KATA PENGANTAR

Shallom

Dengan mengucapkan rasa puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan
Yang Maha Esa, yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat
menyelesaikan laporan PKL (Praktek Kerja Lapangan) dengan judul “Penetapan Simultan
Kadar Pewarna Punceau 4R, Kuning FCF, Merah Allura, Carmoisin dan Tartazin dalam
Makanan Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) – Detektor PDA” yang
dilaksanakan di BPOM (Balai Pengawasan Obat Dan Makanan).

Laporan ini disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam

menyelesaikan PKL (Praktek Kerja Lapangan) bagi para mahasiswa dari Fakultas MIPA
Jurusan Kimia Universitas Papua.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penyusunan laporan ini tidak sedikit
kesulitan dan hambatan yang dialami penulis, baik dalam segi isi, penulisan, maupun kata-
katanya tidak tersusun dengan baik, namun berkat bantuan dan bimbingan dari berbagai
pihak akhirnya laporan PKL ini dapat diselesaikan. Oleh sebab itu saya selaku penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada:

1. TUHAN YESUS yang telah memberikan rahmat, serta kesehatan sehingga penulis
dapat menyelesaikan laporan PKL (Praktek Kerja Lapangan) ini.
2. Kedua orang tua tercinta, suami dan anak tercinta serta saudara-saudara saya yang
memberikan doa, dukungan, serta kasih sayang hingga saat ini
3. Ketua Jurusan Kimia Fakultas Matemika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Evelina
Somar, S.Si.,M.Si selaku pembimbing PKL, atas dukungan, masukan serta saran bagi
penulisan dalam menyelesaikan laporan PKL
4. Herianto Baan, S.Si.,Apt, selaku Kepala Balai Pengawasan Obat Dan Makanan di
Manokwari yang telah memberikan kesempatan bagi penulis untuk melakukan
praktek kerja di BPOM Manokwari
5. Winda Permatasari, S.Si selaku pembimbing teknis yang telah memberikan tambahan
ilmu pengetahuan, nasehat dan dukungan dan masukan dalam menyelesaikan laporan
PKL ini.

i
 6. Ridari Rino Anggoro S.Si.,M.Si yang telah memberikan tambahan ilmu pengetahuan,
nasehat dan dukungan dan masukan dalam menyelesaikan laporan PKL ini.
7. Seluruh staf Balai Pengawasan Obat Dan Makanan di Manokwari
8. Teman-teman PKL Aprilia Ester Aronggear, Margareta Fatem, Herliana Asso, Aulia
Ekamala Wakang, Aisyah Ayu Indarsari

Penulis menyadari bahwa dalam penulisan laporan PKL ini masih jauh dari
kata sempurna, serta kritik dan saran yang membangun sangat diharapkan. Sehingga laporan
PKL ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan secara umum dan kimia
khusus.

Shalom

Manokwari, 11 februari 2021

penulis

ii
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR.................................................................................................................................i
DAFTAR ISI............................................................................................................................................iii
I PENDAHULUAN...................................................................................................................................1
1.1 Latar Belakang.......................................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.................................................................................................................2
1.3 Tujuan....................................................................................................................................2
1.4 Manfaat.................................................................................................................................2
II TINJAUAN PUSTAKA..........................................................................................................................3
2.1 Makanan...............................................................................................................................3
2.2 Bahan Tambahan Pangan.....................................................................................................3
2.3 Tinjauan Umum Tentang Pewarna sintetis...........................................................................4
2.4 Beberapa jenis pewarna sintetis...........................................................................................4
2.5 Kelebihan Pewarna Sintetis..................................................................................................7
2.6 Fungsi pewarna sintetis........................................................................................................7
2.7 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi...........................................................................................8
2.8 Prinsip Kerja Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)..........................................................9
2.9 Komponen-Komponen Kromatografi Cair Kinerja Tingi.....................................................10
2.10 Kelebihan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi........................................................................12
2.11 Kelemahan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi......................................................................13
III KEADAAN UMUM INSTITUSI...........................................................................................................14
3.1 Sejarah Umum Badan POM................................................................................................14
3.2 Tugas dan Fungsi.................................................................................................................15
3.3 Visi dan Misi........................................................................................................................16
3.4 Prinsip Dasar Sistem Pengawasan Obat dan Makanan......................................................16
3.5 Struktur Organisasi dan Sumber Daya Manusia.................................................................17
IV METODE..........................................................................................................................................19
4.1 Waktu Dan Tempat.............................................................................................................19
4.2 Alat Dan Bahan....................................................................................................................19
4.3 Prosedur Percobaan............................................................................................................19
V HASIL DAN PEMBAHASAN...............................................................................................................22
5.1 Penetapan Kadar Pewarna (Ponceau 4R, Kuning FCF, Merah Allura, Tartazine dan
Carmoisin).......................................................................................................................................22
VI PENUTUP.........................................................................................................................................30

iii
 6.1 Kesimpulan..........................................................................................................................30
6.2 Saran....................................................................................................................................30
DAFTAR PUSTAKA...............................................................................................................................31

iv
 DAFTAR TABEL
No Halaman
5.1 Panjang Gelombang Pewarna Sintesis……………………………………...…….. 23
5.2 Hasil Uji Kesesuaian Sistem HPLC untuk Penetapan Kadar Pewarna Simultan…. 24
5.3 Waktu Retensi Larutan Baku………………………………………………. …….. 25
5.4 Konsentrasi dan Luas Area dari Larutan Baku…………………………………… 26
5.5 Hasil Penetapan Simultan Kadar Pewarna pada Sampel………………….............. 29

v
 DAFTAR GAMBAR

No Halaman
2.1 Struktur Kimia Kuning FCF………………………………………………….... 5
2.2 Struktur Kimia Merah Allura…………………………………………………… 5
2.3 Struktur Kimia Ponceau 4R…………………………………………………….. 6
2.4 Struktur Kimia Tartazine……………………………………………………….. 6
2.5 Struktur Kimia Carmoisin……………………………………………………..... 7
2.6 Diagram Alir Alat KCKT………………………………………………………. 9
3.1 Struktur Organisai Balai POM Manokwari…………………………………….. 17
5.1 Kromatogram Larutan Baku……………………………………………………. 24
5.2 Kurva Kalibrasi Larutan Baku………………………………………………...... 27
5.3 Kromatogram Larutan Uji………………………………………………………. 28

vi
 DAFTAR LAMPIRAN

No halaman
1 Foto (Dokumentasi)…………………………………………………………… 31
2 Kegiatan Harian……………………………………………………………….. 32

vii
 I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Makanan ringan atau camilan merupakan makanan yang memiliki maksud
untuk menghilangkan rasa lapar seseorang sementara waktu. Masyarakat Indonesia
memiliki kebiasaan tidak bisa berhenti ngemil. Kebiasaan tersebut menjadi peluang
bisnis bagi industri makanan ringan untuk memproduksi berbagai jenis makanan.
Makanan ringan sangat disukai oleh anak-anak dan orang dewasa, yang pada umumnya
dikonsumsi kurang lebih 2-3 jam diantara waktu makan utama, yaitu pada pukul 10 pagi
dan 4 sore. Saat ini sudah banyak jenis makanan ringan yang beredar di pasaran yang
mempunyai bentuk, rasa, pengemasan, serta tampilan yang berbeda-beda yang dibuat
semenarik mungkin untuk menarik perhatian para konsumen, namun menurut jenisnya
makanan ringan yang banyak beredar dipasaran adalah makanan ringan yang
mengandung monosodium glutamate (MSG), pewarna, kalori, lemak dan zat-zat lain
yang berbahaya (Unpad, 2012). Produk makanan ringan makin membanjiri pasar dengan
pilihan yang semakin beragam, dari berbasis tepung terigu, tepung kedelai, cokelat, buah,
kacang kacangan dll.

Di dalam makanan ringan terdapat pewarna makanan, Pewarna makanan

merupakan salah satu bahan tambahan pangan (BTP) yang sering digunakan dalam
berbagai jenis makanan dan minuman olahan. salah satu sifat yang penting dari makanan
adalah warna, di samping juga nilai gizi, cita rasa, dan tekstur yang baik. Zat warna yang
ditambahkan kedalam makanan dan minuman mempunyai pengaruh yang sangat besar
terhadap selera dan daya tarik konsumen dalam memilih suatu produk

Menurut Cahyadi (2009), berdasarkan sumbernya dikenal dua jenis zat

pewarna yang termasuk dalam golongan bahan tambahan pangan, yaitu pewarna alami
dan pewarna sintetis. Pemberian pewarna sintetik dalam jumlah kecil tetapi berulang dan
konsumsi pewarna sintetik dalam jangka waktu yang lama akan memberikan dampak
negatif seperti kanker hati (Winarno (1992) dalam Chahaya, 2003).

Fenomena penggunaan pewarna buatan/sintetik pada makanan-makanan

semakin meluas sudah sangat banyak kita temui disekitar kita.semakin meningkatnya

1
 kebutuhan akan pewarna ini didukung juga oleh beberapa pihak yang memproduksi
aneka macam jenis pewarna sintetis.

Pewarna buatan/sintetik biasanya dibuat di pabrik-pabrik yang berasal dari

suatu zat kimia atau bahan yang mengandung pewarna alami melalui ekstraksi secara
kimiawi. Pewarna ini digolongkan kepada zat berbahaya apabila dicampurkan kedalam
makanan, namun ada beberapa jenis pewarna yang diijinkan dicampurkan dalam
makanan tetapi dalam batas yang telah ditentukan diantaranya ialah: pewarna Punceau
4R, Kuning FCF, Merah Allura, Carmoisin dan Tartazin.

Untuk mengetahui kadar pewarna dari sampel yang akan diuji, maka
dilakukan pengujian kadar dengan menggunakan metode Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT).

1.2 Rumusan Masalah

1.2.1 Berapa kadar pewarna punceau 4R, kuning FCF, merah allura, carmoisin dan tartazin
dalam makanan ringan?

1.3 Tujuan
1.3.1 Untuk mengetahui kadar pewarna punceau 4R, kuning FCF, merah allura, carmoisin
dan tartazin dalam makanan ringan secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT)

1.4 Manfaat
1.4.1 Dapat memahami bagaimana cara menggunakan alat kromatografi cair kinerja tinggi
(KCKT)
1.4.2 Dapat mengetahui berapa banyak kadar pewarna punceau 4R, kuning FCF, merah
allura, carmoisin dan tartazin dalam makanan ringan

2
 II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Makanan
Hasil dari proses pengolahan suatu bahan pangan yang dapat diperoleh
dari hasil pertanian, perkebunan, perikanan dan adanya teknologi (Moertjipto, 1993). Dalam
ilmu Kesehatan makanan adalah setiap substrat yang dapat dipergunakan untuk proses di
dalam tubuh terutama untuk membangun dan memperoleh tenaga bagi kesehatan sel tubuh.

Menurut Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia

No.942/MENKES/SK/VII/2003,makanan jajanan adalah makanan dan minuman yang diolah
oleh pengrajin makanan di tempat penjualan dan atau disajikan sebagai makanan siap
santap untuk dijual bagi umum selain yang disajikan jasa boga, rumah makan atau
restoran. Makanan jajanan menurut FAO didefisinikan sebagai makanan dan minuman
yang dipersiapkan dan dijual oleh pedagang kaki lima di jalanan dan di tempat keramaian
umum lain yang langsung dimakan atau dikonsumsi tanpa pengolahan atau persiapan lebih
lanjut (Judarwanto, 2008)

2.2 Bahan Tambahan Pangan

Menurut Undang-Undang (UU) Pangan No.18 Tahun 2012 pangan adalah
sesuatu yang berasal dari sumber hayati produk pertanian, perkebunan, kehutanan,
perikanan, peternakan, perairan, dan air baik yang diolah maupun tidak diolah yang
diperuntukan sebagai makanan atau minuman bagi konsumsi manusia, termasuk bahan
tambah pangan, bahan baku pangan dan bahan lainnya yang digunakan dalam proses
penyiapan, pengolahan dan pembuatan makan dan minuman. Sedangkan pangan olahan
menurut Undang-Undang (UU) Pangan No.18 Tahun 2012 adalah makanan atau
minuman hasil proses dengan cara atau metode tertentu dengan tanpa batas tambahan.

Menurut Peraturan Badan Pengawas Obat Dan Makanan No.11 Tahun 2019
Tentang Bahan Tambahan Pangan yang selanjutnya disingkat BTP adalah bahan yang
ditambahkan ke dalam pangan untuk mempengaruhi sifat atau bentuk Pangan. Tujuan
dari penggunaan BTP ialah untuk memmpertahankan kualitas penyimpanan, membuat
lebih mudah saat dihidangkan, serta mempermudah dalam proses preparasi bahan
pangan (Cahyadi,2012:2)

Bahan tambahan pangan yang paling sering digunakan salah satunya adalah
pewarna. Pewarna pada umumnya terbagi atas dua yaitu pewarna alami dan pewarna

3
 buatan/sintetis. Banyak produsen yang memilih menggunakan pewarna buatan/sintetik
dikarenakan harganya yang murah dan lebih efektif dalam mempertahankan kualitas
warna. Namun jika pewarna sintetis digunakan terus menerus dan melebihi batas
konsentrasi yang telah ditetapkan UU maka akan memberikan pengaruh yang buruk
terhadap kesehatan tubuh manusia

2.3 Tinjauan Umum Tentang Pewarna sintetis

Pewarna sintetis merupakan zat aditif yang ditambahkan pada makanan yang
bertujuan untuk memperbaiki warna dari makanan. Pewarna sintetis makanan ini
pertama kali ditemukan oleh wiliam henry perkins pada tahun 1856 dan penggunaannya
sudah mulai dikenal sejak tahun 1956. Pewarna sintetis ini terbuat dari bahan-bahan
kimia yang beraneka ragam dan memiliki sifat yang stabil. Proses pembuatan zat warna
sintetis biasanya melalui perlakuan pemberian asam sulfat atau asam nitrat yang sering
kali terkontaminasi oleh arsen atau logam berat lain yang bersifat racun. Zat warna yang
akan digunakan harus menjalani pengujia dan proses penggunaannya, yang disebut
proses sertifikasi. Proses sertifikasi ini meliputi pengujian kimia, biokimia, toksikologi
dan analisis media terhadap zat warna tersebut.
Ada dua macam yang tergolong pewarna buatan yaitu dye dan lake. Dye
adalah zat pewarna yang umumnya bersifat larut dalam air dan larutannya dapat
mewarnai sedangkan Lake adalah zat pewarna yang merupakan gabungan dari zat warna
(dye) dengan radikal basa (Al atau Ca) yang dilapisi dengan hidrat alumina atau
Al(OH)3.
Warna dari suatu produk makanan maupun minuman merupakan salah satu
ciri yang penting. Warna juga turut mempengaruhi persepsi akan rasa. Oleh sebab itu,
warna menimbulkan banyak pengaruh terhadap konsumen dalam memilih suatu produk
makanan dan minuman (Susanti, 2016).

2.4 Beberapa jenis pewarna sintetis

1. Kuning FCF (Sunset Yellow)
Kuning FCF adalah pewarna yang dapat ditemukan dalam makanan seperti es
jeruk, es krim,ikan kalengan,keju,jeli,minuman bersoda dan banyak obat-obatan.
Batas maksimum penggunaan Kuning FCF dalam permen menurut BPOM No.37
tahun 2013 adalah 100 mg/kg. Untuk sekelompok kecil individu, konsumsi

4
 pewarna aditif ini dapat menimbulkan urtikaria,,rhinitis,alergi,hiperaktivitas,sakit
perut,mual dan muntah.

Gambar 2.1 Struktur Kimia Kuning FCF

2. Merah allura
Merah allura adalah pewarna pewarna sintetis merah jingga yang banyak
digunakan pada permen dan minuman. Merah allura sudah dilarang dibanyak
negara lain, termasuk Belgia,Perancis,Jerman,Swedia,Austria dan Norwegia.
Batas maksimum penggunaan merah allura dalam permen menurut BPOM No.37
Tahun 2013 adalah 100 mg/kg. Sebuah studi menunjukkan bahwa reaksi
hipersensitivitas terjadi pada 15% orang yang mengkonsumsi merah allura. Dalam
studi itu, 52 peserta yang telah menderita gatal-gatal atau ruam kulit selama empat
minggu atau lebih diikutkan pada program diet yang sama sekali tidak
mengandung merah allura dan makanan lain yang diketahui dapat menyebabkan
gatal-gatal, setelah tiga minggu tidak ada gejala, para peserta kembali diberi
makanan yang mengandung merah allura dan dimonitor. Dari pengujian itu, 15%
kembali menunjukkan gejala ruam atau gatal-gatal. Dalam label kemasan
makanan allura red berkode E129 atau FD & C No. 405.

Gambar 2.2 Struktur Kimia Merah Allura

3. Ponceau 4R
Ponceau 4R adalah pewarna merah hati yang digunakan dalam berbagai produk
termasuk selai,kue,agar-agar dan minuman ringan. Selain berpotensi memicu
hiperaktivitas pada anak, ponceau 4R dianggap karsinogenik (penyebab kanker)

5
 dibeberapa negara termasuk Amerika Serikat, Norwegia, Finlandia. US Food and
Drug administration (FDA) sejak tahun 2000 telah menyita permen dan makanan
buatan cina yang mengandung ponceau 4R. Pewarna aditif ini juga dapat
meningkatkan serapan aluminium sehingga melebihi batas toleransi.
Batas maksimum penggunaan Ponceau 4R dalam permen menurut BPOM No.37
Tahun 2013 adalah 100 mg/kg. Dalam label kemasan makanan, pewarna ini
berkode C.I. 16255 atau E124

Gambar 2.3 Struktur Kimia Ponceau 4R

4. Tartazine
Tartazine adalah pewarna kuning yang banyak digunakan pada makanan dan obat-
obatan. Selain berpotensi meningkatkan hiperaktivitas anak pada sekitar 1-10 dari
10.000 orang, tartazine menimbulkan efek langsung seperti urtikaria (ruam kulit),
rhinitis (hidung melar), asma, purpura (kulit lebam). Intoleransi ini lebih umum
pada penderita asma atau orang yang sensitive terhadap aspirin. Menurut BPOM
No.37 Tahun 2013 batas maksimum penggunaan tartazine dalam permen adalah
100 mg/kg

Gambar 2.4 Struktur Kimia Tartazine

5. Carmoisin
Carmoisin merupakan pewarna sintetik yang memberikan warna merah hingga
maroon. Karmoisin bersifat larut air dan sedikit larut pada etanol. Senyawa ini

6
 biasanya berbentuk bubuk garam disodium dengan warna merah hingga maroon.
Pewarna makanan ini sering ditambahkan dalam produk pangan berperisa anggur,
blueberry, atau stroberi. ADI: 0 – 4 mg/kg berat badan. Pada kemasan makanan
pewarna ini mempunyai kode CI 14720. Menurut BPOM No.37 Tahun 2013 batas
maksimum penggunaan karmoisin dalam permen adalah 100 mg/kg

Gambar 2.5 Struktur Kimia Carmoisin

2.5 Kelebihan Pewarna Sintetis

 Kelebihan pewarna buatan dibandingkan pewarna alami adalah dapat
menghasilkan warna yang lebih kuat dan lebih stabil meski jumlah
pewarna yang digunakan hanya sedikit
 Warna yang dihasilkan akan tetap cerah meskipun telah melalui proses
pengolahan dan pemanasan.
 Tersedia dalam jumlah yang memadai
 Stabilitas bagus
 Kekuatan mewarnai yang tinggi menjadikan zat pewarna sintetis
menguntungkan secara ekonomi
 Tersedia dalam berbagai bentuk
 Harga yang jauh lebih murah

2.6 Fungsi pewarna sintetis

Fungsi pewarna yaitu untuk mempertajam atau meyeragamkan warna bahan
makanan yang mengalami perubahan pada saat proses pengolahan. Pada buah,
pemberian pewarna memiliki tujuan untuk menyeragamkan penampilan

7
 (Saparinto,2006). Syah dalam Batama (2015) menambahkan bahwa beberapa tujuan
utama penambahan zat pewarna dalam makanan yaitu:
1. Menutupi perubahan warna akibat paparan cahaya, udara dan temperatur yang ekstrim
akibat pengolahan dan penyimpanan;
2. Memperbaiki variasi alami warna;
3. Membuat identitas produk pangan;
4. Menarik minat konsumen dengan pilihan warna yang menarik;
5. Untuk menjaga rasa dan vitamin produk simpan yang mungkin akan terpengaruh sinar
matahari.

2.7 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi adalah teknik pemisahan fisik suatu campuran zat-zat kimia
(analit) yang berdasarkan pada perbedaan migrasi/ distribusi masing-masing komponen
campuran yang terpisah pada fase diam (stationary phase) dibawah pengaruh fase gerak
(mobile phase), fase gerak dapat berupa gas atau zat cair dan fasa diam dapat berupa zat
cair atau zat padat. KCKT dapat dipandang sebagai pelengkap Kromatografi gas (KG),
keduanya dapat digunakan untuk menghasilkan efek pemisahan yang sama baiknya. Bila
derivatisasi diperlukan dalam KG, namun pada KCKT zat-zat yang tidak diderivatisasi
masih dapat dianalisis. Untuk zat-zat yang labil pada pemanasan atau tidak menguap,
KCKT adalah pilihan utama. Keunggulan metoda ini dibanding metoda pemisahan
lainnya terletak pada ketepatan analisis dan kepekaan yang tinggi serta cocok untuk
memisahkan senyawa-senyawa nonvolatil yang tidak tahan pada pemanasan.

Penemu kromatografi adalah Tswett yang pada tahun 1903 mencoba

memisahkan pigmen dari daun-daun hijau dengan menggunakan suatu kolom yang berisi
kapur (CaSO4). Istilah kromatografi diciptakan oleh Tswett untuk melukiskan daerah-
daerah yang berwarna yang bergerak kebawah kolom. Pada waktu yang hamper
bersamaan, D.T.Day juga menggunakan kromatografi untuk memisahkan fraksi-fraksi
petroleum, namun Tswett lah yang pertama diakui sebagai penemu dan yang
menjelaskan tentang proses kromatografi
Kromatogram KCKT merupakan hubungan antara waktu sebagai absis dan
tanggap detektor sebagai ordinat pada sistem koordinat Cartesian, dimana titik nol
dinyatakan sebagai saat dimulainya injeksi sampel. Molekul-molekul sampel yang

8
 diinjeksikan menuju kolom analisis tidak akan berkumpul pada suatu titik secara
serempak dalam waktu yang sama. Demikian pula tiap-tiap molekul analit akan
mengalami hambatan fase diam di dalam kolom dengan waktu yang berbeda. Oleh
karena itu semua molekul analit tidak serempak keluar dari kolom.

Molekul analit akan keluar dari kolom secara acak dan demikian pula respon
detektor terhadap analit yang keluar dari kolom tersebut tidak serempak terhadap semua
molekul. Sebagai akibat kenyataan tersebut maka profil kromatogram akan melebar
secara ideal membentuk kurva Gauss

2.8 Prinsip Kerja Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Prinsip dasar dari KCKT adalah pemisahan analit-analit berdasarkan

kepolarannya. Kromatografi merupakan teknik yang mana solute atau zat-zat terlarut
terpisah oleh perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan solute-solut ini melewati suatu
kolom kromatografi. Pemisahan solu-solut ini diatur oleh distribusi solute dalam fase
gerak dan fase diam. Penggunaan kromatografi cair secara sukses terhadap suatu
masalah yang dihadapi membutuhkan penggabungan secara tepat dari berbagai macam
kondisi operasional seperti jenis kolom, fase gerak, panjang dan diameter kolom,
kecepatan alir fase gerak, suhu kolom dan ukuran sampel. Untuk tujuan memilih
kombinasi kondisi kromatografi yang terbaik, maka dibutuhkan pemahaman yang
mendasar tentang berbagai macam factor yang mempengaruhi pemisahan pada
kromatografi cair.

Gambar 2.6 Diagram Alir Alat KCKT

9
2.9 Komponen-Komponen Kromatografi Cair Kinerja Tingi

1. Wadah Fase Gerak

Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong
ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak. Wadah ini
biasanya dapat menampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut. Fase gerak atau
eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur yang secara
keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi. Daya elusi dan resolusi ini
detentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-
komponen sampel.
Fase gerak sebelum digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk
menghindari partikel-partikel kecil ini. Selain itu, adanya gas dalam fase gerak juga
harus dihilangkan, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama di
pompa dan detector sehingga akan mengacaukan analisis.
2. Pompa
Berbagai pompa tersedia untuk kromatografi cair. Semuanya dirancang untuk
mendorong berbagai pelarut melalui kolom yang dikemas rapat. Karena tekanan kolom
terhadap aliran tinggi maka pompa harus bekerja pada tekanan tinggi, sering kali lebih
besar dari 1000 psi. Terdapat 2 jenis pompa yang banyak digunakan dalam KCKT yaitu
Pompa tekanan tetap (costant pressure) dan Pompa pendesakan tetap (constant
displacement).
3. Tempat Penyuntikan Sampel
Sampel-sampel cair dan larutan disuntikkan secara langsung kedalam fase
gerak yang mengalir dibawah tekanan menuju kolom menggunakan alat penyuntikan
yang terbuat dari tembaga tanah karat dan katup Teflon yang dilengkapi dengan keluk
sampel (sampel loop) internal atau eksternal.
4. Kolom
Kolom pada KCKT merupakan bagian yang sangat penting, sebab pemisahan
komponen – komponen sampel akan terjadi di dalam kolom. Kolom KCKT dibuat dalam
bentuk lurus yang dimaksudkan untuk efisiensi kolom, sehingga didapkan harga H
minimal. Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok yaitu:
a. Kolom analitik : Kolom analitik digunakan untuk penentuan jenis dan jumlah
analit yang diperiksa. Ditinjau dari ukurannya (panjang dan diameternya)
kolom KCKT dibagi menjadi beberapa bagian untuk kemasan pellicular,

10
 panjang yang digunakan adalah 50-100 cm. untuk kemasan poros
mikropartikular, 10-30 cm. dewasa ini ada yang 5 cm
b. Kolom Preparatif : Kolom preparative digunakan untuk memisahkan
komponen-komponen analit dalam jumlah besar. Biasanya pada kromatografi
preparative kita dapat mengumpulkan tiap-tiap eluate yang keluar dari kolom.
Karena sampel yang dipisahkan pada kromatografi preparative biasanya
dalam jumlah yang relative lebih besar, maka kolom preparative biasanya juga
memiliki diameter dalam dan panjang relative lebih besar dari kolom analitik.
Umumnya kolom preparative memiliki diameter dalam 6 mm atau lebih dan
panjang 25-100 cm
5. Detector
Suatu detector dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen sampel
didalam kolom (analisi kualitatif) dan menghitung kadarnya (analisis kuantitatif).
Detector yang baik memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan (noise) yang rendah,
kisar respon linier yang luas, dan memberi respons untuk semua tipe senyawa. Suatu
kepekaan yang rendah terhadap aliran fluktuasi temperature sangat diinginkan, tetapi
tidak selalu dapat diperoleh.
Terdapat beberapa detector yang dapat digunakan dalam KCKT yaitu :
Detektor photodiode array (PDA), detector fluorosensi, detector elektrokimia, detector
indeks bias dan detector UV-Vis
a. UV-Vis : Pada detector ultraviolet/visible, deteksi komponen sampel
didasarkan pada absorpsi sinar ultraviolet (untuk detector ultraviolet) dan
sinar tampak ( untuk detector visible). Detector ultraviolet merupakan
detector yang paling luas digunakan karena sensivitas dan
reprodusibelitasnya yang tinggi serta mudah operasinya. Detector UV
terutama digunakan untuk pendeteksian senyawa-senyawa organic.
b. PDA : Detektor PDA mampu mendeteksi kumpulan kromatogram secara
simultan pada Panjang gelombang yang berbeda dalam sekali proses
(single run) dan diperoleh spektrum UV tiap puncak yang berbeda. PDA
merupakan detector pada spektofotometer yang terdiri dari satu tatanan
yang teratur (array) dari foto diode aktif dalam jumlah yang sangat
banyak (330 buah). PDA merupakan jenis fotodetektor yang dapat
mengubah energi cahaya menjadi arus atau beda potensial, tergantung
mode preparasinya. Prinsip kerja detector PDA ialah cahaya yang masuk
11
 akan mengeksitasi electron dari lapisan SiO2, kemudian electron akan
dialirkan oleh n-Si dan dibawa menuju p-Si melalui area kosong
(depletion region), setalah itu terjadilah photocurrant dikarenakan
electron dapat mengalir serta dapat terukur oleh amperemeter
c. Fluorosensi : merupakan detector HPLC yang paling sensitive, spesifik
dan selektif diantara detector HPLC yang lain. Detector ini
memungkinkan untuk mendeteksi sebuah molekul analit tunggal didalam
sampel yang tepat. Detector ini sangat cocok untuk ‘trace analysis’ karena
bersifat spesifik dan sensitive. Detector fluorosensi memiliki sensitivitas
10-10000 lebih kuat dari pada detector UV untuk sebuah senyawa yang
menyerap sinar tampak.
d. Elektrokimia : detector elektrokimia biasanya didasarkan pada daya
hantar listrik (konduktometri) dan polarografi. Detector jenis
konduktometri biasanya digunakan untuk mendeteksi solute-solut yang
dapat mengalami reaksi redoks baik senyawa organic maupun senyawa
anorganik.
e. Indeks Bias : merupakan detector yang juga luas penggunaannya setelah
detector ultraviolet. Dasarnya ialah pengukuran perbedaan indeks bias
fase gerak yang berisi komponen sampel, sehingga dapat dianggap
sebagai detector yang universal pada HPLC. Detector ini kurang sensitive
disbanding dengan ultraviolet dan sangat peka terhadap perubahan suhu.

2.10 Kelebihan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Pressure Liquid
Chromatography (HPLC) merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia. KCKT
termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu teknik kromatografi dengan fase gerak
cairan dan fase diam cairan atau padat. Banyak kelebihan metode ini jika dibandingkan
dengan metode lainnya ( Done dkk, 1974; Snyder dan Kirkland, 1979; Hamilton dan
Sewell, 1982; Johnson dan Stevenson, 1978). Kelebihan itu antara lain:
1. Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran
2. Mudah melaksanakannya
3. Kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi
4. Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang dianalisis

12
 5. Resolusi baik
6. Dapat digunakan bermacam-macam detector
7. Kolom dapat digunakan kembali
8. Mudah melakukan “Sample Recovery”

2.11 Kelemahan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

1. Harga sebuah alat KCKT cukup mahal
2. Larutan harus dicari fase diamnya terlebih dahulu
3. Hany bisa digunakan untuk asam organic
4. Harus mengetahui kombinasi yang optimum antara pelarut, analit dan gradient
elusi
5. Sering ada larutan standar yang tertinggal di injector
6. Pada kolom dengan diameter rata-rata partikel fase diam dengan ukuran 3
mikrometer dan 5 mikrometer sela-sela partikel lebih mudah tertutup oleh
kotoran, jadi harus seringkali dicuci dan kemurnian larutan harus dijaga

13
 III KEADAAN UMUM INSTITUSI

3.1 Sejarah Umum Badan POM

Permasalahan pengawasan obat dan makanaan semakin kompleks seiring
dengan pesatnya perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi, dalam bidang obat dan
makanan yang sangat berpengaruh pada gaya hidup dan pola konsumsi masyarakat.
Sementara itu, kemajuan dalam informasi dan transportasi pada saat ini memudahkan
masyarakat memperoleh berbafai pilihan produk semakin meningkatnya resiko
mendapatkan produk yang tidak aman untuk dikosnsumsi.

Untuk menjawab tantangan dan permasalahan pengawasan obat dan makanan

yang makin tidak terprediksi dimasa depan, maka pembangunan dan pengembangan
sumber daya manusia menjadi fokus utama dengan perencenaan dan implementasi yang
baik dan kinsisten. Penegembangan sumber daya manusia harus berdimensi profesional,
dan juga mencakup nilai etos kerja, etika dan kejujuran. Perkuatan infrastruktur
laboratorium perlu dikembangkan agar badan pengawasan obat dan makanan dapat
mengawal semua kebijakan dalam rangka pengawasan obat makanan. Hal ini diperlukan
demi mewujudkan sistem pengawasan obat dan makanan yang kuat, terarah dan
berkesinabungan. Dengan demikian, jaminan mutu, keamanan, dan khasiat produk yang
beredar terpercaya sehingga masyarakat terhindar dari obat dan makanan yang beresiko
terhadap kesehatan.

Berdasarkan Keputusan Presiden RI Nomor 80 Tahun 2001 sebagaimana

telah diubah dengan Keputusan Presiden RI Nomor 103 tahun 2017 tentang kedudukan
dan fungsi, kewenangan, susunan organisasi dan tata kerja lembaga pemerintah nono
Depatermen (LPND) yang bertanggung jawab kepada presiden.

Berdasarkan Keputusan Republik RI Nomor 80 Tahun 2017 tentang Badan

Pengawasan Obat dan Makanan dan berdasarkan surat persetujuan Menteri
Pendayagunaan Aparatur Negara dan Reformasi Birokrasi Nomor B/411/M.KT.01/2018
tanggal 8 juni hal penataan unit pelaksana teknis badab pengawasan obat dan makanan,
perlu menetapkan peraturan badan pengawas obat dan makanan tentang organisasi dan
tata kerja unit pelaksana teknis di lingkungan badan pengawas obat dan makanan.

14
3.2 Tugas dan Fungsi
BPOM adalah sebuah Lembaga Pemerintah Non Depatermen (LPND) yang
bertugas mengawasi peredaran obat, obat tradisional, suplemen kesehatan, kosmetik dan
makanan diwilayah indonesia. Tugas, fungsi dan kewenangan BPOM diatur dalam
keputusan Presiden Nomor 103 Tahun 2001 tentang Kedudukan, Tugas, Fungsi,
Kewenangan, Susunan Organisasi dan Tata Kerja Lembaga Pemerintah Non Departemen
yang telah diubah terakhir kali dengan Peraturan Presiden Nomor 3 Tahun 2013 tentang
Perubahan Ketujuh atas Keputusan Presiden Nomor 103 Tahun 2001. Sesuai amanat ini,
Balai POM di Manokwari sebagai UPT Badan POM RI di wilayah Provinsi Papua Barat
menyelenggarakan fungi.

Dalam melaksanakan tugasnya di Provinsi Papua Barat, Badan POM

memiliki 2 UPT yaitu Balai Pengawas Obat dan Makanan di Manokwari dan Loka
Pengawas Obat dan Makanan di Kabupaten Sorong. Balai POM di Manokwari dan Loka
POM di Kabupaten Sorong mempunyai tugas pokok melakukan pengawasan obat, bahan
obat, narkotika, psikotropika, prekursor, zat adiktif, obat tradisional, suplemen
kesehatan, kosmetik dan pangan olahan. Dalam melaksanakan tugas tersebut, UPT
menyelenggarakan fungsi:

1. Penyusunan rencana dan program di bidang pengawasan Obat dan Makanan.

2. Pelaksanaan pemeriksaan sarana/fasilitas produksi Obat dan Makanan.
3. Pelaksanaan pemeriksaan sarana/fasilitas distribusi Obat dan Makanan dan/atau
sarana/fasilitas pelayanan kefarmasian.
4. Pelaksanaan sertifikasi produk dan sarana/fasilitas produksi dan/atau distribusi Obat
dan Makanan.
5. Pelaksanaan pengambilan contoh (sampling) Obat dan Makanan.
6. Pelaksanaan pengujian Obat dan Makanan.
7. Pelaksanaan intelijen dan penyidikan terhadap pelanggaran ketentuan peraturan
perundang-undangan di bidang pengawasan Obat dan Makanan.
8. Pengelolaan komunikasi, informasi, edukasi dan pengaduan masyarakat di bidang
pengawasan Obat dan Makanan.
9. Pelaksanaan koordinasi dan kerja sama di bidang pengawasan Obat dan Makanan.
10. Pelaksanaan pemantauan, evaluasi dan pelaporan di bidang pengawasan Obat dan
Makanan.

15
 11. Pelaksanaan urusan tata usaha dan rumah tangga.
12. Pelaksanaan fungsi lain yang diberikan oleh Kepala Badan.

3.3 Visi dan Misi

Dalam menjalankan tugas dan fungsinya Balai Pengawasan Obat dan
Makanan di Manokwari berpedoman pada visi dan misi di Badan POM RI, sesuai
dengan keputusan Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI Nomor :
HK.04.01.21.11.10.10509 tanggal 03 november 2010 Visi dan Misi Badan Pengawasan
Obat dan Makanan.

Visi
Obat dan Makanan aman, bermutu, dan berdaya saing untuk mewujudkan Indonesia
maju yang berdaulat, mandiri, dan berkepribadian berlandaskan gotong royong

Misi
Membangun SDM unggul terkait Obat dan Makanan dengan mengembangkan
kemitraan bersama seluruh komponen bangsa dalam rangka peningkatan kualitas
manusia Indonesia;
Memfasilitasi percepatan pengembangan dunia usaha Obat dan Makanan dengan
keberpihakan terhadap UMKM dalam rangka membangun struktur ekonomi yang
produktif dan berdaya saing untuk kemandirian bangsa;
Meningkatkan efektivitas pengawasan Obat dan Makanan serta penindakan kejahatan
Obat dan Makanan melalui sinergi pemerintah pusat dan daerah dalam kerangka
Negara kesatuan guna perlindungan bagi segenap bangsa dan memberikan rasa aman
pada seluruh warga;
Pengelolaan pemerintahan yang bersih, efektif, dan terpecaya untuk memberikan
pelayanan public yang prima dibidang Obat dan Makanan

3.4 Prinsip Dasar Sistem Pengawasan Obat dan Makanan

Prinsipprinsip dasar sistem pengawasan Obat dan Makanan di antara lain :

1. Tindakan pengamatan cepat, tepat, akurat dan profesional.

2. Tindakan dilakukan berdasarkan atas tingkatan resiko dan berbasis bukti ilmiah.
3. Lingkup pengawasan bersifat menyeluruh mencakup seluruh siklus proses.
4. Berskala nasional atau lintas provinsi dengan jaringan kerja ke internasional.
5. Otoritas yang menunjang penegakan suplemasi hukum.
6. Memiliki jaringan laboratorium yang kohesif yang kuat berkolaborasi dengan jaringan
global.

16
3.5 Struktur Organisasi dan Sumber Daya Manusia
Ada dua tipe dalam Balai POM, yaitu tipe A dan tipe B. Balai POM tipe A
adalah Balai Besar Pengawasan Obat dan Makanan. Balai POM tipe B adalah Balai
Pengawasan Obat dan Makanan.

Balai POM di Manokwari termasuk Balai POM tipe B yang mempunyai

struktur organisasi sebagai berikut:

Kepala Balai Pengawas

Obat dan Makanan

Sub Bagian Tata Usaha

Seksi Pemeriksaan Dan Seksi Informasi Dan

Seksi Pengujian
Penindakan Komunikasi

Kelompok Jabatan
Fungsional

Gambar 3.1 Struktur Organisai Balai POM Manokwari

Adapun tugas masing-masing seksi adalah:

1. Sub bagian Tata Usaha mempunyai tugas melakukan koordinasi penyusunan rencana,
program, dan anggaran, pengelolaan keuangan dan barang milik negara, teknologi
informasi komunikasi, evaluasi dan pelaporan, urusan kepegawaian, penjaminan
mutu, tata laksana, kearsipan, tata persuratan serta kerumahtanggaan.

17
2. Seksi Pengujian mempunyai tugas melakukan pengujian kimia dan mikrobiologi Obat
dan Makanan.
3. Seksi Pemeriksaan dan Penindakan mempunyai tugas melakukan inspeksi dan
sertifikasi sarana/fasilitas produksi dan/atau distribusi Obat dan Makanan dan
sarana/fasilitas pelayanan kefarmasian, sertifikasi dan pengambilan contoh (sampling)
produk Obat dan Makanan, serta intelijen dan penyidikan terhadap pelanggaran
ketentuan peraturan perundang-undangan di bidang pengawasan Obat dan makanan
4. Seksi Informasi dan Komunikasi mempunyai tugas melakukan pengelolaan
komunikasi, informasi, edukasi, dan pengaduan masyarakat, serta penyiapan
koordinasi pelaksanaan kerja sama di bidang pengawasan Obat dan Makanan.

Untuk mendukung tugas-tugas Balai POM di Manokwari sesuai dengan

peran dan fungsinya diperlukan sejumlah sumber daya manusia (SDM) yang memiliki
keahlian dan kompetensi yang baik.

18
 IV METODE

4.1 Waktu Dan Tempat

Kegiatan Praktek Kerja Lapangan (PKL) dilaksanakan selama satu bulan,
yaitu mulai tanggal 04 Januari – 04 Februari 2020 pada Laboratorium bahan pangan di
Balai Pengawasan Obat dan Makanan di Manokwari yang berlokasi di Jl. Angkasa
mulyono Amban, Manokwari.

4.2 Alat Dan Bahan

4.2.1 Alat
1. Timbangan neraca analitik (elektromagnetik)
2. Spatula
3. Labu tentukur 10 ml, 20 ml, 50 ml, 1 L
4. Gelas ukur 2 L
5. Seperangkat alat KCKT yang dilengkapi dengan detector PDA
6. Pipet
7. Penyaring membrane 0,45 µm
8. Tabung centrifuge 5 ml, 50 ml
9. Alat centrifuge
10. Alat vortex
11. pH meter
12. Syringe
4.2.2 Bahan
1. Sampel (Permen)
2. Ammonium asetat
3. Air derajat KCKT (aquabiden)
4. Ammonium hidroksida
5. Metanol
6. Asetonitril 90%

4.3 Prosedur Percobaan

1. Linieritas
a. Larutan baku induk (2 mg/ml)

19
 Timbang ±20,0 mg
masing-masing baku
Ponceau 4R, Kuning
FCF, Merah Alura,
Karmoisin
Dilarutkan dan
Masukan kedalam labu diencerkan hingga
tentukur 10 mL tanda menggunakan air
derajat KCKT

b. Larutan Baku Antara I Simultan (0,2 mg/Ml)

Pipet 5,0 mL masing- Ditetapkan hingga

masing larutan baku Masukkan kedalam tanda dengan larutan
induk (Ponceau 4R labu tentukur 50 mL ammonium asetat
dipipet 2,0 mL) 0,02 M

c. Larutan Baku Antara dan Simultan (20 µg/ml)

Tetapkan hingga
Pipet 2,0 mL larutan Masukkan kedalam tanda dengan
baku antara I labu tentukur 20 mL larutan ammonium
asetat 0,02 M

d. Larutan Baku Kerja

Pipet larutan baku Tetapkan hingga tanda

intermediet masing- Masukkan kedalam labu dengan larutan
masing tentukur 10 mL ammonium asetat 0.02
0,25;0,5;1,0;2,0;4,0 mL M

Lakukan sonikasi selama

Larutan disaring
10 menit dan injek
menggunakan penyaring
masing-masing larutan
membrane 0.45 µm
kedalam alat KCKT

20
 2. Larutan Uji

Timbang ± 1 g contoh Tambahkan spike Tambahkan 15 mL larutan

yang telah dihomogenkan, pewarna (Tartazin dan pereaksi dan
Masukkan kedalam Kuning FCF ± 200 µg/g; dihomogenkan dengan
tabung centrifuge 50 mL Ponceau ± 80 µg/g) alat vortex selama 1 menit

Tambahkan larutan
Sonikasi tabung
Lapisan jernih bagian atas pereaksi masing-masing
centrifuge 5 menit, kocok
dipipet dan dimasukkan 15 mL. Ekstrak gabungan
manual 1 menit dan
ke dalam labu ukur 50 dikumpulkan dalam labu
sentrifuge 5 menit dengan
mL. Proses ekstraksi ukur 50 mL dan di
kecepatan 2500 rpm pada
diulang sebanyak 2 kali encerkan dengan larutan
suhu ruang
pereaksi hingga tanda

5 mL larutan ekstraksi Larutan jernih diatas

dimasukkan ke dalam
tabung sentrifuse 5 mL,
disentrifuse 10 menit
dengan kecepatan 13.000 0,45 µm dan disonikasi 5
rpm pada suhu ruang
Lakukan minimal 6×
diambil dan ditampung
pengulangan. injek
(Larutan A). saring
kedalam KCKT dengan
dengan membran filter
kondisi sama seperti pada
baku kerja
menit

3. Pereaksi

Tambahkan air derajat

KCKT 500 mL dan
Timbang ± 1,54 g Masukkan ke dalam labu
beberapa tetes larutan
amonium asetat tentukur 1 L
amonium hidroksida
10% hingga pH 7,8

Tambahkan air derajat

Tambahkan metanol 1 L,
KCKT hingga tanda.
dikocok hingga
Pindahkan kedalam
homogen
gelas ukur 2 L

21
 V HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Penetapan Kadar Pewarna (Ponceau 4R, Kuning FCF, Merah Allura, Tartazine
dan Carmoisin)
Pewarna adalah salah satu contoh bahan tambahan pangan. Pada dasarnya
pewarna dapat dibagi menjadi dua yaitu pewarna alami dan pewarna sintetis. Pewarna
yang dibuat melalui proses esktraksi, isolasi atau derivatisasi (sintesis parsial) dari
tumbuhan,hewan, mineral, atau sumber alami lain merupakan pewarna alami sedangkan
pewarna yang diperoleh melalui sintesis kimiawi ialah pewarna sintesis. Yang termasuk
BTP pewarna alami ialah kurkumin, Riboflavin, Karetinoid, Karmin, Klorofil, Merah
bit, Antosianin, dan Beta-karoten. Sedangkan yang masuk dalam BTP pewarna sintesis
ialah tartrazin, Kuning Kuinolon, Kuning FCF, Karmoisin, Ponceau 4R, Eritrosin, Merah
Allura, Biru berlian, Coklat HT, Indigotin, dan Hijau FCF.

Dalam penetapan kadar BTP pewarna dapat dilakukan dengan menggunakan

instrument Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dengan menggunakan fase gerak
cair yang dialirkan melalui kolom yang merupakan fase diam menuju ke detector dengan
bantuan pompa. Sampel dimasukkan ke dalam aliran fase gerak dengan cara
penyuntikan. Fase gerak yang digunakan adalah asetonitril dengan perbandingan 90%.

Di dalam kolom terjadi pemisahan senyawa-senyawa yang akan keluar atas

dasar kepolaran yang berbeda, sehingga akan mempengaruhi kekuatan interaksi antara
senyawa terhadap fase diam. Senyawa-senyawa yang kurang kuat interaksinya dengan
fase diam akan keluar terlebih dahulu, dan sebaliknya senyawa yang berinteraksi kuat
dengan fase diam akan keluar lebih lama. Kolom yang digunakan pada pengujian ini
adalah oktadesilsilana

Senyawa yang keluar dari kolom akan di deteksi oleh detector kemudian
direkam dalam bentuk kromatogram. Dari kromatogram tersebut akan dapat
diidentifikasi waktu retensi (tR) dan luas area/tinggi puncak. Informasi tR digunakan
untuk analisis kualitatif, sedangkan informasi luas area atau tinggi puncak untuk analisis
kuantitatif. Pada pengujian kali ini menggunakan detector photodiode array (PDA)
karena penentuan kadar dilakukan pada lebih dari satu jenis pewarna (simultan) yakni

22
Ponceau 4R, Merah Allura, Kuning FCF, Tartazine dan karmoisin dengan Panjang
gelombang 400 nm- 600 nm. Berikut adalah Panjang gelombang dari masing-masing
pewarna sintesis.

Pewarna sintesis Panjang gelombang (nm)

Ponceau 4R 511
Merah Allura 509
Kuning FCF 483
Tartazine 427
Karmoisin 518
Tabel 5.1 Panjang Gelombang Pewarna Sintesis

Sebelum penetapan kadar, sampel harus disiapkan terlebih dahulu. Pada

umumnya persiapan sampel dapat dibagi menjadi dua yaitu sampel padat/semisolid dan
sampel cair. Namun dalam pengujian ini sampel yang digunakan berbentuk semisolid
yakni makanan sehingga prosedur yang dilakukan lebih kompleks dibandingkan dengan
prosedur untuk sampel cair karena harus melalui tahap ekstraksi. Pada tahap awal
sampel harus terlebih dulu dihomogenkan dan ditimbangkan, kemudian sampel
dimasukkan kedalam tabung sentrifuge dan ditambahkan larutan pereaksi untuk
melarutkan sampel. Tahap selanjutnya ialah sampel dihomogenkan menggunakan vortex
dan disonikasi untuk mempercepat proses pelarutan zat warna. Selanjutnya, sampel
disentrifugasi selama 5 menit untuk mengendapkan sampel, sehingga larutan dapat
diambil dengan mudah. Lapisan jernih yang terbentuk pada bagian atas dipipet dan
dimasukkan kedalam labu ukur. Proses ekstraksi ini dilakukan sebanyak tiga kali dan
supernatan dimasukkan kedalam labu ukur yang sama. Larutan pada labu ukur kemudian
diencerkan dengan larutan pereaksi hingga tanda. Larutan kemudian disaring dengan
membrane 0,45 µm dan dimasukkan kedalam vial untuk KCKT. Penyaringan ditujukan
untuk menghilangkan partikel yang dapat menghambat dalam kolom KCKT.

Sebelum sampel diinjek kedalam KCKT, dilakukan Uji Kesesuaian Sistem

(UKS) HPLC. Uji ini digunakan untuk verifikasi bahwa system kromatografi memadai
untuk analisis tersebut (Ditjen POM Kemenkes Ri, 2004). UKS dilakukan terhadap
Theoritical plate, presisi injeksi dan tailing factor. Berdasarkan hasil uji kesesuaian
sistem yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa metode pengujian yang dilakukan
memberikan hasil yang akurat dan konsisten karena % RSD-nya dibawah 2%.
Berdasarkan Uji Kesesuaian Sistem yang dilakukan maka didapat hasil sebagai berikut:

23
 Tabel 5.2 Hasil Uji Kesesuaian Sistem HPLC untuk Penetapan Kadar Pewarna
Simultan

Paramete Syarat Rata-Rata Hasil Kesimpulan

Ponceau Merah Kuning Tartazin karmoisin
r
4R Allura FCF e
UKS
Tailing ≤ 2 atau 0,987 1,176 1,016 1,383 1,107 Memenuhi
Factor semakin
mendekati
1
Presisi ≤ 2% 1,65 0,44 0,96 0,63 0,44 Memenuhi
Injeksi
(%RSD)
Number >2000 2677.80 35521.54 9178.038 3331.657 41603.21 Memenuhi
Of 2 6 8

Selanjutnya larutan baku pewarna diinjeksi terlebih dahulu untuk membuat kurva
kalibrasi. Hal ini dilakukan guna untuk mengetahui data baku pewarna agar bisa
dibandingkan dengan dengan data dari sampel. Hasil dari pengujian menggunakan KCKT ini
adalah data waktu retensi dan luas area dari puncak yang didapat. Waktu retensi pada sampel
dibandingkan dengan waktu retensi pada baku untuk mengidentifikasikan ada atau tidaknya
warna pada sampel tersebut. Berdasarkan pengujian terhadap baku zat pewarna didapatkan
kromatogram sebagai berikut.

Gambar 5.1 Kromatogram Larutan Baku

Dari kromatogram larutan baku didapat waktu retensi dari masing-masing

larutan baku:

Larutan Waktu Retensi

Baku (menit)

24
 Ponceau 4R 5,6
Kuning FCF 7,7
Merah Allura 9,7
Tartazine 2,3
Carmoisin 13,1

Tabel 5.3 Waktu Retensi Larutan Baku

Setelah UKS diinjek dilakukan penginjekan deret larutan baku kerja, hal ini
dilakukan guna untuk mengetahui data baku pewarna agar bisa dibandingkan dengan
data dari sampel, baku yang digunakan terdiri dari beberapa deret baku agar didapatkan
lineritas luas area/tinggi puncak dari masing-masing baku, deret baku kerja yang
digunakan sebagai berikut:

Larutan Baku Konsentrasi (µg/ml) Luas area

Ponceau 4R 0.20 16648.00
0.51 21395.00
1.01 40119.00
2.03 81756.00
4.05 166940.00
8.11 341410.00
10.14 441455.00
20.27 964019.00
40.54 1832849.00
Kuning FCF 0.21 20724.00
0.52 26678.00
1.03 49403.00
2.06 101303.00
4.12 207743.00
8.24 418206.00
10.31 539075.00
20.61 1135996.00
41.22 2052974.00
Merah Allura 0.21 20497.00
0.52 26374.00
1.03 48617.00
2.06 99190.00
4.12 201921.00
8.25 407200.00
10.31 521614.00
20.62 1100071.00
41.24 1990399.00

25
Tartazine 0.20 34755.00
0.50 30879.00
1.01 66189.00
2.02 114872.00
4.03 234103.00
8.07 482446.00
10.09 613583.00
20.17 1282780.00
40.34 2303770.00
Carmoisin 0.20 24658.00
0.51 31784.00
1.02 58821.00
2.05 118958.00
4.09 242450.00
8.19 489150.00
10.24 625923.00
20.47 1319584.00
40.94 2388446.00
Tabel 5.4 Konsentrasi dan Luas Area dari Larutan Baku

Dari hasil di atas, dibuat kurva kalibrasi dari masing-masing larutan baku
untuk mendapatkan persamaan sehingga bisa mengetahui konsentrasi pewarna pada
sampel. Berikut adalah kurva kalibrasi dari masing-masing baku:

Kurva Kalibrasi Ponceau 4R

2000000.00
f(x) = 45704.24 x − 7025.71
1500000.00 R² = 1
Luas Area

1000000.00

500000.00

0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00
Konsentrasi (µg/mg)

Kurva Kalibrasi Kuning FCF

2500000.00

2000000.00 f(x) = 50549.39 x + 9733.88

R² = 1
1500000.00
Area

1000000.00

500000.00
26
0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00
Konsentrasi (µg/ml)
 Kurva
KurvaKalibrasi
KalibrasiMerah Allura
Carmoisin
2500000.00
3000000.00
2500000.00
2000000.00
f(x) = 48955.48
59168.7 xx++12178.67
10006.26
2000000.00 R² = 1
Area

1500000.00
LuasArea

1500000.00
1000000.00
Luas

1000000.00
500000.00
500000.00
0.00
0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00
Konsentrasi (ug/mg)
Konsentrasi (ug/mg)

27
 Kurva Kalibrasi Tartazine
2500000.00
f(x) = 57853.82 x + 18122.94
2000000.00 R² = 1

Luas Area
1500000.00

1000000.00

500000.00

0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00
Konsentrasi (ug/mg)

Gambar 5.2 Kurva Kalibrasi Larutan Baku

Dari data kurva kalibrasi, semua larutan baku memenuhi syarat linearitas
karena nilai R2 >0.99.

Setelah didapatkan data kurva kalibrasi kemudian dilanjutkan dengan

melakukan pengujian sampel makanan, pengujian dilakukan duplo yakni sampel yang
telah dihomogenisasikan terlebih dahulu, ditimbang sebanyak 2 kali dan diberlakukan
dengan perlakuan yang sama. Berikut adalah kromatogram hasil pengujian kadar
pewarna simultan pada sampel makanan.

Gambar 5.3 Kromatogram Larutan Uji

28
 Berdasarkan kromatogram di atas tidak ada peak yang menunjukkan
waktu retensi yang sama dengan larutan baku dan berikut adalah hasil penentuan kadar
pewarna simultan pada sampel.

Sampel A B
Waktu Retensi Ponceau 4R 0 0
Kuning FCF 0 0
Merah Allura 0 0
Tartazine 0 0
Carmoisin 0 0
Area Ponceau 4R 0 0
Kuning FCF 0 0
Merah Allura 0 0
Tartazine 0 0
Carmoisin 0 0
Konsentrasi Ponceau 4R 0 0
Kuning FCF 0 0
Merah Allura 0 0
Tartazine 0 0
Carmoisin 0 0
Tabel 5.5 Hasil Penetapan Simultan Kadar Pewarna pada Sampel

Hasil dari pengujian sampel menunjukan tidak adanya pewarna sintetis

yang ditambahkan ke dalam sampel. Hal ini dibuktikan dengan tidak adanya peak yang
muncul pada waktu retensi baku pewarna dalam spektrum sampel. Berdasarkan
Peraturan Kepala BPOM No. 37 Tahun 2013 tentang Penggunaan Bahan Tambahan
Pangan Pewarna, makanan dan minuman tidak boleh mengandung zat pewarna sintetis
yang tidak terdaftar. Dari makanan yang diuji, komposisi pada produk tidak
mengandung zat pewarna sintetis sehingga dapat disimpulkan sampel makanan yang
diuji memenuhi persyaratan.

29
 VI PENUTUP

6.1 Kesimpulan
Dalam penentuan kadar pewarna Ponceau 4R, Kuning FCF, Merah
Allura,Tartazine dan Carmoisin didalam makanan tidak terdeteksi kadarnya dalam
sampel.

6.2 Saran
Untuk masyarakat setempat agar selalu memperhatikan komposisi dalam
setiap bahan pangan yang mengandung bahan-bahan berbahaya yang dapat memberikan
efek buruk bagi Kesehatan.

30
 DAFTAR PUSTAKA

Almatsier,S.2001. Prinsip dasar Ilmu Gizi Seimbang. Jakarta : Direktorat Jendral Pembinaan
Kesehatan Masyarakat, Depkes

Ahmad, M., dan Suherman. 1991. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Airlangga University
Press. Surabaya

Putra,Effendy D. L., 2004. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Dalam Bidang Farmasi.
Jurusan Farmasi Fakultas Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara
:3

Cahyadi W.2012. bahan Tambah Pangan. Bumi Aksara. Jakarta

Johson, E.L. and Stevenson R. Basic Liquid Chromatography. Bandung : Penerbit ITP

Judarwanto, W. 2008. Perilaku Makan Anak Sekolah.

Moertjipto, J.S. 1993. Makanan, Wujud, Variasi, dan Fungsinya Serta Cara Penyajiannya
Pada Orang Jawa Daerah Istimewa Yogyakarta. Depdikbud Direktorat Sejarah
dan Nilai Tradisional Proyek Penelitian Pengkajian dan Pembinaan Nilai-nilai
Budaya Yogyakarta.

Susamti, Y.P 2016. Studi Kandungan Bahan Pengawet dan Pewarna Sintesis pada Berbagai
Bumbu Giling di Pasar Kota Malang sebagai Sumber Belajar Biologi (Skripsi
tidak diterbitkan). FKIP Universitas Muhammadiyah Malang, Malang

Saparinto C, Hidayati D. 2006. Bahan Tambahan Pangan. Kasinius : Yogyakarta

Cahyadi, W. 2009. Analisis dan Aspek Kesehatan Bahan Tambahan Pangan. Bumi Aksara.
Jakarta

Syah, D. 2015. Manfaat dan Bahaya Bahan Tambahan Pangan. Bogor : Fakultas Teknologi
Pertanian IPB

Winarno, F. G. 1992. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta : PT Gramedia Pustaka Utama

Done dkk, 1974; Snyder dan Kirkland, 1979; Hamilton dan Sewell, 1982; Johnson dan
Stevenson, 1978

31
Wahyuni, A. 2013. Penetapan Kadar Zat Pewarna (Tartazine dan Sunset Yellow) Pada
Sirup Kemasan Dengan Mengggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
http://123dok.com/document/oy831dwq-penetapan-pewarna-tartazine-kemasan-
dengan-menggunakan-kromatografi-kinerja.html

Prawerti, W. 2019. Uji Kadar Pewarna. http://id.scribd.com/doc/115763447/makalah-

pangan-pewarna-sintetik

32
LAMPIRAN

33
Lampiran 1. Foto (Dokumentasi)

Alat KCKT Alat Sonikasi

Alat Sentrifuge Proses Penyaringan Larutan

Preparasi Sampel Running sampel di KCKT

34
Lampiran 2. Kegiatan Harian

UNIVERSITAS PAPUA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN IMU PENGETAHUAN ALAM
JURUSAN KIMIA
MANOKWARI 2021

JURNAL KEGIATAN MINGGUAN

PRAKTEK KERJA LAPANGAN
PADA BALAI PENGAWASAN OBAT DAN MAKANAN DI MANOKWARI

Nama : Florentina Maana

NIM : 201739009
Program Studi : Kimia
Kegiatan : Harian (04 januari 2021 – 4 februari 2021 )

Hari / Tanggal Waktu Kegiatan

Senin 04/01/2021 08.00-16.30  Pertemuan sekaligus
perkenalan dengan
pegawai BPOM
 Pembagian kelompok
penyelian
 Pengenalan ruangan-
ruangan dan alat dalam
laboratorium
 istirahat
 Pulang
Selasa 05/01/2021 08.00-16.30  Masuk kantor
 Diskusi judul PKL
 istirahat
 Pulang
Rabu 06/01/2021 08.00-16.30  Masuk kantor
 Pengujian minuman keras
jenis sopi
 istirahat
 Pulang
Kamis 07/01/2021 08.00-16.30  Masuk kantor
 Membuat laporan PKL
 Input hasil data
 istirahat
 Inventaris alat di
laboratorium bahan
pangan
 Pulang
35
Jumat 08/01/2021 08.00-16.30  Senam
 Sarapan
 istirahat
 Ibadah natal dan lepas
sambut tahun baru
 Pulang

Hari / Tanggal Waktu Kegiatan

Senin 11 januari 08.00-16.30  Apel pagi
2021  Membersihkan alat-alat di
laboratorium bahan
pangan
 istirahat
 Pengujian minuman keras
oplosan
 Membuat laporan PKL
 Pulang
Selasa 12 januari 08.00-16.30  Diskusi laporan PKL
2021  Input hasil data pengujian
minuman keras oplosan
 Istirahat
 Pulang
Rabu 13 januari 08.00-16.30  Libur
2021
Kamis 14 januari 08.00-16.30  Membuat laporan PKL
2021  Membersihkan
laboratorium bahan
pangan
 Istirahat
 Membuat laporan PKL
 Pulang
Jumat 15 januari 08.00-16.30  Senam
2021  Sarapan
 Istirahat
 Pengujian formaldehid
dalam nasi
 Apel sore
 Input hasil data pengujian
formaldehid dalam nasi
 Pulang

Hari / Tanggal Waktu Kegiatan

Senin 18 januari 8.00-16.30  Apel pagi
2021  Diskusi laporan PKL
 Membuat bagan kerja
 Istirahat
 Membuat laporan

36
  Pulang
Selasa 19 januari 8.00-16.30  Masuk kantor
2021  Uji formaldehid dalam mie
basah
 Istirahat
 Membuat laporan PKL
 Pulang
Rabu 20 januari 8.00-16.30  Apel pagi
2021  Uji boraks dalam bakso
 Istirahat
 Membuat laporan PKL
 Pulang
Kamis 21 januari 8.00-16.30  IZIN
2021
Jumat 22 januari 8.00-16.30  IZIN
2021

Hari / Tanggal Waktu Kegiatan

Senin 25 januari 8.00-16.30  Apel pagi
2021  Membuat laporan PKL
 Istirahat
 Lanjut membuat laporan
PKL
 Pulang
Selasa 26 januari 8.00-16.30  Libur
2021
Rabu 27 januari 8.00-16.30  Apel pagi
2021  Membuat laporan PKL
 Istirahat
 Membuat PPT PKL
 Pulang
Kamis 28 januari 8.00-16.30  Masuk kantor
2021  Membuat laporan PKL
 Istirahat
 Pulang
Jumat 29 januari 8.00-16.30  Masuk kantor
2021  Preparasi uji pewarna
 Preparasi uji gravimetri
pada air
 Istirahat
 Apel sore
 pulang

Hari / Tanggal Waktu Kegiatan

Senin 01 februari 8.00-16.30  Apel pagi
2021  Membuat laporan PKL
 Istirahat

37
  Lanjut Running uji
pewarna di HPLC
 Pulang
Selasa 02 februari 8.00-16.30  Masuk kantor
2021  Membuat laporan PKL
 Tanya jawab tentang
prosedur kerja dengan
penyelia
 Istirahat
 Pulang
Rabu 03 februari 8.00-16.30  Masuk kantor
2021  Membuat laporan PKL
 Bantu input data
 Istirahat
 Membuat PPT
 Pulang
Kamis 04 februari 8.00-16.30  Masuk kantor
2021  Membuat PPT
 Istirahat
 Input data hasil uji
pewarna
 Pulang

Demikian laporan kegiatan mingguan ini dibuat dengan sebenar benarnya

Jumat 11 februari 2021

Mengetahui,
Pembimbing lapangan/penyelia Peserta PKL

Winda Permatasari,S.Si Florentina maana

NIP. 198901092015022002 NIM. 201739009

38