Ekspresi tinggi galectin-1 dan VEGF dikaitkan dengan prognosis

buruk pada pasien kanker lambung

Abstrak
Ekspresi tinggi galectin-1 dan faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF)
berkorelasi dengan perilaku biologis pada beberapa jenis kanker. Tujuan dari
penelitian ini adalah untuk mengevaluasi ekspresi galectin-1 dan VEGF pada kanker
lambung dan menyelidiki hubungan mereka dengan faktor klinisopatologis dan
signifikansi prognostik. Analisis imunohistokimia untuk ekspresi galectin-1 dan
VEGF dilakukan pada 108 kasus kanker lambung. Hubungan antara ekspresi dan
intensitas pewarnaan galectin-1 dan VEGF, variabel klinis, dan tingkat kelangsungan
hidup dianalisis. Pewarnaan imunohistokimia menunjukkan bahwa 68 dari 108
sampel kanker lambung (63,0%) positif untuk galectin-1 dan 62 dari 108 sampel
kanker lambung (57,4%) positif terhadap VEGF. Ekspresi galectin-1 dikaitkan
dengan ukuran tumor, kelas diferensiasi, stadium TNM, metastasis kelenjar getah
bening, dan ekspresi VEGF. Ekspresi VEGF berhubungan dengan ukuran tumor,
stadium TNM, dan metastase kelenjar getah bening. Analisis kelangsungan hidup
Kaplan-Meier menunjukkan bahwa ekspresi galectin-1 dan VEGF yang tinggi
menunjukkan korelasi yang signifikan dengan prognosis buruk pada pasien kanker
lambung. Analisis multivariat menunjukkan bahwa ekspresi galectin-1 dan VEGF
adalah parameter prognostik independen untuk tingkat kelangsungan hidup
keseluruhan pasien kanker lambung. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
ekspresi galectin-1 berhubungan positif dengan ekspresi VEGF. Baik galectin-1 dan
VEGF dapat berfungsi sebagai indikator prognostik independen untuk kelangsungan
hidup yang buruk untuk kanker lambung.

Kata kunci : Galectin-1, VEGF, kanker lambung, Prognosis, kelangsungan hidup.

Pengantar
Kanker lambung adalah salah satu kanker paling umum di seluruh dunia dan
merupakan salah satu penyebab utama kematian akibat kanker di China. Meskipun

1
banyak kemajuan dalam diagnosis dan pengobatan penyakit ini, prognosis untuk
kanker lambung tetap buruk, terutama pada stadium lanjut. Oleh karena itu,
mengidentifikasi penanda biologis baru untuk menentukan risiko prognosis buruk
penting untuk merancang strategi pengobatan pada pasien kanker lambung.
Galectin-1, anggota keluarga galectin dari protein pengikatan -galaktosida,
adalah homodimer subunit 14-kDa yang memiliki dua -galaktosida yang mengikat.
Ini berpartisipasi dalam berbagai fungsi biologis termasuk interaksi sel-sel dan sel-
matriks dan pertumbuhan sel. Ada bukti yang meningkat yang menunjukkan bahwa
ekspresi galectin-1 diatur dalam berbagai jenis kanker, yang menunjukkan bahwa
galectin-1 dapat mendukung invasi dan metastasis sel kanker, meningkatkan
angiogenesis tumor, dan melindungi tumor dari respons imun inang. Studi terbaru
menunjukkan bahwa ekspresi galektin-1 tinggi berkorelasi dengan kelangsungan
hidup yang buruk pada beberapa jenis kanker, seperti kanker usus besar, kanker
payudara, dan kanker pankreas.
Tumor angiogenesis adalah proses mendasar dalam pertumbuhan tumor dan
metastasis. Setiap peningkatan massa tumor harus didahului oleh peningkatan
mikrovaskular untuk mengantarkan nutrisi dan oksigen ke tumor dan membuang
produk metabolisme tumor. Faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) adalah
promotor tumor angiogenesis tumor yang paling manjur dan spesifik, yang mampu
merangsang pertumbuhan sel epitel dari berbagai asal, meningkatkan konstruksi
vaskular, dan meningkatkan permeabilitas pembuluh darah, terutama mikrovessel.
Beberapa studi yang diterbitkan sebelumnya menunjukkan bahwa ekspresi tinggi
VEGF pada kanker lambung juga dikaitkan dengan prognosis buruk.
Meskipun ekspresi tinggi galectin-1 dan VEGF pada kanker lambung telah
dilaporkan, pentingnya ekspresi galectin-1 dan VEGF sebagai parameter klinis dan
penanda prognostik pada kanker lambung tetap tidak jelas. Tujuan dari penelitian ini
adalah untuk menguji status ekspresi galectin-1 dan VEGF pada jaringan kanker
lambung dan untuk mengevaluasi apakah tingkat ekspresi galectin-1 dan VEGF
berkorelasi satu sama lain dan apakah memiliki kepentingan klinisopatologis dan
prognostik.

Bahan dan metode

2
Informasi pasien
Dari Januari 2006 sampai Agustus 2007, sebanyak 108 pasien dengan kanker
lambung yang menjalani prosedur gastrektomi di Departemen Bedah Gastrointestinal
Sekolah Kedokteran Klinik Pertama Universitas Yangzhou terdaftar dalam penelitian
retrospektif ini. Ada 60 pria dan 48 wanita berusia antara 33 dan 82 tahun (rata-rata
63,8 tahun). Tidak ada yang pernah menerima kemoterapi atau radioterapi sebelum
operasi. Tindak lanjut selesai pada tanggal 31 Agustus 2013. Parameter klinikologis
pasien dikumpulkan, termasuk klasifikasi patologis, diferensiasi penyakit, dan
klasifikasi TNM sesuai dengan International Union against cancer (UICC). Studi ini
dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki Asosiasi Medis Dunia dan disetujui
secara etis oleh First Clinic Medical School Universitas Yangzhou (YZU-EC-
JS2352). Semua pasien memberikan informed consent tertulis.

Analisis imunohistokimia
Sampel jaringan kanker lambung ditetapkan dengan pencelupan pada
paraformaldehida 4% semalam pada suhu 4 C dan kemudian dimasukkan ke dalam
lilin parafin reguler dan dipotong menjadi bagian 4 m. Analisis imunohistokimia
ekspresi galectin-1 dan VEGF dilakukan pada bagian spesimen bedah formalin-fixed
parafin. Untuk imunohistokimia, bagian jaringan di deparaffinized dan rehydrated di
PBS. Setelah pengambilan antigen dengan larutan pengambilan kembali target,
aktivitas peroksidase endogen terhambat oleh inkubasi 0,3% hidrogen peroksida, dan
bagian kemudian diblokir pada serum betina 10% janin. Pengikatan nonspesifik
diblokir oleh pra-inkubasi dengan serum betina 10% janin di PBS dengan 0,01%
natrium azida, dan kemudian selulipkan diinkubasi di ruang yang lembab selama 1
jam dengan antibodi terhadap galectin-1 (titer 1: 100, New Castle, Inggris) dan VEGF
(titer 1:50, Dako Cytomation, Denmark). Akhirnya, sampel diinkubasi dengan
streptavidin terkonjugasi peroksidase (Boster, Wuhan, China). Warna dikembangkan
dengan menginkubasi slide selama beberapa menit dengan diaminobenzidine, dan
nuklei dihitung dengan hematoxylin. Untuk kontrol negatif pengganti, antibodi
primer diganti dengan PBS. Kontrol positif diberikan oleh pemasok kit. Hasil
pewarnaan imunohistokimia ditafsirkan oleh dua ahli patologi berpengalaman, dan

3
kerapatan rata-rata pewarnaan dihitung dengan menggunakan perangkat lunak
ImagePro Plus 6.0 (ImagePro, Bethesda, MD).

Evaluasi pewarnaan imunohistokimia

Persentase skor jaringan kanker lambung imunoreaktif adalah sebagai berikut:
0, tidak ada pewarnaan dan kurang dari 10% sel tumor atau sel stroma dengan
pewarnaan membran; 1+, lebih dari 10% sel tumor atau sel stroma dengan pewarnaan
membran parsial samar pada membran parsial; 2+, lebih dari 10% sel tumor atau sel
stroma dengan pewarnaan membran parsial lemah sampai sedang pada membran
parsial; 3+, lebih dari 10% sel tumor atau sel stroma dengan pewarnaan membran
parsial yang kuat pada membran parsial. Spesimen dengan skor 0 atau 1+ dianggap
negatif, dan mereka dengan skor 2+ atau 3+ dianggap positif untuk ekspresi galectin-
1. Pewarnaan VEGF dianggap positif bila setidaknya 10% sel tumor ternoda, seperti
yang dijelaskan sebelumnya.

Analisis statistik
Semua analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak
SPSS, versi 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Koreksi antara ekspresi galectin-1
dan VEGF dan fitur klinisopatologis dianalisis dengan uji 2. Uji Kaplan-Meier
digunakan untuk mengevaluasi tingkat kelangsungan hidup, dan kurva tingkat
kelangsungan hidup dibandingkan dengan uji log-rank. Model hazard proporsional
Cox digunakan untuk mengidentifikasi faktor-faktor yang memiliki pengaruh
signifikan terhadap kelangsungan hidup. Signifikansi statistik ditetapkan pada P <0.
05.
Hasil
Ekspresi Galectin-1 dan VEGF pada jaringan kanker lambung
Ekspresi Galectin-1 positif pada 68 dari 108 sampel kanker lambung (63,0%)
dan negatif pada 40 sampel sisanya (37%), 42 sampel adalah 2+ (61,8%), dan 26
adalah 3+ (38,2%). Ekspresi VEGF positif pada 62 dari 108 sampel kanker lambung
(57,4%) dan negatif pada 46 sampel sisanya (42,6%), 16 sampel adalah 1+ (14,8%),
29 adalah 2+ (26,9%), dan 17 diantaranya 3+ (15,7%). Gambar 1 menunjukkan
pewarnaan galectin-1 dan VEGF pada jaringan kanker lambung.

Koreksi antara ekspresi galectin-1 dan VEGF dan fitur klinisopatologis

4
 Ada hubungan yang signifikan antara ekspresi galectin-1 dan VEGF; VEGF
terdeteksi pada 66,2% jaringan tumor galectin-1-positif dan pada 42,5% jaringan
tumor galectin-1-negatif (P = 0,016). Korelasi antara ekspresi galectin-1 dan VEGF
dan fitur klinisopatologis ditunjukkan pada Tabel 1 dan 2. Ekspresi Galectin-1
dikaitkan secara positif dengan ukuran tumor, lokasi tumor, stadium, dan metastasis
kelenjar getah bening (semua P <0,05), namun ternyata tidak berkorelasi dengan jenis
kelamin, usia, atau tingkat diferensiasi (semua P> 0,05). Ekspresi VEGF berkorelasi
positif dengan ukuran tumor, stadium, dan metastase kelenjar getah bening (semua P
<0,05), namun tidak berkorelasi dengan fitur klinisopatologis lainnya yang dinilai
(semua P> 0,05).

Koreksi antara ekspresi galectin-1 dan VEGF dan kelangsungan hidup pasien
Semua pasien menjalani follow-up sampai kematian terkait kanker atau lebih
dari 5 tahun setelah reseksi tumor. Tindak lanjut selesai pada 31 Agustus 2013.
Interval follow-up median adalah 50,6 bulan (kisaran, 0-60 bulan). Tingkat
kelangsungan hidup 5 tahun adalah 41,2% untuk pasien galectin-1-positif dan 55,0%
untuk pasien galectin-1- negatif, dan prognosis untuk pasien galectin-1 positif secara
signifikan lebih rendah daripada pasien galaksi-1-negatif P = 0,024, Gambar 2).
Tingkat ketahanan hidup 5 tahun untuk ekspresi VEGF positif dan negatif masing-
masing adalah 40,3 dan 56,5% (P = 0,033, Gambar 3). Sementara itu, pasien positif
VEGF memiliki waktu bertahan lebih pendek daripada pasien negatif VEGF. Tingkat
kelangsungan hidup juga dievaluasi sesuai dengan kombinasi ekspresi galectin-1 dan
ekspresi VEGF. Pasien yang positif untuk ekspresi galectin-1 dan VEGF memiliki
prognosis yang tidak menguntungkan, dan pasien yang negatif untuk ekspresi
galectin-1 dan VEGF memiliki prognosis yang lebih baik (P = 0,025, Gambar 4).

Analisis univariat dan multivariat

Analisis regresi univariat Cox juga menunjukkan bahwa variabel klinis,
termasuk ukuran tumor, stadium tumor, metastasis kelenjar getah bening, dan
ekspresi galectin-1 dan VEGF, secara bermakna terkait dengan kelangsungan hidup
keseluruhan (Tabel 3). Selanjutnya, analisis hazard proporsional Cox yang
proporsional terhadap faktor klinisopatologis yang tampak signifikan pada analisis

5
univariat menunjukkan ekspresi galectin-1 (rasio hazard (HR) 1,421; 95% CI 0,976-
2,883; P = 0,004) dan ekspresi VEGF (HR 1.132; 95% CI 0,894-2,768; P = 0,012)
sebagai indikator prognostik independen terhadap kelangsungan hidup yang buruk
untuk kanker lambung setelah operasi.

Diskusi
Meskipun kemajuan dalam diagnosis dan pengobatan kanker lambung,
kemajuan pada prognosis jangka panjang terbatas. Mengingat seringnya kegagalan
strategi pengobatan konvensional, banyak molekul terkait kanker telah ditandai
dengan tujuan mengembangkan terapi antikanker baru. Oleh karena itu, menemukan
penanda prognostik baru dan mengeksplorasi peluang terapeutik baru menjadi sangat
penting. Penelitian terbaru menunjukkan bahwa ekspresi galectin-1 mungkin
merupakan faktor prognostik pada kanker kolorektal dan payudara. Namun, ada
sedikit penelitian yang mengevaluasi korelasi antara ekspresi galectin-1 dan VEGF
pada kanker lambung, dan apakah ekspresi galectin-1 dan VEGF berkorelasi dengan
prognosis pasien kanker lambung. Dalam penelitian ini, kami memusatkan perhatian
pada kemungkinan nilai prognostik galectin-1 dan VEGF pada pasien kanker
lambung.
Galectin-1 dikodekan oleh gen LGALS1 yang terletak pada kromosom 22q12.
Status metilasi promoter adalah mekanisme kunci yang mengatur ekspresi galectin-1.
Beberapa faktor transkripsi terlibat dalam ekspresi galectin-1, seperti hypoxia
inducible factor-1 (HIF-1) pada sel kanker kolorektal. Selanjutnya, galectin-1
menekan respons imun sitotoksik yang dimediasi T-cell dan meningkatkan
angiogenesis tumor. Berbagai fungsi biologis galectin-1, termasuk dukungan dalam
invasi dan metastasis sel kanker, meningkatkan tumor angiogenesis. Frekuensi positif
tampaknya meningkat dengan stadium klinis penyakit dan dikaitkan dengan
prognosis yang lebih buruk. Ekspresi galectin-1 yang tinggi telah dilaporkan pada
kanker usus besar, payudara, dan prostat. Selain itu, galectin-1 diekspresikan secara
berlebihan di stroma yang mengelilingi sel tumor dan sel endotel terkait kanker.
Puchades et al. menunjukkan hubungan yang signifikan antara ekspresi galectin-1
yang tinggi pada sel kanker dan prognosis buruk pada pasien dengan glioblastoma

6
tingkat tinggi dibandingkan dengan pasien prognosis yang lebih baik. Temuan serupa
pada kanker usus besar, payudara, dan prostat memperkuat korelasi antara ekspresi
galectin-1 dan kelangsungan hidup.
VEGF adalah pengatur angiogenesis yang paling penting; Ini mempromosikan
rekrutmen dan proliferasi sel endotel dan prekursor mereka di dalam tumor dan
dengan demikian memainkan peran penting dalam angiogenesis selama
pengembangan tumor. Ekspresi VEGF tinggi dilaporkan terjadi pada beberapa
keganasan, dan ekspresi VEGF telah dikaitkan dengan prognosis buruk kanker
payudara dan kanker lambung. Ekspresi VEGF telah terbukti berkorelasi positif
dengan jumlah microvessel dan metastasis; Ini merangsang pertumbuhan sel endotel,
yang menyebabkan pembentukan pembuluh darah baru, dan memberikan nutrisi
penting untuk pertumbuhan tumor. Oleh karena itu, terapi antiangiogenesis berbasis
VEGF mungkin bermanfaat secara terapeutik terhadap kanker lambung.
Dalam penelitian ini, kami meneliti 108 kasus kanker lambung dengan adanya
onkoprotein galectin-1 oleh imunohistokimia. Dari semua kasus, 68 (63,0%)
menunjukkan ekspresi galectin-1 yang positif, dan ekspresi galectin-1 berhubungan
dengan ukuran tumor, kelas diferensiasi, stadium, dan metastasis kelenjar getah
bening, menunjukkan bahwa protein ini dapat berpartisipasi dalam pertumbuhan
tumor dan metastasis. Ekspresi VEGF terdeteksi di lebih dari separuh kanker
lambung (57,4%). Baik kejadian dan proporsi ekspresi VEGF meningkat dengan
perkembangan kanker lambung, dan berkorelasi dengan ukuran tumor, stadium, dan
metastase kelenjar getah bening. Dalam analisis kelangsungan hidup Kaplan-Meier,
tingkat kelangsungan hidup keseluruhan pasien dengan ekspresi galectin-1 dan VEGF
yang tinggi secara signifikan lebih pendek daripada pasien dengan ekspresi galectin-1
dan VEGF rendah. Analisis univariat menunjukkan bahwa ekspresi galectin-1 dan
VEGF yang meningkat pada jaringan kanker lambung dikaitkan secara signifikan
dengan tingkat kelangsungan hidup keseluruhan yang buruk. Selain itu, analisis
multivariat menunjukkan bahwa ekspresi galectin-1 dan VEGF, bersamaan dengan
beberapa faktor prognostik tradisional seperti ukuran tumor, status kelenjar getah
bening, dan stadium TNM, merupakan faktor risiko independen dalam prognosis
pasien kanker lambung.

7
 Sementara itu, penelitian ini menunjukkan bahwa ekspresi VEGF meningkat
pada tumor galectin-1-positif dibandingkan dengan tumor galectin-1-negative dan
ekspresi galectin-1 juga meningkat pada tumor positif VEGF dibandingkan dengan
tumor VEGF-negatif. Ekspresi Galectin-1 berhubungan positif dengan ekspresi
VEGF. Koopmans dkk. menunjukkan bahwa aktivasi galectin-1 menyebabkan
regulasi translasi VEGF dan peningkatan angiogenesis melalui jalur JAK / STAT pada
neoplasia myeloproliferative. Fischer dkk. Menunjukkan bahwa galectin-1
menghambat penataan ulang saat transfeksi (RET) dan sinyal Janus kinase 2 (JAK2)
dan sinyal reseptor faktor pertumbuhan endotel vaskular 3 (VEGFR3) yang signaling
pada sel tumor trofoblas. Hsieh dkk. menemukan bahwa galectin-1 diekspresikan
secara berlebihan di jaringan ikat di sekitar sel kanker pada sel endotel vaskular
tumorassociated. Galectin-1 dapat meningkatkan angiogenesis dengan berinteraksi
dengan neuropilin-1 pada permukaan sel endotel. Galectin-1 yang mengikat
neuropilin-1, yang bertindak sebagai co-reseptor VEGF pada sel endotel,
meningkatkan fosforilasi reseptor VEGF dan aktivasi protein kinase mitogen yang
diaktifkan. Hasil penelitian ini juga menunjukkan bahwa ekspresi berlebihan galectin-
1 dan VEGF berkorelasi secara signifikan dengan kelangsungan hidup pasien kanker
lambung yang buruk, terutama pasien dengan ekspresi positif galaksi-1-positif dan
VEGF. Oleh karena itu, galectin-1 dan VEGF memainkan peran yang sesuai dalam
tumor angiogenesis, progresi, metastasis, dan prognosis. Deteksi ekspresi galectin-1
dan VEGF yang tinggi dapat membantu memprediksi prognosis buruk dan dapat
digunakan sebagai penanda prognostik baru untuk pasien kanker lambung.
Kesimpulannya, dengan mengevaluasi ekspresi galectin-1 dan VEGF
menggunakan imunohistokimia, penelitian ini menunjukkan signifikansi prognostik
galectin-1 dan VEGF pada pasien kanker lambung. Dalam analisis univariat dan
multivariat, ekspresi tinggi galectin-1 dan VEGF diidentifikasi sebagai faktor
prognosis independen terhadap kelangsungan hidup keseluruhan yang lebih buruk.
Oleh karena itu, galectin-1 dan VEGF dapat digunakan sebagai target terapi
molekuler potensial pada kanker lambung.