MODUL PRAKTIKUM

BIOKIMIA
Tim Penyusun :
Djoko Priyatno, SP.,MSc
Surati, ST.,M.Si.Med
RirihJatmiWikandari, SST.,M.Si
Devi EtiviaPurlinda, SST.,M.Si

Jurusan Analis Kesehatan

POLTEKKES KEMENKES
SEMARANG
 IDENTITAS MAHASISWA
PRAKTIKUM BIOKIMIA

NAMA MAHASISWA :.........................................................

NIM :.........................................................
SEMESTER/KELAS :.........................................................
ALAMAT MAHASISWA :........................................................
PEMBIMBING :........................................................
:........................................................
:.........................................................
:.........................................................

Semarang,...........................
Praktikan,

i
 TATA TERTIB SELAMA PRAKTIKUM

Selama menjalankan praktikum Biokimia di laboratorium Jurusan Analis

Kesehatan Semarang semua mahasiswa harus mengetahui dan mentaati peraturan
sebagai berikut :
1. Sebelum praktikum yang telah ditetapkan, para mahasiswa tidak
diperbolehkan memasuki ruang praktikum.
2. Para mahasiswa harus datang tepat waktu, bila terlambat lebih dari 15
menit, mahasiswa tidak diperkenankan mengikuti praktikum dan harus
menggati pada hari lain.
3. Di dalam laboratorium, mahasiswa harus mengenakan APD lengkap, jas
praktikum dengan pakaian yang sopan dan rapi, bersepatu tidak
diperkenankan memakai sandal dan kaos oblong.
4. Hp dimatikan/tidak disuarakan
5. Tas dan buku yang tidak diperlukan selama praktikum supaya diletakkan
pada locker yang telah disediakan.
6. Pada waktu praktikum para mahasiswa tidak diperkenankan meninggalkan
ruang tanpa izin dosen atau asisten.
7. Praktikum harus dikerjakan dengan sungguh - sungguh, dan bertingkah
laku sopan.
8. Apabila praktikan merusakkan atau memecahkan alat-alat laboratorium
serta preparat dengan alasan apapun tetap diwajibkan mengganti alat-alat/
preparat yang rusak.
9. Setelah praktikum buku panduan praktikum boleh dibawa pulang.
10. Laporan dikumpulkan 1 minggu/ setelah materi praktek Parasitologi II.
11. Tidak boleh makan dan minum diruang laboratorium.

ii
 TIM PENYUSUN MODUL PRAKTIKUM

BIOKIMIA

1. Djoko Priyatno, SP.,M.Sc

2. Surati,ST.,M.Si.Med
3. Ririh Jatmi Wikandari, SST, M.Si
4. Devi Etivia Purlinda, SST.,M.Si

iii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah S.W.T atas limpahan rahmat dan
hidayah-Nya sehingga diberikan kemudahan dalam penyusunan penuntun praktikum
Biokimia Teknologi Laboratorium Medik . Penuntun ini adalah revisi dari penuntun
sebelumnya yang diharapkan dapat memberi tambahan pengetahuan dan
mempermudah mahasiswa dalam memahami tujuan dari setiap percobaan guna
memperkuat penguasaan ilmu biokimia.

Penulis sadar bahwa penuntun ini masih jauh dari kesempurnan, oleh karena itu
penulis sangat mengharapkan saran dari berbagai pihak demi peningkatan kualitas
substansi penuntun ini. Akhir kata, semoga penuntun ini dapat bermanfaat untuk
pengembangan ilmu pengetahuandan setiap usaha kita dinilai ibadah olehNya. Amin.

Semarang, Februari 2018

Penulis

Djoko Priyatno, SP.,M.Sc

iv
 DAFTAR ISI

Identitas Mahasiswa .............................................................................. i

Tata Tertib Praktikum ......................................................................... ii
TIM Penyusun Praktikum ..................................................................... iii
Kata Pengantar ...................................................................................... iv
Daftar Isi ............................................................................................... v
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................... 1
BAB II KARBOHIDRAT ...................................................................... 3
A. Uji Umum Karbohidrat ..................................................................... 4
1. Test Molish .................................................................................... . 4
2. Test Iodium .................................................................................... 5
3. Test Benedict.................................................................................. 5
4. Test Barfoed ................................................................................... 6
5. Test Bial....................................................... .................................... 7
6. Test Seliwanoff................................................................... .............. 7
7. Test Fehling.................................................................. .................... 8
8. Test Asam Musat ........................................................................... 8
B. Penentuan Test Asam Musat Gula dengan Reagen Anthrone ....... 11
BAB IV. PROTEIN ................................................................................ 12
A. Reaksi-reaksi Kimia untuk Asam Amino dan Protein ..................... 12
1. Test Susunan Erlementer .............................................................. 12
2. Test Kelarutan ............................................................................... 13
3. Test Biuret.......................................................................... .............. 14
4. Test Ninhidrin ................................................................................ 14
5. Test Xanthoprotein................................................................... ...... 15
6. Test Millon.................................................................. ..................... 15
7. Test Gioksilat (Hopkins-Cole) ....................................................... 16
B. Penentuan Kadar Protein Secara Spektrofotometri ........................ 16
C. Protein Casein ................................................................................... 18
D. Penetapan Kadar Protein ................................................................. 19

v
BAB V. LIPID ........................................................................................ 20
A. Uji Kelarutan Lipid............................................................................. 20
B. Penyabunan Emulsi .......................................................................... 21
C. Uji Kolestrol ...................................................................................... 21
D. Uji Kristal Kolesterol ........................................................................ 22
E. Uji Sulkowski ..................................................................................... 22
F. Uji Akreolin ....................................................................................... 23
BAB VI. ENZIM .................................................................................... 24
A. Pengaruh Temperatur ....................................................................... 24
B. Pengaruh pH ...................................................................................... 25
C. Pengaruh Konsenterasi Enzim .......................................................... 25
D. Pengaruh Substrat ............................................................................. 26
BAB VII. VITAMIN .............................................................................. 27
A. Penentuan Adanya Vitamin C (Asam Askorbat) .............................. 27
B. Penentuan Adanya Vitamin A ........................................................... 28
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 29

vi
 BAB I

PENDAHULUAN

1. Tema Modul : Analisa Kualitatif Karbohidrat, Protein, Lipid,

Enzim, dan Vitamin

2. Mata kuliah / kode : Biokimia / TLM207

3. Jumlah SKS : 1 SKS

4. Alokasi waktu : 1 x 170 Menit

5. Semester / T.A : II – 2018/2019

6. Tujuan : Peserta didik mampu melakukan Analisa

Kualitatif Karbohidrat, Protein, Lipid, Enzim,
dan Vitamin

7. Gambaran Umum Modul : Modul Biokimia ini mempelajari tentang

Analisa Kualitatif Karbohidrat, Protein, Lipid,
Enzim, dan Vitamin

8. Karakteristik Mahasiswa : Modul ini ditujukan bagi mahasiswa Prodi

DIII Analis Kesehatan Jurusan Analis
Kesehatan

9. Target Kompetensi : Mahasiswa mampu melakukan :

1. Analisa Karbohirat
2. Analisa Protein
3. Analisa Lipid
4. Analisa Enzim
5. Analisa Vitamin
10. Indikator Ketercapaian : Peserta didik mampu melakukan Analisa
Protein, Karbohidrat, Lipid, Vitamin, dan
Enzim.

11. Materi Pembelajaran :

1. Pengujian Karbohidrat dengan metode

Asam Musat, Barfoed, Benedict, Bial,
Iodium, Molish, Seliwanoff

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 1

 2. Pengujian Protein dengan metode Biuret,
Kelarutan, Ninhidrin, Xantoprotein
3. Pengujian Lipida dengan metode
Kelarutan dan Emulsi, Kolesterol,
Sulkowski
4. Pengujian Vitamin C
5. Pengujian mengenai pengaruh suhu,
konsentrasi enzim, dan pH terhadap
Enzim
12. Strategi Pembelajaran : Ceramah, Praktikum

13. Sarana Penunjang Pembelajaran : LCD, Buku panduan praktikum, tabung

reaksi, erlemeyer, beaker glass, Hot plate,
gelas ukur, rak tabung, penjepit tabung,
mikropipet

14. Prosedur : (terlampir di modul)

15. Metode Evaluasi : Observasi, Pretest dan Laporan Praktikum

16. Metode Penilaian : Tes sumatif dan formatif

17. Daftar Pustaka : a. Murray, R.K., Daryl K.G., Peter A.M.,

Viktor W.R. Biokimia Herper Edisi 25,
2003. Alih Bahasa Oleh Andry Hartono.
EGC: Jakarta
b. Murray, R.K., Daryl K.G., Peter A.M.,
Viktor W.R. Herper’s Illustrated
Biochemistry Twenty-Sixth Edition, 2003.
The McGraw-Hull Companies, Inc

Disiapkan Oleh : Diperiksa Oleh : Disahkan Oleh :

Dosen Pengampu Ketua Program Ketua Jurusan Analis Kesehatan

Studi

Djoko Priyatno, SP.,M.Sc SY. Didik Widiyanto, SKM.,M.Kes

NIP.197012041994031001 NIP. 196204021986031002

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 2

 BAB II

KARBOHIDRAT

Karbohidrat merupakan salah satu dari tiga makanan pokok manusia dan hewan,
dismping itu juga lemak dan protein. Secara fotosintesis, karbohidrat dihasilkan oleh
tanaman. Setelah melalui pencernaan makanan, karbohidrat dipecah menjadi CO2 dan H2O
serta melepaskan energy atau disimpan dalam bentuk glikogen.

Berdasarkan gula penyusunnya, karbohidrat diklasifikasikan menjadi :

1. Monosakarida
Kelompaok senyawa ini tidak dihidrolisa menjadi senyawa yang lebih sederhana lagi.
Kelompok ini mempunyai rasa manis dan mempunyai daya mereduksi serta mempunyai
gugus fungsiional seperti : Aldehid, Keton, dan Alkohol.

Contoh :

a. Pentosa : Monosakarida dengan lima atom karbon, seperti : Arabinosa, Xylosa, Rhamnosa,
Ribosa.
b. Hektosa : Monosakarida dengan enam atom karbon, seperti :
 Dengan gugus fungsional aldehid, disebut aldosa
Contoh : glukosa, galaktosa
 Dengan gugus fungsional keton, disebut : ketosa
Contoh : fruktosa

2. Disakarida
Kelompok ini mempunyai dua gugus monosakarida baik sama atau tidak sama yang
terikat oleh ikatan glikosida. Kelompok ini dapat dihidrolisa menjadi gula sederhana. Ada
yang bersifat mereduksi seperti maltosa, laktosa, sedangkan yang tidak dapat mereduksi
contohnya sukrosa.

3. Polisakarida
Kelompok ini disusun oleh beberapa monosakarida yang diikat oleh ikatan glikosida 1.4
dan 1.6 pada umumnya mempunyai berat molekul besar, tidak dapat mereduksi, tapi dapat
dihidrolisa menjadi gula yang lebih sederhana.
Contohnya : pati, glikogen, inulin, glikoprotein, dextrin dan pectin.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 3

A. Uji Umum Karbohidrat
1. Test Molish
Dasar Teori :
Asam sulfat pekat menghidrolisa ikatan glikosida menghasilkan monosakarida
yang kemudian dihidrasi menghasilkan furfural dan turunannya. Senyawa tersebut
kemudian menghasilkan senyawa komplek berbentuk cincin berwarna cincin ungu.
Larutan Molisch ini mengandung 10 gram α-naftol dalam 100 mL alcohol. Uji ini
berdasarkan kepada reaksi karbohidrat dengan Asam pekat (Sudarmadji, 2010).

Tujuan : untuk mengetahui adanya karbohidrat secara umum.

Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Air Liur
Pipet Tetes Serum
Rak Tabung Reaksi Nasi
Susu
Tahu

Prosedur :
 10 tetes larutan uji + 2 tetes larutan alfa naftol. Dikocok homogen.
 Tambah perlahan-lahan asam sulfat pekat melalui dinding tabung sampai
terbentuk cincin warna ungu.

Reaksi :

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 4

 2. Tes Iodium

Dasar Teori :
Tes pembentukan warna spesifikasi dari polisakarida terhadap iodium.

Tujuan : untuk menunjukkan adanya amylum dan amylopektin.

Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Singkong
Pipet Tetes Tepung ketan
Rak Tabung Reaksi

Prosedur :
 Masukkan 3 tetes larutan yang akan diuji
 Ditambahkan 1 tetes larutan lugol / iodium
 Amati perubahan warna yang terjadi :
Warna biru positif untuk amylum
Warna merah anggur untuk amylopektin.

Reaksi :
Amylum + Iodium .....> biru
Amylopektin + iodium .......> Merah anggur

3. Test Benedict

Dasar Teori :
Cu 2+ akan direduksi oleh gula menjadi Cu + dalam bentuk Cu2O. Reaksi positif di
tandai dengan terbentuknya warna endapan biru kehijauan sampai warna merah
bata.

Tujuan : untuk menunjukkan adanya gula reduksi.

Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Urin
Pipet Tetes Serum
Beaker Glass Susu
Hot Plate Fruktosa
Glukosa
Sukrosa

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 5

 Prosedur :
 5 tetes larutan uji + 10 tetes larutan benedict dan kocok homogen.
 Didihkan 2 menit atau masukkan dalam penagas air selama 5 menit.
Perhatikan warna yang terjadi pada endapan biru kehijauan – merah bata.

Reaksi :

4. Tes Barfoed
Dasar Teori :
Pada prinsipnya sama dengan test benedict, bedanya disini reaksi dalam suasana
asam, tidak menggunakan polihidroksialkohol, karena dalam suasana asam cupri
tidak membentuk endapan Cu(OH)2 dan tetap larut. Reaksi positif ditandai dengan
adanya endapan merah bata dari Cu2O.

Tujuan :
untuk membedakan monosakarida dan disakarida karena dalam suasana asam
larutan gula yang masih mempunyai sifat mereduksi hanya monosakarida.

Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Laktosa
Pipet Tetes Glukosa
Beaker Glass Fruktosa
Hot Plate Talok
Madu

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 6

 Prosedur :

 10 Tetes larutan uji + 10 tetes larutan barfoed, panaskan diatas api selama 1
menit. Bila tidak terlihat adanya reduksi, panaskan dalam penangas api
mendidih selama 10 menit. Pemanasan yang terlalu lama akan
mengakibatkandisakarida yang dalam suasana asam akan mengalami
hidrolisa dan menyebabkan reaksi positif.

5. Tes Bial
Dasar Teori :
Pembentukan senyawa berwarna biru karena adanya kondensasi hasil dekomposisi
karbohidrat dengan orsinol (3.5 dihidroksi toluen )

Tujuan : Untuk mengetahui adanya pentosa

Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Xylosa
Pipet Tetes Fruktosa
Beaker Glass Glukosa
Hot Plate

Prosedur :

 10 tetes larutan uji + 3 tetes larutan HCL pekat + 5 tetes larutan pereaksi bial,
kocok dan tutup dengan kapas, kemudian panaskan dalam penangas air
mendidih selama 10 menit. Warna biru kehijauan menunjukkan adanya
pentosa.

6. Test Seliwanoff

Dasar Teori :
Fruktosa dengan HCL akan membentuk hidroksi metal furfural dan dengan
penambahan recorsinol akan mengalami kondensasi yang berwarna merah orange.
Penambahan HCL juga berfungsi untuk melepaskan air dari fruktosa.
Tujuan : untuk menunjukkan adanya ketosa fruktosa
Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Salak
Pipet Tetes Fruktosa
Beaker Glass Glukosa
Hot Plate Madu

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 7

 Prosedur :
 10 tetes larutan uji + 4 tetes larutan HCL pekat + 5 tetes pereaksi Seliwanoff.
Panaskan dalam penangas air mendidih selama 1 menit. Hasil positif bila
memberikan warna merah orange. Untuk pemanasan yang terlalu lama
sukrosa bisa bereaksi positif karena dalam suasana asam kuat sukrosa akan
terhidrolisa menjadi fruktosa dan glukosa.

7. Tes Fehling
Dasar Teori :
Semua larutan karbohidrat yang mempunyai gugus aldehid atau keton bebas akan
memberikan reaksi positif terhadap pereaksi fehling. Hal ini disebabkan karena ion
cupri direduksi oleh gugus pereduksi tersebut menjadicupro dan mengendap dalam
bentuk cuprosida yang berwarna merah bata.
Larutan Fehling A dan Fehling B sengaja dipisahkan, kemudian dicampur pada
saat akan melakukan percobaan, karena akan terjadi reaksi antara CuSO 4 dengan
NaOH membentuk Cu (OH)2 yang berwarna / endapan putih. Apabila dipanaskan
akan menjadi hitam karena terbentuk Cu2O.

Tujuan :
Untuk mengetahui adanya gugusan pereduksi
Prosedur :
 Diambil 10 tetes campuran larutan Fehling A & B ( 1 : 1)
 Ditambah 10 tetes larutan sampel, kemudian dipanaskan di penangas air
selama 5 menit.
 Diamkan adanya endapan merah bata, menunjukkan adanya gula reduksi.

8. Test Asam Musat

Dasar Teori :
Dari semua karbohidrat hanya galaktosa dan laktosa yang pada oksidasi dengan
asam nitrat menghasilkan asam yang tidak dapat larut.

Tujuan:
Untuk membedakan glukosa dan galaktosa
Alat dan Bahan :

Alat Bahan
Tabung Reaksi Glukosa
Pipet Tetes Galaktosa
Beaker Glass
Hot Plate

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 8

 Prosedur :
 10 tetes larutan uji + 4 tetes HNO3 pekat
 Panaskan dalam penangas air sehingga volumenya tinggal 1/6 tabung ( 0,5
ml)
 Dinginkan perlahan – lahan perhatikan
 Amati terbentuknya kristal pasir dibawah mikroskop.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 9

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 10
B. PENENTUAN SUGAR DENGAN REAGEN ANTRONE
Metode ini dapat digunakan untuk penentuan polisakarida dan monosakarida.
Intensitas warna tergantung pada tipe/jenis sugar dalam sampel. Glukosa biasanya
digunakan sebagai standart.

Reagen :
 Tambahkan 100 ml H2SO4 pekat kedalam 40 ml aquadest secara perlahan
kemudian dinginkan dan homogenkan.
 200 mg antrone dilarutkan dalam 100 ml H2SO4 diatas
 Reagen disimpan pada suhu -150 C dan dapat bertahan selama 2 minggu.

Pembuatan larutan standart :

100 mg glukosa p.a dilarutkan dalam 100 ml aquadest 1 mg/ 1 ml
Seri a : larutan standart 1 mg diencerkan 10x 100 mg/ml
Seri b : larutan standart 1 mg diencerkan 20x 50 mg/ml
Seri c : larutan standart 1 mg diencerkan 40x 25 mg/ml
Seri d : larutan standart 1 mg diencerkan 100x 10 mg/ml

Prosedur :
 Dipipet 5 ml reagen antrone kedalam 6 buah tabung reaksi, dinginkan dalam
es
 Ke dalam tabung reaksi yang pertama tambahkan 1 ml aquadest
 Tabung reaksi kedua tambahkan 1 ml sampel
 Tabung reaksi ketiga sampai ke enam tambahkan 1 ml larutan seri a untuk
tabung reaksi ke 3 dan seterusnya.
 Aduk masing – masing tabung reaksi dan dinginkan dalam air ( 15-200 C )
 Letakkan semua tabung reaksi kedalam penangas air selama 10 menit,
kemudian dinginkan kedalam air 25 menit
 Ukur absorbance pada panjang glombang 620 nm.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 11

 BAB IV

PROTEIN

Lebih dari 50% berat kering senyawa organik total yang terdapat dalam sel adalah
protein. Ditinjau dari struktur sel dan fungsinya maka senyawa ini amatlah fundamental. Jenis
dari macam protein yang terdapat dalam jasad hidup mempunyai fungsi khusus. Ada yang
berfungsi sebagai enzim, hormon dan penyusun jaringan tubuh.
Struktur protein adalah gugus amino dan gugus inkarboksil akan terbentuk ikatan
peptida (bila ikatan ini dalam jumlah besar dan bergabung menjadi satu akan terbentuk ikatan
Polipeptida/protein)
Strukturnya :

Protein tersusun oleh beberapa unsur N,O,H,C dan S,P. Protein cenderung
mengalami beberap abentuk perubahan yang dinyatakan dengan denaturasi. Perubahan
tersebut disebabkan protein peka terhadap suhu dan tekanan tinggi, alcohol, alkali, urea serta
asam tertentu.

A. Reaksi-reaksi Kimia untuk Asam Amino dan Protein

1. Susunan Elementer

Dasar teori :
Semua protein mengandung unsur C,H,O,N kadang juga mengandung S dan P dan rata-
rata prosentasi N dalam protein adalah 16%
Tujuan :
Untuk mengetahui unsur-unsur penyusun protein

Prosedur :
 Memasukan albumin kedalam cawan porselen
 Panaskan taruhlah kaca obyek diatasnya
 Amati bau yang terjadi bila tercium bau rambut terbakar berarti protein
mengandung unsur N
 Bila terjadi pengarangan berarti ada C

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 12

  Perhatikan pula terjadinya pengembunan pada kaca obyek yang menyatakan
adanya Hidrogen dan Oksigen
 Masukan 5 tetes larutan albumin ke dalam tabung reaksi
 Tambahkan 5 tetes larutan NaOH 10% kemudian panaskan
 Perhatikan bau amonia yang timbul dan uji dengan lakmus merah yang telah
dibasahi dengan air
 Terjadi amonia menunjukan adanya N
 Isilah tabung reaksi dengan sedikit larutan albumin
 Tambahkan 10 tetes NaOH 10%, panaskan
 Tambahkan 3 tetes larutan Pb asetat 2%
 Perhatikan yang terjadi bila larutan tersebut menghitam (PbS), tambahkan hati
hati HCl pekat dan perhatikan bau belerang yang khas yang berasal dari belerang
yang teroksidasi

2. Kelarutan
Dasar teori :
Sifat Fisiokimia setiap protein tidak sama tergantung dari jumlah dan jenis asam
aminonya. Protein Globuler mempunyai daya kelarutan yang berbeda dalam air. Ada
protein yang larut dalam air, adapula yang tidak larut dalam air. Tetapi semua protein
tidak larut dalam pelarut lemak seperti etil eter. Bila dalam larutan protein ditambahkan
garam, daya larut protein berkurang, akibatnya protein akan terpisah sebagai endapan.
Apabila protein dipanaskan atau ditambahkan alkohol maka protein menggumpal. Hal
ini disebabkan alkohol menarik mantel air yang melingkupi molekul-molekul protein.
Tujuan :
Untuk mengetahui adanya kelarutan protein terhadap pelarut tertentu.

Prosedur :
 Siapkan 8 tabung reaksi
 Tiap isi tabung diisi pelarut : aquades, NaOH, HCl 10% dan alkohol 90%
sebanyak 1 ml
 4 tabung reaksi masing masing ditambahkan albumin dan 4 tabung lainnya
ditambah gelatin sebanyak 2 ml
 Kemudian dikocok sampai homogen dan amati sifat kelarutannya

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 13

3. Test Biuret

Dasar teori :
Menurut Emil Fisher, asam amino digabungkan oleh suatu ikatan peptide (-CONH-).
Rangkaian asam amino, ikatan antara gugusan asam amino disebut ikatan peptide.
Ikatan peptide yang paling sederhana disusun oleh dua molekul asam amino dan
disebut dipeptida, tiga molekul disebut tripeptida.
Reaksi Biuret positif untuk semua ikatan-ikatan peptide yang lebih besar daripada
dipeptida, (dipeptida sendiri negatif). Reaksi positif memberikan warna ungu/ violet,
hal ini terjadi karena adanya senyawa kompleks yang jarang terjadi antara Cu 2+ dengan
N dari molekul ikatan peptide dan O dari H2O. Apabila CuSO4 berlebih terjadi endapan
putih (Cu(OH)2)

Tujuan :
Untuk mengetahui adanya molekul-molekul peptide dari protein

Prosedur :
 Siapkan 3 tabung reaksi, masing-masing diisi albumin, gelatin, casein sebanyak 2
ml.
 Ketiga tabung ditambah 1ml NaOH 10% dan CuSO4 2% 1 ml
 Amati perubahan yang terjadi

4. Tes Ninhidrin
Dasar teori :
Semua asam amino, protein dan derivat protein yang mengandung gugus amino bebas
dan gugus karboksil bebas memberikan hasil positif terhdap tes ninhidrin. Semua asam
amino bereaksi dengan ninhidrin membentuk aldehid yang lebih rendah dengan
melepaskan NH3 dan CO2 dan terbentuk senyawa kompleks yang berwarna biru (untuk
prolin dan hidroksiprolin berwarna kuning) dikarenakan 2 molekul ninhidrin yang
bereaksi dengan NH3 sesudah asam amino tersebut dioksidasi.
Tujuan :
Untuk mengetahui adanya asam amino bebas protein.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 14

 Prosedur :
 Siapkan 2 tabung reaksi dan masing-masing diisi 10 tetes larutan albumin, casein.
 Masing-masing tabung ditambah reagen ninhidrin kemudain dipanaskan
diatas waterbath mendidih selama 5 menit
 Amati perubah yang terjadi

5. Tes Xanthoprotein
Dasar teori :
Tes Xanthoprotein didasarkan atas nitrasi inti benzen yang terdapat pada protein
(titrosin, triptopan, phenilalanin). Senyawa nito yang terbentuk berwarna kuning dan
dalam suasana alkaslia akan terionisasi dengan bebas dan warnanya berubah menjadi
jingga. Metaprotein yang tidak larut dalam HNO 3 akan membentuk endapan. Dengan
albumin, gelatin, casein, reaksi Xanthoprotein akan membentuk endapan kuning dan
bila diinginkan akan tetap kuning. Pada bidang perbatasan antara protein dan NaOH
terbentuk jingga, hasil ini menyatakan hasil positif.
Tujuan :
Untuk membentuk adanya asam amino Tirosin dan Triptopan

Prosedur :
 Siapkan 3 tabung reaksi, diisi larutan albumin, gelatin, casein sebanyak 10 tetes.
 Tambahkan 5 tetes HNO3 pekat, perhatikan terbantuknya endapan putih
 Kemudian panaskan 1 menit lalu dinginkan dibawah air kran
 Selanjutnya masukkan dengan hati-hati NaOH sehingga terbentuk 2 lapisan
 Perhatikan perubahan warna yang terjadi
6. Test Millon
Dasar teori :
Senyawa yang mengandung radikal hidrokibenzen dapat bereaksi dengan reagen millon
membentuk kompleks berwarna merah. Hanya asam amino Fenolat seperti Tritosin dan
turunannya memberikan reaksi positif.

Tujuan :
Untuk menunjukan adanya asam fenolat seperti tritosin, casein, gelatin, dan albumin.

Prosedur :
 1 ml asam amino atau protein ditambah 5 tetes reagen millon
 Panaskan dalam pengangas air mendidih selama 10 menit, dinginkan sampai
temperatur kamar ditambah 5 tetes larutan NaNO2 1%
Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 15
  Hasil positif bila terbentuk warna merah

7. Tes Glioksilat (Hopskin-Cole)

Dasar teori :
Gugusan indol triptopan dapat bereaksi dengan asam glikosilat, bila ada asam sulfat
pekat memberikan senyawa berwarna ungu asam asetat glasial yang disinari cahaya
matahari dapat membentuk asam glikosilat.

Tujuan :
Untuk mengetahui gugus indol yang terdapat dalam asam amino

Prosedur :
 10 tetes larutan glisin, titrosin, triptopan ditambah 5 ml asam asetat glasial yang
disinari matahari
 Tambahkan perlahan-lahan asam sulfat pekat melalui dinding tabung, sehingga
terbentuk 2 lapisan
 Hasil positif bila terbentuk cincin violet

C. Penentuan Kadar Protein Secara Spektrofotometri

Metode : Lowry
Dasar teori :
Di dalam protein terdapat dalam 3 bentuk :

a. Protein tak larut ( protein fibriler atau skleroprotein)

b. Protein terlarut ( protein globuler atau sferoprotein)

c. Protein bebas

Penentuan kadar protein terlarut ini di dasarkan dengan mengetahui kadar N dalam
protein terlarut melalui berbagai metode

Tujuan :
Untuk menentukan kadar protein terlarut dalam bahan dengan tepat

Prosedur :

 Siapkan larutan protein 300mg/ml.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 16

  Siapkan larutan protein tersebut dalam tabung reaksi sehingga kadarnya
bertingkat dari 30-300 mg/ml. Pengenceran tersebut dapat dilakukan sebagai
berikut :
mL mL mL mL
Tabung Vg/mL Tabung Vg/mL
Larutan H2 O Larutan H2 O
1 0.1 0.9 30 6 0.6 0.4 180
2 0.2 0.8 60 7 0.7 0.3 210
3 0.3 0.7 90 8 0.8 0.2 240
4 0.4 0.6 120 9 0.9 0.1 270
5 0.5 0.5 150 10 1 0 300

1. Tambahkan masing-masing tabung 8 ml reagen Lowry B dan biarkan 10menit

2. Tambahkan reagen Lowry A gojog, biarkan 10’
3. Baca OD (Absorbent) pada panjang gelombang 570 nm
4. Buatlah kurva standar pada kertas grafik yang menujukan hubungan antara OD
(pada ordinat) dan konsentrasi (pada absis)

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 17

D. Protein Casein
Tujuan :
Untuk mengetahui adanya laktosa dan protein dalam susu

Dasar teori :
Susu merupakan makanan yang sangat penting bagi bayi. Ditinjau dari sudut kimia-
fisika, susu merupakan dispersi halus, emulsi lemak dalam air. Zat yang dapat
menstabilkan susu (stabilator) adalah proteinAda kurang lebih 15 macam protein
dimana separuhnya adalh spesifik susu dan yang penting adalah protein-casein (α, β
dan γ), laktalbumin, laktoglobulin, dan laktoferin.

Prosedur :
1. Percobaan Koagulasi dan Denaturasi
 Ke dalam 5 tabung reaksi dimasukan 1 cc larutan 0.5% casein dan
ditambahkan 1 cc buffer asetat dari pH 6 : 5.3 : 5.0 : 4.7 dan 3.8 campur
baik-baik dan catat kekeruhannya dan endapannya setelah 0’, 10’ dan 30’.
Setelah diamati, yang menampakkan endapan dan kekeruhan paling cepat itu
merupakan isoelektriknya.

2. Percobaan Susu Skimed

 100 cc susu skimed (tak berlemak) + 100 cc H2Odiaduk terus menerus

sambil ditetesi larutan HCl 10% sampai terlihat keping-keping dalam cairan
tersebut yaitu casein yang mengendap pada titik isoelektrik pH 4.7.
Tenangkan 10’, kemudian disaring.

Filtrat → Cairan yang masih mengandung protein (selain casein) dipanasi sampai
dengan setengah cairannya menguap. Disaring dan filtratnya diambil, diperiksa
laktosanya (gulas susu) dengan osason

Endapan → Endapan yang timbul adalah protein (laktalbumin dan laktoglobulin)

endapan digiling dengan menambahkan sedikit air kedalam mortir. Bagi menjadi
dua bagian, masing-masing diperiksa dengan tes millon dan biuret.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 18

 E. Penetapan Kadar Protein
Metode : Keydahl
Pereaksi :
1. Campurkan katalisator (96% Na2SO4 anhidrus ; 3.5% CuSO4 dan 0.5 %
Selenium Oksida)
2. Campurkan indikator ( 0.016 % methyl red ; 0.083 % Brom Cresol Green) di
dalam alkohol
3. HCl 0.1N
4. H3BO3 4%
a) Penetapan :
1. Ditimbang seksama 0.5-1gr sampel, masukan dalam labu keydahl, tambahkan
5 gr campuran katalisator, tambahkan batu didih, tambahkan 15 ml H2SO4
pekat
2. Letakkan labu dalam kedudukan miring diatas pemanas, panaskan hati-hati
hingga buih habis. Dididihkan kuat-kuat hingga larutan jernih, biarkan dingin
3. Pindahkan ke dalam labu destilasi yang sudah siap pakai, tambahkan 200 ml
air biarkan dingin, tambahkan 2-3 tetes indikator PP.
4. Tambah 50 ml NaOh 50% hati hati melalui dinding labu. Segera tutup labu
destilasi dan siapkan penampung destilat
5. Tampung destilat dengan 50 ml H3BO3 4% dan indikator campuran. Suling
hingga sulingan mencapai 100 ml.
6. Pisahkan sulingan dari ujung pendingin, cuci ujung pendingin.
7. Titrasi sulingan dengan HCl 0.1 N sampai terjadi perubahan warna dari hijau
menjadi ungu, catat volume filtrasi.
b) Perhitungan :
(𝑁 × 𝑉 )𝐻𝐶𝑙 × 0.014 × 𝐹 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛 ∶ × 100%
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔𝑟)

F untuk susu dan hasil olahannya = 6.38

F untuk beras = 5.59

F untuk gelatin = 5.55

F untuk maizena = 6.25

F untuk makanan lain = 6.25

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 19

 BAB V

LIPID

Lipid adalah biomolekul organik yang tidak dapat larut dalam air. Dapat diekstraksi dari
sel dan jaringan dengan menggunakan zat pelarut no polar seperti CHCl3, eter, benzene dan
hexane. Secara kimia, iipida adalah ester dari asam lernak atau zat membentuk ester. Dialam
banyak terdapat pada bahan nabati dan hewani. Beberapa Lipid diantaranya : fostolipid dan
sterol terdapat dalam semua sel hidup. Dimana protein dan karbohidrat membentuk suatu
bagian yang penting dari koloid protoplasma.

A. Uji Kelarutan Lipid

Dasar Teori :

Pada umumnya bahan yang termasuk lemak sukar larut dalam air, tapi inudah larut
dalam perlarutnya misalnya :

Minyak dalam air akan membentuk emulsi yang tak mantap, karena butir-butir kecil akan
bersatu menjadi besar. Dengan penambahan zat-zat emulsifier, misalnya : protein, gom,
sabun, garam, empedu, akan terbentuk emulsi yang stabil.

Minyak dalam Na2CO3 akan menyebabkan terjadinya penyabunan.

Tujuan

Untuk mengetahui kelarutan lemak pada zat-zat kimia tertentu.

Prosedur :

• Sediakan 5 tabung reaksi, masing-masing diiisi dengan 1 ml air, benzene, Na2CO3 5 %

alkohol dan eter.

• Tambahkan minyak kelapa pada masing-masing tabung sebanyak 1 ml.

• Kocok sampai homogen, biarkan beberapa menit, kemudian amati perubahan yang
terjadi.

• Ulangi pereobaan tersebut dengan menggunakan mentega.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 20

B. Penyabunan Emulsi
Dasar Teori
Minyak dalam air akan membentuk emulsi yang tak mantap, karena butir-buti kecil akan
bersatu menjadi besar. Dengan penambahan emulsifier agent tertentu seperti protein,
gom, sabun, garam, empedu akan terbentuk emulsi yang stabil atau mantap. Emulsifier
akan membentuk lapisan disekeliling minyak denagn akibat merendahnya tekanan
permukaan dan diserap melapisi gelembung-gelembung lemak (globuler) satu sama lain.
Tujuan
Untuk mengetahui pembentukan emulsi
Prosedur :
a) Sediakan 4 tabung reaksi.
 Tabung 1 + 10 tetes air + 2 tetes minyak.
 Tabung 2 + 10 tetes air + 2 tetes minyak 1 tetes larutan Na2CO3 5%.
 Tabung 3 + l 0 tetes air + 2 tetes minyak + 2 tetes kelapa tengik + 1 tetes
Na2CO3 5 %.
 Tabung 4 + 10 tetes larutan empedu atau air sabun + 2 tetes minyak kelapa.
b) Kocoklah masing —masing tabung kemudian biarkan sebentar lalu amati
terbentuknya emulsi pada masing-masing tabung.
c) Emulsi mantap : gelombang kecil menyebar.
d) Emulsi tidak mantap : gelombang kecil tidak menyebar

C. Uji Koelsterol.
Dasar teori :
Beberapa lemak diantaranva fosfolipid dan yang terdapat datam sel yang hidup, Untuk
mengetahui adanya sterol dalam lemak minyak dan kolesterol dapat dilakukan uji
kolesterol, dimana uji ini positif bila menunjukan warna hijau botol
Tujuan
Untuk mengetahi adanya kolesterol pada percobaan (minyak kelapa)
Prosedur
a) Sediakan 3 tabung reaksi yang masing-masing tabung diisi dengan bahan
percobaan sebanyak 1 ml
b) Tambahkan CHCl3 sebanyak 2 ml
c) Tambahkan pula asam asetat anhirid 1 ml

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 21

 d) Tetesi dengan asam sulfat pekat melalui dinding tabung sebanyak 1-2ml dan
didiamkan beberapa detik sampai terjadi perubahan

D. Kristal Kolesterol
Dasar teori :
Kolesterol merupakan sterol penting dalam tubuh yang merupakan prekursor untuk
hormon penting. Hanya ketika tubuh bersifat asam tidak kolesterol mengkristal dan
menjadi masalah. Ini mungkin adalah kristal yang paling terlihat dalam analisis darah,
tetapi penting untk menyadari bahwa kolesterol tidak menjadi masalah ketika anda
melihat kristal, keasaman, Kolesterol sendiri ialah sterol penting dalam tubuh yang
merupakan prekursor untuk hormon yang penting
Kristal kolesterol merupakan degenerasi tidak murni yaitu timbunan bahan-bahan tertentu
baik dalam sel parenkim maupun diantara jaringan ikat sebagai akibat adanya perubahan
patologis tertentu di daerah tersebut, tetapi sel parenkim tidak sakit.
Berawal dari adanya kristal radiokuler, warna lebih merah, terdapat titik keruh yang
merupakan cairan kista dalam lumen kista. Terdapat sel makrofag yang memfagosit sel
lemak kolesterol.

Tujuan

Untuk mengetahui bentuk kristal dari kolesterol.

Prosedur :
a) Taruh serbuk kolesterol dalam CHCl3 diatas obyek glass
b) Teteskan setetes larutan Brom dalam asam asetat disampingnya.
c) Campurkan sehingga hrom dapat diikat oleh kolesterol
d) Perhatikan hentuk kristal yang terjadi.

E. Uji Sulkowski.
Dasar teori :
Bila asam sulfat ditambahkan pada larutan kolesterol dalam CHCl3, maka akan timbul 2
lapisan warna yang karakteristik. Lapisan CHCl3 atas memberikan warna merah-biru dari
lapisan asam memberikan warnahijau fluorescensi.
Tujuan
Untuk mengetahui adanya kolesterol dalam bahan

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 22

Prosedur
a) Larutkan 10 gr kolesterol dalam 1 ml CHCl3
b) Tambahkan H2SO4 pekat dengan hati hati sehingga turun lewat dinding tabung
untuk membentuk 2 lapisan
c) Catat warna yang dihasilkan
F. Uji Akroelin
Dasar teori :
Bila gliserol dipanaskan dengan potassium bisulfit, maka aka terjadi pengeringan dan
terbentuk akrolein yang mempunyai bau karakteristik. Pembentukan alkrolein tidak
terjadi bila ada air, karea itu dipakai KHSO4 anhidros. Pengujian dilakukan pada gliserol
yang bebas atau yang merupakan ester.
Tujuan
Untuk menunjukan terjadi akrolein dar gliserol dan turunannyaa.
Prosedur
Masukan serbuk halus KHSO4 setinggi 0,5 cmi dalam tabungb reaksi yang bersih dan
kering.
• Tambahkan 5 tetes larutan uji.
• Panaskan dengan hati-hati
• Catat adanya bau yang menyengat (walang sangit) dan akrolein yang terbentuk.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 23

 BAB VI
ENZIM

Enzim adalah protein yang disintesa oleh sel hidup yang berfungsi mengkatalisis jenis
reaksi kimia tertentu yang terjadi didalam dan diluar sel yang menghasilkannya sehingga
enzim disebut juga biokatalisator. Aktifitas katalitik enzim dipengaruhi oleh pH, suhu, kadar,
substrat ataupun enzim itu sendiri.

A. Pengaruh temperatur

Dasar teori
Susu rendah yang mendekati titik beku biasanya tidak merusak kegiatan enzim. Pada
suhu dimana enzim masih aktif, kenaikan suhu sehanyak 10°C menyebabkan
keaktifan enzim menjadi 2 kali lebih besar. Pada suhu optimum reaksi berlangsung
paling cepat. Bila suhu dinaikkan terus maka jumlah enzim yang aktif akan berkurang
karena mengalami denturasi.
Sebagai enzim menjadi tidak aktif pada pemanasan 60°C karena enzim terdenaturasi.
Dalam beberapa keadaan, jika pemanasan dihentikan dan enzim didinginkan kembali
maka aktifitasnya akan pulih. Hal ini disebabkan proses denaturasi masih reversible.
pH dan zat pelindung dapat mempengaruhi proses denaturasi pada pemanasan ini

Tujuan
Untuk mengetahui pengaruh temperatur terhadap kegiatan enzym.

Prosedur
Sediakan 4 tabung reaksi dan diisi dengan larutan pati 2 mL
Masing-masing tabung ditambah dengan 1 ml enzym. Lalu masing-maaing disimpan
dalam almari es, suhu kamar, suhu 40°C dan suhu 75°C selama 15 menit.
Kemudian ,dengan larutan lodium (kuning pucat-violet. )
Uji juga dengan reagen benedict
Catat dan amati yang terjadi.

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 24

B. Pengaruh pH
Dasar teori
Pada pH rendah atau tinggi enzym akan2 mengalami denaturasi sehingga dapat
mempeengaruhi kegiatan enzym. Ada atau tidaknya kegiatan enzym dapat ddihat dari
hasil hidrolisa substrat. Misalnya pati amilase maltosa atau glukosa
Hasil hidrolisa ini dapat dibuktikan dengan uji benedict
Bila positif berarti pati terhidrolisa sehingga dapat diasumsikan enzym mempunyai
aktifitas tinggi
Bila uji benedict terhadap enzym asam atau basa memberikan hasil negatif berarti
enzym tidak aktif.

Tujuan
Untuk mengetahui pengaruh pH terhadap kegiatan enzym

Prosedur
Sediakan tabung reaksi, masing masing diisi 2 ml HCl 0,1%, H2O,NaCO3 0,1%.
Tambahkan masing-masing tabungg dengan larutan pati sebanyak 2 mi dan enzym
kemudian diaduk sampai homogen, diarnkan selama 15 menit
Uji dengan lodium sarnpai tidak terjadi perubahan dalam porselin tetes.
Setelah Iodium tidak berubah, lalu uji dengan Benedict Amati perubahan yang terjadi.
Datam tabung berapa aktifitas enzim optimal.

C. Pengaruh Konsentrasi Enzym

Dasar teori :
Konsentrasi enzym akan mempengaruhi kegiatan enzym tersebut dalam memecah
suatu bahan (pati). Semakin besar volume enzym berarti konsentrasi enzym tinggi,
sehingga aktifitas enzym juga bertambah
dilihat dari perbedaan warna yyang terjadi melalui uji Iodium atau dari endapan yang
terjadi melalui uji Benedict

Tujuan
Untuk mengetahui pengaruh konsentrasi enzym terhadap perombakan suatu bahan

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 25

 Prosedur
a) Sediakan 3 tabung reaksi masing masing diisi enzym sebanyak 0,5;1;1,5 ml
b) Tambahkan pada masing-masing tabung larutan pati sebanyak 2 ml, kemudian
simpan 15 menit
c) Selanjutnya uji dengan Iodium dan Benedict seperti di atas

D. Pengaruh Subtrat
Dasar teori :
Konsentrasi substrat berpengaruh terhadap efektifitas enzym dalam perombakan. Bila
konsentrasi substrat bertambah maka kecepatan reaksinya atau efektifitasnya enzym
juga bertambah. Hal ini bisa dilihat melalui endapan yang terbentuk dari uji benedict

Tujuan
Untuk mengetahui adanya pengaruh substrat pada kegiatan enzym

Prosedur
a) Sediakan 3 tabung reaksi, isilah dengan larutan pati berturut turut 2 ml
b) Tambahkan pada masing masing tabung sebanyak 2 ml enzym kemudian
simpan selama 15 menit

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 26

 BAB VII
VITAMIN

Vitamin merupakan bahan makanan yang tidak menghasilkan energi dan tidak dapat
disintesa oleh tubuh, sehingga harus ada dalam makanan sehari hari untuk kesehatan yang
optimal.
Kebanyakan vitamin berperan sebagai koenzym dalam berbagai reaksi didalam tubuh.
Oleh karena itu dapat dimengerti, bahwa kekurangan Vitamin dapat mengganggu kelancara
reaksi biokimia
Menurut sifat kelarutannya, vitamin dapat dibagi dua golongan yaitu :
 Vitamin yang larut dalam lemak : Vitamin A
 Vitamin yang larut dalam air : Vitamin B kompleks, Vitamin C

A. Penentuan Adanya Vitamin C (Asam Askorbat)

Dasar teori
Sumber vitamin adalah sayuran dan buah segar, sehingga vitamin C disebut juga “Fresh
Food Vitamin”
Vitamin C mudah larut dalam air dan mudah rusak oleh oksidasi panas dan alkali.
Vitamin C mempunyai daya reduksi maupun oksidasi, sebab vitamin C di alam berada
dalam bentuk tereduksi (asam askorbat), maupun dalam bentuk teroksidasi (asam dehisro
askorbat)

Tujuan
Untuk mengetahui adanya vitamin C dengan pereaksi benedict

Prosedur
a) Masukkan 10 tetes larutan askorbat 1% kedalam tabung reaski
b) Tambahkan 5 tetes reagent Benedict
c) Panaskan diatas waterbath selama 2 menit
d) Perhatikan warna endapan yang terjadi
e) Warna hijau kekuningan sampai merah bata berarti vitamin C positif

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 27

B. Penentuan Adanya Vitamin A

Dasar Teori :

Vitamin A berasal dari pro Vitamin A yang terdapat di alam tumbuh-tumbuhan sebagai
karoten dan karetenoid. Penentuan adanya Vitamin A dapat dilakukan dengan pereaksi
Carr-Price atau dengan pereaksi Trikhloroasetat. Bila dalam larutan Vitamin A yang
cukup murni, ditambah pereaksi Carr- Price akan timbul warna biru.
Hal ini dikarenakan Vitamin A dengan karoten dalam chloroform membentuk zat
warna biru dengan antimonytrikhlorida. Yang mana warna biru ini cepat mencapai
maksimum kemudian akan terjadi warna merah coklat.

Tujuan :
Untuk mengetahui adanya Vitamin A dalam bahan secara Kualitatif.

Prosedur :
 Masukkan larutan minyak ikan ke dalam tabung reaksi
 Tambahkan sedikit Chloroform, campur.
 Tambahkan 5 tetes asam asetat anhidrit.
 Lalu bubuhkan sepucuk sendok SbCL3 kedalamnya.
 Amati warna biru yang terjadi yang akan segera berubah menjadi coklat.
Adanya warna biru menandakan Vitamin A (+)
 Masukkan 5 tetes larutan minyak ikan kedalam tabung reaksi.
 Tambahkan 5 tetes / 1 ml pereaksi Asam Trikhloroasetat dalam Chloroform dan
kocok campuran ini perlahan-lahan.
 Perhatikan warna biru kehijauan menandakan Vitamin A (+)

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 28

 DAFTAR PUSTAKA

Murray, R.K., Daryl K.G., Peter A.M., Viktor W.R. Biokimia Herper Edisi 25, 2003.
Alih Bahasa Oleh Andry Hartono. EGC: Jakarta
Murray, R.K., Daryl K.G., Peter A.M., Viktor W.R. Herper’s Illustrated Biochemistry
Twenty-Sixth Edition, 2003. The McGraw-Hull Companies, Inc

Pedoman Praktikum Biokimia Teknologi Laboratorium Medik Poltekkes Kemenkes Semarang 29