21.

METODE VOLTAMETRI DAN KOULOMETRIK

A) Voltametrik
Berbeda dengan potensiometri yang beroperasi di bawah kondisi nol, prinsip kerja
voltametrik yaitu metode elektroanalitiknya akan memaksakan sumber listrik
eksternal sampel untuk menginduksi reaksi elektrokimia yang tidak akan terjadi
secara spontan. Dengan demikian dimungkinkan untuk mengukur semua jenis ion
atau senyawa organik yang dapat direduksi atau dioksidasi secara elektrokimia.
Polarografi, merupakan metode paling terkenal dari semua metode voltametri, yang
sampai sekarang masih kompetitif jika digunakan untuk pengukuran trace elements,
ion atau senyawa organik, meskipun implementasinya agak rumit. Metode
voltametri terdiri dari penerapan perbedaan potensial variabel elektroda referensi
(Ag/AgCl) dan elektroda indikator, disebut kerja elektroda. Pada permukaannya
reaksi tipe Ox + ne → Merah (atau kebalikannya) diinduksi. Ketika potensial di
elektroda mencapai nilai sedemikian rupa sehingga a spesies (depolarizer) hadir
dalam larutan yang sedang dianalisis, baik teroksidasi atau reduksi, arus yang
melalui rangkaian luar ke sel meningkat tajam.
1) Direct Current Polarography (DCP)
Setiap analit ditandai dengan potensi setengah gelombang, ditentukan pada
ketinggian menengah iD/2, dari gelombangnya. Akibatnya, beberapa spesies
dapat diidentifikasi pada analisis yang sama, dengan syarat bahwa potensi
setengah gelombang cukup berbeda. Polarogram menunjukkan juga struktur
halus gigi gergaji, yang dihasilkan dari pembaruan terus menerus dari tetesan
merkuri.
2) Diffusion Current
Arus difusi (Faraday-type current) yang berkurang sebagai t1/2 jika permukaan
drop tidak bervariasi, tetapi meningkat dengan mempertimbangkan
pertumbuhan potensial.
3) Pulsed Polarography
Untuk meningkatkan sensitivitas dan untuk dapat membedakan analit dengan
potensi setengah gelombang berbeda hanya dengan beberapa puluh mV,
penurunan merkuri tidak lagi dikirim ke tegangan meningkat secara bertahap
tetapi lebih ke tegangan berdenyut.
4) Pendeteksi Amperometrik pada HPLC dan HPCE
Voltametrik telah diterapkan pada mode deteksi yang sangat sensitif untuk
senyawa elektroaktif dalam kromatografi cair (menyediakan fase gerak) dan
elektroforesis kapiler.
5) Stripping Voltammetry (SV)
Dua metode yang sangat sensitif, disebut anodik dan katodik stripping
voltammetry (SV) digunakan untuk mengukur jejak logam. SV dilakukan
melalui dua tahap yaitu pre-konsentrasi dan re-dissolving.

B) Koulometri
 Koulometrik adalah nama yang diberikan kepada sekelompok teknik penentuan
analit dengan mengukur jumlah listrik yang dikonsumsi dalam reaksi redoks. Ada dua
kategori yang disebut sebagai koulometri potensiometri dan koulometri amperostatik.
1) Koulometri Potensiostatik dan Koulometri Amperometrik
Koulometri potensiostatik melibatkan pemegangan potensi listrik (tegangan)
dari konstanta elektroda yang bekerja selama reaksi. Hal ini menghindari reaksi
parasitik. Arus akan berkurang secepat analit menghilang dari cairannya.
Galvanostat (atau amperostat) digunakan untuk menghitung jumlah arus yang
digunakan.
2) Titrasi Koulometri atau Koulometri Amperometrik
Adalah metode di mana arus dijaga konstan selama pengukuran dengan
amperostat hingga sinyal yang menandai akhir reaksi dengan analit muncul.
Metode ini adalah bentuk yang paling sederhana dari pengukuran koulometrik.
3) Reaksi Titrasi Koulometrik Air oleh Karl Fischer
Banyak produk manufaktur, serta pelarut dan bahan mentah dianalisis kadar
airnya (persen kelembaban). Dari semua metode yang tersedia, Titrasi Karl
Fischer merupakan yang paling banyak digunakan, terhitung lebih dari 500.000
analisis dilakukan setiap hari di seluruh dunia. Metode titrasi ini dapat dibagi
menjadi dua teknik utama yaitu titrasi volumetrik memanfaatkan titrator
(potensiometer) dengan deteksi titik akhir, dan titrasi kometometrik
menggunakan koulometer, yang lebih sensitif untuk pengukuran tingkat air
sangat rendah (konsentrasi dalam urutan atau di bawah 1 mg/L).

21. PREPARASI SAMPEL

Untuk semua analisis kimia, analit, yang merujuk pada spesies yang akan diukur, harus
dalam jumlah yang cukup dan bentuk yang sesuai untuk instrumen yang digunakan. Karena
itu, sebagian besar sampel memerlukan pretreatment tertentu. Persiapan sampel adalah
langkah penting dalam analisis, sama pentingnya dengan pengukuran itu sendiri, sangat
mempengaruhi keandalannya, keakuratannya, dan biayanya.
Untuk memulai analisis, dibutuhkan salah satu sampel dari batch yang diteliti. Sampel ini
berisi spesies yang dipelajari disebut analit, berupa campuran, yang umumnya bila bersama
dengan sejumlah variabel senyawa lain yang tersusun bersama disebut matriks.
Saat mengukur jejak analit di dalam senyawa lain yang ribuan kali lebih banyak, ada
ketakutan bahwa gangguan antara analit dan senyawa lainnya dapat terjadi. Bahkan teknik
analitik terbaik tidak dapat memperbaiki masalah yang dihasilkan oleh perlakuan awal
sampel yang buruk. Hal ini membuat persiapan sampel menjadi sangat penting. Untuk
mengatasi masalah tersebut, metode adsorpsi, ekstraksi atau presipitasi telah dikembangkan
untuk membuat sampel lebih mudah dianalisis.
A) Ekstraksi Fase Padat (SPE)
SPE saat ini digunakan untuk pemurnian atau konsentrasi ekstrak minyak mentah
sebelum pengukuran satu atau beberapa konstituennya. SPE adalah prosedur analitis
bersih yang telah secara drastis mengubah pendekatan ekstraksi pelarut klasik yang
menggunakan ekstraksi cair/cair dalam corong pisah, relatif lebih lambat dan
menggunakan jumlah pelarut organik cair yang relatif besar. Ada 2 metode yang dapat
digunakan yaitu:
1) Metode yang paling banyak digunakan saat ini terdiri dari langkah awal di mana
komponen dipertahankan oleh kolom yang mengandung sorben, diikuti oleh
eliminasi, melalui pembilasan, dari jumlah terbesar zat yang tidak diinginkan untuk
pengukuran selanjutnya. Analit tersebut kemudian diperoleh kembali dalam jumlah
kecil dari pelarut yang sesuai sebagai larutan yang diperkaya. Prosedur ekstraksi ini
memungkinkan tidak hanya isolasi analit tetapi juga pra-konsentrasi analitnya, yang
sangat berguna dalam analisis trace.
2) Metode kedua, yang jarang digunakan meskipun sangat sederhana, terdiri dari
pelewatan sampel melalui kolom agar senyawa yang tidak diinginkan dipertahankan
sementara analit lewat dengan bebas. Pendekatan ini menarik karena menghilangkan
elusi (langkah desorpsi). Di sisi lain, cairan analit dimurnikan, tetapi tidak
terkonsentrasi (faktor pengayaan 1).

B) Ekstraksi Immunoaffinity
Dengan perbaikan melalui ikatan kovalen antibodi pada zat padat yang diadaptasi,
maka akan menghasilkan sorben yang akan memperbaiki antigen yang sesuai, sebagai
polimer yang dicetak secara molekul. Teknik immunoaffinity sekarang digunakan secara
luas dalam aplikasi farmasi dan bioteknologi, dapat disesuaikan dengan ekstrak molekul
organik kecil dari sampel lingkungan. Ada kartrid ekstraksi yang mengandung antibodi
herbisida atau hidrokarbon aromatik polisiklik (HPA) yang diadaptasi untuk ekstraksi
senyawa ini dengan cepat.

C) Prosedur Mikroekstraksi
1) Mikroekstraksi Fase Padat (SPME)
SPME mengintegrasikan pengambilan sampel, ekstraksi, konsentrasi dan
pengenalan sampel ke dalam satu langkah bebas pelarut. Teknik ini
menggunakan segmen berpori sepanjang 1 hingga 2 cm dengan serat silika
leburan dilapisi bahan adsorben yang sesuai. Serat ini dipegang dalam perangkat
seperti jarum suntik, dan dilindungi oleh jarum baja. Analit sampel diekstraksi
dan dikonsentrasikan secara langsung pada serat ekstraksi. Kemudian serat
dimasukkan ke dalam injektor khusus di sebuah GC, di mana melalui efek suhu,
senyawa-senyawa yang diinginkan diserap dan kemudian dipisahkan. Teknik
 SPME juga dapat digunakan secara rutin dalam kombinasi dengan HPLC,
HPCE dan MS. Sensitivitas biasanya rendah, tetapi prosedur ini agak mahal
meskipun serat yang sama dapat digunakan sekitar 50 kali.
2) Mikroekstraksi Fase Cair (LPME)
Teknik ini juga disebut ekstraksi mikro single-drop, beroperasi dalam dua fase
mode. Analisis diekstraksi dari 1 hingga 4 mL sampel berair menjadi 25-50L
dari pelarut organik yang sangat murni, seperti heksana. Cara ini menggunakan
mikrodrop pelarut di ujung microsyringe konvensional, bukan serat silika rapuh
seperti di fase padat. LPME menggabungkan ekstraksi dan konsentrasi dalam
satu langkah. Analisis selanjutnya dilakukan oleh GC. Metode ini telah
diterapkan pada analisis pelarut kimia dalam makanan dan obat-obatan,
komponen tanaman alami, kontaminan yang mudah menguap dan semi-volatil
dalam air.
3) Ekstraksi Gas pada Kartrid atau Disk
Untuk mengukur konsentrasi rendah senyawa molekuler yang ada dalam sampel
gas, misalnya atmosfer yang tercemar, metode terbaik terdiri dari pemasukan
sampel dengan melewatkan volume sampel yang diketahui pada tabung pendek
yang terbuat dari bahan penyerap atau melalui kartrid SPE sekali pakai.
Senyawa yang diserap diperoleh kembali melalui ekstraksi dengan
menggunakan pelarut (biasanya menggunakan karbon disulfida), atau dengan
desorpsi termal dalam gas pembawa. Teknik ini dapat dilakukan dengan
kromatografi fase gas.
4) Headspace
Headspace adalah perangkat pengambilan sampel yang digunakan bersama-
sama dengan instalasi GC. Headspace ini dicadangkan untuk analisis senyawa
volatile pada matriks, yang tidak dapat dengan sendirinya dianalisis secara
langsung dengan kromatografi. Hal ini umumnya terjadi karena sebagian besar
sampel terdiri dari berbagai macam senyawa yang berbeda dalam berat molekul,
polaritas, dan kevolatilan. Prinsip dasar headspace diilustrasikan oleh dua
variasi yaitu mode statik dan mode dinamik.
5) Ekstraksi Fase Superkritikal (SPE)
Ekstraksi menggunakan cairan dalam keadaan superkritis adalah prosedur yang
terkenal dalam industri makanan. Ekstraktor analitik beroperasi dengan prinsip
yang sama. Mereka memasukkan wadah berbentuk tabung di mana ditempatkan
sampel (dalam bentuk padat atau semi-padat) dengan fluida (CO2, N2O atau
CHCIF2 - Freon22) dalam keadaan superkritis. Terdapat dua metode yaitu
offline dan online.
6) Digester Microwave
Digester microwave terdiri dari 'bom' Teflon dengan volume beberapa mL
sampel mentah ditempatkan bersama dengan larutan mineralisasi (diperlukan
untuk karbonisasi atau oksidasi). Pemanasan, yang disebabkan oleh gelombang
mikro, terjadi melalui agitasi molekuler karena dipol molekul air.
 7) On-line Analysers
Semua metode instrumental laboratorium telah disesuaikan secara praktis untuk
prosedur analitik di tempat, dari pengukuran pH hingga analisis NMR.
Instrumen umumnya kurang fleksibel daripada rekan-rekan laboratorium
mereka. Digunakan untuk pengukuran tertentu dan cocok untuk lingkungan
yang keras atau berbahaya.

22. PARAMETER STATISTIK DASAR

1) Mean, Ketepatan Koleksi Pengukuran
Ketika pengukuran n diulangi pada sampel yang sama (dalam arti kimiawi) dan
khususnya untuk tingkat presisi tinggi sering ditemukan bahwa nilai-nilai individual
sedikit berbeda dalam kelompok. Dalam hal ini preferensi untuk estimasi hasil akhir
berdasarkan rata-rata aritmatika x dinyatakan. Hal ini berarti x dari pengukuran n
diperoleh dari rumus:

2) Varians dan Standar Deviasi

Akar kuadrat dari varians adalah standar deviasi, diwakili baik saat jumlah
pengukuran n kecil, atau pada saat populasi nilai statistik yang besar tersedia.
Standar deviasi adalah indeks dispersi ‘a dinyatakan dalam satuan yang sama dengan
x.

3) Kesalahan Acak atau Tak Tentu

Dengan adanya kesalahan sistematis, kesalahan tidak sengaja 'karena bahaya', tidak
dapat dikontrol karena mereka tidak tentu. Arah dan amplitudo bervariasi dalam cara
yang tidak dapat diprediksi dari satu pengukuran ke pengukuran lainnya. Analisis
matematis dari kurva kesalahan mengarah pada kesimpulan bahwa rata-rata
aritmatika x dari nilai-nilai individual adalah estimasi terbaik dari rata-rata
sebenarnya.
4) Interval Konfidens dari Mean
Ketika jumlah pengukuran n kecil (misalnya, jika n adalah antara 4 dan 15), dan jika
tidak ada kesalahan sistematis, mean sebenarnya bisa cukup berbeda dari rata-rata
aritmatika x. Estimasi dari mean sebenarnya harus demikian dibuat dengan
menghitung interval konfidens di mana probabilitas diberikan (misalnya 95 persen),
bahwa nilai riil x0 akan dimasukkan.

5) Kriteria Penolakan Q-Test (atau Dixon Test)

Terkadang, nilai dalam suatu data mungkin tampak menyimpang. Meskipun
mungkin untuk menolak titik data ini, harus diingat bahwa itu hanya abnormal
sehubungan dengan hukum probabilitas yang diberikan. Ada kriteria statistik
 sederhana untuk konservasi atau penolakan nilai outlier ini. Ini adalah tes Dixon,
yang terdiri dari menghitung rasio berikut (dengan syarat setidaknya ada tujuh
pengukuran):

6) Kurva Kalibrasi dan Analisis Rregresi

Kurva kalibrasi digunakan untuk menentukan konsentrasi sampel yang tidak
diketahui atau untuk mengkalibrasi respons yang digunakan instrumen. Secara
tradisional, pada grafik, absis sesuai dengan konsentrasi dan menahbiskan nilai
sinyal. Tujuan analisis regresi seperti yang digunakan dalam analisis kuantitatif
adalah untuk menghasilkan persamaan yang menghubungkan sinyal dengan
konsentrasi, sehingga jika kita diberi nilai tertentu dari sinyal kita bisa mendapatkan
konsentrasi yang tidak diketahui. Karena itu, analisis regresi mengambil langkah di
luar korelasi, memungkinkan penciptaan prediksi model antara dua (atau lebih)
variabel.
7) Metode Robust atau Tes Non-Parametrik
Tes statistik yang dikembangkan di atas mengasumsikan bahwa data mengikuti
distribusi normal. Namun, ada metode analitis yang hasilnya mengungkapkan
distribusi yang berbeda. Ada yang asimetris, atau simetris tetapi 'tidak normal'. Pada
beberapa pendekatan, distribusi ini dianggap sebagai hasil dari superimposisi
distribusi normal dan titik abnormal. Penggunaan median, daripada rata-rata
aritmatika, adalah bagian dari pendekatan alternatif ini. Standard deviasi digantikan
oleh mean deviasi MD.
8) Optimalisasi Percobaan Melalui Satu-Faktor-pada-Satu-Waktu (OFAT)
Ketika pengukuran tergantung pada sinyal (absorbansi atau intensitas fluoresensi)
yang dipengaruhi oleh beberapa faktor, maka secara umum, itu adalah
kecenderungan untuk mencari kondisi keseluruhan yang akan mengarah pada sinyal
maksimum.