 Uji Fitokimia

Karakterisasi kualitatif dan kuantitatif bahan aktif harus diuji menggunakan biomarker.
Mendefinisikan biomarker harus sangat spesifik dan banyak wawasan harus masuk ke dalamnya
sebelum mendeklarasikan molekul yang berbeda. Selain itu campuran harus dianalisis untuk
mengembangkan profil sidik jari.

Skrining Pra Fitokimia: Pemeriksaan fitokimia dilakukan untuk semua ekstrak sesuai dengan metode
standar.
1. Deteksi alkaloid: Ekstrak dilarutkan satu per satu dalam asam klorida encer dan disaring.
- Tes Mayer: Filtrat diperlakukan dengan reagen Mayer (Potassium Mercuri Iodide).
Terbentuknya endapan berwarna kuning menunjukkan adanya alkaloid.
- Tes Wagner: Filtrat diperlakukan dengan reagen Wagner (Yodium dalam Potassium Iodide).
Terbentuknya endapan coklat/kemerahan menunjukkan adanya alkaloid.
- Tes Dragendroff: Filtrat direaksikan dengan pereaksi Dragendroff (larutan Kalium Bismut
Iodida). Terbentuknya endapan merah menunjukkan adanya alkaloid.
- Tes Hager: Filtrat diperlakukan dengan reagen Hager (larutan asam pikrat jenuh). Adanya
alkaloid dikonfirmasi dengan terbentuknya endapan berwarna kuning.

2. Deteksi karbohidrat: Ekstrak dilarutkan satu per satu dalam 5 ml air suling dan disaring. Filtrat
digunakan untuk menguji adanya karbohidrat.
- Tes Molisch: Filtrat diperlakukan dengan 2 tetes larutan alkohol-naftol dalam tabung reaksi.
Terbentuknya cincin ungu pada junction menunjukkan adanya Karbohidrat.
- Tes Benediktus: Filtrat diperlakukan dengan reagen Benedict dan dipanaskan dengan
lembut. Endapan merah jingga menunjukkan adanya gula pereduksi.
- Uji Fehling: Filtrat dihidrolisis dengan dil. HCl, dinetralkan dengan alkali dan dipanaskan
dengan larutan Fehling A & B. Terbentuknya endapan merah menunjukkan adanya gula pereduksi.

3. Deteksi glikosida: Ekstrak dihidrolisis dengan dil. HCl, dan kemudian diuji untuk glikosida.
- Uji Borntrager yang Dimodifikasi: Ekstrak diperlakukan dengan larutan Ferric Chloride dan
direndam dalam air mendidih selama sekitar 5 menit. Campuran didinginkan dan diekstraksi dengan
volume yang sama dari benzena. Lapisan benzena dipisahkan dan diolah dengan larutan amonia.
Terbentuknya warna merah jambu pada lapisan amoniak menunjukkan adanya glikosida antranol.

4. Uji Hukum: Ekstrak diperlakukan dengan natrium nitroprusside dalam piridin dan natrium
hidroksida. Terbentuknya warna pink hingga merah darah menunjukkan adanya glikosida jantung

5. Deteksi saponin
- Uji buih: Ekstrak diencerkan dengan air suling hingga 20ml dan dikocok dalam gelas ukur
selama 15 menit. Terbentuknya lapisan buih 1 cm menunjukkan adanya saponin.
- Uji Busa: 0,5 gram ekstrak dikocok dengan 2 ml air. Jika buih yang dihasilkan bertahan
selama sepuluh menit menunjukkan adanya saponin.

6. Deteksi pitosterol
- Tes Salkowski: Ekstrak diperlakukan dengan kloroform
dan disaring. Filtrat diperlakukan dengan beberapa tetes Conc. Asam sulfat, dikocok dan
didiamkan. Munculnya warna kuning keemasan menunjukkan adanya triterpen.
- Tes Liebermann Burchard: Ekstrak diperlakukan dengan kloroform dan disaring. Filtrat
diperlakukan dengan beberapa tetes anhidrida asetat, direbus dan didinginkan. konsentrasi Asam
sulfat ditambahkan. Terbentuknya cincin coklat pada junction menunjukkan adanya fitosterol

7. Deteksi fenol
- Uji Ferri Klorida: Ekstrak diperlakukan dengan 3-4
tetes larutan besi klorida. Terbentuknya warna hitam kebiruan menunjukkan adanya fenol

8. Deteksi tanin
- Tes Gelatin: Ekstrak ditambahkan larutan gelatin 1%
yang mengandung natrium klorida. Terbentuknya endapan putih menunjukkan adanya
tanin.

9. Deteksi flavonoid
- Uji Reagen Alkaline: Ekstrak diperlakukan dengan beberapa
tetes larutan natrium hidroksida. Terbentuknya warna kuning pekat yang menjadi tidak
berwarna pada penambahan asam encer menunjukkan adanya flavonoid.
- Uji timbal asetat: Ekstrak diperlakukan dengan beberapa tetes dari larutan timbal asetat.
Terbentuknya endapan warna kuning menunjukkan adanya Flavonoid.

10. Deteksi protein dan asam amino

- Uji Xanthoproteic: Ekstrak diperlakukan dengan beberapa
tetes conc. Asam sendawa. Terbentuknya warna kuning menunjukkan adanya protein.
- Uji Ninhidrin: Ekstrak ditambahkan 0,25% b/v reagen
Ninhidrin dan dididihkan selama beberapa menit. Terbentuknya warna biru menunjukkan
adanya asam amino.

11. Deteksi diterpen

- Uji asetat tembaga: Ekstrak dilarutkan dalam air dan
diperlakukan dengan 3-4 tetes larutan tembaga asetat. Terbentuknya warna hijau zamrud
menunjukkan adanya diterpen

Kesimpulan
Metode kimia, metode instrumental dan analisis kromatografi lapis dapat menentukan kualitas
bahan tanaman yang tepat. Prosedur ekstraksi yang tidak standar dapat menyebabkan degradasi
fitokimia yang ada dalam tanaman dan dapat menyebabkan variasi sehingga menyebabkan
kurangnya reproduktifitas. Upaya harus dilakukan untuk menghasilkan batch dengan kualitas
sekonsisten mungkin dan untuk mengembangkan serta mengikuti proses ekstraksi terbaik.