LAPORAN MINGGUAN PRAKTIKUM BAHAN MAKANAN

ACARA II

IDENTIFIKASI RHODAMIN B

DISUSUN OLEH

TARITSU HAZAL FARADIS

G1C 015 039

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS MATARAM

2018
 ACARA II

IDENTIFIKASI RHODAMIN B

A. PELAKSANAAN PRAKTIKUM
1. Tujuan Praktikum
Untuk mengidentifikasi adanya Rhodamin B pada sampel makanan dan minuman
dengan menggunakan metode kromatografi sederhana.
2. Waktu Praktikum
Jumat, 26 Oktober 2018
3. Tempat Praktikum
Lantai II, Laboratorium Kimia Dasar, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Mataram.

B. LANDASAN TEORI

Rhodamin B mempunyai karakteristik kristal hijau atau bubuk jingga

kemerah-merahan dan mempunyai sifat yang tidak larut dalam air dan menjadi
merah kebiru-biruan bila dilarutkan dalam air. Rhodamin B juga mempunyai sifat
sangat larut dalam alkohol dan sedikit larut dalam HCL dan NaOH. Rhodamin B
merupakan reagen untuk Sb, BI, Co, niobium, Au, Mn, Hg, Mo, tantalum, Th, dan
W. Penggunaan rhodamin B banyak ditemukan pada pewarna tekstil, kosmetik, dan
obat-obatan (Mahindru, 2000:168).
Rhodamin B mempunyai struktur molekul C28H31N2O3C1 dan sekarang
masih banyak digunakan pada berbagai macam produk makanan dan minuman
(terutama pada masyarakat ekonomi kelas bawah), seperti kue basah, saus, sirup,
biskuit dan lain-lain (Kusmayadi dan Sukandar, 2009). Rhodamin B terbuat dari
dietillaminophenol dan phatalic anchidria dimana kedua bahan baku ini sangat
toksik bagi manusia dan biasanya digunakan sebagi pewarna kertas, wol, dan sutra
(Djarismawati, 2004:237).
 Analisis senyawa dalam bahan ruangan maupun dalam cairan biologis
dengan metode kromatografi dapat ditilik balik pada awal tahun 1920-an. Pada
tahun 1955-an, metode kromatografi kertas secara menaik dan menurun telah
muncul untuk menganalisis suatu senyawa dalam obat-obatan. Kromatografi
merupakan suatu proses pemisahan yang mana analit-analit dalam sampel
terdistribusi antara 2 fase, yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam dapat berupa
bahan padat atau porus dalam bentuk molekul kecil, atau dalam bentuk cairan yang
dilapiskan pada dinding kolom. Fase gerak dapat berupa gas atau cairan. Jika gas
digunakan sebagai fase gerak, maka prosesnya dikenal sebagai kromatografi gas
sedangkan jika cairan yang digunakan pada fase gerak maka prosesnya disebut
kromatografi cair dan juga kromatografi lapis tipis. Kromatografi merupakan
teknik analisis yang paling sering digunakan dalam analisis sediaan farmasetik.
Suatu pemahaman terhadap parameter-parameter yang berpengaruh terhadap
kinerja kromatografi akan meningkatkan sistem kromatografi sehingga akan
dicapai pemisahan yang baik (Rohman, 2009:89).

Rhodamin B adalah salah satu zat pewarna sintesis yang digunakan pada
industri tekstil zat pewarna ini ditetapkan sebagai zat yang dilarang penggunaannya
pada makanan. Menurut Peraturan Menteri Kesehatan (PerMenKes) pada aturan
No.239/MenKes/Per/V/85, namun walaupun sudah dilarang penggunaan Rhodamin B
dalam makanan masih banyak terdapat dilapangan. Rhodamin B yang dikonsumsi
dalam jumlah cukup besar dan berulangulang akan menyebabkan iritasi pada saluran
pernapasan, iritasi pada kulit, iritasi pada mata, iritasi pencernaan, keracunan, gangguan
fungsi hati dan kanker hati (Longdong, 2017).

Rhodamin B umumnya ditemukan pada produk terasi tanpa merek yang

dipasarkan di pasar-pasar tradisional (Daya, Terong dan Pa’baeng-baeng) Kota
Makassar. Sebagian besar pedagang tidak mengetahui bahwa produk terasi yang dijual
mengandung Rhodamin B. pedagang beranggapan bahwa warna pada terasi dihasilkan
dari udang atau rebon yang digunakan. Pada kenyataannya, Rhodamin B digunakan
sebagai pewarna pada terasi dengan alasan warna terasi yang dihasilkan lebih menarik
dan karena harga Rhodamin B relatif lebih murah dibanding pewarna sintetis untuk
pangan (Amir, 2017).

Dari tabel uji kualitatif zat pewarna Rhodamin B yang telah dilakukan pada
6 sampel saus yang dipasarkan di Kota Banda Aceh dinyatakan bahwa dari uji
organoleptik warna diperoleh hasil normal sesuai dengan SNI 01-3546-2004. Hasil uji
kimia yang dilakukan pada sampel saus menunjukkan bahwa tidak terdeteksi adanya
kandungan zat pewarna Rhodamin B pada seluruh sampel saus tomat dan saus cabe
yang dianalisis . Sedangkan jika saus yang mengandung Rhodamin B dapat diketahui
dengan cara melihat perubahan warna sampel saus dibawah sinar UV 254 nm dan 366
nm, warna saus akan berfluoresensi menjadi kuning/jingga serta nilai Rf yang sama
atau hampir sama dengan Rf standar baku Rhodamin B (Azmi, 2017).

Pengikatan Rhodamin B untuk Calf timus DNA ( DNA CT ) dipelajari

menggunakan berbagai teknik biofisik dan metode docking molekular . Studi dichroic
melingkar mengungkapkan bahwa konformasi dari CT DNA berubah moderat dan
bersantai di mengikat dengan Rhodamin B. mengikat adalah koperasi di alam . Itu
keseluruhan konstan mengikat , ditinjau dari Benesi Hidebrand petak terlihat berada di
kisaran 103 M_1 . Salt ketergantungan yang mengikat data menunjukkan bahwa energi
bebas mengikat tergantung pada konsentrasi garam . Dari studi termodinamika ,
disimpulkan bahwa proses pengikatan disukai oleh kedua entalpi negatif perubahan dan
perubahan entropi positif . Perhitungan docking molekular dan percobaan Quenching
menegaskan bahwa pewarna mengikat dalam alur kecil CT DNA . Hasil ini lebih
memajukan kami pengetahuan tentang aspek molekuler pada interaksi dari jenis
pewarna untuk asam nukleat (Islam, 2013).

Penghilangan warna oksidatif Rhodamin B (RhB) dilakukan dalam reaktor

fotokimia yang memungkinkan microwave (MW) dan radiasi UV untuk diterapkan secara
bersamaan. Kami menggunakan sumber microwave tenggelam, dengan tidak perlu oven.
Mengontrol suhu, MWpower, andUVemission reaktor semua menyebabkan kontrol secara
keseluruhan lebih besar dari process.Due untuk aksi yang sangat radikal hidroksil reaktif,
penghilangan warna dari RhB diikuti online menggunakan spektrograf. Penghilangan warna
 lengkap terjadi di empat menit, dan 92% dari mineralisasi diperoleh di 70 menit. Percobaan
dilakukan pada berbagai suhu (21∘C, 30∘C, 37∘C, dan 46∘C), dengan dan tanpa laju reaksi
jelas hidrogen peroxide.The digunakan untuk menghitung jelas energi aktivasi proses
penghilangan warna: 𝐸𝑎= 38} 2kJ / mol dan 40} 2 kJ / mol dengan (400mg / L) atau tanpa
hidrogen peroksida, masing-masing. Kurangnya penyimpangan dari perilaku linier dari plot
Arrhenius menegaskan bahwa penerapan MW tidak mempengaruhi 𝐸𝑎 proses. The jelas
nilai energi aktivasi ditemukan dibandingkan dengan beberapa data yang tersedia dalam
literatur, yang diperoleh dengan tidak adanya MWradiation dan tidak konsisten (Ferarri,
2013).
Metode ekstraksi cair-cair berbasis pelarut cair berbasis sololat sederhana dan
sensitif dijelaskan untuk pemisahan / prakonsentrasi dan deteksi spektrofotometri rhodamin
B. Metode ekstraksi mikro, yang direalisasikan pada suhu ambien untuk mendeteksi
rhodamin B, dilakukan dengan menggunakan pelarut supramolekul seperti tetrahidrofuran
dan asam decanoic. Metode ini didasarkan pada analisis rhodamine B dengan menggunakan
spektrofotometri UV-Vis pada 558 nm. Pengaruh beberapa parameter seperti pH, volume
sampel, larutan eluen, waktu sentrifugasi, dan waktu mandi ultrasonik dioptimalkan. Efek
dari berbagai ion matriks juga diselidiki. Selain itu, batas deteksi dan batas kuanti kasi
dihitung masing-masing 0,49 µg L-1 dan 1,47 µg L-1. Faktor prakonsentrasi adalah 30.
Standar deviasi relatif ditentukan sebagai 5,8% dalam 0,5x10-4 M rhodamine B. Prosedur ini
divalidasi dengan tes penjumlahan/pemulihan. Metode microextraction diterapkan untuk
penentuan rhodamine B dalam sampel air keran dan sampel kosmetik seperti cat kuku, rouge,
dan lipstick (Ozkantar, 2017).

C. ALAT DAN BAHAN PRAKTIKUM

1. Alat-alat Praktikum
a. Batang pengaduk
b. Chamber
c. Gelas arloji
d. Gelas kimia 100 mL
e. Gelas kimia 250 mL
f. Gelas ukur 25 mL
g. Labu takar 25 mL
h. Neraca analitik
 i. Penggaris
j. Pensil
k. Penutup chamber
l. Pipet kapiler
m. Pipet tetes
n. Pipet Volume 5 mL
2. Bahan-bahan Praktikum
a. Aquades (H2O)(l)
b. Kertas Kromatografi
c. Larutan asam asetat glacial (CH3COOH) encer
d. Larutan etanol (C2H5OH) 50%
e. Pellet NaCl (natrium klorida)
f. Pewarna tekstil (wantex) merah
g. Rhodamin B (C28H31ClN2O3)(aq) 20.000 ppm
h. Terasi

D. SKEMA KERJA
1. Pembuatan Larutan rhodamin B (sebagai standar)

Rhodamin B

- Ditimbang 0,1 g
- Dimasukkan dalam gelas kimia 50 mL
- + aquades sampai larut

Larutan rhodamin B

- Dimasukkan dalam labu takar 50 mL

- Diencerkan dengan aquades sampai tanda batas

Larutan Rhodamin B 0,2%

2. Persiapan Sampel Uji (%w/v)

Sampel wantex dan terasi

- Dimasukkan dalam gelas kimia 250 mL

- + asam asetat glacial encer dan diaduk sampai
warna larut

Sampel
 3. Pembuatan Eluen untuk Elusidasi Sampel

1 g NaCl dilarutkan dalam etanol 50%

- Dimasukkan chamber
- Dijenuhkan selama ± 30 menit
Hasil

4. Pengujian rhodamin B pada Sampel

Rhodamin B Sampel

- Ditotolkan pada kertas saring whatman 10x5 cm yang

telah digaris (panjang lintasan : 9 cm)

Hasil
- Dimasukkan dalam chamber yang berisi eluen yang
telah dijenuhkan

Hasil

- Dilakukan elusi sampai pelarut merambat pada garis

tanda batas

Hasil
- Elusi dihentikan (kertas diangkat)
- Kertas dikeringkan
Hasil: spot yang tebentuk diamati dan dibandingkan
dengan spot standar

E. HASIL PENGAMATAN
(bila perlu pendaran diamati di bawah sinar UV)
Pembuatan larutan rhodamin B (sebagai standar)
No Percobaan Hasil Pengamatan
1 0,1 g rhodamin B ditimbang Rhodamin B yang ditimbang berbentuk bubuk
lalu dimasukkan dalam gelas halus (serbuk kristal) dengan warna hijau
beaker 50 mL dan ditambahkan keunguan.
dengan aquades sampai larut. Terbentuk larutan rhodamin B berwarna merah
terang.
2 Larutan rhodamin B Terbentuk larutan rhodamin B yang berwarna
dimasukkan ke dalam labu merah terang dengan konsentrasi 0,2%.
takar 50 mL dan diencerkan
sampai tanda batas.
Persiapan Sampel Uji
No Percobaan Hasil Pengamatan
1 Sampel uji
- Terasi dimasukkan dalam - Sampel terasi berwarna merah muda
gelas kimia dan
ditambahkan asam asetat
glacial
- Wantex dimasukkan - Sampel wantex berwarna merah pekat
dalam gelas kimia dan
ditambahkan asam asetat
glacial
Pembuatan Eluen untuk Elusidasi Sampel
No Percobaan Hasil Pengamatan
1 1 g NaCl dilarutkan dalam Warna larutan: bening
etanol 50%. Dimasukkan ke
Proses penjenuhan berlangsung selama 30
dalam chamber dan dijenuhkan
menit
selama ± 30 menit
Pengujian rhodamin B dalam sampel uji
No Percobaan Hasil Pengamatan
1 Larutan rhodamin B (standar) - Sampel terasi tidak mengalami
dan sampel uji ditotolkan pada pergerakan ke atas/tidak ada muncul spot.
kertas kromatografi kemudian Sedangkan untuk standarnya, muncul spot
dimasukkan dalam chamber pada jarak 5,2 cm dari titik awal (5,4 cm).
yang berisi eluen. Kemudian - Pada sampel wantex tidak muncul spot.
dielusi sampai pelarut Sedangkan untuk standarnya, muncul spot
merambat sampai tanda batas pada jarak 5,4 cm dari titik awal (5,6 cm).

Hasil Pengujian rhodamin

No Sampel Hasil Uji
 1 Terasi -
2 Wantek -

Gambar hasil elusidasi dengan Kromatografi Kertas

F. ANALISIS DATA
Perhitungan Nilai Rf
jarak zat (spot) bergerak ke atas
Rf =
jarak permukaan eluen
1. Untuk sampel terasi:
5,2
Rf (standar) = 5,4

= 0,9629
0
Rf (sampel) = 5,4

=0
2. Untuk sampel wantex:
5,4
Rf (standar) = 5,6

= 0,9642
0
Rf (sampel) = 5,6

=0

G. PEMBAHASAN
 Rhodamin B adalah salah satu zat pewarna sintetis yang biasa digunakan pada
industri tekstil dan kertas. Zat ini ditetapkan sebagai zat yang dilarang penggunaannya pada
makanan melalui Menteri Kesehatan (Permenkes) No.239/Menkes/Per/V/85. Namun
penggunaan Rhodamine dalam makanan masih terdapat di lapangan. Rhodamin B ini juga
adalah bahan kimia yang digunakan sebagai bahan pewarna dasar dalam tekstil dan kertas.
Pada awalnya zat ini digunakan untuk kegiatan histologi dan sekarang berkembang untuk
berbagai keperluan yang berhubungan dengan sifatnya dapat berfluorensi dalam sinar
matahari.

Rhodamin B

Rumus Molekul dari Rhodamin B adalah C28H31N2O3Cl dengan berat molekul

sebesar 479.000. Zat yang sangat dilarang penggunaannya dalam makanan ini berbentuk
kristal hijau atau serbuk ungu-kemerah – merahan, sangat larut dalam air yang akan
menghasilkan warna merah kebiru-biruan dan berfluorensi kuat. Rhodamin B juga
merupakan zat yang larut dalam alkohol, HCl, dan NaOH, selain dalam air. Di dalam
laboratorium, zat tersebut digunakan sebagai pereaksi untuk identifikasi Pb, Bi, Co, Au, Mg,
dan Th dan titik leburnya pada suhu 165oC.Nama lain dari Rhodamin B itu sendiri yang
terkenal dipasaran adalah D and C Red no 19, Food Red 15, ADC Rhodamine B,
Aizen Rhodamine, tetra ethyl rhodamin,C.I. No.45179, C.I. Basic Violet 10, Rheonine B
dan Brilliant Pink.
Ciri-ciri suatu makanan yang mengandung Rhodamin B antara lain warnanya cerah
mengkilap dan lebih mencolok, terkadang warna terlihat tidak homogen (rata), ada gumpalan
warna pada produk, dan bila dikonsumsi rasanya sedikit lebih pahit. Biasanya produk pangan
yang banyak dijumpai mengandung rhodamin B tidak mencantumkan kode, label, merek,
atau identitas lengkap lainnya. Rhodamin B sering disalahgunakan pada pembuatan kerupuk,
terasi, cabe merah giling, agar-agar, arumanis/kembang gula, manisan, sosis, sirup,
minuman, cendol, kolang-kaling dan cincau. dan lain-lain (Cahyadi, 2008 : 154).
Dalam analisis dengan metode destruksi dan metode spektrofometri, didapat
informasi bahwa sifat racun yang terdapat dalam Rhodamine B tidak hanya saja disebabkan
oleh senyawa organiknya saja tetapi juga oleh senyawa anorganik yang terdapat dalam
Rhodamin B itu sendiri, bahkan jika Rhodamin B terkontaminasi oleh senyawa anorganik
lain seperti timbaledan arsen. Dengan terkontaminasinya Rhodamin B dengan kedua unsur
tersebut, menjadikan pewarna ini berbahaya jika digunakan dalam makanan.
Di dalam Rhodamin B sendiri terdapat ikatan dengan klorin (Cl) yang dimana
senyawa klorin ini merupakan senyawa anorganik yang reaktif dan juga berbahaya. Rekasi
untuk mengikat ion klorin disebut sebagai sintesis zat warna. Disini dapat digunakan Reaksi
Frield- Crafts untuk mensintesis zat warna seperti triarilmetana dan xentana. Rekasi antara
ftalat anhidrida dengan resorsinol dengan keberadaan seng klorida menghasilkan fluoresein.
Apabila resorsinol diganti dengan N-N-dietilaminofenol, reaksi ini akan menghasilkan
rhodamin B. Selain terdapat ikatan Rhodamin B dengan Klorin terdapat juga ikatan
konjugasi. Ikatan konjugasi dari Rhodamin B inilah yang menyebabkan Rhodamin B
bewarna merah. Ditemukannya bahaya yang sama antara Rhodamin B dan Klorin membuat
adanya kesimpulan bahwa atom Klorin yang ada pada Rhodamin B yang menyebabkan
terjadinya efek toksik bila masuk ke dalam tubuh manusia. Atom Cl yang ada sendiri adalah
termasuk dalam halogen, dan sifat halogen yang berada dalam senyawa organik akan
menyebabkan toksik dan karsinogen.
Menurut WHO, Rhodamin B berbahaya bagi kesehatan manusia karena sifat kimia
dan kandungan logam beratnya. Penggunaan Rhodamin B pada makanan dalam waktu yang
lama akan dapat mengakibatkan gangguan fungsi hati maupun kanker. Namun demikian,
bila terpapar Rhodamin B dalam jumlah besar maka dalam waktu singkat akan terjadi gejala
akut keracunan Rhodamin B. Bila Rhodamin B tersebut masuk melalui makanan akan
mengakibatkan iritasi pada saluran pencernaan dan mengakibatkan gejala keracunan dengan
urine yang berwarna merah maupun merah muda. Selain melalui makanan dan minuman,
Rhodamin B juga dapat mengakibatkan gangguan kesehatan, jika terhirup akan terjadi
iritasi pada saluran pernafasan. Mata yang terkena Rhodamin B juga akan mengalami iritasi
yang ditandai dengan mata kemerahan dan timbunan cairan atau udem pada mata. Jika
terpapar pada bibir dapat menyebabkan bibir akan pecah-pecah, kering, gatal, bahkan kulit
bibir terkelupas. Rhodamin B mengandung senyawa klorin (Cl). Senyawa klorin merupakan
senyawa halogen yang berbahaya dan reaktif. Jika tertelan, maka senyawa ini akan berusaha
mencapai kestabilan dalam tubuh dengan cara mengikat senyawa lain dalam tubuh, hal inilah
yang bersifat racun bagi tubuh. Selain itu, rhodamin B juga memiliki senyawa pengalkilasi
(CH3-CH3) yang bersifat radikal sehingga dapat berikatan dengan protein, lemak, dan DNA
dalam tubuh (Yuliarti, 2007).
Untuk mendeteksi adanya campuran zat pewarna Rhodamin B pada bahan
tambahan makanan, cara mudah dan sederhana untuk mendeteksi kandungan zat pewarna
sintesis ini secara kualitatif yaitu dilakukan dengan metode kromatografi sederhana. Pada
praktikum kali ini, dilakukan pengujian kandungan Rhodamin B terhadap sampel terasi dan
wantex (pewarna pakaian) dengan metode kromatografi kertas. Pada percobaan ini,
dilakukan beberapa proses, antara lain pembuatan larutan Rhodamin B sebagai standar,
persiapan sampel uji, pembuatan eluen untuk elusidasi sampel, serta terakhir pengujian
Rhodamin B pada sampel.
Prosedur pertama yakni pembuatan larutan standar Rhodamin B dimana larutan
standar ini dibuat dengan konsentrasi 0,2% (% w/v). Pembuatan larutan Rhodamin dengan
konsentrasi yang sangat kecil yakni 0,2% dikarenakan kepekatan warna dari Rhodamin B
ini sangat tinggi. Hal ini ditunjukkan dengan warna larutan Rhodamin B yang berwarna
merah terang yang pekat (keunguan) seperti warna larutan KMnO4 padahal konsentrasinya
hanya 0,2%. Jika dibuat larutan yang lebih pekat lagi dari 0,2% misalnya 20% akan
mempersulit pada proses penotolan sampel dalam kertas saring yang akan dielusidasi
(dianalisis dengan metode kromatografi).
Prosedur yang kedua yakni persiapan sampel uji. Sampel yang kita gunakan adalah
terasi dan wantex. Preparasi sampel dilakukan untuk memperoleh larutan sampel sehingga
bisa dianalisis karena dalam kromatografi kertas, sampel yang diuji harus berbentuk larutan
sehingga masing-masing sampel ini kita larutkan dengan asam asetat glacial encer. Fungsi
pelarutan dengan asam asetat glacial encer ini untuk mendestruksi senyawa-senyawa yang
ada di dalam sampel dan menstabilkan rhodamine agar tidak berubah dari bentuk terionisasi
menjadi bentuk netral.
Selanjutnya dilakukan penyiapan fasa diam dan fasa gerak dari sistem kromatografi
kertas ini. Fasa diam yang digunakan adalah kertas kromatografi yang juga berfungsi sebagai
media elusidasinya. Kandungan yang terdapat dalam kertas kromatografi ini adalah selulosa
dimana sifat dari fase diam ini adalah merupakan senyawa polar. Sedangkan fase gerak yang
digunakan adalah campuran NaCl : etanol. Eluen ini dibuat dengan mencampurkan 1 gram
NaCl di dalam etanol 50%. Eluent yang digunakan ini bersifat lebih polar dari fase diamnya
agar sampel yang polar tidak terikat kuat pada fase diamnya. Penggunaan eluent ini
disesuaikan dengan sifar polar Rhodamin B karena memiliki gugus karboksil dengan
pasangan elektron bebas dan gugus amina pada struktur molekulnya. Gugus karboksil dan
amina ini akan membentuk ikatan hidrogen intermolekular dengan pelarut polar sehingga
mudah larut dalam pelarut polar seperti etanol. Oleh karena itu, digunakan campuran eluen
polar agar dapat mengeluasi Rhodamin B dengan baik.
Setelah dibuat eluent, maka larutan eluent tersebut dijenuhkan terlebih dahulu.
Tujuan penjenuhan adalah untuk memastikan partikel fasa gerak terdistribusi merata pada
seluruh bagian Chamber sehingga proses pergerakan spot di atas fasa diam oleh fasa gerak
berlangsung optimal, dengan kata lain penjenuhan digunakan untuk mengotimalkan naiknya
eluent. Selain itu juga berfungsi untuk menghindari hasil tailing pada kertas kromatografi.
Selanjutnya proses terakhir yaitu dilakukan pengujian Rhodamin B pada sampel.
Tahapan pertama yaitu proses penyiapan fase diam yang berupa kertas kromatografi.
Disiapkan kertas kromatografi yang terdiri dari dua bagian, yakni satu bagian untuk
penotolan sampel dan satu bagian lagi untuk penotolan standar. Pada kertas kromatografi
tersebut, diberi batas atas dan bawah yang berfungsi sebagai penanda jarak tempuh eluent.
Panjang lintasan untuk bergeraknya eluen adalah 5,4 cm untuk terasi dan 5,6 cm untuk
wantex. Setelah itu, dilakukan penotolan Rhodamin standar dan sampel menggunakan pipet
kapiler. Tujuannya yaitu supaya hasil totolannya sekecil mungkin karena dalam
Kromatografi kertas, penotolan yang baik diusahakan sekecil mungkin untuk menghindari
pelebaran spot dan jika sampel yang digunakan terlalu banyak maka akan menurunkan
resolusi. Pelebaran spot dapat mengganggu nilai Rf karena memungkinkan terjadinya
himpitan puncak. Penotolan dilakukan pada garis bawah yang telah dibuat. Kemudian
dibiarkan beberapa saat hingga mengering. Penotolan pada kertas kromatografinya juga
tidak boleh terlalu berdekatan untuk menghindari bergabungnya spot standar dan sampel dan
larutan sampel dan standar tidak boleh terlalu pekat untuk menghindari adanya tailing saat
spot naik bersama fasa gerak.
Selanjutnya, kertas kromatografi dimasukkan dengan hati-hati ke dalam chamber
tertutup yang berisi fasa gerak dengan posisi fasa gerak berada di bawah garis. Kromatografi
kertas ini menggunakan metode ascending (naik). Kemudian fase gerak dibairkan naik
sampai hampir mendekati batas atas kertas. Fase gerak perlahan-lahan bergerak naik.
Meskipun melawan gravitasi, namun eluent bisa naik karena adanya afinitas. Dalam proses
naiknya fase gerak, komponen-komponen yang berbeda dari campuran berjalanan pada
tingkat yang berbeda sesuai dengan kepolarannya. Setelah kira-kira mencapai jarak tempuh
x cm, kertas kromatografi diangkat dan dibiarkan kering diudara. Tujuannya untuk
 menguapkan sisa pelarut yang masih terdapat pada kertas untuk menjamin penguapan telah
sempurna dan agar spot jelas terlihat.
Berdasarkan hasil pengukuran, diperoleh jarak spot untuk sampel terasi dengan
batas bawah yaitu 0 cm sedangkan jarak tempuh Rhodamin standarnya yaitu 5,4 cm.
Sedangkan jarak spot untuk sampel wantex dengan batas bawah yaitu 0 cm sedangkan jarak
tempuh Rhodamin standarnya yaitu 5,6 cm. Selanjutnya dilakukan perhitungan Rf dengan
menggunakan rumus dimana nilai Rf yang didapatkan dari sampel terasi dan wantex yaitu
0. Nilai Rf ini menyatakan ukuran daya pisah suatu zat dengan kertas kromatografi, dimana
jika nilai Rf-nya besar berarti daya pisah zat yang dilakukan solvent (eluennya) maksimum
sedangkan jika nilai Rf-nya kecil berarti daya pisah zat yang dilakukan solvent (eluenya)
minimum. Rf yang optimum yaitu berada pada rentang 0,5–0,9.
Rf sampel kemudian dibandingkan dengan Rf Rhodamin standar. Dalam larutan
Rhodamin standar untuk terasi dan wantex diperoleh nilai Rf yang berbeda yaitu sebesar 0,
9629 dan 0,9642. Dari hasil ini dapat dilihat bahwa nilai Rf antara Rhodamin standar dengan
terasi dan wantex sangat jauh berbeda. Hal ini dapat mengindikasikan bahwa dalam sampel
terasi dan wantex tersebut tidak terdapat kandungan Rhodaminnya.
Dalam Kromatografi kertas, faktor-faktor yang dapat mempengaruhi pemisahan
komponen adalah struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan, sifat dari penyerap dan
derajat aktifitasnya, tebal dan kerataan zat penyerap, kemurnian pelarut, derajat kejenuhan,
teknik percobaan, jumlah cuplikan, temperatur, dan kesetimbangan.

H. KESIMPULAN
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa
mengidentifikasi kandungan rhodamin B pada sampel makanan dapat menggunakan
kromatografi sederhana yaitu kromatografi kertas. Hasil yang didapatkan pada kedua sampel
adalah negatif rhodamin B, dengan nilai Rf pada standar untuk terasi sebesar 0,9629 dan Rf
pada sampel terasi sebesar 0. Sedangkan Rf pada standar untuk wantek sebesar 0,9642 dan
Rf pada sampel wantex 0.
 DAFTAR PUSTAKA

Amir, Nursinah dan Chanif Mahdi. (2017). Evaluasi Penggunaan Rhodamin B pada Produk
Terasi yang Dipasarkan Di Kota Makassar. Jurnal IPTEKS PSP Vol. 4(8): 128-133.
Azmi, Ulul, Melly Novita, Ismail Sulaiman. 2017. Analisis Bahan Pewarna Sintetis Non
Pangan Rhodamin B dan Methanyl Yellow Pada Produk Saus Tomat Dan Saus Cabe Di
Kota Banda Aceh. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pertanian Unsyiah Vol. 2 No. 3: 210-215.

Djarismawati. 2004. Pendidikan Kesehatan dan Ilmu Perilaku. Jakarta: PT. Rineka
Cipta.

Ferrari, Carlo, H. Chen, R. Lavezza, C. Santinelli, I. Longo, and E. Bramanti. 2013.

Photodegradation of Rhodamine B Using the Microwave/UV/H2O2: Effect of
Temperature. International Journal of Photoenergy : 1-12.
Islam, Md. Maidul, Maharudra Chakraborty, Prateek Pandya, Abdulla Al Masum,
Neelima Gupta, Subrata Mukhopadhyay. 2013. Binding of DNA with Rhodamine B:
Spectroscopic and molecular modeling studies. Dyes and Pigments : 412-422.
Longdong, Giovani M.B, Jemmy Abidjulu, Novel S. Kojong. 2017. Analisis Zat Pewarna
Rhodamin B pada Saos Bakso Tusuk yang Beredar di Sekitar Kampus Universitas Sam
Ratulangi Manado. Jurnal Ilmiah Farmasi Vol. 6 No. 4: 28-34.

Mahindru S.N. 2000. Food Additives.New Delhi: Tata Mc Graw Hill.

Ozkantar, N., Mustafa, S., & Mustafa T. (2017). Spectrophotometric Detection of Rhodamine
B in Tap Water, Lipstick, Rouge, and Nail Polish Samples After Supramolecular
Solvent Microextraction. Turkish Journal of Chemistry, 41, 987.

Rohman A. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Yogyakarta:Graha Ilmu.