LAPORAN PRAKTIKUM ABA – ABO

ANALISIS KUANITATIF PROTEIN METODE KJEDAHL

KELOMPOK 5
ABA-ABO KIMIA

ABA-ABO LABORATORIUM

Syafitri K.Arief, S.Pd.M.T

Maitsa Luthfiyyah Durrotunnisa (101816954)

Meliza Tri Lizarta (101816960)
Muhammad Hartsa Adnan (101616991)
Muzhaffar Ghani Taufikkurrahman (101817006)

XII AK 5
 I. Tanggal praktikum : Kamis, 25 Maret 2021

II. Tanggal laporan : Kamis, 1 April 2021

III. Tujuan praktikum

Penentukan kadar protein dalam sampel menggunakan metode Makro Kjedahl

IV. Prinsip percobaan

Sejumlah tertentu sampel, didekstruksi dengan H2SO4 pekat dan katalis garam Kjeldahl,
lalu didestilasi dengan penambahan NaOH pekat dan logam Zn, NH3 yang terbentuk
direaksikan dengan larutan HCl standar berlebih dan terukur. Kelebihan HCl dititrasi
dengan larutan NaOH standar terhadap indikator metil merah hingga TA ( jingga merah).
Pada TE, mek N = mek HCl – mek NaOH

VI. Persamaan reaksi

VII. Dasar teori

Metode Kjeldahl merupakan metode yang digunakan untuk menentukan kadar nitrogen
dalam senyawa organik maupun senyawa anorganik. Metode ini telah mengalami
perubahan secara teknis dan pada peralatannya selama lebih dari 100 tahun sejak
diperkenalkan, namun secara mendasar, prinsip yang digunakan tetaplah sama. Metode
Kjeldahl dapat dibagi menjadi tiga tahap utama, yakni:
a. Digesi (Digestion)
Tahap digesi merupakan tahap dekomposisi nitrogen dalam sampel menggunakan asam
pekat. Tahap ini disempurnakan dengan mendidihkan sampel pada asam sulfat pekat.
Hasil akhir digesi merupakan larutan amonium sulfat.
b. Distilasi (Distillation)
Merupakan tahap penambahan basa berlebih ke dalam larutan digesi untuk mengubah
NH4+ menjadi NH3 yang diikuti pemanasan dan kondensasi gas NH3 pada larutan
penerima. Campuran digesi selanjutnya diencerkan dan dibasakan melalui penambahan
NaOH. Proses distilasi ini menghasilkan NH3.

Labu Kjeldahl ditempatkan pada kondensor air dan dipanaskan untuk menguapkan gas
NH3 dari larutan. Ujung kondensor yang dihubungkan dengan labu yang berisi larutan
penerima yang berupa asam, baik berupa asam standar maupun asam borat. Parlakuan ini
dilakukan untuk menangkap NH3 yang teruapkan.

c. Titrasi (Titration)
Tahap ini bertujuan untuk mengetahui jumlah amoniak dalam larutan penerima. Jumlah
nitrogen dapat dihitung dari jumlah ion amonia di dalam larutan penerima tersebut.

Terdapat dua macam titrasi yang digunakan pada proses Kjeldahl, yakni titrasi balik yang
biasanya digunakan pada Kjeldahl Makro dan titrasi langsung. Kedua metode tersebut
mengindikasikan keberadaan amonia dalam air distilat dengan menunjukkan perubahan
warna dan memungkinkan dilakukannya perhitungan konsentrasi.

Perhitungan kadar nitrogen harus disesuaikan dengan larutan penerima yang digunakan
dan faktor pengenceran selama proses distilasi. Pada persamaan di bawah, “N”
menunjukkan normalitas. “ml blank„ adalah mililiter yang diperlukan untuk titrasi balik
reagen blank jika yang digunakan adalah asam standar, atau menunjukkan mililiter asam
standar yang dibutuhkan untuk mentitrasi larutan penerima. Ketika asam standar
digunakan sebagai larutan penerima, persamaan yang digunakan adalah:

Jika berat sampel berupa miligram, berat molekul nitrogen harus diubah menjadi
1400,67. Ketika asam borat digunakan sebagai larutan penerima, maka persamaan yang
digunakan adalah:
 Keunikan, ketepatan dan kemampuan reproduktifitas metode Kjeldahl menjadikannya
metode yang diakui secara internasional untuk memperkirakan kandungan protein dalam
makanan dan ini adalah metode standar yang dengannya semua metode lainnya dinilai.
Hal ini juga digunakan untuk menguji tanah, air limbah, pupuk dan bahan lainnya.
Namun, hal itu tidak memberi ukuran kandungan protein yang benar, karena ia mengukur
nitrogen nonprotein selain nitrogen dalam protein. Hal ini dibuktikan dengan insiden
makanan hewan peliharaan 2007 dan skandal susu Tiongkok tahun 2008, ketika melamin,
bahan kimia kaya nitrogen, ditambahkan Untuk bahan baku untuk memalsukan
kandungan protein tinggi. Juga, faktor koreksi yang berbeda diperlukan untuk protein
yang berbeda untuk memperhitungkan urutan asam amino yang berbeda. Kelemahan
tambahan, seperti kebutuhan untuk menggunakan asam sulfat pekat pada suhu tinggi dan
waktu pengujian yang relatif lama (satu jam atau lebih), tidak sesuai dengan metode
Dumas untuk mengukur kandungan protein kasar.

Metode Kjeldahl tidak berlaku untuk senyawa yang mengandung nitrogen

pada nitro serta gugus azo dan nitrogen yang terdapat dalam cincin (misalnya piridin,
kuinolin, isokuniolin]) karena nitrogen dari senyawa ini tidak berubah menjadi amonium
sulfat dengan kondisi metode ini.

VIII. Alat dan Bahan

Alat :
Bahan :
 Botol timbang
 Sampel bahan makanan (biskuit)
 Labu kejdahl 100 ml
 H2SO4 pekat
 Gelas ukur 25 ml, 100 ml
 Garam kjedahl (CuSO4 + K2SO4)
 Corong pendek
 NaOH 50% ( ⁄
 Gelas kimia 600 ml
 Logam Zn
 Kondensor
 HCl standar ± 0,1 N
 Adaptor
 NaOH standar ± 0,1 N
 Selang
 Indikator metil merah
 Labu didih 500 ml
 Still head
 Kaki tiga
 Kassa asbes
 Batang engaduk
 Magnetic stirrer
 Buret
  Klem
 Statif
 Botol semprot
 Pipet tetes

IX. Langkah Kerja

1. Ditimbang 1gram sampel yang telah dihaluskan, lalu dimasukkan ke dalam labu
kjedahl
2. Ditambahkan 10gram garam kjedahl dan 15 ml H2SO4 pekat, lalu dipanaskan
dengan api kecil dalam ruang asam hingga berhenti berasap, diteruskan
pemanasan dengan menggunakan api besar sampai mendidih dan cairan menjadi
jernih
3. Dilakukan pemanasakn tambah selama ± 1 jam, lalu setelah itu dimatikan api
pemanasan dan dibiarkan bahan menjadi dingin
4. Ditambahkan 100 ml aquadest ke dalam labu kjedahl berisi bahan yang sudah
didinginkan
5. Dirangkai alat destilasi
6. Dipindahkan larutan ke dalam labu destilasi dan diencerkan hinggal ½ bagian
labu, lalu ditambahkan 3-5 logam Zn, kemudian dipasangkan pada rangkaian alat
destilasi
7. Ditambahakan 50 ml larutan NaOH 50% ⁄ (memalui still head, lalu diutup
kembali), lalu dimulai pemanasan
8. Ditampung detilat dalam gelas kimia berisi 50 ml larutan HCl standar ± 0,1 N dan
3-5 tetes indicator metil merah. Dilakukan destilasi hingga semua NH3
tertampung dalam larutan HCl standar
9. Dititrasi sisa HCl dengan larutan NaOH standar ± 0,1 N hingga TA (jingga
merah)
10. Dihitung kadar nitrogen dalam sampel
X. Data Pengamatan

 Preparasi Sampel

Gambar Keterangan

Dihaluskan sampel biscuit, lalu di bagi

menjadi empat bagian seperti pada
gambar

Diambil sampel biscuit secara horizontal

(gambar ke dua), lalu diaduk rata

Ditimbang sampel sebanyak 1 gram,

menggunakan kertas timbang
 Proses Dektruksi

Gambar Keterangan

Sampel dipindahkan ke selongsong, lalu

selongsong di masukan ke dasar labu
kjedahl, lalu dituangkan sampel biskuit

Labu Kjedahl

Ditimbang garam kjedahl sebanyak 10

gram, lalu di masukan kedalam labu
kjedahl menggunkan selongsong

Dipasangkan labu kjedahl kepada alat

heating mantle dipipet 15 ml larutan
H2SO4 pekat, dimasukan kedalam labu
kjedahl yang berisi sampel dan garam
kjedahl
 Dipastikan dasar dari labu kjedahl
menempel semua pada dasar heating
mantle, setelah itu dinyalakan alat atur
suhu sampai 400oC, tunggu samapi
proses dekstruksi sempurna

Setelah selesai, akan terbentuk carbon

carbon pada dinding labu, maka lakukan
proses pemijaran untuk menghilangkan
carbon yang terbentuk

 Tahapan destilasi

Gambar Keterangan

Tambahkan 100 ml aquadest ke dalam labu

kjedahl berisi sampel, larutkan
Rangkai alat destilasi

Pindahkan larutan ke dalam labu destilasi

dan encerkan hingga ½ bagian labu, lalu
tambahkan 3-5 butir logam Zn

Tambahkan 50 ml larutan NaOH 50% w/w

(melalu still head, lalu tutup kembali)
Mulai pemanasan dengan suhu yang
diinginkan

Tampung dengan destilat dalam gelas kimia

berisi 50 ml larutan HCl standar 0,1 N,
lalukan destilasi hingga semua NH3
tertampung dalam larutan HCl standar.

Lakukan Tes, masih tersisa atau tidak NH3

dalam proses destilasi tersebut dengan
menggunakan lakmus merah

Note :
- jika masih terdapat NH3 maka kertas
lakmus merah menjadi biru
- jika tidak terdapat NH3 maka kertas
lakmus tidak akan berubah warna
 Tahapan Titrasi
Gambar Keterangan

Titrasi sisa HCl dengan NaOH standar

0,1 N hingga TA (Jingga merah)

Hitung kadar nitrogen dalam sampel

 Perhitungan

mek N = ( V × N )HCl × ( V × N)NaOH

= ( 50 ml × 0.1309 N ) × ( 24,00 ml × 0,1000 N)

= 6.545 mek × 2.4 mek

= 4.145 mek

mg N = mek N × BE N

= 4.145 mek × 14

= 58.03 mg
 %N = × 100%

= × 100%

= 5.63%

% Protein = %N × Faktor konversi Nitrogen

= 5.63% × 6.25

= 35.19%

XI. Pembahasan :
1. Penentuan protein metode kjeldahl terdiri dari tiga tahapan yang terdiri dari destruksi,
destilasi dan titrasi.
2. Sampel yang digunakan dalam praktikum kali ini adalah sampel biskuit.
3. Labu yang digunakan untuk mendestruksi harus memiliki leher yang panjang sehingga
mencegah terjadinya kehilangan bahan dan letupan yang kuat karena pada saat
mendestruksi sampel menggunakan asam kuat, maka digunakanlah labu kjeldahl.
4. Saat ingin menggunakan labu kjeldahl pastikan labu dalam keadaan kering, dan bisa
dikeringkan menggunakan hairdryer.
5. Saat setelah mencuci alat destilasi, keringkan alat menggunakan alkohol 96% supaya
cepat kering, karena alkohol (ethanol) dapat menyerap air dan merupakan senyawa volatil
atau mudah menguap.
6. Penimbangan dilakukan dengan cara penimbangan selisih agar zat yang ditimbang saat
dipindahkan ke dalam tabung destruksi dalam keadaan kering.
7. Gunakan kertas timbang berukuran panjang pada saat memasukan sampel ke dalam
tabung destruksi, tujuannya agar zat terpindahkan seluruhnya ke dasar labu destruksi
tanpa ada yang menempel pada dindingnya.
8. Garam kjeldahl berfungsi untuk menaikan titik didih asam sulfat sehingga proses reaksi
saat destruksi berlangsung dengan cepat.
9. Pembuatan Garam Kjeldahl dapat dilakukan dengan 2 cara. Yang pertama dicampurkan
langsung antara CuSO4 dan K2SO4 (9:1) apabila kebutuhannya hanya untuk satu kali saja.
 Yang kedua digerus sampai homogen antara CuSO dan K2SO4 (9:1) menggunakan
mortar dan alu, apabila jumlah kebutuhannya banyak.
10. Pada tahap destruksi sampel (biskuit) dipanaskan dengan asam sulfat pekat sehingga
terjadi proses destruksi, dimana nitrogen akan berubah menjadi amonium sulfat
((NH4)2SO4).
11. Garam kjeldahl berfungsi untuk menaikan titik didih asam sulfat sehingga proses reaksi
saat destruksi berlangsung dengan cepat.
12. Jangan lupa menggunakan sarung tangan karet dan masker saat ingin memipet asam
sulfat pekat, karena asam sulfat pekat bersifat korosif dan menghindari terhirupnya uap
berbahaya.
13. Proses destruksi dilakukan di dalam ruang asam karena khawatir terhirupnya uap
berbahaya yang keluar.
14. Ruang asam harus ditutup pada saat destruksi agar asap dari hasil destruksi terbawa
seluruhnya oleh blower.
15. Sampel didestruksi menggunakan H2SO4 pekat dengan tujuan agar senyawa organik
seperti C, H, O dalam sampel dapat teroksidasi menjadi CO2, H2O, O2 tanpa diikuti
oksidasi nitrogen menjadi N2. Unsur nitrogen tersebut terikat dengan asam sulfat sebagai
amonium sulfat ((NH4)2SO4).
16. Pada saat mendestruksi suhu panas harus dari paling minimum, apabila langsung
menggunakan suhu tinggi dikhawatirkan uap/buih yang keluar dari labu destruksi terlalu
cepat dan akan membawa zat yang sedang didestruksi. Oleh karena itu digunakan heating
mantle.
17. Warna kehitaman yang terbentuk pada saat proses destruksi dalam labu kjeldahl
dihasilkan dari pemanasan yang tidak sempurna meninggalkan karbon yang berwarna
hitam di dinding labu.
18. Cara menghilangkan karbon yang ada bisa dengan menggunakan api pemijaran.
19. Hasil destruksi ditandai dengan larutan sampel berwarna jernih atau jernih kebiruan.
20. Saat setelah di destruksi encerkan sampel terlebih dahulu hasil destruksi dengan aquadest,
ini dilakukan untuk mengurangi kehebatan reaksi langsung antara sampel hasil destruksi
dengan NaOH.
21. Larutan dijadikan basa dengan menambahkan NaOH 50%, tujuan dari penambahan
natrium hidroksida untuk memecah senyawa amonium sulfat menjadi ammonia (NH3).
22. Pengukuran larutan pekat harus menggunakan sarung tangan lateks atau karet agar tidak
mengenai tangan, contohnya NaOH 50% dan H2SO4 pekat.
23. Saat memasukan larutan NaOH 50% kedalam labu destilasi menggunakan corong
panjang karena dikhawatirkan akan masuk ke dalam kondensor dan mengalir kedalam
penampung yang mana akan menyebabkan hasil analisa tidak akurat karena bereaksi
dengan HCl dalam penampung.
24. Logam Zn berfungsi sebagai katalis reaksi, supaya reaksi berjalan lebih cepat.
25. Hasil dari destilasi (destilat) ditampung dalam gelas kimia/erlemeyer berisi asam HCl
standar yang terukur.
26. Pengukuran HCl menggunakan pipet sukuran 50 mL karena harus terukur dan masuk
dalam perhitungan yang membutuhkan keakuratan yang tinggi, tidak boleh menggunakan
gelas ukur karena pengukuran menggunakan gelas ukur memiliki keakuratan yang kurang
dibandingkan dengan pipet seukuran 50 mL
27. Pastikan ujung corong destilasi (tempat destilat keluar) tercelup sedalam mungkin dalam
gelas kimia atau erlemeyer penampung berisi asam klorida, agar kontak antara asam
klorida dengan ammonia lebih baik.
28. Tekanan pada saat destilasi tidak boleh kurang (ditandai dengan naik turunnya larutan
HCl pada penampung) dikhawatirkan larutan pada penampung akan terpindahkan ke labu
destilasi dan akan menganggu proses analisa.
29. Proses destilasi dikatakan telah selesai jika NH3 telah terdesilasi sempurna
30. Cara untuk mengecek kesempurnaan destilasi ialah dengan cara mendekatkan lakmus
merah diatas uap yang berasal dari labu destilasi dengan ujung batang pengaduk, jika
lakmus masih berubah menjadi biru saat didekatkan uap, artinya destilasi masih belum
sempurna dan masih bersifat basa atau masih terdapat NH3 dalam labu, proses destilasi
selesai dengan ditandai oleh lakmus merah yang tidak berubah warna.
31. Hasil destilasi ditampung dalam erlemeyer berisi asam klorida yang ditambahkan
indikator metil merah. Fungsi indikator adalah untuk mengetahui kapan reaksi akan
terjadi setelah mencapai titik akhir titrasi. kemudian dititrasi dengan larutan natium
hidroksida 0,1 N yang telah distandarisasi
 32. Penggunaan NaOH sebagai peniter bertujuan untuk mencari sisa asam klorida yang tidak
bereaksi dengan ammonia .Akhir titrasi ditandai dengan perubahan warna larutan dari
merah muda menjadi jingga kekuningan.
33. Saat memasukan NaOH ke dalam buret sebaiknya dilakukan menjalang titrasi, bila
dilakukan lebih awal dan dibiarkan terlalu lama dikhawatirkan NaOH akan menguap
yang akan menyebabkan perubahan konsentrasi NaOH.
34. Mek Nitrogen didapat dari mek HCl total – mek NaOH
35. Titrasi yang terjadi termasuk jenis titrasi tidak langsung/titrasi kembali/ Indirect titration,
karena senyawa uji yaitu NH3 direaksikan terlebih dahulu dengan HCl standar terukur,
kemudian sisa HCl dititrasi dengan NaOH standar.

XII. Kesimpulan

Telah tercapai tujuan dari praktikum kali ini yaitu dapat melakukan analisa Penetapan Kadar
(%) Protein Metode Makro Kjeldahl terhadap sampel uji (biskuit). Dapat disimpulkan :

 Didapat % Nitrogen dalam sampel sebesar 5,63%

 Didapat % Protein dalam sampel sebesar 35,19%

XIII. Daftar Pustaka

 Widiastuti Harti, M. Kisan Chakrawaty. 2014. Analisis Kadar Protein Pada Ulat
Sagu Asal Kabupaten Halmahera Timur Maluku Utara Dengan Metode Kjeldahl.
 http://jurnal.farmasi.umi.ac.id diakses tanggal 27 Maret 2021
 Genecraftlabs.2019.Metode Penentuan Kadar Nitrogen: Metode Kjeldahl
https://genecraftlabs.com/id/metode-penentuan-kadar-nitrogen-metode-
kjeldahl/amp/ (diakses tanggal 29 maret 2021)
 Anonim.2019.Metode Kjedahl. Tersedia di
https://id.m.wikipedia.org/wiki/Metode_Kjeldahl (30 maret 2021)