See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/331555767

ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF KANDUNGAN SENYAWA KIMIA

DARI EKSTRAK HEKSAN, ASETON, ETANOL DAN AIR DARI DAUN ALPUKAT
(Persea americana Mill)

Preprint · March 2019

DOI: 10.13140/RG.2.2.19403.03367

CITATIONS READS

0 4,670

3 authors, including:

Harrizul Rivai Liza Asbari Hasni

Universitas Andalas 2 PUBLICATIONS   0 CITATIONS   
170 PUBLICATIONS   165 CITATIONS   
SEE PROFILE
SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Pharmaceutical Care View project

Development and Validation of Omeprazole Analysis Methods in Capsules with Absorbance Methods and Areas under Curves Methods with UV-Vis Spectrophotometry
View project

All content following this page was uploaded by Harrizul Rivai on 06 March 2019.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF KANDUNGAN SENYAWA KIMIA
DARI EKSTRAK HEKSAN, ASETON, ETANOL DAN AIR DARI DAUN ALPUKAT
(Persea americana Mill)

Harrizul Rivai 1), Liza Asbari Hasni 2), Zulharmita 2)

1)
Fakultas Farmasi Universitas (UNAND) Andalas Padang
2)
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi (STIFRM) Padang
Email: lizahassofyian@gmail.com

ABSTRAK

Penelitian tentang analisis kualitatif dan kuantitatif kandungan senyawa kimia dari ekstrak heksan,
aseton, etanol, dan air dari daun alpukat (Persea americana Mill), dengan tujuan untuk menentukan kandungan
dan kadar senyawa kimia yang terdapat dalam masing-masing ekstrak tersebut. Penelitian ini menggunakan dua
metode ekstraksi yaitu metode maserasi untuk pelarut heksan, aseton, etanol dan metode infusa untuk pelarut
air. Hasil analisis kualitatif yang positif pada ekstrak heksan mengandung senyawa kimia flavonoid dan
alkaloid. Ekstrak aseton mengandung senyawa kimia flavonoid, fenol, tanin, dan alkaloid. Ekstrak etanol
mengandung senyawa kimia flavonoid, fenol, tanin, alkaloid, dan saponin. Ekstrak air mengandung senyawa
kimia flavonoid, fenol, tanin, dan alkaloid. Hasil analisis kuantitatif kadar senyawa flavonoid pada ekstrak
heksan, aseton, etanol, dan air masing-masing 0,6 %; 0,3 %; 0,3 %; dan 0,5 %. Kadar senyawa fenol pada
ekstrak aseton, etanol, dan air masing-masing 5,1 %; 3,9 %; dan 3,7 %. Kadar senyawa tanin pada ekstrak
aseton, etanol, dan air masing-masing 0,3 %; 0,2 %; dan 0,1 %. Kadar senyawa alkaloid pada ekstrak heksan,
aseton, etanol dan air masing-masing 0,1 %; 13,6 %; 15,6 %; dan 5,5 %. Kadar senyawa saponin pada ekstrak
etanol 3,3 %.

kata kunci: ekstrak daun alpukat, spektrofotometri Uv-Vis, gravimetri.

ABSTRACT

The study is about qualitative and quantitative analysis of the chemical compounds of hexane, acetone,
ethanol, and water extracts from avocado leaves (Persea americana Mill), with the aim of determining the
content and levels of chemical compounds contained in each extract. This study uses two extraction methods,
namely maceration method for hexane, acetone, ethanol solvent and infusion method for water solvent. The
results of a positive qualitative analysis of hexane extract contain chemical compounds of flavonoids and
alkaloids. Acetone extract contains chemical compounds of flavonoids, phenols, tannins, and alkaloids. Ethanol
extract contains chemical compounds of flavonoids, phenols, tannins, alkaloids, and saponins. Water extracts
contain chemical compounds of flavonoids, phenols, tannins, and alkaloids. The results of quantitative analysis
of flavonoid compounds respectively from hexane, acetone, ethanol, and water extracts were 0.6 %; 0.3 %; 0.3
%; and 0.5 %. Phenol compounds respectively from acetone, ethanol, and water extracts were 5.1 %; 3.9 %;
and 3.7 %. Tannin compounds respectively from acetone, ethanol, and water extracts were 0.3 %; 0.2 %; and
0.1 %. Alkaloid compounds respectively from hexane, acetone, ethanol, and water extracts were 0.1 %; 13.6 %;
15.6 %; and 5.5 %. Saponin compounds ethanol extracts were 3.3 %.

Keywords: avocado leaf extract, spektrofotometri Uv-Vis, gravimetri.

PENDAHULUAN ditentukan kadar kandungan senyawa

Tanaman alpukat (Percea americana
Mill) merupakan salah satu tanaman yang
memiliki manfaat sebagai obat tradisional.
Hampir semua bagian dari tanaman ini
memiliki khasiat sebagai sumber obat-
obatan, diantaranya daun alpukat yang
dapat digunakan untuk pengobatan herbal
dislipidemia (Peraturan Menteri
Kesehatan, 2016). Maka dari itu, perlu
kimia yang terdapat dalam daun alpukat.
Daun alpukat memiliki beberapa
kandungan senyawa kimia yang sangat
bermanfaat bagi kesehatan. Berdasarkan
penelitian terdahulu, Kamagate et al.,
(2016) dalam uji skrining fitokimia pada
daun Persea americana Mill yang
dilakukan dengan metode maserasi untuk
pelarut metanol dan etanol, serta dengan
metode dekokta untuk pelarut air,
diidentifikasi adanya senyawa saponin,
polifenol, flavonoid, alkaloid, sterol atau
politerpenoid, dan kumarin. Selain itu pada
ekstrak air daun Persea americana Mill
juga diidentifikasi adanya kandungan tanin
sedangkan pada ekstrak etanol dan ekstrak
metanol daun Persea americana Mill
diidentifikasi adanya kandungan tanin
katekin (Kamagate et al., 2016). Boadi et
al., (2015) juga mengidentifikasi adanya
senyawa glikosida, alkaloid, tanin,
saponin, flavonoid, terpenoid, dan steroid
dari ekstrak metanol, kloroform, etil asetat,
dan petroleum eter dari daun alpukat yang
proses ekstraksinya dilakukan dengan
metode soxhletasi.
Selain hasil penelitian mengenai
analisis kualitatif dari ekstrak daun Persea
americana Mill, ada juga hasil penelitian
mengenai analisis kuantitatif dari ekstrak
daun Persea americana Mill. Diantaranya
analisis kuantitatif kadar senyawa
polifenol total yang diperoleh dari masing-
masing ekstrak air, ekstrak etanol, dan
ekstrak metanol daun Persea americana
Mill yang diidentifikasi dengan metode
kolorimetri Folin-Ciocalteu menunjukkan
nilai absorbansi 2707,3 ± 155,4 untuk
ekstrak air; 2952,7 ± 166,0 untuk ekstrak
etanol dan 1873,1 ± 63,5 untuk ekstrak
metanol (GAE) µg/g dengan ekivalen
asam galat. Untuk kadar senyawa
flavonoid total yang diidentifikasi dengan
metode spektrofotometri menunjukkan
persentase kandungannya yaitu: 0,543 ±
0,007; 0,582 ± 0,012 dan 0,474 ± 0,007 %
dari masing-masing ekstrak air, ekstrak
etanol, dan ekstrak metanol daun alpukat
(Kamagate et al., 2016).
Ekstraksi atau penyarian merupakan
proses pemisahan senyawa dari matriks
atau simplisia dengan menggunakan
pelarut yang sesuai. Tujuannya adalah
untuk menarik atau memisahkan senyawa
dari campurannya atau simplisia. Pelarut
yang digunakan tergantung pada polaritas
senyawa yang akan disari, mulai dari yang
bersifat nonpolar hingga polar (Hanani,
2015). Heksan merupakan pelarut yang
bersifat sangat tidak polar yang biasanya
2
digunakan sebagai pelarut inert dalam
reaksi organik (Aziz et al., 2009). Aseton
adalah pengekstraksi yang sangat berguna,
yang mampu melarutkan banyak
komponen hidrofilik dan lipofilik, dapat
larut dengan air, mudah menguap, dan
toksisitas rendah. Etanol memiliki aktivitas
ekstrak yang lebih tinggi dibandingkan
ekstrak air. Hal ini dapat dilihat pada
jumlah polifenol yang lebih banyak pada
ekstrak etanol dibandingkan pada ekstrak
air. Air bersifat universal yang mampu
mengekstrak semua bagian tanaman.
Namun, air tidak memiliki aktivitas
antimikroba dan senyawa fenol yang ada
dalam air hanya sebagai antioksidan
(Tiwari et al., 2011).
Berdasarkan uraian diatas, peneliti
tertarik untuk melakukan uji analisis
kualitatif dan kuantitatif kandungan
senyawa kimia dari ekstrak heksan, aseton,
etanol, dan air dari daun alpukat (Persea
americanaMill). Dengan membandingkan
kandungan senyawa kimia serta kadar
kandungan kimia yang diperoleh dari
masing-masing ekstrak tersebut.
METODE PENELITIAN
Alat
Alat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah spektrofotometer
Ultraviolet-Visible double beam
(Shimadzu 1800), sonikator (Branson
1800), penguap putar (IKA), oven
(Memmert), lampu ultraviolet (Camag),
wadah maserasi (botol gelap), timbangan
analitik (Precisa), corong, krus porselen,
cawan penguap, tabung reaksi (Iwaki),
corong pisah (Iwaki), Erlenmeyer (Iwaki),
labu ukur (Iwaki), gelas piala (Iwaki),
pipet ukur (Iwaki), kertas saring Whatman
No. 42 (GE Healthcare Life Sciences).
Bahan
Bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah serbuk simplisia
kering daun alpukat (Persea amaricana
Mill) yang dibeli di PT Temu Kencono,
heksan p.a (EMSURE), aseton (Merck),
etanol p.a (EMSURE), air suling (CV.
NOVALINDO), amoniak (EMSURE),
TLC silica gel 60 F254 20 × 20 cm (Merck),
kuersetin (Sigma), asam galat (Sigma),
katekin (Sigma), dan semua pereaksi dibeli
dari Merck: alumunium klorida,
kloroform, metanol, etil asetat, asam
klorida, α-naftol, asam sulfat, rodamin B,
serbuk seng, serbuk magnesium, serbuk
asam borat, serbuk asam oksalat, besi (III)
klorida, vanilin, gelatin, iodium, kalium
iodida, raksa (II) klorida, bismut nitrat,
asam nitrat, amonium molibdat, eter,
kalium permanganat, asam asetat
anhidrida, natrium hidroksida, n-butanol,
dietil eter, kertas pH.
Standarisasi Simplisia Daun Alpukat
(Persea americana Mill) (Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia, 2010).
a) Mikroskopik
b) Penetapan Susut Pengeringan
c) Penetapan Kadar Abu Total
d) Penetapan Kadar Abu Tidak Larut
Asam
e) Penetapan Kadar Sari Larut Air
f) Penetapan Kadar Sari Larut Etanol
Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak heksan, aseton,
dan etanol. Masukkan 50 gram serbuk
kering simplisia daun alpukat kedalam
maserator, tambahkan 500 mL pelarut
(perbandingan 1:10 w/v). Direndam
selama 6 jam pertama sambil sesekali
diaduk, kemudian diamkan selama 18 jam.
Maserat dipisahkan dengan cara filtrasi
(penyaringan) menggunakan kain flanel,
proses penyaringan ini diulang 2 kali
dengan menggunakan jenis dan jumlah
pelarut yang sama. Semua maserat
dikumpulkan, kemudian uapkan dengan
alat penguap putar (rotary evaporator)
pada suhu di bawah ± 40 ºC sehingga
diperoleh kembali ekstrak cair sebanyak
500 mL.
Selanjutnya pembuatan infusa
daun alpukat, metode infusa adalah cara
3
ekstraksi dengan menggunakan pelarut air,
pada suhu 96-98 ºC selama 15-20 menit
(dihitung setelah suhu 96 ºC tercapai).
Bejana infusa tercelupkan dalam tangas
air. Cara ini sesuai untuk simplisia yang
bersifat lunak, seperti bunga dan daun
(Hanani, 2010). Dengan cara timbang
sebanyak 50 gram simplisia daun alpukat
dan dimasukkan ke dalam panci infus dan
ditambahkan dengan pelarut air suling
sebanyak 500 mL, lalu masukkan ke dalam
penangas air selama 15-20 menit pada
suhu 98 ºC, lalu saring menggunakan kain
flanel cukupkan volume hingga diperoleh
ekstrak air daun alpukat sebanyak 500 mL.
Analisis Kualitatif dengan Skrining
Fitokimia
1. Uji Asam amino
a. Larutan 0,1 % Ninhydrin-aseton
Larutan pereaksi dibuat segar dan
dilakukan dengan sedikit pemanasan.
Tambahkan beberapa tetes larutan 0,1
% ninhydrin-aseton ke dalam
beberapa tetes ekstrak. Umumnya
asam amino memberikan warna ungu
hingga biru keabu-abuan, kecuali
prolin yang memberikan warna
kuning (Hanani, 2015).
2. Uji Karbohidrat
a. Larutan Fehling A dan Larutan
Fehling B
Identifikasi dilakukan dengan
penambahan larutan Fehling A dan
Fehling B dalam jumlah yang sama
banyak ke dalam larutan uji, lalu akan
terjadi reduksi (kadang-kadang
diperlukan pemanasan), menghasilkan
endapan kupro oksida bewarna merah
bata (Hanani, 2015).
b. Reaksi Molisch
Semua karbohidrat memberikan warna
ungu apabila direaksikan dengan α-
naftol dan asam nitrat. Terbentuk
cincin ungu menandakan adanya
karbohidrat (Hanani, 2015).
3. Uji Asam Lemak
a. Larutan Asam Sulfat 25 %
Tambahkan beberapa tetes asam asam
sulfat 25 % ke dalam beberapa tetes
ekstrak kemudian lakukan pemanasan
sehingga terbentuk warna coklat muda
(Hanani, 2015).
b. Larutan 0,5 % Rodamin B
Tambahkan beberapa tetes larutan
rodamin B ke dalam beberapa tetes
ekstrak sehingga terbentuk warna
kuning atau biru keunguan dengan
latar belakang merah muda (Hanani,
2015).
4. Uji Flavonoid
 Larutan Percobaan
Ambil 10 mL ekstrak cair tambahkan
10 mL metanol refluks selama 10 menit.
Saring panas melalui kertas saring kecil
berlipat, encerkan dengan 10 mL air.
Setelah dingin tambahkan 5 mL eter,
kocok hati-hati, diamkan. Ambil lapisan
metanol, uapkan pada suhu 40 ºC. Sisa
dilarutkan dalam 5 mL etil asetat
kemudian saring (Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, 1995).
 Cara percobaan
Cara I: Uapkan hingga kering 1 mL
larutan ekstrak, sisa dilarutkan dalam 1 mL
sampai 2 mL etanol (95 %), tambahkan
0,5 gram serbuk seng dan 2 mL asam
klorida 2 N diamkan selama 1 menit.
Tambahkan 10 tetes asam klorida pekat.
Jika dalam waktu 2 sampai 5 menit terjadi
warna merah intensif. Menunjukkan
adanya flavonoid (Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, 1995).
Cara II: Uapkan hingga kering 1 mL
ekstrak, sisa dilarutkan dalam 1 mL etanol
(95 %). Tambahkan 0,1 gram serbuk
magnesium dan 10 tetes asam klorida
pekat. Jika terjadi warna merah jingga
sampai merah ungu, menunjukkan adanya
flavonoid. Jika terjadi warna kuning jingga
menunjukkan adanya flavon, kalkon, dan
auron (Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, 1995).
Cara III: Uapkan hingga kering 1 mL
ekstrak. Basahkan sisa dengan aseton,
tambahkan sedikit serbuk halus asam borat
4
dan serbuk halus asam oksalat, panaskan
di atas penangas air dan hindari
pemanasan yang berlebihan. Campur sisa
yang diperoleh dengan 10 mL eter. Amati
dengan sinar ultraviolet 366 nm larutan
berflouresensi kuning intensif
menunjukkan adanya flavonoid
(Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, 1995).
5. Uji Fenol
a. Larutan Garam Besi (III) klorida
Tambahkan beberapa larutan garam
besi (III) klorida ke dalam beberapa tetes
ekstrak jika memberikan warna hijau
hingga biru hitam menunjukkan adanya
fenol (Hanani, 2015).
b. Larutan Vanilin Asam Sulfat
Tambahkan beberapa tetes larutan
vanilin asam sulfat kedalam beberapa tetes
ekstrak. Jika terjadi perubahan warna
maka menunjukkan adanya fenol (Hanani,
2015).
c. Larutan Vanilin Asam Klorida
Tambahkan beberapa tetes larutan
vanilin asam klorida kedalam beberapa
tetes ekstrak. Jika terjadi perubahan warna
maka menunjukkan adanya fenol (Hanani,
2015).
d. Folin-Ciocalteu
Tambahkan beberapa tetes larutan
Folin-Ciocalteu ke dalam beberapa tetes
ekstrak. Jika terjadi perubahan warna
maka menunjukkan adanya fenol (Hanani,
2015).
6. Uji Tanin
a. Larutan Garam Feri (Besi)
Tambahkan beberapa tetes larutan
garam feri (besi) ke dalam beberapa tetes
ekstrak apabila memberikan endapan
bewarna biru hitam menunjukkan adanya
galotanin dan elagitanin, sedangkan tanin
terkondensasi menimbulkan warna hijau
coklat (Hanani, 2015).
b. Larutan 1 % Gelatin dalam 10 %
Natrium Klorida
Tambahkan beberapa tetes larutan 1 %
gelatin dalam 10 % natrium klorida ke
dalam beberapa tetes ekstrak jika
menimbulkan endapan menunjukkan
adanya tanin (Hanani, 2015).
7. Uji Alkaloid ekstrak, jika terbentuk perubahan warna
 Larutan percobaan menunjukkan adanya alkaloid
Ambil masing-masing 10 mL ekstrak (Departemen Kesehatan Republik
cair, tambahkan 1 mL asam klorida 2 N Indonesia, 1995).
dan 9 mL air, panaskan di atas penangas c. Larutan Asam Sulfat Pekat
air selama 2 menit, dinginkan dan saring. Tambahkan beberapa tetes larutan asam
 Reaksi Pengendapan sulfat pekat ke dalam beberapa tetes
a. Pereaksi Bouchardat ekstrak, jika terbentuk perubahan warna
Tambahkan beberapa tetes pereaksi menunjukkan adanya alkaloid
Bouchardat ke dalam beberapa tetes (Departemen Kesehatan Republik
ekstrak, jika terbentuk endapan Indonesia, 1995).
menunjukkan adanya alkaloid d. Larutan Frohde
(Departemen Kesehatan Republik Tambahkan beberapa tetes larutan
Indonesia, 1995). Frohde ke dalam beberapa tetes ekstrak,
b. Pereaksi Mayer jika terbentuk perubahan warna
Tambahkan beberapa tetes pereaksi menunjukkan adanya alkaloid
Mayer ke dalam beberapa tetes ekstrak, (Departemen Kesehatan Republik
jika terbentuk endapan menunjukkan Indonesia, 1995).
adanya alkaloid (Departemen Kesehatan 8. Uji Antrakuinon
Republik Indonesia, 1995). a. Ambil 5 mL ekstrak kemudian
c. Pereaksi Wagner tambahkan 12,5 mL asam klorida 2 N lalu
Tambahkan beberapa tetes pereaksi panaskan di atas penangas air selama 15
Wagner ke dalam beberapa tetes ekstrak, menit. Dalam keadaan panas, larutan
jika terbentuk endapan menunjukkan disaring kemudian didinginkan dan
adanya alkaloid (Departemen Kesehatan dikocok dengan 20 mL eter. Lapisan eter
Republik Indonesia, 1995). dipisahkan dan dikocok dengan 15 mL
d. Pereaksi Dragendroff ammonia 6 N. Amati warna merah yang
Tambahkan beberapa tetes pereaksi timbul (Hanani, 2015).
Dragendroff ke dalam beberapa tetes 9. Uji Minyak Atsiri
ekstrak, jika terbentuk endapan a. Larutan Kalium Permanganat
menunjukkan adanya alkaloid Tambahkan beberapa tetes larutan
(Departemen Kesehatan Republik kalium permanganat ke dalam beberapa
Indonesia, 1995). tetes ekstrak, warna akan menjadi pucat
e. Pereaksi Hager atau hilang menunjukkan adanya minyak
Tambahkan beberapa tetes pereaksi atsiri (Hanani, 2015).
Hager ke dalam beberapa tetes ekstrak, b. Larutan Asam Asetat Anhidrida
jika terbentuk endapan menunjukkan Tambahkan beberapa tetes asam asetat
adanya alkaloid (Departemen Kesehatan anhidrida ke dalam bebrapa tetes ekstrak
Republik Indonesia, 1995). kemudian tambahkan 1 mL asam sulfat
 Reaksi warna pekat sehingga timbul warna hijau biru
a. Larutan Erdman menunjukkan adanya minyak atsiri
Tambahkan beberapa tetes larutan (Hanani, 2015).
Erdman ke dalam beberapa tetes ekstrak, 10. Uji Saponin
jika terbentuk perubahan warna a. Uji Busa
menunjukkan adanya alkaloid Ambil 1 mL ekstrak tambahkan 10 mL
(Departemen Kesehatan Republik air kemudian kocok kuat selama 10 menit,
Indonesia, 1995). apabila terbentuk buih yang stabil selama
b. Larutan Asam Nitrat Pekat tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-10
Tambahkan beberapa tetes larutan asam cm dan pada penambahkan 1 tetes asam
nitrat pekat ke dalam beberapa tetes klorida 2 N buih tidak hilang menunjukkan

5
adanya saponin (Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, 1995).
11. Uji glikosida jantung
a. Pereaksi Baljet
Larutkan 0,1 mL ekstrak dengan 2,9
mL metanol tambahkan pereaksi Baljet
terbentuk warna jingga beberapa menit,
menunjukkan adanya glikosida dan
aglikon kardenolida (Departemen
Kesehatan Republik Indonesia, 1995).
b. Pereaksi Keller-Kiliani
Uapkan 0,2 mL ekstrak diatas penangas
air. Larutkan sisa dengan 3 mL asam asetat
dengan sedikit pemanasan, lalu dinginkan.
Teteskan besi (III) klorida 0,3 M,
kemudian tambahkan asam sulfat dan 1
tetes besi (III) klorida 0,3 M, apabila
terbentuk cicin bewarna merah coklat pada
batas carian, setelah beberapa menit di atas
cicin bewarna biru hijau menunjukkan
adanya glikosida dan glikon 2-desoksi gula
(Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, 1995).
Analisis Kuantitatif Kadar Total
Golongan Kandungan Senyawa Kimia
1. Penetapan Kadar Flavonoid Total
a. Larutan untuk ekstrak cair
Pipet masing-masing 1 mL ekstrak cair,
encerkan dengan etanol 80 % sampai tanda
batas di dalam labu ukur 10 mL.
b. Larutan pembanding
Timbang seksama kurang lebih 10 mg
pembanding kuersetin, larutkan dengan
etanol 80 % sampai tanda batas di dalam
labu ukur 10 mL, encerkan secara
kuantitatif dan jika perlu bertahap dengan
etanol 80 % dengan kadar 20, 40, 60, 80,
dan 100 µg/mL.
c. Pengukuran
Pipet secara terpisah 1 mL larutan uji
dan larutan pembanding tambahkan pada
masing-masing larutan tersebut 1,5 mL
etanol, 0,1 mL aluminium klorida 10 %,
0,1 mL natrium asetat 1 M dan 2,8 mL air
suling. Kocok dan diamkan selama 30
menit pada suhu ruang. Untuk pengukuran
serapan panjang gelombang maksimum
dilakukan pada konsentrasi pembanding
6
60 ppm dengan etanol 80 % sebagai
blangko pada panjang gelombang 440 nm
(Kementerian Kesehatan Republik
Indonesia, 2010).
2. Penetapan Kadar Fenol Total
a. Pembuatan larutan uji
Pipet masing-masing 1 mL ekstrak cair,
encerkan dengan metanol sampai tanda
batas di dalam labu ukur 10 mL.
b. Pembuatan larutan pembanding
Timbang seksama kurang lebih 10 mg
pembanding asam galat, larutkan dengan
metanol sampai tanda batas di dalam labu
ukur 10 mL, encerkan secara kuantitatif
dan jika perlu bertahap dengan metanol
dengan kadar 30, 40, 50, 60, dan 70
µg/mL.
c. Pengukuran
Pipet masing-masing 1 mL larutan uji
dan enceran larutan pembanding dalam
tabung reaksi, tambahkan 5 mL enceran
Folin-Ciocalteu fenol LP (7,5 % dalam
air). Diamkan selama 8 menit, tambahkan
4 ml natrium hidroksida 1 %, diamkan
selama 1 jam. Untuk pengukuran serapan
panjang gelombang maksimum dilakukan
pada konsentrasi pembanding 50 ppm
dengan metanol sebagai blangko pada
panjang gelombang 749 nm, buat kurva
kalibrasi dan hitung kadar fenol total
(Kementerian Kesehatan Republik
indonesia, 2010).
3. Penetapan Kadar Tanin Total
a. Larutan pembanding
Keringkan pembanding katekin dalam
oven pada suhu 105 °C sampai bobot
tetap. Timbang seksama lebih kurang 10
mg, masukkan ke dalam labu terukur 10
mL, larutkan dalam etil asetat, sonikasi
selama 5 menit. Pipet 2 mL larutan,
masukkan ke dalam labu erlenmeyer
bersumbat kaca 100 mL, tambahkan 50
mL etil asetat, sonikasi kembali selama 5
menit.
b. Larutan uji
Ambil 20 mL ekstrak cair masukkan ke
dalam labu terukur 50 mL, larutkan dalam
etil asetat, sonikasi selama 5 menit. Pipet 2
mL larutan, masukkan ke dalam labu
erlenmeyer bersumbat kaca 100 mL,
tambahkan 50 mL etil asetat, sonikasi sebagai saponin total (skema dapat dilihat
kembali selama 5 menit. pada Gambar 57) (Edeoga et al, 2005).
c. Pengukuran
Ukur serapan larutan pembanding, HASIL DAN PEMBAHASAN
larutan uji, dan larutan blangko secara
spektrofotometri pada panjang gelombang Standarisasi Simplisia Daun Alpukat
280 nm. Gunakan etil asetat sebagai (Persea americana Mill)
blangko. Hitung persentase katekin dalam  Pemeriksaan mikroskopik
ekstrak pada panjang gelombang 280 nm Dari hasil yang didapat yaitu epidermis
(Kementerian Kesehatan Republik atas dan tulang daun, epidermis bawah
Indonesia, 2010). dengan stomata tipe aniositik, rambut
3. Penetapan Kadar Alkaloid Total penutup dan idioblast kristal, epidermis,
Ambil 20 mL ekstrak cair, sari mesofil, dan kelenjar minyak, serta
menggunakan 100 mL metanol dan 10 mL mesofil, sel minyak, dan berkas
amoniak, panaskan di atas tangas air pengangkut. Pemeriksaan tersebut sesuai
selama 30 menit, saring. Ulangi 2 kali dengan standarisasi yang terdapat dalam
penyarian menggunakan jenis dan jumlah Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I
pelarut yang sama. Tambahkan 50 mL (2010).
asam klorida 1 N pada kumpulan filtrat,  Susut pengeringan
uapkan hingga volume kurang lebih 25 Hasil 8,6431 % ± 0,0299 % memenuhi
mL, saring ke dalam corong pisah. standarisasi yang terdapat dalam
Basakan filtrat dengan amoniak sampai pH Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I
± 10, sari 3 kali dengan 25 mL kloroform, (2010), dimana nilai susut pengeringan
kumpulkan dan uapkan fase kloroform tidak lebih dari 10 %.
pada suhu 50 °C, kemudian keringkan  Kadar abu total
pada suhu 100 °C hingga bobot tetap. Hasil 3,3164 % ± 0,0040 % memenuhi
Hitung sisa pengeringan sebagai alkaloid standarisasi yang terdapat dalam
total (skema dapat dilihat pada Gambar Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I
56) (Kementerian Kesehatan Republik (2010), dimana nilai kadar abu total tidak
Indonesia, 2010). lebih dari 4,2 %.
4. Penetapan Kadar Saponin Total  Kadar abu tidak larut asam
Ambil 200 mL ekstrak cair, sari Hasil 0,4011 % ± 0,1358 % memenuhi
menggunakan 100 mL etanol 20 % dalam standarisasi yang terdapat dalam
air, panaskan di atas penangas air selama 4 Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I
jam pada suhu 55 °C sambil sesekali (2010), dimana nilai kadar abu tidak larut
diaduk, saring. Sisanya disari kembali asam tidak lebih dari 1,1 %.
dengan 200 mL etanol 20 % dalam air,  Kadar sari larut air
saring. Gabungkan kedua ekstrak Hasil 22,3791 % ± 0,0221 % memenuhi
kemudian uapkan sampai 40 mL di atas standarisasi yang terdapat dalam
penangas air pada suhu 90 °C. Kemudian Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I
ekstrak dimasukkan ke dalam corong pisah (2010), dimana nilai kadar sari larut air
250 mL ditambah 20 mL dietil eter, kocok tidak kurang dari 20,2 %.
kuat. Lapisan air disimpan, lapisan eter  Kadar sari larut etanol
yang tersisa ditambah 20 mL dietil eter, Hasil 19,7912 % ± 0,1109 % memenuhi
kocok. Ulangi lagi sampai lapisan air standarisasi yang terdapat dalam
jernih. Gabungkan lapisan air kemudian Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I
tambahkan 60 mL n-butanol, cuci dengan (2010), dimana nilai kadar sari larut air
10 mL natrium klorida 5 %. Ambil lapisan tidak kurang dari 18,9 %.
n-butanol kemudian uapkan sampai kering
pada suhu 60 °C. Hitung sisa pengeringan

7
Analisis kandungan Kimia
Kandungan Hasil Ekstrak
Pereaksi
Kimia Heksan Aseton Etanol Air
1 2 3 4 5 6
Asam Amino 0,1 % Nindyrin-aseton (-) (-) (-) (-)
Karbohidrat Fehling
(-) (-) (-) (-)
( A & B)
Molisch (-) (-) (-) (-)
Asam Lemak Asam sulfat 25% (-) (-) (-) (-)
Rodamin B (-) (-) (-) (-)
Flavonoid Serbuk seng + asam klorida 2 N
(-) (-) (-) (-)
+ asam klorida pekat
Serbuk magnesium + asam
(-) (-) (-) (+)
klorida pekat
Sampel + aseton + asam borat
(+) (+) (+) (-)
+ asam oksalat + eter  UV366
Fenol Larutan garam besi (III) klorida (-) (+) (+) (+)
Vanilin-asam sulfat pekat (-) (+) (+) (+)
Vanilin-asam klorida pekat (-) (+) (+) (+)
Folin Ciocalteu (-) (+) (+) (+)
Tanin Larutan garam besi (-) (+) (+) (+)
Larutan gelatin (-) (+) (+) (+)
Alkaloid Reaksi Pengedapan
Bouchardat (-) (+) (+) (+)
Mayer (-) (+) (+) (-)
Wagner (-) (+) (+) (+)
Dragendroff (-) (+) (+) (-)
Hager (-) (+) (+) (-)
Reaksi Warna
Erdman LP (-) (+) (+) (+)
Asam nitrat pekat (+) (+) (+) (+)
Asam sulfat pekat (+) (+) (+) (+)
Frohde LP (-) (+) (+) (-)
Antrakuinon Sampel + asam klorida 2 N 
(-) (-) (-) (-)
panaskan + eter + amoniak 6 N
Minyak Atsiri Kalium permanganat (-) (-) (-) (-)
Asam asetat anhidrida (-) (-) (-) (-)
Saponin Pembuihan (-) (-) (+) (-)
Glikosida Baljet (-) (-) (-) (-)
Jantung Keller – Killiani (-) (-) (-) (-)

Uji asam amino yang telah dilakukan
pada ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan larutan 0,1 %
ninhydrin-aseton memberikan hasil yang
negatif pada ekstrak. Tidak munculnya
warna ungu hingga biru keabu-abuan pada
ekstrak yang menunjukkan tidak adanya
asam amino. Warna kuning juga tidak
muncul pada ekstrak yang menunjukkan
tidak adanya asam amino jenis prolin. Hal
ini membuktikan bahwa tidak adanya asam
amino dalam keempat ekstrak daun
alpukat.
Uji karbohidrat yang telah dilakukan
pada ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan larutan Fehling
memberikan hasil yang negatif pada
ekstrak. Tidak munculnya endapan kupro
warna merah bata pada ekstrak yang
menunjukkan tidak adanya karbohidrat.
Kemudian uji yang dilakukan dengan
reaksi Molish juga memberikan hasil yang
negatif pada ekstrak heksan, aseton,
etanol, dan air daun alpukat. Tidak muncul
cincin ungu pada kedua batas cairan saat
penambahan asam sulfat setetes demi

8
setetes melalui dinding tabung. Hal ini
membuktikan bahwa tidak adanya
karbohidrat dalam keempat ekstrak daun
alpukat.
Uji asam lemak yang telah dilakukan
pada ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan larutan asam sulfat
25 % memberikan hasil yang negatif pada
ekstrak. Tidak munculnya warna coklat
muda pada ekstrak yang menunjukkan
tidak adanya asam lemak, serta warna
coklat merah dan merah terang juga tidak
muncul pada ekstrak yang menunjukkan
tidak adanya asam lemak jenis glikolipid
dan sulfolipid. Kemudian uji asam lemak
juga dilakukan dengan larutan 0,5 %
rodamin B dalam etanol memberikan hasil
yang negatif pada ekstrak heksan, aseton,
etanol, dan air daun alpukat. Dengan
menggunakan latar belakang merah muda
warna kuning atau ungu kebiruan tidak
muncul pada ekstrak yang menunjukkan
tidak adanya asam lemak dalam keempat
ekstrak daun alpukat.
Uji flavonoid yang telah dilakukan pada
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat menggunakan cara-cara yang
tertera pada Materia Medika Indonesia
(1995). Dengan menggunakan Cara I
memberikan hasil yang negatif pada
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat. Tidak muncul pada ekstrak
yang menunjukkan tidak adanya flavonoid
jenis glikosida 3-flavonol. Kemudian uji
flavonoid menggunakan Cara II dengan
penambahan serbuk magnesium dan asam
klorida pada pengujian flavonoid akan
menyebabkan tereduksinya senyawa
flavonoid yang ada sehingga menimbulkan
reaksi warna merah yang merupakan ciri
adanya flavonoid (Robinson, 1995).
Namun, pada uji ini serbuk magnesium
tidak memberikan reaksi reduksi senyawa
flavonoid sehingga larutan uji tidak
memberikan perubahan warna pada
ekstrak yang menunjukkan tidak adanya
flavonoid. Tetapi, pada uji ini muncul
warna kuning jingga pada ekstrak air daun
alpukat yang memberikan hasil positif,
yang menunjukkan adanya flavonoid jenis
9
flavon, kalkon, dan auron. Namun, pada
ekstrak heksan, aseton, dan etanol daun
alpukat tidak muncul warna kuning jingga
yang menunjukkan tidak adanya flavonoid
jenis flavon, kalkon, dan auron.
Selanjutnya uji flavonoid menggunakan
Cara III memberikan hasil yang positif
pada ektsrak heksan, aseton, dan etanol
daun alpukat, dimana muncul warna
berflorurensi saat diamati dengan sinar
ultraviolet 366 nm yang menunjukkan
adanya flavonoid. Namun, pada ekstrak air
daun alpukat warna berflorurensi tidak
muncul saat diamati dengan sinar
ultraviolet 366 nm yang menunjukkan
tidak adanya flavonoid.
Uji fenol yang telah dilakukan dengan
menggunakan larutan garam besi (III)
klorida dalam air yang ditambahkan pada
masing-masing ekstrak daun alpukat
memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton, etanol, dan air daun
alpukat. Perubahan warna terjadi karena
adanya gugus hidroksil yang ada pada
senyawa fenol yang diekstraksi dengan
pelarut aseton, etanol, air sehingga muncul
warna hijau hingga biru hitam pada
ekstrak yang menunjukkan adanya fenol
(Sangi, et al., 2012). Namun, pada ekstrak
heksan daun alpukat tidak muncul warna
hijau hingga biru hitam yang menunjukan
tidak adanya fenol, karena tidak adanya
gugus hidroksil yang ada pada senyawa
fenol yang diekstraksi dengan pelarut
heksan.
Kemudian uji dengan pereaksi warna
menggunakan larutan vanilin asam sulfat
pekat, memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton, etanol, dan air daun
alpukat. Terjadinya perubahan warna pada
ekstrak yang menunjukkan adanya fenol.
Namun, pada ekstrak heksan daun alpukat
tidak terjadi perubahan warna yang
menunjukkan tidak adanya fenol. Uji
dengan larutan vanilin asam klorida pekat
memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton, etanol, dan air daun
alpukat. Terjadinya perubahan warna pada
ekstrak yang menunjukkan adanya fenol.
Namun, pada ekstrak heksan daun alpukat
tidak terjadi perubahan warna yang
menunjukkan tidak adanya fenol. Uji
dengan reaksi Folin-Ciocalteu memberikan
hasil yang positif pada ekstrak aseton,
etanol, dan air daun alpukat. Terjadinya
perubahan warna pada ekstrak yang
menunjukkan adanya fenol. Namun, pada
ekstrak heksan tidak terjadi perubahan
warna yang menunjukkan tidak adanya
fenol.
Uji tanin yang telah dilakukan pada
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan menggunakan larutan
garam besi (III) klorida memberikan hasil
yang postif pada ekstrak aseton, etanol,
dan air daun alpukat. Perubahan warna
terjadi karena adanya gugus hidroksil yang
ada pada senyawa tanin sehingga muncul
endapan berwarna biru hitam yang
menunjukkan adanya tanin jenis galotanin
dan elagitanin (Sangi, et al., 2012).
Namun, pada ekstrak heksan tidak muncul
endapan warna biru hitam atau warna hijau
coklat yang menunjukkan tidak adanya
tanin jenis galotanin dan elagitanin atau
tanin terkondensasi. Uji dengan larutan 1
% gelatin dalam 10 % natrium hidroksida
memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton, etanol, dan air daun
alpukat. Munculnya endapan pada ekstrak
yang menunjukkan adanya tanin. Namun,
pada ekstrak heksan tidak ada muncul
endapan yang menunjukkan tidak adanya
tanin.
Uji alkaloid yang telah dilakukan pada
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan menggunakan reaksi
pengendapan, diantaranya menggunakan
reaksi Bouchardat memberikan hasil yang
positif pada ekstrak aseton, etanol, dan air
daun alpukat. Munculnya endapan pada
ekstrak yang menunjukkan adanya
alkaloid. Namun, pada ekstrak heksan
tidak ada muncul endapan yang
menunjukkan tidak adanya alkaloid. Uji
alkaloid dengan pereaksi Mayer
memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton dan etanol daun alpukat.
Nitrogen pada alkaloid akan bereaksi
dengan ion logam K+ dari kalium
10
tetraiodomerkurat (II) membentuk
kompleks kalium-alkaloid yang
mengendap menunjukkan adanya alkaloid
(Marliana et al., 2005). Namun, pada
ekstrak heksan dan air daun alpukat tidak
ada muncul endapan yang menunjukkan
tidak adanya alkaloid. Uji alkaloid dengan
pereaksi Wagner memberikan hasil yang
positif pada ekstrak aseton, etanol, dan air
daun alpukat. Ion logam K+ akan
membentuk ikatan kovalen koordinat
dengan nitrogen pada alkaloid membentuk
kompleks kalium-alkaloid yang
mengendap menunjukkan adanya alkaloid
(Marliana et al., 2005). Namun, pada
ekstrak air daun alpukat tidak ada muncul
endapan yang menunjukkan tidak adanya
alkaloid. Uji alkaloid dengan pereaksi
Dradendroff memberikan hasil yang
positif pada ekstrak aseton dan etanol daun
alpukat. Nitrogen digunakan untuk
membentuk ikatan kovalen koordinat
dengan K+ yang merupakan ion logam
sehingga terbentuk endapan jingga pada
ekstrak yang menunjukkan adanya
alkaloid (Marliana et al., 2005). Namun,
pada ekstrak heksan dan air daun alpukat
tidak ada muncul endapan yang
menunjukkan tidak adanya alkaloid. Uji
alkaloid dengan pereaksi Hager
memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton dan etanol. Munculnya
endapan pada ekstrak yang menunjukkan
adanya alkaloid. Namun, pada ekstrak
heksan dan air daun alpukat tidak ada
muncul endapan yang menunjukan tidak
adanya alkaloid.
Untuk uji alkaloid dengan reaksi warna
yang telah dilakukan pada ekstrak heksan,
aseton, etanol, dan air daun alpukat
diantaranya dengan larutan Erdman
memberikan hasil yang positif pada
ekstrak aseton, etanol, dan air daun
alpukat. Terjadinya perubahan warna pada
ekstrak yang menunjukkan adanya
alkaloid. Namun, pada ekstrak heksan
daun alpukat tidak terjadi perubahan warna
yang menunjukkan tidak adanya alkaloid.
Uji alkaloid dengan larutan asam nitrat
pekat memberikan hasil yang positif pada
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat. Terjadinya perubahan warna
pada ekstrak yang menunjukkan adanya
alkaloid. Uji alkaloid dengan larutan asam
sulfat pekat juga memberikan hasil yang
positif pada ekstrak heksan, aseton, etanol,
dan air daun alpukat. Terjadinya
perubahan warna pada ekstrak yang
menunjukkan adanya alkaloid. Uji alkaloid
dengan larutan Frohde memberikan hasil
yang positif pada ekstrak aseton dan etanol
daun alpukat. Terjadinya perubahan warna
pada ekstrak yang menunjukkan adanya
alkaloid. Namun, pada ekstrak heksan dan
air daun alpukat tidak terjadinya
perubahan yang menunjukan tidak adanya
akaloid.
Uji antrakuinon yang telah dilakukan
pada ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan menggunakan asam
klorida 2 N, memberikan hasil yang
negatif pada keempat ekstrak daun
alpukat. Tidak munculnya warna merah
pada keempat ekstrak daun alpukat. Hal ini
membuktikan bahwa tidak adanya
antrakuinon dalam keempat ekstrak daun
alpukat.
Uji minyak atsiri yang telah dilakukan
pada ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan menggunakan larutan
kalium permanganat, memberikan hasil
yang negatif pada keempat ekstrak daun
alpukat. Warna kalium permanganat tidak
menjadi pucat atau hilang saat
ditambahkan kedalam ekstrak daun
alpukat yang menunjukan tidak adanya
minyak atsiri pada keempat ekstrak. Uji
minyak atsiri juga dilakukan dengan
larutan asam asetat anhidrida, memberikan
hasil yang negatif pada keempat ekstrak
daun alpukat. Tidak timbulnya warna hijau
biru pada keempat ekstrak daun alpukat
yang menunjukan tidak adanya minyak
atsiri. Hal ini membuktikan bahwa tidak
adanya minyak atsiri dalam keempat
ekstrak daun alpukat.
Uji saponin yang telah dilakukan pada
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat dengan melakukan uji
pembuihan (uji busa), yang memberikan
11
hasil positif pada ekstrak etanol daun
alpukat. Timbulnya buih stabil setinggi 1,5
cm selama 10 menit setelah ditambahkan
asam klorida 2 N yang menunjukan
adanya saponin. Sedangkan pada ekstrak
heksan, aseton, dan air tidak muncul buih
yang stabil yang menunjukan tidak adanya
saponin.
Uji glikosida jantung yang telah
dilakukan pada ekstrak heksan, aseton,
etanol, dan air daun alpukat dengan
menggunakan reaksi Baljet, memberikan
hasil yang negatif pada keempat ekstrak
daun alpukat. Tidak munculnya warna
jingga pada keempat ekstrak daun alpukat
yang menunjukan tidak adanya glikosida
jantung jenis glikosida dan aglikon
kardenolida. Uji glikosida jantung juga
dilakukan dengan rekasi Keller-Kiliani,
memberikan hasil yang negatif pada
keempat ekstrak daun alpukat. Tidak
timbulnya cincin berwarna biru hijau pada
keempat ekstrak daun alpukat yang
menunjukan tidak adanya glikosida
jantung. Hal ini membuktikan bahwa tidak
adanya glikosida jantung dalam keempat
ekstrak daun alpukat.
Pembahasan Kadar Senyawa Kimia
Penetapan kadar flavonoid total dari
ekstrak heksan, aseton, etanol, dan air
daun alpukat (Persea americana Mill)
dilakukan dengan menggunakan metode
kolorimetri aluminium klorida secara
spektrofotometri Ultraviolet-Visible yang
dihitung sebagai kuersetin. Prinsip
penetapan kadar flavonoid dengan metode
aluminium klorida adalah pengukuran
berdasarkan pembentukan warna dan
terjadinya pembentukan kompleks antara
aluminium klorida dengan gugus keto pada
atom C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-
3 atau C-5. Flavonoid mengandung sistem
aromatik yang terkonjungasi sehingga
menunjukkan pita serapan kuat pada
daerah spektrum sinar tampak (Harborne,
1987).
Aluminium klorida yang digunakan
berfungsi untuk memberikan efek
batokromik dengan melakukan
penggeseran kearah panjang gelombang peningkatan intensitas larutan standar
yang lebih panjang, sehingga merubah kuersetin menghasilkan warna kuning
panjang gelombang standar kuersetin (Chang et al., 2002). Panjang gelombang
untuk masuk ke dalam range panjang maksimum yang dihasilkan dari
gelombang Ultraviolet-Visible, sehingga pengukuran kuersetin adalah 440 nm.
menghasilkan efek hiperkromik

Gambar 1. Spektrum larutan 60 ppm kuersetin dalam etanol 80 % dengan pereaksi aluminium
klorida.
Kurva kalibrasi larutan kuersetin dalam etanol
80 % dengan pereaksi alumnium klorida
1
y = 0,007x + 0,111
0,9 R = 0,999
0,8
0,7
absorban

0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 50 100 150
konsentrasi (ppm)

Gambar 2. Kurva kalibrasi larutan kuersetin dalam etanol 80 % dengan pereaksi aluminium
klorida pada berbagai macam konsentrasi pada panjang gelombang maksimum 749 nm.
Berdasarkan kurva kalibrasi pada Penetapan kadar fenol total
Gambar 2 diperoleh persamaan regresi y = menggunakan spektrofotometri
0,007x + 0,111, dengan koefisien korelasi Ultraviolet-Visible dengan metode Folin-
R = 0,999, dengan perolehan kadar Ciocalteu. Reagen Folin-Ciocalteu
flavonoid total masing-masing pada digunakan karena senyawa fenolik dapat
ekstrak heksan 0,6 %; ekstrak aseton 0,3 bereaksi dengan Folin membentuk larutan
%; ekstrak etanol 0,3 %; dan ekstrak air berwarna biru yang dapat diukur
0,5 %. absorbansinya pada panjang gelombang
maksimum 749 nm.

12
 Gambar 3. Spektrum larutan 50 ppm asam galat dalam metanol dengan pereaksi Folin
Ciocalteu dan natrium hidroksida.
Senyawa fenolik bereaksi dengan & Syafrianti, 2017). Pada penetapan kadar
reagen Folin-Ciocalteu hanya dalam fenol total pembanding yang digunakan
suasana basa agar terjadi disosiasi proton adalah asam galat yang merupakan
pada senyawa fenolik menjadi ion fenolat. senyawa golongan fenolat yang bersifat
Untuk membuat kondisi basa maka stabil dan murni.
digunakan natrium hidroksida 1 % (Tahir
Kurva kalibrasi larutan asam galat dalam
metanol dengan pereaksi Folin Ciocalteu dan
natrium hidroksida
0,8
y = 0,010x - 0,030
0,7 R = 0,999
0,6
Absorban

0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 20 40 60 80
Konsentrasi (ppm)
Gambar 4. Kurva kalibrasi larutan asam galat dalam metanol dengan pereaksi Folin Ciocalteu
dan natrium hidroksida pada panjang gelombang maksimum 440 nm.
Berdasarkan kurva kalibrasi pada Gambar yang digunakan yaitu katekin. Ekstrak
4 diperoleh persamaan regresi y = 0,010x - yang sudah diencerkan kemudian
0,030 dengan koefisien korelasi R = dimasukkan ke dalam alat sonikator
0,999, dengan perolehan kadar fenol total selamat 5 menit. Tujuannya adalah untuk
masing-masing pada ekstrak aseton 5,1 %; meningkatkan permeabilitas dinding sel
ekstrak etanol 3,9 %; dan ekstrak air 3,7 sehingga isi sel keluar. Frekuensi getaran
%. mempengaruhi hasil ekstraksi (Hanani,
Penetapan kadar tanin total dilakukan 2015). Hasil pengukuran serapan larutan
dengan menggunakan spektrofotometri pembanding pada panjang gelombang
Ultraviolet-Visible dengan pembanding maksimum 280 nm yaitu 0,513.

13
 Gambar 5. Spektrum larutan katekin dalam etil asetat.
Hasil pengukuran serapan larutan uji
ekstrak aseton 0,830 dengan kadar yang
diperoleh 0,3 %; serapan larutan uji
ekstrak etanol 0,489 dengan kadar yang
diperoleh 0,2 %; serapan larutan uji
ekstrak air 0,138 dengan kadar yang
diperoleh 0,1 %.
Penetapan kadar alkaloid total
dilakukan dengan metode gravimetri.
Metode gravimetri adalah salah satu
metode penentuan secara kuantitatif
dengan cara mengukur berat komponen
dalam keadaan murni setelah melalui
proses pemisahan (Hanani, 2015).
Amoniak digunakan untuk melepaskan
ikatan alkaloid dengan asamnya sehingga
alkaloid kembali berada dalam kondisi
bebas. Akan terbentuk dua lapisan yaitu
lapisan asam dan lapisan kloroform.
Amoniak akan bereaksi dengan asam
klorida dan membentuk garam yang larut
dalam air sedangkan alkaloid kembali
dalam bentuk basa dan tidak larut dalam
air tetapi mudah larut dalam kloroform.
Alkaloid dalam keadaan bebas dapat
diekstraksi dengan pelarut kloroform,
sehingga dihasilkan ekstrak kloroform
yang merupakan alkaloid total.
Berdasarkan hasil perhitungan kadar
alkaloid total ekstrak heksan diperolah
kadar sebesar 0,1 %; ekstrak aseton
diperolah kadar sebesar 13,6 %; ekstrak
14
etanol diperolah kadar sebesar 15,6 %;
ekstrak air diperolah kadar sebesar 5,5 %.
Penetapan kadar saponin
dilakukan dengan cara gravimetri. Metode
gravimetri adalah salah satu metode
penentuan secara kualitatif dengan cara
mengukur berat komponen dalam keadaan
murni setelah melalui proses pemisahan
(Hanani, 2015). Ekstrak disari dengan
etanol 20 % dalam air. Etanol merupakan
pelarut umum yang dapat menarik hampir
sebagian besar senyawa kimia, sedangkan
air digunakan untuk menarik saponin
karena saponin mudah larut dalam air dan
tidak larut dalam eter (Hanani, 2015).
Berdasarkan hasil perhitungan kadar
saponin total dalam ekstrak etanol
diperoleh nilai 3,3 %.
KESIMPULAN
Pada penelitian ini telah berhasil
mengidentifikasi kandungan senyawa
kimia dari ekstrak heksan yaitu flavonoid
dan alkaloid. Kandungan senyawa kimia
dari ekstrak aseton yaitu flavonoid, fenol,
tanin, dan alkaloid. Kandungan senyawa
kimia dari ekstrak etanol yaitu flavonoid,
fenol, tanin, alkaloid, dan saponin.
Kandungan senyawa kimia dari ekstrak air
yaitu flavonoid, fenol, tanin, dan alkaloid.
Kadar flavonoid total pada ekstrak
heksan sebesar 0,6 %; ekstrak aseton
sebesar 0,3 %; ekstrak etanol sebesar 0,3
%; dan ekstrak air sebesar 0,5 %. Kadar
fenol total pada ekstrak aseton sebesar 5,1
%; ekstrak etanol sebesar 3,9 %; dan
ekstrak air sebesar 3,7 %. Kadar tanin total
pada ekstrak aseton sebesar 0,3 %; ekstrak
etanol sebesar 0,2%; dan ekstrak air
sebesar 0,1 %. Kadar alkaloid total pada
ekstrak heksan 0,1 %; ekstrak aseton 13,6
%; ekstrak etanol 15,6 %; dan ekstrak air
5,5 %. Kadar saponin total pada ekstrak
etanol sebesar 3,3 %.
SARAN
Disarankan kepada peneliti selanjutnya
agar melakukan identifikasi lebih lanjut
terhadap jenis kandungan senyawa kimia
dari ekstrak heksan, aseton, etanol dan air
dari daun alpukat (Persea americana
Mill).
DAFTAR PUSTAKA
Aziz, T., Cindo, R., & Fresca, A. (2009).
Pengaruh Pelarut Heksana dan
Etanol, Volume Pelarut, dan Waktu
Ekstraksi Terhadap Hasil Ekstraksi
Minyak Kopi. Jurnal Teknik
Kimia.16 (1), 1-8.
Badan Pengawas Obat dan Makanan
Republik Indonesia. (2008).
Taksonomi koleksi tanaman obat
kebun tanaman obat Citeureup.
Jakarta: Direktorat Obat Asli
Indonesia.
Boadi, N. O., Saah, S. A., Mensha, J. K.,
Addai-Arhinand, S., & Mensha, M.
B. (2015). Phytoconstituents,
Antimicrobial and Antioxidant
Properties of The Leaves of Persea
Americana Mill Cultivated In
Ghana. Journal of Medicinal Plants
Research. 9 (36), 933-939.
Chang, C., Yang, M., Wen, H., & Chern,
J., (2002). Estimation of Total
Flavonoid Content in Propolis by
Two Complementary Colorimetric
15
Methods. Journal of Food and
Drugs Analysis. 10 (3), 178-182.
Edeoga, H. O., Okwu, D. E., & Mbeabie,
B. O. (2005). Phytochemical
Constituents of Some Nigerian
Medicinal Plants. African Journal of
Biotechnology. 4 (7), 685-688.
Hanani, E. (2015). Analisis fitokimia.
Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Harborne, J., B. (1987). Metode Fitokimia.
Penentuan Cara Modern
Menganalisa Tumbuhan. Bandung:
Penerbit ITB
Kamagate, M., Kouame, N. M., Koffi, E.,
Kadja, A. B., Camille, K., Yao, N.
A. R., Balayssac, E., Potey-Daubrey,
T., N’zoue, K. S., & Kacou – Die, H.
M., (2016)., Acute toxicity and
hypoglycaemic activity of the leaf
exstracts of Persea americana Mill.
(Lauraceae) in wistar rats. African
Journal of Pharmachy and
Pharmacology. 10 (33), 690-698.
Kementerian Kesehatan Republik
Indonesia. (2010). Farmakope
Herbal Indonesia. (Suplemen I).
Jakarta: Departemen Kesehatan
Republik Indonesia.
Marliana, S., D., Suryanti, V., & Suyono.
(2005). Skrining Fitokimia dan
Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Komponen Kimia Buah Labu Siam
(Sechium edule Jacq. Swartz.) dalam
Ekstrak Etanol. Biofarmasi. 3 (1),
26-31
Peraturan Menteri Kesehatan Nomor 6.
(2016). Tentang Formularium Obat
Herbal Asli Indonesia. Jakarta:
Menteri Kesehatan Republik
Indonesia.
Robinson, T. (1995). Kandungan Organik
Tumbuhan Tingkat Tinggi. Bandung:
Penerbit ITB
 Sangi, M., S., Momuat, L., I., &
Kumaunang, M. (2012). Uji
Toksisitas dan Skrining Fitokimia
Tepung Gabah Pelepah Aren
(Arenga pinnata). Jurnal Ilmiah
Sains. 12 (2), 127-134.

Tahir, M., Muflihunna, A., & Syafrianti.

(2017). Penentuan Kadar Fenolik
Total Ekstrak Etanol Daun Nilam
(Pogostemon cablin Benth) Dengan
Metode Spektrofotometri UV-Vis.
Jurnal Fitofarmaka Indonesia. 4 (1).
215-218.

Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G.,

& Kaur, H. (2011). Phytochemical
screening and extraction: A review.
International Pharmaceutica
Sciencia. 1 (1), 98-106.

16

View publication stats