg/ml = 1000 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,1 ml . 1000 g/ml
C1 = 20 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,2 ml . 1000 g/ml
C1 = 40 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,3 ml . 1000 g/ml
C1 = 60 g/ml
o V1 . C1 = V2 . C2
5 ml . C1 = 0,5 ml . 1000 g/ml
C1 = 100 g/ml

| 138
o V1 . C1 = V2 . C 2
5 ml . C1 = 0,7 ml . 1000 g/ml
C1 = 140 g/ml
- % 0,1 = 100% = 7,27%

- % 0,2 = 100% = 6,90%

- % 0,3 = 100% = 8,13%

- % 0,5 = 100% = 11,95%

- % 0,7 = 100% =12,93%

| 139
Lampiran 14. Kurva Sampel 3 Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi

Kurva % Aktivitas Antioksidan vs

Konsentrasi
80
% Aktivitas Antioksidan

70 y = 210.16x + 10.918
60 R = 0.9476

50
40
Y-Values
30
Linear (Y-Values)
20
10
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Konsentrasi (mg/ml)

| 140
Lampiran 15. Kurva Sampel 4 & 5 Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi

Kurva % Aktivitas Antioksidan vs

Konsentrasi
70
y = 187.59x + 8.6953
% Aktivitas Antioksidan

60
R = 0.9814
50
40
30 Y-Values

20 Linear (Y-Values)

10
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Konsentrasi (mg/ml)

| 141
Lampiran 16. Kurva OT Fraksinasi dan Uji Antioksidan Fraksi

| 142
Lampiran 17. Data Penimbangan Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat
Penimbangan fraksi
Beker gelas = 50,0581 g Beker + sisa fraksi = 50,1110 g
Beker + isi = 50,1583 g Sisa fraksi di beker = 0,0473 g
Beker + sisa = 50,0581 g Flakon kosong = 12,7851 g
Fraksi = 0,1002 g Flakon + sisa fraksi = 12,8057 g
Sisa fraksi di flakon = 0,0206 g
Bobot total fraksi dalam KLT = 0,1002 g 0,0473 g 0,0206 g
= 0,0323 g
Penimbangan isolat
Keterangan Isolat I Isolat II Isolat III
Cawan kosong (g) 37,8944 29,3870 27,5079
Cawan + isi (g) 37,9226 29,3922 27,5254
Isolat (g) 0,0282 0,0052 0,0175

| 143
Lampiran 18. Data Perhitungan Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat
Penentuan Operating Time
Menit ke - Absorbansi Menit ke - Absorbansi
5 0,770 35 0,772
10 0,777 40 0,772
15 0,773 45 0,773
20 0,772 50 0,774
25 0,772 55 0,776
30 0,771 60 0,778
OT = 20 menit
maks = 514 nm

ISOLAT I III 0,340

IV 0,290
Bobot = 28,2 mg
V 0,260
C=
%S:
Konsentrasi larutan seri (V1 C1 = V2 C2)
I =
I : 0,1 ml 2,82 mg/ml = 5 ml C2
C2 II =
= 0,0564 mg/ml
II : 0,2 ml 2,82 mg/ml = 5 ml C2 III =
C2 = 0,1128 mg/ml
IV =
III : 0,3 ml 2,82 mg/ml = 5 ml C2
C2 = 0,1692 mg/ml V =
IV : 0,4 ml 2,82 mg/ml = 5 ml C2
Persamaan regresi linear (y = Bx + A)
C2 = 0,2820 mg/ml
A = 6,74
V : 0,5 ml 2,82 mg/ml = 5 ml C2
B = 79,50
C2 = 0,3948 mg/ml
r = 0,994
Larutan Absorbansi
y = 79,50x + 6,74
DPPH 0,417
50 = 79,50x + 6,74
I 0,371
x = 0,544 mg/ml
II 0,347

| 144
ISOLAT II IV =
Bobot = 5,2 mg
V =
C=
Persamaan regresi linear (y = Bx +
Konsentrasi larutan seri (V1 C1 = V2
A)
C2 )
A = 3,35
I : 0,1 ml 0,52 mg/ml = 5 ml C2
B = 188,20
C2 = 0,0104 mg/ml
r = 0,987
II : 0,2 ml 0,52 mg/ml = 5 ml C2
y = 188,20x + 3,35
C2 = 0,0208 mg/ml
50 = 188,20x + 3,35
III : 0,3 ml 0,52 mg/ml = 5 ml
x = 0,248 mg/ml
C2
C2 = 0,0312 mg/ml
ISOLAT III
IV : 0,4 ml 0,52 mg/ml = 5 ml
Bobot = 17,5 mg
C2
C=
C2 = 0,0520 mg/ml
V : 0,5 ml 0,52 mg/ml = 5 ml C2 Konsentrasi larutan seri (V1 C1 = V2
C2 = 0,0728 mg/ml C2 )
Larutan Absorbansi I : 0,1 ml 1,75 mg/ml = 5 ml C2
DPPH 0,402 C2 = 0,0350 mg/ml
I 0,383 II : 0,2 ml 1,75 mg/ml = 5 ml C2
II 0,374 C2 = 0,0700 mg/ml

III 0,360 III : 0,3 ml 1,75 mg/ml = 5 ml C2

IV 0,349 C2 = 0,1050 mg/ml

V 0,335 IV: 0,4 ml 1,75 mg/ml = 5 ml C2

%S: C2 = 0,1750 mg/ml

V: 0,5 ml 1,75 mg/ml = 5 ml C2
I =
C2 = 0,2450 mg/ml
II =

III = Larutan Absorbansi

DPPH I 0,395

| 145
 I 0,377 II : 0,2 ml 1 mg/ml = 5 ml C2
II 0,372 C2 = 0,04 mg/ml
III 0,370 III : 0,3 ml 1 mg/ml = 5 ml C2
DPPH II 0,530 C2 = 0,06 mg/ml
IV 0,488 IV : 0,4 ml 1 mg/ml = 5 ml C2
V 0,491 C2 = 0,1 mg/ml

%S: V : 0,5 ml 1 mg/ml = 5 ml C2

C2 = 0,14 mg/ml
I =
Larutan Absorbansi
II = DPPH I 0,812

III = I 0,753
II 0,756
IV =
III 0,746
IV 0,715
V = V 0,707
%S:
Persamaan regresi linear (y = Bx +
A) I =
A = 4,67
B = 13,73
II =
r = 0,877
y = 13,73x + 4,67
50 = 13,73x + 4,67 III =
x = 3,30 mg/ml
KURKUMIN
IV =
C=
Konsentrasi larutan seri (V1 C1 = V2
C2 ) V =

I : 0,1 ml 1 mg/ml = 5 ml C2
C2 = 0,02 mg/ml

| 146
Lampiran 19. Data Pengamatan KLT Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat
Plat 1

kurkumin sampel

Isolat 1 Isolat 2 Isolat 3

Rf1 = = 0,483 Rf1 = = 0,333 Rf1 = = 0,221

Hf1 = 0,483 x 100 = 48,3 Hf1 = 0,333 x 100 = 33,3 Hf1 = 0,221 x 100 = 22,1

Rf2 = = 0,542 Rf2 = = 0,367 Rf2 = = 0,25

Hf2 = 0,542 x 100 = 54,2 Hf2 = 0,367 x 100 = 36,7 Hf2 = 0,25 x 100 = 25

Range = 5,8 cm 6,5 cm Range = 4 cm 4,4 cm Range = 2,65 cm 3 cm

| 147
Plat 2

kurkumin sampel

Isolat 1 Isolat 2 Isolat 3

Rf1 = = 0,517 Rf1 = = 0,342 Rf1 = = 0,192

Hf1 = 0,517 x 100 = 51,7 Hf1 = 0,342 x 100 = 34,2 Hf1 = 0,192 x 100 = 19,2

Rf2 = = 0,55 Rf2 = = 0,383 Rf2 = = 0,242

Hf2 = 0,55 x 100 = 55 Hf2 = 0,383 x 100 = 38,3 Hf2 = 0,242 x 100 = 24,2

Range = 6,2 cm 6,6 cm Range = 4,1 cm 4,6 cm Range = 2,3 cm 2,9 cm

| 148
Lampiran 20. Kurva Isolat 1 Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

| 149
Lampiran 21. Kurva Isolat 2 Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

| 150
Lampiran 22. Kurva Isolat 3 Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

| 151
Lampiran 23. Kurva OT Isolasi dan Uji Antioksidan Isolat

| 152
Lampiran 24. Kurva Larutan Standar Kurkumin Isolasi dan Uji
Antioksidan Isolat

| 153
Lampiran 25. Kurva Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Uji
Fraksinasi

| 154
Lampiran 26. Kurva Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Uji Isolat

| 155