Penentuan Kadar Protein Crude Enzim Lipase

Pembuatan Reagen Biuret

Penentuan kadar protein dilakukan dengan metode Biuret. Reagen Biuret dibuat dari campuran
0,375 g Tembaga Sulfat (CuSO4) dan 1,51 g K-Na Tartat kemudian dilarutkan dalam 100 mL
aquades dengan penambahan larutan NaOH 7,5 % (b/v). Larutan tersebut dimasukkan dalam
labu ukur 250 mL dan ditambahkan aquades sampai tanda batas.

Pembuatan Larutan Standar

Larutan standar I, 250 mg Bovine Serum Albumin (BSA) ditambahkan aquades dalam labu
ukur 50 mL, sehingga diperoleh C = 5000 µg/mL. Larutan standar II, 1000 mg Bovine Serum
Albumin (BSA) ditambahkan aquades dalam labu ukur 50 mL, sehingga diperoleh C = 20000
µg/mL.

Kurva Absopsi

3 mL larutan standar I ditambahkan 6 mL Reagen Biuret diencerkan dengan aquades dalam

labu ukur 10 mL. Diukur Abropsi pada Panjang gelombang 553,36 nm dengan
Spektrofotometer.

Pembuatan Kurva Kalibrasi Bovine Serum Albumin (BSA)

Kurva standar dibuat dengan membuat larutan BSA dengan konsentrasi 1000, 1500, 2000,
2500, 3000, 3500, 4000, dan 4500 µg/mL. Sebanyak 0,5 ; 0,75 ; 1 ; 1,25 ; 1,5 ; 1,75 ; 2 dan
2,25 mL larutan standar II ditambahkan dengan reagen biuret masing-masing 6 mL dan
diencerkan dengan aquades dalam labu ukur 10 mL. Diukur Absorbansi pada Panjang
gelombang 553,36 nm dengan Spektofotometer.

Pengukuran Kadar Protein

3 mL larutan sampel dan 6 mL reagen biuret dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL kemudian
ditambahkan aquades sampai tanda batas. Diukur Absorbansi pada Panjang gelombang 553,36
nm dengan Spektofotometer.

Perhitungan kadar protein enzim dilakukan dengan mensubtitusikan absorbansi larutan yang
diperoleh ke dalam persamaan regresi kurva kalibrasi standar tersebut :

𝑌 = 𝑎𝑋 + 𝑏

Keterangan : Y = Absorbansi Sampel

X = Konsentrasi Protein Sampel

a = Slope

b = Intersept