BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Metode penelitian yang digunakan dalam karya tulis ilmiah ini adalah

MPN (most probable number) adalah metode yang di gunakan untuk menghitung

jumlah coliform pada sampel cincau. Penelitian dilakukan dengan variasi suhu

penyimpanan dan perendaman.

Desain penelitian yang digunakan adalah post test design, yaitu

identifikasi dilakukan setelah sampel diberi perlakuan (Elfindri, 2011).

4.2 Variabel Penelitian

Variabel pada penelitian ini adalah :

1. Variabel bebas pada penelitian ini adalah variasi lama penyimpanan dan

perendaman.

2. Variabel terikat pada penelitian ini adalah bakteri coliform pada cincau hitam.

3. Variabel kontrol pada penelitian ini adalah cincau.

4.3 Definisi Operasional

1. cincau :

Bahan baku minuman yang di jual di pasaran yang kandungan alaminya

tidah ditambah maupun dikurangi dan belum mendapat perlakuan perendaman

dan lama penyimpanan. Cincau di dapat dari pasar tradisional Kec. Duduk

Sampeyan Kab. Gresik.

2. coliform:

Bakteri ini berbentuk batang, tidak membentuk spora, memiliki flagel

peritrikus, berkapsul atau tidak, dan termasuk bakteri gram negatif

3. Variasi lama penyimpanan dan perendaman :

Pada suhu kamar, gel cincau hitam dapat bertahan hingga 4 hari, sedangkan

pada gel cincau hijau hanya bertahan 2 hari dan biasanya cincau hitam di pasar di

simpan dalam wadah dan kemungkinan dapat terjadi kontaminasi pada wadah

yang terbuka sehingga kontaminasi bakteri coliform.

Perendaman pada cincau dengan air bisa menjaga kestabilan tekstur pada

cincau.

4. Metode MPN (most probable number):

Mpn adalah metode yang di gunakan untuk menghitung jumlah coliform

didalam air dengan menggunakan pengujian fermentasi dalam tabung. Tiga

pengujian itu diantaranya adalah uji dugaan (presumtive test) uji penguat

(confirmed test) dan uji pelengkap (completed test)

4.4 Kerangka Kerja Penelitian

A. Deteksi bakteri choliform cincau hitam dengan variasi perendaman dan

penyimpanan.

cincau

Variasi penyimpanan di lemari Es pada hari ke-1,ke-2,ke-3,dan ke-4

Membuat pengenceran dari aquades steril dengan sampel cincau

Di ambil 0,1 ml sampel dan masukkan ke dalam tabung LB 1 (0,1 ml)

 Di ambil 1 ml sampel dan masukkan ke dalam tabung LB 1 (1 ml)

Di ambil 10 ml sampel lalu masukkan ke dalam tabung LB 2 inkubasi

selama 24 jam pada suhu 37 C.

Jika pada tabung LB positif terdapat gas dan dilanjut penanaman di media

BGLB sebanyak 2-3 mata ose .

Dan di lakukan uji penguat pada media mac conkey di inkubasi 24 jam
pada suhu 37˚ C

B. Identifikasi bakteri coliform

pengenceran

Cincau hitam di tanam pada media LB

Tanam pada media BGLB

Tanam pada media MC

4.5 Populasi, Sampel, Teknik Sampling

4.5.1 Populasi Penelitian

Populasi pada penelitian ini adalah cincau hitam di pasar tradisional Kec.

Duduk Sampeyan Kab. Gresik.

4.5.2 Sampel Penelitian

Sampel yang digunakan ada 1 sampel cincau yang di ambil dari pasar

tradisional Kec. Duduk Sampeyan Kab. Gresik.

4.5.3 Teknik Sampling

Teknik pengambilan sampel pada penelitian ini dengan cara purposive

sampling yaitu pengambilan sampel dari populasi berdasarkan lokasi tempat

pengambilan sampel. Dari hasil pengambilan sampel dengan menggunakan

metode ini, diharapkan adanya sampel yang mewakili populasi (Kasiram, 2005

dalam Cahyono, dkk., 2013).

4.6 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilukukan di Laboratorium Mikrobiologi Akademi Analis

Kesehatan Delima Husada Gresik. Jalan Arif Rahman Hakim 2B pada bulan

Maret-Juli 2018.

4.7 Instrumen Penelitian

4.7.1 Alat Yang Disteril Meliputi :

Gelas Arloji, corong, sendok besi, tabung reaksi, batang pengaduk, pipet

ukur, petridish, erlenmeyer, dan alat penyebar (Ose).

4.7.2 Bahan

A. Sampel : Cincau

B. Media : lactosa broth (LB), (BGL

4.8 Prosedur Penelitian

4.8.1 Persiapan Sampel Cincau:

4.8.2 Penyimpanan :

Di masukkan cincau kedalam wadah dan di bagi menjadi 4 bagian (hari

pertama, kedua, ketiga, dan keempat). Dan masukkan kedalam lemari Es

dan sesuai hari cicau siap diteliti.

4.8.3 Pemeriksaan Bakteri

1. Persiapan alat yang disteril

Perlatan yang harus disteril, dicuci bersih dan dikeringkan terlebih dahulu

(kecuali ose), kemudian masing-masing peralatan dibungkus dengan kertas

aluminium foil dan disterilkan menggunakn autoclavepada suhu 121˚C selama 15

menit. Lalu, peralatan didinginkan dan siap untuk digunakan.

2. Pembuatan media LB 1

Ditimbang 1,04 gram media LB 1, kemudian dilarutkan dengan 80 ml

aquades. Lalu, dipanaskan agar media larut sempurna. Ukur pH 7,2 masukkan

dalam tabung yang berisi tabung durham masing-masing tabung berisi 10 ml tutup

erlenmeyer dengan kapas berlemak dan bungkus dengan koran, lalu di steril

menggunakan autoclave 121˚C selama 15 menit, setelah steril dinginkan media

dalam suhu ruang, kemudian simpan dalam lemari Es.

 3. Pembuatan Media LB 2

Ditimbang 5,2 gram media LB 2, kemudian dilarutkan mengunakan

aquades 200 ml. Lalu, dipanaskan agar media larut sempurna. Ukur pH 7,2.

masukkan dalam tabung yang berisi tabung durham masing-masing tabung berisi

10 ml tutup erlenmeyer dengan kapas berlemak dan bungkus dengan koran, lalu di

steril menggunakan autoclave 121˚C selama 15 menit, setelah steril dinginkan

media dalam suhu ruang, kemudian simpan dalam lemari Es.

4.8.4 Cara Pemeriksaan Sampel Cincau dengan variasi lama penyimpanan dan

perendaman

Disiapkan alat yang sudah steril, kemudian disiapkan sampel cincau dan

timbang lalu di larutkan dengan aquades.

Dipipet 0,1 ml sampel dan tanam pada media LB 1 (0,1 ml), dan 1 ml

sampel tanam pada media LB 1 (1 ml ) kemudia tanam 10 ml sampel pada media

LB 2 kemudian di inkubasi selama 24 jam pada suhu 37˚C. Langkah selanjutnya,

jika ada yang positif (terdapat gas pada tabung durham) di lanjutkan penanaman

pada media BGLB dan di inkubasi pada suhu 37˚C.

4.8 Analisa Data

Untuk mengetahui pengaruh variasi lama penyimpanan hari pertama,

kedua, ketiga, dan keempat terhadap pertumbuhan bakteri coliform pada sampel

cincau hitam..

Hasil penelitian pengaruh variasi lama penyimpanan hari pertama, kedua,

ketiga, dan keempat terhadap pertumbuhan bakteri coliform pada sampel cincau

hitam dapat disajikan dalam bentuk rancangan data sebagai berikut:

Tabel 4.1 Rancangan data hasil pertumbuhan bakteri coliform
Pertumbuhan bakteri coliform
No Sampel
Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Hari ke-4