nanomaterial

Artikel

Evaluasi In Vitro dan Ex Vivo Mikropartikel

Siklodekstrin Berbasis Nepafenac untuk Pengobatan
Radang Mata
Blanca Lorenzo-Veiga 1, Patricia Diaz-Rodriguez 2,3, Carmen Alvarez-Lorenzo 3,
Thorsteinn Loftsson 1 dan Hakon Hrafn Sigurdsson 1, *
1
Fakultas Ilmu Farmasi, Universitas Islandia, Hofsvallagata 53, IS-107 Reykjavik, Islandia; blv3@hi.is (BL-V.);
thorstlo@hi.is (TL)
2
Departamento de Ingenier saya a Qu saya mika y Tecnolog saya sebuah Farmac é utica, Facultad de Ciencias de la
Salud, Universidad de la Laguna (ULL), Kampus de Anchieta, 38200 La Laguna (Tenerife), Spanyol;
pdiarodr@ull.edu.es
3
Departamento de Farmacolog saya a, Farmacia y Tecnolog saya sebuah Farmac é utica, R + D Pharma Group (GI-1645),
Facultad de Farmacia dan Institut Penelitian Kesehatan Santiago de Compostela (IDIS), Universidade de Santiago de
Compostela, 15782 Santiago de Compostela, Spanyol; carmen.alvarez.lorenzo@usc.es Korespondensi: hhs@hi.is
*

Diterima: 6 Maret 2020; Diterima: 7 April 2020; Ditayangkan: 9 April 2020

Abstrak: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk merancang dan mengevaluasi formulasi agregat berbasis
siklodekstrin (CD) baru untuk ffi secara efisien memberikan nepafenac topikal ke struktur mata, untuk
mengobati peradangan dan meningkatkan kadar nepafenac di segmen posterior, sehingga melemahkan
respon mediator inflamasi. Sifat fisikokimia dari sembilan formulasi agregat yang mengandung nepafenac / γ- CD
/ hidroksipropil- β ( HP β) - Kompleks CD serta sifat reologi, mukoadhesion, iritasi mata, permeabilitas kornea
dan skleral, dan aktivitas anti-inflamasi diselidiki secara rinci. Hasilnya dibandingkan dengan suspensi
nepafenac yang tersedia secara komersial, Nevanac ® 3 mg / mL. Semua formulasi menunjukkan
mikropartikel, pH netral, dan potensial zeta negatif (-6 hingga -27 mV). Mereka tidak menyebabkan iritasi dan
tidak beracun dan menunjukkan permeasi tinggi melalui sklera sapi. Formulasi yang mengandung
karboksimetil selulosa (CMC) menunjukkan aktivitas anti-inflamasi yang lebih besar, bahkan lebih tinggi
daripada formulasi komersial, Nevanac. ® 0,3%. Formulasi yang dioptimalkan merupakan peluang untuk
pemberian obat topikal ke segmen posterior mata.

Kata kunci: tetes mata; siklodekstrin; nepafenac; HET-CAM; studi perembesan ex vivo; radang mata

1. Perkenalan

Radang mata dan jaringan di sekitarnya merupakan salah satu patologi mata dengan insiden tertinggi
dalam oftalmologi, yang jika tidak mendapatkan perawatan yang tepat, dapat menyebabkan kehilangan
penglihatan [ 1 ]. Gejala utamanya termasuk mata merah, sakit mata, gatal, penglihatan kabur, bengkak, dan
gangguan penglihatan [ 2 ]. Penyebab paling umum dari radang mata di bagian posterior mata berhubungan
dengan gangguan mata seperti glaukoma, edema makula, intervensi operasi katarak, skleritis, uveitis
posterior, dan retinopati diabetik [ 3 , 4 ]. Penyebab lain yang a ff Segmen anterior mata termasuk konjungtivitis,
infeksi mata, uveitis anterior dan menengah, sindrom mata kering, keratitis, penggunaan lensa kontak, dan
trauma [ 5 ]. Meskipun peradangan dapat dipicu oleh berbagai penyebab etiologis, gejalanya serupa, karena
menyebabkan respons imunologis yang serupa [ 6 , 7 ].
Mengobati peradangan di segmen posterior secara klasik melibatkan steroid mata serta obat
antiinflamasi nonsteroid (NSAID) [ 8 , 9 ]. Penggunaan berulang dari kortikosteroid tradisional

Nanomaterials 2020, 10, 709; doi: 10.3390 / nano10040709 www.mdpi.com/journal/nanomaterials

Nanomaterials 2020, 10, x UNTUK REVIEW Rekan 2 dari 20
Nanomaterials 2020, 10, 709 2 dari 20

Mengobati peradangan pada segmen posterior secara klasik melibatkan steroid mata serta obat
antiinflamasi nonsteroid (NSAID) [8,9]. Penggunaan berulang kortikosteroid tradisional seperti
seperti fl uocinolone, dexamethasone, prednisolone, atau fl uorometholone dapat menyebabkan sisi yang tidak
fluocinolone, deksametason, prednisolon, atau fluorometholone dapat menyebabkan efek samping yang
diinginkan e ff efek, seperti tekanan intraokular tinggi, risiko infeksi, pembentukan katarak, atau edema makula
tidak diinginkan, seperti tekanan intraokular tinggi, risiko infeksi, pembentukan katarak, atau edema
[ 10 ]. Ophthalmic NSAIDs disetujui oleh US Food and Drug Administration (FDA) digunakan untuk pengobatan
makula [10]. Ophthalmic NSAID yang disetujui oleh Food and Drug Administration (FDA) AS digunakan
radang mata dan nyeri termasuk diklofenak 0,1%, ketorolorac 0,6%, dan larutan bromfenac 0,09%, dan
untuk pengobatan peradangan mata dan nyeri termasuk diklofenak 0,1%, ketorolorac
nepafenac 0,1% dan suspensi 0,3% [ 11 , 12 ]. Penggunaan formulasi NSAID topikal dapat menyebabkan infiltrasi
0,6%, dan larutan bromfenac 0,09%, dan suspensi nepafenac 0,1% dan 0,3% [11,12]. Penggunaan
kornea, pelelehan kornea, atau keratitis [ 13 ]. Nepafenac adalah NSAID yang diresepkan sebagai profilaksis
formulasi NSAID topikal dapat menyebabkan infiltrasi kornea, pelelehan kornea, atau keratitis [13].
serta pasca operasi katarak. Saat ini disetujui untuk pengobatan nyeri dan radang setelah operasi katarak dan
Nepafenac adalah NSAID yang diresepkan sebagai profilaksis serta pasca operasi katarak. Saat ini
dikomersialkan sebagai suspensi tetes mata, Nevanac ®, dalam dua dosis, 1 mg / mL tiga kali sehari dan 3 mg /
disetujui untuk pengobatan nyeri dan peradangan setelah operasi katarak dan dikomersialkan sebagai
mL sekali sehari [ 14 ]. Sisi e ff Efeknya termasuk peningkatan tekanan intraokular, penurunan ketajaman visual,
suspensi tetes mata, Nevanac ®, dalam dua dosis, 1 mg / mL tiga kali sehari dan 3 mg / mL sekali sehari
dan mata lengket [ 15 ]. Sahu dkk. [ 16 ] menganalisis e ff efek dari tiga NSAID topikal (ketorolac 0,4%, nepafenac
[14]. Efek samping termasuk peningkatan tekanan intraokular, penurunan ketajaman visual, dan mata
0,1%, dan bromfenac 0,09%) pada peradangan setelah operasi. Hasil mereka menunjukkan bahwa nepafenac
lengket [15]. Sahu dkk. [16] menganalisis efek dari tiga NSAID topikal (ketorolac 0,4%, nepafenac
secara signifikan lebih e ff Efektif bahwa yang lain mengurangi kemerahan ruang anterior. Selain itu, Modi dkk. [ 17
0,1%, dan bromfenac 0,09%) pada peradangan setelah operasi. Hasilnya menunjukkan bahwa nepafenac secara
] mendemonstrasikan kemudahan menanamkan nepafenac 0,3% sekali sehari dibandingkan dengan Nevanac ®
signifikan lebih efektif daripada yang lain dalam mengurangi kemerahan bilik anterior. Selain itu, Modi dkk. [17]
0,1% tiga kali sehari, karena keduanya menunjukkan hal yang sama e ffi cacy.
mendemonstrasikan kemudahan menanamkan nepafenac 0,3% sekali sehari dibandingkan dengan Nevanac ®
0,1% tiga kali sehari, karena keduanya menunjukkan kemanjuran yang sama.
Tidak seperti NSAID lainnya, nepafenac adalah obat penghilang rasa sakit. Setelah pengobatan mata
Tidak seperti NSAID lainnya, nepafenac adalah obat penghilang rasa sakit. Setelah pengobatan
topikal, ia menembus kornea dan diubah oleh hidrolase jaringan mata menjadi metabolit aktifnya, amfenac
mata topikal, ia menembus kornea dan diubah oleh hidrolase jaringan mata menjadi metabolit aktifnya,
(Gambar 1 ), penghambat siklooksigenase-1 dan -2 (COX-1, COX-2) [ 18 , 19 ]. Ekspresi enzim siklooksigenase telah
amfenac (Gambar 1), penghambat siklooksigenase-1 dan -2 (COX-1, COX-2) [18,19] . Ekspresi enzim
banyak dipelajari [ 19 , 20 ]. Aktivasi COX-1 dan COX-2 terlibat dalam produksi prostaglandin, dan oleh karena itu
siklooksigenase telah banyak dipelajari [19,20]. Aktivasi COX-1 dan COX-2 terlibat dalam produksi
dalam proses peradangan di mata. Karena peradangan mata, perubahan pada sawar darah-mata,
prostaglandin, dan oleh karena itu dalam proses peradangan di mata. Karena peradangan mata,
angiogenesis okular, dan permeabilitas vaskular dapat terjadi.
perubahan pada sawar darah-mata, angiogenesis okular, dan permeabilitas vaskular dapat terjadi.
Penghambatan aktivitas COX menghalangi pembentukan mediator inflamasi,
Penghambatan aktivitas COX menghalangi pembentukan mediator proinflamasi, termasuk
termasuk prostaglandin, mengurangi edema dan peradangan [ 21 , 22 ].
prostaglandin, yang menyebabkan edema dan inflamasi [21,22].

Gambar 1. Struktur ( Sebuah) nepafenac dan ( b) amfenac.

Gambar 1. Struktur ( Sebuah) nepafenac dan ( b) amfenac.

Mengobati penyakit mata segmen posterior dengan cara berangsur-angsur topikal masih menjadi
Mengobati segmen posterior pada penyakit mata dengan cara berangsur-angsur topikal masih menjadi tantangan, karena perbedaan membran
tantangan, karena di ff selaput biologis yang tidak ada dan batas fisik mata yang membatasi perjalanan dan
biologis dan batas fisik mata yang membatasi perjalanan dan penetrasi obat [23-25]. Sistem obat nanopartikulasi biodegradable telah diusulkan sebagai
penetrasi obat [ 23 - 25 ]. Sistem obat nanopartikulasi biodegradable telah diusulkan sebagai alternatif yang
alternatif yang menjanjikan dalam pengobatan penyakit retinal [26-28]. Tahara dkk. [29] menyiapkan nanopartikel poli (laktida-ko-glikolida) (PLGA) dari tiga
menjanjikan dalam pengobatan penyakit retinal [ 26 - 28 ]. Tahara dkk. [ 29 ] menyiapkan nanopartikel poli
kortikosteroid (deksametason dan hidrokortison asetat, dan prednisolon asetat) tersuspensi dalam gel untuk pengobatan edema makula dan mempelajari
(laktida-ko-glikolida) (PLGA) dari tiga kortikosteroid (deksametason, hidrokortison asetat dan prednisolon
perembesan ex vivo mereka menggunakan mata kelinci. Nanopartikel polimer ini mampu mempertahankan pengiriman obat ke retina setelah pemberian
asetat) tersuspensi dalam gel untuk pengobatan edema makula dan mempelajari perembesan ex vivo mereka
episkleral. Lebih lanjut, Balguri et al. [30] merancang nanopartikel lipid padat berbasis kitosan yang mampu mengirimkan indometasin ke kornea dan sklera.
menggunakan mata kelinci. Nanopartikel polimer ini mampu mempertahankan pengiriman obat ke retina
Selain itu, obat tetes mata konvensional tidak dapat mempertahankan konsentrasi terapeutik di jaringan mata karena waktu kontak yang singkat dan
setelah pemberian episkleral. Lebih lanjut, Balguri et al. [ 30 ] merancang nanopartikel lipid padat berbahan
eliminasi yang cepat [31-33]. Untuk mengatasi masalah ini, nanopartikel siklodekstrin (CD) telah diusulkan sebagai salah satu pilihan terbaik untuk
dasar kitosan yang mampu mengantarkan indometasin ke kornea dan sklera. Selain itu, obat tetes mata
penggunaan tetes mata topikal dari obat molekul kecil dan biomolekul ke mata [34]. Formulasi tetes mata berbasis air 0,2% (w / v) siklosporin A dengan
konvensional tidak dapat mempertahankan konsentrasi terapeutik di jaringan mata karena waktu kontak yang
12,5% (w / v) alfa-siklodekstrin (α-CD), berbagai jumlah gamma-siklodekstrin (γ-CD), dan 1,4% ( w / v) poli terhidrolisis (vinil alkohol) (PVA) terbukti dapat
singkat dan eliminasi yang cepat [ 31 - 33 ]. Untuk mengatasi masalah ini, nanopartikel siklodekstrin (CD) telah
ditoleransi dengan baik pada kelinci [35,36]. Lebih lanjut, beberapa formulasi tetes mata berbasis CD telah dikomersialkan (Clorocil tetes mata konvensional
diusulkan sebagai salah satu pilihan terbaik untuk penggunaan tetes mata topikal dari obat molekul kecil dan
tidak mampu mempertahankan konsentrasi terapeutik di jaringan mata karena waktu kontak yang singkat dan eliminasi yang cepat [31-33]. Untuk
biomolekul ke mata [ 34 ]. Formulasi tetes mata berbasis air dari 0,2% (b / v) siklosporin Dengan 12,5% (b / v)
mengatasi masalah ini, nanopartikel siklodekstrin (CD) telah diusulkan sebagai salah satu pilihan terbaik untuk penggunaan tetes mata topikal dari obat
alfa-siklodekstrin ( α- CD), berbagai jumlah gamma-siklodekstrin ( γ- CD), dan 1,4% (w / v) poli terhidrolisis (vinil
molekul kecil dan biomolekul ke mata [34]. Formulasi tetes mata berbasis air 0,2% (w / v) siklosporin A dengan 12,5% (w / v) alfa-siklodekstrin (α-CD), berbagai
alkohol) (PVA) terbukti dapat ditoleransi dengan baik pada kelinci [ 35 , 36 ]. Lebih lanjut, beberapa formulasi tetes
jumlah gamma-siklodekstrin (γ-CD), dan 1,4% ( w / v) poli terhidrolisis (vinil alkohol) (PVA) terbukti dapat ditoleransi dengan baik pada kelinci [35,36]. Lebih
mata berbasis CD telah dikomersialkan (Clorocil ®, Voltaren ®, Vitaseptol ®, dan Indocid ®) [ 37 ]. Kombinasi polimer
lanjut, beberapa formulasi tetes mata berbasis CD telah dikomersialkan (Clorocil tetes mata konvensional tidak mampu mempertahankan konsentrasi
dan siklodekstrin telah dilaporkan sebagai strategi untuk meningkatkan perembesan obat di jaringan mata [ 38 - 40
terapeutik di jaringan mata karena waktu kontak yang singkat dan eliminasi yang cepat [31-33]. Untuk mengatasi masalah ini, nanopartikel siklodekstrin (CD)
].
telah diusulkan sebagai salah satu pilihan terbaik untuk penggunaan tetes mata topikal dari obat molekul kecil dan biomolekul ke mata [34]. Formulasi tetes mata berbasis air 0,2% (w / v
Nanomaterials 2020, 10, 709 3 dari 20

Baru-baru ini, kami menemukan bahwa penambahan satu atau lebih polimer ke nepafenac / γ- CD / hidroksipropil- β
(HP β) - Kompleks CD (Tabel 1 ) mengarah pada peningkatan kelarutannya dalam air, o ff mencari alternatif untuk
obat tetes mata nepafenac saat ini [ 41 ], dan oleh karena itu e ffi cacy harus dievaluasi lebih lanjut. Komposisi
polimer dari suspensi tetes mata awal diringkas dalam Tabel 1 .

Tabel 1. Formulasi agregat nepafenac pendahuluan. Semua mengandung campuran 15% (w / v) γ- CD dan 8% (w /
v) HP β- CD dalam larutan air [ 41 ].

Formulasi

F2 = 1,0% (w / v) CMC
F3 = 2.0% (w / v) PVA + 1.0% (w / v) CMC + 0.1% (w / v) Tyloxapol F5 =
1.0% (w / v) PVP + 1.0% (w / v) CMC + 0.1% ( w / v) HPMC F9 = 2.0% (w
/ v) PVA + 1.0% (w / v) CMC + 0.1% (w / v) MC
CD, siklodekstrin; HP β, hidroksipropil- β; CMC, karboksimetilselulosa; HPMC, hidroksipropilmetilselulosa;
MC, metil selulosa; PVA, poli terhidrolisis (vinil alkohol); PVT, polivinilpirolidon.

Penelitian ini ditujukan untuk pengembangan dan evaluasi formulasi tetes mata berair berbasis CD yang
mengandung polimer mukoadhesif (natrium hialuronat dan natrium alginat) dan ff efektif dengan formulasi
sebelumnya dikembangkan ke e ffi secara efisien memberikan nepafenac ke mata untuk mengobati
peradangan, meningkatkan konsentrasi obat di segmen posterior, dan mengurangi ekspresi mediator
inflamasi. Semua formulasi agregat dievaluasi untuk in vitro di ff studi penggunaan, sifat reologi dan
mukoadhesif, aktivitas anti-inflamasi in vitro, dan studi ex vivo kornea dan permeabilitas skleral. Mereka
dibandingkan dengan Nevanac komersial ®

Suspensi 3 mg / mL. Sejauh pengetahuan kami, ini adalah pertama kalinya formulasi mengandung
γ- CD / HP β- Nanopartikel CD telah dievaluasi secara in vitro dan ex vivo.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Bahan

Nepafenac (kemurnian 98%, MW 254,28 g / mol) diperoleh dari Fagron (Rotterdam, Belanda); γ- siklodekstrin
( γ- CD) disediakan oleh Wacker Chemie (Munich, Jerman); 2-hidroksipropil- β- siklodekstrin, DS 0,62 (HP β- CD; MW
1380 Da) disumbangkan dengan baik oleh Janssen Pharmaceutica (Beerse, Belgia). Metil selulosa (MC; MW
14.000 Da; viskositas ~ 15 cPs) berasal dari ICN Biomedicals Inc. (Solon, OH, USA); natrium alginat (SA; MW
80.000-12.000 Da) berasal dari Fagron Iberica (Zaragoza, Spanyol); natrium hyaluronate (HA; MW 360.000Da,
asam glukuronat 47,4%) berasal dari Guinama (La Pobla de Valbona, Spanyol).

Benzalkonium klorida (BAK), ethylenediamine-tetraacetic acid disodium salt dihydrate (EDTA),

reagen-grade tyloxapol (MW 280,4 g / mol), 87% –90% poli terhidrolisis (vinil alkohol) (PVA) (rata-rata MW
30.000–70.000 Da ), hidroksipropil metilselulosa (HPMC; MW 26.000 Da, viskositas ~ 100 cPs), polivinilpirolidon
(PVP; rata-rata MW 40.000 Da), dan garam natrium karboksimetilselulosa (CMC) (MW 90.000 Da; viskositas
rendah) dibeli dari Sigma-Aldrich (St . Louis, MO, AS). Filter membran (0.45 µ m) diperoleh dari Phenomenex
(Cheshire, UK). Air dimurnikan menggunakan reverse osmosis (resistivitas> 18 M Ω cm; Milli-Q, Millipore ®, Madrid,
Spanyol). Semua reagen lainnya adalah kelas analitik.

Karbonat bu ff er, pH 7,2, dibuat dengan mencampurkan bu ff er larutan A (100 mL; 1,24 g NaCl, 0,071 g
KCl, 0,02 g NaH 2 PO 4, 0,49 g NaHCO 3) dan bu ff er larutan B (100 mL; 0,023 g CaC l2, 0,031 g MgC l2).
BALB / 3T3 cloneA31mouse fibroblast (ATCCCCL-163 ™) dan THP-1monosit (ATCCTIB-202 ™)
dibeli dari American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). Serum sapi janin (FBS), larutan
antibiotik (penisilin 10.000 unit / mL dan streptomisin 10,00 µ g / mL), lipopolisakarida (LPS) dari E. coli, phorbol
12-myristate 13-acetate (PMA), tris hydrochloride, dan lauryl sulfate sodium salt (SDS) diperoleh dari
Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA ). Medium Elang yang Dimodifikasi Dulbecco dengan Campuran Nutrisi F-12
Ham (DMEM / F12) dan RPMI 1640 adalah
Nanomaterials 2020, 10, 709 4 dari 20

dipasok oleh Gibco (Thermo Fisher, Paisley, UK). Reagen Proliferasi Sel WST-1 dibeli dari La Roche (Manheim,
Jerman).

2.2. Persiapan Tetes Mata Nepafenac

Nepafenac (18 mg) ditambahkan ke 6 mL cairan 15% γ- CD / 8% HP- β Larutan CD (w / v) yang mengandung
di ff polimer yang salah (Tabel 2 ), 0,1% (b / v) EDTA, 0,02% (b / v) BAK, dan 0,04% (b / v) NaCl.

Meja 2. Polimer yang digunakan untuk menyiapkan formulasi tetes mata nepafenac dan persentasenya.

Formulasi Tetes Mata

Komponen
A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9
(% w / v)

PVT - - - - 1.0 - - - -
PVA - - 2.0 - - - - - 2.0
CMC - 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 - 1.0 1.0
HPMC - - - - 0.1 - - - -
MC - - - - - - - - 0.1
Tyloxapol - - 0.1 - - - - - -
HA 0.2 - - 0.2 - - - 0.2 -
SA - - - - - 0.4 0.4 0.4 -
CMC, karboksimetilselulosa; HPMC, hidroksipropilmetilselulosa; MC, metil selulosa; PVA, poli (vinil alkohol); PVT, polivinilpirolidon;
HA, natrium hyaluronate; SA, natrium alginat.

Selanjutnya, suspensi ditempatkan dalam penangas air ultrasonik (Pembersih Ultrasonik Branson 3510,
Marshall Scientifc, Hampton, NH, USA) pada suhu 60 ◦ C selama 60 menit. Mereka didinginkan hingga suhu
kamar dan disimpan dalam pengocok (Unitronic, JP Selecta, Spanyol) di bawah agitasi konstan selama 7 hari
pada 37 ◦ C. Setelah ini, suspensi disaring (Acrodisc ® Filter Jarum Suntik, 0.22 µ m; GHP Minispike, Waters) dan
disentrifugasi pada 4000 rpm selama 15 menit pada 25 ◦ C (centrifuge model 5804R, Eppendorf AG, Germany),
dan supernatan diencerkan dengan air Milli-Q. Kelarutan nepafenac ditentukan dengan spektroskopi UV-Vis
pada 254 nm menggunakan kurva kalibrasi standar yang sebelumnya divalidasi dalam rangkap tiga dalam
kisaran 3-25. µ g / mL.

2.3. Karakterisasi Fisikokimia

2.3.1. Analisis Ukuran Partikel

Ukuran partikel dan distribusi ukuran formulasi A1 hingga A9 dan Nevanac diukur dengan hamburan
cahaya dinamis (DLS) menggunakan alat analisa partikel Gelombang Nanotrac (Microtrac, York, PA, USA).
Sampel yang sebelumnya disaring diencerkan dengan Milli-Qwater, dan pengukuran dilakukan pada 25 ◦ C
dengan laser 780 nm dan 180 ◦ sudut hamburan. Setiap pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga.

2.3.2. Potensi Zeta dan pH

Potensi zeta dari formulasi A1 hingga A9 dicatat menggunakan Zetasizer ® 3000HS. pH diukur dengan
pHmeter GLP22 (Crison Instruments, Barcelona, Spanyol). Semua pengukuran dilakukan dalam rangkap tiga
pada 25 ◦ C.

2.3.3. Analisis Reologi

Karakterisasi reologi formulasi dilakukan dengan menggunakan aRheolyst AR-1000Nrheometer (TA

Instruments, Newcastle, UK) yang dilengkapi dengan data analyzer AR2500, pelat Peltier, dan cone (diameter 6 cm,
2.1. ◦ ). Pertama, penyimpanan (G ′) dan kerugian (G ”) modulus tercatat 37 ◦ C dan 0,1 Pa menerapkan sapuan frekuensi
sudut dari 0,1 hingga 50 rad / s. Viskositas dan kurva aliran dilakukan di bawah putaran berjalan pada 37 ◦ C selama 2
menit dengan tegangan geser dalam kisaran 0,1 hingga 200 detik –1. Analisis data adalah
Nanomaterials 2020, 10, 709 5 dari 20

dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak analisis data Rheology Advantage. Eksperimen dilakukan dengan menggunakan
1,5 mL untuk setiap formulasi.

2.3.4. Studi Mukoadhesif In Vitro

Kekuatan mukoadhesion dievaluasi dalam rangkap tiga menggunakan TA.XT Plus Texture analyzer
(Produk Sistem Mikro Stabil, Godalming, Inggris) mengikuti metode yang sebelumnya dijelaskan oleh Akhter et
al. [ 42 ] dan Campaña-Seoane et al. [ 43 ] dengan beberapa modifikasi. Kornea sapi ditempatkan di bawah pita
dua sisi di ujung probe. Untuk mensimulasikan aplikasi tetes mata, 15 µ L dari setiap formulasi ditempatkan di
bagian bawah cawan petri. Kekuatan mukoadhesion ditentukan sebagai gaya detasemen yang diperlukan
untuk memisahkan formulasi dari kornea setelah menerapkan gaya 0,5 N selama 60 detik.

2.4. Uji Toleransi Mata (uji HET-CAM)

Tes iritasi mata dilakukan seperti yang dilaporkan sebelumnya [ 44 ]. Singkatnya, 200 µ L dari
masing-masing formulasi diuji, setidaknya dalam rangkap dua, pada membran chorioallantoic (Hen's Egg
Test-Chorioallantoic Membrane, HET-CAM) telur ayam setelah 10 hari inkubasi pada 37 ◦ C dan 60% RH. Waktu
dan tingkat keparahan cedera setelah penambahan setiap formulasi dicatat. Skor iritasi (IS) dihitung sebagai
berikut (34):

( 301 - tH) × 5 ( 301 - tL) × 7 ( 301 - tC) × 9

IS = + + (1)
300 300 300

dimana tH, tL, dan tC adalah waktu (dalam detik) yang diperlukan untuk munculnya hemolisis, lisis, dan
koagulasi. Bergantung pada nilai IS, formulasi diklasifikasikan sebagai non-iritasi (IS <1), iritasi ringan (1 ≤ IS <5),
cukup mengiritasi (5 ≤ IS <10), atau sangat mengiritasi (IS> 10).

2.5. Viabilitas Sel In Vitro

Sitokompatibilitas formulasi siklodekstrin dievaluasi pada BALB / 3T3 klon A31 (ATCC ® CCL-163TM) murine
fibroblast menggunakan tes WST-1. Sel BALB 3T3 dikultur dalam media kultur DMEM / F12 (Corning) yang
dilengkapi dengan 10% serum janin sapi (Hyclone) dan 1% penisilin / streptomisin (Gibco). Mereka diunggulkan
di piring 96-sumur di 1,5 × 10 4 sel / sumur. Untuk memungkinkan
perlekatan sel lengkap, sel diinkubasi 4 jam pada 37 ◦ C dan 5% CO 2. Formulasi A1 sampai A9, suspensi Nevanac
3 mg / mL, dan kontrol (DMEM / F12) diencerkan 1:50, 1: 100, dan
1: 150 kali, masing-masing, dengan media kultur sel lengkap berada di bawah IC 50 dari nepafenac, untuk memastikan
bahwa nepafenac tidak dalam konsentrasi sitotoksik, dan ditambahkan ke lapisan tunggal sel [ 45 ]. DMEM / F12
media digunakan sebagai kontrol. Setelah 24 jam inkubasi dengan formulasi, reagen WST-1 (Roche)
ditambahkan dan pengujian dilakukan sesuai dengan petunjuk pabrik. Absorbansi diukur pada 450 nm
menggunakan pembaca mikroplate Model 680 dari Bio-Rad (Hercules, CA, USA) dan perangkat lunak
Microplate Manager (Versi 5.2.1, BioRad, CA, USA).

2.6. Di ff Usion Assays

Nepafenac di ff tes penggunaan dari formulasi tetes mata dilakukan dalam rangkap tiga di Franz di vertikal ff
penggunaan sel yang dilengkapi dengan filter membran selulosa asetat (0.45 µ ukuran pori m, diameter 25
mm). Filter membran direndam dalam media reseptor selama 1 jam sebelum memulai percobaan. Fase donor
terdiri dari alikuot sebanyak 1,00 mL formulasi uji. Fase reseptor adalah 6,00 mL 2,5% (w / v) γ- CD / HP β- Rasio
CD (80/20) media berair untuk memastikan kondisi bak cuci, dan disimpan pada 37 ◦ C dan di bawah
pengadukan magnet pada 300 rpm. Di ff luas usion adalah 0.786 cm 2. Sampel (1 mL) diambil dari fase reseptor
pada menit ke 30, 60, 90, 120, 180, 210, 240, 300, dan 360 dan diganti dengan media segar. Tetes mata
komersial, Nevanac 3 mg / mL, juga diuji. Konten Nepafenac
Nanomaterials 2020, 10, 709 6 dari 20

ditentukan dengan spektrofotometri UV-VIS pada 254 nm menggunakan metode yang sebelumnya divalidasi dengan
larutan standar dalam kisaran 3-25 µ g / mL.
Di ff usion coe ffi cients (D) diperkirakan dari persamaan Higuchi:

( Dt) 1 2
Q
(2)
A = 2C 0 π

di mana Q adalah jumlah nepafenac (g) yang dilepaskan oleh waktu t (menit), A adalah di ff area penggunaan
(cm 2), C 0 adalah konsentrasi awal nepafenac dalam formulasi (g / mL), dan D adalah di ff usion coe ffi cient
(cm 2 / min).

2.7. Ex Vivo Corneal dan Scleral Permeability

Kornea ex vivo dan studi permeabilitas skleral dari formulasi nepafenac terpilih dilakukan dengan
menggunakan mata sapi segar dari rumah pemotongan hewan lokal. Mata disimpan di fosfat-bu ff Larutan ered
saline (PBS) dengan antibiotik yang ditambahkan sebelumnya (penisilin 100 IU / mL dan streptomisin 100 µ g /
mL) dan dipelihara dalam penangas es selama pengangkutan. Kornea dan skleranya diisolasi, dicuci dengan
PBS, dan ditempatkan pada garis vertikal ff menggunakan sel Franz. Fase reseptor dan donor diisi dengan bu
karbonat ff er, pH 7,2, mengikuti protokol bovine corneal opacity and permeability (BCOP), ditempatkan di bak
mandi pada 37 ◦ C, dan disimpan di bawah pengadukan magnet selama 1 jam untuk menyeimbangkan jaringan
mata. Setelah ini, bu ff eh di ruang donor benar-benar dilepas dan diganti dengan formulasi (2 mL). Ruang
ditutup dengan parafilm untuk mencegah penguapan (0,785 cm 2 area yang tersedia untuk permeasi). Sampel
(1 mL) dikeluarkan dari ruang reseptor pada 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, dan 6 jam, mengganti volume yang sama dengan
bu karbonat. ff er setiap kali, dan berhati-hati untuk menghilangkan gelembung dari di ff sel penggunaan. Semua
percobaan dilakukan dalam rangkap tiga.
Nepafenac yang diserap diukur pada 254 nm menggunakan sistem HPLC Jasco (autosampler AS-4140,
pompa PU-4180, kotak antarmuka LC-NetII / ADC, oven kolom CO-4060, detektor larik fotodioda MD-4010),
dengan kolom C18 ( Waters Symmetry C18, 5 µ m, 3.9 × 150 mm) dan perangkat lunak ChromNAV. Fase gerak
terdiri dari asetonitril: air (50:50) dengan laju aliran 1 mL / menit dan 90 µ L untuk volume injeksi dan waktu
retensi 1,9 menit.
Setelah 6 jam uji permeasi, alikuot dari ruang donor diambil untuk analisis HPLC. Kornea dan sklera yang
telah diinjeksi sebelumnya dipotong dan kandungan nepafenac diekstraksi dalam tabung dengan campuran 3
mL etanol / air (50:50 v / v) selama 24 jam pada 37 ◦ C, dan sonikasi diaplikasikan selama 90 menit dalam
rendaman ultrasound pada 37 ◦ C. Setelah itu, tabung disentrifugasi (1000 rpm, 5 menit, 25 ◦ C), dan supernatan
disaring (Acrodisc ® penyaring jarum suntik, 0.22 µ m GHP Minispike, Waters) menjadi Eppendorf kecil,
disentrifugasi lagi (14.000 rpm, 20 menit, 25 ◦ C), dan disaring untuk diukur dengan HPLC.
Koe permeabilitas yang tampak ffi cient (P. aplikasi) dihitung dari fl ux (J) menurut
Persamaan (3):
J
P. app = C 0 (3)

di mana J adalah fl ux, dihitung sebagai kemiringan (Q / t) dari penampang linier jumlah obat di
ruang reseptor (Q) versus waktu (t), dan C. 0 adalah konsentrasi awal nepafenac pada fase donor. Setiap
percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan hasilnya dilaporkan sebagai nilai rata-rata ±
deviasi standar (SD).

2.8. Monosit Manusia

2.8.1. Di ff erentiasi menjadi Makrofag

THP-1 monosit manusia (ATCC TIB-202 ™) dibudidayakan di RPMI 1640 (Gibco) yang dilengkapi dengan
10% serum sapi janin (Hyclone), 2-merkaptoetanol (0,05 mM; Gibco), dan 1% penisilin-streptomisin (Gibco).
Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA; Sigma-Aldrich) 200 nM digunakan untuk mempromosikan ff erensiasi
monosit THP-1 menjadi makrofag [ 46 ]. Sebelumnya,
Nanomaterials 2020, 10, 709 7 dari 20

monosit telah dihitung dalam Coulter Multisizer3 (Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA) dan kepadatan sel
disesuaikan menjadi 200.000 sel per mL. Kemudian PMA 200 nM ditambahkan ke di ff membedakan sel THP-1
menjadi makrofag dan diinkubasi selama 72 jam pada 37 ◦ C.

2.8.2. Aktivitas Anti-inflamasi

Setelah makrofag di ff erentiasi, larutan PMA dihilangkan dan lapisan tunggal sel dicuci dengan bu fosfat
Dulbecco ff ered saline (DPBS) dan trypsinized mengikuti protokol standar. Sel diunggulkan ke dalam 48 piring
dengan ukuran 4,5 × 10 4 sel / sumur. Untuk menginduksi respon inflamasi, makrofag diobati dengan 100 ng /
mL lipopolisakarida (LPS) dari Escherichia coli O111: B4
(St. Louis, MO, USA, Sigma-Aldrich) dan diinkubasi pada waktu yang sama selama 24 jam pada 37 ◦ C dan 5% CO 2
dengan sampel. Sel yang dirawat hanya dengan LPS berfungsi sebagai kontrol positif, sedangkan sel yang tidak distimulasi
(tanpa LPS) digunakan sebagai kontrol negatif. Formulasi A2, A3, A5, A8, dan A9 dipilih untuk antiradang e ffi cacy,
dan formulasi kosong yang sesuai (tanpa obat) juga diuji sebagai kontrol.

Setelah inkubasi, supernatan kultur sel dikumpulkan dan disimpan pada suhu -150 ◦ C sampai penilaian
sitokin. Sekresi dari 3 mediator inflamasi, PEG-2, IL-6, dan IL-1ra, dianalisis. Konsentrasi PEG-2 dipelajari dengan
menggunakan uji EIA (Arbor Assays), sedangkan IL-6 dan IL-1ra dianalisis dengan ELISA tertentu (Sigma, St.
Louis, MO, USA) setelah pengenceran yang memadai mengikuti petunjuk pabrik.

2.9. Analisis statistik

Data disajikan sebagai mean ± deviasi standar (SD). E ff Pengaruh komposisi formulasi pada respon
antiradang dianalisis menggunakan ANOVA dan uji jarak berganda (Statgraphics Centurion XVI 1.16.1.11,
StatPoint Technologies Inc., Warrenton, VA, USA). Di ff hubungan dianggap signifikan p < 0,05.

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Kelarutan Tetes Mata Nepafenac dan Karakterisasinya

Kelarutan yang tampak, potensial zeta, dan pH dari formulasi nepafenac yang dirancang dirangkum
dalam Tabel 3 .

Tabel 3. Kelarutan obat nyata, potensi zeta, dan pH suspensi tetes mata nepafenac.

Kelarutan Obat yang Jelas Obat Terlarut Potensi Zeta

Perumusan pH
di 25 ◦ C (mg / mL) Kandungan (%) (mV)
A1 1.87 ± 0,03 62.33 - 10.9 ± 0.6 6.08 ± 0.23
A2 1.95 ± 0,02 65.00 - 10.4 ± 0.3 6.18 ± 0,05
A3 2.23 ± 0,01 74.33 - 6.4 ± 0.8 6.09 ± 0,03
A4 1.91 ± 0,02 63.66 - 12.1 ± 1.4 6.21 ± 0,09
A5 2.50 ± 0,02 83.33 - 7.8 ± 0.9 6.07 ± 0,02
A6 1.89 ± 0,05 63.00 - 27.4 ± 1.7 6.13 ± 0.33
A7 1.68 ± 0,01 56.00 - 14.4 ± 1.4 6.01 ± 0.23
A8 1.95 ± 0,02 65.00 - 14.7 ± 1.2 6.16 ± 0.15
A9 2.61 ± 0,02 87.00 - 6.9 ± 1.4 6.08 ± 0,05

Dalam pembentukan kompleks terner, obat-CD-polimer telah banyak dieksplorasi untuk meningkatkan kelarutan dan disolusi
obat yang sulit larut [ 47 , 48 ]. Salah satu tujuan dari penelitian ini adalah untuk menjelaskan apakah penambahan polimer hidrofilik ke
kompleks nepafenac / CD dapat meningkatkan kelarutannya serta meningkatkan waktu tinggal di jaringan mata. Untuk itu, di ff berbagai
polimer dan konsentrasi diuji. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3 , kelarutan nepafenac meningkat di semua formulasi dibandingkan
dengan kelarutan dalam air, yang telah dilaporkan menjadi 0,0197 mg / mL pada 25 ◦ C dalam air [ 49 ].
Nanomaterials 2020, 10, 709 8 dari 20

Penambahan SA menunjukkan peningkatan kelarutan terendah (formulasi A7, 1,68 ± 0,01 mg / mL) sedangkan
kombinasi SA dengan CM atau CMC dan HA menyebabkan kelarutan kompleks yang lebih tinggi (1,89 ±
0,05 dan 2,61 ± 0,02 mg / mL, masing-masing). Ini di ff Hal ini disebabkan oleh peningkatan kekuatan
pengompleks siklodekstrin untuk nepafenac. Mengenai formulasi yang mengandung CMC, formulasi A9 (CMC,
PVA, dan MC), A5 (CMC, PVP, dan HPMC), dan A3 (CMC, PVA, dan tyloxapol) menunjukkan kelarutan tertinggi,
2,61, 2,50, dan 2,23 mg / mL , masing-masing. Hasil ini mendukung studi pendahuluan kami sebelumnya, yang
menunjukkan bahwa formulasi yang mengandung CMC dan / atau PVA menyebabkan pelarutan nepafenac
tertinggi.
Semua formulasi menunjukkan potensi zeta negatif, sesuai dengan sifat anionik atau nonionik dari
polimer dan surfaktan yang terlibat. Formulasi A6 menunjukkan nilai absolut potensial zeta tertinggi, –27,4 ± 1,7
mV. Meskipun nilai absolut potensial zeta yang tinggi terkait dengan stabilitas tinggi nanoaggregates, faktor
lain seperti kekuatan ion, pH, atau jumlah obat yang dienkapsulasi dapat memengaruhi perilaku agregasi [ 50 ].

Selain itu, semua nilai pH adalah sekitar 6,08-6,21, yaitu dalam kisaran yang memadai untuk pemberian mata [ 51 ].
Ukuran partikel dan distribusi ukuran juga dievaluasi dengan DLS (Tabel 4 ).

Tabel 4. Ukuran partikel hasil tetes mata nepafenac encer yang diencerkan. Data yang dilaporkan adalah cara
dari tiga penentuan.

Ringkasan Puncak

Perumusan Ukuran (d. Nm) Intensitas (%)

5880.0 73.3
A1
2619.0 19.9
5880.0 46.9
A2 4300.0 46.8
1953.0 6.3
5590.0 96.3
A3
827.0 3.7
A4 5870.0 100.0

3090.0 53.5
A5 5950.0 42.0
481.0 4.5
A6 5575.0 100.0

3380.0 65.1
A7
5560.0 34.9
4510.0 66.4
A8
1572.0 33.6
5510.0 77.1
A9 3250.0 15.3
340.0 7.6

Semua formulasi yang diuji menyajikan mikropartikel (sekitar 5-6 µ m), dan formulasi A3, A5, dan
A9, yang berisi PVA dan CMC atau PVP dan CMC, juga menampilkan sebagian kecil dari partikel yang lebih kecil (kurang dari 1 µ
m). Dibandingkan dengan ukuran partikel Nevanac yang dilaporkan oleh Shelley et al. [ 51 ], peningkatan ukuran partikel
formulasi kami dapat dikaitkan dengan di ff polimer yang tidak digunakan. Faktanya, kisaran ukuran yang serupa dilaporkan
oleh Jansook dan rekan kerja [ 52 ] setelah pembuatan obat tetes mata irbersartan juga mengandung 15% γ- CD. Selain itu,
semua formulasi menunjukkan indeks polidispersitas yang tinggi, yang mungkin disebabkan oleh pembentukan dan
pengacauan nanoagregat secara terus menerus.
Nanomaterials 2020, 10, 709 9 dari 20

3.2. Karakterisasi Reologi

Waktu tinggal prekornea yang singkat membatasi ketersediaan hayati mata dari obat yang diformulasikan sebagai
tetes mata topikal konvensional. Salah satu strategi untuk memperpanjang masa tinggal prekornea bergantung pada
Nanomaterials 2020, 10, x UNTUK REVIEW Rekan 9 dari 20
penambahan polimer yang dapat meningkatkan viskositas dan karenanya retensi obat di kantung mata [ 53 ]. Profil viskositas
formulati

Gambar
Gambar 2.
2. Ketergantungan
Ketergantungan viskositas
viskositas pada
pada kondisi
kondisi laju
laju geser
geser tetes
tetes mata
mata diukur pada 37
yang diukur ◦ C.
pada 37 ° C.

Diketahui bahwa setelah penerapan gaya mekanis seperti mata berkedip, viskositas film air mata alami
Diketahui bahwa pada penerapan gaya mekanis seperti mata berkedip, viskositas lapisan tipis air mata
menurun dengan cara yang jelas. Tetes mata idealnya menunjukkan perilaku pseudoplastik untuk mencegah
menurun secara nyata. Tetes mata idealnya harus menampilkan perilaku pseudoplastik untuk mencegah
pengangkatannya
pengangkatannyadalam dalamkondisi berkedip
kondisi berkedip[ 50[50].
]. Seperti yang
Seperti ditunjukkan
yang pada
ditunjukkan Gambar
pada 2 , di2,
Gambar 37pada
◦ C, semua formulasi
37 ° C, semua
menunjukkan perilaku pseudoplastik, viskositas tinggi selama interblinking (laju geser 0,03
formulasi menunjukkan perilaku pseudoplastik, viskositas tinggi selama interblinking (laju geser detik). –1), 0,03 detik). -

dan viskositas rendah selama berkedip (laju geser 4250–28,500 detik –1), yang sesuai untuk formulasi tetes mata
1), dan viskositas rendah selama berkedip (laju geser 4250–28,500 detik –1), yang sesuai untuk formulasi tetes

[ 51 ]. Mengenai viskositas, Nevanac menunjukkan viskositas tertinggi yaitu 37 ◦ C. Perilaku viskoelastik pada
mata [51]. Mengenai viskositas, Nevanac menunjukkan viskositas tertinggi pada 37 ° C.
37 ◦ C juga dianalisis (Gambar 3 ), merekam ketergantungan penyimpanan
Perilaku viskoelastik pada 37 ° C juga dianalisis (Gambar 3), mencatat ketergantungan modulus
(G ′) dan modulus rugi (G ”) sebagai fungsi frekuensi sudut (rad / s).
penyimpanan (G ') dan kehilangan (G' ') sebagai fungsi frekuensi sudut (rad / s).
Mengenai perilaku viskoelastik, menambahkan 1% CMC, 0,2% HA, dan 0,4% SA ke formulasi agregat yang
mengandung nepafenac / γ- CD / HP- β CDmodifikasi sifat reologi dari formulasi (Gambar 3 ). Formulasi A1 hingga
A7 dan A9 dilakukan sebagai sistem yang sangat cair, dan nilai G 'dapat diabaikan, menunjukkan bahwa
mereka memiliki perilaku yang lebih kental daripada elastis. Sebagai alternatif, formulasi A8, yang
mengandung CMC, HA, dan SA, berperilaku sebagai gel yang terstruktur dengan baik (G ′ >> G ”) dan juga
menampilkan perilaku pseudoplastik. Dalam kasus Nevanac, G ′ dan nilai G ”meningkat dengan frekuensi sudut,
yang merupakan tipikal gel lemah.
formulasi menunjukkan perilaku pseudoplastik, viskositas tinggi selama interblinking (laju geser 0,03 detik). -
1), dan viskositas rendah selama berkedip (laju geser 4250–28,500 detik –1), yang sesuai untuk formulasi tetes
mata [51]. Mengenai viskositas, Nevanac menunjukkan viskositas tertinggi pada 37 ° C.
Perilaku viskoelastik pada 37 ° C juga dianalisis (Gambar 3), mencatat ketergantungan modulus
penyimpanan (G ') dan kehilangan (G' ') sebagai fungsi frekuensi sudut (rad / s).
Nanomaterials 2020, 10, 709 10 dari 20

Gambar 3. Evolusi penyimpanan (G ', simbol padat) dan kerugian (G' ', simbol terbuka) modulus sebagai fungsi
Gambar 3. Evolusi penyimpanan (G ′, simbol padat) dan modulus kerugian (G ", simbol terbuka) sebagai fungsi
frekuensi sudut (rad / s).
frekuensi sudut (rad / s).

3.3. Studi Mucoadhesion

Diketahui bahwa setelah pemberian topikal ke mata, faktor precorneal dan mekanisme refleks mata
menyebabkan eliminasi obat secara cepat, dan hanya sebagian kecil obat yang tersedia di permukaan mata.
Pengobatan penyakit mata dengan sistem pengiriman mukoadesif telah diusulkan sebagai strategi untuk
meningkatkan retensi obat dari formulasi oftalmik topikal. Ikatan polimer-musin dapat digunakan untuk
menjebak formulasi pada permukaan mata, sehingga meningkatkan ketebalan film air mata [ 54 ]. Beberapa
teknik in vitro telah dilaporkan untuk mempelajari mukoadhesion [ 55 ]. Uji tarik in vitro banyak digunakan untuk
menilai kekuatan mukoadhesif dalam hal gaya pelepasan yang diperlukan untuk memisahkan dua permukaan [ 43
, 56 ]. Kekuatan mukoadhesion formulasi dirangkum dalam Tabel 5 .

Tabel 5. Kekuatan mukoadhesif dari formulasi oftalmik pada kornea sapi ex vivo.

Perumusan Kekuatan Mukoadhesif (N)

A1 0.39 ± 0.15
A2 0,54 ± 0.13
A3 0.41 ± 0,04
A4 0,56 ± 0.11
A5 0,52 ± 0,02
A6 0.39 ± 0,06
A7 0.36 ± 0,08
A8 0.47 ± 0,02
A9 0.38 ± 0,06
Nevanac 3 mg / mL 0.67 ± 0,03

Nevanac menunjukkan kekuatan mukoadhesif tertinggi (0,672 ± 0,03N), diikuti dengan formulasi
A4 yang berisi CMC dan HA; A2 yang berisi CMC; dan A5, dengan PVP, HPMC, dan CMC.
Turunan selulosa seperti CMC dan HPMC dan natrium hialuronat telah banyak digunakan sebagai polimer
mukoadesif. Brako dan rekan kerja [ 57 ] mempelajari mukoadhesi serat nano yang memuat progesteron, dan
menemukan bahwa penambahan CMC ke serat juga meningkatkan mukoadhesi mereka di kedua membran
buatan dan mukosa. Lee dkk. [ 58 ] ditemukan setara e ffi cacy pada pasien dengan sindrom mata kering yang
diobati dengan tetes mata HA atau CMC. Mayol dkk. [ 59 ] dirancang
Nanomaterials 2020, 10, 709 11 dari 20

poloksamer / asam hialuronat in situ yang membentuk hidrogel untuk pemberian obat, menunjukkan perilaku mukoadhesif yang baik
dengan pelepasan obat yang berkelanjutan.
Karena mukoadhesion berkorelasi dengan viskositas [ 60 ], hasil ini sesuai dengan nilai viskositas yang
ditunjukkan sebelumnya. Dilaporkan bahwa kekuatan yang dibutuhkan selama mata berkedip adalah 0,8 N [ 50 ].

3.4. Tes Iritasi Mata (HET-CAM)

Tes Hen's Egg Test-Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) didasarkan pada deteksi kerusakan pembuluh
darah pada membran chorioallantoic, yang merupakan analog untuk konjungtiva mata [ 61 ]. Di ff alternatif lain
untuk tes mata kelinci Draize telah diusulkan untuk menjelaskan toksisitas potensi iritasi mata [ 62 , 63 ]. HET-CAM
telah digambarkan sebagai salah satu alternatif yang paling cocok untuk menguji iritasi mata secara in vitro
karena ditemukan memiliki korelasi yang baik dengan tes Draize [ 64 ]. Uji HET-CAM menegaskan bahwa
formulasi tidak mengiritasi sebagai kontrol negatif (IS = 0) (Gambar 4 ); IS untuk kontrol positif sekitar 17.

Nanomaterials 2020, 10, x UNTUK REVIEW Rekan 11 dari 20

Gambar 4. Gambar
Gambar 4. Gambaruji
ujiHen's
Hen'sEgg
Egg Test-Chorioallantoic
Test-Chorioallantoic Membrane
Membrane (HET-CAM)
(HET-CAM) direkam
direkam setelah
setelah lima menit
lima menit kontak
kontak
dengandengan formulasi
formulasi nepafenac.
nepafenac. Kontrol
Kontrol negatif negatif
dan positifdan positifpada
mengacu mengacu pada
NaCl 0,9% NaCl 0,9% dan 0,1 NNaOH,
dan
masing-masing.
0,1 N NaOH, masing-masing.

3.5. Viabilitas
3.5. Viabilitas Sel
Sel
Persentase kelangsungan
Persentase kelangsungan hidup
hidup sel
sel relatif
relatif terhadap
terhadap kontrol
kontrol negatif
negatif formulasi
fibroblas yang diperlakukan
A1 hingga dengan pada
A9 dan Nevanac
formulasi A1 hingga A9 dan Nevanac pada
tiga pengenceran ditunjukkan pada Gambar 5.tiga pengenceran ditunjukkan pada Gambar. 5 .
 kontak dengan formulasi nepafenac. Kontrol negatif dan positif mengacu pada NaCl 0,9% dan 0,1 NNaOH,
masing-masing.

3.5. Viabilitas Sel

Persentase
Nanomaterials kelangsungan
2020, 10, 709 hidup sel relatif terhadap kontrol negatif formulasi A1 hingga A9 dan Nevanac
12 pada
dari 20

tiga pengenceran ditunjukkan pada Gambar 5.

Gambar2020,
Nanomaterials 5. Viabilitas sel BALB
10, x UNTUK / 3T3
REVIEW setelah 24 jam terpapar formulasi oftalmik A1-A9 dan Nevanac pada berbagai
Rekan 12 dari 20
Gambar 5. Viabilitas sel BALB / 3T3 setelah 24 jam terpapar formulasi oftalmik A1-A9 dan Nevanac
konsentrasi dan kontrol.
pada berbagai konsentrasi dan kontrol.
Nevanac diencerkan dengan media DMEM / F12 untuk mendapatkan konsentrasi nepafenac akhir
Nevanac
0,236 diencerkan
mM, 0,188 dengan
mM, dan media
0,0787 mM,DMEM / F12EC50
karena untuk mendapatkan
dilaporkan konsentrasi
menjadi 0,0875 akhir
mMnepafenac
[45]. Semua
0,236 mM, 0,188
formulasi juga mM, dan 0,0787
diencerkan mM, karena
dengan mediaEC50
DMEMdilaporkan menjadi
/ F12 sesuai 0,0875konsentrasi
dengan mM [ 45 ]. Semua
ini. formulasi juga
diencerkan
Semuadengan
sampelmedia
yang DMEM / F12 sesuai
diuji terbukti dengan konsentrasi
tidak berbahaya ini. 3T3, dengan viabilitas sel serupa dengan
bagi sel BALB
yangSemua sampel
dipamerkan yang
oleh diuji terbukti
formulasi tidak berbahaya
yang dipasarkan, bagi sel
Nevanac. BALB
Hasil 3T3, dengan
menegaskan viabilitas
bahwa sel serupa
pengenceran 1: dengan
100
yang dipamerkan
cukup oleh formulasi
untuk penilaian yang
lebih lanjut daridipasarkan, Nevanac. Hasil menegaskan bahwa pengenceran 1: 100
aktivitas anti-inflamasi.
cukup untuk penilaian lebih lanjut dari aktivitas antiradang.
3.6. Studi Difusi In Vitro
3.6. In Vitro Di ff Studi penggunaan
Difusi Nepafenac dari formulasi agregat dan suspensi yang dipasarkan pertama kali dievaluasi secara in
Nepafenac di ff penggunaan dari formulasi agregat dan suspensi yang dipasarkan pertama kali dievaluasi
vitro dalam kondisi sink selama enam jam. Membran selulosa asetat (ukuran pori 0,45 µm, diameter 25 mm)
secara in vitro dalam kondisi sink selama enam jam. Membran selulosa asetat (0,45 µ ukuran pori m, diameter
digunakan untuk memisahkan donor dari kompartemen reseptor (Gambar 6).
25 mm) digunakan untuk memisahkan donor dari kompartemen reseptor (Gambar 6 ).

Gambar6.6.Nepafenac
Gambar Uji difusi di
nepafenac melalui membran
ff uji penggunaan selulosaselulosa
melalui membran asetat asetat
pada suhu
pada 37
37 °◦ C
C dari
dariformulasi
formulasitetes
tetesmata
mata
A1 A1 hingga
hingga A9. A9.

Formulasi A9 menunjukkan difusi tercepat (926,1 ± 23,4 µg / cm3 2), diikuti dengan formulasi A5 (847,8 ±
39,5 µg / cm3 2), A2 (808,9 ± 31,6 µg / cm 2), dan A3 (749,6 ± 58,4 µg / cm3 2). Peningkatan difusi dibandingkan
dengan Nevanac disebabkan oleh fraksi nepafenac terlarut yang lebih tinggi. Karena difusi bergantung pada
gradien konsentrasi dan formulasi A2, A3, A5, dan A9 adalah yang menunjukkan kapasitas pelarutan terbesar
dari obat tersebut.
Nanomaterials 2020, 10, 709 13 dari 20

Formulasi A9 menunjukkan di tercepat ff usion (926.1.2) ± 23.4 µ g / cm 2), diikuti dengan formulasi A5 (847.8 ± 39.5
µ g / cm 2), A2 (808.9 ± 31.6 µ g / cm 2), dan A3 (749.6 ± 58.4 µ g / cm 2). Di meningkat ff Penggunaan dibandingkan dengan
Nevanac adalah karena fraksi nepafenac terlarut yang lebih tinggi. Sejak di ff penggunaan tergantung pada gradien
konsentrasi dan formulasi A2, A3, A5, dan A9 adalah yang menunjukkan kapasitas pelarutan terbesar dari obat
tersebut.

3.7. Ex Vivo Corneal dan Studi Permeabilitas Skleral

Nanomaterials 2020, 10, x UNTUK REVIEW Rekan 13 dari 20
Jumlah nepafenac yang meresap dari formulasi terpilih melalui kornea sapi dan sklera selama enam jam
ditunjukkan pada Gambar. 7 .

Gambar 7. Jumlah nepafenac yang meresap melalui kornea sapi ( puncak) dan sclera ( bawah) diukur di ruang
Gambar 7. Jumlah nepafenac yang meresap melalui kornea sapi (atas) dan sklera (bawah) diukur
reseptor sebagai fungsi waktu.
dalam ruang reseptor sebagai fungsi waktu.

Profil perembesan transcorneal dan transscleral dari formulasi agregat nepafenac dibandingkan dengan
Semua formulasi yang diuji menunjukkan tingkat permeabilitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan
formulasi yang dipasarkan. Nevanac menunjukkan jumlah nepafenac terendah yang meresap melalui kornea
Nevanac. Hal ini dapat dikaitkan dengan adanya siklodekstrin dalam formulasi kami dan fraksi nepafenac
sapi dan sklera setelah enam jam dibandingkan dengan suspensi nepafenac, 7.75
terlarut yang lebih tinggi. Sejumlah penelitian telah menunjukkan bahwa CD meningkatkan penetrasi obat
± 0.26 µ g / cm 2 di kornea dan 19.44 ± 1.74 µ g / cm 2 di sclera (Gambar 7 ). Temuan ini sejalan dengan
melalui penghalang biologis yang terdiri dari bagian luar berair dan selaput lendir. Aktaş dan rekan kerja [66]
melaporkan bahwa obat tetes mata yang mengandung kompleks pilocarpine / HPβ-CD menunjukkan
peningkatan empat kali lipat dalam penetrasi transcorneal dibandingkan dengan formulasi obat tanpa CD.
Perilaku ini juga diamati oleh Shelley et al. [51], ketika mereka mempelajari permeabilitas nepafenac di seluruh
kornea babi dibandingkan dengan formulasi siklodekstrin dari nepafenac. Permeabilitas tertinggi melalui
kornea sapi dan sklera dicapai dengan formulasi A9, 20.80 ± 1.66 µg / cm 2 di kornea dan 104,24 ±
Nanomaterials 2020, 10, 709 14 dari 20

yang dilaporkan dalam literatur dan mereka dapat dikaitkan dengan jumlah nepafenac rendah yang dilarutkan di Nevanac 3
mg / mL (37,87 µ g / mL) dibandingkan dengan suspensi nepafenac. Faktanya, berbagai penelitian menggunakan nanopartikel
lipid Nevanac dan nepafenac [ 65 ] atau gel in situ [ 51 ] menyarankan bahwa tingkat pelepasan yang rendah dari Nevanac
adalah karena mengandung Carbopol 974P, yang merupakan polimer bioadhesif yang sangat terkait silang yang
memungkinkan tingkat pelepasan mendekati nol atau anomali.
Semua formulasi yang diuji menunjukkan tingkat permeabilitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan
Nevanac. Hal ini dapat dikaitkan dengan adanya siklodekstrin dalam formulasi kami dan fraksi nepafenac
terlarut yang lebih tinggi. Sejumlah penelitian telah menunjukkan bahwa CD meningkatkan penetrasi obat
melalui penghalang biologis yang terdiri dari bagian luar berair dan selaput lendir. Aktaş¸ dan rekan kerja [ 66 ]
melaporkan bahwa obat tetes mata mengandung pilocarpine / HP β- Kompleks CD menunjukkan peningkatan
empat kali lipat dalam penetrasi transkornea dibandingkan dengan formulasi obat tanpa CD. Perilaku ini juga
diamati oleh Shelley et al. [ 51 ], ketika mereka mempelajari permeabilitas nepafenac di seluruh kornea babi
dibandingkan dengan formulasi siklodekstrin dari nepafenac. Permeabilitas tertinggi melalui kornea sapi dan
sklera dicapai dengan formulasi A9, 20.80 ± 1.66 µ g / cm 2 di kornea dan 104.24 ± 3.21
µ gNanomaterials
/ cm 2 di sclera, masing-masing. Jumlah nepafenac yang terakumulasi di permukaan kornea dan skleral
2020, 10, x UNTUK REVIEW Rekan 14 dari 20
sapi
dan di jaringan setelah enam jam ditampilkan pada Gambar. 8 .

Angka 8. Nepafenac terakumulasi di permukaan dan di dalam ( SEBUAH) kornea dan ( B) sklera setelah enam jam
terpapar.
Angka 8. Nepafenac terakumulasi di permukaan dan di dalam ( SEBUAH) kornea dan ( B) sklera setelah enam jam
terpapar.

Setelah enam jam, Nevanac terakumulasi paling banyak ke permukaan dan di dalam kornea sapi
(89,57 ± 6,66 µg / cm3). 2), yang dapat dikaitkan dengan viskositas formulasi yang tinggi pada permukaan
mata. Di sisi lain, pada sclera akumulasi yang lebih tinggi ditemukan untuk formulasi A9 (87,76 ±
Nanomaterials 2020, 10, 709 15 dari 20

Setelah enam jam, Nevanac terakumulasi paling banyak ke permukaan dan di dalam kornea sapi (89.57 ± 6.66
µ g / cm 2), yang dapat dikaitkan dengan viskositas formulasi yang tinggi pada permukaan mata. Di sisi lain, di
sclera akumulasi yang lebih tinggi ditemukan untuk formulasi A9 (87.76 ± 8.08 µ g / cm 2), A8 (65,84 ± 6.34 µ g /
cm 2), A5 (71,07 ± 7.64 µ g / cm 2), dan A2 (79,64 ± 1.90 µ g / cm 2).
Ini di ff Perbedaan antara akumulasi kornea dan skleral mungkin disebabkan oleh pembentukan agregat. Selanjutnya,
konsisten dengan beberapa laporan, sklera menunjukkan permeabilitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan
kornea [ 67 ]. Selama beberapa tahun terakhir, e ffi khasiat pemberian obat ke segmen posterior mata setelah aplikasi
topikal tetes mata berbasis siklodekstrin telah dibuktikan. Loftsson dan Stefansson [ 34 ] mengembangkan obat tetes
mata yang mengandung deksametason / γ- Kompleks CD untuk mengirimkan deksametason ke segmen posterior
mata untuk mengobati edema makula diabetik (DME), yang diuji secara in vivo pada kelinci dan secara klinis pada
pasien. Mereka menemukan bahwa hasil pada pasien DME yang diobati dengan tetes mata CD secara klinis serupa
dengan hasil setelah injeksi kortikosteroid intravitreal.
Singkatnya, hasil akumulasi ex vivo sclera menegaskan potensi formulasi kami untuk mengantarkan
nepafenac ke segmen posterior mata melalui jalur skleral.

3.8. Aktivitas Anti-Peradangan

Sitokin dan mediator lain, seperti prostaglandin, memainkan peran penting dalam peradangan mata.
Obat antiradang yang digunakan untuk pengobatan mata kering telah dilaporkan untuk meningkatkan
produksi antagonis reseptor interleukin1 (IL-1) (IL-1ra), di antara molekul antiradang lainnya, di permukaan
mata [ 68 ]. Sebagai alternatif, peningkatan kadar IL-6 dan prostaglandin E2 (PEG2) telah dilaporkan terlibat
dalam mata kering, glaukoma, patologi kornea, angiogenesis retina, dan perkembangan retinopati diabetik [ 69 ,
70 ]. Dalam studi ini, kami memeriksa sekresi dua mediator pro-inflamasi, IL-6 dan PGE2, dan satu mediator
anti-inflamasi, IL-1ra, oleh makrofag yang mengalami stimulasi lipopolisakarida (LPS) dan diobati dengan
formulasi yang dipilih untuk menentukannya. aktivitas anti-inflamasi (Gambar 9 ). Angka 9 A membandingkan
formulasi yang dimuat nepafenac dengan sistem kosongnya yang sesuai. Tidak signifikan e ff Efek pada sekresi
IL-1ra diamati untuk formulasi yang dikembangkan. Penggabungan nepafenac tidak merangsang sekresi
molekul antiradang ini. Namun, penurunan yang signifikan dalam sekresi IL-1ra (bg, ANOVA dan uji jarak
berganda) p < 0,05; n = 3) diamati untuk semua formulasi dibandingkan dengan kontrol positif. Dalam kasus
IL-6 (Gambar 9 B), semua formulasi menyebabkan penurunan yang signifikan pada sekresi IL-6 dibandingkan
dengan kontrol positif, mencapai tingkat yang mirip dengan kontrol negatif (sel yang tidak distimulasi) dalam
kasus formulasi yang mengandung nepafenac. Namun, ini e ff dll tidak diamati pada sel yang dirawat Nevanac.
Dalam kasus sekresi PGE2 (Gambar 9 C), Nevanac dan nepafenac memuat formulasi A3, A5, A8, dan A9 secara
signifikan mengurangi tingkat sekresi PGE2 dibandingkan dengan kontrol positif. Menariknya, sel yang dirawat
A8, A9, dan Nevanac mencapai tingkat yang mirip dengan kontrol negatif. Di sisi lain, pengobatan dengan A2
dan A3 yang dimuat secara signifikan menurunkan sekresi PGE2 dibandingkan dengan formulasi kosong yang
sesuai. Singkatnya, formulasi yang diuji A2, A3, A5, A8 dan A9 menunjukkan antiradang in vitro yang jelas ff ect,
mengurangi tingkat sekresi molekul pro-inflamasi (IL-6 dan PEG2), tanpa memodifikasi sekresi penanda
anti-inflamasi, IL-1ra. Dalam kasus Nevanac, hanya penurunan sekresi PEG2 yang diamati, yang serupa dengan
yang terdeteksi pada formulasi A8 dan A9. Selain itu, formulasi A8 dan A9 menunjukkan kinerja terbaik,
mencapai tingkat IL-6 dan PGE2 yang mirip dengan sel yang distimulasi non-LPS dan kapasitas anti-inflamasi
yang lebih unggul daripada formulasi yang tersedia secara komersial.

Beberapa penelitian telah mengukur konsentrasi mediator inflamasi setelah pengobatan dengan obat anti
inflamasi untuk menilai aktivitas terapeutiknya. Kern dkk. [ 71 ] menganalisis e ff Efek tetes mata nepafenac (0,3%) pada
produksi PEG2 di retina pada tahap awal retinopati diabetik. Mereka menemukan bahwa pengobatan dengan
nepafenac menyebabkan penghambatan yang signifikan dari sekresi PGE2 di retina. Calles dkk. [ 72 ] mempelajari
terapi in vitro e ffi khasiat film yang memuat deksametason dengan mengukur perubahan tingkat IL-6 setelah
pemaparan film menggunakan model in vitro dari peradangan kornea. Mereka menemukan
Nanomaterials 2020, 10, x UNTUK REVIEW Rekan 15 dari 20

3.8. Aktivitas Anti-inflamasi

Sitokin dan mediator lain, seperti prostaglandin, memainkan peran penting dalam
Nanomaterials 2020, 10, 709
peradangan mata. Obat anti-inflamasi yang digunakan untuk pengobatan mata kering telah 16 dari 20
dilaporkan untuk meningkatkan produksi antagonis reseptor interleukin 1 (IL-1) (IL-1ra), di antara
molekul anti-inflamasi lainnya, di permukaan mata [68]. Sebagai alternatif, peningkatan kadar IL-6
bahwa sel radang yang terpapar film deksametason telah secara signifikan mengurangi produksi IL-6
dan prostaglandin E2 (PEG2) telah dilaporkan terlibat dalam mata kering, glaukoma, patologi
dibandingkan dengan kontrol. Sesuai dengan hasil yang diterbitkan sebelumnya, penelitian kami menunjukkan
kornea, angiogenesis retinal, dan progresi retinopati diabetik [69,70]. Dalam studi ini, kami
e ff Efektivitas formulasi yang sarat dengan nepafenac, inhibitor COX, untuk menurunkan sekresi PGE2,
memeriksa sekresi dua mediator pro-inflamasi, IL-6 dan PGE2, dan satu mediator anti-inflamasi,
meningkatkan kinerja dibandingkan dengan formulasi Nevanac yang tersedia secara komersial. Formulasi A8
IL-1ra, oleh makrofag yang mengalami stimulasi lipopolisakarida (LPS) dan diobati dengan
dan A9, berisi CD, CMC, PVA, dan MC, menunjukkan data yang paling menjanjikan sebagai sistem antiradang.
formulasi yang dipilih untuk menentukannya. aktivitas anti-inflamasi (Gambar 9).

Gambar 9. E ff dll dari formulasi oftalmik pada tingkat sekresi ( SEBUAH) agonis reseptor interleukin-1 (IL-1ra), ( B) IL-6,
Gambar
dan 9. PengaruhE2
( C) prostaglandin formulasi
(PGE2) di oftalmik
makrofag.pada tingkat
Kontrol sekresi
negatif ( SEBUAH)
mengacu agonis
pada sel yang reseptor interleukin-1
tidak distimulasi (tanpa
(IL-1ra), ( B) IL-6,
lipopolisakarida dan kontrol
(LPS)); ( C) prostaglandin E2 (PGE2)
positif mengacu di makrofag.
pada sel yang hanyaKontrol negatif
distimulasi mengacu
dengan pada
LPS. Huruf sel yang
yang sama tidak
distimulasi (tanpa
menunjukkan lipopolisakarida
kelompok (LPS)); kontrol
yang secara statistik homogenpositif
(ANOVAmengacu
dan ujipada
jarak sel yang hanya dirangsang
berganda
p < 0,05; n = 3).
Nanomaterials 2020, 10, 709 17 dari 20

4. Kesimpulan

Singkatnya, kami berhasil mengembangkan formulasi agregat berbasis siklodekstrin yang mampu
mengantarkan nepafenac ke segmen posterior mata melalui sklera untuk mengobati peradangan. Semua
suspensi ditemukan tidak menimbulkan iritasi dan biokompatibel setelah uji HET-CAM dan uji viabilitas sel in
vitro pada fibroblas tikus. Formulasi tetes mata yang optimal, A9, mengandung CMC, PVA, dan MC,
menunjukkan kapasitas pelarutan obat yang tinggi, retensi sklera yang tinggi, dan pengurangan respon
inflamasi yang lebih tinggi dibandingkan dengan formulasi yang dipasarkan, Nevanac ® 3 mg / mL. Ini
memberikan alternatif untuk pengiriman topikal obat hidrofobik seperti nepafenac yang digunakan untuk
mengobati penyakit mata di bagian belakang mata. Sementara itu, studi lebih lanjut perlu dilakukan untuk
menilai kelayakannya secara in vivo.

Kontribusi Penulis: Konseptualisasi, HHS dan CA-L .; metodologi, BL-V., PD-R., HHS, dan CA-L .; validasi, BL-V., PD-R., HHS, dan
CA-L; sumber daya, TL, HHS dan CA-L .; menulis — persiapan draf asli, BL-V., menulis — meninjau dan mengedit, PD-R., HHS,
dan CA-L .; pengawasan, HHS dan CA-L. Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan: Penelitian ini didanai oleh MINECO (SAF2017-83118-R), Agencia Estatal de Investigaci. Hai n (AEI) Spanyol, Xunta
de Galicia (ED431C 2016/008), dan FEDER (Spanyol). BL-V. mengakui pelatihan Erasmus + (IS-SM2018-81075).

Ucapan Terima Kasih: Penulis mengucapkan terima kasih kepada M. Vivero-Lopez, A. Lopez-Ulloa, dan A. Varela-Garc saya a untuk
bantuan dengan pengujian HET-CAM dan eksperimen sapi ex vivo.

Konflik Kepentingan: Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi

1. Callegan, M .; Gregory-Ksander, M .; Willcox, M .; Lightman, radang mata S. dan infeksi.

Int. J. In fl amm. 2012, 2012, 2. [ CrossRef ] [ PubMed ] Mata merah. Tersedia online: https://www.nhs.uk/conditions/red-eye/
2. (diakses 28 Agustus 2019). Rodrigues, EB; Farah, ME; Bottos, JM; Bom Aggio, F. Obat anti-inflamasi nonsteroid dalam
3. pengobatan penyakit retinal. Dev. Ophthalmol. 2016, 55, 212–220. [ CrossRef ] [ PubMed ] Ho ff pria, RS; Braga-Mele, R .;
Donaldson, K .; Emerick, G .; Henderson, B .; Kahook, M .; Mamalis, N .; Miller, KM; Realini, T .; Shorstein, NH; dkk. Operasi
4. katarak dan obat antiinflamasi nonsteroid.

J. Refraktasi Katarak. Surg. 2016, 42, 1368–1379. [ CrossRef ] [ PubMed ]

5. Janagam, DR; Wu, L .; Lowe, TL Nanoparticles untuk pengiriman obat ke segmen anterior mata.
Adv. Obat Deliv. Putaran. 2017, 122, 31–64. [ CrossRef ]
6. Egwuagu, CE; Sun, L .; Kim, SH; Dambuza, IM Penyakit radang mata: Patogenesis molekuler dan imunoterapi. Curr. Mol.
Med. 2015, 15, 517–528. [ CrossRef ]
7. Arango Duque, G .; Descoteaux, A. Sitokin makrofag: Keterlibatan dalam kekebalan dan penyakit menular.
Depan. Immunol. 2014, 5, 491. [ CrossRef ]
8. Kessel, L .; Tendal, B .; Jorgensen, KJ; Erngaard, D .; Flesner, P .; Andresen, JL; Hjortdal, J. Pencegahan pasca-katarak dari
peradangan dan edema makula dengan steroid dan obat tetes mata anti-inflamasi nonsteroid: Tinjauan sistematis. Ilmu
Kesehatan Mata 2014, 121, 1915–1924. [ CrossRef ]
9. Miller, K .; Fortun, JA Diabetic macular edema: Pemahaman saat ini, pilihan pengobatan farmakologis, dan terapi
berkembang. Asia Pac. J. Ophthalmol. 2018, 7, 28–35. [ CrossRef ]
10. Comstock, TL; Decory, HH Kemajuan dalam terapi kortikosteroid untuk peradangan mata: Loteprednol etabonate. Int. J.
In fl amm. 2012, 2012, 789623. [ CrossRef ]
11. Rao, R .; Kumar, R .; Sarwal, A .; Sinha, Peradangan Mata VR dan NSAID: Gambaran Umum dengan Inhibitor cox Selektif
dan Non-Selektif. 2016. Tersedia online: https://pdfs.semanticscholar.org/97ac/
e3cb72c3af14ac8c72d0e397cb930b9f0bac.pdf (diakses 28 Agustus 2019).
12. Gaynes, BI; Onyekwuluje, A. OAINS oftalmik topikal: Pembahasan dengan fokus pada suspensi oftalmik nepafenac. Clin.
Ophthalmol. 2008, 2, 355–368. [ CrossRef ]
13. Guo, S .; Patel, S .; Baumrind, B .; Johnson, K .; Levinsohn, D .; Marcus, E .; Tannen, B .; Roy, M .; Bhagat, N .; Zarbin, M.
Pengelolaan edema makula cystoid pseudophakic. Surv. Ophthalmol. 2015, 60, 123–137. [ CrossRef ] [ PubMed ]
Nanomaterials 2020, 10, 709 18 dari 20

14. EMA. Nepafenac. Tersedia online: https://www.ema.europa.eu/en/documents/overview/nevanac-eparsummary-public_en.pdf

(diakses 3 Juni 2019).
15. Paulsamy, M .; Ponnusamy, C .; Palanisami, M .; Nackeeran, G .; Paramasivam, S .; Sugumaran, A .; Kandasamy, R .;
Natesan, S .; Palanichamy, R. Nepafenac dimuat nanopartikel silika tersebar sistem gel in-situ: Pengembangan dan
karakterisasi. Int. J. Biol. Macromol. 2018, 110, 336–345. [ CrossRef ] [ PubMed ]

16. Sahu, S .; Ram, J .; Bansal, R .; Pandav, SS; Gupta, A. E ff Efek ketorolak topikal 0,4%, nepafenac 0,1%, dan bromfenak
0,09% pada peradangan pasca operasi menggunakan laser adalah fotometri pada pasien yang mengalami fakoemulsi fi
kasi. J. Refraktasi Katarak. Surg. 2015, 41, 2043–2048. [ CrossRef ] [ PubMed ]
17. Modi, SS; Lehmann, RP; Walters, TR; Fong, R .; Christie, WC; Roel, L .; Nethery, D .; Sager, D .; Tsorbatzoglou, A .;
Philipson, B .; dkk. Suspensi oftalmik nepafenac sekali sehari 0,3% untuk mencegah dan mengobati peradangan mata
dan nyeri setelah operasi katarak: Studi fase 3. J. Refraktasi Katarak. Surg. 2014,
40, 203–211. [ CrossRef ]
18. Chastain, JE; Sanders, ME; Curtis, MA; Chemuturi, NV; Gadd, ME; Kapin, MA; Markwardt, KL; Dahlin, DC Distribusi
nepafenac okular topikal dan metabolit amfenac aktifnya ke segmen posterior mata. Exp. Res mata. 2016, 145, 58–67. [ CrossRef
] Kawahara, A .; Utsunomiya, T .; Kato, Y .; Takayanagi, Y. Perbandingan e ff Efek larutan mata nepafenac dan diklofenak
19. pada kornea, film air mata, dan permukaan mata setelah operasi katarak: Hasil uji coba secara acak. Clin. Ophthalmol. 2016,
10, 385–391. [ CrossRef ]

20. Kleiter, M .; Malarkey, DE; Ruslander, DE; Thrall, DE Ekspresi siklooksigenase-2 pada tumor hidung epitel taring. Dokter
hewan. Radiol. USG. HAI ff. Selai. Coll. Dokter hewan. Radiol. Int. Dokter hewan. Radiol. Assoc. 2004, 45, 255–260. [ CrossRef
]
21. Kirkby, NS; Chan, MV; Zaiss, AK; Garcia-Vaz, E .; Jiao, J .; Berglund, LM; Verdu, EF; Ahmetaj-Shala, B .; Wallace, JL;
Herschman, HR; dkk. Studi sistematis ekspresi konstitutif siklooksigenase-2: Peran NF- κ Jalur transkripsi B dan NFAT. Proc.
Natl. Acad. Sci. Amerika Serikat 2016, 113, 434–439. [ CrossRef ] Ozcimen, M .; Sakarya, Y .; Goktas, S .; Sakarya, R .; Yener,
22. HI; Bukus, A .; Demir, LS E ff Efek tetes mata nepafenac pada nyeri yang berhubungan dengan operasi pterigium. Lensa
Kontak Mata 2015, 41, 187–189. [ CrossRef ] Kim, SJ Novel mendekati obat retinal dan pengiriman gen. Terjemahan. Vis.
23. Sci. Technol. 2014, 3, 7. [ CrossRef ] Shah, SS; Denham, LV; Elison, JR; Bhattacharjee, PS; Clement, C .; Huq, T .; Hill, JM
24. Pemberian obat ke segmen posterior mata untuk terapi farmakologis. Ahli Rev. Ophthalmol. 2010, 5, 75–93. [ CrossRef ] [ PubMed
]

25. Jiang, S .; Franco, YL; Zhou, Y .; Chen, J. Nanoteknologi dalam pengiriman obat retinal. Int. J. Ophthalmol. 2018, 11,
1038–1044. [ CrossRef ] [ PubMed ]
26. Fu, T .; Yi, J .; Lv, S .; Zhang, B. Pemberian amfoterisin B okuler oleh pembawa lipid berstruktur nano yang dimodifikasi
kitosan untuk terapi target keratitis jamur. J. Liposome Res. 2017, 27, 228–233. [ CrossRef ] [ PubMed ] Alvarez-Trabado, J .;
27. Diebold, Y .; Sanchez, A. Merancang nanopartikel lipid untuk pengiriman obat mata topikal.
Int. J. Pharm. 2017, 532, 204–217. [ CrossRef ] [ PubMed ]
28. Kalam, MA Pengembangan nanopartikel kitosan yang dilapisi dengan asam hialuronat untuk pengiriman deksametason ke
mata secara topikal. Int. J. Biol. Macromol. 2016, 89, 127–136. [ CrossRef ] [ PubMed ]
29. Tahara, K .; Karasawa, K .; Onodera, R .; Takeuchi, H. Kelayakan pemberian obat ke segmen posterior mata dengan
penanaman topikal nanopartikel PLGA. Asian J. Pharm. Sci. 2017, 12, 394–399. [ CrossRef ]
30. Balguri, SP; Adelli, GR; Majumdar, S. Formulasi nanopartikel lipid oftalmik topikal (SLN, NLC) dari indometasin untuk
pengiriman ke jaringan mata segmen posterior. Eur. J. Pharm. Biofarm. 2016, 109,
224–235. [ CrossRef ]
31. Subrizi, A .; Del Amo, EM; Korzhikov-Vlakh, V .; Tennikova, T .; Ruponen, M .; Urtti, A. Prinsip desain sistem pengiriman
obat mata: Pentingnya muatan obat, laju pelepasan, dan sifat material.
Penemuan Obat. Hari ini 2019, 24, 1446–1457. [ CrossRef ]
32. Srinivasarao, DA; Lohiya, G .; Katti, DS Fundamentals, tantangan, dan solusi berbasis nanomedicine untuk penyakit
mata. Wiley Interdiscip. Pdt. Nanomed. Nanobiotechnol.dll 2019, 11, e1548. [ CrossRef ]
33. Weng, Y .; Liu, J .; Jin, S .; Guo, W .; Liang, X .; Hu, Z. Strategi berbasis nanoteknologi untuk pengobatan penyakit mata. Acta
Pharm. Dosa. B 2017, 7, 281–291. [ CrossRef ]
34. Loftsson, T .; Stefansson, E. Cyclodextrins dan pengiriman obat topikal ke segmen anterior dan posterior mata. Int. J.
Pharm. 2017, 531, 413–423. [ CrossRef ] [ PubMed ]
Nanomaterials 2020, 10, 709 19 dari 20

35. Johannsdottir, S .; Jansook, P .; Stefansson, E .; Loftsson, T. Pengembangan formulasi tetes mata siklodekstrin berbasis
air cyclosporin. Int. J. Pharm. 2015, 493, 86–95. [ CrossRef ] [ PubMed ]
36. Johannsdottir, S .; Kristinsson, JK; Fulop, Z .; Asgrimsdottir, G .; Stefansson, E .; Loftsson, T. Formulasi dan studi
toksikologi in vivo dari siklosporin air tetes mata dengan nanopartikel siklodekstrin. Int. J. Pharm.
2017, 529, 486–490. [ CrossRef ] [ PubMed ] Cyclolab. Tersedia online: https://cyclolab.hu/userfile / CD%
37. 20NEWS2018January_.pdf (diakses 11 Juni 2019).

38. Tsai, CH; Wang, PY; Lin, IC; Huang, H .; Liu, GS; Tseng, CL Pemberian obat mata: Peran nanocarrier polimerik
terdegradasi untuk aplikasi mata. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 2830. [ CrossRef ] [ PubMed ] Ludwig, A. Penggunaan polimer
39. mukoadhesif dalam pengiriman obat mata. Adv. Obat Deliv. Putaran. 2005, 57,
1595–1639. [ CrossRef ]
40. Khare, A .; Grove, K .; Pawar, P .; Singh, I. polimer mukoadhesif untuk meningkatkan retensi dalam pengiriman obat
mata. Di Kemajuan dalam Adhesi dan Perekat; Wiley-Scrivener: Beverly, MA, AS, 2015; Volume 13, hlm. 451–484. [ CrossRef
]
41. Lorenzo-Veiga, B .; Sigurdsson, HH; Loftsson, T.Nepafenac-loaded siklodekstrin / nanoagregat polimer: Sebuah
pendekatan baru untuk formulasi tetes mata. Bahan 2019, 12, 229. [ CrossRef ]
42. Akhter, S .; Anwar, M .; Siddiqui, MA; Ahmad, I .; Ahmad, J .; Ahmad, MZ; Bhatnagar, A .; Ahmad, FJ Meningkatkan
farmakokinetik mata topikal dari agen imunosupresan dengan nanoemulsi mukoadhesif: Pengembangan formulasi,
studi in-vitro dan in-vivo. Surfing Koloid. B Biointerfaces 2016,
148, 19–29. [ CrossRef ]
43. Campana-Seoane, M .; Peleteiro, A .; Laguna, R .; Otero-Espinar, FJ Emulsi bioadhesif untuk mengontrol pelepasan
progesteron yang resisten terhadap pembersihan cairan vagina. Int. J. Pharm. 2014, 477, 495–505. [ CrossRef ]
44. Alvarez-Rivera, F .; Fernandez-Villanueva, D .; Concheiro, A .; Alvarez-Lorenzo, C. Asam alfa-lipoat dalam nanomicelles
polimerik soluplus ((r)) untuk pengobatan mata penyakit kornea terkait diabetes.
J. Pharm. Sci. 2016, 105, 2855–2863. [ CrossRef ]
45. Fernandez-Ferreiro, A .; Santiago-Varela, M .; Gil-Martinez, M .; Parada, TG; Pardo, M .; Gonzalez-Barcia, M .; Piñeiro-Ces,
A .; Rodr saya guez-Ares, MT; Blanco-Mendez, J .; Lama, MJ; dkk. Perbandingan keamanan mata dari tetes mata
antiinflamasi nonsteroid yang digunakan dalam pencegahan edema makula sistoid pseudofak.
Int. J. Pharm. 2015, 495, 680–691. [ CrossRef ]
46. Chanput, W .; Mes, JJ; Wichers, garis sel HJ THP-1: Model sel in vitro untuk pendekatan modulasi kekebalan.
Int. Immunopharmacol. 2014, 23, 37–45. [ CrossRef ] [ PubMed ] Hirlekar, RS; Sonawane, SN; Kadam, VJ Studies on the e ff Efek
47. polimer yang larut dalam air pada kelarutan kompleks obat-siklodekstrin. AAPS Pharmscitech. 2009, 10, 858–863. [ CrossRef
] [ PubMed ] Patel, AR; Vavia, PR E ff Pengaruh polimer hidrofilik pada pelarutan fenofat dengan kompleksasi siklodekstrin.
48. J. Incl. Phenom. Macrocycl. Chem. 2006, 56, 247–251. [ CrossRef ] Nepafenac. Tersedia online: https://www.drugbank.ca/drugs/DB06802
(diakses 28 Agustus 2019). Saldias, C .; Velasquez, L .; Quezada, C .; Leiva, A. Penilaian fisikokimia dari dextran-g-poly
49. (varepsilon-caprolactone) micellar nanoaggregates sebagai nanocarrier obat. Karbohidrat Polym. 2015, 117,
50.

458–467. [ CrossRef ] [ PubMed ]

51. Shelley, H .; Rodriguez-Galarza, RM; Duran, SH; Abarca, EM; Babu, formulasi gel RJ In situ untuk meningkatkan
pengiriman mata dari nepafenac. J. Pharm. Sci. 2018, 107, 3089–3097. [ CrossRef ]
52. Jansook, P .; Muankaew, C .; Stefansson, E .; Loftsson, T. Perkembangan obat tetes mata yang mengandung obat
antihipertensi: Formulasi tetes mata encer irbesartan / gammaCD. Pharm. Dev. Technol. 2015, 20, 626–632. [ CrossRef ]

53. Irimia, T .; Ghica, MV; Popa, L .; Anu¸ţa, V .; Arsene, AL; Dinu-Pîrvu, Strategi CE untuk meningkatkan ketersediaan hayati
obat mata dan penyembuhan luka kornea dengan sistem pengiriman berbasis kitosan. Polym (Basel) 2018,
10, 1221. [ CrossRef ]
54. Greaves, JL; Wilson, CG Pengobatan penyakit mata dengan sistem pengiriman mukoadesif. Adv. Obat Deliv. Putaran. 1993,
11, 349–383. [ CrossRef ]
55. Ivarsson, D .; Wahlgren, M. Perbandingan metode in vitro untuk mengukur mukoadhesion: Ellipsometri, kekuatan tarik
dan pengukuran reologi. Surfing Koloid. B Biointerfaces 2012, 92, 353–359. [ CrossRef ]
Nanomaterials 2020, 10, 709 20 dari 20

56. Almeida, H .; Lob Sebuah o, P .; Frigerio, C .; Fonseca, J .; Silva, R .; Quaresma, P .; Lobo, JMS; Amaral, MH Pengembangan
tetes mata mukoadhesif dan termosensitif untuk meningkatkan bioavailabilitas oftalmik ibuprofen. J. Drug Deliv. Sci.
Technol. 2016, 35, 69–80. [ CrossRef ]
57. Brako, F .; Thorogate, R .; Mahalingam, S .; Raimi-Abraham, B .; Craig, DQM; Edirisinghe, M. Mucoadhesion konstruksi
nano serat pengiriman obat progesteron-loaded. ACS Appl. Mater. Antarmuka 2018, 10, 13381–13389. [ CrossRef ] [ PubMed
]
58. Lee, JH; Ahn, HS; Kim, EK; Kim, TI E ffi khasiat natrium hyaluronate dan karboksimetilselulosa dalam mengobati penyakit
mata kering ringan sampai sedang. Kornea 2011, 30, 175–179. [ CrossRef ] [ PubMed ]
59. Mayol, L .; Quaglia, F .; Borzacchiello, A .; Ambrosio, L .; La Rotonda, MI Sebuah poloksamer baru / asam hialuronat in
situ yang membentuk hidrogel untuk pemberian obat: Sifat pelepasan reologis, mukoadesif, dan in vitro. Eur. J. Pharm.
Biofarm. 2008, 70, 199–206. [ CrossRef ] [ PubMed ]
60. Masak, SL; Woods, S .; Methven, L .; Parker, JK; Khutoryanskiy, VV Polisakarida mukoadhesif memodulasi retensi
natrium, pelepasan dan persepsi rasa. Kimia Makanan. 2018, 240, 482–489. [ CrossRef ] [ PubMed ] McKenzie, B .; Kay, G .;
61. Matthews, KH; Knott, RM; Cairns, D. Tes membran korioalantois telur ayam (HET-CAM) untuk memprediksi potensi
iritasi mata dari gel yang mengandung sistein: Kuantifikasi menggunakan Photoshop (R) dan ImageJ. Int. J. Pharm. 2015, 490,
1–8. [ CrossRef ] [ PubMed ]
62. Yun, JW; Hailian, Q .; Na, Y .; Kang, BC; Yoon, JH; Cho, EY; Lee, M .; Kim, D .; Bae, S .; Seok, SH; dkk. Eksplorasi dan
perbandingan uji iritasi mata in vitro dengan uji kelinci in vivo standar ISO untuk evaluasi iritasi mata lensa kontak. Toksikol.
Vitr. 2016, 37, 79–87. [ CrossRef ]
63. Hayashi, K .; Mori, T .; Abo, T .; Koike, M .; Takahashi, Y .; Sakaguchi, H .; Nishiyama, N. Pendekatan berjenjang yang
menggabungkan uji paparan waktu singkat (STE) dan uji opasitas dan permeabilitas kornea sapi (BCOP) untuk
memprediksi potensi bahan kimia iritasi mata. J. Toxicol. Sci. 2012, 37, 269–280. [ CrossRef ]
64. Scheel, J .; Kleber, M .; Kreutz, J .; Lehringer, E .; Mehling, A .; Reisinger, K .; Steiling, W. Potensi iritasi mata: Kegunaan
HET-CAM di bawah sistem klasifikasi dan pelabelan bahan kimia (GHS) yang diselaraskan secara global. Regul. Toksikol.
Pharmacol. RTP 2011, 59, 471–492. [ CrossRef ]
65. Yu, S .; Bau.; Liu, D .; Yang, X .; Pan, W. Hidrogel baru berbasis Nanostructured lipid carrier (NLC) sebagai pembawa
potensial untuk nepafenac diterapkan setelah operasi katarak untuk pengobatan peradangan: Desain, karakterisasi dan
penghambatan sel in vitro dan studi pengambilan. RSCAdv. 2017, 7, 16668–16677. [ CrossRef ] Aktaş¸, Y .; Ünlü, N .; Orhan,
66. M .; İ˙rkeç, M .; Atilla Hıncal, A. Pengaruh Hidroksipropil β- Siklodekstrin pada Permeasi Kornea dari Pilocarpine. Dev Obat.
Ind. Pharm. 2003, 29, 223–230. [ CrossRef ] Loch, C .; Zakelj, S .; Kristl, A .; Nagel, S .; Gutho ff, R .; Weitschies, W .; Seidlitz, A.
67. Penentuan permeabilitas coe ffi klien obat mata melalui di ff beberapa lapisan mata babi, kelinci dan sapi. Eur. J. Pharm.
Sci.
2012, 47, 131–138. [ CrossRef ] [ PubMed ]
68. Amparo, F .; Dastjerdi, MH; Okanobo, A .; Ferrari, G .; Smaga, L .; Hamrah, P .; Jurkunas, U .; Schaumberg, DA; Dana, R.
Antagonis reseptor interleukin 1 topikal untuk pengobatan penyakit mata kering: Sebuah uji klinis acak. JAMA
Ophthalmol. 2013, 131, 715–723. [ CrossRef ] [ PubMed ] Ghasemi, H. Peran IL-6 dalam Peradangan Mata: Review A. Ocul.
69. Immunol. Radang. 2018, 26, 37–50. [ CrossRef ] [ PubMed ]

70. Doucette, LP; Walter, MA Prostaglandin di mata: Fungsi, ekspresi, dan peran dalam glaukoma.
Genet Mata 2017, 38, 108–116. [ CrossRef ] [ PubMed ]
71. Kern, TS; Miller, CM; Du, Y .; Zheng, L .; Mohr, S .; Bola, SL; Kim, M .; Jamison, JA; Bingaman, Pemberian Topikal DP dari
Nepafenac Menghambat Penyakit Mikrovaskuler Retina yang Diinduksi Diabetes dan Kelainan yang Mendasari
Metabolisme dan Fisiologi Retina. Diabetes 2007, 56, 373. [ CrossRef ] Calles, JA; L Hai pez-Garc saya A A.; Vall é s, EM; Palma,
72. SD; Diebold, Y. Karakterisasi awal film asam hialuronat cross-linked deksametason untuk terapi mata topikal. Int. J.
Pharm. 2016, 509,
237–243. [ CrossRef ]

© 2020 oleh penulis. Pemegang Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses terbuka
yang didistribusikan di bawah syarat dan ketentuan lisensi Creative Commons Attribution (CC BY)
(http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).