LAPORAN KEMAJUAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

IDENTIFIKASI POTENSI SI SANTAN: FRAKSI N-HEKSAN BANDOTAN

(Ageratum conyzoides L.) SEBAGAI ANTIKANKER TERHADAP SEL
KANKER PAYUDARA MCF-7 SECARA IN VITRO DAN IN SILICO

BIDANG KEGIATAN:
PKM-P

Diusulkan oleh:
Windy Andriati Lubis 20130350083 Angkatan 2013
Nazariah Putri 20140350067 Angkatan 2014
Erfan Abdissalam 20150350062 Angkatan 2015
Mia Claudya 20150350033 Angkatan 2015
Nuariska Laila Ramadhani 20160350031 Angkatan 2016

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH YOGYAKARTA

YOGYAKARTA
2017
 ii

PENGESAHAN LAPORAN AKHIR PKM-P

 iii

DAFTAR ISI

LAPORAN KEMAJUAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA .......................... i

PENGESAHAN LAPORAN AKHIR PKM-P ....................................................................ii
DAFTAR ISI ...................................................................................................................... iii
DAFTAR TABEL................................................................................................................v
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................................... vii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang Masalah ..................................................................................... 1
1.2 Permasalahan ...................................................................................................... 2
1.3 Tujuan ................................................................................................................. 2
1.4 Luaran ................................................................................................................. 2
1.5 Kegunaan ............................................................................................................ 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................................ 3
A. Bandotan (Ageratum conyzoides L.) ....................................................................... 3
B. Kanker Payudara (Carsinoma Mammae)................................................................ 5
C. Ekstraksi dan Fraksinasi ......................................................................................... 7
D. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ............................................................................ 8
E. Uji Antioksidan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil)................................ 8
F. Uji Sitotoksik (MTT assay) .................................................................................... 9
G. Docking Molekuler ................................................................................................. 9
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................................... 11
3.1 Desain Penelitian .............................................................................................. 11
3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ............................................................................ 11
3.3 Alat dan Bahan.................................................................................................. 11
3.4 Prosedur Penelitian ........................................................................................... 11
3.5 Analisis Data ..................................................................................................... 13
BAB IV HASIL YANG DICAPAI DAN POTENSI KHUSUS ....................................... 15
4.1 Determinasi Tanaman ....................................................................................... 15
4.2 Ekstraksi dan Fraksinasi ................................................................................... 15
4.3 Docking Molekuler ........................................................................................... 15
4.4 Kromatografi Lapis Tipis.................................................................................. 16
 iv

4.5 Uji Antioksidan ................................................................................................. 16

4.6 Uji Sitotoksik .................................................................................................... 17
4.7 Uji Antibakteri .................................................................................................. 18
BAB V PENUTUP ........................................................................................................... 19
A. Kesimpulan ........................................................................................................... 19
B. Saran ..................................................................................................................... 19
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................................... 20
LAMPIRAN ..................................................................................................................... 23
 v

DAFTAR TABEL

Table 1. Score Docking Kaempferol dan Ageratochromene Dimer terhadap .......15

Table 2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi N-Heksan Bandotan .................16
Table 3. Persen Hidup sel MCF-7 dengan Perlakuan N-Heksan Bandotan ..........17
Table 4. Diameter Daerah Hambat FNB terhadap S.Aureus .................................18
Table 5. Indeks Keberhasilan ................................................................................18
 vi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Bandotan (Ageratum conyzoides L.) ............................................................... 3

Gambar 2. Profil Kromatografi Lapis Tipis FNB ........................................................... 16
Gambar 3. Grafik Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi N-Heksan Bandotan ...................... 17
Gambar 4. Grafik Hasil Uji Sitotoksik Fraksi N-Heksan Bandotan terhadap Sel Kanker
Payudara MCF-7 ........................................................................................... 17
 vii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Penggunaan Dana ....................................................................................... 23

Lampiran 2. Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis ............................................................ 25
Lampiran 3. Visualisasi docking ..................................................................................... 25
Lampiran 4. Dokumentasi Kegiatan ............................................................................... 27
Lampiran 5. Nota-nota Pembelian .................................................................................. 29
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Masalah

Seluruh kematian di dunia, 12 % diantaranya disebabkan oleh kanker
dan menjadi pembunuh nomor 2 setelah penyakit kardiovaskuler dan
diperkirakan akan bertambah tiap tahunnya (NCI, 2012). Dari data studi
pendahuluan yang dilakukan di Rumah Sakit Kanker Dharmais, Jakarta,
didapat data pada tahun 2013 ada 10 jenis kanker yang paling sering terjadi,
salah satunya yaitu kanker payudara dengan persentase angka kejadian 36,9%
dan merupakan kanker yang paling banyak terjadi dibandingkan dengan
kanker lainnya (Kemenkes RI, 2014). Obat antikanker merupakan obat khusus
dengan batas keamanannya begitu sempit. Antikanker bekerja tidak selektif
karena memiliki mekanisme kerja merusak DNA baik pada sel normal
maupun sel kanker (Dai, 2004) dan mungkin menimbulkan efek samping
seperti kerontokan rambut akibat kemoterapi, kehilangan memori akibat
radioterapi dan fruktur tulang akibat pembedahan sel kanker (NCI, 2012).
Hal tersebut yang menjadi alasan dilakukannya upaya penelusuran
antikanker yang berasal dari bahan alam khususnya tumbuh-tumbuhan
dengan harapan dapat menemukan antikanker yang efektif dan dapat
mengurangi efek samping yang berbahaya. Salah satu bahan alam yang
memungkinkan digunakan yaitu Bandotan (Ageratum conyzoides L.).
Bandotan merupakan tumbuhan gulma yang tumbuh dilingkungan sekitar,
bandotan memiliki kandungan flavonoid dan memiliki potensi sebagai
antioksidan dan antibakteri sehingga diharapkan bandotan dapat digunakan
sebagai antikanker payudara, untuk memastikan kandungan flavonoid pada
bandotan dilakukan uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis) dan pengujian dan
untuk memastikan aktivitas antioksidan pada bandotan dilakukan uji dengan
metode DPPH. Metode DPPH dipilih karena sederhana, mudah, cepat, peka,
serta hanya memerlukan sedikit sampel (Hanani et al., 2005). .
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis aktivitas sitotoksik dan
apoptosis bandotan terhadap sel kanker payudara MCF-7, MCF-7 merupakan
sel yang umum digunakan untuk menguji efek kanker payudara secara in
vitro karena bentuknya yang lebih baik dibandingkan dengan sel kanker
payudara lainnya pada manusia dan dilakukan uji molekuler dari kandungan
aktif fraksi n-heksan bandotan secara in silico terhadap protein target HER-2,
HER2 (human epidermal growth factor receptor 2) dipilih karena merupakan
satu jenis gen yang pada keadaan tertentu dan mempunyai peran besar dalam
pertumbuhan kanker payudara. Uji in silico dilakukan untuk mengetahui
interaksi antara protein target HER-2.
 2

1.2 Permasalahan
Berdasarkan latar belakang masalah diatas maka permasalahan yang akan
dibahas adalah sebagai berikut :

1. Berdasarkan uji KLT, apakah golongan senyawa flavonoid terkandung

dalam fraksi n-heksan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.) ?
2. Berdasarkan uji DPPH, bagaimanakah aktivitas antioksidan fraksi n-
heksan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.) ?
3. Berdasarkan uji MTT assay, apakah fraksi n-heksan herba bandotan
(Ageratum conyzoides L.) mempunyai efek sitotokik yang potensial
terhadap sel kanker payudara MCF-7 ?
4. Berdasarkan uji apoptosis, apakah fraksi n-heksan herba bandotan
(Ageratum conyzoides L.) mempunyai efek apoptosis terhadap kanker
payudara ?
5. Berdasarkan analisis docking molekuler, apakah senyawa kaempferol pada
herba bandotan (Ageratum conyzoides L.) memiliki afinitas yang tinggi
untuk menghambat protein HER-2 ?
1.3 Tujuan
Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk :
a. Mengidentifikasi senyawa yang terkandung dalam fraksi n-heksan
herba bandotan (Ageratum conyzoides L.).
b. Mengetahui efek antioksidan fraksi n-heksan herba bandotan
(Ageratum conyzoides L.).
c. Mengetahui aktivitas fraksi n-heksan herba bandotan (Ageratum
conyzoides L.) sebagai agen sitotoksik dan apoptosis terhadap sel
kanker payudara.
d. Mengetahui fraksi n-heksan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.)
memiliki efek apoptosis terhadap sel kanker payudara.
e. Mengetahui potensi senyawa kaempferol pada herba bandotan
(Ageratum conyzoides L.) sebagai agen kemopreventif dengan analisis
docking molekuler pada protein HER-2.
1.4 Luaran
Penulis berharap dari hasil penelitian ini dapat dipubliksaikan di jurnal
Nasional atau Internasional dalam hal pengobatan antikanker payudara dari
bahan alam yaitu herba bandotan (Ageratum conyzoides L.).
1.5 Kegunaan
Dalam penilitian ini diharapkan hasil penelitian dapat memberikan
kontribusi positif bagi perkembangan ilmu pengetahuan dalam bidang kesehatan
dan farmasi pada khususnya. Sebagai sumber informasi kepada masyarakat akan
pemanfaatan ekstrak herba bandotan (Ageratum conyzoides L.) sebagai agen
kemopreventif kanker payudara.
 3

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Bandotan (Ageratum conyzoides L.)

Berdasarkan Natural Resources Conservative Service (Kartesz, 2012)
herba bandotan diklasifikasikan sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Superdivisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Subkelas : Asteridae
Orde : Asterales
Family : Asteraceae
Genus : Ageratum Linn
Spesies : Ageratum conyzoides Linn
Ageratum conyzoides L. di Sumatera dikenal dengan nama daun tombak,
rumput tahi ayam dan siangit sedangkan di Jawa dikenal dengan nama
babandotan, bandotan, dus wedusan, tempuyak dan berokan, untuk masyarakat
Sulawesi mengenal tumbuhan ini dengan nama dawet, lawet, rukut manoe dan
sopi (Dalimartha, 2006).
Bandotan merupakan sejenis tanaman pengganggu yang banyak
ditemukan di pinggir jalan, hutan, ladang dan tanah terbuka. Tanaman ini berasal
dari Asia Tenggara, Amerika Tengah, Amerika Selatan, Karibia, Florida, China
Selatan dan Australia. Tanaman ini dikenal dengan sebagai tanaman hias dari
Amerika dan banyak ditemukan di Pasifik Selatan serta negara beriklim hangat
lainnya (Prasad, 2011). Di Indonesia, bandotan merupakan tanaman liar dan lebih
dikenal sebagai tumbuhan pengganggu (gulma) di kebun dan ladang (Retno,
2009).

Gambar 1. Bandotan (Ageratum conyzoides L.)

 4

Bandotan memiliki ketinggian mencapai 1 meter dengan ciri daun yang

mempunyai bulu berwarna putih halus. Bunga berukuran kecil, berwarna putih
keunguan pucat, berbentuk seperti bunga matahari dengan diameter 5-8 mm.
Batang dan daun ditutup oleh bulu halus berwarna putih dan daunnya mencapai
panjang 7.5 cm. Buahnya mudah tersebar sedangkan bijinya ringan dan mudah
terhembus angin (Prasad, 2011).
Bandotan telah digunakan di Afrika sebagai tanaman obat untuk berbagai
macam penyakit. Daun bandotan biasanya digunakan untuk pengobatan luka,
selain itu juga sebagai antiinflamasi, analgesik dan antipiretik (Adebayo et al,
2010). Kandungan fitokimia pada tanaman bandotan menunjukkan adanya
senyawa sebagai berikut : steroid, terpenoid, fenol, saponin, asam lemak dan
alkaloid (Kamboj dan Saluja, 2010). Dalam studi fitokimia lain yang dilakukan
oleh Dash dan Murthy (2011), ekstrak bandotan menunjukkan beberapa
kandungan antara lain steroid, sterol, triterpenoid, alkaloid, flavonoid, saponin,
tanin, fenolik, karbohidrat dan protein.
1. Flavonoid
Flavonoid termasuk senyawa fenol terbesar yang ditemukan di
alam. Senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru serta
sebagian warna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan.
Flavonoid mempunyai kerangka dasar karbon yang terdiri dari 15 atom
karbon, 2 cincin benzene (C6) terikat pada suatu rantai propan (C3)
sehingga membentuk susunan C6-C3-C6 (Okunade, 2002).
2. Tanin
Tanin disebut sebagai polifenol tanaman, yang mempunyai peran
dalam pengikatan protein, pembentukan pigmen sebagai ion metal dan
mempunyai susunan molekul yang besar serta sebagai aktivitas
antioksidan. Tanin memiliki rumus molekul C75H52O46, ada yang tidak
berwarna tetapi ada juga yang berwarna kuning atau cokelat (Okuda dan
Ito, 2011). Dua kelas besar tanin dikenal berdasarkan reaksi hidrolitik
dan asal fenoliknya. Kelas pertama disebut sebagai tanin hydrolysable
dan yang lain disebut tanin terkondensasi. Disebut sebagai tanin
hydrolysable karena mudah larut dalam asam mineral atau enzim seperti
tannase, strukturnya berupa asam galat, hexahydrodiphenic atau allagic
acid. Sedangkan tanin terkondensasi tidak dapat larut dalam asam
mineral dan enzim sehingga disebut juga tannin nonhydrolisable
(Rangari, 2007).
3. Saponin
Saponin merupakan glikosida dengan berat molekul yang tinggi,
dikarakteristikkan strukturnya mengandung steroid dengan satu atau lebih
rantai gula. Saponin menunjukkan spektrum luas dalam aktivitas biologis
 5

dan digunakan dalam obat-obatan herbal (Laufer, 2005). Beberapa

saponin menunjukkan antibakteri, antifungal dan dapat meningkatkan
sistem imun (Kerem, Shashoa et al, 2005).
4. Triterpenoid
Lebih dari 4000 jenis triterpenoid telah diisolasi dengan lebih dari
40 jenis kerangka dasar yang sudah dikenal dan pada prinsipnya
merupakan siklisasi dari skualen. Triterpenoid terdiri dari kerangka
dengan 3 dan 6 siklik yang bergabung dengan siklik 5 atau berupa 4 siklik
dan 6 siklik yang mempunyai gugus fungsi pada siklik tertentu (Lenny,
2006).

B. Kanker Payudara (Carsinoma Mammae)

Kanker atau neoplasma adalah penyakit pertumbuhan sel yang terjadi
karena dalam tubuh timbul dan berkembang baik sel-sel baru yang bentuk, sifat
dan kinetikanya berbeda dari sel normal asalnya. Sel yang baru pertumbuhannya
terlepas dari sistem kendali pertumbuhan normal sehingga merusak bentuk dan
atau fungsi organ yang terkena. Kata neoplasma berasal dari bahasa Yunani neos
yang berarti baru dan plasein yang berarti bentukan, yaitu berupa bentukan baru
berupa sel baru yang berbeda dari sel asalnya. Sel neoplasma itu terjadi karena
ada mutasi atau transformasi sel normal akibat adanya kerusakan gen yang
mengatur pertumbuhan dan diferensiasi sel (Sukardja, 2000).
Dari percobaan pada binatang diketahui bahwa terjadinya neoplasma
melalui 3 tahap transformasi sel yaitu tahap inisiasi, tahap promosi dan tahap
progresi :
1. Tahap Inisiasi
Pada tahap inisiasi sel normal berubah menjadi sel yang
mempunya potensi untuk menjadi sel neoplastik. Pada tahap ini
karsinogen yang bekerja sebagai inisiator, cenderung berubah baik
langsung maupun melalui perubahan metabolik menjadi gugus yang
bereaksi dengan DNA, mengakibatkan DNA pecah, mengalami metilasi
atau hambatan perbaikan kerusakan DNA (Pringgoutomo et al, 2002).
2. Tahap Promosi
Bahan kimia yang merangsang transformasi neoplastik pada sel
yang telah diinisiasi tetapi tidak menyebabkan transformasi neoplastik
oleh dirinya sendiri disebut promotor. Promotor bekerja mengubah
ekspresi informasi genetik sel. Promotor merangsang proliferasi klonal
pada sel yang telah diinisiasi dan mengubah cara diferensiasi dan maturasi
(Pringgoutomo et al, 2002).
3. Tahap Progresi
Pada tahap progresi, gen pertumbuhan yang telah diaktivasi oleh
kerusakan DNA akan mengalami percepatan mitosis dan pertumbuhan
(Tjay dan Rahardja, 2002).
 6

Kanker payudara adalah keganasan yang bermula dari sel-sel payudara.

Kanker ini menyerang jaringan payudara, tumbuh di dalam kelenjar mammae,
saluran mammae dan jaringan lemak. Terjadi karena ada pertumbuhan tidak
normal sel pada kelenjar payudara. Namun, pertumbuhan kanker payudara jauh
lebih lambat dibandingkan dengan jenis kanker lainnya. Sistem getah bening
adalah salah satu cara utama kanker payudara menyebar. Sel-sel kanker payudara
dapat memasuki pembuluh limfe dan mulai tumbuh di kelenjar getah bening. Jika
sel-sel kanker payudara telah mencapai pembuluh getah bening di ketiak (node
axilaris), tandanya adalah pembengkakan kelenjar getah bening di ketiak. Bila
ini terjadi, kemungkinan besar sel-sel kanker telah masuk ke aliran darah dan
menyebar ke organ tubuh lainnya (Soebachman, 2011)
1. Faktor Etiologi Kanker Payudara
Kanker payudara terjadi akibat adanya mutasi tertentu pada DNA
sel payudara. Sebagian mutasi gen bersifat diwariskan (genetic).
Sementara lainnya terjadi tanpa diketahui penyebab pastinya
(Soebachman, 2011).
2. Faktor Resiko Kanker Payudara
Penyebab kanker payudara belum diketahui secara pasti. Namun,
ada beberapa faktor risiko yang dapat meningkatkan kemungkinan
terjadinya kanker payudara, beberapa diantaranya sebagai berikut :
a. Riwayat keluarga
Beberapa riwayat keluarga yang dianjurkan untuk melakukan
pemeriksaan dini yaitu ibu atau saudara perempuan terkena kanker
payudara atau kanker lainnya.
b. Riwayat hormon
Faktor hormon merupakan faktor yang banyak berpengaruh pada
timbulnya kanker payudara, seperti mendapat menstruasi pertama
sebelum umur 10 tahun, menopause setelah umur 55 tahun, tidak
menikah atau tidak melahirkan anak, melahirkan anak pertama setelah
umur 35 tahun dan tidak pernah menyusui anak.
c. Faktor rmur
Wanita berusia 30 tahun mempunyai kemungkinan lebih besar terkena
kanker payudara.
d. Pernah mengalami infeksi, trauma atau benturan, operasi payudara
akibat tumor jinak (kelainan fibrokistik dan fibroadenoma).
e. Pernah menggunakan obat hormonal yang lama, seperti hormonal
replacement therapy (HRT) dan pengobatan kemandulan (infertilitas).
f. Pemakaian kontrasepsi oral pada penderita tumor payudara jinak.
g. Pernah mendapat radiasi sebelumnya pada payudara atau dinding dada,
misalnya untuk pengobatan keloid.
h. Peningkatan berat badan yang signifikan pada usia dewasa.
 7

3. Gejala Penyakit Kanker Payudara

Kanker payudara pada tahap dini biasanya tidak menimbulkan
keluhan. Penderita merasa sehat, tidak merasa nyeri dan tidak terganggu
aktivitasnya. Tanda yang mungkin dirasakan yaitu teraba benjolan pada
payudara, bentuk dan ukuran payudara berubah berbeda dari sebelumnya,
luka pada payudara sudah lama tidak sembuh walaupun diobati.

C. Ekstraksi dan Fraksinasi

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat
aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang
sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau
serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah
ditetapkan (Depkes RI, 1995).
Ekstrak cair adalah sediaan cair simplisia nabati yang mengandung etanol
sebagai pelarut atau sebagai pengawet atau sebagai pelarut dan pengawet. Ekstrak
cair yang cenderung membentuk endapan dapat didiamkan dan disaring atau
bagian yang bening diendaptuangkan. Beningan yang diperoleh memenuhi
persyaratan Farmakope (Depkes RI, 1995). Proses pembuatan ekstrak terdiri dari
beberapa tahap yaitu pembuatan serbuk simplisia dan klasifikasinya, cairan
pelarut, separasi dan pemurnian, pemekatan atau penguapan dan pengeringan
ekstrak (Depkes RI, 2000).
Fraksinasi merupakan proses pemisahan antara zat cair dengan zat cair.
Fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasarkan tingkat kepolarannya yaitu
dari non polar, semi polar, dan polar. Senyawa yang memiliki sifat non polar akan
larut dalam pelarut non polar, yang semi polar akan larut dalam pelarut semi
polar, dan yang bersifat polar akan larut kedalam pelarut polar (Harborne, 1987).
Fraksinasi ini umumnya dilakukan dengan menggunakan metode corong pisah
atau kromatografi kolom. Kromatografi kolom merupakan salah satu metode
pemurnian senyawa dengan menggunakan kolom. Corong pisah merupakan
peralatan laboratorium yang digunakan untuk memisahkan komponen-komponen
dalam campuran antara dua fase pelarut yang memiliki massa jenis berbeda yang
tidak tercampur. Ekstrak yang telah dilarutkan dalam aquades, nantinya akan
dimasukkan ke dalam corong pisah dan dicampur dengan pelarut berdasarkan
tingkat kepolarannya. Setelah itu corong pisah dikocok. Setelah dikocok, akan
terbentuk 2 lapisan. Pelarut yang memiliki massa jenis lebih tinggi akan berada di
lapisan bawah dan yang memiliki massa jenis lebih kecil akan berada di lapisan
atas. Senyawa yang terkandung dalam ekstrak nantinya akan terpisah sesuai
dengan tingkat kepolaran pelarut yang digunakan. Senyawa akan tertarik oleh
pelarut yang tingkat kepolarannya sama dengan senyawa tersebut.
 8

D. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) adalah metode pemisahan fisikokimia,
pada prinsipnya KLT melibatkan 2 fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam
berfungsi sebagai penyerap dan yang paling sering digunakan ialah silika gel,
alumunium oksida dan selulosa, silika gel menghasilkan perbedaan dalam efek
pemisahan dan bersifat sedikit asam sehingga baik digunakan untuk pemisahan
asam sebaliknya alumunium oksida bersifat basa sehingga sering digunakan untuk
pemisahan basa. Fase gerak adalah medium angkut dan terdiri dari 1 atau
beberapa pelarut yang bergerak pada fase diam (Sastroamidjojo, 2002). Perkiraan
identifikasi hasil diperoleh dengan pengamatan nilai Rf dari bercak. Rf adalah
perbandingan jarak perambatan suatu zat dengan jarak perambatan fase bergerak
dihitung dari titik penotolan larutan zat.

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑡𝑖𝑡𝑖𝑘 𝑝𝑢𝑠𝑎𝑡 𝑏𝑒𝑟𝑐𝑎𝑘 𝑑𝑎𝑟𝑖 𝑡𝑖𝑡𝑖𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙

𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑔𝑎𝑟𝑖𝑠 𝑑𝑒𝑝𝑎𝑛 𝑑𝑎𝑟𝑖 𝑡𝑖𝑡𝑖𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙

Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi noda dalam KLT sehingga dapat

mempengaruhi nilai Rf menurut Depkes RI (1979) adalah :
1. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan.
2. Sifat dari penyerap dan derajat aktivitasnya.
3. Tebal dari lapisan penyerap
4. Pelarut dan derajat kemurnian fase gerak
5. Derajat kejenuhan dari uap dalam bejana yang digunakan
6. Teknik percobaan
7. Jumlah cuplikan yang digunakan
8. Suhu
9. Kesetimbangan
Kelebihan KLT yaitu tidak membutuhkan biaya besar dalam
pengerjaannya, menggunakan waktu yang singkat untuk menyelesaikan analisis
dan membutuhkan jumlah totolan yang sangat sedikit. KLT dapat digunakan
untuk memisahkan senyawa seperti ion-ion organik, senyawa organik dan
nonorganik yang bersifat kompleks baik yang terdapat di alam maupun yang
disintesis (Stahl, 1985).

E. Uji Antioksidan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil)

Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menunda, memperlambat dan
mencegah proses reaksi oksidasi radikal bebas. Terdapat dua kategori antioksidan
yaitu antioksidan alami dan antioksidan sintetik. Antioksidan alami dapat berupa
senyawa fenolik (tokoferol dan flavonoid), senyawa nitrogen (alkaloid, turunan
klorofil, asam amino dan amina) atau karotenoid seperti asam askorbat (Apak et
al, 2007).
 9

Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat dan sensitif untuk
pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu atau ekstrak tanaman (Koleva,
2002). Karena adanya elektron yang tidak berpasangan, DPPH memberikan
serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm. Ketika elektronnya menjadi
berpasangan oleh keberadaan penangkap radikal bebas, maka absorbansinya
menurun sesuai stokiometri sesuai jumlah elektron yang diambil. Keberadaan
senyawa antioksidan dapat mengubah warna larutan DPPH dari ungu menjadi
kuning (Dehpour et al, 2009). Untuk penentuan nilai IC50 suatu sampel untuk
mengoptimasi metode yang digunakan. Optimasi metode berupa penentuan OT
(Operating Time) dan panjang maksimum. Tingkat kekuatan antioksidan senyawa
uji menggunakan metode DPPH dapat digolongkan menurut nilai IC50 (Armala,
2009).

F. Uji Sitotoksik (MTT assay)

Uji sitotoksik adalah uji secara in vitro menggunakan kultur sel yang
digunakan dalam evaluasi keamanan obat, kosmetik, zat tambahan makanan,
peptisida dan digunakan untuk mendeteksi adanya aktivitas antineoplastik dari
suatu senyawa (Freshney, 1992). Uji sitotoksik dapat menggunakan parameter
IC50, dimana nilai IC50 menunjukan nilai konsentrasi yang menghasilkan
hambatan pertumbuhan sel sebesar 50% dari populasi. Nilai IC50 dapat
menunjukkan potensi suatu senyawa sebagai sitotoksik, semakin besar nilai IC50
maka senyawa tersebut semakin tidak toksik (Heti, 2008).
MTT assay adalah teknik yang sering dipakai pada umumnya, teknik ini
menggunakan garam tetrazolium atau MTT [3-(4,5-dimetil tiazol-2-il)-2,5-difenil
tetrazolium bromida] yang berwarna kuning dimana akan dimetabolisme oleh
enzim suksinat dehydrogenase yang terdapat pada mitokondria sel menjadi kristal
formazan berwarna ungu (Freshney, 1992). MTT dilarukan dalam Phosphate
Buffer Saline (PBS), intensitas warna yang terbentuk berbanding langsung dengan
jumlah sel yang aktif melakukan metabolisme (Zakaria, 2010).

G. Docking Molekuler
Docking molekuler adalah metode komputasi yang bertujuan untuk meniru
peristiwa interaksi ligan dan protein target (Motiejunas dan Wade, 2006). Di
dalam penambatan molekul, molekul ligan ditambatkan pada situs aktif atau situs
tambat dari suatu protein yang sedang diam (statik), dengan menyertakan molekul
ko-faktor dan H2O di dalamnya atau tidak. Dari sini, diperoleh data mengenai
posisi dan orientasi ligan-ligan itu di dalam situs aktif atau situs tambat tersebut.
Dari data ini, dapat disimpulkan gugus-gugus fungsional ligan yang penting untuk
interaksinya, sehingga tidak boleh dihilangkan dan gugus-gugus fungsionalnya
yang dapat ditingkatkan kekuatan interaksinya. Informasi ini menjadi petunjuk
untuk modifikasi ligan tersebut. Dengan adanya petunjuk tersebut, modifikasi
ligan dan uji In Vitro turunan-turunannya dapat berlangsung secara efisien.
 10

Interaksi ligan dengan protein di atas terjadi hanya apabila terdapat kecocokan
(fit) bentuk dan volume di antara molekul ligan dan situs aktif atau situs tambat
protein tersebut (Motiejunas dan Wade, 2006). Selain itu, gugus-gugus fungsional
pada molekul ligan itu harus berada pada posisi yang memadai dari asam-asam
amino yang menjadi pasangannya pada situs aktif atau situs tambat tersebut
(Schneider dan Baringhaus, 2008). kecocokan di antara molekul ligan dan situs
aktif atau situs tambat proteinnya adalah demikian spesifik, bagaikan kecocokan
lubang kunci dengan anak kuncinya (lock-and-key) (Motiejunas dan Wade, 2006).
Untuk menuju kecocokan ini, situs aktif atau situs tambat mendesak
(menginduksi) pengubahan konformasi ligan (Foloppe dan Chen, 2009;
Motiejunas dan Wade, 2006). Pada saat kecocokan tercapai, maka konformasi
yang dianut oleh molekul ligan dinamakan konformasi bioaktif (Schneider dan
Baringhaus, 2008). Untuk rangkaian posisi gugus fungsional yang penting dari
ligan pada konformasi bioaktif itu dinamakan farmakofor (Alvarez dan Shoichet,
2005).
 11

BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Pada penelitian ini digunakan desain penelitian eksperimental laboratoris.

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di laboratorium Teknologi Farmasi dan Penelitian
Fakultas FKIK Universitas Muhammadiyah Yogyakarta.

3.3 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat gelas, timbangan,
alumunium foil, tabung konikal 15 ml steril, mikropipet, blue tip, eppendorf,
autoklaf, vorteks, shaker, inkubator CO2, Laminar Air Flow Hood, Oven,
Spektrofotometer UV-Vis, laptop windows 7, silika gel, mikroskop.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah herba Bandotan,
Vitamin C, N-Heksan, Metanol, DPPH, Aquadest, kloroform dan Etanol 70%.

3.4 Prosedur Penelitian

Identifikasi dengan KLT
Sampel yang telah di maserasi sebelumnya dengan larutan etanol 70%
kemudian difraksinasi dengan n-heksan lalu dikentalkan menggunakan evaporator
dan setelah mendapatkan sampel, dilakukan uji yaitu fraksi n-heksan bandotan
ditotolkan dengan bantuan pipa kapiler pada pelat silica gel 60 F254 sebagai fase
diam, kemudian dimasukkan ke dalam gelas piala berisi fase gerak. Fase gerak
yang digunakan adalah kloroform, yang kemudian dilihat hasilnya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis.
Docking Molecular
Uji docking dimulai dengan preparasi protein HER-2 yang berikatan
dengan native ligand. Optimasi struktur senyawa uji dilakukan dengan program
Marvin Sketch. Pada tahap validasi metode docking molekuler, native ligand di-
docking-kan kembali pada protein yang telah dihilangkan native ligand-nya. Hasil
analisis menunjukkan nilai RMSD Heavy Atoms senyawa hasil docking
dibandingkan dengan referensi. Docking senyawa uji kaempferol pada protein
yang sudah dihilangkan native ligand-nya menggunakan program Autodock 4.2.
Uji Antioksidan Metode DPPH
Parameter yang digunakan untuk menghitung aktivitas antioksidan adalah
IC50. Semakin kecil konsentrasi IC50, maka semakin besar aktivitas
antoksidannya. Aktivitas antioksidan dari fraksi n-heksan bandotan diuji
menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-dipikrilhidrazil).
 12

Larutan DDPH 0,4 mM dipersiapkan dengan cara melarutkan DPPH

dalam metanol. Fraksi n-heksan bandotan sebanyak 20 mg ditambah 20 ml
methanol yang dibuat seri konsentrasi 100, 200, 300, 400 dan 500 μg/ml, lalu 1 ml
larutan DPPH ditambahkan untuk selanjutnya disebut larutan sampel. Komposisi
blanko seperti larutan sampel tetapi tanpa penambahan DPPH, sedangkan larutan
kontrol terdiri dari, 1 ml DPPH, dan 5 ml metanol. Setelah penambahan larutan
DPPH, masing-masing larutan baik sampel maupun kontrol dihomogenkan
menggunakan vortex. Blanko, kontrol, maupun sampel diinkubasi selama 30
menit di ruang gelap, kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang
517 nm (Mokbel dan Hashinaga, 2005).
Pengamatan Apoptosis
Sel MCF-7 diresuspensikan dalam media RPMI sehingga diperoleh 5x105
sel/ml yang ditambahkan 10% Fetal Bovin Serum (FBS), 25 mM HEPES, 100
unit/ml penisilin, 100μg/ml dan 50 μg/ml gentamisin dan kemudian diinkubasi
pada suhu 37oC dalam inkubator CO2 selama 24 jam. Fraksi n-heksan bandotan
dilarutkan dalam DMSO dan dibuat dengan konsentrasi :
0,05;0,1;0,25;0,5;1;2,5;5;10;25;50;100;250 μg/ml kemudian ditambahkan ke
dalam biakan kultur sel MCF-7 dan diinkubasi selama 24 jam. Efek induksi
apoptosis digunakan sel kanker hasil perlakuan dan kemudian sel ditambah RPMI
1640 disentrifugasi pada suhu 4oC, 800 rpm selama 5 menit. Medium tersebut
kemudian dibuang, sebagian sel selanjutnya dipindahkkan ke dalam gelas objek
dan kemudian ditambah dengan metanol 4% dalam PBS pH 7,4 dan dibiarkan
selama 25 menit pada suhu 4oC. Campuran ini kemudian dicuci dan ditambahkan
pereaksi etidium bromide–akridin orange ( 1:1) , dan biarkan selama 1 menit
dalam suhu kamar dan ditutup dengan gelas penutup . Selanjutnya yang terwarnai
diamati pada mikroskop flouresens . Sel yang mengalami apoptosis akan terlihat
berwarna orange flouresens hal ini disebabkan adanya ikatan antara etidium-
bromida dengan DNA terfragmentasi dari sel kanker yang mengalami apoptosis ,
sedangkan untuk sel yang hidup akan menunjukkan warna hijau. Jumlah sel yang
mengalami apoptosis dihitung untuk tiap lapang pandang dengan jumlah minimal
100 sel (Spector, 1998). Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan
analisis varian (anava) satu arah (α=0,05) dimana hasil uji bermakna jika
diperoleh harga p ≤ 0,05 dan jika terdapat perbedaan yang nyata dilanjutkan
dengan uji Least Significant Difference (LSD). Nilai IC50 apoptosis ditentukan
dengan menggunakan persen probit.
Uji Sitotoksisitas (MTT assay)
Sel MCF-7 ditanam pada microplate 96 sumuran sehingga diperoleh
kepadatan 5x103 sel/sumuran dan diinkubasi selama 48 jam untuk mendapatkan
pertumbuhan yang baik. Setelah itu medium diganti dengan
 13

yang baru dengan co-solvent DMSO dan diinkubasi pada 37oC dalam inkubator
CO2 5% selama 48 jam. Pada akhir inkubasi, media dan ekstrak dibuang
kemuadian sel dicuci dengan PBS. Pada masing-masing sumuran, ditambahkan
100 µL media kultur dan 10 µL MTT 5 mg/mL. Sel diinkubasi kembali selama 4-
6 jam dalam ink ubator CO2 5% 37oC. Reaksi MTT dihentikan dengan HCL 4N-
isopropanol (1:100), digoyang diatas shaker selama 10 menit. Serapan dibaca
dengan ELISA reader (Bencmark Bio Rad) pada panjang gelombang 595 nm.
Uji Antibakteri
Pembuatan media Mc. Konkey untuk bakteri Streptococcus Aureus, lalu
pembuatan kertas cakram dengan diameter 6 mm dibuat dari kertas saring
Whatman, seluruh alat dan kertas cakram di autoklaf pada suhu 121˚C selama 15
menit, lalu dilakukan suspense bakteri dengan mengembangkan bakteri pada
media NaCl 0.9% sebanyak 1 ml lalu diinkubasi selama 2 jam, selanjutnya ambil
bakteri yang sudah dikembangkan ditambahkan pada media BHI sebanyak 9 ml.
Uji bakteri dilakukan dengan mengoles dengan ose bakteri pada media Mc.
Konkey lalu kertas cakram yang sudah direndam pada FNB dengan konsentrasi
100%, 75%, 50% dan 25% serta kontrol positif berupa Ciprofloksasin Inj.
Diletakkan pada media lalu diinkubasi selama 24 jam yang selanjutnya diamati
diameter hambatnya.

3.5 Analisis Data

Analisis Identifikasi Senyawa dengan KLT
Fraksi n-heksan bandotan (Ageratum conyzoidez L.) diuji dengan KLT.
Perubahan warna pada spot dilihat pada sinar tampak (visible), UV254 nm dan
UV366 nm serta diukur nilai Rf pada plat.
Analisis Antioksidan dengan DPPH
Aktivitas antioksidan sampel ditentukan oleh besarnya hambatan serapan
radikal DPPH. Data yang didapat dari hasil pembacaan spektrofotometer UV
berupa absorbansi (OD) masing-masing larutan uji dihitung nilai IC50 berdasarkan
presentase inhibisi, DPPH dengan rumus:
Absorbansi Kontrol Negatif−Absorbansi Sampel
% inhibisi= x 100%
Absorbansi Kontrol Negatif
Analisis Uji Sitotoksik
Analisis data pada uji sitotoksisitas aplikasi tunggal, dimana data yang
didapat dari ELISA reader berupa hasil absorbansi masing-masing sumuran
dikonservasi ke dalam persen sel hidup dan dianalisis dengan statistik, yang
dihitung menggunakan rumus:

Absorbansi sel dengan perlakuan−Absorbansi kontrol media

% Hidup= x 100%
Absorbansi kontrol media sel−Absorbansi kontrol media
 14

Analisis Uji Apoptosis

Data apoptosis berupa data kualitatif yang diperoleh dari hasil
pengamatan morfologi sel menggunakan mikroskop flouresens. Sel yang hidup
akan berflouresen hijau dengan acridine orange dan sel yang mati akan
berflouresens orange dengan ethidium-bromide. Perhitungan sel yang mengalami
apoptosis dihitung dengan rumus:
Jumlah sel apoptosis x 100%
% Apoptosis = ⅀Total Sel
Analisis Docking Molekuler
Dilakukan analisis data nilai scoring dan pose. Molekul dengan nilai score
terendah menunjukkan afinitas kestabilan yang baik, setelah itu visualisasi
interaksi dengan menggunakan program DS Visualizer.

Analisis Uji Antibakteri

Analisis uji antibakteri dengan mengamati dan diukur lebar daerah hambar
dari zona yang terbentuk menggunakan penggaris, sehingga diketahui lebar
daerah hambat dari FNB.
 15

BAB IV
HASIL YANG DICAPAI DAN POTENSI KHUSUS

4.1 Determinasi Tanaman

Herba Bandotan (Ageratum conyzoides L.) yang digunakan dalam
penelitian ini berasal dari daerah Bantul, Yogyakarta. Determinasi dilakukan
di bagian Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Gajah Mada,
Yogyakarta. Hasil determinasi menunjukkan bahwa sampel yang diujikan
merupakan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.).

4.2 Ekstraksi dan Fraksinasi

Dari 1,2 kg herba bandotan dimaserasi dan remaserasi menghasilkan
ekstrak cair sebanyak 8,82 L. Kemudian ekstrak difraksinasi menggunakan
pelarut n-heksan. Dari 1,5 L ekstrak bandotan dan 1,5 L n-heksan
menghasilkan 1,5 L Fraksi N-heksan Bandotan (FNB). Kemudian di evaporasi
dengan rotary evaporator dan didapatkan 1,776 gram FNB.

4.3 Docking Molekuler

Nilai RMSD dan score docking terbaik dari setiap ligand terhadap protein
HER-2 dan NF-kB ditunjukkan oleh tabel 1.

Table 1. Score Docking Kaempferol dan Ageratochromene Dimer terhadap

Protein Target HER-2 dan NF-kB
No Protein Nama Senyawa Nilai RMSD Skor Konformasi
. (<2.00 Å) docking Asam Amino
1 HER-2 Kaempferol 1.896 Å -6.8 Konformasi ke-2
(Kode Ageratochromen 1.818 Å -6.2 Konformasi ke-8
Protein: Dimer
3PP0) Doxorubicin 1.572 Å -6.9 Konformasi ke-2
2 NF-Kb Ageratochromen 1.986 Å -8.5 Konformasi ke-2
(Kode Dimer
Protein: Doxorubicin 1.850 Å -7.1 Konformasi ke-2
1TUP)

Uji in silico juga digunakan untuk mengidentifikasi senyawa aktif (ligand)

yang berpotensi menghambat aktivitas protein tertentu, mengetahui struktur tiga
dimensi ligan-reseptor serta interaksi antara protein dan ligan yang diujikan secara
komputasi. Kekuatan ikatan antara ligand (senyawa uji) dan protein dapat dilihat
dari nilai score docking yang menujukkan energy afinitas ikatan, semakin kecil
nilai score docking, maka semakin baik ikatan senyawa uji dan protein. Pada
analisis docking molekuler, senyawa kaempferol dan ageratochromene dimer
memiliki ikatan yang lebih lemah dibandingkan doxorubicin terhadap protein
 16

target HER-2, sedangkan pada protein target NF-kB senyawa ageratochromene

dimer memiliki ikatan yang kuat dibandingkan doxorubicin.

4.4 Kromatografi Lapis Tipis

Fase diam yang digunakan adalah silica gel GF254 sedangkan fase
geraknya adalah kloroform. Dibuat larutan stok sampel 25 mg/ml yang dilarutkan
dalam n-heksan, deteksi menggunakan UV 254 dan UV 366 menghasilkan bercak
pada sampel FNB. Tabel 2 menunjukkan nilai Rf dan warna plot pada pengamatan
KLT.
Sebelum diuapi amoniak Sesudah diuapi
amoniak

Sinar UV UV Sinar UV UV
tampak 254 366 tampak 254 366
Gambar 2. Profil Kromatografi Lapis Tipis FNB
Senyawa flavonoid akan berpendar pada UV 254 dengan warna kuning
atau ungu, beberapa senyawa flavonoid akan berpendar biru, sedangkan pada UV
366 fluoresensinya tergantung jenis semprot yang digunakan. Berdasarkan profil
kromatografi lapis tipis, senyawa flavonoid terdapat pada bercak nomor 4 dan 5
dengan warna pendaran ungu muda berupa flavonoid glikosida seperti quersetin
glikosida.

4.5 Uji Antioksidan

Pada uji antioksidan diperoleh nilai absorbansi yang kemudian digunakan
untuk menghitung % inhibisi. Nilai % inhibisi yang diperoleh digunakan untuk
menentukan IC50. Nilai IC50 aktivitas antioksidan FNB ditunjukkan pada tabel 3.

Table 2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi N-Heksan Bandotan

Konsentrasi Rata-rata % Inhibisi ± SD Persamaan
(μg/ml) Absorbansi
 17

100 0.304567 26.07605178 ± 0.00135 y = 0.0403x + 22.023

200 0.2894 29.75728155 ± 0.001389
300 0.276233 32.95307443 ± 0.001877 R² = 0.9819
400 0/260233 36.83656958 ± 0.00206 IC50 = 694 μg/ml
500 0.2353 42.88834951 ± 0.000361

Aktivitas Antioksidan Fraksi

Heksan Bandotan
50
% Inhibisi

0
0 100 200 300 400 500 600
Konsentrasi (µg/ml)

Gambar 3. Grafik Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi N-Heksan Bandotan

Pada uji aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa fraksi n-heksan

bandotan (Ageratum conyzoides L.) mempunyai daya antioksidan yang lemah
dengan nilai IC50 sebesar 694 μg/ml.

4.6 Uji Sitotoksik

Table 3. Persen Hidup sel MCF-7 dengan Perlakuan N-Heksan Bandotan

Rata-rata Konsentrasi Viabilitas sel Standar Persamaan
Absorbansi Kontrol (μg/ml) Deviasi
Sel Media
0.679 0.0918 1000 3.263337117 2.140148426 y = -102.67x +
500 1.730987514 0.695087895 296.93
250 71.76503973 4.247057193 R² = 0.8065
125 93.78547106 3.858416148 IC50 = 306 μg/ml
62.5 97.41770715 6.59564798

Profil Efek Sitotoksik Fraksi

Hexan Bandotan terhadap…
200

100

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3

Gambar 4. Grafik Hasil Uji Sitotoksik Fraksi N-Heksan Bandotan terhadap Sel
Kanker Payudara MCF-7
 18

Pada uji sitotoksik fraksi n-heksan bandotan memiliki potensi lemah untuk
menghambat sel kanker payudara MCF-7 dengan nilai IC50 sebesar 306 μg/ml.

4.7 Uji Antibakteri

Table 4. Diameter Daerah Hambat FNB terhadap S.Aureus
Konsentrasi Ekstrak Diameter Daerah Hambat (mm)
100% 10.6
75% 10
50% 9.3
25% 9
Ciprofloksasin Inj. (Kontrol positif) 39.3

Berdasarkan tabel diatas Diameter Hambat yang dihasilkan FNB

berbanding lurus dengan penambahan konsentrasi dan menunjukkan bahwa FNB
kurang efektif membunuh koloni Streptococcus Aureus dibandingkan dengan
Ciprofloksasin Inj.

Table 5.Indeks Keberhasilan

Uji yang Dilakukan Indeks Keberhasilan Ketercapaian
Konsultasi dengan Telah dilaksanakan
Pembimbing
Perizinan Laboratorium Telah dilaksanakan
Uji/kegiatan yang Determinasi Tanaman Telah dilaksanakan
diajukan dalam Pembelian bahan dan alat Telah dilaksanakan
proposal Ekstraksi dan Fraksinasi Telah dilaksanakan
Uji docking molekuler Telah dilaksanakan
Uji Kromaografi Lapis Tipis Telah dilaksanakan
Uji Aktivitas Antioksidan Telah dilaksanakan
Uji Sitotoksik Telah dilaksanakan
Uji Apoptosis Proses
Uji Antibakteri Telah dilaksanakan
Uji docking molekuler Telah dilaksanakan
Uji/kegiatan yang dengan protein dan senyawa
dilakukan diluar berbeda.
proposal Pembuatan prototipe Telah dilaksanakan
Pembuatan teks Prosiding Telah dilaksanakan
Publikasi jurnal Nasional dan
Internasional
 19

BAB V
PENUTUP

A. Kesimpulan
a. Senyawa yang terkandung dalam fraksi n-heksan herba bandotan
(Ageratum conyzoides L.) adalah flavonoid.
b. Fraksi n-heksan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.) memiliki
aktivitas antioksidan yang lemah terhadap DPPH dengan IC50 sebesar 694
μg/ml.
c. Aktivitas fraksi n-heksan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.)
sebagai agen sitotoksik terhadap sel kanker payudara.MCF-7 memiliki
potensi yang lemah dengan IC50 sebesar 306 μg/ml.
d. Mengetahui fraksi n-heksan herba bandotan (Ageratum conyzoides L.)
memiliki efek antibakteri yang lemah terhadap bakteri S. Aureus dengan
nilai DZI berbanding lurus dengan konsentrasi FNB.
e. Senyawa kaempferol pada herba bandotan (Ageratum conyzoides L.)
sebagai agen kemopreventif dengan analisis docking molekuler pada
protein HER-2 memiliki potensi yang kuat dengan skor docking -6.9 dan
senyawa ageratochromen dimer pada protein Nf-Kb lebih baik disbanding
doxorubicin dengan skor docking -8.5

B. Saran

a. Saran untuk penelitian ini selanjutnya untuk dilakukan penelitian lebih

lanjut untuk keamanan dan penggunaan Bandotan (Ageratum conyzoides
L.) sebagai antikanker payudara.
b. Dapat bekerjasama dengan IKOT (Industri Kecil Obat Tradisional) untuk
pemanfaatan Bandotan (Ageratum conyzoides L.) sebagai kemopreventif
kanker payudara.
 20

DAFTAR PUSTAKA

Adebayo, AH, Zeng, GZ, Fan, JT, Ji, CJ, He, WJ, Xu, JJ, Zhang, YM,
Akindahusni, AA, Kela, R & Tan, NH. 2010. Biochemical,
Haematological and Histophatological Studies of Extract of Ageratum
conyzoides L. in Sparague Dawley Rats. J Med Plant Res, Vol 4, no 21,
pp. 2264, 2265.
Alvarez, J., & Shoichet, B. (Eds.). 2005. Virtual Screening in Drug Discovery.
Taylor and Francis.
Anonim. 2009. Kromatografi Lapis Tipis. http/www.chem
istry.org/materi_kimia/instrument_analisis/kromatografi1/kromatografi_la
pis_tipis/.
Anonim. 2012. www.p1999.com/english/newsinfor.php?id=382&newclass=1
diakses pada 9 Mei 2016.
Apak, R, Guclu, Demirata, Celik & Berker. 2007. Comparative evaluation of
various total antioxidant capacity assay applied to phenolic compounds
with the CUPPRAC assay. Molecules 12, pp.1496-1547.
Armala, M. 2009. Daya Antioksidan Fraksi Air Ekstrak Herba Kenikir (Cosmos
caudatus H.B.K.) dan Profil KLT. Yogyakarta. Skripsi. Fakultas Farmasi
Universitas Islam Indonesia.
Boyle, N., Banck, M., James, C., Morley, C., van der Meersch, T., & Hutchison,
G. R. 2011. Open Babel: An Open Chemical Toolbox. Journal of
Cheminformatics.
Brasseur, T and Angenot L. 1986. Flavonol Glycosides from Leaves of Phlomis
lychnitys. Phytochemistry.
Da’i, M., Meiyanto, E., and Supardjan, A.M. 2004. Antiproliferative effect of
Pentagamavunon-0 on Myeloma cells. Sains kesehatan.
Dalimartha S. 2006. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jakarta: Puspa Swara.
Dash, GK & Murthy, PN. 2011. Wound Healing Effects of Ageratum conyzoides
Linn. Int J Pharma Bio Sci, Vol 2, no. 2, pp 370, 376, 379.
Dehpour, A.A., Ebrahimzadeh, M.A., Fazel, N.S., dan Mohammad, N.S. 2009.
Antioxidant Activity of Methanol Extract of Ferula Assafoetida and Its
Essential Oil Composition, Grasas Aceites, 60(4), 405-412
Departemen Farmakologi dan Terapi. 2008. Farmakologi dan Terapi Edisi V.
Jakarta: Fakultas Kedokteran UI.
Departemen Kesehatan RI. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta: Dirjen
POM Departemen Kesehatan RI.
Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Dirjen
POM Departemen Kesehatan RI.
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan
Obat. Jakarta: Dirjen POM.
 21

Departemen Kesehatan RI. 2013. Laporan Hasil Riset Kesehatan Dasar

(RISKESDAS) Nasional: Jakarta.
Foloppe, N., & Chen, I.-J. (2009). Conformational Sampling and Energetics of
Drug-like Molecules. Current Medicinal Chemistry.
Freshney, R.I.1992. Animal Cell Culture. New York: Oxford University Press.
Harbone, J.B. 1997. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan,Terbitan Ketiga. Penerjemah: Padmawinata K, Soediro I.
Bandung: ITB.
Heti, Dany. 2008. Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol 70% Herba Sisik Naga
(Drymogolossum piloselloides Presl.) terhadap Sel T74D. Skripsi.
Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Kamboj, A & Saluja, AK. 2011. Isolation of Stigmasterol and β-sitosterol from
Petroleum Ether Extract of Aerial Parts of Ageratum conyzoides
(asteraceae). Int J Pharm Sci, Vol 3, no 1, pp. 94.
Kartesz, JT. 2012. Ageratum conyzoides L. Topical Whiteweed.
http://plants.usda.gov/core/profile?symbol=AGCO diakses pada 16 Mei
2016.
Kerem, Z, Shashou, HG & Yarden, O. 2005. Microwave-Assisted Extraction of
Bioactive Saponins from Chickpea (Cicer arietinum L.). J Sci Food Agric.
Kementerian kesehatan RI. 2014. Pusat Data dan Informasi. Jakarta selatan.
Koleva, I. 2002. Screening of Plant Extract for Antioxidant Activity: A
Comparative Study on Three Testing Methods. Phytochem Anal.
Laufer, S. 2005. Isolation , Sturctural Elucidation Quantification and
Formulation of Saponins and Flavonoids of the Glinus Lotoides. Faculty
of Pharmacy. Tubingen. Eberhard Karls University.
Lenny, S. 2006. Senyawa Terpenoida dan Steroida. Medan. Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sumatera Utara.
Melannisa, R. 2004. Pengaruh PGV-1 Pada Sel Kanker Payudara Yang Diinduksi
17β-Estradiol: Kajian Antiproliferasi, Pemacuan Apoptosis dan
Antiangiogenesis. Tesis. Yogyakarta. Sekolah Pascasarjana. UGM.
Mossman, T. 1983. Rapid Colorimetric Assay For Celluler Growt and Survival :
Aplication to Proliveration and Citotoxity Assay. Journal Of Immunologi
Methods. 65 (1-2) : 55-63.
Motiejunas, D., & Wade, R. 2006. Structural, Energetics, and Dynamic Aspects of
Ligand-Receptor Interactions. In J. B. Taylor & D. J. Triggle (Eds.),
Comprehensive Medicinal Chemistry II Volume 4: Computer-Assisted
Drug Design (Vol. 4, pp. 193-214). Elsevier.
Mulyani, N,S. 2013. Kanker Payudara dan PMS Dalam Kehamilan. Yogyakarta:
Nuha Medica.
NCI, 2012. Breast Cancer. http/www.cancer.gov/cancertopics/types/breast. html
diakses pada 10 Mei 2016.
NCI. 2012. Cancer Treatment. http/www.cancer.gov/cancertopics/treatment. html
 22

diakses pada 10 Mei 2016.

Ndip, RN, Ajonglefac, AN, Wirna, T, Luma, HN, Wirmum, C & Efange,
SMN.2009. In Vitro Antimicrobial Activity of Ageratum conyzoides (Linn)
on Clinical Isolates of Helicobacter pylori. Tokyo. Afr J Pharm
Pharmacol.
Okuda, T & Ito, H. 2011. Tannins of Contant Structure in Medical and Food
Plant-Hydrolyzable Tannins and Polyphenol Related to Tannins. Tokyo.
Afr J Pharm Pharmacol.
Okunade, Al. 2002. Review Ageratum conyzoides L. (Asteraceae). Fitoterapia.
Sastroamidjojo, H. 2002. Kromatografi. Yogyakarta: Liberty.
Schneider, G., & Baringhaus, K.-H. 2008. Molecular Design: Concepts and
Applications. WILEY-VCH.
Soebachman, Agustina. 2011. 7 Kanker Paling Mematikan. Yogyakarta: Syura
Media Utama.
Sukardja, I Dewa Gede. 2000. Onkologi Klinik edisi 2. Surabaya: Airlangga
University Press.
Supardjo, Apar. 2016. Cara Mengobati Kanker Payudara Stadium Awal.
http://greenworldinternasional.com/cara-mengobati-kanker-payudara
stadium-awal/ diakses pada 20 Mei 2016.
Stahl, E. 1985. Analisis Obat secara Kromatografi dan Mikroskopi. Terjemahan
oleh Kosasih P & Iwang S. Bandung: ITB.
Tjay, T.H., Rahardja, K. 2002. Obat-obat Penting : Khasiat, Penggunaan, dan
Efek-Efek Sampingnya. Edisi VI. Jakarta: Penerbit PT. Elex Media
Komputindo.
Prasad, KB. 2011. Evaluation of Would Healing Activity of Leaves of Ageratum
conyzoides L. Int J of Pharm Pract Drug Res. Vol 1, no 1, pp.8, 9, 12.
Pringgoutomo, Sudarto. 2002. Buku Ajar : Patologi I Umum (edisi 1). Jakarta:
Sagung Seto.
Rangari, VD. 2007. Tannin Countaining Drug. New Nandanvan. Chaturvedi
College of Pharmacy.
Robbins dan Kumar. 1999. Buku Ajar Patologi I Edisi IV. Jakarta: EGC.
Weerapreeyakul N, Nonpunya A, Barusrux S, Thitimetharoch T, Sripanidkulchai
B. 2012. Evaluation of The Anticancer Potential of Six Herbs Against a
Hepatoma Cell Line. Chinese Medicine. 7, 1-7.
Zakaria., Mohmed, A.M, Jamil, Mohd., Somchit., Sulaiman & Arifah. 2011. In
Vitro Cytotoxic and Antioxidant Properties of The Aqueous, Chloroform
and Methanol Extracts of Dicranopteris Linearis Leave. African Journal
of Biotechnology.

Zou,Y., Lu,Y. and Wei,D. 2004. Antioxidant Activity of Flavonoid Rich Extract of
Hypericum perforatum L. in Vitro. J.Agric.Food Chem.
 23

LAMPIRAN
Lampiran 1. Penggunaan Dana
No. Tanggal Keterangan Jumlah Harga Satuan Masuk Keluar Saldo

1 20/3/2017 Dana DIKTI - Rp 10,000,000 Rp 10,000,000 Rp 10,000,000

2 20/3/2017 Izin Lab Penelitian 1 Rp 100,000 Rp - Rp 100,000 Rp 9,900,000
3 21/32017 Etanol 70% 5 Rp 50,000 Rp - Rp 600,000 Rp 9,300,000
4 21/3/2017 Simplisia Bandotan 1 Rp 50,000 Rp - Rp 50,000 Rp 9,250,000
5 21/3/2017 n-heksan 5 Rp 27,000 Rp - Rp 135,000 Rp 9,115,000
6 23/3/2017 Buku kas 1 Rp 6,300 Rp - Rp 6,300 Rp 9,108,700
7 25/3/2017 Rapat koordinasi 5 Rp 20,000 Rp - Rp 100,000 Rp 9,008,700
8 1/4/2017 POT 2 Rp 1,500 Rp - Rp 3,000 Rp 9,005,700
9 3/4/2017 DPPH 1 Rp 350,000 Rp - Rp 350,000 Rp 8,655,700
10 3/4/2017 Vitamin C 1 Rp 60,000 Rp - Rp 60,000 Rp 8,595,700
11 3/4/2017 Es Batu 6 Rp 1,000 Rp - Rp 6,000 Rp 8,589,700
12 3/4/2017 Metanol 1 Rp 11,800 Rp - Rp 11,800 Rp 8,577,900
13 3/4/2017 Parkir 1 Rp 1,000 Rp - Rp 1,000 Rp 8,576,900
14 10/4/2017 Pendaftaran Abstrak 1 Rp 50,000 Rp - Rp 50,000 Rp 8,526,900
15 19/4/2017 Bahan KLT 1 Rp 133,000 Rp - Rp 133,000 Rp 8,393,900
16 20/4/2017 Determinasi Tanaman 1 Rp 60,000 Rp - Rp 60,000 Rp 8,333,900
17 21/4/2017 Preparasi docking 1 Rp 250,000 Rp - Rp 250,000 Rp 8,083,900
18 22/4/2017 Poster dan design 1 Rp 120,000 Rp - Rp 120,000 Rp 7,963,900
19 22/04/2017 Print 1 Rp 5,000 Rp - Rp 5,000 Rp 7,958,900
20 22/04/2017 fotocopy 1 Rp 12,300 Rp - Rp 12,300 Rp 7,946,600
21 22/4/2017 Pendaftaran seminar 1 Rp 75,000 Rp - Rp 75,000 Rp 7,871,600
22 27/4/2017 Korsa 5 Rp 100,000 Rp - Rp 500,000 Rp 7,371,600
 24

23 29/4/2017 Izin Lab UGM 1 Rp 200,000 Rp - Rp 200,000 Rp 7,171,600

24 20/5/2017 Uji sitotoksik 1 Rp 5,200,000 Rp - Rp 5,200,000 Rp 1,971,600
25 15/5/2017 Uang lembur laboran 4 Rp 50,000 Rp - Rp 200,000 Rp 1,771,600
26 23/5/2017 Pembuatan Prototipe 1 Rp 325,000 Rp - Rp 325,000 Rp 1,446,600
27 23/5/2017 Print dan fotocopy 1 Rp 20,000 Rp - Rp 20,000 Rp 1,426,600
28 29/5/2017 Pot bulat 5 Rp 1,650 Rp - Rp 8,250 Rp 1,418,350
29 29/5/2017 Parkir 1 Rp 2,000 Rp - Rp 2,000 Rp 1,416,350
30 7/6/2017 Print dan fotocopy 1 Rp 12,500 Rp - Rp 12,500 Rp 1,403,850
31 13/6/2017 Bakteri S.Aureus 1 Rp 300,000 Rp - Rp 300,000 Rp 1,103,850
32 14/6/2017 Hands Scoon 1 Rp 40,000 Rp - Rp 40,000 Rp 1,063,850
33 14/6/2017 Masker 1 Rp 35,000 Rp - Rp 35,000 Rp 1,028,850
34 17/6/2017 Uji Bakteri 1 Rp 224,000 Rp - Rp 224,000 Rp 804,850
35 12/7/2017 Bahan prototipe 1 Rp 243,500 Rp - Rp 243,500 Rp 561,350
36 13/7/2017 Transportasi 5 Rp 50,000 Rp - Rp 250,000 Rp 311,350
37 12/7/2017 Konsumsi Latihan presentasi 1 Rp 25,000 Rp - Rp 25,000 Rp 286,350
38 13/7/2017 Internet 1 Rp 100,000 Rp - Rp 100,000 Rp 186,350
39 14/7/2017 Print laporan 1 Rp 79,600 Rp - Rp 79,600 Rp 106,750
40 14/7/2017 Parkir 1 Rp 2,000 Rp - Rp 2,000 Rp 104,750
41 15/7/2017 Print kemasan 1 Rp 43,000 Rp - Rp 43,000 Rp 61,750
42 15/7/2017 Print copy 1 Rp 2,200 Rp - Rp 2,200 Rp 59,550
43 15/7/2017 Gabus 2 Rp 24,000 Rp - Rp 24,000 Rp 35,550
44 15/7/2017 Steroform 1 Rp 10,000 Rp - Rp 10,000 Rp 25,550
45 16/7/2017 Evaluasi monev (konsumsi) 1 Rp 25,000 Rp - Rp 25,000 Rp 550
46 29/7/2017 Print dan scan 1 Rp 42,550 Rp - Rp 43,550 Rp 0
 25

Lampiran 2. Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis

Warna bercak
Nomor Nilai Sinar Tampak UV 254 UV 366
bercak Rf Tanpa uap Dengan Dengan/tanpa Dengan/tanpa Ket.
NH3 uap NH3 Uap NH3 Uap NH3
1 0.2 Kuning tua Kuning Kuning - -
2 0.28 - Kuning Kuning Kuning +
3 0.32 - - Ungu tua Merah -
4 0.33 - - Ungu muda Merah -
5 0.48 - - Ungu muda - -
6 0.68 Hijau Hijau Kuning Kuning +
7 0.76 - - Kuning - -
8 0.8 - - Ungu muda - -
9 0.84 Kuning Kuning Ungu tua - -
10 0.88 - - Kuning - -

Lampiran 3. Visualisasi docking

Senyawa Protein Hasil Visualisasi
Target
Kaempferol

HER-2

Ageratochromene
Dimer
 26

Doxorubicin

Ageratochromene
Dimer

NF-kB

Doxorubicin
 27

Lampiran 4. Dokumentasi Kegiatan

Kegiatan Penelitian
28
 29

Lampiran 5. Nota-nota Pembelian

30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41