NIM : 17 04 034
Tugas Fitokimia
A. Ekstraksi
Tujuan dari suatu proses ekstraksi adalah untuk memperoleh suatu bahan aktif
yang tidak diketahui, memperoleh sekelompok senyawa yang struktur sejenis,
memperoleh semua metabolit sekunder dari suatu bagian tanaman dengan spesies
tertentu, mengidentifikasi semua metabolit sekunder yang terdapat dalam suatu mahluk
hidup sebagai penanda kimia atau kajian metabolisme. Produk ekstraksi yang dihasilkan
dari proses ekstraksi jaringan tanaman dapat berupa cairan yang tidak murni, semisolid
atau serbuk yang diperuntukkan bagi pemakaian luar ataupun oral.
Teknik ekstraksi yang ideal adalah teknik ekstraksi yang mampu mengekstraksi
bahan aktif yang diinginkan sebanyak mungkin, cepat, mudah dilakukan, murah, ramah
lingkungan dan hasil yang diperoleh selalu konsisten jika dilakukan berulang-ulang.
Adapun teknik ekstraksi dibagi menjadi 2 antara lain, adalah:
B. Kromatografi
1. Kromatografi Gel
Teknik ini menggunakan dekstran ikatan-silang (polimer gula)
yang, ketika ditambahkan ke pelarut yang sesuai (mis. Kloroform atau
etil asetat), membengkak untuk membentuk matriks gel. Gel ini
mengandung pori-pori yang aman untuk mencegah molekul kecil (<500
Da) dipertahankan dalam matriks; molekul yang lebih besar (> 500 Da)
dikeluarkan dan bergerak cepat melalui gel. Gel ini dimuat ke dalam
kolom dan diekstraksi ditambahkan ke kolom. Molekul besar adalah
yang pertama kali dielusi, diikuti oleh molekul berukuran lebih kecil. Ini
adalah metode yang sangat baik untuk memisahkan klorofil, asam lemak,
gliserida dan molekul besar lainnya yang dapat mengganggu uji biologis.
Ini adalah metode 'lunak' non-destruktif dengan pemulihan tinggi
(senyawa jarang teradsorpsi dengan kuat) dan daya tarik ekstrak yang
tinggi (ratusan miligram hingga gram) dapat dipisahkan. Manfaat lebih
lanjut dari teknik ini adalah bahwa banyak gel yang berbeda dapat
tersedia dengan berbagai perusahaan, kecuali yang dapat digunakan
untuk campuran dari 500 hingga 250.000 Da. Ini adalah metode pilihan
untuk molekul besar, khususnya protein, polipeptida, karbohidrat, tanin,
dan glikosida, terutama glikosida saponin dan triterpen.
2. Kromatografi Ion Pertukaran
Pemisahan senyawa polar kecil, khususnya produk alami ion,
seringkali bermasalah. Dimungkinkan untuk memisahkan metabolit-
metabolit ini dari molekul-molekul yang lebih besar (menggunakan gel)
tetapi mereka umumnya sangat terserap kuat dengan sorben fase normal
seperti silika atau alumina, dan, bahkan dengan penggunaan pelarut dan
pengubah kutub (misalnya asam dan basa), pemisahan yang efisien
mungkin tidak dapat dicapai. Selain itu, senyawa ini tidak ditahan pada
sorben fase balik seperti C18 atau C8. Produk alami ini memiliki gugus
fungsi, seperti CO2H, -OH, -NH2, yang berkontribusi terhadap polaritas
molekul, dan ini dapat digunakan untuk mengembangkan metode
pemisahan menggunakan kromatografi pertukaran ion.
3. Kromatografi Biotage flash
Dapat digunakan untuk pemisahan yang cepat dan efisien. Ini
menggunakan kartrid plastik tahan pelarut yang dikemas sebelumnya
(Gbr. 7.3), yang mengandung sorben (silika, alumina, C18, HP-20, atau
resin penukar ion). Kartrid ini dimasukkan ke dalam modul kompresi
radial (silinder logam pada Gambar 7.3), yang memberi tekanan.
Dengan menggunakan teknik ini, miligram hingga puluhan gram
dapat dipisahkan. Ekstrak bioaktif dapat dilarutkan dalam pelarut dan
dimuat ke kolom secara langsung; pelarut kemudian dipompa melalui
kolom dan fraksi dikumpulkan, menghasilkan pemisahan yang cepat dari
komponen ekstrak. Ini adalah metode yang cepat; 10 g ekstrak dapat
difraksinasi menjadi 12 fraksi dari peningkatan polaritas dalam 30 menit
menggunakan sistem pelarut step gradient. Senyawa yang dielusi dari
kolom dapat dideteksi oleh TLC (fraksi) atau eluant dapat dilewatkan
melalui detektor UV sehingga senyawa yang menyerap cahaya UV dapat
dideteksi ketika mereka mengelusi dari kolom. Beberapa laboratorium
menjalankan beberapa kolom flash ini secara bersamaan, menghasilkan
sejumlah besar ekstrak fraksinasi yang memiliki massa yang cukup untuk
pemurnian lebih lanjut dari komponen aktif.
4. Kromatografi Lapis Tipis
Thin-layerchromatography(TLC) merupakan salah satu metode yang
paling banyak digunakan dan termudah untuk memurnikan sejumlah
kecil (2-4) komponen, biasanya mengikuti pemisahan biotage flash.
Dalam penggunaan analitis, mikrogram bahan dapat dipisahkan
menggunakan teknik ini dan sampel seperti obat pelecehan (mis. Resin
ganja) dapat dibandingkan dengan standar (mis. Tetrahydrocannabinol)
untuk identifikasi cepat. TLC preparatif digunakan sebagai prosedur
pembersihan akhir untuk memisahkan 2-4 senyawa. Sampel dilarutkan
dalam volume kecil pelarut dan diterapkan sebagai garis tipis 2 cm dari
bagian bawah piring dan dikeringkan. Piring kemudian dielusi dalam
pelarut yang sesuai dan senyawa aktif-UV divisualisasikan pada 254 atau
366 nm. Produk alami yang tidak aktif-UV akan membutuhkan
pengembangan menggunakan pereaksi semprot yang sesuai seperti asam
vanillinsulphuric, reagen Dragendorff, asam fosfomolibdat atau antimon
triklorida. Dalam hal ini, ujung pelat disemprotkan dengan pereaksi
(menggunakan carethatonlyasmallareaof dari translate discovered) dan
senyawa yang terpisah divisualisasikan sebagai pita berwarna. Ada
sejumlah keuntungan dari metode ini untuk analisis dan isolasi produk
alami yang aktif secara biologis:
biaya dibandingkan dengan metode instrumental dan memerlukan
sedikit pelatihan atau pengetahuan kromatografi.
Peningkatan skala dari mode analitik ke preparatif dengan cepat
isolasi miligram ke jumlah gram produk
Fleksibilitas pilihan suara ponsel dan fase stasiun
Pemisahan dapat dengan mudah dioptimalkan menjadi 'nol
dalam' pada satu komponen dan metode dapat dengan cepat
dikembangkanl
Praktis setiap pemisahan dapat dicapai dengan fase bergerak dan
stasioner yang benar
Sejumlah besar sampel dapat dianalisis atau dipisahkan secara
bersamaan.