NAMA : LUCIANA DEWI K

NIM : 1713206018

TUGAS BIOTEKNOLOGI

1. apakah kelebihan dan kekurangan dr edible vaccine?

Jawab :
Kelebihan :

 Biaya pr oduksi untuk s kala besa r tida k terla lu mahal, a pabila dibandingkan
dengan vaksin konvensional

 Mudah dalam hal penyimpanan

 Mudah dalam hal pemrosesan

 Administrasinya mudah dan tepat dan mudah diaplikasikan secara oral

 ataupun nasal ketika produk telah dimurnikan

 Baik untuk menginduksi imunitas mukosa

 Mengurangi penggunaan binatang sebagai vaksin

Kekurangan :

 Alergenitas

 Kerusakan lingkungan, disebabkan oleh adanya hilangnya sifat-sifat alami

tanaman dan degradasi komponen seluler.

 Toleransi oral, apabila antigen diberikan terlalu frekuentif atau dengan dosis
rendah yang berulang-ulang maka dapat mengakibatkan sistem imunitas
mukosa menurun dan menjadi tidak peka terhadap vaksin sehingga tidak dapat
melakukan penyembuhan dengan vaksin kembali.
  Transfer gen, perpindahan antigen ke dalam suplai makanan konvesional
melalui hibridisasi genetik atau kontaminasi produk dapat mengakibatkan
toleransi oral.

 Dosis yang tidak konsisten, tidak tertentunya jumlah antigen tidak dapat
menghasilkan respon imun yang diperlukan untuk perlindungan terhadap suatu
penyakit.

2. Bagaimana metode transformasi gen untuk pembuatan edible vaccine ?

Jawab : Pada dasarnya ada dua metode transformasi tanaman:

1) Sistem pembawa Plasmid / Vektor: Agrobacterium tumifaciens metode.

Agrobacterium tumefaciens merupakan

vektor yang dapat mentransfer gen asing ke
dalam tanaman. Secara umum, mekanisme proses
transformasi gen
oleh Agrobacterium adal ah dengan menempel pada
sel tanaman yang telah dilukai. Agrobacterium
akan mengenalkan Ti plasmid, bagian T-DNA
(transferred DNA) ke dalam inti sel tanaman.
Salah satu tanda keberhasilan transformasi
gen adalah pembentukan tumor pada tanaman, yang merupakan respon onkogenik. Gen-gen
onc ini akan mengkode biosintesis auksin dan sitokinin, kemudian merangsang proliferasi sel
menjadi sel kalus tumor (crown gall).
Berdasarkan ilustrasi di atas, Agrobacterium memiliki Ti plasmid yang memiliki komponen
transfer T-DNA, gen vir dan gen untuk katabolisme opin. Gen vir terdiri dari VirA, VirB,
VirC, VirD, VirE, VirG, VirF dan VirH. Senyawa-senyawa fenolik yang dihasilkan dari
pelukaan tanaman akan menginduksi transkripsi sederetan gen vir  dan berakhir dengan
penyisipan gen-gen yang ada pada daerah T-DNA. virA yang merupakan protein kinase
untuk mengaktifkan virG dan memfosforilasinya menjadi virG-P. Dengan aktifnya virG-P ini
akan mengaktifkan gen-gen vir lainnya untuk mulai bersifat virulen dan melakukan transfer
VirD untuk memotong situs spesifik pada Ti plasmid, pada LB dan RB sehingga melepaskan
T-DNA yang akan ditransfer dari bakteri ke sel tanaman. T-DNA utas tunggal akan diikat
oleh protein VirE yang merupakan single strand binding protein sehingga terlindung dari
degradasi. Bersamaan dengan itu, protein virB membentuk saluran transmembran yang
menghubungkan sel A. tumefaciens dan sel tanaman sehingga T-DNA dapat masuk ke sel
tanaman. T-DNA membawa gen biosintetik enzim untuk menghasilkan asam amino octopin
dan nopalin Dalam T-DNA juga terdapat gen iaaH, iaaM, dan ipt untuk menyandikan enzim-
enzim penting dalam biosintesis tanaman yaitu auksin dan sitokinin (De la riva et al, 1998).
Dengan mengubah keseimbangan hormon dalam sel tanaman tersebut bagian sel yang
terinfeksi menjadi tidak dapat terkontrol oleh tanaman dan terjadi pembentukan tumor.

2) Metode pemboman proyektil mikro (Biolistik).

 Tumifaciens, Bakteri tanah yang terbentuk secara alami, digunakan untuk mentransfer
sebagian kecil DNA ke dalam genom tanaman dan proses ini disebut transformasi. Kemudian
seluruh tanaman dapat diregenerasi dari sel tanaman individu. Telah dipelajari bahwa gen
berhasil diekspresikan dalam model tanaman eksperimental dan ketika diberikan secara oral
kepada hewan, ekstrak tanaman transgenik yang mengandung antibodi serum yang diinduksi
antigen.

Studi ini mengungkapkan hal itu A. tumifaciens digunakan untuk memproduksi

vaksin yang dapat dimakan 32-33. Itu didasarkan pada patogen nabati A. tumefaciens dan A.
rhizogenes, properti untuk mengintegrasikan DNA mereka (T-DNA) dengan sel genom
nuklir yang terinfeksi 34. Pengenalan gen eksogen ke dalam T-DNA yang dimodifikasi
secara memadai Agrobacterium Sel-sel dan infeksi setelah jaringan nabati menyebabkan studi
integrasi stabil gen dalam genom tanaman dan produksi protein transgenik.

Mekanisme dari proses genetic engineering (GE) atau recombinant DNA technology
intinya adalah proses kloning gen, dimana awalnya meliputi proses isolasi fragmen DNA
yang mengandung gen target atau transgen. Kemudian fragmen DNA yang mengandung gen
target atau transgen diklon pada molekul DNA sirkuler (plasmid) yang disebut vektor
(vector). Vektor bertindak sebagai wahana yang membawa gen target masuk ke dalam sel
tuan rumah (host), biasanya berupa bakteri. Di dalam sel host, vektor melakukan replikasi
yang menghasilkan banyak turunan yang identik, baik vektornya ataupun gen target yang
disisipkan (transgen). Ketika sel host membelah, molekul DNA rekombinan diwariskan
kepada progeny dan terjadi lagi replikasi vektor. Setelah terjadi sejumlah pembelahan yang
identik, dimana tiap sel dalam klon mengandung satu atau lebih molekul DNA rekombinan.
Setelah tereplikasi, barulah kemudian molekul DNA rekombinan tersebut dapat dimanfaatkan
lebih lanjut (Gambar 1).
Setelah melalui proses tersebut maka akan diperoleh suatu produk yang dikenal dengan
istilah transgenik ataupun GMO (Genetically Modified Organism), dimana salah satu
contohnya adalah tanaman transgenik.

3. Faktor apakah yg mempengaruhi efikasi?

Jawab :

a. Enterotoksin di Vibrio cholerae, agen penyebab kolera, termasuk subunit B (CTB)

yang tidak beracun yang membantu toksin mengikat sel-sel usus. CTB juga
imunogenik karena merangsang respons antibodi pada manusia dan hewan. Para
peneliti memperkenalkan gen CTB ke dalam kentang dan mengembangkan tanaman
transgenik. Tikus diberi makan dengan umbi kentang mentah setiap minggu selama
sebulan dengan pakan pendorong akhir setelah 40 hari. Tikus yang diberi makan
kentang transgenik menghasilkan antibodi spesifik kolera dalam serum dan ususnya;
Antibodi IgA dan IgG mencapai tingkat tertinggi setelah pemberianmakanan keempat
b. Toksin kolera dan Escherichia coli, heat-labile enterotoxins (LT), adalah antigen oral
yang kuat tetapi ketika diberikan dengan antigen lain mereka memberikan
adjuvantcity untuk antigen. Pendekatannya adalah untuk meningkatkan
imunogenisitas dari Tomat berfungsi sebagai kandidat ideal untuk antigen HIV karena
tidak seperti tanaman transgenik lain yang membawa antigen yang diberikan secara
oral dengan menggunakan adjuvan mukosa. Salah satu pendekatan tersebut adalah
penggunaan enterotoksin bakteri seperti CT atau LT, imunomodulator mamalia dan
virus serta metabolit sekunder turunan tanaman.

c. Faktor lain, yang penting dalam menentukan kemanjuran vaksin, adalah kendaraan
pengiriman. Jadi kendaraan pengiriman untuk antigen harus sedemikian rupa sehingga
tetap mempertahankan imunogenisitas antigen yang dikirim jika diproses 51. Studi
lebih lanjut mengungkapkan bahwa respon antibodi IgA dapat ditingkatkan dengan
meningkatkan frekuensi imunisasi dan penggunaan adjuvant yang sesuai dalam
imunisasi primer dan booster.

4. Sebutkan aplikasi edible vaksin untk pengobatan (3saja) dari jurnal tersebut !

Jawab :

a) Hepatitis B

Virus hepatitis B diperkirakan telah menginfeksi 400 juta orang di

seluruh dunia, menjadikannya salah satu patogen manusia yang paling umum.
Karena imunisasi adalah satu-satunya metode yang dikenal untuk mencegah
penyakit virus hepatitis B, setiap upaya untuk mengurangi infeksi memerlukan
ketersediaan sejumlah besar vaksin, antigen permukaan hepatitis A (HBsAg).
Subtipe HBsAg yang dikloning ke dalam CaMv plasmid dan tanaman yang
diregenerasi dari sel yang ditransformasikan terbukti menghasilkan HbsAg.
Lebih jauh, ekspresi antigen ditemukan lebih tinggi pada akar kentang
transgenik daripada pada jaringan daun 79. Namun, ekspresi HbsAg dalam
kentang transgenik tidak cukup untuk digunakan sebagai vaksin oral. Studi
lebih lanjut sedang dilakukan untuk meningkatkan tingkat HBsAg dengan
menggunakan promotor yang berbeda seperti promotor patatin Dalam upaya
untuk meningkatkan ekspresi HbsAg dalam kentang, Arntzen dan rekan-
 rekannya menguji pengenalan sejumlah pensinyalan peptida dan 5'- dan 3 '-
daerah yang tidak diterjemahkan (UTR) dalam konstruksi yang didorong oleh
virus mosaik kembang kol yang biasanya merupakan konstitutif (CaMV)
Promotor 35S. Urutan diuji termasuk 5'-UTR dari virus gatal tembakau dan
virus mosaik tembakau, dan 3'-UTR dari kedelai vspB dan gen pinII kentang.
Setelah menormalisasi ke tingkat transkrip seperti yang dijelaskan di atas,
telah ditemukan bahwa penggunaan 5'-UTRs yang berbeda memiliki sedikit
efek pada tingkat ekspresi, tetapi pengenalan vspB dan pinII 3 'UTRs
meningkatkan jumlah protein HBsAg secara signifikan

b) Diabetes

Penelitian oleh Ma et al di University of Western Ontario

menunjukkan bahwa diabetes dapat dicegah pada tikus dengan memberi
makan mereka dengan tanaman yang direkayasa untuk menghasilkan protein
terkait diabetes. Idenya didasarkan pada 'toleransi oral' di mana sistem
autoimun secara selektif dimatikan lebih awal dengan mengajarkan tubuh
untuk mentolerir "protein antigenik". Protein pankreas, glutamic acid
decarboxylase (GAD67), terkait dengan permulaan IDDM, dan ketika
disuntikkan ke tikus diketahui dapat mencegah diabetes. Kelompok Kanada
mengembangkan tanaman transgenik kentang dan tembakau dengan gen untuk
GAD67, memberi mereka makan tikus diabetes yang tidak gemuk, yang
mengembangkan diabetes yang bergantung pada insulin secara spontan.
Hasilnya menarik: hanya 20% dari tikus yang diberi makan sebelum diabetes
dengan tanaman transgenik mengembangkan diabetes sementara 70% tikus
yang tidak diobati menderita penyakit tersebut. Tikus yang dirawat juga
menunjukkan peningkatan kadar IG1, sebuah antibody terkait dengan sitokin,
yang menekan respon imun yang berbahaya. Dengan demikian, antigen yang
diproduksi pada tanaman tampaknya mempertahankan imunogenisitas dan
mencegah diabetes pada model hewan. Menurut Ma, ini adalah bukti prinsip
pertama untuk penggunaan vaksin yang dapat dimakan dalam pengobatan
penyakit autoimun.

c) Campak
 Secara global, campak menyebabkan lebih dari 800.000 kematian
setiap tahun. Banyak orang lain yang menjadi tuli atau menderita ensefalitis.
Vaksin yang saat ini digunakan menghasilkan serokonversi 95% pada individu
yang berusia di atas 18 bulan pada saat vaksinasi 70-72. Vaksin campak yang
dilemahkan hidup tidak menghasilkan efek imunisasi oral dan dihancurkan
oleh panas. Telah dipelajari bahwa tanaman wortel transgenic dapat digunakan
untuk mengantarkan antigen virus untuk pengembangan vaksin campak.