Hindawi

BioMed Research International

Volume 2019, ID Artikel 5423703, 10 halaman
https://doi.org/10.1155/2019/5423703

Artikel Penelitian
Asam Klorogenik Melemahkan Cedera Iskemik / Reperfusi Ginjal dengan
Mengurangi Peradangan, Cedera Tubular, dan Formasi Myofibroblast

Nur Arfi an, 1 Danny AP Wahyudi, 2 Ingesti B. Zulfatina, 2 Arsitya N. Citta, 2

Nungki Anggorowati, 3 Ali Multazam, 4,5 Muhammad M. Romi, 1 dan Dwi CR Sari 1
1 Departemen Anatomi, Fakultas Kedokteran, Kesehatan Masyarakat dan Keperawatan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
2 Fakultas Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Kesehatan Masyarakat dan Keperawatan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
3 Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Kesehatan Masyarakat dan Keperawatan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia

4 Program Magister Ilmu Biomedis, Fakultas Kedokteran, Kesehatan Masyarakat dan Keperawatan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia

5 Departemen Fisioterapi, Universitas Muhammadiyah Malang, Malang, Jawa Timur, Indonesia

Korespondensi harus ditujukan kepada Nur Arfi an; nur_arfi an@ugm.ac.id

Diterima 8 Mei 2019; Direvisi 26 Juli 2019; Diterima 30 Agustus 2019; Diterbitkan 22 September 2019

Editor Akademik: Sivagnanam) amilselvan

Hak Cipta © 2019 Nur Arfi an dkk. ) adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah Lisensi Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan penggunaan,
distribusi, dan reproduksi yang tidak dibatasi dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.

Cedera iskemik / reperfusi ginjal (I / R) merupakan penyebab utama dari cedera ginjal akut (AKI) yang melibatkan kerusakan fungsi ginjal, kerusakan arsitektur
ginjal, dan peradangan.) Adalah kondisi yang dapat menyebabkan fibrosis ginjal dengan transisi epitel tomesenchymal (EMT) dan pembentukan mioforblas. .
Penghambatan efek kronis cedera I / R ginjal dapat memberikan strategi yang efektif untuk mengobati AKI dan penyakit ginjal kronis (CKD). Asam klorogenat
(CGA) dikenal sebagai antioksidan kuat, dengan sifat antiradang dan antifrotik dalam banyak kondisi. Namun, efek CGA pada cedera I / R ginjal belum dijelaskan.
Cedera ginjal I / R dilakukan pada tikus latar Swiss jantan (grup I / R, n = 5, 3-4 bulan, 30-40 g) yang menjalani penjepitan pedikel ginjal bilateral selama 30 menit
dan kemudian di-eutanasia pada hari ketiga setelah operasi.) Kelompok I / R diobati dengan 3 dosis berbeda CGA secara intraperitoneal selama 2 hari: 3,5 (I / R +
CGA1 group), 7 (I / R + CGA2 group), dan 14 (I / R + CGA3 group) mg / kg berat badan. Cedera tubular diukur berdasarkan pewarnaan Periodic Acid-Schi ff,
sedangkan reverse transcriptase PCR (RT-PCR) dilakukan untuk mengukur ekspresi mRNA dari TGF- β 1, vimentin, SOD-1, TLR-4, TNF- α, NF- κ B dan MCP-1.
Pewarnaan imunohistokimia dilakukan untuk mengukur antigen inti sel yang berproliferasi (PCNA), mioforblast ( α- Nomor SMA), SOD-1 dan makrofag (CD68).
Ginjal I / R menunjukkan cedera tubular dan peningkatan ekspresi mediator inflamasi, jumlah makrofag, dan ekspansi mioforblas. Sedangkan analisis histologis
menunjukkan cedera tubulus bawah dengan proliferasi sel epitel yang lebih tinggi pada kelompok CGA dibandingkan dengan kelompok I / R. RT-PCR juga
mengungkapkan TGF- β 1 dan ekspresi mRNA vimentin dengan ekspresi mRNA SOD-1 yang lebih tinggi. Kelompok yang diobati dengan CGA juga menunjukkan
jumlah makrofag dan miofagus yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan kelompok I / R. ) temuan ini terkait dengan ekspresi mRNA yang lebih rendah dari
TLR-4, TNF- α, NF- κ B, dan MCP-1 sebagai mediator inflamasi dalam kelompok CGA. I / R + CGA3 mewakili efek perbaikan tertinggi di antara kelompok lain yang
diobati dengan CGA. Pengobatan CGA melemahkan cedera I / R ginjal melalui pengurangan peradangan, penurunan ekspansi myofroblast, dan menginduksi
proliferasi sel epitel.

1. Perkenalan
Insiden cedera ginjal akut (AKI) meningkat dalam dua dekade terakhir.
Insiden AKI mencapai 550 per 100.000 penduduk pada tahun 2003 [1]. Di
rumah sakit, kejadiannya berkisar
dari 2% menjadi 7%, dan 5 sampai 10% di unit perawatan intensif (ICU) [2].
Data epidemiologi mengidentifikasi penyebab AKI yang berbeda antara
negara maju dan negara berkembang. Di negara berkembang, sebagian
besar pasien AKI adalah lansia, sedangkan pasien AKI didominasi di negara
berkembang.
2 BioMed Research International
adalah populasi yang lebih muda dengan kondisi prerenal sebagai penyebab utama
[3].
Cedera iskemik / reperfusi ginjal (I / R) adalah penyebab utama AKI. )
adalah kondisi dengan kesakitan dan kematian yang tinggi, dengan biaya
pengobatan yang tinggi. Cedera ginjal I / R juga dilihat sebagai faktor risiko
penyakit ginjal kronis (CKD) [4]. Cedera I / R ginjal, ditandai dengan
penurunan dan hilangnya aliran darah ginjal (stenosis), diikuti oleh reperfusi.
Hipoksia menyebabkan cedera sel epitel dan apoptosis, yang merupakan
konsekuensi utama dari hipoksia [5]. Hipoksia menyebabkan cedera sel dan
disfungsi dengan kegagalan pompa Na + -K + ATPase dan meningkatkan ion
kalsium intraseluler, sehingga menghasilkan kematian sel dan stres oksidatif
[6]. Proliferasi dan regenerasi sel epitel terjadi setelah cedera [7]. Sel epitel
tubular mengalami transisi epitel ke mesenkim (EMT) atau diferensiasi. ) Sel
epitel yang masih hidup akan menggantikan sel apoptosis setelah AKI [8].
Namun, diketahui bahwa AKI dengan cedera I / R ginjal dapat menyebabkan
CKD. Dalam kebanyakan kasus AKI, EMT tipe II setelah cedera ginjal I / R
memainkan peran penting dalam fibrogenesis ginjal dengan regenerasi yang
tidak lengkap dan menyebabkan fibrosis interstisial [9]. Lebih lanjut, reperfusi
itu sendiri membesar-besarkan produksi spesies oksigen reaktif (ROS),
menyebabkan cedera yang lebih parah setelah hipoksia [10].
Cedera I / R juga membesar-besarkan ketidakseimbangan metabolik
yang menyebabkan peradangan [11]. Selama cedera I / R, ginjal
menghasilkan reseptor Toll-like-2 dan -4 (TLR-2 dan TLR-4), sehingga
memicu peradangan steril. Aktivasi TLRs menghasilkan peningkatan
regulasi mediator proinflamasi seperti TNF- α, MCP-1, IL-8, IL-6, IL-1 β, dan
TGF- β.
Sitokin dan kemokin menginduksi infiltrasi makrofag [5]. TGF- β berperan
dalam kaskade fibrotik dan menginduksi proliferasi fibroblast, menghambat
deposisi kolagen, dan merangsang produksi kolagen, fibronektin, dan
proteoglikan [12]. Aktivasi fibroblast mengubah fenotipe sel menjadi
fibroblas α- Ekspresi penanda SMA [13]. TGF- β juga penting untuk
melindungi sel epitel dari cedera sublethal [14]; Namun, stimulasi
berlebihan pada fibroblas dan sel epitel menghasilkan akumulasi matriks
ekstraseluler dan menyebabkan fibrosis interstisial [15]. Dalam kondisi CKD
kronis, fibrosis ginjal menghasilkan kerusakan fungsi ginjal yang progresif
dan ireversibel [12].
Asam klorogenat (CGA) adalah zat polifenol yang mengandung asam
ca eic dan quinic [16] yang ditemukan di banyak produk nabati [17]. Itu juga
ditemukan dalam kopi hijau. Ini memiliki banyak efek positif, dan salah
satunya adalah mengurangi cedera I / R di banyak organ dengan efek
antiinflamasinya seperti menghambat TNF- α dan aktivasi IL-6 dan
mengurangi NF- κ Ekspresi B [18, 19]. CGA juga memainkan peran penting
sebagai zat antioksidan melalui penghilangan radikal bebas [20, 21] dan
mempromosikan efek anti fibrosis [22]. Pengobatan CGA melemahkan
cedera iskemik / reperfusi hati pada tikus karena efek antioksidannya [23].
Namun, efek CGA pada cedera I / R ginjal belum dijelaskan. ) adalah studi
yang bertujuan untuk menjelaskan efek CGA pada cedera I / R ginjal dan
menunjukkan efek renoprotektif CGA pada cedera I / R ginjal, terutama
pada cedera tubular, peradangan, dan mekanisme fibrosis.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Hewan Subjek dan Model Cedera Iskemik / Reperfusi Ginjal (IR). Tikus
latar Swiss (jantan, n 25, 3- 4 bulan, 20-30 gram berat badan) digunakan
untuk penelitian ini. Mencit dipelihara sesuai kondisi standar laboratorium
dengan pemberian pakan dan air ad libitum serta kandang siklus terang dan
gelap selama 12 jam. ) studi tersebut telah mendapat persetujuan dari
Komite Etik Fakultas Kedokteran, Kesehatan Masyarakat dan Keperawatan,
Universitas Gadjah Mada, dengan nomor referensi KE / FK / 1066 / EC /
2017. Penjepitan pedikel ginjal bilateral dilakukan untuk menginduksi cedera
IR ginjal berdasarkan metode yang dipublikasikan sebelumnya [24]. Secara
singkat mencit dianestesi dengan natrium pentobarbital 0,1 ml / 10 g berat
badan. Setelah itu, perut dibuka. Selanjutnya, kedua pedikel ginjal
divisualisasikan, dijepit dengan penjepit vaskular non-trauma selama 30
menit, dan kemudian dilepas. Operasi palsu (grup SO, n 5) prosedur
digunakan untuk kelompok kontrol dengan hanya membuka perut mencit
tanpa penjepitan pedikel ginjal. Asam klorogenat (CGA) (Sigma Aldrich,
C3878) diberikan melalui injeksi intraperitoneal setiap hari, berdasarkan hasil
sebelumnya pada tikus [23]. Kami mengkonversikan dosis sesuai dengan
faktor konversi tikus (200 gr / 0,2 kg) menjadi tikus (20 gr / 0,02 kg)
berdasarkan berat badan, yaitu 0,14 [25]. ) en, rumus yang digunakan untuk
menghitung dosis adalah (dosis dalam tikus (mg / kg) × BW tikus (0.2 kg) ×
faktor konversi (0,14)) / BB tikus (0,02 kg).) Dosis tikus adalah 2,5, 5, dan
10 mg / kg BB, yang sama dengan 3,5,
7, dan 14mg / kg BB berdasarkan rumus. Mencit dibagi menjadi kelompok
berikut: kelompok SO dengan injeksi intraperitoneal NaCl 0,9%; Grup I / R ( n 5);
Kelompok I / R dengan dosis CGA 3.5mg (kelompok I / R + CGA1, n 5), dosis
7mg (kelompok I / R + CGA2, n 5), dan dosis 14mg (kelompok I / R + CGA3, n
5) / kg berat badan (BW). Keesokan harinya setelah operasi, tikus diinjeksi
dengan CGA. Tikus disuntik mati pada hari ke-3 setelah operasi.
2.2. Eutanasia dan Pemanenan Ginjal. Tikus dibius dengan injeksi
intraperitoneal natrium pastorbital (0,1 ml / 10 g berat badan). Setelah
abdomen dan toraks dibuka, perfusi organ dilakukan melalui ventrikel kiri
menggunakan NaCl 0,9%. Ginjal dipanen, kemudian ginjal kanan
dimasukkan ke dalam larutan pengawet RNA untuk ekstraksi RNA dan
ginjal kiri difiksasi dalam larutan normal bufer formalin (NBF) selama 24 jam
kemudian digunakan untuk pembuatan paralon.
2.3. Analisis Histologis dan Pemikiran Imunohistoris.
Bagian n-tertanam dengan 4 μ ketebalan m digunakan untuk pewarnaan dasar
dan pewarnaan imunohistokimia (IHC). Bagian parsial dihilangkan dan
direhidrasi menggunakan larutan serial xylene dan alkohol dan kemudian
diwarnai dengan Periodic Acid-Schi ff (PAS) untuk menentukan dan mengukur
skor cedera tubular. Untuk pewarnaan IHC, langkah deparasi dan rehidrasi
dilanjutkan dengan pengambilan antigen menggunakan pemanasan dalam
penyangga sitrat pH 6, memblokir peroksidase menggunakan
H. 2 HAI 2 3% dalam larutan PBS, kemudian memblokir antigen nonspesifik menggunakan
penembak jitu latar belakang (Kit IHC Star Trek, BioCare
BioMed Research International
Medis). Setelah itu, slide diinkubasi dengan
α- aktin otot polos ( α- SMA) (1: 400, Sigma, A2547), CD68 (1: 400, Abcam,
ab125212), antigen inti sel berkembang biak (PCNA) (1: 200, Abcam,
ab29), dan super oksida dismutase-1 (SOD-1 ) (1: 100, Bioss, bs-10216R)
sebagai antibodi pertama untuk inkubasi semalam dalam 4 ° C dan
kemudian disediakan antibodi ke-2 Trekkie Universal Link, Tre-
kAvidin-HRP, dan diaminobenzidine-tetrahydrochloride
(DAB) (Biocare Medical ®). ) e α- Pewarnaan antibodi SMA digunakan
untuk mengukur ekspansi miofobroblast,
Antibodi CD68 untuk menghitung makrofag, dan antigen inti sel proliferasi
(PCNA) untuk menilai proliferasi sel epitel di ginjal sampel. Kemudian,
kuantifikasi diukur dengan menghitung sinyal pewarnaan positif dari 15
bidang untuk setiap sampel dengan pembesaran 400x menggunakan
perangkat lunak ImageJ. SOD-1 immunostaining digunakan untuk
melokalisasi ekspresi SOD-1 di jaringan.
2.4. Skor Cedera Tubular. Skor cedera tubular dinilai dengan pewarnaan
PAS dan ditentukan menggunakan sistem penilaian semi-kuantitatif di 15
bidang untuk setiap spesimen dengan perbesaran 200x. Variabel penilaian
adalah sebagai berikut: (1) atrofi dan dilatasi tubular, (2) hilangnya batas
sikat, (3) akumulasi sel-sel inflamasi, dan (4) gips intraluminal. Sedangkan
skala cedera adalah dari 0 sampai 4: skor 0: kondisi normal; skor 1: ringan
(cedera <25%); skor 2: sedang (cedera 25-50%); skor 3: parah (cedera
50-75%); dan skor 4: kerusakan ekstensif (cedera> 75%).
2.5. Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR). RNA diekstraksi menggunakan
larutan Genezol (Genezol, Cat. No. GZR100), dilanjutkan dengan kuanti fi
konsentrasi RNA.
kation menggunakan nanodrop ReverTra Ace ® ( Toyobo, Jepang, Cat.
tidak. TRT-101), dan primer acak (Toyobo, Jepang,
Kucing. tidak. 3801) digunakan dalam mensintesis cDNA dan kemudian
melakukan reverse transcriptase PCR (RT-PCR) menggunakan Master Mix
(Go Taq green) untuk menilai ekspresi gen berikut: (1) Toll-like receptor-4 /
TLR- 4 (maju 5 ′ - GGGCCTAAACCCAGTCTGTTTG-
3 ′, mundur 3 ′ - GCCCGGTAAGGTCCATGCTA-5 ′); ( 2) monosit
chemoattractant protein-1 / MCP-1 (maju 5 ′ -
GGCATCACAGTCCGAGTCACAC-3 ′, mundur 3 ′ - CTA-
CAGACAACC-ACCTCAAGCACTTCTGTAG-5 ′); ( 3)
vimentin (maju 5 ′ - CGGAAAGTGGAATCCTTGCA-
3 ′, mundur 5 ′ - CACATCGATCTGGACATGCTG-3 ′); ( 4) faktor nekrosis
tumor- α / TNF- α ( maju 5 ′ - GCCTCT- TCTCATTCCTGCTTG-3 ′, mundur 3 ′ - CTGATGAGAGG-
lebih tinggi pada kelompok I / R dibandingkan dengan kelompok SO (Gambar 2 (a) dan
GAGGCCATT-5 ′); ( 5) faktor nuklir- κ B / NF- κ B (maju 5 ′ - GCGTACACATTCTGGGGAGT-3
rendah pada grup I / R + CGA2 dan I / R + CGA3 dibandingkan dengan grup I / R. Myo
′, mundur 3 ′ - ACCG-
AAGCAGGAGCTATCAA-5 ′); ( 6) super oksida dismutase- 1 / SOD-1 (maju
5 ′ - AGCATTCCATCATTGGCCGTA-
3 ′, mundur 3 ′ - TTTCCACCTTTGCCCAAGTCA-5 ′); dan (7) GAPDH (maju 5 ′ pewarnaan positif pada sel epitel tubular pada kelompok SO (Gambar 2 (b)).
- TTGCTGTTGAAGTCGCAG- GAG-3 ′, mundur 3 ′ - TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-5
Grup I / R menunjukkan pengurangan sinyal positif dibandingkan dengan SO. )
′)
digunakan sebagai referensi. Ekspresi gen dikuantifikasi menggunakan
analisis densitometri (software ImageJ), dan
GAPDH gen digunakan untuk menormalkan ekspresi gen (gen penjaga
rumah).
3
2.6. Analisis statistik. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan SPSS
22 for Windows (IBM, Chicago). ) Distribusi data sebelumnya ditentukan
menggunakan uji Shapiro-Wilk dan disajikan sebagai mean ± pengukuran
kesalahan standar (SEM) dianalisis dengan uji parametrik menggunakan
ANOVA satu arah. Untuk beberapa perbandingan, data kemudian diperiksa
dengan menggunakan uji post hoc LSD. ) Tingkat signifikansi statistik adalah p
< 0,05.
3. Hasil
3.1. Pengobatan CGA Cedera Ginjal Atenuasi dan Cedera Tubular dan
Peningkatan Proliferasi Sel Epitel setelah Cedera I / R Ginjal. Cedera ginjal I /
R menunjukkan cedera ginjal dengan cedera tubular dan tingkat kreatinin
yang lebih tinggi. Arsitektur ginjal yang rusak pada kelompok IR ditunjukkan
dengan apoptosis sel tubular, dilatasi dan atrofi tubular, kehilangan batas
sikat, pembentukan gips intraluminal, dan infiltrasi makrofag (Gambar 1).
Kuantifikasi cedera tubular menunjukkan skor yang lebih tinggi pada kelompok
I / R dibandingkan dengan kelompok SO.
Perbaikan arsitektur ginjal ditunjukkan pada kelompok CGA, yang
ditunjukkan dengan skor cedera tubular yang jauh lebih rendah pada kelompok
I / R CGA2 dan I / R + CGA3 dibandingkan dengan kelompok I / R.
Pengobatan CGA juga menginduksi proliferasi sel epitel. Kuantifikasi
pewarnaan PCNA IHC sebagai penanda proliferasi kunci menunjukkan
proliferasi sel epitel yang jauh lebih tinggi pada kelompok I / R dibandingkan
dengan SO. Selanjutnya, kelompok I / R + CGA2 dan I / R + CGA3 memiliki
proliferasi jumlah sel epitel yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok I /
R. I / R + CGA3 memiliki jumlah sel epitel yang berkembang biak tertinggi. )
Temuan ini terkait dengan perbaikan fungsi ginjal pada kelompok yang diobati
dengan CGA, seperti yang ditunjukkan dengan kadar kreatinin serum yang
lebih rendah secara signifikan pada kelompok IR + CGA3 dibandingkan
dengan kelompok IR. ) e Kelompok IR juga menunjukkan penanda mesenkim
yang lebih tinggi, β 1. Sementara itu, kelompok yang diobati CGA mewakili
vimentin yang lebih rendah dan TGF- β 1 ekspresi mRNA dibandingkan dengan
grup I / R. IR + CGA3 memiliki vimentin dan TGF- yang secara signifikan lebih
rendah β 1 ekspresi mRNA dibandingkan dengan grup IR.
3.2. CGA Melemahkan Ekspansi Myo fi broblast dan Ekspresi SOD-1 yang
Diatur. Cedera I / R menyebabkan myo fi broblast
ekspansi seperti yang ditunjukkan oleh angka myo fi broblast yang secara signifikan
2 (c)). Sementara itu, terdapat angka myo fi broblast yang secara signifikan lebih
fi bro-
ekspansi ledakan mungkin terkait dengan stres oksidatif dan pengurangan enzim
antioksidan. Immunostaining SOD-1, enzim antioksidan, menunjukkan
Temuan dikonfirmasi dengan RT-PCR dari SOD-1 mRNA yang menunjukkan
ekspresi mRNA SOD-1 yang secara signifikan lebih rendah pada kelompok I / R
dibandingkan dengan SO. Kelompok yang diobati dengan CGA memiliki ekspresi
SOD-1 mRNA yang lebih tinggi;
4 BioMed Research International

BEGITU I/R I / R + CGA1 I / R + CGA2 I / R + CGA3

(Sebuah)

BEGITU I/R I / R + CGA1 I / R + CGA2 I / R + CGA3

(b)

Skor cedera tubular PCNA-positif Tingkat kreatinin (mg / dL) TGF- β 1

nomor sel epitel
4.5 2.5 p < 0,001
Vimentin
20 p < 0,05 p < 0,001
4 ∗ ∗∗∗ ∗∗∗
GAPDH
∗ 18 2 ∗∗∗
3.5
BEGITU I/R I/R+ I/R+ I/R+
16 ∗#∗#∗
∗
3 ∗ #∗ CGA1 CGA2 CGA3
# ∗ 14 ∗ ## ∗ # ∗
1.5
2.5 # 2 p < 0,05
12
2 1.8
10 ∗ 1 ∗
1.5 1.6
8
1.4
1 6 0,5
1.2
Lipat meningkat

0,5 4 ∗∗∗
1
0 2 0 #
#
0.8
0 #####
0.6
BEGITU BEGITU
0.4
I/R BEGITU I/R

I / R + CGA1 I/R I / R + CGA1

0.2

I / R + CGA2 I / R + CGA1 I / R + CGA2 0

I / R + CGA3 I / R + CGA2 I / R + CGA3 Vimentin / GAPDH TGF- β 1 / GAPDH

I / R + CGA3
BEGITU

I/R

I / R + CGA1
I / R + CGA2
I / R + CGA3

(c) (d) (e) (f)

Angka 1: (a) Gambar representatif pewarnaan PAS di semua kelompok. ) Kelompok SO memiliki histologi jaringan ginjal normal dengan batas sikat.
) Kelompok IR memiliki karakteristik cedera tubular dengan dilatasi dan kehilangan batas sikat (panah putih). (b) Immunostaining PCNA menunjukkan pewarnaan positif pada inti sel
epitel (panah hitam). (c, d). Kuantifikasi skor cedera tubular dan jumlah sel positif PCNA menunjukkan atenuasi cedera tubulus yang terkait dengan peningkatan jumlah sel epitel
yang berkembang biak pada kelompok yang diobati dengan CGA (terutama kelompok IR + CGA3). (e) Pengukuran kadar kreatinin menunjukkan penurunan pada kelompok IR +
CGA3. (f) Analisis reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) dari vimentin (penanda mesenkim) dan TGF- β 1 (faktor probiotik). ) Kelompok IR + CGA3 menunjukkan vimentin dan TGF-
yang secara signifikan lebih rendah β 1 ekspresi mRNA dengan grup IR. ∗ p < 0,05 vs. kelompok SO; ∗∗ p < 0,01 vs. kelompok IR; ∗∗∗ p < 0,001 vs kelompok SO.

#
p < 0,05 vs. kelompok IR; ## p < 0,01 vs. kelompok IR; ### p < 0,001 vs. kelompok IR.

Namun, hanya grup I / R + CGA3 yang memiliki ekspresi lebih tinggi secara
signifikan dibandingkan grup I / R. Immunostaining SOD-1 juga menunjukkan
pewarnaan positif pada sel epitel tubular dari kelompok I / R + CGA3. Kuantifikasi
ekspresi mRNA TLR4 dan MCP-1 menegaskan angka yang jauh lebih tinggi pada
grup I / R dibandingkan dengan SO. RT-PCR mengungkapkan hanya kelompok I / R
+ CGA3 yang memiliki ekspresi mRNA TLR-4 dan MCP-1 yang lebih rendah secara
signifikan dibandingkan dengan kelompok I / R.
3.3. Pengobatan CGA Menginduksi Peradangan Lebih Rendah dan
Ekspansi Myo fi broblast. RT-PCR juga mengungkapkan peningkatan
mediator peradangan di kelompok IR. Kami menegaskan ekspresi mRNA
yang lebih tinggi dari NF- κ B, faktor transkripsi, dan TNF- α, mediator
peradangan. Di sisi lain, kelompok yang diobati CGA menunjukkan ekspresi
mRNA yang lebih rendah dari NF- κ B dan TNF- α; namun, hanya grup I / R +
CGA3 yang menunjukkan peningkatan yang signifikan
BioMed Research International 5

BEGITU I/R I / R + CGA1 I / R + CGA2 I / R + CGA3

(Sebuah)

BEGITU I/R I / R + CGA1 I / R + CGA2 I / R + CGA3

(b)

∗∗ TLR-4
∗ SOD-1
25
MCP-1
GAPDH
∗#∗#∗
GAPDH
20 BEGITU I/R I/R+I/R+I/R+
CGA1 CGA2 CGA3 BEGITU I/R I / R + I / R + I / R + CGA1
Nomor sel myo fi broblast

p < 0,01
2.5 CGA2 CGA3
15
∗ # ∗∗ SOD-1 / GAPDH
1.4
##

10 2
∗
1.2 ∗
### #
∗
1 ∗
5 ∗∗ 1.5 ∗

Lipat meningkat
∗∗
0.8 ∗∗
∗∗ #
0
BEGITU

0.6 1 #
I/R

I / R + CGA1

I / R + CGA2

I / R + CGA3

0.4
0,5
0.2

BEGITU 0 0
I/R TLR-4 / GAPDH MCP-1 / GAPDH

I / R + CGA1
BEGITU BEGITU
I / R + CGA2
I/R I/R
I / R + CGA3
I / R + CGA1 I / R + CGA1
I / R + CGA2 I / R + CGA2
I / R + CGA3 I / R + CGA3

(c) (d) (e)

Angka 2: (a) Gambar perwakilan dari α- Pemeriksaan imun SMA untuk penanda miofilast. Pewarnaan positif ditampilkan di area interstisial (panah putih). (b) Gambar representatif
SOD-1 immunostaining. Pewarnaan positif terlihat pada sel epitel pada SO, sedangkan penurunan pada kelompok IR. ) e Kelompok IR + CGA3 menunjukkan pewarnaan positif pada
sel epitel. (c) Kuanti fi kasi bilangan myo fi broblast menunjukkan penurunan jumlah pada kelompok yang diobati dengan CGA, terutama pada kelompok IR + CGA3. (d) Analisis
reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) dari SOD-1. ) e Kelompok IR + CGA3 menunjukkan ekspresi mRNA SOD-1 yang jauh lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok IR. (e)
Analisis reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) dari penanda peradangan (TLR-4 dan MCP-1). ) e Kelompok IR + CGA3 menunjukkan ekspresi mRNA MCP-1 dan TLR-4 yang secara
signifikan lebih rendah dengan kelompok IR. ∗ p < 0,05 vs. kelompok SO; ∗∗ p < 0,01 vs kelompok SO; ∗∗∗ p < 0,001 vs kelompok SO. # p < 0,05 vs. kelompok IR; ## p < 0,01 vs. kelompok
IR; ### p < 0,001 vs. kelompok IR.

ekspresi mRNA dibandingkan dengan kelompok IR (Gambar 3 (a) dan 3 (b)). 4. Diskusi
Pewarnaan IHC menegaskan infiltrasi makrofag yang lebih tinggi setelah
cedera I / R ginjal seperti yang ditunjukkan oleh jumlah makrofag yang lebih ) adalah studi yang menyoroti peran CGA dalam melemahkan
tinggi pada kelompok I / R dibandingkan dengan kelompok SO. Ekspresi perkembangan cedera I / R ginjal melalui pelemahan cedera tubular,
mediator inflamasi yang lebih rendah pada kelompok CGA terkait dengan peradangan, dan pembentukan mioforblast. Cedera I / R ginjal
menyebabkan AKI dan menyebabkan cedera tubular. Regenerasi ginjal
jumlah makrofag yang lebih rendah dibandingkan dengan kelompok I / R. Kami
setelah cedera ditandai dengan diferensiasi, proliferasi, dan migrasi sel
menemukan efek tergantung dosis pengobatan CGA dalam menurunkan
epitel tubular yang selamat. ) sel-sel ini menggantikan sel-sel mati [8]. )
jumlah makrofag dan peradangan. Perlakuan CGA dengan dosis tertinggi adalah kondisi yang mengubah fenotipe sel epitel, dari bentuk kuboid atau
memiliki jumlah makrofag terendah dan ekspresi mediator inflamasi. kolumnar menjadi sel mesenkim berbentuk skuamosa. )adalah
6 BioMed Research International

NK- κ B

TNF- α

GAPDH

BEGITU I/R I / R + I / R + I / R + CGA1

CGA2 CGA3

(Sebuah)

140

120 ∗

100

80
1

Nomor makrofag
∗
0.9
∗
∗
0.8 ∗ 60
∗ ∗
0.7 #
0.6
#
0,5 40 #

0.4 #

0.3
20
0.2
0.1
0 0

BEGITU
NF κ B / GAPDH TNF- α / GAPDH

I/R

I / R + CGA1

I / R + CGA2

I / R + CGA3
BEGITU I / R + CGA2

I/R I / R + CGA3

I / R + CGA1
BEGITU I / R + CGA2

I/R I / R + CGA3

I / R + CGA1

(b) (c)

BEGITU I/R I / R + CGA1 I / R + CGA2 I / R + CGA3

Makrofag

(d)

Angka 3: (a, b) Analisis reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) dari NF- κ B dan TNF- α ekspresi mRNA. ) e Grup IR + CGA3 menunjukkan NF- yang secara signifikan lebih rendah κ
B dan TNF- α ekspresi mRNA dibandingkan dengan kelompok IR. (b) Gambar representatif dari immunostaining CD68 untuk penanda makrofag. Pewarnaan positif ditampilkan
di area interstisial (panah hitam). (c) Kuantifikasi bilangan makrofag menunjukkan penurunan bilangan pada kelompok perlakuan CGA, khususnya kelompok IR + CGA3. (d)
Gambar representatif dari CD68 immunostaining untuk mendemonstrasikan infiltrasi makrofag (panah hitam). ∗ p < 0,05 vs kelompok SO. # p < 0,05 vs. kelompok IR.

Proses ini dikenal sebagai transisi epitel-mesenkim ( EMT) [26, 27]. EMT
ditandai dengan pengurangan ekspresi penanda epitel, seperti E-cadherin, dan
peningkatan regulasi ekspresi penanda mesenkim, seperti vimentin [26].
Tampaknya regenerasi setelah cedera I / R dapat menyebabkan EMT. Dalam
penelitian ini, kami mengungkapkan peningkatan cedera tubular pada
kelompok CGA yang terkait dengan tidak hanya peningkatan proliferasi tubular
tetapi juga penurunan EMT, seperti yang ditunjukkan oleh pengurangan
vimentin dan TGF- β 1 ekspresi mRNA. Vimentin dikenal sebagai penanda
mesenkim kunci, tetapi juga mewakili proses diferensiasi. Ekspresi vimentin
yang lebih tinggi setelah iskemia mungkin menunjukkan proses regenerasi
yang sedang berlangsung [27]. Namun, diketahui bahwa AKI dengan
Cedera I / R ginjal dapat menyebabkan CKD. EMT tipe II setelah cedera ginjal I / R
juga berperan dalam fibrogenesis ginjal dengan regenerasi yang tidak lengkap dan
menyebabkan fibrosis interstisial [9]. Dalam pewarnaan imunohistokimia kami,
tampak bahwa pengobatan CGA dapat memperbaiki cedera tubular, yang
menyebabkan proliferasi sel epitel ginjal; namun, ia mempertahankan sel epitel
tersebut sambil menghambat proses EMT yang mengarah ke fibrosis.
Cedera I / R ginjal juga menginduksi peradangan dan produksi ROS yang
kemudian mengaktifkan TGF- β 1 secara langsung atau tidak langsung [28, 29],
menyebabkan aktivasi komplementer dan cedera endotel [5, 30]. Mengubah faktor
pertumbuhan- β 1 (TGF- β 1) dapat mempromosikan EMTand fibrosis [31, 32]. ROS
itu sendiri
BioMed Research International
telah diketahui memiliki tindakan yang berbeda dalam sel epitel dan
interstisial. ROS menginduksi apoptosis sel epitel, sekaligus mendorong
proliferasi sel interstisial [33]. ) dapat menyebabkan peningkatan jumlah
mioforblas di area interstisial setelah cedera I / R ginjal.
Penelitian kami menegaskan bahwa CGA mungkin tidak hanya
menyebabkan proliferasi dan regenerasi sel epitel tetapi juga dapat
mengurangi perluasan mioforblas. ) Temuan ini berhubungan dengan
peningkatan enzim antioksidan, SOD-1.
) Kelompok yang diobati dengan CGA menunjukkan peningkatan regulasi
ekspresi SOD-1 mRNA. ) Hasil menunjukkan bahwa efek antioksidan dari
CGA mungkin bermanfaat dalam menginduksi proliferasi sel epitel dan
menghambat proliferasi sel interstisial. CGA telah dikenal memiliki efek
antioksidan melalui pembasmian radikal bebas. Ia memiliki urutan R-OH yang
mengikat radikal bebas [19]. ROS sendiri menginduksi TGF- β 1 aktivasi di
area interstisial [29].
Studi kami juga menunjukkan peningkatan regulasi TGF- β Ekspresi 1
mRNA dan peningkatan jumlah myo fi broblast setelah cedera I / R.
Peningkatan formasi myofroblast pada cedera I / R ginjal mungkin terkait
dengan TGF- β 1 regulasi naik sebagai pengatur utama fibrosis dan proses
EMT [31, 34]. TGF- β 1 peningkatan regulasi dapat terjadi sementara pada
AKI untuk induksi regenerasi, sedangkan peningkatan regulasi jika
berkepanjangan dapat menginduksi CKD dan fibrosis ginjal [35]. Kondisi ini
menghasilkan peradangan, ekspansi fibroblast, deposisi matriks
ekstraseluler, dan fibrosis sebagai jalur akhir [5]. TGF- β 1 peningkatan
regulasi terjadi secara signifikan 3 jam setelah cedera dan berlanjut hingga
14 hari setelah cedera [36, 37]. Hasil kami menunjukkan TGF- β 1 ekspresi
mRNA dalam grup I / R + CGA3 dibandingkan dengan grup I / R. )
Menemukan menunjukkan CGA menurunkan TGF β 1 ekspresi mRNA
dengan cara tergantung dosis. Pengobatan CGA telah dilaporkan
memperbaiki fibrosis hati di karbon tetraklorida-
(CCl 4-) model fibrosis hati yang diinduksi. ) pengurangan fibrosis dikaitkan
dengan penurunan TGF- β 1 dan
α- Ekspresi tingkat protein SMA [22]. Hasil serupa juga ditunjukkan oleh
satu penelitian yang menggunakan pengobatan CGA untuk melemahkan
fibrosis hati pada ligasi saluran empedu. Penurunan fibrosis juga dikaitkan
dengan penurunan kolagen I dan kolagen III, TGF- β 1, dan α- Ekspresi SMA
[8]. Selain itu, CGA juga menurunkan regulasi TGF- β 1 ekspresi dalam
model nefrektomi subtotal [38].
Hipoksia setelah cedera I / R menyebabkan peningkatan regulasi NF-
κ Faktor transkripsi B [39] yang kemudian menginduksi TGF- β
peningkatan regulasi [40], peradangan sitokin, seperti TNF- α,
IL-1 β, dan IL-6 [41], subfamili CCL dan CXCL [42], dan iNOS [30]. TGF- β produksi
dapat dirangsang oleh peradangan sitokin di sel epitel tubular [43].
Berfokus pada respons peradangan setelah cedera I / R ginjal, kami
menyelidiki pensinyalan TLR-4 dan jalur hilirnya. Cedera ginjal I / R
menyebabkan peningkatan regulasi TLR-4 dan pensinyalan hilir dan NF- κ B,
TNF- α, dan ekspresi mRNA MCP-1 (Gambar 2), yang berhubungan dengan
infiltrasi makrofag seperti yang ditunjukkan oleh jumlah makrofag yang lebih
tinggi pada kelompok I / R. Sementara itu, pengobatan CGA mengurangi
peradangan melalui pengurangan pensinyalan TLR-4 (NF- κ B, TNF- α, dan
MCP-1) dan nomor makrofag.
7
Sel mati melepaskan pola molekul terkait kerusakan (DAMPs) seperti
heat shock protein HMGB1 yang mengikat TLR-4 dan menginduksi sitokin
inflamasi seperti TNF- α dan IL-1 β [ 44]. Peningkatan kemokin dari sel epitel,
monosit dan makrofag, dan sel dendritik menginduksi migrasi sel inflamasi
seperti makrofag, neuroprofil, dan limfosit melalui interaksi reseptor CCR1
[42]. ROS dan molekul adhesi seperti ICAM-1 dan P-selektin
dari sel endotel juga meningkatkan infiltrasi leukosit dan neutrofil [30]. Sel
inflamasi menghasilkan kemokin inflamasi, TNF- α, IL-1 β, dan IL-6 [4, 45],
dan ROS [46], yang kemudian memperburuk TGF- β produksi.
TLR-4 meningkat pada 24 jam di sel endotel dan kemudian pada 24
jam dari sel epitel. Ini dipertahankan selama 3-5 hari, terutama dari sel
epitel tubular [47]. CGA adalah zat fitokimia dengan banyak fungsi, seperti
antiinflamasi [48, 49], antioksidan, dan efek antiapoptosis [48]. CGA
mengurangi TNF- α ekspresi tingkat protein dan ekspresi mRNA iNOS dan
COX-2. CGA menghambat pelepasan kotak grup mobilitas tinggi 1
(HMGB-1) ke ekstraseluler, sehingga menghambat peningkatan regulasi
TLR-4 dan NF- κ Translokasi nuklir B [50]. CGA juga menghalangi ekspresi
TLR-4 melalui penghambatan I κ Fosforilasi B yang berhubungan dengan
NF- κ Aktivasi B [51]. Efek anti-inflamasi dari CGA mungkin tergantung pada
dosis seperti yang ditunjukkan oleh ekspresi mRNA TLR-4 dan MCP-1 yang
secara signifikan lebih rendah pada kelompok CGA + I / R3, tetapi tidak
pada kelompok lain. Berdasarkan metode dosis konversi, dosis kami
serupa dengan penelitian Yun et al. (2012); Namun, mereka menggunakan
model cedera I / R hati [23]. Aktivasi pensinyalan TLR-4 menginduksi NF- κ Aktivasi
B dan kemudian menghasilkan mediator inflamasi [4], terutama MCP-1 [52].
Promotor MCP-1 memiliki dua situs pengikatan untuk NF- κ B, yang
meningkat dalam 30 menit pertama setelah cedera I / R ginjal [53]. Banyak
sel menghasilkan MCP-1, seperti neutrofil, sel endotel, dan makrofag [54].
Berdasarkan hasil penelitian kami, kami mengasumsikan bahwa
pengurangan ekspresi MCP-1 mungkin disebabkan oleh pengurangan
ekspresi dan aktivasi TLR-4. Meskipun ada banyak jalur yang menginduksi
ekspresi MCP-1 setelah cedera I / R, aktivasi JNK mungkin terkait dengan
ekspresi MCP-1 pada cedera I / R. Secara farmakologis, blokade JNK
mengurangi ekspresi MCP-1 [55]. Sel epitel tubular juga mengekspresikan
ligan CD40 yang berinteraksi dengan Cd154, yang mengaktifkan MAPK
dan menghasilkan MCP-1 dan Il-8 dalam sel epitel tubular. ) adalah sinyal
proses dan pemicu p38 dan ERK1 / 2 dari MAPK [56].
MCP-1 adalah atraktan utama untuk perekrutan makrofag pada cedera I /
R [4]. Jenis makrofag bergantung pada aspek waktu setelah cedera I / R.
Selama 3 hari pertama cedera, makrofag M1 akan diaktifkan dan makrofag M2
diaktifkan pada hari ke-7 setelah cedera I / R. Makrofag M1 melepaskan sitokin
proinflamasi karena ROS. Sedangkan makrofag M2 dapat berperan penting
dalam proses perbaikan [5]. Di sini, kami melaporkan bahwa pengobatan CGA
mengurangi infiltrasi makrofag dengan jumlah makrofag yang secara signifikan
lebih rendah pada kelompok I / R + CGA2 dan I / R + CGA3 dibandingkan
dengan I / R
8 BioMed Research International
kelompok (Gambar 2). ) Kelompok SO menunjukkan pewarnaan positif dari
makrofag yang mewakili makrofag yang menetap di ginjal. Jumlah makrofag
yang lebih rendah dalam kelompok yang diobati dengan CGA mungkin
terkait dengan efek antiinflamasi dari CGA. Baru-baru ini, penelitian
menunjukkan ekspresi CGA-attenuatedMCP-1 dan CD68 dalam model
steatosis hati pada tikus [57].
5. Kesimpulan
Di sini, kami mendemonstrasikan efek renoprotektif CGA pada cedera I / R
ginjal melalui pengurangan mediator inflamasi dan infiltrasi makrofag,
sementara juga mengurangi pembentukan EMT dan mioforblast.
Ketersediaan Data
Data dan bahan pendukung kesimpulan artikel penelitian ini termasuk
dalam artikel.
Penyingkapan
Beberapa data dalam penelitian ini digunakan untuk menyelesaikan
program sarjana Danny Agus Pramana Wahyudi, Ingesti Bilkis Zulfatina,
dan Arsitya Nayana Citta serta program magister Ali Multazam.
Konflik kepentingan
) e penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki konflik kepentingan.
Ucapan Terima Kasih
Terimakasih kami ucapkan kepada Mulyana selaku teknisi penanganan
hewan, Wiwit Ananda Setyaningsih yang telah membantu percobaan
pewarnaan RNA dan IHC, serta Ida Ayu yang telah membantu penulisan
naskah.) Studi ini didanai oleh Penelitian Tim Pascasarjana 2018 dengan
nomor 1781 / UN1 / DITLIT / DIT- LIT / LT / 2018 dari hibah tahunan
pemerintah Indonesia.
Referensi
[1] C.-Y. Hsu, CE McCulloch, D. Fan, JD Ordoñez,
GM Chertow, dan AS Go, "Insiden gagal ginjal akut berbasis komunitas", Ginjal
Internasional, vol. 72, tidak. 2, hlm. 208–212, 2007.
[2] SS Waikar, KD Liu, dan GM Chertow, “Diagnosis,
epidemiologi dan hasil dari cedera ginjal akut, " Jurnal Klinis dari American
Society of Nephrology, vol. 3, tidak. 3, hlm. 844–861, 2008.
[3] J. Cerdá, N. Lameire, P. Eggers dkk., “Epidemiologi akut
cedera ginjal, " Jurnal Klinis dari American Society of Nephrology, vol. 3, tidak.
3, hlm. 881–886, 2008.
[4] A. Kezić, N. Stajic, dan F.) aiss, “Respon imun bawaan dalam
iskemia ginjal / cedera reperfusi: target potensial untuk terapi, " Jurnal
Penelitian Imunologi, vol. 2017, ID Artikel 6305439, 10 halaman, 2017.
[5] JV Bonventre dan L. Yang, “Patofisiologi Seluler
cedera ginjal akut iskemik, " Jurnal Investigasi Klinis, vol. 121, tidak. 11, hlm.
4210–4221, 2011.
[6] T. Kalogeris, CP Baines, M. Krenz, dan RJ Korthuis, “Sel
biologi cedera iskemia / reperfusi, " Ulasan Internasional Biologi Sel dan
Molekuler, vol. 298, hlm. 229–317, 2012. [7] Harga PM, RL Safirstein, dan J.
Megyesi, ") siklus sel dan
cedera ginjal akut, " Ginjal Internasional, vol. 76, tidak. 6, hlm. 604–613, 2009.
[8] C.-C. Wu, C.-Y. Chang, S.-T. Chang, dan S.-H. Chen, "17 β-
estradiol mempercepat regenerasi tubulus ginjal pada tikus jantan setelah
cedera ginjal akut akibat iskemia / reperfusi, "
Syok, vol. 46, tidak. 2, hlm. 158–163, 2016.
[9] AH Tennakoon, T. Izawa, M. Kuwamura, dan J. Yamate,
“Patogenesis tipe 2 transisi epitel ke mesenkim (EMT) di ginjal dan hati
fibrosis,” Jurnal Kedokteran Klinik, vol. 5, tidak. 1, hal. 4, 2016.
[10] DN Granger dan PR Kvietys, “Cedera reperfusi dan
spesies oksigen reaktif: evolusi sebuah konsep, " Biologi Redoks, vol. 6, hlm.
524–551, 2015.
[11] HK Eltzschig dan T. Eckle, “Iskemia dan reperfusi—
dari mekanisme ke terjemahan, ” Pengobatan Alam, vol. 17, tidak. 11, hlm.
1391–1401, 2011.
[12] L. Gewin dan R. Zent, “Bagaimana TGF- β menengahi tubu-
lointerstitial fibrosis ?, ” Seminar di Nefrologi, vol. 32, tidak. 3, hlm. 228–235,
2012.
[13] B. Kaissling dan M. Hir, ") e renal cortical interstitium:
aspek morfologi dan fungsional, " Histokimia dan Biologi Sel, vol. 130, tidak. 2,
hlm. 247–262, 2008.
[14] Q. Guan, CYC Nguan, dan C. Du, “Ekspresi trans-
membentuk faktor pertumbuhan- β 1 membatasi cedera iskemia-reperfusi ginjal, " Transplantasi,
vol. 89, tidak. 11, hlm. 1320–1327, 2010. [15] S. Meran dan R. Steadman,
“Fibroblas dan miofor pada
fibrosis ginjal, " Jurnal Internasional Patologi Eksperimental, vol. 92, tidak. 3,
hlm. 158–167, 2011.
[16] J. Santana-Gálvez, L. Cisneros-Zevallos, dan D. Jacobo-
Velázquez, "Asam klorogenat: kemajuan terbaru dalam peran ganda sebagai
aditif makanan dan nutraceutical melawan sindrom metabolik", Molekul, vol. 22,
tidak. 3, hlm. 358–378, 2017. [17] R. Niggeweg, AJ Michael, dan C. Martin,
“Engineering
tanaman dengan peningkatan kadar asam klorogenat antioksidan, " Bioteknologi
Alam, vol. 22, tidak. 6, hlm. 746–754, 2004. [18] Y.-J. Guo, T. Luo, F. Wu et al.,
"Keterlibatan TLR2 dan TLR9
dalam efek anti-inflamasi asam klorogenat dalam mikroglia yang terinfeksi
HSV 1, " Ilmu Kehidupan, vol. 127, hlm. 12–18, 2015. [19] L. Ji, P. Jiang, B. Lu, Y.
Sheng, X. Wang, dan Z. Wang,
"Asam klorogenat, polifenol makanan, melindungi cedera hati yang diinduksi
asetaminator dan mekanismenya," Ae Journal of Nutritional Biochemistry, vol.
24, tidak. 11, hlm. 1911-1919, 2013. [20] J. Zhang, M. Chen, W. Ju dkk.,
"Kromatografi cair /
uji spektrometri massa tandem untuk penghentian simultan asam klorogenat
dan asam sinamat dalam plasma dan aplikasinya untuk studi farmakokinetik, "
Jurnal Analisis Farmasi dan Biomedis, vol. 51, tidak. 3, hlm. 685–690, 2010.
[21] N. Liang dan DD Kitts, “Peran asam klorogenat dalam
mengendalikan kondisi stres oksidatif dan peradangan, "
Nutrisi, vol. 8, tidak. 1, hal. 16 Agustus 2016.
[22] H. Shi, L. Dong, Y. Bai, J. Zhao, Y. Zhang, dan L. Zhang,
“Asam klorogenat terhadap fibrosis hati yang diinduksi karbon tetraklorida
pada tikus,” Jurnal Farmakologi Eropa, vol. 623, no. 1–3, hlm. 119–124, 2009.
[23] N. Yun, J.-W. Kang, dan S.-M. Lee, “Efek pelindung dari
asam klorogenat terhadap cedera iskemia / reperfusi di hati tikus: bukti
molekuler dari sifat antioksidan dan anti-inflamasi, " Ae Journal of Nutrisi
Biokimia, vol. 23, tidak. 10, hlm. 1249–1255, 2012.
BioMed Research International
[24] N. Arfi an, N. Emoto, N. Vignon-Zellweger, K. Nakayama,
K. Yagi, dan K.-i. Hirata, "Penghapusan ET-1 dari sel endotel melindungi ginjal
selama fase perpanjangan cedera iskemia / reperfusi," Komunikasi riset biokimia
dan biofisika, vol. 425, tidak. 2, hlm. 443–449, 2012. [25] AL Bacharach dan DR
Laurence, Evaluasi Obat
Aktivitas: Farmakometri, vol. 1-2, hal. 897, Academic Press Inc. Ltd. Berkeley
Square House, London, Inggris, 1964.
[26] SJ Serrano-Gomez, M. Maziveyi, dan SK Alahari, “Reg-
ulasi transisi epitel-mesenkim melalui modifikasi epignetic dan pasca-translasi,
" Molekuler
Kanker, vol. 15, tidak. 1, hal. 18 Agustus 2016.
[27] K. Lee dan CM Nelson, “Wawasan baru ke dalam regulasi
transisi epitel-mesenkim dan fibrosis jaringan, " Tinjauan Internasional Biologi
Sel dan Molekuler, vol. 294, hlm. 171–221, 2012.
[28] R.-M. Liu dan KAG Pravia, “Stres oksidatif dan gluta-
thione di TGF- β- fibrogenesis yang dimediasi, " Biologi dan Kedokteran Radikal Bebas, vol.
48, tidak. 1, hlm. 1–15, 2011.
[29] R.-M. Liu dan LP Desai, “Regulasi timbal balik dari TGF- β
dan spesies oksigen reaktif: siklus buruk untuk fibrosis, "
Biologi Redoks, vol. 6, hlm. 565–577, 2015.
[30] M. Malek dan M. Nematbakhsh, “Iskemia / reperfusi ginjal
cedera; dari patofisiologi hingga pengobatan, " Jurnal Pencegahan Cedera Ginjal,
vol. 4, tidak. 2, hlm. 20–27, 2015.
[31] R. Kalluri dan RA Weinberg, ") e dasar-dasar epitel-
transisi mesenkim, " Jurnal Investigasi Klinis,
vol. 119, tidak. 6, hlm. 1420–1428, 2009.
[32] I. Kolosova, D. Nethery, dan JA Kern, “Peran Smad2 / 3 dan
p38 MAP kinase di TGF- β Transisi epitel-mesenkim paru yang diinduksi 1 dari
sel epitel paru, " Jurnal Fisiologi Seluler, vol. 226, no. 5, hlm. 1248–1254,
2011.
[33] J. Kim, K.-J. Jung, dan KM Park, “Spesies oksigen reaktif
secara berbeda mengatur epitel tubulus ginjal dan proliferasi sel interstitial
setelah cedera iskemia dan reperfusi, " American Journal of Physiology-Renal
Physiology, vol. 298, tidak. 5, hlm. 1118–1129, 2010.
[34] X.-M. Meng, DJ Nikolic-Paterson, dan HY Lan, "TGF- β:
pengatur utama fibrosis, " Nefrologi Ulasan Alam,
vol. 12, tidak. 6, hlm. 325–338, 2016.
[35] YS Jiang, T. Jiang, B. Huang, PS Chen, dan J. Ouyang,
"Transisi epitel-mesenkim tubulus ginjal: berbagai proses perbaikan pada
cedera akut atau kronis ?,"
Hipotesis Medis, vol. 81, tidak. 1, hlm. 73–75, 2013.
[36] DP Basile, JM Rovak, DR Martin, dan M. R. Hammerman,
“Peningkatan ekspresi transformasi faktor pertumbuhan-beta 1 dalam
regenerasi tubulus ginjal tikus setelah cedera iskemik,”
American Journal of Physiology-Renal Physiology, vol. 270, tidak. 3, hlm. F500 –
F509, 1996.
[37] S. Supavekin, W. Zhang, R. Kucherlapati, FJ Kaskel,
LC Moore, dan P. Devarajan, "Ekspresi gen yang berbeda setelah iskemia /
reperfusi ginjal dini," Internasional Ginjal, vol. 63, tidak. 5, hlm. 1714–1724,
2003.
[38] J. Lou, X. Gu, Y. Xing, J. Cui, W. Lv, dan Y. Zhang,
“Asam klorogenat memperlambat proteinuria dan fibrosis ginjal pada 5/6-tikus
yang diefrektomi dengan anti-oksidasi dan menghambat akumulasi matriks
ekstraseluler,” Jurnal Internasional Kedokteran Klinis dan Eksperimental, vol.
9, tidak. 8,
hlm. 15719–15727, 2016.
[39] J. Afnan, S. Oakes, BH Williams, J. Rabaglia, MC Carroll,
dan FD Moore Jr., ") Mekanisme cedera reperfusi yang dimediasi oleh sistem
imun dipertahankan antara spesies hewan yang berbeda," Jurnal Penelitian
Bedah, vol. 130, tidak. 2,
p. 317, 2006.
9
[40] E. Chavez, K. Reyes-Gordillo, J. Segovia dkk., “Resveratrol
mencegah fibrosis, NF- κ Aktivasi B dan TGF- β peningkatan yang disebabkan oleh
pengobatan CCl4 kronis pada tikus, " Jurnal Toksikologi Terapan, vol. 28, tidak. 1,
hlm. 35–43, 2008. [41] V. Kumar, AK Abbas, dan JC Aster, Robbins Dasar Pa-
thology, Elsevier, Philadelphia, PA, AS, 2013.
[42] ACK Chung dan HY Lan, "Kemokin pada cedera ginjal",
Jurnal American Society of Nephrology, vol. 22, tidak. 5, hlm. 802–809, 2011.
[43] H. Geng, R. Lan, G. Wang et al., "Penghambatan autoregulasi
TGF β pensinyalan secara bersamaan meningkatkan proliferasi dan
diferensiasi epitel ginjal dan mendorong perbaikan setelah iskemia ginjal, " Ae
American Journal of Pathology,
vol. 174, tidak. 4, hlm. 1291–1308, 2009.
[44] H. Wu, G. Chen, KR Wyburn dkk., “Aktivasi TLR4
menengahi iskemia ginjal / cedera reperfusi, " Jurnal Investigasi Klinis, vol.
117, tidak. 10, hlm. 2847–2859, 2007. [45] GJ Ko, C.-S. Boo, S.-K. Jo, WY Cho,
dan HK Kim,
“Makrofag berkontribusi pada perkembangan fibrosis ginjal setelah cedera
ginjal akut akibat iskemia / reperfusi,” Transplantasi Dialisis Nefrologi, vol. 23,
tidak. 3, hlm. 842–852, 2008.
[46] KA Kamisnksi, TA Bonda, J. Korecki, dan WJ Musial,
“Stres oksidatif dan aktivasi neutrofil — dua batu kunci dari cedera iskemia /
reperfusi,” Jurnal Internasional Kardiologi, vol. 86, tidak. 1, hlm. 41–59, 2002.
[47] C.-B. Chen, L.-S. Liu, J. Zhou et al., “Pengaturan atas
HMGB1 memperburuk cedera iskemia-reperfusi ginjal dengan menstimulasi
respons peradangan dan kekebalan melalui jalur pensinyalan TLR4 pada
tikus, " Fisiologi Seluler dan Biokimia, vol. 41, tidak. 6, hlm. 2447–2460, 2017.
[48] SJ Hwang, Y.-W. Kim, Y. Park, H.-J. Lee, dan K.-W. Kim,
“Efek anti-inflamasi dari asam klorogenat dalam sel RAW 264,7 yang
distimulasi oleh sakarida lipopoli,” Re- inflamasi Re- search, vol. 63, tidak. 1,
hlm. 81–90, 2013.
[49] M. Miao, L. Cao, R. Li, X. Fang, dan Y. Miao, “Efek pelindung
asam klorogenat pada model tikus reperfusi iskemia serebral fokus, " Jurnal
Farmasi Saudi, vol. 25, tidak. 4, hlm. 556–563, 2017.
[50] Y. Feng, Y.-H. Yu, S.-T. Wang et al., “Asam klorogenat
melindungi kerusakan hati dan ginjal yang diinduksi d-galaktosa melalui efek
antioksidan dan anti-inflamasi pada tikus, " Biologi Farmasi, vol. 54, tidak. 6,
hlm.1027–1034, 2016.
[51] G. Ruifeng, F. Yunhe, W. Zhengkai et al., “Asam klorogenat
melemahkan tikus mastitis yang diinduksi lipopolisakarida dengan menekan
NF- yang dimediasi TLR4 κ Jalur pensinyalan B, ” Jurnal Farmakologi Eropa, vol.
729, hlm. 54–58, 2014. [52] E. Melgarejo, M. Á. Medina, F. Sánchez-Jiménez,
dan
JL Urdiales, "Monocyte chemoattractant protein-1: mediator kunci dalam
proses peradangan," Ae International Journal of Biokimia & Biologi Sel, vol.
41, tidak. 5, hlm. 998–1001, 2009.
[53] FL Sung, TY Zhu, KKW Au-Yeung, YL Siow, dan
O. Karmin, “Peningkatan ekspresi MCP-1 selama cedera iskemia / reperfusi
dimediasi oleh stres oksidatif dan NF- κ B, "
Ginjal Internasional, vol. 62, tidak. 4, hlm. 1160–1170, 2002. [54] Y.
Yamaguchi, F. Matsumura, M. Takeya dkk., “Monocyte
chemoattractant protein-1 meningkatkan ekspresi molekul adhesi antar sel-1
setelah reperfusi iskemia hati pada tikus, " Hepatologi, vol. 27, tidak. 3, hlm.
727–734, 1998.
[55] MH de Borst, J. Prakash, M. Sandovici dkk., “C-Jun NH2-
kinase terminal sangat penting terlibat dalam tubulus ginjal
10 BioMed Research International

peradangan interstisial, " Jurnal Farmakologi dan Eksperimental Aerapeutics, vol.

331, tidak. 3, hlm. 896–905, 2009. [56] H. Li dan EP Nord, “ligasi CD40
merangsang MCP-1 dan
Produksi IL-8, perekrutan TRAF6, dan aktivasi MAPK dalam sel tubulus
proksimal, " American Journal of Physiology- Fisiologi Ginjal, vol. 282, tidak. 6,
hal. F1020 – F1033, 2002. [57] Y. Ma, M. Gao, dan D. Liu, "Asam klorogenat
meningkatkan
steatosis hati akibat diet lemak dan resistensi insulin pada tikus, " Penelitian
Farmasi, vol. 32, tidak. 4, hlm. 1200–1209,
2014.