10/17/19

Lodish, 233

Pendahuluan

• Banyak kendala teknis studi pada sel spesifik

atau bagian sel dalam hewan dan tanaman
hidup
KULTUR SEL • Alternatifà organ utuh diambil à larutan
bufer untuk mempertahankan integritas
Biologi Sel fisiologis dan fungsinya à problem
Semester Gasal 2019/2020 • Sel diisolasi à kondisi disesuaikan
• Culturing

https://organdonationalliance.org/tag/liver-perfusion/

Kelebihan kultur sel

• Kultur sel à sel tertentu à sifat sama

• Kondisi eksperimen pada kultur dapat
dikontrol dengan lebih baik
• Sel tunggal dapat ditumbuhkan menjadi
koloni yang terdiri atas sel-sel identik à
cell cloning

https://www2.estrellamountain.edu/faculty/farabee/biobk/BioBookAnimalTS.html

Kekurangan kultur sel

• Sel tidak berada pada lingkungan normalnya à

aktivitas tidak diatur oleh sel dan jaringan lain
seperti pada organisme utuh
• Insulin berpengaruh pada metabolisme glukosa
di hati tapi hal tersebut tidak terjadi pada
kultur sel hati
• Distribusi 3D sel dan matriks ekstraseluler à
bentuk dan tingkah laku sel à kultur sel sifat
berbeda dari sel di lingkungan normal
Hati-hati dalam menarik kesimpulan

1
 10/17/19

Kultur sel hewan membutuhkan media

kaya nutrisi dan permukaan solid

• Sel hewan butuh nutrisi khusus dan

specially coated dishes
• Suhu, pH, kekuatan ionik, dan nutrisi
à mendekati kondisi organisme utuh
https://www.sigmaaldrich.com/labware/labware-
products.html?TablePage=17215950

• Sel à inkubator à suhu,

kelembaban, dan atmosfer dikontrol
https://greenbioresearch.com/product/100mm-cell-culture-dish-tc-

• Pencegahan kontaminasi à
treated-greiner-bio-one-664160/

antibiotik, biosafety cabinet

https://assets.fishersci.com/TFS-Assets/LED/product-images/F76360~p.eps-650.jpg

https://www.nuaire.com/cellgard-es-hazardous-drug-nu-481-class-ii-type-a2-biosafety-cabinet

• Media mengandung 9 aa esensial: • Serum mengandung berbagai faktor protein

histidin, isoleusin, leusin, lisin, metionin, untuk proliferasi sel mamalia dalam kultur
fenilalanin, treonin, triptofan, dan valin • Kebanyakan sel hewan hidup pada permukaan
(tidak bisa disintesis sendiri) solid à menempel à perlu cell adhesion
molecule
• 3 aa: sistein, glutamin, valine (di sintesis
di hewan hidup) • Sel dapat tumbuh di kaca atau plastik (dengan
tambahan molekul muatan negatif) à sel
• Komponen media lain: vitamin, garam, mensekresikan matriks ekstraseluler à
asam lemak, glukosa, dan serum menempel pada permukaan à sel tumbuh

2
 10/17/19

Kultur sel primer dan galur sel

mempunyai waktu hidup terbatas

https://plos.figshare.com/articles/_Schema_of_adherent_and_non_adherent_cell_culture_systems_used_in_this_study_/218686

• Jaringan normal hewan (kulit, ginjal, hati) atau

embrio à umum digunakan untuk memulai kultur
sel primer (primary cell culture)
• Interaksi sel-sel dan sel-matriks harus diputus à
jaringan + kombinasi antara protease (tripsin atau
kolagenase atau keduanya) dan khelator kation
divalen (EDTA)
• Sel ditempatkan pada media kaya nutrisi dan
Figure 1. Examples of an adherent cell line. NIH 3T3 cells 24 serum à sel menempel ke permukaan dish dan
hours (A) and 72 hours (B) post freeze/thaw show typical menempel satu sama lain
adherent fibroblastic morphology. Confluence should carefully
be monitored and passaged when cells reach ~80% confluency

Penyiapan single-cell suspension

• Protease/khelator yang sama digunakan • Kultur sel à membelah selama waktu

untuk melepaskan sel dari permukaan dish tertentu à pertumbuhan terhenti
à uji atau subkultur • Human fetal fibroblast membelah 50 x
• Connective tissue fibroblast à membelah sebelum berhenti
lebih cepat daripada sel lain à tipe sel • Sel awal 106, 50 x doubling à 106 x 250 à
dominan dalam kultur primer walaupun terbatas jika sel dipelihara
• Sel tertentu (dari darah, limpa, sumsum dengan baik à studi beberapa generasi
tulang) tidak menempel dengan baik à • Sel yang berasal dari kultur primer disebut
nonadherent cells, mempelajari diferensiasi galur sel (cell strain)
sel darah

3
 10/17/19

• Galur sel dapat dibekukan dalam bentuk suspensi

+ pengawet untuk mencegah pembentukan kristal
es à nitrogen cair à waktu penyimpanan lama à
dicairkan à beberapa sel tidak hidup, banyak
yang hidup

https://www.thermofisher.com/blog/biobanking/cryopreserving-circulating-tumor-cells-for-clinical-studies/

Transformed cells dapat

tumbuh secara tidak terbatas

• Untuk kloning sel, modifikasi sifat sel, dan • HeLa cell line (the first human cell line)à
menyeleksi mutan à perlu kultur sel > 100 doubling kanker serviks
• Pertumbuhan lama ditunjukkan oleh sel tumor • Kultur primer sel manusia jarang menjadi
• Perubahan genetik spontan disebut oncogenic transformed cell, sel rodent bisa à sel
transformation à sel dapat tumbuh tanpa batas à dapat tumbuh tidak terbatas dengan syarat
sel disebut oncogenically transformed nutrisi cukup
(transformed) • Kebanyakan cell line kehilangan fungsi khas
• Kultur sel dengan waktu hidup tidak terbatas sel terdifferensiasi à bukan model untuk
(immortal) disebut cell line mempelajari fungsi normal sel tertentu

• Beberapa more-differentiated cell lines

à sifat seperti nontransformed cells
• Tumor hati (HepG2 cell line) à sintesis
protein serum = hepatosit
• Sel fibroblas à seperti prekursor sel
otot (myoblast)
• Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cell
lines à sifat = sel epitel à membentuk
lembaran epitelial pada kultur

4

Hibridoma membentuk
antibodi monoklonal
• Kultur sel selain sebagai model untuk
studi fungsi sel, sel dapat diubah
menjadi “pabrik” untuk memproduksi
protein (cth: antibodi monoklonal)
• Setiap sel limfosit B normal à
antibodi spesific untuk molekul
antigen (1 jenis antibodi)
• Hewan disuntik antigen à sel
limfosit B terstimulasi untuk tumbuh
dan menghasilkan antibodi
https://en.wikibooks.org/wiki/Structural_Biochemistry/Protein_function/Epitope
10/17/19
Aplikasi kultur sel hewan
• Produksi rekombinan protein
• Uji sitotoksisitas
• Terapi
• Produksi monoklonal antibodi
https://www.americanhipinstitute.com/blog/benefits-of-stem-cell-therapy-for-hip-recovery-16541.html
• Setiap sel limfosit B membentuk klon dalam limpa
atau kelenjar getah bening à @ menghasilkan
antibodi sejenis: antibodi monoklonal
• Antigen alami mengandung banyak epitop à
multiple different B-lymphocyte clones à setiap
klon menghasilkan antibodi yang berbeda
• Campuran antibodi yang mengenali epitop berbeda
pada antigen yang sama à antibodi poliklonal à
diisolasi sebagai grup untuk penelitian
• Antibodi monoklonal dibutuhkan untuk banyak
penelitian dan aplikasi medis à pemurnian dari
darah tidak memungkinkan (konsentrasi rendah)
• Kultur primer sel limfosit B à masa hidup
terbatas à perlu sel yang tidak dapat mati à
menggabung sel normal dengan sel myeloma à
hibrid
• Hibrid sel myeloma dan sel pembentuk antibodi
normal dari limpa tikus atau mencit à hibridoma
5
 10/17/19

(hypoxanthine-aminopterin-
thymidine medium)

https://en.wikipedia.org/wiki/HAT_medium#/media/File:HAT_Selection.png

Kegunaan antibodi monoklonal

• Digunakan sebagai label untuk mengetahui lokasi

spesifik protein tertentu di dalam sel suatu organ
dan dalam kultur sel
• Alat diagnostik dan terapeutik
• Ab à menginaktifkan protein toksik dari patogen à
antibodi digunakan untuk mengobati penyakit yang
disebabkan oleh patogen tersebut
• Ab spesifik protein sel tumor à kemoterapi kanker

Acuan
Terima Kasih
Selamat belajar menghadapi UTS
Semoga sukses