A.

INTERAKSI ANTIBODI-ANTIGEN
Interaksi antigen-antibodi disebut memiliki banyak istilah yang melibatkan banyak
komponen berbeda. Beberapa contoh termasuk istilah yang menggambarkan interaksi
antigen-antibodi pada Tabel 1. berikut:
Tabel 1. Istilah pada antigen-antibodi

Antibodi adalah molekul protein (imunoglobulin) yang memiliki satu atau lebih situs
gabungan (combining site) yang disebut paratope. Antigen adalah istilah umum untuk
molekul yang mungkin memicu generasi antibodi, dengan banyak berpotensi pada
permukaan fitur yang berbeda. Penentu antigenik (Antigenic Determinant) adalah fitur
permukaan antigen yang mana komplementer menuju ke tempat penggabungan antibody
(combining site).

Gambar 1. Epitop Antigen dan Paratop Antibodi

B. IMMUNOGLOBULIN
Antibodi termasuk dalam jenis molekul protein disebut immunoglobulin (Ig), yang
pada manusia terdiri dari populasi heterogen dari lima kelas yang berbeda atau isotipe. Setiap
kelas imunoglobulin umumnya memiliki perilaku fungsional yang berbeda, dan waktu paruh
yang berbeda. Ig dapat ditemukan dalam bentuk disekresikan dalam cairan, atau terikat
permukaan sel, seperti limfosit B. Tipe dari Limfosit B disebut limfosit B plasma
bertanggung jawab atas sekresi kelima jenis antibodi,yang terjadi sebagai bagian dari respons
klon pada klon proses seleksi.
Tabel 2. Jenis Antibodi dan Fungsinya

Clas Additional Info Functional Description

s
 IgG IgG1-IgG4 Antibodi dominan ditemukan dalam darah
dan getah bening. Antibodi dominan terlibat
dalam kekebalan material.
IgA IgA1 (serum) Antibodi dominan ditemukan dalam air liur,
IgA2 (sekretori) air mata, keringat, susu, sekresi usus, dan
kolostrum.
IgM Macroglobulin Jenis antibodi pertama yang diproduksi
selama klon respons. Terikat pada limfosit
dan serum.
IgD Terikat Terikat ke permukaan limfosit, konsentrasi
permukaan sangat rendah dalam serum.
IgE Pelindung dari Memiliki peran sebagai perlindung dari
Parasit parasit. kadar rendah dalam serum

Imunoglobulin terikat ke permukaan B-limfosit adalah fitur utama dari teori

pemilihan klon. (1) memberikan kemampuan pertahanan dalam sekresi antibodi terlarut
dengan spesifisitas yang sama dengan sel reseptor, dan (2) mengingat dan memperbaiki sel
reseptor sebagai klon sel untuk paparan di masa depan antigen. Tidak semua limfosit B
memiliki Ig permukaan terikat (biasanya disebut reseptor sel B -BCR). Native sel B
(independen antigen) mengekspresikan IgM dan IgD dalam jumlah yang kira-kira sama. Sel
B plasma tidak mengekspresikan imunoglobulin tetapi mengeluarkannya,khususnya isotipe
IgG, IgE, dan IgA. Memori Sel B dapat mengekspresikan satu dari masing-masing dari ketiga
yang disekresikan isotipe.

Gambar 2. reseptor pada sel dan ligan

C. JENIS ANTIGEN
Antigen adalah makromolekul dengan satu atau lebih penentu antigenik. Antigen
disebut juga imunogen karena menghasilkan respons imun. Molekul yang lebih kecil yang
disebut haptens bersifat penentu antigenic, meskipun mereka terlalu kecil dan harus terikat
pada permukaan molekul yang lebih besar. Antigen biasanya dinamakan sebagai molekul asal
eksternal (Eksogen), meskipun mereka juga dapat berasal daridalam host (endogen).

Tabel 3. Jenis antigen, contoh, dan asal-usulnya

Antigen eksternal yang dapat menyebabkan penyakit pada inang organisme disebut
patogen. Patogen biasanya mikroorganisme seperti virus, bakteri, dan parasite. Antigen
otomatis atau self-antigen adalah jaringan host yang memicu respons imun dan mungkin
sinyal penyakit autoimun. Antigen tumor bersifat self-antigen yang dapat membahayakan
host. Jaringan host mungkin antigen dalam contoh jaringan atau darah transplantasi dimana
jaringan yang ditransplantasikan ditolak oleh sistem imun host. Vaksin adalah antigen yang
menghasilkan kekebalan terhadap penentu antigenik yang dimiliki oleh vaksin dan
patogennya.
Alergen adalah antigen (seperti serbuk sari) yang dihasilkan dalam respon imun
ekstrim yang disebut reaksi alergi. Tolerogen adalah antigen yang menghasilkan toleransi
dari respon imun pada inang. ContohTolerogen alami adalah self-jaringan dari host. Antigen
asing bisa menjadi toleran jika diperkenalkan ke sel host di awal pengembangannya seperti
sebelum sistem kekebalan tubuh sepenuhnya berkembang.

D. PEMILIHAN ANTIBODI UNTUK MENGIKAT ANTIGEN

Pemilihan mengacu pada pemilihan antibodi dan B-reseptor sel (untuk mengikat) oleh
antigen pada teori seleksi klonal. Pemilihan antibodi terjadi pada larutan seperti darah dan
getah bening. Pemilihan reseptor limfosit biasanya terjadi di jaringan limfoid sekunder seperti
limpa, dan kelenjar getah bening.

1. Kekuatan Intramolekuler
Seleksi dalam larutan campuran antigen dan antibodi diatur oleh sifat fisik dan
kimia dari interaksi mereka, hal tersebut dinamakan gaya antarmolekul. Jika kombinasi
kekuatan yang menarik dan menolak (Afinitas) antara penentu antigenik dan combining
site antibodi lebih tertarik daripada tertolak dan cukup kuat, antigen dan antibody
membentuk ikatan kimia. Ikatan ini seperti kunci dan gembok, dimana antigen adalah
kuncinya, dan antibodi adalah gembok nya. Jumlah energi yang dibutuhkan untuk
memisahkan ikatan disebut sebagai energi ikatan.
 Tabel 4. Ikatan yang terlibat pada ikatan Ag-Ab

2. Antigenitas dan spesifitas

Kemampuan antigen untuk memicu respon kekebalan tubuh, reaktivitas, dan
kemungkinan akan mengikat ke antibodi disebut antigenisitas ataui munogenisitas
antigen. Kemampuan antibodi atau reseptor sel-B untuk mengikat dengan antigen disebut
sebagai antibody atau spesifisitas reseptor.

Gambar 3 Spesifisitas dan antigenisitas antara antigen tunggal dan antibody

Spesifisitas suatu antibody relevan dengan antibodi lain dan relative untuk
penentu antigenik. Sama halnya dengan antigen imunogenisitas relatif terhadap antigen
lainnya penentu antigenik, atau antibody.

Gambar 4 Spesifisitas dan antigenisitas pada antigen dan kelompok antibody

3. Cross-Reactivity
Generalisasi spesifisitas antibodi disebut sebagai reaktivitas silang. Reaktivitas
silang merupakan kemampuan suatu antibodi untuk bereaksi dengan antigen lain. Ada
 dua contoh utama reaktivitas silang. (1) Antigen lain memiliki penentu antigenik yang
sama, sehingga antibodi dinaikkan untuk menentuakan bereaksi terhadap antigen lain
dengan determinan yang sama. (2) Antigen lain memiliki penentu antigenik yang sama
untuk penentu yang digunakan untuk meningkatkan antibodi, dengan demikian
pengikatan parsial (cukup baik) dapat terjadi.
Semakin spesifik combining site untuk penentu antigenic, semakin khusus
pengetahuan yang diperoleh oleh sistem kekebalan tubuh dan semakin efesien responnya.
Semakin rendah spesifikasi respon, semakin digeneralisasikan pengetahuan yang
diperoleholeh sistem kekebalan tubuh, dan terbatas pada defensive coverage dari respon.
Spesifisitas dan reaktivitas silang memberikan pertukaran dalam efisiensi yang sempit
dan luas dalam respon imun.

Gambar 5. Efek dari spesifisitas dan cross-reaktivitas

4. Interaksi Monoklonal vs Poliklonal Antibodi

Tipe seleksi klon respon imun yaitu tipe oligoclonal yang memiliki beberapa klon
dengan spesifisitas tinggi dipilih oleh antigen dan bertanggung jawab untuk peningkatan
antibodi secara eksponensial yang dihasilkan respon imun. Tipe respons adalah spesifik
untuk monoklonal, atau poliklonal dengan kadar sedikit.

Gambar 6. interaksi monoklonal (oligoclonal) dengan tipikal antigen

Dengan cara yang sama seperti antibodi atau sel-B reseptor mungkin memiliki
spesifisitas tinggi atau reaktivitas silang yang tinggi, antigen mungkin memiliki efek yang
sama pada kolam sel-B. Antigen super memiliki jenderal penentu antigenik yang memicu
persentase jauh lebih besar dari kumpulan limfosit dalam yang ada disebut hiper-aktivasi
dari respon imun. Lebih baik respons monoklonal spesifik atau poliklonal kecil, daripada
responsnya besar dan sangat poliklonal.
 Gambar 7. Interaksi poliklonal dengan super-antigen

E. PENGUKURAN INTERAKSI
1. Afinitas
Afinitas mendefinisikan jumlah yang menarik dan menolak kekuatan fisik dan
kimia antara antigen penentu antigenik dan immunoglobulin combining site. Afinitas
mengukur kekuatan ikatan antara epitop dan paratop, dan biasanya digunakan untuk
mengukur secara kualitatif spesifisitas suatu imunoglobulin untuk penentu antigenik.
Pada imunologi teoritis, afinitas digunakan sebagai dasar ‘afinitas flandscape’ sebagai
respons permukaan untuk berbagai reseptor (dan dasar genetiknya) untuk penentu
antigenik.

Gambar 8. kekuatan interaksi antara penentu antigenic dan combining site

2. Valensi
Valensi mengacu pada jumlah paratope dari suatu imunoglobulin atau jumlah
epitop pada antigen. Ini mendefinisikan jumlah ikatan kimia yang mungkin terjadi antara
antigen dan suatu antibodi. Antibodi biasanya memiliki valensi dua, meskipun beberapa
isotipe memiliki lebih banyak seperti IgM. Sebuah antigen biasanya sangat polivalen
(artinya tipe antigen memiliki banyak penentu antigenik). Tipe B-limfosit juga sangat
polivalen, seperti yang sudah ada disebutkan, mungkin memiliki hingga 10⁵ reseptor.
 Gambar 9. Antigen multivalen dan antibody multivalent

3. Avidity
Avidity memberikan ukuran stabilitas kompleks yang terbentuk dari hasil
pengikatan suatu antigen dan antibodi atau antigen dan reseptor. Ukuran aviditas
termasuk jumlah afinitas untuk interaksi multivalen. Selain jumlah afinitas, aviditas
mengukur kekuatan untuk mengikat, dengan mempertimbangkan pertimbangan
tambahan seperti susunan struktural kedua molekul.

Gambar 10 - Aviditas antara antigen dan antibody

F. PEMANFAATAN ANTIGEN-ANTIBODI DI LABORATORIUM

1. Tes precipitin
Tes precipitin adalah contoh dari uji klinis berdasarkan reaksi antigen-antibodi.
Antibodi mampu mengendapkan antigen melalui ikatan multivalen, di mana 2 Fab
fragmen dalam antibodi tunggal dapat secara bersamaan mengikat 2 antigen. Matriks dari
antigen: kompleks antibodi dalam suatu larutan kemudian akan mengarah ke
pembentukan endapan yang terlihat. Pada tes precipitin, larutan antigen dan antibodi
berdifusi satu sama lain, dan terlihat sebelum terbentuk endapan ketika 2 zat terlarut
bertemu pada konsentrasi optimal.
2. Complement Fixation
Di laboratorium kesehatan masyarakat, uji pelengkap fiksasi (CF)digunakan untuk
mengetik isolat virus. Secara singkat, kehadiranantibodi spesifik dalam serum pasien
terdeteksi dengan menggunakangen, komplemen, dan sel darah merah (RBC). Jika
antibody hadir, itu akan mengikat antigen virus tertentu. Penambahan komplemen yang
berikatan dengan bentuk kompleks antigen-antibodi, yang memungkinkan sel darah
merah untuk mengendap dari serum sebagai pelet. Jika tidak ada antigen spesifik, tidak
ada kompleks terbentuk, dan komplemen akan melisis sel darah merah ketika mereka
ditambahkan.

3. Hemaglutinasi
Uji inhibisi hemaglutinasi (HI) adalah tes tidak langsung atau pasif di mana
antigen terikat ke inert substansi dan kemudian dicampur dengan serum pasien yang
mengandung antibodi. Sampel serum yang dilarutkan secara resmi ditempatkan dalam
microtiter plate yang ditambahkan antigen virus dan sel darah merah.

4. Particle Agglutination
Reaksi aglutinasi mirip dengan reaksi precipitin, tetapi mereka melibatkan antigen
atau antibodi yang terikat pada permukaan pembawa seperti manik-manik polystyrene.
Endapan yang terlihat (menggumpal) kompleks antibodi-antigen dengan manik-manik
hanya terjadi ketika molekul antigen mengandung banyak epitope mengarah ke
crosslinking dan reaksi aglutisasi yang terlihat Gambar 11.

Gambar 11. Tes aglutinasi menunjukkan negatif (seperti susu) dan

positif (berbintik-bintik)
5. Aglutinasi Lateks dan Staphylococcal
Tes aglutinasi lateks cenderung hasil false-positif karena reaksi aglutinasi
nonspesifik. Contoh metode pretreatment, seperti sentrifugalgation, boiling, atau filtrasi
dapat membantu dalam menghilangkan atau mengurangi imitasi aglutinasi nonspesifik.
Beberapa spesimen, seperti urin, dapat dikonsentrasikan dengan sentrifugasi atau
membran filtra-untuk meningkatkan sensitivitas tes.
 Dalam tes koaglutinasi stafilokokus, formalin ditambahkan untuk membunuh sel
Staphylococcus aureus digunakan untuk visualisasi sebagai pengganti manik-manik
lateks. Dinding sel organisme ini mengandung protein A, yang mengikat bagian Fc dari
antibodi IgG, meninggalkan bagian Fab tuntuk bereaksi dengan antigen spesifik.
Koaglutinasi sangat spesifik, dan sering digunakan untuk mengkonfirmasi identifikasi
koloni bakteri pada kultur plate, tetapi bukan pilihan terbaik untuk deteksi cepat antigen
dalam spesimen klinis.

6. Tes Immunoturbidimetric
Tes immunoturbidimetric mikropartikel dapat digunakan untuk pengukuran
kuantitatif obat atau biomarker dalam cairan tubuh seperti serum, plasma, atau urin.
Pengujian didasarkan pada reaksi yang disebabkan oleh ikatan antigen-antibodi. Untuk
keperluan pemantauan obat, pemeriksaan sering mencakup obat dalam sampel dan obat
dilapisi dengan mikropartikel.

7. Light-Scattering Immunoassays
Tes Nephelometric digunakan di laboratorium klinis dengan memanfaatkan fakta
bahwa kompleks antigen-antibodi dalam larutan tersebar cahaya di berbagai sudut ke arah
cahaya datang. Tes nefelometrik merupakan titik dasar yang dapat dibuat lebih sensitive
dengan menyambungkan antigen ke partikel kecil. Peningkatan partikel tes
nephelometric, dapat digunakan untuk mengukur sensitivitas C-reactive protein (CRP)
digunakan sebagai biomarker untuk kerusakan kardiovaskular.
8. Enzim Immunoassays
Immunoassay enzim adalah alat yang cepat dan sensitif untuk deteksi antigen atau
antibodi spesifik penyakit diserum pasien. Salah satu target umum dalam laboratorium
klinis adalah hepatitis B (HBV). Ada banyak serologis penanda untuk hepatitis B
termasuk antigen permukaan hepatitis (HbsAg), antibodi anti-HbsAg, hepatitis B e-
antigen (HbeAg), Antibodi IgM terhadap antigen inti HB (HBc), dan semuanya memiliki
profil waktu serologis yang berbeda sehingga memungkinkan untuk ahli immunologi
untuk menentukan tahap dan perjalanan waktu kemudahan pada setiap pasien.
9. EIA in Lateral Flow Systems
Aplikasi enzim immunoassay yang terkenal adalah immunochromatography
dimana antibodi penangkap dilapisi dengan permukaan membran berpori (nitroselulosa,
nilon, Teflon), dan sampel melewati membran. Modifikasi ini menggunakan kaset plastik
sekali pakai dengan membran melekat pada ruang tempat sampel klinis yang telah
ditambahkan.
Sistem aliran lateral berdasarkan prinsip-prinsip immunochromatography cukup
populer karena waktu analisis lebih cepat dibandingkan dengan ELISA. Metode ini
dilakukan sebagai tes kualitatif cepat sederhana untuk analit tunggal baik di laboratorium
klinis maupun di rumah. Set-up biasanya mengandung kontrol negatif dan positif untuk
memudahkan hasil interpretasi dan kontrol kualitas. EIA yang terikat membran (aliran
lateral). Tes aliran biasanya digunakan untuk deteksi hormon secara cepat (hCG, LH),
virus (hepatitis B dan C), bakteri (Streptococcus, Chlamydia, Helicobacter pylori), racun
bakteri, parasite (malaria), obat-obatan terapeutik dan terlarang, serta biomarker seperti
troponin (penyakit kardiovaskular) atau prostat anti-spesifikgen (PSA, kanker prostat)
10. Immunofluorescence Assays
Di laboratorium klinis, tes antibodi fluoresen saat ini digunakan untuk mendeteksi
infeksi bakteri, virus, dan jamur serta untuk bioimaging sampel jaringan. Sejumlah
respiratory Virus dapat dideteksi secara langsung dalam sampel nasofaring menggunakan
tes Direct fluorescent antibody (DFA). Teknik ini biasa digunakan untuk Respiratory
syncytial Virus (RSV), influenza A dan B, dan adenovirus. Melalui pengembangan alat
imunokimia, diagnosis cepat dari infeksi ini sekarang dimungkinkan di fasilitas point-of-
care (POC). Tes imunokimia fluoresensi juga berhasil digunakan untuk diagnosis
penyakit autoimun seperti lupus.

11. Fluorescence Polarization Immunoassay

Polarisasi fluoresensi immunoassay (FPIA) didasarkan pada kapasitas molekul
fluorescein untuk memancarkan polarisasi bidang cahaya pada eksitasi. Di FPIA,
senyawa berlabel fluorescein (obat) bersaing dengan senyawa tidak berlabel untuk situs
ikatan antibody spesifik. FPIA saat ini banyak digunakan dalam pemantauan obat
terapeutikskema di rumah sakit dan fasilitas perawatan.
12. Enzyme Multiplied Immunoassay—EMIT
Mirip dengan FPIA, enzyme multiplied immunoassays (EMIT) memiliki aplikasi
luas dalam terapi dan pemantauan obat-obatan terlarang. Dalam jenis pengujian ini,
sampel yang menarik dengan analit (obat) ditambahkan ke sejumlah enzim-terikat obat,
dan antibodi anti-obat. Setelah penambahan substrat, pengukuran absorbansi diambil pada
interval waktu untuk menentukan kecepatan reaksi enzim. Semakin banyak obat bebas
dalam sampel, semakin cepat reaksi enzim karena hanya kompleks enzim-obat yang
terikat mampu mengikat strate (Gambar 12). Metode ini dapat digunakan untuk seluruh
darah,serum, atau urin. Enzim yang dikalikan immunoassay dapat sepenuhnya otomatis
dengan throughput sampel klinis yang cepat khususnya di laboratorium yang
mengkhususkan dalam memantau obat terapeutik seperti cyclosporin pada penerima
transplantasi.

Gambar 12. Enzim multipied immunoassay (EMIT) untuk pengukuran dengan obat bebas
dalam sampel yang melibatkan jumlah enzim-obat terikat, dan antibodi anti-obat

13. Immunostaining
Imunostaining adalah istilah yang berlaku untuk setiap penggunaan antibodi
digabungkan dengan enzim atau pewarna untuk mendeteksi protein tertentu atau antigen
dalam sampel. Aplikasi yang paling umum adalah pemilihan gel elektrophoresis
(immunoblotting, Western Blot) atau di dalam jaringan irisan pewarnaan
imunohistokimia. Misalnya, standar konfirmasi untuk tes skrining reaktif anti-HIV
hasilnya adalah uji Western Blot yang memisahkan protein dengan berat molekul
dilakukan dengan elektroforesis. Gel itu kemudian dihapuskan pada membran yang
 memungkinkan transfer virus protein ke membran. Membran kemudian diinkubasi
dengan serum pasien. Antibodi spesifik HIV berikatan dengan profil virus, pada membran
dan dapat dideteksi menggunakan enzim-berlabel antibodi sekunder atau sistem deteksi
biotin-avidin.
Marker fluoresens dapat diterapkan ke berbagai pilihan tes termasuk histokimia
dan microarray jaringan untuk deteksi protein spesifik seperti penanda kanker dalam sel
atau jaringan dan untuk visualisasi sel dalam pengukuran flow cytometer. Beberapa agen
imunostaining dapat diterapkan dalam satu tahap, di mana antibodi primer terkait
langsung dengan agen pewarnaan, tetapi dalam banyak kasus antibodi primer ditargetkan
oleh antibodi "sekunder" yang diberi label sehingga memberikan sinyal sebagai ikatan
Antibodi sekunder dengan antibodi primer seperti gambar dibawah ini.

Gambar 13. Ikatan Ab primer dengan Ab sekunder

14. Chemiluminescence Assays

Uji chemiluminescence (CL) sangat populer dan banyak digunakan dalam
berbagai format pengujian. Chemiluminescence mengacu pada emisi cahaya yang terjadi
ketika media meluruh dari keadaan state ke keadaan dasar. Sementara fluoresensi
bereaksi dengan memanfaatkan radiasi insiden untuk energi, chemiluminescence energi
dihasilkan dari reaksi kimia, paling sering suatu reaksi oksidasi. Chemiluminescence
dapat diterapkan baik sebagai label langsung atau senyawa chemiluminescent dapat
digunakan sebagai substrat untuk immunoreactant berlabel enzim. Chemilumines paling
umum adalah ester acridinium dan turunan dari isolasinol. Senyawa Acridinium dapat
dikonjugasikan ke salah satu antibodi atau antigen.
15. Optical Immunoassays
Immunoassay optik (OIA) didasarkan pada interaksikompleks antigen-antibodi
pada permukaan lembam. Ikatan spesifikantibodi meningkatkan ketebalan reaktan di
permukaan, dan mengubah warna cahaya yang dipantulkan dari permukaan.
Optikimmunoassays digunakan di banyak laboratorium untuk mendeteksi kelompok
AStreptococcus (GAS) pada anak-anak serta virus pernapasan.