LAPORAN PRAKTIKUM

“BIOKIMIA DARAH”

OLEH :
THOMAS CAREL A. : 41170113
I GEDE YUDA S. : 41170129
CORNELIA RIVANDA B : 41170146
BRENDA MIRIANE R. : 41170167
BRYAN ABEDNEGO : 41170181
ANASTASIA APRILIA T. : 41170202

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS KRISTEN DUTA WACANA
2018
 BAB 1
DASAR TEORI

Darah merupakan salah satu komponen penting bagi tubuh. Jumlah darah pada tubuh
4-5 liter yang terdiri dari 55% plasma dan 45% sel darah. Sel darah tersebut meliputi eritrosit,
leukosit, dan trombosit. Darah memiliki fungsi sebagai :
1. Alat transport zat seperti oksigen, karbon dioksida dan hasil metabolisme, yang
merupakan peran dari eritrosit
2. Fungsi imunitas sehingga tubuh tidak rentan terhadap penyakit akibat patogen/
mikrob dan merupakan fungsi dari leukosit
3. Menjaga suhu tubuh, dengan mendistribusikan panas secara merata. Ini
merupakan fungsi dari eritrosit
4. Menjaga keseimbangan asam basa dalam tubuh, dengan menjaga kadar CO2 di
dalam darah.
Eritrosit, leukosit, dan trombosit tersuspensi dalam plasma darah. Plasma darah
merupakan komponen darah yang telah bercampur dengan zat antikoagulasi dan terdiri dari
90% air terlarut di dalam zat elektrolit dan protein seperti enzim plasmin, fibrin, albumin, dan
globulin. Plasma darah merupakan cairan yang berada di atas dari hematokrit. Serum darah
berbalikan dengan plasma, serum merupakan cairan di atas hematokrit namun tidak
bercampur dengan zat antikoagulan. Serum mengandung tidak hanya zat protein seperti
albumin dan globulin, tetapi mengandung zat-zat nonprotein seperti klorida, fosfat, kalsium,
dan glukosa.
Trombosit merupakan keping darah yang berfungsi untuk melakukan koagulasi darah.
Faktor yang berpengaruh dalam proses koagulasi adalah kalsium, fibrinogen, dan vitamin K.
Mekanisme pembekuan darah adalah trombosit meninggalkan pembuluh darah lalu pecah,
maka trombosit mengeluarkan trombonikase, bersama dengan ion Ca dan vitamin K,
tromboplastin akan mengaktifkan protombin menjadi thrombin. Thrombin menghasilkan
fibrinogen yang akan berubah jadi fibrin sebagai serat-serat penutup luka. Protein Albumin
dan Globulin memiliki peran penting bagi penyembuhan luka. Dengan melihat fungsi dari
kedua protein tesebut :
1. Globulin mengangkut hormon steroid, lipid, dan fibrinogen.
2. Sedangkan albumin mengangkut asam lemak, kalsium, kortisol, dan bilirubin.
Eritrosit adalah sel darah yang berwarna merah karena memiliki hemoglobin, dimana
hemoglobin tersebut akan mengikat oksigen dan karbondioksida. Eritrosit yang bertumpuk

1
dan hemoglobinnya mengkat oksigen akan terlihat berwarna merah, sedangkan jika eritrosit
berdiri sendiri dan mengangkut lebih banyak karbondioksida akan terlihat berwarna kuning-
kehijauan.

2
 BAB II
PERSIAPAN PRAKTIKUM

A. Alat dan bahan

• Alat:
1. Pipet
2. Tabung reaksi
3. Stopwatch
4. Vortex
5. Waterbath
6. Bunsen
7. Kertas saring
8. Kerucut
9. Latar belakang hitam
• Bahan :
1.Darah Sitrat
2.Darah bebas fibrin
3.Cacl2 5%
4.Serum Darah
5.Ammonium Sulfat Jenuh
6.(NH4)2SO4 padat
7.CH2SO4 2%
8.Indiktaor Klorfenol merah
9.HNO3 pekat
10.Larutan AgNO3
11.Amonum Molibdat
12.Kalium Oksalat
13.Gliserol
14.Na2CO3 padat
15.Larutan CuSO4
16.Akuades
17.Reagen Tauber
18.Hidrogen Peroksida

3
B. Cara kerja
Percobaan 1 : Pengaruh Ion Ca dan Fibrin terhadap Koagulasi Darah

1. Siapkan tabung sitrat (tutup tabung biru) dan tabung bebas fibrin (tutup tabung ungu).
2. Masukkan 2 ml darah ke dalam tabung sitrat dan 2 ml darah ke tabung bebas fibrin.
3. Darah yang baru dimasukkan ke tabung sitrat langsung dibolak-balik secara hati-hati
sebanyak 5 kali.
4. Masukkan 5 tetes CaCl2 ke dalam tabung bebas fibrin dan campur dengan cara
membolak-balikan tabung pelan-pelan maksimal 10 kali.
5. Masukkan 5 tetes CaCl2 ke dalam tabung sitrat dan campur dengan cara membolak-
balikkan tabung pelan-pelan sebanyak 5 kali.
6. Diamkan kedua tabung selama 30 detik lalu miringkan tabung secara perlahan dan
perhatikan perubahan yang terjadi.
7. Jika darah didalam tabung masih mengalir diamkan lagi selama 30 detik. Lakukan
hingga pengamatan berkala tiap 30 detik hingga salah satu tabung mengalami
koagulasi.

Percobaan 2 : Pengendapan Globulin

1. Masukkan 5 cc serum darah ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan 5 cc ammonium sulfat jenuh.
3. Lalu campur dengan vortex, sampai ada endapan putih.
4. Saring campuran dengan kertas saring, sehingga tersisa endapan pada kertas saring,
menampung filtrat dalam tabung reaksi, digunakan untuk percobaan 3.
5. Larutkan endapan dengan menambahkan sedikit air (5-10 tetes) hingga endapan larut.
6. Tambahkan sedikit air hingga terbentuk lagi endapan.

Percobaan 3 : Pengendapan Albumin

1. Tambahkan ammonium sulfat padat kedalam filtrat percobaan 2.
2. Saring campuran dengan kertas saring sehingga tersisa endapan putih (seujung sendok
kecil)
3. Pindahkan endapan pada tabung yang lain.
4. Tambahkan air pada tabung reaksi.
5. Campur dengan vortex hingga larut.
6. Tambahkan air ke tabung reaksi.

4
Percobaan 4 : Menghilangkan Protein Serum (Deproteinisasi)
1. Masukkan 5 ml serum dan 10 ml aquades ke tabung reaksi.
2. Tutup dengan parafilm, campur dengan vortex, buka hipafix lalu panaskan di
waterbath.
3. Tambahkan asam asetat 2 % tetes demi tetes (3-5 tetes) hingga terbentuk endapan dan
gumpalan putih lalu dinginkan.
4. Saring campuran dengan kertas saring, ambil filtrat.
5. Buat filtrat menjadi pH 5,4 dengan klorfenol merah.
6. Tanda bahwa pH sudah 5,4 adalah hilangnya warna merah muda setelah diberi asam
asetat.
7. Jika belum, teteskan asam asetat dan panaskan.
8. Bagi filtrate menjadi 4 tabung untuk percobaan adanya Cl, PO4, Ca, dan glukosa.

Percobaan 5 : Menunjukkan adanya Klorida

1. Sebagian filtrat pada percobaan 4 masukkan ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan setetes HNO3 pekat dan larutan AgNO3 1-2 tetes hingga terjadi endapan
AgCl berwarna putih

Percobaan 6 : Menunjukkan Adanya Fosfat

1. Sebagian filtrat pada percobaan 4 masukkan ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan setetes HNO3 pekat dan beberapa tetes larutan ammonium molibdat 3-4
tetes, kemudian panaskan di waterbath, akan terbentuk endapan kuning jeruk.

Percobaan 7 : Menunjukkan adanya Kalsium

1. Masukkan sebagian filtrat percobaan 4 ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan beberapa tetes larutan kalium oksalat. Amati perubahan yang terjadi,
bandingkan dengan control dengan menggunakan latar belakang hitam.

Percobaan 8 : Menunjukkan adanya Glukosa

1. Masukkan sebagian filtrat percobaan 4 ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan 3 tetes gliserol.
3. Tambahkan seujung sendok Kristal Na2CO3 anhidrat.
4. Tambahkan 2 tetes larutan CuSO4 2,5 %. Amati apa yang terjadi.
5. Panaskan campuran itu di penangas selama 5 menit. Amati perubahan yang terjadi .

5
Percobaan 9 : Pemecahan Eritrosit
1. 1 tetes darah oksalat ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan 10 ml aquades, di vortex.
3. Panaskan sebentar di bunsen, lalu dinginkan dengan air ledeng.
4. Amati perubahan.
5. Larutan didiamkan untuk dipakai untuk tes benzidin.

Percobaan 10 : Tes Benzidin

1. Ke dalam tabung reaksi kering, masukkan 2 cc reagen Tauber dan 2 cc hydrogen
peroksida, campur dengan vortex pelan-pelan.
2. Darah pada percobaan 9 setetes demi setetes ditambahkan pada tabung sambil
digoyang-goyangkan.
3. Akan terjadi warna hijau biru.

6
 BAB 3
HASIL

Jenis Percobaan Hasil

Tutup biru membeku dalam waktu 1 jam
Tutup ungu menggumpal dalam waktu 1
1. Pengaruh ion Ca dan fibrin terhadap koagulasi darah Jam 20 menit

Setelah ditambah aquades terdapat endapan

2. Pengendapan globulin putih

Jernih
3. Pengendapan albumin

Warna merah hilang dan menjadi warna

4. Menghilangkan protein serum (deproteinasi) Ungu muda

Larutan kuning dengan endapan warna putih

5. Menunjukkan adanya klorida

Terdapat endapan warna kuning jeruk

6. Menunjukkan adanya fosfat

Warna ungu muda dan lebih keruh dibanding

7. Menunjukkan adanya kalsium Warna kontrol

Warna menjadi merah kecoklat-coklatan

8. Menunjukkan adanya glukosa

7
 Berwarna coklat tua
9. Pemecahan eritrosit

Berwarna coklat muda bening

10. Tes benzidin

8
 BAB 4
PEMBAHASAN
Percobaan 1: Koagulasi Darah
Hasil :darah pada tabung yang berwarna biru ( mngandung natrium sitrat ) lebih cepat
membeku daripada darah yang berada dalam tabung bertutup ungu (bebas fibrin). Waktu
pembekuan tabung biru 1 jam sedangkan waktu pembekuan tabung bertutup ungu 1 jam 20
menit.
Pembahasan :praktikum ini bertujuan untuk membuktikan bahwa tabung dengan
natrium sitrat lebih cepat engalami koagulasi daripada tabung bebas fibrin setelah kedua
tabung tersebut ditambahkan dengan CaCl2. Dimana CaCl2 yangmengandung unsur kalsium
tersebut akan membantu trombokinase mengaktifkan trombin menjadi protrombin bersama
vitamin K. Proses pembekuan darah pada tubuh terjadi sejak pembuluh darah mengalami
kerusakantubuh meresponnya dengan menghasilkan aktivator protrombin. Aktivator ini akan
mengubah protrombin menjadi trombin yang akan mngaktifkan fibrin dari fibrinogen
sehingga dapat terbentuk bekuan. Bekuan tersebut akan membentuk gumpalan yang
menyumbat pembuluh darah. Gumpalan darah tersebut harus dilenyapkan melalui proses
fibrinolisis dengan bantuan enzim plasmin.
Terdapat faktor lain juga yang dapart mempercepat proses pembekuan darah :
Faktor Nama
I Fibrinogen
II Protrombin
III Tromboplastin ( faktor jaringan)
IV Ca2+
V Proakselerin = globulin akselerator (Ac-glob)
VII Prokonvertin
VIII Faktor antihemofilia, globulin antihemofilia (AHG)
IX Komponen Tromboplastin plasma (faktor christmas)
IX Faktor stuart-power
X Anteseden tromboplastin plasma (PTA)
XII Faktor hageman
XIII Faktor Laki-Lorand
Sumber: Murray, Robert K. et. al. 2006. Biokimia Harper Edisi 27. Jakarta : Penerbit Buku
Kedokteran EGC

9
Percobaan 2 : Pengendapan Globulin
Hasil percoban pengendapan globulin adalah endapan putih hilang saat ditambah
aquades dan dicampur. Saat di tambahkan aquades lagi, endapan terlihat kembali, dan larutan
berwarna agak kuning. Globulin adalah protein yang ada dalam serum yang berfungsi untuk
pembentukan antibodi. Dalam percobaan, 5cc serum ditambahkan dengan ammonium sulfat
jenuh, dimana bertujuan agar protein akan terpisah dengan salting out dan protein yang ada
dapat mengalami denaturasi sehingga globulin akan terpisah dalam bentuk endapan. Setelah
itu, endapan globulin disaring dengan kertas saring dan dilarutkan dengan aquades karena
globulin bersifat larut dalam air atau garam encer. Setelah kami tambahkan aquades lagi,
endapat muncul lagi, hal ini menunjukan bahwa globulin bersifat hidrofobik.

Percobaan 3 : Pengendapan Albumin

Hasil percobaan dari pengendapan albumin adalah adanya endapan putih hilang saat
dicampur aquades dan divortex. Saat di tambahkan aquades lagi, endapannya tetap tidak
terlihat (larut) dan larutan berwarna putih bening. Albumin adalah protein utama dalam
plasma manusia yang berfungsi untuk mempertahankan tekanan osmotik, sebagai plasma dan
pengikat toksik, termasuk bilirubin dan bahan logam berat, serta kemampuannya dalam
mengangkut asam lemak. Bahan metabolik, hormon serta enzim, sebagai antioksidan dan
buffer. Endapan dan filtrat yang larut dalam air sesuai dengan hasil praktikum yang kami
dapat menandakan bahwa uji albumin dalam serum bertanda positif, dan menandakan bahwa
albumin merupakan protein yang larut dalam air (hidrofilik).

Percobaan 4 : Deproteinisasi
Tujuan percobaan deproteinisasi adalah untuk menghilangkan protein dalam serum
darah tidak mengganggu proses dan hasil percobaan setelahnya. Hasilnya ketika serum darah
ditambah aquades dan asam asetat yang kemudian dididihkan, didapati adanya endapan
dalam larutan. Lalu larutan ditetesi klorfenol merah dan diasamkan yang menyebabkaan
terjadi perubahan warna menjadi ungu agak bening.
Fungsi dari penambahan asam asetat dan pemanasan adalah untuk penggumpalan,
sebab darah mengandung protein. Penggumpalan terjadi ketika protein telah mencapai titik
isolistriknya dan titik isolistrik dalam darah adalah 4,88. Fungsi dari penambahan indicator
klorfenol merah adalah untuk mengecek pH larutan.

10
Percobaan 5: Menunjukkan adanya Klorida
Setelah melakukan percobaan, hasil yang ditemukan adalah filtrat yang sudash
ditambah AgNO3 dan HNO3 ada endapan putih AgCl dengan larutan keruh. Adanya endapan
putih karena penambahan HNO3 dan AgNO3 sehingga membentuk AgCl. Ini menunjukkan
adanya ion klorida yang terkandung dalam darah. HNO3 pekat mengubah Cl organik jadi Cl
anorganik. AgNO3 mengikat Cl organik. HNO3 mencegah adanya endapan perak fosfat pada
larutan. Reaksi yang terjadi dirumuskan sebagai = Cl- + AgNO3 → AgCl + NO3-

Percobaan 6 : Menunjukkan adanya fosfat

Filtrat hasil percobaan 4 ketika ditambahkan HNO3, Ammonium Molibdat yang
kemudian di panaskan akan terbentuk endapan dan larutan berwarna kuning. Filtrat + HNO3
+ Ammonium Molibdat = endapan fosfomolibdat dengan demikian, dapat dikatakan filtrat
mengandung fosfat.

Percobaan 7 : Menunjukkan adanya kalsium

Filtrat hasil percobaan 4 ditambahkan K-oksalat akan terbentuk larutan keruh dan
endapan putih. Filtrat + Kalsium Oksalat = Ca-Oksalat + KCL dengan demikian, dapat
dikatakan filtrat mengandung kalsium.

Percobaan 8 : menunjukan adanya glukosa.

Percobaan ini untuk keadaan positif akan memberikan warna merah bata yang
merupakan akibat dari reduksi CuSO4 oleh glukosa. Filtrat yang telah mengalami
deproteinisasi ditambahkan dengan gliserol, Na2CO3 anhidrat dan larutan CuSO4. Larutan
tersebut membentuk endapan berwarna merah bata yang merupakan hasil reduksi dari
glukosa berupa Cu2O. Sedangkan Na2CO3 anhidrat akan mengubah PH menjadi basa dan
glukosa akan menjadi enol areaktif untuk mereduksi Cu2+. Pada percobaan ini juga
menggunakan gliserol untuk mengikat ion Cu.

Reaksi yang terjadi :

2Cu2++ + 4OH- Cu2O+ 2H2

11
Percobaan 9: Pemecahan Pigmen Eritrosit
Percobaan ini bertujuan untuk memecahkan eritrosit dengan menggunakan aquades
sebagai pengencer darah dan memanaskan darah untuk proses pemecahan. Sifat dari masing-
masing bahan adalah aquades bersifat hipotonis sedangkan darah bersifat hipertonis. Sifat
tersebut membuat air masuk ke dalam sel eritrosit darah sehingga sel eritrosit membengkak
saat diberi aquades dan pecah saat proses pemanasan di bunsen. Hasil dari percobaan ini
adalah larutan darah dengan aquades menjadi coklat. Warna coklat yang dihasilkan
disebabkan oleh Fe2+ yang terkandung dalam darah keluar dari heme.

Percobaan 10: Uji Benzidine

Tujuan dari uji benzidine adalah untuk membuktikan bahwa hemoglobin dapat
berfungsi seperti enzim peroksidase. Percobaan dilakukan dengan menggunakan larutan
tauber dan hydrogen peroksida. Hidrogen peroksida mengkatalisis oksidasi subtrat. Saat
benzidine dan hidrogen peroksida ditambah pada darah, ada reaksi redoks yang terjadi.
Reaksi ini mengonversi benzidine sehingga menjadikan darah berwarna hijau atau dianzo.
Pada percobaan ini, kami tidak berhasil menghasilkan warna hijau karena ada kesalahan pada
larutan tauber sehingga membuat larutan percobaan hanya berwarna coklat muda dalam arti
tidak terjadi reaksi apapun.
Hasil reaksi dapat dirumuskan sebagai Fe2+ + H2O = Fe3+ + OH- + OH

12
 BAB V
KESIMPULAN

Berdasarkan hasil percobaan, kami menarik kesimpulan bahwa di dalam plasma darah
terdapat beberapa kandungan seperti protein (globulin dan albumin), glukosa yang
merupakan karbohidrat serta beberapa elektrolit seperti Ca, Cl, dan fosfat. Ca dan fosfat ini
juga ternyata sangat mempengaruhi proses koagulasi darah sesuai hasil percobaan satu yang
kami lakukan. Suatu jenis sel darah yaitu eritrosit yang memiliki hemoglobin, ternyata
bersifat hipertonis sehingga air yang masuk dapat menyebabkan pemecahan sel darah merah
ini. Selain mengandung besi dan protein, hemoglobin (Hb) juga dapat bersifat seperti enzim
peroksidase ketika diberi reagen tertentu sesuai dengan hasil percobaan sembilan dan
sepuluh.

13
 DAFTAR PUSTAKA

Murray, Robert K. et. al. 2006. Biokimia Harper Edisi 27. Jakarta : Penerbit Buku
Kedokteran EGC

Guyton, A.C., dan Hall, J.E. 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 11. Jakarta: EGC

Sherwood, L. 2014. Fisiologi Manusia : dari sel ke sistem. Edisi 8. Jakarta: EGC

Dorland, W.A Newman. 2010. Kamus Kedokteran Dorland Ed. 31 (Alih bahasa : Albertus
Agung Mahode). Jakarta : EGC

______. 2014. Kamus Besar Bahasa Indonesia Pusat Bahasa. Jakarta : PT Gramedia Pustaka
Utama.

14
15