FITOFARMASI
3.
OLEH:
ARUM PUTRI SUKMAWATI
AKF17149
DWI RATNAWATI
AKF17161
LUTFA ALFIYAROTUL IMAMA
AKF17170
RIZQY WAHYUNINGTYAS
AKF17188
BUKU FITOFARMASI
Yang dibimbing oleh Bapak Dr. Bilal Subchan A. S., M. Farm., Apt
Oleh :
i
KATA PENGANTAR
Puji syukur sepatutnyalah kita panjatkan kehadirat Tuhan yang Maha Esa,
karena atas berkat, pertolongan dan petunjuknya sehingga kami dapat menyelesaikan
buku yang berjudul “FITOFARMASI” tepat pada waktu yang telah ditentukan.
Ucapan terima kasih kami sampaikan kepada semua pihak yang telah
membantu kami dalam menyelesaikan makalah ini, dan juga tak terlupa kepada
Bapak Dr. Bilal S.A.S., M.Farm., Apt Selaku dosen pengasuh matakuliah fitofarmasi.
Kami sadar buku ini masih sangat jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu
segala saran, kritik, dan masukan yang bersifat membangun sangat kami harapkan
demi kesempurnaan makalah ini.
Akhirnya besar harapan kami kiranya buku ini dapat membantu teman-teman
sekalian dalam memahami tentang fitofarmasi.
Penulis
ii
DAFTAR ISI
BUKU FITOFARMASI........................................................................................................... i
KATA PENGANTAR ............................................................................................................. ii
DAFTAR ISI............................................................................................................................iii
BAB I ........................................................................................................................................ 1
FARMAKOGNOSI................................................................................................................. 1
1.1. Sejarah Singkat Farmakognosi.............................................................................. 1
1.2. Ruang Lingkup Ilmu Farmakognosi ..................................................................... 3
BAB II ...................................................................................................................................... 5
SIMPLISIA.............................................................................................................................. 5
2.1. Pengertian ................................................................................................................ 5
2.2. Syarat – Syarat Simplisia ....................................................................................... 5
2.3. Nama Latin Tanaman............................................................................................. 6
2.4. Tata Nama Simplisia............................................................................................... 7
2.5. Ejaan Latin .............................................................................................................. 8
2.6. Macam – Macam Simplisia ....................................................................................... 10
a. Simplisia Folium ..................................................................................................... 10
b. Simplisia Flos.......................................................................................................... 14
c. Simplisia Fructus .................................................................................................... 16
d. Simplisia Semen....................................................................................................... 21
e. Simplisia Amylum ................................................................................................... 24
f. Simplisia Oleum ....................................................................................................... 25
g. Simplisia Rhizoma ................................................................................................... 31
h. Simplisia Radix ....................................................................................................... 34
BAB III................................................................................................................................... 36
EKSTRAKSI ......................................................................................................................... 36
3.1. Pengertian Ekstraksi ............................................................................................ 36
3.2. Tujuan Ekstraksi .................................................................................................. 36
3.3. Prinsip ekstraksi.................................................................................................... 37
3.4. Jenis Ekstraksi ...................................................................................................... 39
BAB IV ................................................................................................................................... 49
SKRINING FITOKIMIA DAN IDENTIFIKASI .............................................................. 49
4.1. Skrining Fitokimia Alkaloid, Flavonoid, Dan Tanin ............................................. 49
a. Skrining fitokimia alkaloid ..................................................................................... 49
b. Skrining fitokimia flavonoid ................................................................................... 50
c. Skrining fitokimia tanin .......................................................................................... 50
4.2. Skrining Fitokimia Terpenoid dan Antrakuinon ................................................... 52
a. Skrining fitokimia terpenoid dan steroid tak jenuh .................................................. 53
b. Skrining fitokimia antrakuinon ................................................................................ 54
BAB V .................................................................................................................................... 55
iii
Kromatografi Lapis Tipis..................................................................................................... 55
5.1. Gambaran Umum Kromatografi Lapis Tipis ......................................................... 55
5.2. Metode Pemisahan pada Kromatografi ................................................................... 56
a. Pemisahan berdasarkan polaritas ............................................................................ 57
b. Pemisahan berdasarkan muatan ion ........................................................................ 57
c. Pemisahan berdasarkan ukuran molekul ................................................................. 58
d. Pemisahan berdasarkan bentukan spesifik .............................................................. 58
5.3. Tahapan Metode Analisis KLT ................................................................................ 59
5.4. Penanganan Eluen ..................................................................................................... 67
5.5. Penanganan Chamber ............................................................................................... 68
5.6. Elusi (Pengembangan) KLT...................................................................................... 73
a. Aplikasi Manual ....................................................................................................... 79
b. Zona Konsentrasi KLT............................................................................................. 80
5.7. Evaluasi Noda ............................................................................................................. 81
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................................ 84
iv
v
BAB I
FARMAKOGNOSI
Istilah Materia Medica adalah kata latin yang dikemukakan mula-mula oleh
seorang dokter Yunani Disocorides pada abad pertama sesudah Masehi. Bahan dasar
alam atau umumnya disebut bahan alam tersebut berasal dari tumbuhan (bahan alam
nabati), dari hewan (bahan alam hewani) dan dari mineral (bahan alam mineral). Dari
ketiga jenis bahan alam ini, tumbuhan merupakan jumlah terbesar yang digunakan
sebagai sumber bahan untuk farmasi. Bahan disini dapat berupa simplisia atau hasil
olahan simplisia berupa ekstrak medisinal, yaitu ekstrak yang digunakan untuk
pengobatan dan mengandung kumpulan senyawa kimia alam yang secara keseluruhan
mempunyai aktivitas biologi, atau hasil olahan (simplisia) berupa senyawa kimia
murni yang dapat digunakan sebagai prazat (1hysical1, zat pemula) untuk sintesis
senyawa kimia obat.
1
2
diperoleh secara sintesis skala besar (campuran rasemat) dari α-pinena yang terdapat
di dalam minyak terpentin
Informasi tertulis paling tua dakan tradisi Eropa-Arab, berasal dari orang
Sumeria dan Akkad di Mesopotamia. Penduduk ini berasal dari daerah yang sama
seperti yang tercatat arkeologis Shanidar IV. Dokumentasi serupa telah bertahan
ribuan tahun di Mesir. Orangorang Mesir mendokumentasikan pengetahuan mereka
(termasuk kedokteran dan farmasi) pada kertas 2hysica yang terbuat dari Cyperus
aquaticus, suatu tumbuhan air seperti rumput (disebut juga 2hysica) ditemukan di
sepanjang Eropa selatan dan Afrika utara. Yang paling penting dalam tulisan ini
adalah Papirus Ebers, yang berasal dari sekitar 1500 SM. Papirus Ebers merupakan
buku pegangan medis yang mencakup semua macam penyakit dan termasuk empiris
dan juga bentuk simbolik pengobatan. Papirus lainnya berfokus pada resep untuk
sediaan farmasi (contohnya, yang disebut Papirus Berlin).
Jamu adalah obat tradisional Indonesia yang diduga berasal dari 2hysica
Surakarta dan Yogyakarta, dari praktek budaya Jawa kuno dan juga hasil pengaruh
obat Cina, India dan Arab. Ukiran di candi Borobudur sejak dari tahun 800-900
menggambarkan penggunaan daun kalpataru (pohon yang tidak pernah mati) untuk
membuat obat-obatan. Pengaruh suku Jawa menyebar ke Bali ketika terbentuk
hubungan, dan pada tahun 1343 pasukan kerajaan Majapahit di Jawa Timur dikirim
untuk menaklukkan orang-orang Bali.
Jepang pada tahun 701 merupakan salinan yang sama dengan 3hysic medis dinasti
Tang di Cina.
Perdagangan obat botani meningkat selama abad ke-16. Dari, India Timur
terdapat pala (Myristica fragrans) yang sudah digunakan oleh orang Yunani sebagai
bahan 3hysical dan untuk mengatasi masalah gastrointestinal. Kelembak (Rheum
palmatum) tiba di Eropa pada abad ke-10 dan dipakai sebagai pencahar yang kuat.
Perubahan penting lainnya pada saat ini adalah penemuan tumbuhan penyembuh
yang memiliki sifat-sifat baru sebagai penyembuh.
1. Morfin, dari opium bunga Papaver somniferum, yang pertama kali diidentifikasi
oleh FW Sertuner dari Jerman pada tahun 1804 dan secara kimia dikarakterisasi
pada tahun 1817 sebagai alkaloid. Struktur utuhnya ditentukan pada tahun 1923
oleh JM Gulland dan R.Robinson di Manchester.
4
2. Kuinin, dari batang kulit Cinchona succirubra, yang pertama kali diisolasi oleh
Pierre Joseph Pelletier dan Joseph Bienaime Caventou dari Perancis pada tahun
1820; strukturnya dieludasi pada tahun 1880 oleh berbagai laboratorium. Pelletier
dan Caventou juga membantu dalam mengisolasi berbagai alkaloid lain.
3. Salisin, dari kulit kayu Salix spp, diisolasi pertama kali oleh Johannes Buchner di
Jerman. Salisin diturunkan pertama kali pada tahun 1838 oleh Rafaele Pirea
(Perancis) untuk menghasilkan asam salisilat, dan kemudian pada tahun 1899
oleh perusahaan Bayer untuk menghasilkan asam asetilsalisilat atau aspirin.
BAB II
SIMPLISIA
2.1. Pengertian
Simplisia nabati adalah simplisia berupa tanaman utuh, bagian tanaman atau
eksudat tanaman. Eksudat tanaman adalah isi sel yang secara spontan keluar dari
tanaman atau isi sel dengan cara tertentu dikeluarkan dari selnya, atau zat-zat nabati
lainnya yang dengan cara tertentu dipisahkan dari tanamannya dan belum berupa zat
kimia murni.
5
6
merupakan produk hasil pertanian tumbuhan obat setelah melalui proses pasca panen
dan proses preparasi secara sederhana menjadi bentuk produk kefarmasian yang siap
dipakai atau siap diproses selanjutnya, yaitu:
1. Siap dipakai dalam bentuk serbuk halus untuk diseduh sebelum diminum (jamu)
2. Siap dipakai untuk dicacah dan digodok sebagai jamu godokan (infus)
3. Diproses selanjutnya untuk dijadikan produk sediaan farmasi lain yang umumnya
melalui proses ekstraksi, separasi dan pemurnian.
Variasi senyawa kandungan dalam produk hasil panen tumbuhan obat (in
vivo) disebabkan oleh aspek sebagai berikut:
1. Genetik (bibit)
2. Lingkungan (tempat tumbuh, iklim)
3. Rekayasa agronomi (fertilizer, perlakuan selama masa tumbuh)
4. Panen (waktu dan pasca panen)
Dalam hal simplisia sebagai bahan baku (awal) dan produk siap dikonsumsi
langsung, dapat dipertimbangkan 3 konsep untuk menyusun parameter standar
umum:
1. Nama Latin tanaman terdiri dari 2 kata, kata pertama disebut nama genus
dan perkataan kedua disebut petunjuk species , misalnya nama latin dari padi
adalah Oryza sativa, jadi Oryza adalah genusnya sedangkan sativa adalah
petunjuk speciesnya. Huruf pertama dari genus ditulis dengan huruf besar
dan huruf pertama dari petunjuk species ditulis dengan huruf kecil .Nama
ilmiah lengkap dari suatu tanaman terdiri dari nama latin diikuti dengan
singkatan nama ahli botani yang memberikan nama latin tersebut.
Contoh :
Ae e Galangae ga-la-nge
Lobeliae lo-be-li-e
Curcuma kur-ku-ma
Citri Sit-tri
Glycyrrhiza Gli-si-ri-sa
e, i, y
hidup
Cetaceum Se-ta-se-um
Ff f Paraffinum Pa-ra-fi-num
9
j y Cajuputi Ka-yu-pu-ti
ll l Vanilla Va-ni-la
mm m Gummi Gu-mi
Ichtammolum Ih-ta-mo-lum
nh n Ipecacuanhae I-pe-ka-ku-ane
oe eu Foeniculi Feu-ni-ku-li
Asafoetida A-sa-feu-ti-da
nn n Belladonna Be-la-do-na
Sennae Se-ne
ph f Orthosiphon Or-to-si-fon
pp p hippoglossi hi-po-glo-si
qu kw quercus kwer-kus
Rh r rhei re-i
rhizoma ri-zo-ma
Rr r myrrha mi-ra
Sh sy shorea syo-re
purshiana pur-si-a-na
Ss s Cassia ka-si-a
Th t Mentha men-ta
cortex kor-teks
bixa bik-sa
(Farmakognosi 1 : 2009)
Keluarga : Papilionaceae
2. ACHILEAE FOLIUM
Keluarga : Asteraceae
3. AGLAIAE FOLIUM
Keluarga : Meliaceae
Keluarga : Apiaceae
5. BAECKEAE FOLIUM
Keluarga : Myrtaceae
6. BASILICI FOLIUM
Keluarga : Lauraceae
7. BATATASAE FOLIUM
Keluarga : Convolvulaceae
11
12
8. BLUMEAE FOLIUM
Keluarga : Asteraceae
9. CARICAE FOLIUM
Keluarga : Caricaceae
Nama tanaman asal : Syzygium aromaticum (L.) Merr & Perry, Eugenia
aromatica (L.) Bail, Eugenia caryophyllata Thumb
Keluarga : Myrtaceae
Keluarga : Lamiaceae
kresol
Keluarga : Poaceae
Keluarga : Papilionaceae
Keluarga : Scrophulariaceae
Penggunaan : Kardiatonika
Keluarga : Scrophulariaceae
Keluarga : Asteraceae
Penggunaan : Adstringen
b. Simplisia Flos
1. Caryophylli Flos
Keluarga : Myrtaceae
Keluarga : haloragaceae
Zat berkhasiat : –
3. Jasmini Flos
Keluarga : Oleaceae
4. Messuae Flos
Keluarga : Clusiaceae
Keluarga : Lytraceae
Penggunaan : Adstringensia
c. Simplisia Fructus
1. AMOMI FRUCTUS
Nama tanaman asal : Amomum compactum ( Solan. Ex. Maton) disebut juga
Amomum cardamomum, Amomum kapulaga (Sprague
& Burk)
Keluarga : Zingiberaceae
2. ANISI FRUCTUS
3. BRUCEAE FRUCTUS
Nama tanaman asal : Brucea javanica (L) Merr, disebut juga Brucea
amarissima Lour Merr, dan Brucea sumatrana (Roxb)
17
Keluarga : Simarubaceae
4. CAPSICI FRUCTUS
Keluarga : Solanaceae
Keluarga : Solanaceae
6. COPTICI FRUCTUS
Keluarga : Apiaceae
Persyaratan kadar Kadar minyak atsiri tidak kurang dari 1,6% v/b
7. CORIANDRI FRUCTUS
Keluarga : Apiaceae
8. CUBEBAE FRUCTUS
Keluarga : Piperaceae
9. CUMINI FRUCTUS
Keluarga : Apiaceae
10.FOENICULI FRUCTUS
Keluarga : Apiaceae
Keluarga : Malvaceae
Keluarga : Myrtaceae
19
Penggunaan : Karminativa
Keluarga : Rubiaceae
Keluarga : Pandanaceae
Keluarga : Thymelacaceae
Keluarga : Piperaceae
Keluarga : Piperaceae
Keluarga : Piperaceae
Keluarga : Caesalpiniaceae
Zat berkhasiat : Asam – asam organik antara lain asam tartrat, asam
utama/isi sitrat, asam malat
Keluarga : Orchidaceae
Persyaratan kadar : Kadar sari anhidrat yang larut dalam etanol 70 % tidak
kurang dari 12 %
(Salisbury)
Keluarga : Lythraceae
Penggunaan : Adstringen
d. Simplisia Semen
1. ARECAE SEMEN
Keluarga : Arecaceae
2. COFFEAE SEMEN
Keluarga : Rubiaceae
3. COLAE SEMEN
Nama tanaman asal : Beberapa species cola antara lain : Cola Nitida dan
Cola acuminata (Schott et Endl.)
Keluarga : Sterculiaceae
4. CUCURBITAE SEMEN
Keluarga : Cucurbitaceae
5. FOENIGRAECI SEMEN
Keluarga : Papilionaceae
6. MYRISTICAE SEMEN
Keluarga : Myristicaceae
7. MYRISTICAE ARILUS
Keluarga : Myristicaceae
Keluarga : Myristicaceae
Keluarga : Ranunculaceae
Penggunaan : Karminativa
Keluarga : Ranunculaceae
Keluarga : Mimosaceae
Keluarga : Loganiaceae
e. Simplisia Amylum
1. AMYLUM MANIHOT
Keluarga : Euphorbiaceae
2. AMYLUM MAYDIS
Keluarga : Poaceae
3. AMYLUM ORYZAE
Keluarga : Poaceae
4. AMYLUM SOLANI
Keluarga : Solanaceae
Keluarga : Poaceae
f. Simplisia Oleum
1. OLEUM ANISI (FI)
Keluarga : Apiaceae
2. OLEUM ARACHIDIS
Keluarga : Leguminosae
Zat berkhasiat : Gliserida dari asam oleat, linoleat, asam palmitat, asam
utama/isi hipogeat, asam lignoserat, asam arakhidat
3. OLEUM AURANTII ( FI )
Keluarga : Rutaceae
Persyaratan : Kadar aldehida tidak kurang dari 1,0 % dan tidak lebih
kadar dari 3,0 %
4. OLEUM CACAO
Keluarga : Sterculiaceae
5. OLEUM CAJUPUTI
Keluarga : Mirtaceae
26
Penggunaan : Sebagai obat gosok pada encok dan rasa nyeri lainnya
kadang kadang untuk obat batuk.
6. OLEUM CANANGA
Keluarga : Anonaceae
terpineol )
7. OLEUM CARCHARIDIS
8. OLEUM CARYOPHYLI
Keluarga : Myrtaceae
9. OLEUM CINNAMOMI
Keluarga : Lauraceae
Keluarga : Rutaceae
Keluarga : Apiaceae
Keluarga : Myrtaceae
Keluarga : Apiaceae
Keluarga : Flacourtiaceae
Keluarga : Gadidae
Penggunaan : Potensi vitamin A tidak kurang dari 600 S.I tiap gram
dan potensi vitamin D tidak kurang dari 80 S.I tiap
gram.
Keluarga : Poaceae
Keluarga : Lamiaceae
Keluarga : Myristicaceae
Zat berkhasiat : Miristin, egenol, asam miristinat bebas atau sebagai ester
Keluarga : Myristicaceae
Keluarga : Oleaceae
Zat berkhasiat : Trigliserida dari asam oleat dan asam palmitat, gliserida
utama/isi asam linoleat, bagian yang tak tersabunkan berupa
fitosterol dan hidrokarbon skualen
Keluarga : Lamiaceae
Keluarga : Euphorbiaceae
30
Zat berkhasiat : Gliserida dari asam risinoleat, glisida asam oleat, asam
utama/isi linoleat, asam-asam jenuh lainnya
Nama tanaman asal : Rosa gallica (L.), Rosa damascena (Niler), Rosa alba
(L.), Rosacentifolia (L.) dan varietas Rosa lainnya
Keluarga : Rosaceae
Keluarga : Pedaliaceae
Zat berkhasiat : Gliserida dari asam oleat, asam linoleat, asam palmitat,
utama/isi asam stearat, asam miristinat
Keluarga : Dipterocarpaceae
Keluarga : Poaceae
g. Simplisia Rhizoma
1. BOESENBERGIAE RHIZOMA (MMI)
Keluarga : Zingiberaceae
Penggunaan : Antidiare
Keluarga : Araceae
3. CURCUMAE RHIZOMA ( FI )
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Cyperaceae
Keluarga : Poaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Zat berkhasiat : Pati, damar, oleo resin, gingerin, minyak atsiri yang
utama/isi mengandung zingeron,zingiberol, zingiberin,borneol,
kamfer, sineol dan felandren
Keluarga : Zingiberaceae
Keluarga : Zingiberaceae
Penggunaan : Stomakik
Keluarga : Zingiberaceae
34
Keluarga : Zingiberaceae
h. Simplisia Radix
1. CATHARANTHI RADIX
Nama tanaman asal : Catharanthus roseus (L), Vinca rosea (L), Lochnera
rosea (L)
Keluarga : Apocynaceae
2. GLYCYRRHIZAE RADIX
Keluarga : Papilionaceae
3. PANACIS RADIX
Keluarga : Araliaceae
4. RHEI RADIX
Keluarga : Polygonaceae
Penggunaan : Laksativa
Keluarga : Apocynaceae
6. VETIVERIAE RADIX
Keluarga : poaceae
EKSTRAKSI
36
37
penggantian pelarut dilakukan sebanyak 3 kali setiap 3-4 jam. Filtrat yang
diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan.
5. Prinsip Destilasi Uap Air
Penyarian minyak menguap dengan cara simplisia dan air ditempatkan
dalam labu berbeda. Air dipanaskan dan akan menguap, uap air akan masuk ke
dalam labu sampel sambil mengekstraksi minyak menguap yang terdapat dalam
simplisia, uap air dan minyak menguap yang telah terekstraksi menuju kondensor
dan akan terkondensasi, lalu akan melewati pipa alonga, campuran air dan minyak
menguap akan masuk ke dalam corong pisah, dan akan memisah antara air dan
minyak atsiri.
6. Prinsip Rotavapor
Proses pemisahan ekstrak dari cairan penyarinya dengan pemanasan yang
dipercepat oleh putaran dari labu alas bulat, cairan penyari dapat menguap 5-10º
C di bawah titik didih pelarutnya disebabkan oleh karena adanya penurunan
tekanan. Dengan bantuan pompa vakum, uap larutan penyari akan menguap naik
ke kondensor dan mengalami kondensasi menjadi molekul-molekul cairan pelarut
murni yang ditampung dalam labu alas bulat penampung.
7. Prinsip Ekstraksi Cair-Cair
Ekstraksi cair-cair (corong pisah) merupakan pemisahan komponen kimia
di antara 2 fase pelarut yang tidak saling bercampur di mana sebagian komponen
larut pada fase pertama dan sebagian larut pada fase kedua, lalu kedua fase yang
mengandung zat terdispersi dikocok, lalu didiamkan sampai terjadi pemisahan
sempurna dan terbentuk dua lapisan fase cair, dan komponen kimia akan terpisah
ke dalam kedua fase tersebut sesuai dengan tingkat kepolarannya dengan
perbandingan konsentrasi yang tetap.
8. Prinsip Kromatografi Lapis Tipis
Pemisahan komponen kimia berdasarkan prinsip adsorbsi dan partisi, yang
ditentukan oleh fase diam (adsorben) dan fase gerak (eluen), komponen kimia
bergerak naik mengikuti fase gerak karena daya serap adsorben terhadap
komponen-komponen kimia tidak sama sehingga komponen kimia dapat bergerak
dengan kecepatan yang berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya, hal inilah yang
menyebabkan terjadinya pemisahan.
9. Prinsip Penampakan Noda
a. Pada UV 254 nm
Pada UV 254 nm, lempeng akan berflouresensi sedangkan sampel akan
tampak berwarna gelap.Penampakan noda pada lampu UV 254 nm adalah karena
adanya daya interaksi antara sinar UV dengan indikator fluoresensi yang terdapat
pada lempeng. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi cahaya yang
dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat
39
energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan
semula sambil melepaskan energi.
b. Pada UV 366 nm
Pada UV 366 nm noda akan berflouresensi dan lempeng akan berwarna
gelap. Penampakan noda pada lampu UV 366 nm adalah karena adanya daya
interaksi antara sinar UV dengan gugus kromofor yang terikat oleh auksokrom
yang ada pada noda tersebut. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi
cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi
dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke
keadaan semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang tampak pada
lampu UV 366 terlihat terang karena silika gel yang digunakan tidak
berfluororesensi pada sinar UV 366 nm.
c. Pereaksi Semprot H2SO4 10%
Prinsip penampakan noda pereaksi semprot H2SO4 10% adalah
berdasarkan kemampuan asam sulfat yang bersifat reduktor dalam merusak gugus
kromofor dari zat aktif simplisia sehingga panjang gelombangnya akan bergeser
ke arah yang lebih panjang (UV menjadi VIS) sehingga noda menjadi tampak
oleh mata.
3.4.Jenis Ekstraksi
1. Ekstraksi secara dingin
a. Metode maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian sederhana yang dilakukan dengan
cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada
temperatur kamar dan terlindung dari cahaya. Metode maserasi digunakan untuk
menyari simplisia yang mengandung komonen kimia yang mudah larut dalam
cairan penyari, tidak mengandung benzoin, tiraks dan lilin.
Keuntungan dari metode ini adalah peralatannya sederhana. Sedang
kerugiannya antara lain waktu yang diperlukan untuk mengekstraksi sampel
cukup lama, cairan penyari yang digunakan lebih banyak, tidak dapat digunakan
untuk bahan-bahan yang mempunyai tekstur keras seperti benzoin, tiraks dan
lilin.
b. Metode Perkolasi
Perkolasi adalah cara penyarian dengan mengalirkan penyari melalui
serbuk simplisia yang telah dibasahi.Keuntungan metode ini adalah tidak
memerlukan langkah tambahan yaitu sampel padat (marc) telah terpisah dari
ekstrak. Kerugiannya adalah kontak antara sampel padat tidak merata atau
terbatas dibandingkan dengan metode refluks, dan pelarut menjadi dingin selama
proses perkolasi sehingga tidak melarutkan komponen secara efisien.
40
Proses Ekstraksi
Grinder Bahan baku bersih yang telah disortasi
dikecilan ukuran ukurannya dengan cara
menggiling menggunakan mesin grinding,
baru pengayakan pada mesh tertentu.
Untuk mendapat hasil berkualitas, gunakan
mesin penggiling rempah yang inert yaitu
berbahan stainless steel.
a. Prosedur SPE
Dari diagram atas dapat diketahui bahwa ada 4 tahap dalam prosedur
SPE, yaitu:
1. Pengkondisian
Cartridge (Penjerap) dialiri dengan pelarut sampel untuk
membasahi permukaan penjerap dan untuk menciptakan nilai pH yang
sama, sehingga perubahan-perubahan kimia yang tidak diharapkan ketika
sampel dimasukkan dapat dihindari.
2. Retensi (tertahannya) sampel
Larutan sampel dilewatkan ke cartridge baik untuk menahan analit yang
diharapkan sementara komponen lain terelusi atau untuk menahan
komponen yang tidak diharapkan sementara analit yang dikehendaki
terelusi
3. Pembilasan
Tahap ini penting untuk menghilangkan seluruh komponen yang tidak
tertahan oleh penjerap selama tahap retensi.
4. Elusi
Tahap ini merupakan tahap akhir untuk mengambil analit yang
dikehendaki jika analit tersebut tertahan pada penjerap.
b. Fase SPE
Berbagai macam cartridge SPE yang berisi berbagai macam penjerap
diringkas dalam tabel dibawah. Suatu penjerap pada SPE harus dipilih yang
mampu menahan analit secara kuat selama pemasukan sampel ke dalam
cartridge.
cairan. Zat yang memiliki titik didih lebih rendah akan menguap lebih
dulu. Metode ini termasuk sebagaiunit operasi kimia jenis perpindahan
massa. Penerapan proses ini didasarkan pada teori bahwa pada suatu larutan,
masing-masing komponen akan menguap pada titik didihnya. Model ideal
distilasi didasarkan pada Hukum Raoult dan Hukum Dalton.
dari distilasi uap adalah untuk mengekstrak beberapa produk alam seperti
minyak eucalyptus dari eucalyptus, minyak sitrus dari lemon atau jeruk,
dan untuk ekstraksi minyak parfum dari tumbuhan.
Campuran dipanaskan melalui uap air yang dialirkan ke dalam
campuran dan mungkin ditambah juga dengan pemanasan. Uap dari
campuran akan naik ke atas menuju ke kondensor dan akhirnya masuk ke
labu distilat.
4. Destilasi Vakum
Destilasi vakum biasanya digunakan jika senyawa yang ingin
didistilasi tidak stabil, dengan pengertian dapat terdekomposisi sebelum
atau mendekati titik didihnya atau campuran yang memiliki titik didih di
atas 150 °C. Metode destilasi ini tidak dapat digunakan pada pelarut
dengan titik didih yang rendah jika kondensornya menggunakan air
dingin, karena komponen yang menguap tidak dapat dikondensasi oleh
air. Untuk mengurangi tekanan digunakan pompa vakum atau aspirator.
Aspirator berfungsi sebagai penurun tekanan pada sistem distilasi ini.
5. Azeotrop
Azeotrop adalah campuran dari dua atau lebih komponen yang
memiliki titik didih yang konstan. Azeotrop dapat menjadi gangguan yang
menyebabkan hasil distilasi menjadi tidak maksimal. Komposisi dari
azeotrope tetap konstan dalam pemberian atau penambahantekanan. Akan
tetapi ketika tekanan total berubah, kedua titik didih dan komposisi dari
azeotrop berubah. Sebagai akibatnya, azeotrop bukanlah komponen tetap,
yang komposisinya harus selalu konstan dalam interval suhu dan tekanan,
tetapi lebih ke campuran yang dihasilkan dari saling memengaruhi dalam
kekuatan intramolekuler dalam larutan.
Azeotrop dapat didistilasi dengan menggunakan tambahan pelarut
tertentu, misalnya penambahan benzena atau toluena untuk memisahkan
air. Air dan pelarut akan ditangkap oleh penangkap Dean-Stark. Air akan
tetap tinggal di dasar penangkap dan pelarut akan kembali ke campuran
dan memisahkan air lagi. Campuran azeotrop merupakan penyimpangan
dari hukum Raoult.
6. Efektifitas Destilasi
Secara teori, hasil distilasi dapat mencapai 100% dengan cara
menurunkan tekanan hingga 1/10 tekanan atmosfer. Dapat pula dengan
menggunakan distilasi azeotrop yang menggunakan penambahan pelarut
organik dan dua distilasi tambahan, dan dengan menggunakan
penggunaan cornmeal yang dapat menyerap air baik dalam bentuk cair
atau uap pada kolom terakhir. Namun, secara praktek tidak ada distilasi
yang mencapai 100%.
48
49
50
larut dalam air. Dalam industri, tanin adalah senyawa yang berasal dari
tanaman, yang mampu mengubah kulit hewan yang mentah menjadi kulit
siap pakai karena kemampuannya menyambung silang proteina. Di dalam
tanaman, letak tanin terpisah dari protein dan enzim sitoplasma, tetapi bila
jaringan rusak, misalnya bila hewan memakannya, maka reakis penyamakan
dapat terjadi. Reaksi ini menyebabkan protein lebih sukar dicapai oleh cairan
pencernaan hewan. Pada kenyataannya, sebagian besar tanaman yang
banyak bertanin dihindari oleh hewan pemakan tanaman karena rasanya
yang sepat. Kita menganggap salah satu fungsi utama tanin dalam tanaman
adalah penolah hewan pemakan tanaman. Secara kimia terdapat dua jenis
tanin yang tersebar merata dalam dunia tumbuhan. Tanin-terkondensasi
hampir terdapat semesta di dalam paku-pakuan dan gymnospermae, serta
tersebar luas dalam angiospermae, terutama pada jenis tanaman berkayu.
Sebaliknya, tanin yang terhidrolisiskan penyebarannya terbatas pada
tanaman berkeping dua; di Inggris hanya terdapat dalam suku yang nisbi
sedikit. Tetapi, kedua jenis tanin itu dijumpai bersamaan dalam tumbuhan
yang sama seperti yang terjadi pada kulit daun ek, Quercus. Tanin
terkondensasi atau flavolan secara biosintesis dapat dianggap terbentuk
dengan cara kondensasi katekin tunggal (atau galokatekin) yang membentuk
senyawa dimer dan kemudian oligomer yang lebih tinggi. Ikatan karbon
menghubungkan satu satuan flavon dengan satuan berikutnya melalui ikatan
4-8 atau 6-8. Kebanyakan flavolan mempunyai 2 sampai 20 satuan flavon.
Nama lain untuk tanin terkondensasi adalah proantosianidin karena bila
direaksikan dengan asam panas, beberapa ikatan karbon-karbon penghubung
satuan terputus dan dibebaskanlah monomer antosianidin. Kebanyakan
proantosianidin adalah prosianidin, ini berarti bila direaksikan dengan asam
akan menghasilkan sianidin. Dikenal juga dengan prodelfinidin dan
properlargonidin, demikian juga campuran polimer yang menghasilkan
sianidin dan delfinidin pada penguraian oleh asam. Tanin terhidrolisiskan
terutama terdiri dari dua kelas yang sederhana yaitu depsida galoilglukosa.
Pada senyawa ini, inti yang berupa glukosa dikelilingi oleh lima gugus ester
galoil atau lebih. Pada jenis kedua, inti molekul berupa senyawa dimer asam
galat, yaitu asam heksahidroksidifenat, disini pun berikatan dengan glukosa.
Bila dihidrolisis elagitanin ini menghasilkan asam elagat. Senyawa dalam
kedua golongan ini dapat dipilah lebih lanjut berdasarkan biogenesisnya. Uji
skrining tanin dapat dilakukan dengan 2 metode yaituuji gelatin FeCl3.
Untuk uji FeCl3, maka sebanyak 2 ml ekstrak air dari suatu bagian tanaman
ditambahkan ke dalam 2 ml air suling. Selanjutnya, larutan ekstrak tersebut
ditetesi dengan satu atau dua tetes larutan FeCl31%. Adanya kandungan
tanin ditandai dengan timbulnya warna hijau gelap atau hijau kebiruan.
52
55
56
kecepatan yang berbeda selama pergerakan fase gerak melalui fase diam. Hal ini
disebut dengan pengembangan kromatogram. Ketika fase gerak telah bergerak
sampai jarak yang diinginkan, fase diam diambil, fase gerak yang terjebak dalam
lempeng dikeringkan, dan zona yang dihasilkan dideteksi secara langsung
(visual) atau di bawah sinar ultraviolet (UV) baik dengan atau tanpa penambahan
pereaksi penampak noda yang cocok.
Perbedaan migrasi merupakan hasil dari perbedaan tingkat afinitas
masing-masing komponen dalam fase diam dan fase gerak. Berbagai mekanisme
pemisahan terlibat dalam penentuan kecepatan migrasi. Kecepatan migrasi
komponen sampel tergantung pada sifat fisika kimia dari fase diam, fase gerak
dan komponen sampel. Retensi dan selektivitas kromatografi juga ditentukan
oleh interaksi antara fase diam, fase gerak dan komponen sampel yang berupa
ikatan hidrogen, pasangan elektron donor atau pasangan elektron-akseptor
(transfer karge), ikatan ionion, ikatan ion-dipol, dan ikatan van der Waals.
Pengambilan sampel, pengawetan, dan pemurnian sampel adalah masalah
umum untuk KLT dan metode kromatografi lainnya. Sebagai contoh,
pengembangan KLT biasanya tidak analisis yang berbeda dalam laboratorium
yang sama, sehingga perlu dipertimbangkan penggunaan Rf relatif yaitu nilai Rf
noda senyawa dibandingan noda senyawa lain dalam lempeng yang sama.
Faktor-faktor yang menyebabkan nilai Rf bervariasi meliputi dimensi dan jenis
ruang, sifat dan ukuran lempeng, arah aliran fase gerak, volume dan komposisi
fase gerak, kondisi kesetimbangan, kelembaban, dan metode persiapan sampel
KLT sebelumnya.
Konfirmasi identifikasi dapat diperoleh dengan mengerok noda dalam
lempeng kemudian analit dalam lempeng dielusi dan dideteksi dengan
spektrometri inframerah (IR), spektrometri Nuclear magnetic resonance (NMR),
spektrometri massa, atau metode spektrometri lain jika senyawa hasil elusi cukup
tersedia. Metode identifikasi ini juga dapat menggunakan untuk menandai zona
langsung pada lapisan (in situ).
Fase diam KLT dengan sorben yang memiliki bentukan spesifik dengan
selektifitas tinggi dalam bentuk lempeng siap pakai belum tersedia dipasaran.
c. Aktivasi lempeng
Aktivasi lempeng ditujukan untuk menghilangkan kelembaban air
atmosfer yang teradsorbsi dalam lempeng. Contoh aktivasi lempeng yaitu
pegeringan lempeng silika gel 30 menit pada 120 ° C. Jika suhu yang
digunakan terlalu tinggi akan menyebabkan pelepasan senyawa kimia
dalam lempeng yang dapat merubah sifat silika gel secara irreversible (tak
terpulihkan). Pada kromatografi adsorbsi, aktivitas lempeng yang tinggi
dapat meningkatkan ketertambatan fase diam sehingga jarak migrasi
sampel menjadi lebih pendek. Untuk mendapatkan reprodusibilitas nilai
ketertambatan (faktor retardasi) diperlukan penentuan tingkat aktivasi
lempeng yang baik. Proses aktivasi lempeng diatas hanya cocok untuk
lempeng silika gel dan aluminium oksida. Untuk lempeng dengan sorben
lain aktivasi lempeng dilakukan sesuai petunjuk yang disarankan produsen
lempeng. Misalnya untuk lempeng KLTKT modifikasi amino (Merck)
merekomendasikan agar lempeng diaktivasi selama 10 menit pada 120 ° C
sebelum digunakan. Temperatur dan lama aktivasi lempeng merupakan
sumber kesalahan dalam aktivasi. Terlalu pendek waktu aktivasi akan
mengakibatkan tidak sempurnyanya penghilangan kelembaban air dalam
lempeng ataupun sisa eluen pencucian lempeng sehingga lempeng akan
memberikan latar belakang yang tidak seragam. Sebaliknya waktu aktivasi
yang terlalu lama akan menghilangkan air kimia terikat yang dapat
merubah sifat fisika kimia lempeng. Selain itu lapisan sorben lempeng
dapat retak karena adanya modifikasi kimia.
d. Pengkondisian lempeng (conditioning)
Pengkodisian lempeng dapat dilakukan untuk mempengaruhi proses
kromatografi. Pengkondisian lempeng ditujukan untuk mengontrol
kelembaban lempeng dalam chamber. Kelembaban lempeng dapat
66
e. Impregnasi Lempeng
Masalah yang muncul dalam pemisahan dengan KLT dapat diatasi
dengan merubah sorben fase diam yang digunakan dengan cara impregnasi
sorben lempeng KLT dengan senyawa anorganik maupun senyawa
organik. Selain memakan waktu, teknik ini memerlukan pengalaman dalam
67
pH diatas pKa, analit berbentuk ion. Saat analit berbentuk molekul afinitas analit
terhadap fase diam dan fase gerak akan sesuai dengan nilai koefisien partisinya
tetapi ketika analit berbentuk ion maka analit akan bersifat polar atau sebagian
besar larut dalam pelarut polar dan hampir tidak dapat larut dalam pelarut non
polar. Oleh karena itu nilai log P dan pKa analit menentukan apakah analit satu
dengan analit yang lain dapat dipisahkan dengan metode KLT. Bila dua analit
memiliki koeffisien partisi (log P) sama dan nilai tetapan disosiasi (pKa) juga
sama, maka kedua analit tersebut akan sulit dipisahkan dengan metode KLT.
Bila dua analit memiliki nilai log P sama tetapi nilai pKa berbeda, maka
kedua analit masih dapat dipisahkan dengan cara mengatur pH dari eluen yang
digunakan. pH eluen diatur agar salah satu analit berada dalam bentuk molekul
sedangkan analit yang lain berada dalam bentuk ion. Selain nilai log P dan pKa
tentu sifat fisika kimia yang lain (misalnya ikatan kimia) juga menentukan proses
pemisahan analit. Tabel 2 menunjukkan beberapa pelarut yang paling sering
digunakan dalam KLT, disertai dengan nilai log P dan koefisien kecepatan
migrasi masing-masing pelarut, yang digunakan sebagai acuan kekuatan elusi.
Nilai K merupakan kecepatan migrasi pelarut melewati lempeng silika gel, yang
berhubungan dengan lamanya waktu pengembangan KLT. Semakin besar nilai K
semakin cepat waktu pengembangan KLT. Nilai log P menunjukkan polaritas
pelarut yang berhubungan dengan afinitas analit dengan pelarut. Analit yang
bersifat polar akan memiliki afinitas tinggi terhadap pelarut polar dan afinitasnya
rendah terhadap pelarut non polar. Sebaliknya analit yang bersifat non polar akan
memiliki afinitas tinggi terhadap pelarut non polar dan afinitasnya rendah
terhadap pelarut polar. Pencarian eluen berdasarkan pustaka yang ada juga dapat
membantu tahapan optimasi eluen. Eluen dari pustaka dapat dimodifikasi untuk
mendapatkan pemisahan yang efisien. Bila noda yang dihasilkan belum bagus
(noda masih berekor atau belum simetris), eluen dapat dimodifikasi dengan
menambahkan sedikit asam atau basa sehingga merubah pH eluen. Dari beberapa
eluen yang dicoba dalam optimasi eluen dapat ditentukan efisiensi kromatogram
yang dihasilkan (dapat dilihat pada bab 3.2) sehingga dapat diperoleh eluen yang
optimal.
Dalam chamber terjadi beberapa hal yaitu kejenuhan uap pelarut, adsorpsi
uap pelarut oleh sorben lempeng KLT, munculnya efek tepi yang disebabkan
oleh ketidakseimbangan gaya kapilaritas pada sisi tengah dengan sisi tepi
lempeng KLT. Hal- hal tersebut sangat mempengaruhi proses pemisahan, oleh
karena itu modifikasi fitur pada chamber dilakukan untuk menghilangkan efek
yang tidak diinginkan dan memperbaiki resolusi pemisahan. Berikut ini adalah
beberapa jenis chamber KLT :
1. Chamber Nu (chamber normal, alas datar, tak jenuh)
2. Chamber Ns (chamber normal, alas datar, jenuh)
3. Camber Twin-trough (chamber dengan dua kompartemen tempat eluen)
4. Chamber Su (chamber sandwich, tak jenuh)
5. Chamber Ss (chamber sandwich, jenuh)
6. Chamber horizontal (jenuh dan tak jenuh)
7. Chamber elusi otomatis
70
Chamber N
Chamber normal merupakan chamber dengan alas datar dimana semua
komponen pelarut berada dalam kesetimbangan dengan uap pelarut yang berada
didalam chamber baik sebelum maupun ketika proses kromatografi berlangsung.
Proses yang terjadi dalam chamber adalah diawali dengan terjadi keseimbangan
antara fase eluen dan fase uap eluen dalam chamber N. Ketika lempeng masuk
kedalam chamber, lempeng langsung kontak dengan uap eluen. Sorben lempeng
KLT berinteraksi dengan molekul uap pelarut. Interaksi yang terjadi tergantung
dari kejenuhan chamber. Secara bersamaan pelarut bermigrasi melewati sorben
lempeng KLT melalui gaya kapilaritas dan juga berinteraksi dengan uap eluen
secara simultan (gambar 2.7). Didalam lempeng sejumlah interaksi terjadi yaitu
interaksi antara fase uap eluen, fase eluen, kelembaban yang teradsorbsi dalam
lempeng, dan sorben lempeng itu sendiri. Adanya analit dalam lempeng akan
menambah jumlah interaksi yang terjadi. Pada chamber N tak jenuh, eluen
sebanyak 3-5 mm kedalaman diletakkan dalam chamber, kemudian chamber
ditutup dengan penutup chamber. Uap eluen akan memenuhi ruangan dalam
chamber dan terjadi proses penjenuhan chamber kurang lebih selama 15 menit.
Kejenuhan di bagian tengah chamber sekitar 75% dan kejenuhan ruangan
diatasnya lebih kecil lagi. Ketika lempeng KLT dimasukkan dalam chamber
kejenuhan sedikit berubah dan butuh beberapa waktu untuk mengkondisikan
kejenuhan baru. Proses pengembangan diawali dengan meningkatnya aliran
molekul eluen melewati sorben lempeng.
Dibagian atas chamber terjadi adsorbsi uap eluen oleh lempeng KLT
kering (bagian lempeng yang tidak terbasahi eluen) sehingga uap eluen semakin
tak jenuh. Terjadi penguapan dari eluen yang ada dalam lempeng menuju
ruangan dalam chamber yang menyebabkan kecepatan alir eluen berkurang
(gambar 2.8). Analit dengan Rf rendah tidak terpengaruh oleh efek tersebut tetapi
analit dengan Rf mendekati batas depan eluen akan mengalami perubahan bentuk
noda dari bulatan menjadi pita tipis. Eluen yang terdiri dari pelarut dengan titik
didih rendah dan sangat mudah menguap dapat menyebaban terjadinya efek tepi
dan melengkungnya bentuk garis depan eluen. Hal ini dikarenakan penguapan
tidak hanya terjadi dari atas kebawah tapi juga dari samping tepi chamber ke
tengah chamber. Efek ini dapat diatasi dengan cara sederhana yaitu dengan
membuat chamber N jenuh. Dalam chamber N jenuh sisi dalam chamber dilapisi
dengan kertas sorben (kertas saring). Kejenuhan lempeng dicapai dalam waktu 5-
15 menit tergantung pelarut yang digunakan. Ketika lempeng dimasukkan dalam
chamber praloading sisi kering lempeng yang terjadi hampir sempurna sehingga
efek yang tidak diinginkan diatas tidak muncul.
71
eluen α (gambar 2.11). Kedua garis depan β pada awalnya tidak teramati. Setelah
elusi selesai dan lempeng divisualisasi dengan penampak noda atau lampu UV
garis depan eluen β akan tampak. Efek demixing eluen pada lempeng KLT dapat
mengganggu kromatogram yang dihasilkan. Analit yang berada berada tepat atau
didekat garis depan eluen α dan β akan membentuk noda yang jelek (pecah).
Demixing eluen dapat dihindari dengan cara menjenuhkan lempeng dengan uap
eluen dengan chamber twin trough (gambar 2.12). Selain itu pemilihan
komposisi yang eluen yang digunakan juga perlu diperhatikan untuk mencegah
efek demixing eluen. Pada pencampuran pelarut sangat polar dengan pelarut
sangat non polar sebaiknya ditambah satu pelarut lagi yaitu pelarut semipolar
sehingga eluen yang terbentuk dapat bercampur dengan baik (tidak terlihat
adanya kekeruhan).
73
melalui suatu wadah (biasanya alas tangki) melalui suatu lapisan dan dibuang
dengan cara tertentu pada ujung lapisan.
e. Pengembangan gradien
Pengembangan ini dilakukan dengan menggunakan komposisi fase
gerak yang berbeda-beda. Lempeng yang berisi analit dapat dimasukkan ke
dalam bejana kromatografi yang berisi fase gerak tertentu lalu komponen fase
gerak selanjutnya ditambahkan sedikit demi sedikit ke dalam bejana dan
diaduk sampai homogen. Tujuan utama sistem ini adalah untuk mengubah
polaritas fase gerak. Meskipun demikian untuk memperoleh komposisi fase
gerak yang reprodusibel sangatlah sulit. Alat pengembangan gradient secara
otomatis disebut Automated Multipled Development (AMD). Dengan AMD
komposisi eluen dapat berubah-ubah sesuai dengan jarak migrasi eluen. Pada
umumnya berubahan kompisisi eluen bervariasi antara 10-40 komposisi
eluen. Eluen bergerak melewati lempeng dengan kenaikan yang konstan.
Perubahan komposisi eluen berdasarkan jarak migrasi eluen biasanya antara
1-3 cm. Perubahan komposisi eluen diprogram melalui komputer. Setelah
pengembangan dengan satu komposisi eluen selesai, eluen dipompa keluar
dan lempeng dikeringkan dengan sistem vakum. Kemudian eluen berikutnya
dipompa masuk dalam kompartemen pra pengkondisian lempeng. Kemudian
pengembangan berikutnya berjalan dan seterusnya. Pencampuran pelarut
disiapkan oleh pompa mixer dan gradien. Pelarut murni diletakkan dalam
wadah pelarut.
Sistem AMD memiliki enam botol pelarut dan sepenuhnya diprogram,
dengan kemampuan untuk menyimpan dan mengingat metode gradien. Sistem
AMD dapat digunakan pada pemisahan pestisida (gambar 2.18).
kedua dapat berupa eluenyang sama dengan eluen pertama atau eluen yang
berbeda dengan eluen pertama (gambar 2.19). Contoh pengembangan KLT
dua dimensi pada sampel asam-asam amino yang dapat memisahkan senyawa-
senyawa kritis (senyawa yang memiliki sifat fisika kimia mirip) terdapat pada
gambar 2.20.
77
78
a. Aplikasi Manual
Sebelum aplikasi sampel pada lempeng KLT, posisi awal penotolan
diberi tanda berupa titik dengan pensil dan akhir elusi ditandai berupa garis.
Sedapat mungkin penandaan tidak merusak sorben KLT. Untuk aplikasi
manual, terdapat beberapa alat penotolan sampel (gambar 2.22). Alat aplikasi
manual yang paling banyak digunakan adalah pipet mikro kapiler
(microcaps). Dengan cara mencelupkan pipet kapiler mikro, larutan secara
otomatis akan mengisi ruang dalam pipet mikro kapiler. Setelah terisi
tempelkan pipet pada permukaan lempeng KLT maka larutan sampel akan
berpindah dari pipet kapiler menuju sorben lempeng KLT. Penggunaan
syringe lebih dipilih dibandingkan pipet kapiler pada beberapa kondisi :
1. Bila pelarut yang digunakan memiliki berat jenis tinggi, misalnya
kloroform atau metilen klorida, sehingga cairan cenderung keluar dari
pipet kapiler ketika pipet kapiler dalam posisi vertikal.
2. Bila pelarut yang digunakan sangat mudah menguap (titik didih 40-60 °
C) misalnya n-heksana, petroleum eter atau dietil eter. Gaya kapiler tidak
dapat mengisi ruang pipet kapiler secara reprodusibel.
3. Bila sampel mengandung surfaktan yang dapat mengurangi tegangan
permukaan pipet kapiler sehingga pengisian ruang dalam pipet kapiler
tidak reprodusibel
4. Bila sampel berupa cairan kental yang sulit mengalir dalam pipet kapiler.
Pengeluaran larutan dari pipet kapiler juga tidak bisa sempurna karena
masih ada larutan yang menempel pada dinding dalam pipet kapiler
sehingga volume sampel yang dikeluarkan juga tidak reprodusibel.
5. Bila pelarut yang digunakan sulit menguap (titik didih ≥ 100oC) misalnya
air. Pengeluaran larutan dari pipet kapiler juga tidak bisa sempurna karena
masih ada larutan yang menempel pada dinding dalam pipet kapiler
sehingga volume sampel yang dikeluarkan juga tidak reprodusibel.
80
memberikan hasil terbaik. Polar, pelarut kental seperti fase gerak dapat
menyebabkan peningkatan yang rendah dalam pemisahan.
Seperti ditunjukkan dalam Gambar 2.27, beban tertinggi untuk
lempeng tipis dapat diperoleh dengan menggunakan seluruh lebar
lempeng dan mencelupkannya ke dalam larutan sampel. Setelah kering
lempeng dapat diulang sampai pemuatan yang diperlukan diperoleh, tetapi
perawatan diperlukan untuk menghindari terjadinya overloading atau
kelebihan. Setiap kebocoran pada penyimpanan fase gerak biasanya
diabaikan. Untuk meningkatkan potensi lempeng zona konsentrasi,
lempeng KLT fase terbalik telah digunakan dan telah terbukti bernilai
untuk berbagai aplikasi. Dibandingkan silika gel 60, gel silika RP18 telah
menjadi media pemisahan dengan luas pori-pori yang sesuai sorben untuk
zona konsentrasi.
Alam, Gemini dan Abdul Rahim. 2007. Penuntun Praktikum Fitokimia. UIN
Alauddin: Makassar. 24-26.
Anonim, 1989. Materia Medika Indonesia Jilid I-V, Departemen Kesehatan Republik
Indonesia.
Cahyo, A, 2015. Teknologi Ekstraksi Senyawa Bahan Aktif dari Tanaman Obat.
Plataxia, Yogyakarta.
Gunawan, D dan Mulyani, S. 2002. Ilmu Obat Alam. (Farmakognosi) Jilid 1. Penebar
Swadaya, Jakarta.
Heinrich, et al. 2009. Farmakognosi dan fitoterapi; alih bahasa: Winny R. Syarief et
al; editor bahasa Indonesia, Amalia H. Hadinata. EGC, Jakarta.
Http://devinurmiati.blogspot.com/2017/01/simplisia-fructus_17.html
Http://devinurmiati.blogspot.com/2017/01/simplisia-semen.html
Https://halimatussakdyah.wordpress.com/2017/01/15/simplisia-flos-bunga/
Kristanti, dkk, 2008. Buku Ajar Fitokimia. Airlangga Universitiy Press, Surabaya.
Saifudin, A., Rahayu V., Taruna H.Y., 2011. Standardisasi Bahan Obat Alam. Graha
Ilmu, Yogyakarta.
84
85
Stahl, Egon. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. ITB:
Bandung. 3-5
Winny Rivany Syarief, Jojor Simanjuntak; editor edisi bahasa Indonesia, Sintha