ZERNIKE PHASE CONTRAST MICROSCOPY

Dosen Pengampu: D.J Djoko Herry Santjojo

Disusun Oleh :

Khoirul Anwar I (175090800111001)

JURUSAN FISIKA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
2019
Zernike Phase Contrast Microscopy

1. Pengertian

Phase Contrast Mcroscopy adalah mikroskop optik yang prinsip kerjanya memanfaatkan
pergeseran fase cahaya dalam melewati suatu spesimen transparan untuk perubahan kecerahan
pada gambar. Pergeseran fase itu sendiri sebenarnya tidak terlihat akan tetapi pergeseran
tersebut dapat terlihat saat ditampilkan dalam variasi kecerahan. Ketika gelombang cahaya
merambat pada media selain media vakum maka aka nada interaksi dengan medianya sehingga
menyebabkan perubahan amplitudo dan fase gelombangnya sesuai dengan sifat-sifat yang
dimiliki medium tersebut. Perubahan amplitude berhubungan dengan panjang gelombang
sehingga timbulnya suatu warna, perubahan amplitudo terjadi karena adanya hamburan dan
penyerapan cahaya.

Pada umumnya peralatan topografi dan mata manusia hanya mampu mendeteksi varian
amplitudo, padahal perubahan fase juga membawa informasi penting yang dapat
mengungkapkan struktur seluler yang tidak terlihat dengan mikroskop bidang terang. Struktur
tersebut dapat terlihat sebelumnya yaitu dengan mewarnainya tapi mengakibatkan terbunuhnya
sel yang diamati. Dengan Phase Contrast Microscopy memungkinkan mengamati struktur sel
yang masih hidup atau bahkan ketika berkembang biak. Phase Contrast Microscopy ini
ditemukan oleh Frist Zernike pada awal tahun 1930-an yang merupakan salah satu kemajuan
dalam mikroskop.

2. Prinsip Kerja

Gambar Jalur Cahaya pada Phase Contrast Microscopy

 Step-step jalur cahayanya sebagai berikut

A) Cahaya yang tidak dipolarisasi memasuki mikroskop dan terpolarisasi pada 45 °.

B) Cahaya terpolarisasi memasuki prisma Wollaston yang dimodifikasi Nomarski pertama
dan dipisahkan menjadi dua sinar yang terpolarisasi pada sumbu 90° satu sama lain, sinar
pengambilan sampel dan sinar referensi.
Prisma Wollaston adalah jenis prisma yang terbuat dari dua lapisan zat kristal, seperti
kuarsa, yang, karena variasi indeks bias tergantung pada polarisasi cahaya, membagi
cahaya menurut polarisasi. Prisma Nomarski menyebabkan kedua sinar tersebut
mencapai titik fokus di luar tubuh prisma, sehingga memungkinkan fleksibilitas yang lebih
besar ketika mengatur mikroskop, karena prisma dapat secara aktif difokuskan.
C) Kedua sinar difokuskan oleh kondensor untuk lewat melalui sampel. Kedua sinar ini
difokuskan sehingga mereka akan melewati dua titik yang berdekatan dalam sampel,
dengan jarak sekitar 0,2 μm.
Sampel secara efektif diterangi oleh dua sumber cahaya yang koheren , satu dengan
polarisasi 0 ° dan yang lainnya dengan polarisasi 90 °. Namun kedua iluminasi ini tidak
selaras, dengan ditimbangi satu dengan lainnya.
D) Sinar bergerak melalui area sampel yang berdekatan, dipisahkan oleh penggeser.
Pemisahan ini biasanya mirip dengan resolusi mikroskop. Mereka akan mengalami
panjang jalur optik yang berbeda pada area dengan indeks bias atau ketebalan yang
berbeda. Hal ini menyebabkan perubahan fase sinar satu relatif terhadap yang lain karena
keterlambatan yang dialami oleh gelombang pada material yang lebih padat secara optik.
E) Sinar bergerak melalui lensa objektif dan difokuskan terhadap prisma Wollaston yang
dimodifikasi Nomarski kedua.
F) Prisma kedua mengkombinasikan kedua sinar menjadi satu yang terpolarisasi pada sumbu
135 °. Kombinasi sinar menyebabkan interferensi, mencerahkan atau menggelapkan
gambar pada titik tersebut sesuai dengan perbedaan jalur optik.
 Gambar yang dihasilkan

Gambar memiliki penampilan objek

tiga dimensi di bawah pencahayaan yang
sangat miring, menyebabkan cahaya yang
kuat dan bayangan gelap pada wajah yang
sesuai. Arah penerangan semu ditentukan
oleh orientasi prisma Wollaston.

Seperti dijelaskan di atas, gambar

dihasilkan dari dua gambar bidang terang
yang identik yang dilapis sedikit diimbangi
satu sama lain (biasanya sekitar 0,2 μm),
dan gangguan selanjutnya karena
perbedaan fasa mengubah perubahan fasa
(dan juga panjang jalur optik) menjadi
terlihat. berubah dalam kegelapan. Gangguan ini dapat bersifat konstruktif atau destruktif,
sehingga memunculkan penampilan karakteristik tiga dimensi.

Perbedaan fase khas yang menimbulkan gangguan sangat kecil, sangat jarang lebih
besar dari 90 ° (seperempat panjang gelombang). Hal ini disebabkan oleh kesamaan indeks
bias sebagian besar sampel dan media tempat mereka berada: misalnya, sel dalam air hanya
memiliki selisih indeks bias sekitar 0,05. Perbedaan fasa kecil ini penting untuk fungsi DIC
yang benar, karena jika perbedaan fasa pada sambungan antara dua zat terlalu besar maka
perbedaan fasa dapat mencapai 180 ° (setengah panjang gelombang), menghasilkan
gangguan destruktif total dan gelap anomali. wilayah; jika perbedaan fasa mencapai 360 °
(panjang gelombang penuh), itu akan menghasilkan interferensi konstruktif lengkap,
menciptakan wilayah cerah anomaly.
 Referensi

Lang, Walter (1968). "Nomarski perbedaan-perbedaan mikroskop". Informasi ZEISS . 70 : 114–

120 . Diakses pada 31 Agustus 2016 .

Murphy, D., Mikroskop Perbedaan Kontras Diferensial (DIC) dan Mikroskop Kontras Modulasi,
dalam Fundamentals of Light Microscopy dan Digital Imaging, Wiley-Liss, New York,
hlm. 153–168 (2001).

Salmon, E. dan Tran, P., Mikroskop Cahaya Kontras Resolusi Video-disempurnakan Resolusi
Tinggi (VE-DIC)., Mikroskop Video, Sluder, G. dan Wolf, D. (eds), Academic Press, New
York, hlm. 153–184 (1998).