PENETAPAN KADAR

COCCI PROS
A. Sulfaquinoxaline
Spektrofotometer UV-Vis (λ=385 nm) (Protap COCCI PROS)
Pelarut : NaOH 0,1 N
a. Larutan Standar:
Timbang 40 mg standar Sulfaquinoxaline, masukkan ke dalam labu ukur 100 mL
larutkan dengan pelarut, sonikasi selama ± 15 menit dan encerkan dengan pelarut
hingga tanda batas, homogenkan. Kemudian ambil 5 mL larutan, masukkan larutan ke
dalam labu ukur 100 mL dan encerkan dengan pelarut hingga tanda batas,
homogenkan.
b. Larutan Sampel:
Timbang dengan seksama 1,25 gram sampel, masukkan ke dalam labu ukur 100 mL
larutkan dengan pelarut, sonikasi selama ± 15 menit, encerkan dengan pelarut
sampai tanda batas, homogenkan. Kemudian ambil 5 mL larutan, masukkan larutan ke
dalam labu ukur 100 mL dan encerkan dengan pelarut hingga tanda batas,
homogenkan.
c. Lakukan pemeriksaan kadar dengan menggunakan alat spektrofotometer untuk
mendapatkan nilai absorban dari larutan sampel:
| | Ws Bt 1
% Sulfaquinoxaline= ¿ x x Fsp x x x % kadar standar ¿
Ls Fst Wu ZA
Keterangan :
Abs : Nilai absorban
Ls : Luas puncak larutan standar
Ws : Bobot standar (mg)
Fst : Faktor pengenceran standar
Fsp : Faktor pengenceran sampel
Bt : Berat teoritis (mg)
Wu : Bobot sampel (mg)
ZA : Kandungan zat aktif dalam sampel
Spefikasi : tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110%

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Journal (Sakano, 1981)

Kromatografi cair ALC/GPC 244 dilengkapi dengan mode 440 UV detector (254 nm)
Fase Diam : Kolom C18 Fase Terbalik (3 cm x 4,6 mm I.D.)
Fase Gerak : 0,05 M buffer fosfat (pH 6.0):asetonitril (3:1)
Injeksi : 10-50 µL
Laju alir : 1,0 ml/min
Waktu retensi : 13,5 menit
Temperatur kolom : 22-25°C
a. Larutan Standar:
50 mg Sulfaquinoxaline ditimbang dengan akurat ke dalam labu ukur 50 mL.
Sulfaquinoxaline dilarutkan dalam asetonitril 80%. Larutan diencerkan dengan
asetonitril 50% dengan konsentrasi yang diinginkan dan stabil selama setidaknya 1
minggu pada suhu kamar. Larutan disaring menggunakan mikrofilter 0,4 µm kemudian
disuntikkan untuk mendapatkan kurva kalibrasi.
b. Larutan Sampel:
Diaveridine dan Sulfaquinoxaline dipisahkan dan dihomogenisasi. sekitar 5 g
homogenat ditimbang ke dalam tabung centrifuge 50 mL. homogenat diatur hingga pH
6,0 dengan menambahkan 1 mL campuran 1N AcOH : AcONa (1 : 3), kemudian 20 mL
kloroform ditambahkan dan campuran dikocok kuat-kuat selama 5 menit. setelah
sentrifugasi, 5 mL fase organik dipindahkan ke tabung centrifuge berbentuk kerucut
10 mL dan diuapkan menjadi kering di bawah tekanan rendah pada suhu kamar. residu
dilarutkan dalam 100 µl asetonitril 50%, dan 10 µl diinjeksikan ke kolom.

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (USP, 2015) hal. 5401

Fase gerak: 2 g/L amonium fosfat dalam campuran asetonitril, asam asetat glasial,
tetrahidrofuran, amonium hidroksida, dan air (400: 10: 5: 2: 583). Lewat filter 0,5
mm atau ukuran pori yang lebih halus
Larutan standar: 0,06 mg / L USP sulfaquinoxaline RS dalam 0,01 N natrium hidroksida
Larutan sampel: 0,06 mg / mL sulfaquinoksalin dalam 0,01 N natrium hidroksida
Sistem kromatografi
Mode: LC
Detektor: UV 254 nm
Kolom: 4 mm x 25 cm, bungkus L1
Laju alir: 1 ml / menit
ukuran injeksi: 15 uL
Kesesuaian sistem
Sampel: Larutan standar
 persyaratan kesesuaian
Faktor Tailling: NMT 1,2
Simpangan baku relatif: NMT 1%
Analisis
Sampel: solutio standar dan sampel solutio
Menghitung persentase sulfaquinoxaline
(C14H12N4O2S) dalam porsi sulfaquinoxaline yang diambil
ru cs
Hasil : x x 100
rs Cu
Keterangan:
ru = respons puncak dari larutan sampel
rs = respon puncak dari larutan standar
Cs = konsentrasi USP sulfaquinoxaline RS dalam larutan standar (mg/mL)
Cu = konsentrasi sulfaquinoxaline dalam larutan sampel (mg/mL)
kriteria penerimaan: 98% -101% berdasarkan kering

Keterangan : Penetapan Kadar (FOHI, 2008) hal. 346-347 = Titrasi

B. Diaveridine (Li, 2015)

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Journal (Sakano, 1981)
Kromatografi cair ALC/GPC 244 dilengkapi dengan mode 440 UV detector (254 nm)
Fase Diam : Kolom C18 Fase Terbalik (3 cm x 4,6 mm I.D.)
Fase Gerak : 0,05 M buffer fosfat (pH 6.0):asetonitril (3:1)
Injeksi : 10-50 µL
Laju alir : 1,0 ml/min
Waktu retensi : 7,5 menit
Temperatur kolom : 22-25°C
a. Larutan Standar:
50 mg diaveridine ditimbang dengan akurat ke dalam labu ukur 50 mL. Diaveridine
dilarutkan dalam asetonitril 50% (asetonitril:air = 1:1, v/v). Larutan diencerkan
dengan asetonitril 50% dengan konsentrasi yang diinginkan dan stabil selama
setidaknya 1 minggu pada suhu kamar. Larutan disaring menggunakan mikrofilter 0,4
µm kemudian disuntikkan untuk mendapatkan kurva kalibrasi.
b. Larutan Sampel:
Diaveridine dan Sulfaquinoxaline dipisahkan dan dihomogenisasi. sekitar 5 g
homogenat ditimbang ke dalam tabung centrifuge 50 mL. homogenat diatur hingga pH
6,0 dengan menambahkan 1 mL campuran 1N AcOH : AcONa (1 : 3), kemudian 20 mL
kloroform ditambahkan dan campuran dikocok kuat-kuat selama 5 menit. setelah
sentrifugasi, 5 mL fase organik dipindahkan ke tabung centrifuge berbentuk
kerucut 10 mL dan diuapkan menjadi kering di bawah tekanan rendah pada suhu
kamar. residu dilarutkan dalam 100 µl asetonitril 50%, dan 10 µl diinjeksikan ke
kolom.

Keterangan : Penetapan Kadar (FOHI, 2008) hal. 89-91 = Titrasi

Penetapan Kadar (USP, 2015) = Tidak ada
PENETAPAN KADAR
Kolerapros
A. Oxytetracycline
Spektrofotometri UV-Vis (λ=353 nm) (Protap Kolerapros)
Pelarut : HCl 0,1 N
a. Larutan Standar:
Timbang 20 mg standar Oxytetracycline HCl, masukkan ke dalam labu ukur 100 mL
larutkan dengan pelarut, sonikasi selama ± 15 menit dan encerkan dengan pelarut
hingga tanda batas, homogenkan. Kemudian ambil 5 mL larutan, masukkan larutan ke
dalam labu ukur 50 mL dan encerkan dengan pelarut hingga tanda batas, homogenkan.
b. Larutan Sampel:
Timbang dengan seksama 200 mg sampel, masukkan ke dalam labu ukur 100 mL larutkan
dengan pelarut, sonikasi selama ± 15 menit, encerkan dengan pelarut sampai tanda
batas, homogenkan. Kemudian ambil 5 mL larutan, masukkan larutan ke dalam labu
ukur 50 mL dan encerkan dengan pelarut hingga tanda batas, homogenkan.
c. Lakukan pemeriksaan kadar dengan menggunakan alat spektrofotometer untuk
mendapatkan nilai absorban dari larutan sampel:
|x|Ws x Fsp x Bt x 1 x 460.474 % kadar standar
% Sulfaquinoxaline=
Ls x Fst x Wu x ZA x 496.90
Keterangan :
Abs : Nilai absorban
Ws : Bobot standar (mg)
Ls : Luas puncak larutan standar
Fst : Faktor pengenceran standar
Fsp : Faktor pengenceran sampel
Bt : Berat teoritis (mg)
Wu : Bobot sampel (mg)
ZA : Kandungan zat aktif dalam sampel
Spefikasi : Kadar tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110%.

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Journal (Prčetić, 2011)

Sistem Agilent Technologies 1200 seri dilengkapi dengan pompa kuartener, degasser
vakum mikro, thermostated autosampler, kolom thermostated kompartemen, dan detektor
array dioda
Fase diam : Kolom C18 (50 × 4.6 mm id, 1,8 m ukuran partikel) pada suhu 20°C.
Fase gerak : 0,1% asam heptafluorobutyric (HFBA) dengan amonia (pH 2,5) dalam air,
dan asetonitril
Laju Alir : 0,4 ml/menit
Injeksi : 10 µL
Waktu retensi : 9,95 menit
Temperatur kolom : 50°C.
a. Larutan Standar:
Oxytetracycline hydrochloride untuk pengujian linearitas yang dibuat dengan
mengencerkan larutan stok (500 ug/mL) dengan air untuk berbagai konsentrasi 10-
120 ug/mL. Pengujian ketepatan metode analisis oxytetracycline, tiga seri berisi
10, 50, dan 120 mg/mL oxytetracycline, dengan enam larutan standar, dibuat dari
larutan standar (500 ug/mL).
b. Larutan Sampel :
Larutan sampel Neomycin, mengandung 71,5 mg neomycin sulfat dalam 1 g bubuk, yang
dibuat dengan melarutkan sampel dalam air untuk konsentrasi kerja 50 ug/mL.
Larutan sampel dari Kolerapros, perumusan yang berisi 71,5 mg neomycin sulfat dan
100 mg oxytetracycline hydrochloride dalam 1 g bubuk, yang dibuat dengan
melarutkan sampel dalam air untuk mendapatkan larutan 50 ug/mL neomycin sulfat
dan 50 ug/mL oxytetracycline hydrochloride. Sampel disuntikkan ke sistem HPLC.

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (USP, 2015) hal. 4722-4723

Larutan Tetrabutylammonium hydrogen sulfate - Larutkan 1 g tetrabutylammonium
hydrogen sulfate dalam 100 mL air. Sesuaikan dengan 1 N natrium hidroksida ke pH 7,5
Larutan Edetate disodium - Larutkan 0,04 g edatate disodium dalam 100 mL air.
Sesuaikan dengan 1 N natrium hidroksida ke pH 7,5
pH 7,5 Buffer fosfat - Siapkan campuran 0,33 M kalium fosfat dibasik dan 0,33 M
natrium fosfat monobasa (85:15). Sesuaikan, jika perlu, dengan menambahkan lebih
banyak komponen yang sesuai ke pH 7,5
Fase gerak - Pindahkan 200 mL air, 50 g alkohol butil tersier ke labu ukur 1000 mL.
Tambahkan 60 mL pH 7,5 buffer fosfat, 50 mL larutan tetrabutil ammonium hidrogen
sulfat, dan 10 mL larutan edetate disodium, dan encerkan dengan air hingga volume.
Degas sebelum digunakan. Lakukan penyesuaian jika perlu.
Persiapan standar - Larutkan kuantitas USP Oxytetracycline RS yang ditimbang secara
akurat dalam asam hidroklorat 0,01 N untuk mendapatkan larutan yang memiliki
konsentrasi yang diketahui sekitar 0,22 mg / mL.
Kesesuaian sistem larutan - Siapkan larutan tetrasiklin hidroklorida dalam asam
hidroklorat 0,01 N yang mengandung sekitar 0,2 mg/mL. Campurkan 3 mL larutan ini dan
1,5 mL sediaan standar, dan encerkan dengan air hingga 25 mL.
Persiapan pengujian - Pindahkan sekitar 44 mg oksitetrasiklin ke labu ukur 200 mL,
tambahkan sekitar 25 mL asam hidroklorat 0,01 N ke volume, dan campur.
Sistem kromatografi - Kromatografi cair dilengkapi dengan detektor 254 nm dan kolom
4,6 mm x 25 cm yang berisi kemasan L21 dan dipertahankan pada 60±2 o. laju alir
sekitar 1 mL/menit. Larutan kromatografi kesesuaian sistem, dan catat respon puncak
sebagaimana diarahkan untuk prosedur: waktu retensi relatif sekitar 0,6 untuk
oxytetracycline dan 1 untuk tetracycline, dan resolusi, R, antara puncak
oxytetracycline dan puncak tetracycline tidak kurang dari 5. Kromatografi persiapan
standar, dan catat respons puncak sesuai petunjuk untuk prosedur: faktor tailing
tidak lebih dari 1,25, dan standar deviasi relatif untuk injeksi ulangan tidak lebih
dari 1%.
Prosedur - (Gunakan area puncak di mana respons puncak diindikasikan.) Suntikan
secara terpisah volume yang sama (sekitar 20 ul) dari persiapan standar dan
persiapan pengujian ke dalam kromatograf, catat kromatograf, dan ukur respons untuk
puncak utama. Hitung kuantitas, dalam ug, dari C 22H24N2O9 dalam setiap mg
oxytetracycline yang diambil dengan rumus:
CP ru
200( x )
W rs
Yang mana C konsentrasinya, dalam mg / mL, USP oxytetracycline RS dalam persiapan
standar, P adalah potensi yang ditentukan, dalam ug / mg, dari USP oxytetracycline
RS; W adalah berat, dalam mg, dari oxytetracycline yang diambil untuk menyiapkan
preparasi assay, dan ru dan rs adalah respon puncak oxytetracycline yang diperoleh
masing-masing dari preparasi assay dan preparasi standar.
 
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (FOHI, 2008) hal. 247 – 249
Larutan uji: Larutkan dan encerkan 20 mg zat uji dalam asam hidroklorida 0,01 M
sampai batas volume 25 mL
Larutan Standar
a. Larutkan dan encerkan 20 mg standar oksistetrasiklin dalam asam hidroklorida 0,01
M sampai volume 25 mL.
b. Larutkan dan encerkan 20 mg standar 4-epioksitetrasiklin dalam asam hidroklorida
0,01 M sampai batas volume 25 mL.
c. Larutkan dan encerkan 25 mg standar tetrasiklin hidroklorida dalam asam
hidroklorida 0,01 M sampai 25 mL.
d. Larutkan 8 mg standar α-apo-oksitetrasiklin dalam 5 mL NaOH 0,01 M dan encerkan
dengan HCL 0,01 M sampai volume 100 mL.
e. Larutkan 8 mg standar β-apo-oksitetrasiklin dalam 5 mL NaOH 0,01 M dan encerkan
dengan HCl 0,01 M sampai volume 100 mL.
f. Campur 1,5 mL larutan standar (a), 1 mL larutan standar (b), 3 mL larutan standar
(c), 3 mL larutan standar (d), 3 mL larutan standar (e) dan encerkan dengan HCl
0,01 M sampai batas volume 25 mL.
g. Campuran 1 mL larutan standar (b), 4 mL larutan standar (c), 40 mL larutan
standar (e) dan encerkan dengan HCl 0,01 M sampai batas volume 200 mL.
Kolom: Kopolimer stiren-divinilbenzen (8 um), ukuran 0,25 m x 4,6 mm atau yang
sesuai suhu 60oC.
Fase gerak A: Larutkan dan encerkan 30 g 2-metil-2-propanol dengan 200 mL air,
tambah 60 mL larutan dapar fosfat 0,33 M pH 7,5, 50 mL tetrabutilamonium hidrogen
sulfat (10 g/L, atur pH 7,5 dengan NaOH) dan 10 mL larutan Na EDTA (0,4 g/L, atur pH
7,5 dengan NaOH) dan encerkan dengan air sampai batas volume 1000 mL
Fase gerak B: Larutkan dan encerkan 100 g 2-metil-2-propanol dengan 200 mL air,
tambah 60 mL larutan dapar fosfat 0,33 M pH 7,5, 50 mL tetrabutilamonium hidrogen
sulfat (10 g/L, atur pH 7,5 dengan NaOH) dan 10 mL larutan Na EDTA (0,4 g/L, atur pH
7,5 dengan NaOH) dan encerkan dengan air sampai batas volume 1000 mL.
Laju alir: 1 mL/menit
Detektor: Spektrofotometer panjang gelombang 254 nm.
Injek: 20 ul larutan uji dan larutan standar (f) dan (g).
Kesesuaian sistem larutan standar: resolusi minimum 4 antara puncak ketidak murnian
A (puncak ke-1) dan oksitetrasiklin (puncak ke-2), minimum 5 antara puncak
oksitetrasiklin dan antara ketidak murnian B (puncak ke-3), dan minimum 3,5 antara
puncak ketidak murnian D (puncak ke-4) dan ketidak murnian E (puncak ke-5). Jika
diperlukan, lakukan penyesuaian perbandingan fase gerak A dan B atau atur program
elusi gradien.
Faktor simetri: Maksimum 1,25 untuk puncak oksitetrasiklin.
B. Neomycine
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Journal (Prčetić, 2011)
Sistem Agilent Technologies 1200 seri dilengkapi dengan pompa kuartener, degasser
vakum mikro, thermostated autosampler, kolom thermostated kompartemen, dan detektor
array dioda
Fase diam : Kolom C18 (50 × 4.6 mm id, 1,8 m ukuran partikel) pada suhu 20°C.
Fase gerak : 0,1% asam heptafluorobutyric (HFBA) dengan amonia (pH 2,5) dalam air,
dan asetonitril
Laju Alir : 0,5 ml/menit
Injeksi : 10 µL
Waktu retensi : 10,1 menit
Temperatur kolom : 50°C.
b. Larutan Standar:
Timbang 500 ug/mL standar Neomycin sulfat, dibuat dengan melarutkan zat standar
dalam air. Uji kurva kalibrasi (kisaran 10-120 μg/mL). Tiga seri berisi 10, 50,
dan 120 mg / mL neomycin, dengan enam larutan standar, disiapkan dan disuntikkan
untuk menguji ketepatan metode.
c. Larutan Sampel :
Larutan sampel Neomycin, mengandung 71,5 mg neomycin sulfat dalam 1 g bubuk, yang
dibuat dengan melarutkan sampel dalam air untuk konsentrasi kerja 50 ug/mL.
Larutan sampel dari Kolerapros, perumusan yang berisi 71,5 mg neomycin sulfat dan
100 mg oxytetracycline hydrochloride dalam 1 g bubuk, yang dibuat dengan
melarutkan sampel dalam air untuk mendapatkan larutan 50 ug/mL neomycin sulfat
dan 50 ug/mL oxytetracycline hydrochloride. Sampel disuntikkan ke sistem HPLC.

(USP, 2015)
Lanjutkan sebagaimana diarahkan dengan antibiotik - uji mikroba, menggunakan volume
larutan oral yang diukur secara akurat, diencerkan secara kuantitatif dengan buffer
No. 3 untuk menghasilkan larutan yang memiliki konsentrasi neomisin. Secara
kuantitatif encerkan larutan stok ini dengan buffer No. 3 untuk mendapatkan
pengenceran uji yang memiliki konsentrasi yang dianggap sama dengan tingkat dosis
median standar.

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (FOHI, 2008) hal. 230-231

Larutan uji: Larutkan dan encerkan 25 mg zat uji dalam fase gerak sampai volume 50
mL.
Larutan Standar:
a. Larutkan dan encerkan 25 mg standar Framisetin sulfat dalam fase gerak sampai
batas volume 50 mL.
b. Encerkan 5 mL larutan standar (a) dengan fase gerak sampai batas volume 100 mL.
c. Encerkan 1 mL larutan standar (a) dengan fase gerak sampai batas volume 100 mL.
d. Larutkan isi vial standar Neamin 0,5 mg dalam fase gerak sampai batas volume 50
mL
e. Larutkan dan encerkan 10 mg standar Neomisin sulfat dalam fase gerak sampai batas
volume 100 mL.
Kolom: Silika gel oktadesilsilik (basa tidak aktif) 5 um, ukuran 25 cm x 4,6 mm atau
yang sesuai suhu 25oC.
Fase gerak: Campurkan 20 mL asam trifluoro asetat, 6 mL larutan natrium hidroksida
bebas karbonat dan 500 mL air, encerkan dengan air sampai batas volume 1000 mL.
Laju alir: 0,7 mL/menit
Larutan pos kolom: Larutkan NaOH bebas karbonat, encerkan 1 dari 25 (sebelumnya
hilangkan gas menggunakan 375 uL)
Laju alir pos kolom: 0,5 mL/menit
Detektor: Amperometrik elektroda indikator emas, elektroda standar perak atau perak
klorida dan elektroda bantu baja-tahan karat adalah badan sel, berturut-turut 0,00 V
pendeteksian, + 0,8 V oksida dan – 0,6 V pengurangan potensial dengan jangka waktu
sesuai terhadap instrumen yang digunakan
Injek: 10 uL larutan uji dan larutan standar (b), (c), (d) dan e
Waktu uji: 1,5 kali waktu tambat neomisin B
Waktu tambat relatif: Standar neomisin B sekitar 10 menit, ketidak murnian A sekitar
0,65, ketidak murnian C sekitar 0,9, ketidak murnian G sekitar 1,1.
Kesesuaian sistem: Resolusi minimum 2 antara puncak ketidak murnian C dan neomisin B
pada kromatogram yang diperoleh dengan larutan standar (e). Jika diperlkukan, atur
volume larutan NaOH bebas karbonat dalam fase gerak.
PENETAPAN KADAR
Biopros TP OS
A. ATP
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (USP, 2015) hal. 2062-2063
Buffer: 6,8 g/L pottasium hidrogen sulfat dan 3,4 g/L tetrabutylammonium hidrogen
sulfat dalam larutan yang disiapkan. Pindahkan sejumlah kalium hidrogen sulfat dan
tetrabutil amonium hidrogen sulfat yang sesuai ke labu volumetrik yang sesuai, dan
larutkan dalam 90% air pada labu. Sesuaikan dengan potasium hidroksida 2N hingga pH
6,5 dan cairkan dengan air hingga batas volume.
Fase gerak: Buffer dan air (60:40)
Larutan sesuai sistem: masing-masing 4 ug/mL USP Adenosine RS dan inosin dalam fase
gerak
Larutan Standar: 0,2 mg/mL USP Adenosine RS dalam fase gerak
Larutan Sampel: 0,2 mg/mL adenosin dalam fase gerak
Sistem kromatografi
Mode: LC
Detektor: UV 254 nm
Kolom: 4,6 mm x 25 cm; 5 um mengepak L1
laju alir: 1,5 mL / menit
Waktu Retensi: NLT 1,5 menit puncak adenosine
Kesesuaian sistem
Sampel: kesesuaian sistem larutan dan larutan standar
Kesesuaian persyaratan
Resolusi: NLT 1,5 antara adenine dan inosine, kesesuaian sistem larutan
Tailing factor: larutan NMT 2.0 Standar
Standar Deviasi Relatif: NMT 0,7%, larutan standar
Analisis
Sampel: Larutan standar dan larutan sampel hitung persentase adenosin (C 10H13N5O4)
dalam porsi adenosin yang diambil:
Ru Cs
Hasil : x x 100
Rs Cu
Keterangan:
Ru = respon puncak dari solusi sampel
Rs = respon puncak dari solusi standar
Cs = persetujuan USP Adenosine RS dalam larutan standar (mg / mL)
Cu = Konsentrasi adenosin dalam larutan smple (mg / mL)
Kriteria penerimaan = 98% - 102% berbasis kering

B. Vitamin B12 (FI IV, 1995) hal. 263-264. (USP, 2015) hal. 2966-2967 (FOHI, 2008) hal.
429-430
Spektrofotometer UV-Vis (λ=361 nm)
a. Larutan standar
1) Timbang 30 mg standar vitamin B12, masukkan kedalam labu ukur 100 mL larutkan
dengan purified water lalu sonikasi selama ±15 menit dan encerkan dengan
purified water sampai tanda batas, homogenkan.
2) Pipet 5 mL larutan masukkan kedalam labu ukur 50 mL dan encerkan dengan
purified water sampai tanda batas, homogenkan.
b. Larutan sampel
1) Timbang 30 mg sampel, masukkan ke dalam labu ukur 100 mL larutkan dengan
purified water lalu sonikasi selama ±15 menit dan encerkan dengan purified
water sampai tanda batas, homogenkan.
2) Pipet 5 mL larutan masukkan kedalam labu ukur 50 mL dan encerkan dengan
purified water sampai tanda batas, homogenkan.
c. Ukur larutan standar dan sampel dengan Spektrofotometer UV-Vis λ=361 nm dan
hitung dengan rumus:
Au x Ws x % kadar standar
% Vitamin B 12=
As x Wu
Keterangan :
Au : Luas puncak larutan sampel
As : Luas puncak larutan standar
Ws : Bobot standar (mg)
Wu : Bobot sampel (mg)
Spesifikasi : mengandung tiak kurang dari 96% dan tidak lebih dari 100,5%.
C. Mg-aspartat (British Pharmacopeia Vol. II, 2008) hal. 1347-1348 (FOHI, 2008) 407-408
Titrasi
Titran : Na2EDTA 0,1 M
Titrat : Sampel
Timbang secara seksama 260 mg sampel, larutkan dalam aquades tambahkan 10 mL Dapar
ammonia – Amonium Klorida LP, titrasi dengan Na 2EDTA 0,1 M
1 mL Na2EDTA setara dengan 28,85 mg Magnesium Aspartat
Spefikasi : kadar antara 98-102 %.

D. K-aspartat (British Pharmacopeia Vol. I & II, 2009) hal. 4813-4815

Titrasi
Titran : Asam perklorat 0,1 M
Titrat : Sampel
Larutkan 70 mg sampel dalam 5 ml asam format R anhidrat, tambahkan 50 ml asam asetat
anhidrat R. Titrasi dengan asam perklorat 0,1 M, tentukan titik akhir secara
potensiometri.
1 ml asam perklorat 0,1 M setara dengan 8,56 mg C 4H6KNO4.

E. Sodium selenit (FI V, 1995) hal. 1186; (USP, 2015) hal. 1870
Titrasi
Titran : Iodium 0,1 N
Titrat : Sampel
Timbang seksama lebih kurang 180 mg sampel, yang telah dikeringkan pada suhu 120 oC
hingga bobot tetap, larutkan dalam 50 mL air dalam labu bertutup kaca. Tambahkan 3
gram Kalium Iodida P dan 5 mL Asam Klorida P, tutup labu dan diamkan 10 menit.
Tambahkan 50 mL air, 50 mL Natrium Tiosulfat 0,1 N dan 3 mL Kanji LP, segera titrasi
dengan iodium 0,1 N hingga warna coklat kekuningan.
1 mL Iodium 0,1 N setara dengan 4,323 mg Natrium Selenit
Spefikasi : tidak kurang dari 98% dan tidak lebih dari 101%

AAS (Spektofotometer Serapan Atom) Journal (Mahmoud, 2012)

AAS 6800, Shimadzu, Jepang. Ini dilengkapi dengan pembakar asetilena oksida nitrat,
lampu katoda berongga digunakan untuk Se, panjang gelombang 196 nm, lampu (mA) 16,
volume sampel 10 ul, gas argon selubung, pengeringan waktu 30 detik, ashing temp
10000C, suhu atomisasi 2000 0C, waktu atomisasi 3 detik. Grafit metode tungku

F. Glysin (FI IV, 1995) hal. 499-500 (USP, 2015) hal. 3694
Titrasi
Sampel : 150 mg glisin
Blanko : 100 mL asam asetat glasial P
sistem titrimetik
Mode : titrasi langsung
Titran : 0,1 N asam perklorat VS
Titik akhir titrasi: visual
Analisis :
Larutkan sampel dalam 100 mL asam asetat glasial, dan tambahkan 1 tetes kristal
violet TS. titrasi dengan titran ke titik akhir hijau. melakukan penentuan blanko.
Menghitung persentase glisin (C 2H5NO2) dalam sampel yang diambil
(Vs – V 8) x N x F
Hasil : x 100
W
Keterangan :
Vs = Volume titran yang dikonsumsi sampel (mL)
V8 = Volume titran yang dikonsumsi blanko (mL)
N = Normalitas aktual dari titran (mEq/mL)
F = Faktor ekivalensi, 75,07 mg/mEq
W = Berat sampel
Kriteria penerimaan = 98,5% - 101,5% berbasis kering

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) (Li, 2012)

Fase diam : kolom Sentry guard (Nova-Pak C 18 bonded silica) terhubung ke 4 μm
AccQ-Tag C18 kolom (3.9×150 mm I.D.; both from Waters)
Fase gerak : A. 0.14 M sodium asetat dengan 0.017 M triethanolamine (pH 4.95)
B. 60% (v/v) larutan asetonitril
Laju Alir : 1 ml/menit
Injeksi : 10 µL
Waktu retensi : 7,9 menit
Temperatur kolom : 37oC
a. Larutan Standar:
Larutan Glysin siapkan dengan melarutkan jumlah yang sesuai senyawa dalam asam
klorida 0,1 M dan diencerkan dengan volume yang sesuai. Larutan ini disimpan pada
suhu 4oC untuk beberapa hari tanpa perubahan nyata. larutan kerja disiapkan dengan
pengenceran yang sesuai dengan air sesuai kebutuhan, dan diproses tanpa
penundaan. Dalam analisis, 10 μl sampel dicampur dengan 70 μl larutan buffer
(buffer borat 0,2 M) dan setelah itu 20 μl reagen derivatisasi (2 mg/ml AQC)
ditambahkan. Larutan langsung disuntikkan ke HPLC.
b. Larutan Sampel :
10 μl sampel dicampur dengan 70 μl larutan buffer (buffer borat 0,2 M) dan
setelah itu 20 μl reagen derivatisasi (2 mg/ml AQC) ditambahkan. Derivatisasi
larutan langsung disuntikkan ke HPLC.