Naskah yang Diterima

Karakterisasi kimia dan fungsional dari biji, pulp dan bubuk kulit dari
chilto (Solanum betaceum), buah asli Argentina. Fraksi fenolik
mempengaruhi
enzim kunci yang terlibat dalam sindrom metabolik dan stres oksidatif

María Eugenia Orqueda, Marisa Rivas, Iris Catiana Zampini, María Rosa
Alberto, Sebastian Torres, Soledad Cuello, Jorge Sayago, Samanta Thomas
Valdes, Felipe Jiménez-Aspee, Guillermo Schmeda-Hirschmann, María Inés
Isla

PII: S0308-8146(16)31245-6
DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.08.015
Referensi: FOCH 19661 Ditampilkan

di: Food Chemistry

Tanggal Diterima: 1 Februari 2016

Tanggal Revisi: 6 Juli 2016
Tanggal Diterima: 6 Agustus 2016

Silakan kutip artikel ini sebagai: Orqueda, ME, Rivas, M., Zampini, IC, Alberto, MR, Torres, S., Cuello, S.,
Sayago, J. , Thomas-Valdes, S., Jiménez-Aspee, F., Schmeda-Hirschmann, G., Isla, MI, Karakterisasi kimia
dan fungsional dari biji, pulp dan bubuk kulit dari chilto (Solanum betaceum), buah asli Argentina. Fraksi
fenolik mempengaruhi enzim kunci yang terlibat dalam sindrom metabolik dan stres oksidatif, Food
Chemistry (2016), doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.08.015

Ini adalah file PDF dari manuskrip yang belum diedit yang telah diterima untuk diterbitkan. Sebagai layanan
kepada pelanggan kami, kami menyediakan versi awal naskah ini. Naskah akan menjalani copyediting,
typesetting, dan review dari bukti yang dihasilkan sebelum diterbitkan dalam bentuk akhirnya. Harap dicatat
bahwa selama proses produksi dapat ditemukan kesalahan yang dapat mempengaruhi konten, dan semua
penolakan hukum yang berlaku untuk jurnal terkait.
1 Karakterisasi kimia dan fungsional dari biji, pulp dan bubuk kulit dari chilto 2 (Solanum

betaceum), buah asli Argentina. Fraksi fenolik mempengaruhi enzim kunci 3 yang terlibat

dalam sindrom metabolik dan stres oksidatif. 4

María Eugenia Orquedaa, Marisa Rivasa, Iris Catiana Zampinia, María Rosa Albertoa 5 ,

Sebastian Torresa, Soledad Cuelloa, Jorge Sayagoa, Samanta Thomas-Valdesb 6 , Felipe

Jiménez-Aspeeb, Guillermo Schmeda-Hirschmannb#, María Inés Islaa*# 7 8

 a
9 Laboratorio de Investigación de Productos Naturales (LIPRON), Instituto de Química 10 del

NOA (INQUINOA-CONICET). Facultad de Ciencias Naturales dan IML. Universidad 11

Nacional de Tucumán, San Miguel de Tucumán, Tucumán, Argentina.

b
12 Laboratorio de Química de Productos Naturales, Instituto de Química de Recursos 13

Naturales, Universidad de Talca, Casilla 747, Talca 3460000, Chili. 14

15 lari: Penghambat enzim sindrom metabolik dalam JudulSolanum betaceum bubuk

16 # Kedua penulis memiliki partisipasi yang sama

17
18 *Penulis koresponden: Dra. María Inés Isla
19 INQUINOA- CONICET
20 Universidad Nacional de Tucumán.
21 San Lorenzo 1469
22 4000 - San Miguel de Tucumán. ARGENTINA
23 Email: misla@tucbbs.com.ar
24 Telepon: (+54)3815879252
25

26

27

1
28 Abstrak

29 Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk menilai komponen nutrisi dan fungsional bubuk 30

yang diperoleh dengan liofilisasi buah utuh, biji, pulp dan kulit dari chilto (Solanum 31

betaceum Cav ) dibudidayakan di ekoregion Yungas, Argentina. Bubuk memiliki kandungan

karbohidrat dan natrium yang rendah 32 dan merupakan sumber vitamin C, karotenoid, fenolat,

33 kalium dan serat. Analisis HPLC-ESI-MS/MS dari fraksi yang diperkaya dalam 34 fenolat

memungkinkan identifikasi 12 turunan asam caffeic dan fenolat terkait, 35 10 turunan asam

rosmarinic dan 7 flavonoid. Polifenol diperkaya ekstrak 36 sebelum dan sesudah simulasi saluran

cerna pencernaan terhambat enzim terkait dengan 37 sindrom metabolik, termasuk α-glucosidase,
amilase dan lipase dan dipamerkan 38 aktivitas antioksidan dengan mekanisme yang berbeda.

Tak satu pun dari bubuk buah yang dianalisis 39 menunjukkan toksisitas akut atau genotoksisitas.

Serbuk dari tiga bagian S. betaceum buah40 dapat menjadi makanan fungsional yang potensial

dan ekstrak biji dan kulit 41 yang diperkaya polifenol mungkin memiliki sifat nutraceutical.

42

43 Kata kunci: Solanum betaceum; chito; biji, pulp dan bubuk kulit; antioksidan 44 kapasitas;

sindrom metabolik.

45

46 Daftar Singkatan: ekuivalen glukosa (GE); βsetara -carotene(βCE); cyanidin-3- 47 glukosida

setara (C3-GE); setara procyanidin B2 (PB2E); quercetin 48 setara (QE); setara asam galat

(GAE); ekstrak yang diperkaya fenolik (PEE); 2,2'- 49 azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-

sulfonic acid (ABTS); butylated hydroxytoluene 50 (BHT); sel darah merah (RBC); 2,2`-azo-

bis(2-amidinopropane) dihydrochloride 51 (AAPH)

52
2
53 1. Pendahuluan

54 Tomat pohon atau chilto (Solanaceae) (sinonim: Solanum betaceum Sendt dan 55

Cyphomandra betacea Sendt.) adalah tanaman pangan asli Argentina yang dibudidayakan di 56

hutan lembab di timur Lereng Andes di barat laut Argentina Di 57 ekosistem yang dikenal

sebagai Yungas ini, pertanian berkembang hampir secara eksklusif di dataran rendah 58 sektor

pra-pegunungan dalam proses yang dimulai dengan konversi hutan lembab menjadi 59 kebun

tebu dan jeruk, dan kemudian menjadi kedelai produksi (Grau & Brown, 60 2000) Kehancuran

ekosistem Yungas telah meningkat dalam dekade terakhir, 61 mempengaruhi kondisi ekologi

hutan yang tersisa dengan konsekuensi atas 62 kejadian dan distribusi tumbuhan dan hewan asli,

fiksasi energi dan karbon . S. 63 betaceum buahdikenal sebagai chilto termasuk dalam Kode

Makanan Argentina sebagai tomat pohon. 64 Buah matang dikonsumsi terutama oleh penduduk

dari barat laut Argentina di 65 salad, jus, selai dan minuman keras, yang dikomersialkan terutama
di 66 pasar lokal atau regional. Selama pemrosesan, kulit dan bijinya dibuang. Karakterisasi yang

lebih baik dari 67 buah chilto yang diproduksi di Argentina serta dari produk sampingan

industrinya 68 relevan untuk mengetahui potensi sifat nutraceutical dan fungsional dari sumber

makanan asli 69 ini. Sebelumnya, akumulasi simultan dari protein antimikroba dan 70 gula

pereduksi selama pematangan buah chilto dilaporkan (Ordóñez, Vattuone, & Isla, 71 2005;

Ordóñez, Ordoñez, Nieva Moreno, Sayago, & Isla, 2006). Protein 72 yang diisolasi menunjukkan

aktivitas penghambatan terhadap enzim hidrolitik yang dihasilkan oleh organisme patogen 73 dan

terhadap pertumbuhan bakteri dan jamur fitopatogen. Sebuah kemungkinan 74 partisipasi protein

dalam mekanisme pertahanan tanaman dan penggunaannya dalam pertanian sebagai 75 agen

kontrol pasca panen telah diusulkan (Isla, Ordóñez, Nieva Moreno, 76 Vattuone, & Sampietro,

2002).

3
77 Aktivitas antioksidan dari maserasi, rebusan dan jus buah segar chilto dalam sistem sel dan sel

78 gratis telah didemonstrasikan. Aktivitas ini terkait dengan kandungan senyawa fenolik 79

(Ordóñez, Cardozo, Zampini, & Isla, 2010). Salmonella Mikrosom80 uji rebusan, maserasi dan

jus tidak menunjukkan efek mutagenik (Ordóñez et al., 81 2010). Materi yang tidak larut atau

bahan limbah (biji dan kulit) yang diperoleh setelah pembuatan jus 82 menunjukkan aktivitas

antioksidan dengan memadamkan radikal bebas (Ordóñez et al., 83 2010). Namun, tidak ada

informasi yang tersedia mengenai sifat dan komposisi dari 84 bubuk yang diperoleh dari bahan

limbah dari pengolahan industri, termasuk biji, 85 pulp dan kulit. Saat ini, Direction of Non-kayu

Forest Products from Argentina 86 mempromosikan budidaya chilto di lingkungan alaminya di

Yungas sebagai tanaman komersial 87 untuk pengelolaan berkelanjutan dari hutan pegunungan

yang tersisa. Untuk 88 ini, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai komposisi kimia,

aktivitas biologis dan toksisitas bubuk yang diperoleh dari berbagai bagian buah jeruk matang

dari 90 chilto (biji, kulit dan pulp) yang dikumpulkan di Yungas Argentina di Tucumán. Efek 91

komponen polifenol dari ekstrak buah terhadap enzim yang relevan dalam 92 hiperglikemia,

dislipidemia, dan stres oksidatif yang terkait dengan sindrom metabolik telah 93 dipelajari.
 Pengetahuan tentang sumber daya alam hutan asli Argentina barat laut 94 ini akan mendorong

konsumsi, budidaya dan pemasaran buah chilto, menghasilkan sumber pendapatan 95 bagi

penduduk wilayah tersebut.

96

97 2. Bahan dan Metode

98 2.1. bahan tanaman. Buah Solanum betaceum Cav. (kultivar oranye-kuning) 99 dikumpulkan

di Parque Sierra de San Javier, kawasan lindung Universidad Nacional 100 de Tucumán,

Argentina pada ketinggian 600 meter di atas permukaan laut, selama Februari dan Maret 2014 101

dan 2015. Identitas taksonomi dikonfirmasi di Instituto Miguel Lillo,

4
102 Tucumán, menggunakan spesimen herbarium referensi. Buah dipanen secara manual 103 dari

tanaman yang berbeda sesuai dengan tahap pematangan. Tahap pematangan untuk semua sampel

104 dipilih sesuai dengan tahap di mana buah biasanya dikonsumsi. Setelah 105 pengumpulan,

buah-buahan dikemas dalam lemari es portabel sampai diangkut ke 106 laboratorium (2–3 jam).

Buah-buahan segar dicuci dengan air ledeng dan kulit, ampas dan 107 biji dipisahkan. Kulit

(epidermis luar) buah dipisahkan dengan hati-hati 108 dari dagingnya menggunakan pisau tajam.

Fraksi biji adalah biji tanpa bagian agar-agar. 109 Pulp adalah bagian tomat yang tersisa setelah

dibuang kulit dan fraksi bijinya. 110 Kemudian masing-masing fraksi dibekukan pada suhu -80 C,

diliofilisasi dan digerus hingga diperoleh serbuk 111. Bubuk kemudian ditempatkan dalam

kantong penghalang oksigen, dikemas vakum 112 (Multivac, D-8941, Jerman) dan disimpan beku

pada -20 ° C sampai analisisnya.

113 2.2. Parameter kualitas buah chilto segar

114 Sekitar 100 g buah segar ditekan untuk mendapatkan jus, yang digunakan untuk 115

menentukan total padatan terlarut menggunakan refraktometer digital (ATC Instruments,

Chemillé, 116 France) dengan kompensasi suhu otomatis dan hasilnya dinyatakan dalam 117

°Brix. PH diukur secara langsung di setiap sampel dengan pH meter (Adwa, Szeged, 118

Hungaria). Keasaman yang dapat dititrasi (TA), sebagai jumlah larutan alkali (0,1 M NaOH) 119
yang diperlukan untuk menetralkan komponen dari sejumlah sampel tertentu (jus), dinyatakan

dalam g asam sitrat/100 mL produk (AOAC, 2000) . Parameter kromatik 121 diukur dengan

kolorimeter Chroma meter CR-400 (Konica Minolta, Tokyo, 122 Jepang) menggunakan sistem

CIELab. Ruang warna dipilih untuk mendapatkan hasil 123 yang dinyatakan dalam koordinat

kromatisitas L*, a* dan b* untuk iluminan terpilih.

124 L* terkoordinasi mewakili kecerahan (kontribusi hitam atau putih bervariasi antara 125 0 dan

100); a* mewakili kontribusi hijau atau merah (negatif atau positif); dan b* 126 mewakili

kontribusi warna biru atau kuning (negatif atau positif). Koordinat

5
127 L* tegak lurus terhadap bidang yang memuat koordinat kromatisitas a* dan b*. 128

Mempertimbangkan koordinat L*, a* dan b*, warna dinyatakan melalui L*, C* dan H, 129 di

mana: L* adalah kecerahan; C* adalah kroma atau saturasi; dan H adalah nada (atau sudut rona,

yang 130 menunjukkan variasi warna pada bidang yang dibentuk oleh koordinat a* dan b*).

Parameter ini ditentukan dengan mempertimbangkan: C*= (a 2+b2)1/2 131 , H°= arctang (b/a)

dimana 0º = 132 merah-ungu, 90º = kuning, 180º = hijau kebiruan dan 270º = biru), indeks CIRG=

180-h/(L* 133 + C*) (Usenik, tampar & Vebericˇ, 2009).

134 2.3. Penentuan komponen nutrisi

135 Semua analisis dilakukan dalam rangkap tiga menggunakan metode standar yang sebelumnya

dioptimalkan 136 dan digunakan untuk matriks makanan nabati menurut metode Association of

Official Analytical 137 Chemists (AOAC, 2005). Kandungan protein kasar (920,87) dihitung dari

138 kandungan total nitrogen (N) yang ditentukan dengan metode Kjeldahl menggunakan faktor

konversi 139 dari 6,25. Total lipid (920,85) konten ditentukan menurut metode ekstraksi Soxhlet

140 dengan petroleum eter (40-60 °C) selama 4 jam.

141 2.3.1. Analisis karbohidrat

142 Serbuk sampel (1 g) diekstraksi dengan etanol berair 80% (4 mL) pada 75°C selama 10 143

menit dan kemudian disentrifugasi pada 9000 x g selama 5 menit. Padatan yang tersisa diekstraksi

144 secara mendalam dengan sistem pelarut yang sama. Semua ekstrak organik digabungkan dan
kemudian diuapkan. Total gula netral dan gula pereduksi diukur masing-masing

menggunakanfenol

asam sulfat146 dan metode Somogyi-Nelson (Costamagna, Ordoñez, 147 Zampini, Sayago, &

Isla, 2013). Glukosa, fruktosa dan sukrosa dikuantifikasi dengan 148 sistem HPLC ditambah

dengan detektor indeks bias (Waters 410) menurut 149 Gancedo & Luh, 1986. Pemisahan

kromatografi gula melibatkan asetonitril: 150 air (80:20, v/v) sebagai fase gerak pada laju aliran

1,5 mL/menit dan kolom Karbohidrat ZORBAX 151 Agilent (4,5 mm 4,6 mm 250 mm) (GL

Sciences Inc.,

6
152 Torrance, CA, USA). Puncak terelusi dideteksi dengan detektor indeks bias. Kurva kalibrasi

153 dibuat menggunakan standar komersial glukosa, fruktosa dan 154 sukrosa untuk menentukan

hubungan antara luas puncak dan konsentrasi. 155 konsentrasi gula dinyatakan sebagai mg/100 g

berat kering. Tiga ulangan digunakan 156 untuk semua sampel.

157 2.3.2. Amalisis mineral

158 Analisis mineral dilakukan dengan spektrometri massa plasma induktif quadrupole 159 (Q-

ICPMS) di Instituto Superior de Investigación Desarrollo y 160 Servicios en Alimentos, ISIDSA,

Córdoba, Argentina. Kandungan mineral dan 161 komposisi abu (993,14) ditentukan dengan

spektroskopi serapan atom 162 sesuai dengan rekomendasi AOAC (2005). Ion-ion berikut

dianalisis: 163 natrium, magnesium, kalium, kalsium, dan besi. Hasilnya dinyatakan dalam 164

mg/100 g bubuk.

165 2.4. Fitokimia fungsional

166 2.4.1. Ekstraksi dan kuantifikasi total senyawa fenolik dan flavonoid total 167 Sampel yang

berbeda diekstraksi tiga kali dengan 95 °etanol (1 g bubuk per 5 168 mL etanol) sambil diaduk (40

siklus/menit) dalam penangas ultrasonik selama 30 menit di kamar 169 suhu. Kemudian, sampel

disentrifugasi pada 12000 x g selama 10 menit. 170 fase organik gabungan diambil hingga kering

di bawah tekanan tereduksi untuk menghasilkan 171 ekstrak yang diperkaya fenolik (PEE).

Kandungan total fenolik ditentukan dalam PEE 172 menurut Singleton, Orthofer, & Lamuela-
Raventos (1999). Hasilnya 173 dinyatakan sebagai mg setara asam galat (GAE)/100 g bubuk buah

utuh atau setiap buah 174 bagian. Kandungan flavonoid diukur mengikuti laporan oleh Zhishen,

Mengcheng 175 & Jianming, (1999) menggunakan AlCl3 dan NaNO2.Hasilnya dinyatakan sebagai

mg 176 quercetin setara (QE)/100 g bubuk buah utuh atau setiap bagian buah.

7
177 2.4.1.1. Efisiensi pemulihanEfisiensi

178pemulihan senyawa fenolik dinilai menggunakan asam klorogenat 179 dan asam rosmarinic

sebagai standar internal selama prosedur ekstraksi. Secara singkat, dua 180 set masing-masing

sampel disiapkan dengan rangkap tiga untuk setiap bubuk. Untuk melakukan 181 pengujian, 0,5 g

bubuk biji, kulit dan pulp chilto diekstraksi tiga kali 182 dengan etanol 95 ° dalam kondisi yang

sama seperti yang dijelaskan dalam 2.4.1. Set 1, sampel 183 diperoleh dengan spiking asam

klorogenat dan asam rosmarinic (100 μg masing-masing) sebelum 184 ekstraksi. Set 2, sampel

diperoleh tanpa standar internal dan kemudian, 185 diekstraksi. Ekstraksi dipekatkan dengan

penguapan dan dianalisis langsung dengan 186 HPLC-DAD. Sistem HPLC terdiri dari sistem

Pompa HPLC Biner Waters 1525 187 dengan Pemanas Kolom Seri 1500, dan detektor larik

fotodioda Waters 2998 188 (PDA), kolom XBridgeTM C18 (4,6 mm×100 mm, 5µm; Perusahaan

Waters, 189 Milford, MA) dengan sistem pelarut gradien biner digunakan. Sistem ini 190 terdiri

dari pelarut A (0,1% asam asetat dalam air) dan pelarut B (0,1% asetat 191 asam dalam metanol)

(kondisi: 10–57% B dari 0 hingga 45 menit dan 57–100% B 192 dari 45 sampai 65 menit)

digunakan. Laju aliran diatur pada 0,5 mL / menit. Efisiensi 193 pemulihan diperkirakan sebagai

rasio rata-rata area puncak standar internal 194 yang dibubuhi sebelum ekstraksi (ditetapkan 1) ke

area puncak dengan jumlah yang sama dari standar internal 195 yang dibubuhi dalam fase gerak.

Kurva kalibrasi dibuat menggunakan 196 standar komersial asam klorogenat dan asam rosmarinic

untuk menentukan hubungan antara luas puncak dan konsentrasi. Konsentrasi dinyatakan 198

sebagai mg/100 g berat kering. Tiga ulangan digunakan untuk semua sampel.

199
200 2.4.2. Ekstraksi dan kuantifikasi tanin

201 Setiap sampel bubuk (1 g) diekstraksi dengan 12,5 mL aseton:air (70:30, v:v)
 8
202 menurut Costamagna et al. (2013). Total kandungan tanin terkondensasi dalam setiap 203

sampel ditentukan menurut Prior et al. (2010). Hasil dinyatakan sebagai mg 204 setara procyanidin

B (PB2E)/100 g bubuk buah utuh atau setiap bagian buah. 205 Aseton diuapkan dan fraksi berair

dipisahkan menjadi dua fraksi. 206 Salah satunya diajukan ke hidrolisis asam. Kandungan asam

galat total adalah 207 diukur dalam fraksi terhidrolisis dengan metode rhodanine (Inoue &

Hagerman, 208 1988). Asam galat bebas ditentukan dalam fraksi yang tidak terhidrolisis.

Kandungan 209 tanin terhidrolisis ditentukan dengan selisih antara keduanya dan hasilnya 210

dinyatakan sebagai mg galat setara asam (GAE)/100 g bubuk buah utuh atau setiap 211 bagian

buah.

212 2.4.3. Pigmen dan asam askorbat

213 Antosianin, karotenoid dan asam askorbat diekstraksi dari masing-masing sampel 214

menurut Costamagna et al. (2013) dan kandungan total masing-masing metabolit adalah 215 yang

ditentukan menurut Lee, Durst, & Wrolstad, (2005); Rodríguez-Amaya, (1999) dan 216 Barros,

Heleno, Carvalho & Ferreira, (2010), masing-masing. Asam askorbat juga ditentukan oleh HPLC-

DAD menurut Phillips, Council-Troche, McGinty, Rasor, & 218 Tarrago-Trani, (2015).

219 2.4.4. Serat Mentah

220 Kandungan serat (962,09) ditentukan menurut AOAC (2005). 221 2.5.

Simulasi pencernaan gastroduodenal

222 Efek penghambatan pada enzim yang berhubungan dengan sindrom metabolik ditentukan

dengan menggunakan 223 ekstrak polifenol sebelum dan sesudah simulasi pencernaan

gastroduodenal (GD). 224 ekstrak polifenol diserahkan ke simulasi GD menurut Tenore,

Campiglia, 225 Giannetti & Novellino (2015) dengan sedikit modifikasi. Secara singkat, untuk

pencernaan 226 saliva, ekstrak (4 mg GAE) dicampur dengan 6 mL saliva buatan pada pH 6,8

9
227 (KCl [89,6 g/L], KSCN [20 g/L], NaH 2PO4 [88,8 g / L], Na 2SO4 [57,0 g / L], NaCl [175,3 228

g / L],NaHCO3 [84,7 g / L], urea [25,0 g / L] dan α-amylase [48,3 mg / mL]). Campuran 229
diinkubasi selama 3 menit pada suhu 37°C. Kemudian, untuk pencernaan lambung, ditambahkan

pepsin (14.800 U) 230 yang dilarutkan dalam HCl 0,1 M. PH diatur menjadi 2 dan campuran

diinkubasi pada suhu 37°C selama 2 jam. Untuk pencernaan pankreas (duodenal), pH diatur 232

hingga 6,5 dengan NaHCO3 (0,5 M). Kemudian ditambahkan pankreatin (8 mg/mL) dan garam

empedu (50 mg/mL) 233 (1:1, v/v), dilarutkan dalam air (20 mL), dan campuran diinkubasi pada

suhu 37 234 °C selama 2 jam Setelah pencernaan buatan, polifenol diekstraksi dengan etil asetat

dan 235 fase organik diambil hingga kering dan disuspensikan kembali dalam dimetilsulfoksida

(DMSO) 236 (1 mg GAE/mL).

237 2.6. Uji penghambatan enzim dan antioksidan

238 2.6.1. Aktivitas penghambatan enzim yang berhubungan dengan

sindrom metabolik 239 2.6.1.1. α-Glucosidase penghambatan

240 Penghambatan enzim dilakukan menurut Costamagna et al. (2013) dengan beberapa

modifikasi 241 menggunakan p-nitrophenyl α-D-glucopyranoside sebagai substrat. Pra-inkubasi

242 dari α-glucosidase enzim dan PEE biji, kulit, dan bubuk bubur (2,5-20 ug / mL) 243 (sebelum

dan sesudah simulasi GD pencernaan) dilakukan pada 4ºC selama 10 menit. 244 IC 50 nilai dihitung

dengan interpolasi kurva respon dosis. Orlistat 245 (tetrahydrolipstatin, kode ATC: A08AB01,

Laboratorium Elea, Ciudad Autonoma de 246 Buenos Aires, Argentina) digunakan sebagai

kontrol positif.

247 2.6.1.2.α-Amylase penghambatan

248The α-amylase aktivitas penghambatan menggunakan pati sebagai substrat diuji menggunakan

249 Amilokit ® (Wiener Lab Group, Rosario, Argentina, Kit N ° 1504163370) sesuai dengan 250

petunjuk fabricant seperti dilansir Costamagna et al. (2016). PEE dari biji, 251 kulit dan bubuk

pulp (5-40 g GAE/mL) dinilai (sebelum dan setelah disimulasikan GD

10
252 pencernaan) dan hasilnya dilaporkan sebagaiIC50 nilai. IC50 nilai menunjukkan g 253 GAE/mL

dari PEE yang dibutuhkan untuk menghambat enzim sebesar 50%.

254 2.6.1.3. Penghambatan lipase

255 Aktivitas lipase diuji dengan mengukur hidrolisis enzimatik p-nitrofenil 256 palmitat menjadi

p-nitrofenol dalam pembaca lempeng mikro (BiotekELx808) pada 400 nm menurut 257

Costamagna et al. (2016) di hadapan (konsentrasi akhir antara 2,5 dan 20 g/mL) 258 dan tanpa

PEE dari biji, kulit dan bubuk pulp (sebelum dan sesudah simulasi 259 GD pencernaan). Setelah

pra-inkubasi (Enzyme-PEE) pada suhu 4ºC selama 10 menit, reaksi enzim 260 dilakukan selama

20 menit. IC50 nilai ditentukan sebagai g GAE/mL dari 261 PEE yang diperlukan untuk

menghambat aktivitas enzim sebesar 50%.

262 2.6.2 Aktivitas antioksidan

263 2.6.2.1. Uji kapasitas antioksidan totalUji kapasitas

264antioksidan PEE dilakukan oleh kation radikal ABTS yang ditingkatkan (ABTS ●+

265) seperti yang dijelaskan oleh Re, Pellegrini, Proteggente, Pannala, Yang, & 266 Rice-Evans

(1999). Hasil dinyatakan sebagai konsentrasi PEE (sebelum dan 267 setelah destruksi GD

simulasi) yang diperlukan untuk mengais 50% ABTS (SC 50). BHT sebanyak 268 digunakan

sebagai senyawa referensi.

269 2.6.2.2. Perlindungan hemolisis oksidatif

270 Perlindungan hemolisis oksidatif sel darah merah (RBC) oleh PEE (0,1-2,5 g 271 GAE/mL)

(sebelum dan sesudah simulasi pencernaan GD) ditentukan menurut 272 Mendes, de Freitas,

Baptista, & Carvalho, (2011), menggunakan larutan senyawa azo 273 AAPH. Tingkat hemolisis

ditentukan secara spektrofotometri. Campuran reaksi 274 diinkubasi selama 1 jam pada 37°C dan

kemudian disentrifugasi (4000 x g) selama 3 275 menit. Penyerapan supernatan dibaca pada 545

nm. The persen hemolisis adalah 276 dihitung dan IC 50 nilai-nilaiditentukan sebagai konsentrasi

ekstrak (sebelum

11
277 dan setelah simulasi GD pencernaan) yang diperlukan untuk melindungi RBC dari oksidatif

278 hemolisis oleh 50%. BHT digunakan sebagai senyawa referensi.

279 2.7. Identifikasi fenolat dengan HPLC-ESI-MS/MS

280 PEE dari pulp, kulit dan biji tomat pohon dianalisis dengan HPLC-ESI-MS/MS untuk
membandingkan sampel dan mengidentifikasi konstituen ekstrak. Spektrum massa 282 direkam

menggunakan sistem kromatografi cair 283 Agilent 1100 (Agilent Technologies Inc., CA, USA)

yang dihubungkan melalui pemisahan ke sistem Esquire 4000 Ion Trap 284 LC/MS(n) (Bruker

Daltoniks, Jerman). Ionisasi dilakukan pada 3000 V 285 dibantu oleh nitrogen sebagai gas

nebulisasi pada 50 psi dan sebagai gas pengering pada 365ºC dan laju alir 286 10 L/menit. Ion

negatif dideteksi menggunakan pemindaian penuh (m/z 20-2200) dan resolusi normal 287

(kecepatan pemindaian 10.300 m/z/s; puncak dengan 0,6 FWHM/m/z). Parameter trap 288 diatur

dalam ion charge control (ICC) menggunakan parameter default pabrikan, dan 289 waktu

akumulasi maksimum 200 ms. Kondisi spektrometri massa untuk analisis 290 adalah: jarum

elektrospray, 4000 V; offset pelat ujung, -500 V; skimmer 1, 56,0 V; 291 skimmer 2, 6,0 V; offset

keluar kapiler, 84,6 V; keluar kapiler, 140,6 V. Collision 292 induced disociation (CID) spektrum

diperoleh dengan amplitudo fragmentasi 293 1,00 V (MS/MS) menggunakan helium sebagai gas

tumbukan dan dikontrol secara otomatis 294 melalui opsi SmartFrag. Campuran dianalisis

menggunakan kolom MultoHigh 100 RP 18-5µ 295 (250 x 4,6 mm) (CS-Chromatographie Service

GmbH, Langerwehe, Jerman) 296 yang dipertahankan pada 25 °C. Analisis HPLC-MS dilakukan

menggunakan sistem pelarut gradien linier 297 yang terdiri dari 1% asam format dalam air (A) dan

asetonitril sebagai berikut: 298 90% hingga 85% A selama 15 menit, dipertahankan hingga 20

menit dan diubah menjadi 82% A dari 20 hingga 299 25 menit, 82 hingga 70% A dari 25 hingga

50 menit, dipertahankan hingga 70% A dari 50 hingga 80 menit, dan 300 kembali ke 90% A dari

80,01 hingga 90 menit. Laju alir 0,5 mL/menit dan volume 301 yang disuntikkan adalah 20 µL.

Senyawa dipantau pada 280 nm.

12
302 2.7.1. Kuantifikasi asam rosmarinic dan asam 3-caffeoylquinic 303 The fenolat utama

dalam PEE yang telah diukur dengan menggunakan kurva kalibrasi eksternal 304 siap dengan

standar murni pada λ 330 nm. Senyawa referensi asam rosmarinic 305 (98%, Sigma Aldrich, St.

Louis, MO, USA) dan asam 3-caffeoylquinic (98%, Phytolab 306 GmbH, Verstenbergsgreuth,

Jerman) digunakan dalam konsentrasi mulai dari 5-500 307 mg/ L (r = 0,9998) dan 10-1000 mg/L
(r = 0,9999), masing-masing. 308 parameter analitis dihitung sesuai dengan referensi ICH (ICH,

2005), dengan LOD 309 dari 7,03 dan 5,91 mg/L dan LOQ dari 21,32 dan 17,91 mg/L untuk

rosmarinic dan 3-310 asam caffeoylquinic, masing-masing. Hasil dinyatakan sebagai mg dari 311

senyawa/100g ekstrak yang sesuai.

312 2.8. Toksisitas

313 2.8.1. Uji Toksisitas Akut

314 Tingkat toksisitas akut dari ekstrak dipelajari menggunakan Artemia salina sebagai organisme

uji 315 (Svensson, Mathiasson, Martensson & Bergatröm, 2005). The Artemia salina 316 kista

yang menetas di air laut buatan. Setelah 24 jam inkubasi pada 25°C, 317 larva yang menetas

dipindahkan ke lempeng mikro yang berisi air laut dan 2,5 hingga 200 2.5g GAE/mL 318 masing-

masing ekstrak. Kontrol pelarut (DMSO) tanpa ekstrak dan kontrol positif 319 kalium dikromat

(10-40 g/mL) dimasukkan dalam percobaan. Semua pelat (320) diinkubasi selama 24 jam pada 25

°C. Jumlah larva yang mati dihitung sebanyak 321 setiap konsentrasi.

322 2.8.2. Mutagenisitas

323 Efek mutagenik ekstrak bubuk chilto dievaluasi pada dua Salmonella 324 typhimurium

strain(TA98 dan TA100). Uji piring penggabungan dilakukan 325 menurut Maron & Ames

(1983), dengan menambahkan 0,1 mL semalam bakteri 326 budaya, 0,05 mL PEE pada

konsentrasi yang berbeda (175-500 mg GAE / piring) dan 2 mL

13
327 dari atas agar-agar pada agar-agar minimal. Plate kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama

48 jam. Setelah 328 inkubasi, koloni revertannya+ dihitung dan dibandingkan dengan jumlah 329

koloni revertan pada kontrol. Kontrol positif yang digunakan adalah 4-nitro-O 330

phenylenediamine (4-NPD; Aldrich Chemical Co.), 10 g/plate. Kontrol pelarut 331 dilakukan

dengan menambahkan 0,05 mL DMSO/piring. Sebuah ekstrak dianggap mutagenik ketika 332

jumlah rata-rata revertants adalah dua kali lipat atau lebih besar dari dua kali dari kontrol negatif

333. Tiga piring per percobaan diuji dan dua percobaan terpisah dilakukan untuk setiap

konsentrasi yang diuji dan untuk kontrol positif dan negatif.

335 2.9. Analisis statistik

336 Semua pengukuran direplikasi tiga kali dan data dianalisis dengan Anova. 337 Koefisien

korelasi (r) juga dihitung.

338 3. Hasil dan Pembahasan

339 3.1. Penentuan indeks kematangan

340 Buah yang dapat diterima oleh konsumen pada dasarnya tergantung pada kombinasi beberapa

atribut kualitas 341, yang antara lain meliputi warna, kadar gula, dan keasaman. Karakteristik

kromatik buah 342 ditentukan untuk diseleksi dengan tingkat kematangan yang sama 343

(L*=62,33±1,89, a* =15,72±1,81, b*=39,92±2,32, chroma=42,90, sudut rona=68,50 dan 344

CIRG indeks = 1,06) SSC kultivar kuning-oranye bervariasi dengan nilai rata-rata 345 9,01±0,5,

lebih rendah dari yang ditemukan pada buah-buahan dari Kolombia, Ekuador dan Spanyol 346

(Schotsman, East, & Woolf, 2011; Acosta Quezada et al ., 2015). Keasaman total (nilai TA 347)

lebih tinggi (TA= 1,9% asam sitrat) dibandingkan cabai merah (Acosta 348 Quezada et al., 2015;

Schotsmans et al., 2011), nilai antara 0,76 hingga 1,71.

349 Selama proses industri buah chilto, kulit dan bijinya dibuang dan 350 dianggap bahan limbah.

Pulp, biji dan kulit mewakili 51,5%, 39,4% dan 9,1%,

14
351 masing-masing, dari total berat buah segar. Oleh karena itu, sekitar setengah dari berat buah

352 (49%) dianggap sampah dan akan dibuang. Meskipun demikian, bahan ini dapat bermanfaat

sebagai sumber bahan pangan fungsional alami. Untuk alasan ini, bubuk dari 354 daging buah

matang, kulit dan biji diperoleh dengan liofilisasi bahan segar. Hasil 355 adalah sebagai berikut:

24,04 g bubuk/100 g kulit segar; 13,28 g bubuk/100 g segar 356 biji dan 12,02 g bubuk/100 g

ampas segar. Bubuk dicirikan dari 357 nutrisi dan sudut pandang fungsional.

358 3.2. Komposisi nutrisi bubuk yang diperoleh dari buah matang, daging buah, kulit dan biji

359 Kandungan karbohidrat dalam buah chilto kuning-oranye utuh (1,17 g/100 g berat segar 360

dan 9,11g/100 g berat kering) dari Yungas Argentina mirip dengan kandungan karbohidrat 361
berbagai varietas tomat komersial (Solanum esculentum) (1,01-2 g/100 362 g berat segar) dan

lebih tinggi dari tomat pohon jeruk (Acosta Quezada et al., 2015). Efisiensi penyimpanan 363

sukrosa dalam buah kuning-oranye lebih tinggi daripada penyimpanan glukosa dan 364 fruktosa

(Tabel 1). Hasil ini serupa dengan yang dilaporkan pada buah berwarna oranye 365 dari tempat

lain seperti Valencia, Spanyol (Vasco, Avila, Ruales, Svanberg & Kamal 366 Eldin, 2009;

Schotsmans et al., 2011; Acosta Quezada et al., 2015 ). Namun, Ordoñez 367 et al., (2005)

melaporkan bahwa pada buah merah matang dari Argentina, aktivitas asam invertase 368 yang

tinggi dapat melepaskan heksosa konsentrasi tinggi melalui hidrolisis sukrosa selama 369

pematangan buah. Pada chilto kuning-oranye, tingkat glukosa dan fruktosa serupa 370 dengan

yang ditemukan pada buah jeruk dari Ekuador tetapi lebih tinggi dari tingkat heksosa pada buah-

buahan dari 371 Spanyol (Vasco et al., 2009). Daging buah, biji dan bubuk kulit terkandung 7,62,

11,91 dan 372 2,23% dari total gula dan penyimpanan sukrosa lebih banyak daripada glukosa dan

fruktosa (Tabel 1). Tingkat protein total 373 (2,6 g/100 g berat segar atau 18,95 g/100 g berat

kering) serupa dengan 374 yang dilaporkan pada buah chilto dari Spanyol dan Ekuador (Vasco et

al., 2009; Schotsmans et al., 375 2011) dan lebih tinggi dari pada Solanum esculentum buah(0,55-

1,05 g/100 g berat segar)

15
376 (Guil-Guerrero & Rebolloso-Fuentes, 2009). Bubuk chilto kuning-oranye utuh 377 buah,

daging buah, biji dan kulit mengandung 18,95%; 12,95%; 20,95% dan 8,84% dari total protein,

masing-masing 378. Kandungan lemak dalam buah-buahan segar dan dalam bubuk setiap bagian

buah rendah 379 (Tabel 1). Kandungan serat buah chilto utuh (2,08 g/100 g berat segar dan 16

g/100 g 380 berat kering) lebih tinggi dibandingkan Solanum esculentum buah(0,74-1,60 g/100 g

berat segar 381). Kandungan serat dalam bubuk tiap bagian buahnya tinggi, dengan nilai masing-

masing 382 23,46, 19,04 dan 28,42 g/100 g untuk kulit, daging buah dan biji (Tabel 1). Untuk 383

alasan ini, bubuk chilto dapat memiliki efek kesehatan yang bermanfaat yang meningkatkan 384

fungsi sistem pencernaan (González-Castejón & Rodriguez-Casado, 2011).

385 Kandungan unsur mikro dari biji chilto, kulit dan bubuk pulp tinggi kalium 386 dan rendah
natrium. Also, high calcium content in the skin and high magnesium content 387 in seeds was

observed (Table 1). The content of K, Ca and Mg in “chilto” whole fruit 388 was higher than in

commercial Solanum esculentum fruit (Guil-Guerrero & Rebolloso

389 Fuentes, 2009).

390 3.3. Phytochemical composition of chilto powder

391 3.3.1. Ascorbic acid: The percent ascorbic acid content (in mg) of 100 g pulp, seed and 392

skin powder was 84.1, 56.8 and 51.1 mg, respectively (Table 1). Hence, the 393 consumption of

100 g of chilto powder may be enough to cover the daily requirements 394 in ascorbic acid,

recommended daily allowance of 60-90 mg per person (men and 395 women) (Levine, Wang,

Padayatty, & Morrow, 2001) The ascorbic acid content in 396 whole fruit was lower (15.21

mg/100 g fresh fruit or 117 mg/100 g dry weight) than the 397 reported in S. esculentum red fruit

(100-200 mg/100 g fresh weight) (Guil-Guerrero & 398 Rebolloso-Fuentes, 2009).

399 3.3.2. Polyphenolic compounds: The total polyphenols content was 415.2, 523.8 and 400

179.4 mg GAE/100 g of pulp, skin and seed powder, respectively (Table 1). The pulp

16
401 and skin powder were higher in phenolic and contained higher levels of total soluble 402

phenolic compounds than the seeds without jelly. In fruits from Ecuador, the level of 403

phenolics was higher in skin or peel (Vasco, Ruales & Kamal-Eldin, 2008; Vasco et al., 404 2009).

The flavonoid content of chilto skin powder was higher (265.70 mg/100 g 405 powder) than pulp

(223.80 mg/100 g powder) and seeds (175.62 mg/100 g powder), 406 respectively. Since the

average value of flavonoids mean uptake is in the range from 23 407 to 35 mg per day (Manach,

Scalbert, Morand, Rémés &, Jiménez, 2004), 8 g of skin 408 powder are sufficient to meet the

requirements of flavonoids. At the moment, 409 recommended daily allowance (RDA) of total

flavonoids could be between 250–400 410 mg/day, respecting the seasonality of food sources

(Peluso & Palmery, 2015). The 411 content of phenolic compounds and flavonoid are higher in

chilto fresh fruit (88.92 mg 412 GAE/100 g fresh weight and 20 mg QE/100 g fresh weight,

respectively) than in 413 Solanum lycopersicon fruit (10.51 mg GAE/100 g fresh weight and 9.45
QE/100 g 414 fresh weight, respectively) (Liu, Cai, Lu, Han, Xiao & Ying, 2012). However, the

415 composition and identity of the flavonoids in diet is relevant for the biological effects. 416

Condensed and hydrolyzed tannins were not detected in the pulp, skin and seed powder. 417 3.3.3.

Pigments

418 To determine the pigment content, differential extractions of the chilto fruit powder 419 seeds,

skin and pulp were carried out. Carotenoids are major compounds in the whole 420 fruit powder

(1.41±0.09 g β-CE/100 g).The carotenoid content in the skin powder was 421 higher than in pulp

and seed powder (Table 1).Total carotenoid content was higher in 422 chilto fruits from Tucuman

(Argentina) than in fruits from Brazil and Ecuador (Vasco et 423 al., 2009) and in several varieties

of S. esculentum (Guil-Guerrero & Rebolloso-Fuentes, 424 2009). The carotenoids from the

yellow colored tree tomato fruit were identified by

17
425 HPLC-PDA-MS (Mertz, Brat, Caris-Veyrat & Gunata, 2010). The authors identified 26 426

compounds from the crude extracts and after saponification.

427 The anthocyanin level was very low (1.78 mg C-3GE/100 g powder) and was detected 428

only in skin. This result is coincident with the reported for fruits from Colombia where 429 the

anthocyanin level in red fruits (7818 mg/100 g) was higher than in the orange fruits 430 (Osorio,

Hurtado, Dawid, Hofmann, Heredia-Mira & Morales, 2012). The identified 431 pigments in red

fruits were delphinidin 3-O-(6-O-α-rhamnopyranosyl-β

432 glucopyranosyl)-3´-O-β-glucopyranoside, delphinidin 3-O-(6-O-α-rhamnopyranosyl)- 433 β-

glucopyranoside, cyanidin 3'-O-(6-O-α-rhamnopyranosyl)-β-glucopyranoside and 434

pelargonidin 3-O-(6-O-α-rhamnopyranosyl)-β-glucopyranoside (Hurtado, Morales, 435 González-

Miret, Escudero-Gilete, & Heredia, 2009), delphinidin 3-O-α-L 436 rhamnopyranosyl-(1,6)-β-D-

glucopyranoside-3-O-β-D-glucopyranoside, cyanidin-3-O 437 rutinoside, pelargonidin-3-O-

rutinosideand delphinidin-3-O-rutinoside (Hurtado et al., 438 2009; Osorio et al., 2012). De Rosso

& Mercadante (2007) described the anthocyanin 439 and carotenoid content of C. betaceae fruits
from Brazil. The main carotenes were β 440 cryptoxanthin and β-carotene while the three

anthocyanins identified were delphinidin

441 3-rutinoside, cyanidin 3-rutinoside and pelargondin 3-glucoside-5-rhamnoside. 442

3.4. Functional properties

443 3.4.1. Effect of PEEs on key enzyme involved in the development of metabolic 444

syndrome

445 The metabolic syndrome, characterized by glycemic index imbalance, glucose 446

intolerance, hypertension, dyslipidemia and/or obesity, is an early sign of potential 447 future

development of type II diabetes characterized by postprandial hyperglycemia. 448 The effect of

PEE from seed, pulpand skin powder before and after simulated GD

18
449 digestion was assessed towards enzymes associated with metabolic syndrome, such as 450 α-

glucosidase, α-amylase and pancreatic lipase. The effect of chilto PEE on metabolic 451 enzymes

was summarized in Table 2.

452 α-Glucosidase and α-amylase inhibition

453 The increase of blood post-prandial glucose can be reduced through inhibition of 454 enzymes

involved in the release of glucose from food such as α-glucosidase, a 455 membrane-bound

enzyme located in the epithelium of the small intestine. Management 456 of hyperglycemia in

diabetes mellitus by oral α-glucosidase inhibitors is currently 457 limited to acarbose, voglibose

and miglitol aimed at delaying digestion of dietary 458 carbohydrates to maintain postprandial

blood glucose at normal levels (Ghani, 2015). 459 The continuous administration may cause

several adverse effects, such as abdominal 460 discomfort, diarrhea, flatulence, and hepatotoxicity

(Ghani, 2015). Therefore, novel 461 inhibitors of α-glucosidase are necessary given the therapeutic

challenge of type II 462 diabetes mellitus. Much research has focused on glycosidase inhibitors to

control 463 hyperglycemia, but many forms of starch are also digested as rapidly as glucose 464

absorption. Slowing the digestion and breakdown of starch may have beneficial effects 465 on

insulin resistance and glycemic index control in diabetics. The PEE from chilto seed, 466 pulp and
skin powder were active towards α-amylase and α-glucosidase with IC50 values 467 of 5.1, 11.0

and 10.5 µg GAE/mL for α-glucosidase and 19.4, 15.0 and 13.5µg 468 GAE/mL for α-amylase,

respectively. The IC50 value of the reference compound 469 acarbose was 25.0 µg/mL for α-

glucosidase and 1.25 µg mL/mL for α-amylase, 470 respectively (Table 2). The PEEs were more

active towards α-glucosidase than the 471 reference compound acarbose but presented lower effect

on α-amylase. The results 472 suggest that PEE of chilto fruits powder might be able to reduce

glucose

19
473 uptake/absorption. In this sense, chilto fruits powder may be a dietary complement to 474

control hyperglycemia in diabetic patients. However, further evaluation of the in vivo 475

hypoglycaemic activity is necessary to verify potential beneficial effects. 476 Pancreatic lipase

477 Pancreatic lipase is an enzyme that has an impact on metabolic syndrome (Grove, Sae 478 tan,

Kennett, & Lambert, 2012). Lipase, primarily produced in the pancreas, hydrolyses 479 lipids to

form fatty acids in a way that they can be absorbed in the human digestive 480 system. The

inhibition of pancreatic lipase is the main prescribed treatment for weight 481 management and

obesity (Birari & Bhutani, 2007). Orlistat, acommercial drug for 482 obesity treatment, is an

inhibitor of pancreatic lipase that produces several secondary 483 effects (Mohamed, Ibrahim,

Elkhayat & El Dine, 2014). In order to find alternative 484 natural sources for obesity prevention

and treatment, we evaluated PEE of chilto fruit 485 seeds, pulp and skin on lipase activity. The

results are showed in Table 2. The 486 inhibitory activity of seeds phenolic extract on lipase (IC 50:

5.3 µg GAE/mL) was 487 higher than the pulp extract (IC 50: 14.0 µg GAE/mL) and skin (IC50:

11.7 µg GAE/mL) 488 and better than the inhibition reported for white and green tea polyphenols

(Gondoin, 489 Grussu, Stewart & McDougall, 2010).

490 Effect of polyphenolic extracts after simulated GD digestion

491 After simulated GD digestion, the polyphenolic seed extract was more active on α 492

amylase and less active on α-glucosidase than the untreated sample. The pulp and skin 493 extracts

showed similar activity before and after artificial GD digestion (Table 2). 494 3.4.2. Antioxidant
activity

495 The role of oxidative stress in the initiation and progression of metabolic syndrome 496

(diabetes and obesity) leads to the hypothesis that antioxidants can be used as 497 therapeutic

agents for its treatment or prevention. For this reason and considering that

20
498 chilto extract possess hypoglycaemic and anti-obesity capacity, the antioxidant activity 499 of

the powder, before and after simulated GD digestion was analyzed. All the PEE 500 showed a

dose-response effect on the ABTS cation radical reducing capacity with SC 50 501 value between

0.8 and 1.38 µg GAE/mL. Overall, the scavenging activity was higher 502 than commercial

natural and synthetic antioxidants used in food industry such as BHT 503 (SC 50 = 55 µg/mL). All

fractions showed protection capacity of RBC on the oxidative 504 hemolysis (IC 50 values between

0.4 to 0.9 µg GAE/mL). The antioxidant power of the 505 polyphenolic extracts before and after

simulated GD was similar except for seeds 506 extract, whose antioxidant capacity decreased after

treatment with digestive enzymes.

507 3.5. Toxicity and mutagenicity assays

508 The toxicity of extracts against Artemia salina was studied. The extracts were no toxic 509 at

the assayed concentration range on this test organism. The mutagenicity was 510 evaluated by the

Ames assay. In a series of experiments preceding the mutagenicity 511 studies, it was ascertained

that the amounts of phenolic compounds added to the S. 512 thyphimurium culture do not

influence their viability (data not shown). None of the 513 preparations were mutagenic in strains

TA98 or TA100 under the conditions used in this 514 assay which indicates the inexistence of

mutagens that cause base substitution (detected 515 in TA100) and frameshift (detected in TA98)

mutations. The absence of mutagenicity 516 for the chilto preparations studied in the Salmonella

tested strains indicates that DNA 517 does not seem to be a relevant target for phenolic

components of chilto.

518 3.6. Identification of polyphenolics

519 The HPLC-ESI-MS/MS analysis of the samples (Figure 1, Table 3) allowed the 520 tentative
identification of 31 constituents, including 12 caffeic acid derivatives and 521 related phenolics

(compounds 1-5, 8-11, 13, 14 and 16), 10 rosmarinic acid (RA) 522 derivatives (compounds 15,

18, 21-24, 28-31), and 7 flavonoids (compounds 6, 12, 19-

21
523 20, 25-27). Selected ion chromatograms were used to identify the main constituents and 524

related compounds in the extracts. The ions at m/z 179, 301, 353 and 359 amu were 525 used for

the caffeoyl, quercetin, caffeoylquinic acid and rosmarinic acid derivatives, 526 respectively.

Identification of the constituents was supported by literature (Espin, 527 González-Manzano,

Taco, Poveda, Ayuda-Durán, González-Paramas & Santos-Buelga, 528 2016; Wu, Meyer,

Whitaker, Litt & Kennelly, 2013) as well as by comparison with 529 standards when available.

The mass spectra of compounds 1, 3, 10 and 14 with a [MH]-

530 ion at m/z 341 shows 531 neutral loss of 162 atomic mass units (amu), leading to the base

peak at m/z 179, in

agreement with caffeoyl hexosides. The compounds 4, 9, 11 and 13 presented a [MH]- 532

533 ion at m/z 353 amu and the loss of hexose, with a base peak at m/z 191 and were 534

identified as isomeric caffeoyl quinic acids. Compounds 5 and 8 with m/z of 515 and 535 677 amu,

respectively, losses a neutral fragment of m/z 162 (compound 5) or two 536 hexose units

(compound 8) leading to a base peak at 353 amu. The compounds were 537 identified as

caffeoylquinic acid hexoside 5 and caffeoylquinic acid dihexoside 8, respectively. Compound 2

with m/z of 689 shows MS2

538 ions at m/z 515, 353 and 173 and was assigned as a dicaffeoylquinic acid derivative.

Compound 7 with a [MH]- 539 ion at 540 m/z 583 shows a neutral loss of 198 leading to a base

peak at 385 amu. While a compound with deprotonated ion [MH]-

541 at m/z 385 amu was described for the Ecuador 542 sample of tree tomato and identified as

dehydrodiferulic acid, the compound from the 543 Argentinean fruit should be isolated to establish

unambiguously the identity by spectroscopic means. The compound 16 with a [MH]-

544 ion at m/z 401 shows a neutral 545 loss of 48 amu leading to a base peak at 353 amu and was

tentatively assigned as a 546 caffeoylquinic acid derivative. Compound 17 was assigned as

sinapoyl hexoside based 547 on the neutral loss of 162 amu, leading to the base peak at m/z 223.

The mass spectra of

22
548 compounds 18, 21, 22, 24, 28 and 29 shows a base peak at m/z 359, in agreement with 549

rosmarinic acid, previously identified in tree tomato by Espin et al. (2016). Compounds 550 21, 22

and 28 (521 amu) shows the neutral loss of 162 amu and were identified as rosmarinic acid

hexosides while compound 24 ([MH]- 551 ion at m/z 637) show the loss of 552 a malonyl and a

hexose and was identified as rosmarinic acid malonyl hexoside. The 553 compound 18 shows the

loss of two hexose units and was identified as rosmarinic acid dihexoside. The mass spectrum of

compound 15 show a [MH]-

554 ion at m/z 375, differing 555 in 16 atomic mass units (amu) from rosmarinic acid and show a

base peak at 179 amu, 556 being assigned as hydroxyrosmarinic acid. Compound 29 is in

agreement with 557 rosmarinic acid while 31 differs in 16 amu, in agreement with isorinic acid.

The compound 23 with a [MH]-

558 ion at m/z 505 show neutral loss of a hexose leading to a 559 base peak at m/z 343 and was

tentatively assigned as isorinic acid hexoside. The compound 30 ([MH]-

560 ion at m/z 727) presented the loss of a hexose and further 561 fragmented to a m/z 359 ion,

being assigned as rosmarinic acid hexoside derivative. 562 The mass spectra of the compounds 19,

20, 25 and 27 shows neutral loss of 146 563 (rhamnose), 308 (rutinose), 162 (hexose) and 176

atomic mass units (glucuronic acid), 564 respectively, leading to a base peak at m/z 301, in

agreement with quercetin. The 565 compounds were assigned as quercetin rhamnoside, rutinoside,

hexoside and glucuronide, respectively. The compounds 6 and 26, with a [MH]-

566 ion at m/z419 and 567 593 shows a neutral loss of 132 and 308 amu, respectively, leading to a

base peak at 568 m/z287 and 285, in agreement with dihydrokaempferol and kaempferol,

respectively. 569 The compounds were tentatively identified as dihydrokaempferol pentoside and

570 kaempferol rutinoside, respectively. The compound 12 showed the loss of pentose unit, 571

leading to the m/z 269 ion, being assigned as apigenin pentoside. The tentative
 23
572 identification of compounds 1-31 is summarized in Table 3. The main compounds 573

detected in the samples were caffeoylquinic acid and rosmarinic acid. 574 Selected ion

chromatogram analysis was carried out for the identification of the main 575 phenolics of S.

betaceum PEE, according to the two major groups of constituents 576 reported for S. betaceum

fruit, namely caffeoylquinic acid derivatives and rosmarinic 577 acid (RA)-related compounds

(Espin et al., 2016). In our study, additional compounds 578 and some flavonoid glycosides were

identified. The chromatograms of the pulp, skin 579 and seeds extract (Figure 1) showed the same

main compounds as identified by Espin 580 et al. (2016) but also constituents that are reported for

the first time for this fruit. 581 The compound 23 was tentatively identified as isorinic acid

hexoside. Isorinic acid 582 differs from rosmarinic acid in one hydroxyl function and has been

reported from 583 several plant species (Dictionary of Natural Products on DVD, 2016).

Caffeoylquinic 584 acids, rosmarinic acid and its derivates, are characterized as natural

antioxidants and 585 potential natural anti-diabetic and anti-obesity compounds, because are

inhibitors of α 586 glucosidase and amylase (McCue & Shetty, 2004; Chen, Mangelinck, Ma,

Wang, Li, 587 De Kimpe, 2014; Ghani, 2015) and inhibitors of lipase (Mohamed 2014).

Therefore, it 588 is also feasible that the effect of chilto extracts on enzyme related to metabolic

589 syndrome could be attributed to caffeoylquinic and rosmarinic acids (CQA and RA) and 590

its derivatives present in the extracts. In previous papers, it was demonstrated that 591 phenolic

substances that are able to form quinones (ie caffeic acid, chlorogenic acid, 592 gallic acid, etc) are

more reactive than those phenolics that cannot form quinones, and 593 Rohn, Rawel & Kroll

(2002) suggested that semi-quinones formed may react with 594 amino acid side chains and free

thiol groups on the enzyme. In the chilto extract, the 595 antioxidant flavonoid rutin, with suitable

pharmacokinetic properties was detected. 596 Rousselot (2004) stated that improved antioxidant

status may be one mechanism by

24
597 which dietary antioxidant treatment contributes to the prevention and reduction of 598 diabetic

complications. In other Solanaceae fruits including Solanum esculentum, CQA 599 and RA were
not found. However, phenolic acids like gallic acid, chlorogenic acid and 600 its derivatives,

caffeic acid, syringic acid, p-coumaric acid and its derivatives have been 601 reported (Navarro-

González, García- Valverde, García-Alonso & Periago, 2011; Liu et 602 al., 2012). The flavonoids

rutin, myricetin, quercetin, kaempferol and enantiomers of 603 naringenin were identified in

tomato seed (Torres, Davies, Yañez, & Andrews, 2005; 604 Peng, Zhang, & Ye, 2008) while rutin,

naringenin, and rutin derivatives were described 605 in tomato peel (Navarro-González et al.,

2011).The dihydrochalcone phloretin 3′,5′-di 606 C-β-glucopyranoside and the flavonol quercetin

3-O-(2″-O-β-apiofuranosyl-6″-O

607 rhamnopyranosyl-glucopyranoside were reported in whole tomato fruits (Slimestad, 608

Fossen & Verheul, 2008). All tomatoes fruit fractions showed antioxidant activity (Toor 609 &

Savage, 2005; Navarro González et al., 2011; Liu et al., 2012). 610 Under our experimental

conditions, the percent recovery of the reference compounds 611 chlorogenic acid and rosmarinic

acid were in the range 96-100% and 100-105% for 612 chlorogenic acid and rosmarinic acid,

respectively. The content of the main phenolics, 613 expressed as mg/100 g extract were as

follows. For the 3-caffeoylquinic acid 614 (compound 11, Figure 1 and Table 3): 1724.1 ± 80.7,

1324.8 ± 49.6 and 1663.4 ± 4.5 in 615 the skin, pulp and seed extract, respectively. The content of

rosmarinic acid (compound 616 29) was 871.8 ± 3.5, 497.8 ± 6.8 and 345.1 ± 10.6 for skin, pulp

and seed extract, 617 respectively. Other derivatives identified by HPLC-MS were present in

amounts below 618 the LOQ and thus were not included in the quantification (ICH, 2005,

accessed 619 11.06.2016). For the samples from Ecuador, Espin et al. (2016) reported values

ranging 620 from 25.04 to 163.62 mg/100 g dry weight for 3-O-caffeoylquinic acid (CQA) and

621 12.22 to 121.89 mg/100 g dry weight for rosmarinic acid (RA), respectively.

25
622 Conclusions

623 The dry powder of Argentinian chilto is a potential source of the biologically active 624

phenolic CQA and RA. When referred to dry fruit part and percent of the total fruit, the 625 skin,

pulp and seed can be considered a good alternative to obtain a dietary supplement 626 or
functional food with nutraceutial potential, a potential source of dietary fiber and 627 bioactive

compounds. Additional studies are necessary to disclose the potential of the 628 waste material

from chilto processing to improve metabolic syndrome, including 629 clinical trials. Following the

guidelines of FAO and Biodiversity International (formerly 630 the International Plant Genetic

Resources Institute), this study will contribute to bring 631 new insight in the research field of

Argentina biodiversity principally underutilized 632 genetic resources that could be used as non

conventional food.

633

634

635 ACKNOWLEDGEMENTS

636 This research was supported by grants from: ARCOR Award to Technological 637

Innovation (Argentina) in Edition 2015, Secretaria de Ciencia, Arte e Innovación 638 Tecnológica

de la Universidad Nacional de Tucumán, Argentina (SCAIT-UNT), 639 Consejo Nacional de

Investigaciones Científicas y Técnicas, Argentina (CONICET), 640 Agencia Nacional de

Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT), FONDECYT 641 1120096 (Chile) and PIEI-

QUIM-BIO, Universidad de Talca.

642

643

644 References
645
646 Acosta-Quezada, PG, Raigón, MD, Riofrío-Cuenca, T., García-Martínez, MD, 647 Plazas, M.,

Burneo, M., Figueroa, JG, Vilanova, S. & Prohens, J. (2015).

26
648 Diversity for chemical composition in a collection of different varietal types of 649 tree

tomato (Solanum betaceum Cav.), an Andean exotic fruit. Food Chemistry, 650 169, 327-335.

651 AOAC. (2005). Association of Official Analytical Chemists. In Official Methods of 652

Analysis (18th ed.). Gaithersburg, Maryland

653 AOAC. (2000). Association of Official Analytical Chemists. In Official Methods of 654
Analysis Chemists (17th ed.). Washington DC.

655 Barros, L., Heleno, S., Carvalho, A., & Ferreira, I. (2010). Lamiaceae often used in 656

Portuguese folk medicine as a source of powerful antioxidants: vitamins and 657 phenolics.

Food Science and Technology, 43, 544-550.

658 Birari, R., & Bhutani, K. (2007). Pancreatic lipase inhibitors from natural sources: 659

unexplored potential. Drug Discovery Today, 12, 879–889 660 Chen, J., Mangelinck, S., Ma, L.,

Wang, Z., Li, W., & De Kimpe,N. (2014). 661 Caffeoylquinic acid derivatives isolated from the

aerial parts of Gynura divaricata 662 and their yeast α-glucosidase and PTP1B inhibitory activity.

Fitoterapia, 99, 1–6. 663 Costamagna, MS, Ordoñez, RM, Zampini, IC, Sayago, JE, & Isla, MI

(2013). 664 Nutritional and antioxidant properties and toxicity of Geoffroea decorticans, an 665

Argentinean fruit and products derived from them (flour, arrope, decoction and 666 hydroalcoholic

beverage). Food Research International, 54, 160-168. 667 Costamagna, MS, Zampini, IC,

Alberto, MR, Cuello, AS, Torres, S., Pérez, J., 668 Quispe, C., Schmeda-Hirschmann G., & Isla,

MI (2016). Polyphenols rich 669 fraction from Geoffroea decorticans fruits flour affects key

enzymes involved in 670 metabolic syndrome, oxidative stress and inflammatory process. Food

Chemistry, 671 190, 392-402.

27
672 De Rosso, VV, & Mercadante, AZ (2007). HPLC-PDA-MS/MS of anthocyanins and 673

carotenoids from Dovydalis and tamarillo fruits. Journal of the Agricultural and 674 Food

Chemistry, 55, 9135-9141.

675 Dictionary of Natural Products on DVD (2016). CRC Pers; Boca Raton, FL, USA. 676 Espin,

S., Gonzalez-Manzano, S., Taco, V., Poveda, C., Ayuda-Durán, B., Gonzalez 677 Paramas, AM,

& Santos-Buelga, C. (2016). Phenolic composition and 678 antioxidant capacity of yellow and

purple-red Ecuadorian cultivars of tree tomato 679 (Solanum betaceum Cav.). Food Chemistry,

194, 1073-1080. 680 Gancedo, MC, & Luh, B. (1986). HPLC analysis of organic acids and sugars

in 681 tomato juice. Journal of Food Science, 51(3), 571–573.

682 Ghani, U. (2015). Re-exploring promising α-glucosidase inhibitors for potential 683

development into oral anti-diabetic drugs: Finding needle in the haystack. European 684 Journal

of Medicinal Chemistry, 103, 133-162.

685 Grau, A., & Brown, AD (2000). Development threats to biodiversity and opportunities 686 for

conservation in the mountain ranges of the upper Bermejo River Basin, NW 687 Argentina and

SW Bolivia. Ambio, 29, 432–439.

688 Gondoin, A., Grussu, D., Stewart, D., & McDougall, G. (2010). White and green tea 689

polyphenols inhibit pancreatic lipase in vitro. Food Research International, 43, 690 1537–1544.

691 González-Castejón, M., & Rodríguez-Casado, A.(2011). Dietary phytochemicals and 692 their

potential effects on obesity: A review. Pharmacological Research, 64, 438- 693 455.

694 Grove, KA, Sae-tan, S., Kennett, MJ, & Lambert, JD (2012). (-)-Epigallocatechin-3- 695

gallate inhibits pancreatic lipase and reduces body weight gain in high fat-fed obese 696 mice.

Obesity (Silver Spring), 20, 2311-2313.

28
697 Guil-Guerrero, JL, & Rebolloso-Fuentes, MM (2009). Nutrient composition and 698

antioxidant activity of eight tomato (Lycopersicon esculentum) varieties. Journal of 699 Food

Composition and Analysis, 22, 123–129

700 Hurtado, NH, Morales, AL, González-Miret, ML, Escudero-Gilete, ML, & 701 Heredia, FJ

(2009). Colour, pH stability and antioxidant activity of anthocyanin 702 rutinosides isolated from

tamarillo fruit (Solanum betaceum Cav.). Food Chemistry, 703 117, 88–93.

704 ICH. Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology; ICH Harmonised 705

Tripartite Guideline, 2005; http://www.ich.org/fileadmin/ Public_Web_Site/ ICH_ 706

Products/Guidelines/Quality/Q2_R1/Step4/Q2_R1Guideline.pdf(accessed 707 11.06.2016).

708 Inoue, KH, & Hagerman, AE (1988). Determination of gallotannins with rhodanine. 709

Analytical Biochemistry, 169, 363–369.

710 Isla, MI, Ordóñez, RM, Nieva Moreno, MI, Vattuone, MA, & Sampietro, AR 711 (2002).

Inhibition of hydrolytic enzyme activities and plant pathogen growth by 712 invertase inhibitors.
Journal of Enzyme Inhibition, 17, 37-43. 713 Lee, J., Durst, RW, & Wrolstad, RE (2005).

Determination of total monomeric 714 anthocyanin pigment content of fruits juices, beverages,

natural colorants, and 715 wines by the pH differential method: collaborative study. Journal of

AOAC 716 International, 88, 1269-1278.

717 Levine, M., Wang, Y., Padayatty, S., & Morrow, J. (2001). A new recommended 718 dietary

allowance of vitamin C for healthy young women. Procceding of National 719 Academy of

Sciences, 98 (17), 9842-9846.

720 Liu, CH, Cai, LY, Lu, XY, Han, XY, Xiao, X. & Ying, TJ (2012). Effect of 721

postharvest UV-C irradiation on phenolic compound content and antioxidant

29
722 activity of tomato fruit during storage. Journal of Integrative Agriculture, 11(1), 723 159-

165.

724 Manach, C., Scalbert, A., Morand, C., Rémésy, C., & Jiménez, L. (2004). Polyphenols: 725

food sources and bioavailability. American Journal of Clinical Nutrition, 79, 727- 726 747.

727 Maron, DM, & Ames, BN (1983). Revised methods for the Salmonella mutagenicity 728 test.

Mutation Research, 113, 173–215.

729 McCue, P. & Shetty, K. (2004).Inhibitory effects of rosmarinic acid extracts on porcine 730

pancreatic amylase in vitro. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition, 13, 101- 731 106.

732 Mendes, L., de Freitas, V., Baptista, P., & Carvalho, M. (2011). Comparative 733

antihemolytic and radical scavenging activities of strawberry tree (Arbutus unedo 734 L.) leaf and

fruit. Food and Chemical Toxicology, 49, 2285-2291. 735 Mertz, C., Brat, P., Caris-Veyrat, C., &

Gunata, Z. (2010). Characterization and thermal 736 lability of carotenoids and vitamin C of

tamarillo fruit (Solanum betaceum Cav.). 737 Food Chemistry, 119, 653-659.

738 Mohamed, S. (2014). Functional foods against metabolic syndrome (obesity, diabetes, 739

hypertension and dyslipidemia) and cardiovasular disease. Trends in Food Science 740 &

Technology, 35, 114-128.

741 Mohamed, GA, Ibrahim, SRM, Elkhayat, ES & El Dine, RS (2014). Natural 742 anti-obesity
agents Bulletin of Faculty of Pharmacy, Cairo University, 52, 269– 743 284.

744 Navarro-González, I., García-Valverde, V., García-Alonso, J., & Periago, MJ (2011). 745

Chemical profile, functional and antioxidant properties of tomato peel fiber. Food 746 Research

International, 44, 1528–1535.

30
747 Ordóñez, RM, Vattuone, MA, & Isla, MI (2005). Changes in carbohydrate content 748 and

enzymes related activity during Cyphomandra betacea Sendt. fruits maturation. 749 Postharvest

Biology and Technology, 35, 293-301.

750 Ordóñez, RM, Ordóñez, AAL, Nieva Moreno, MI, Sayago, JE, & Isla, MI 751 (2006).

Antimicrobial activity of glycosidase inhibitory protein isolated from 752 Cyphomandra betacea

Sendt fruits. Peptides, 27, 1187-1191. 753 Ordóñez, RM, Cardozo, ML, Zampini, IC, & Isla, MI

(2010). Evaluation of 754 antioxidant activity and genotoxicity of alcoholic and aqueous

beverages and 755 pomace derived from ripe fruits of Cyphomandra betacea Sendt. Journal of

756 Agricultural and Food Chemistry, 58, 331-337.

757 Osorio, C., Hurtado, N., Dawid, C., Hofmann, T., Heredia-Mira, F., & Morales, A. 758

(2012). Chemical characterisation of anthocyanins in tamarillo (Solanum betaceum 759 Cav.) and

Andes berry (Rubus glaucus Benth.) fruits. Food Chemistry 132, 1915– 760 1921.

761 Peluso, I. & Palmery M. (2015). Review Flavonoids at the pharma-nutrition interface: Is 762 a

therapeutic index in demand?. Biomedicine & Pharmacotherapy, 71, 102–107. 763 Peng, Y.,

Zhang, Y., & Ye, J. (2008). Determination of phenolic compounds and 764 ascorbic acid in

different factions of tomato by capillary electrophoresis with 765 electrochemical detection.

Journal of Agricultural and Food Chemistry, 56, 766 1838- 1844.

767 Phillips, K, Council-Troche, M., McGinty, R., Rasor, A. & Tarrago-Trani, M. (2016). 768

Stability of vitamin C in fruit and vegetable homogenates stored at different 769 temperatures.

Journal of Food Composition and Analysis, 45, 147–162. 770 Prior, RL, Fan, E., Ji, H., Howell,

A., Nico, C., Payne, MJ,& Reed, J. (2010). 771 Multilaboratory validation of a standard method

for quantifying proanthocyanidins

 31
772 in cranberry powders. Journal of the Science of Food and Agriculture, 90, 1473- 773 1478.

774 Re, R., Pellegrini, N., Proteggente, A., Pannala, A., Yang, M., & Rice-Evans, C. (1999). 775

Antioxidant activity applying an improvet ABTS radical cation decoloration assay. 776 Free

Radical Biological Medicinal, 26, 1231-1237.

777 Rodríguez-Amaya, DB (1999). A guide to carotenoid analysis in foods. ILDI Press: 778

Washington DC.

779 Rohn, S., Rawel, HM, Kroll, J. (2002). Inhibitory effects of plant phenols on the 780

activity of selected enzymes. Journal of Agricultural and Food Chemistrty,50, 781 3566-

3571.

782 Rousselot, DB (2004). The role of antioxidant micronutrients in the preventionof 783

diabetic complications. Treatments in Endocrinology, 3, 41–52. 784 Schotsmans, WC, East,

A. & Woolf, A. (2011). Tamarillo (Solanum betaceum 785 (Cav.)), Postharvest biology and

technology of tropical and subtropical fruits. 786 Woodhead Publishing Limited. 427-441

787 Singleton, VL, Orthofer, R., & Lamuela-Raventos, RM (1999). Analysis of total 788 phenols

and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu 789 reagent. Methods

in Enzymology, 299, 152-178.

790 Slimestad, R., Fossen, T., & Verheul M. (2008). The flavonoids of tomatoes. Journal of 791

Agricultural and Food Chemistry, 56, 2436–2441.

792 Svensson, BM, Mathiasson, L., Martensson, L. & Bergatröm, S. (2005). Artemia 793

salina as test organism for assessment of acute toxicity of leachate water from 794 landfills.

Environmental Monitoring and Assessment, 102, 309-321.

32
795 Tenore, GC, Campiglia, P., Giannetti, D., & Novellino, E. (2015). Simulated 796

gastrointestinal digestion, intestinal permeation and plasma protein interaction of 797 white, green,
and black tea polyphenols. Food Chemistry 169, 320–326 798 Toor, RK, & Savage, GP (2005).

Antioxidant activity in different fractions of 799 tomatoes. Food Chemistry, 38, 487-494.

800 Torres, CA, Davies, NM, Yañez, JA, & Andrews, PK (2005). Disposition of 801 selected

flavonoids in fruit tissues of various tomato (Lycopersicon esculentum 802 Mill.) genotypes.

Journal of Agricultural and Food Chemistry, 53, 9536-9543.

803 Usenik, V., Štampar, F., & Veberic, R. (2009). Anthocyanins and fruit colour in plums 804

(Prunus domestica L.) during ripening. Food Chemistry 114, 529–534 805 Vasco, C., Avila, J.,

Ruales, J., Svanberg, U. &, Kamal-Eldin, A. (2009). Physical and 806 chemical characteristics of

golden-yellow and purple-red varieties of tamarillo fruit 807 (Solanum betaceum Cav.).

International Journal of Food Science and Nutrition, 808 60 , 278–288 .

809 Vasco, C., Ruales J, & Kamal-Eldin, A. (2008). Total phenolic compounds and 810

antioxidant capacities of major fruits from Ecuador. Food Chemistry, 111, 816 – 811 823.

812 Wu, SB, Meyer, RS, Whitaker, BD, Litt, A., & Kennelly, EJ (2013). A new 813 liquid

chromatography-mass spectrometry-based strategy to integrate chemistry, 814 morphology,

and evolution of eggplant (Solanum) species. Journal of 815 Chromatography A, 1314, 154-

172.

816 Zhishen, J., Mengcheng, T., & Jianming, W. (1999). The determination of flavonoid 817

contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals. Makanan 818

Chemistry, 64, 555-559.

819
33
820 Figures

821 Figure 1. HPLC chromatograms of the phenolic-enriched extracts of Argentinean 822

Solanum betaceum skin (A), pulp (B), and seed(C) powder. Detection: UV, 280 nm (in blue) and

total ionic current-all MSn

823 (in black). Peak identification is given in 824 Table 3.

825
 34
826 Table1: Nutritional and phytochemical composition of Argentinean Solanum betaceum 827

seeds, pulp and skin powder.

828

Phytochemical and minerals content Whole fruits Skin Pulp Seeds

Dry extract (g/100 g fresh fruit) 684.5±22.0a523.8±3.0b415.2±4.0c179.4±3.0d

Yield (g skin, pulp and seed powder/100 g fresh fruits) Total
phenolic 157.69±9.0d265.70±3.60a223.80±2.90b175.62±3.10c
(mg GAE/100 g of powder) Flavone and flavonol (mg
QE/100 g of powder) Anthocyanins 1.78±0.50a1.01±0.01a ND ND
(mg C-3GE/100 g of powder)
Ascorbic acid
(mg AA/100 g of powder) Carotenoids 117.0±10.2a51.1±2.1c 84.1±2.0b56.8±2.3c 1.41±0.09a 1.37±0.09a
(g β carotene/100 g of powder)
0.41 1.30 2.34 - 2.18 6.19 5.2 0.93±0.05b 0.53±0.03c

Total sugar (g GE/100 g of powder) 9.11 ± 1.50ab 2.23±0.50c 7.62±1.90b 11.91±2.00a

Glucose (g/100 g of powder) 2.49±0.03a2.72±0.01a1.04±0.01c1.91±0.03b

Fructose (g /100 g of powder)
Sucrose (g/100 g of powder) 8.10±0.03a7.85±0.02a3.23±0.05c6.82±0.01b 0.16± 0.02a
Soluble Protein (g/100 g of powder)
0.99±0.08a0.92±0.02a0.40±0.01c0.79±0.03b 0.13±0.01ab 0.11±0.01b 0.15±0.01a

Total Protein (g /100 g) 18.95±1.50b8.84±1.00d 12.95±1.00c 20.95±1.80a

Fat (g/100 g of powder) 0.20± 0.02bc 0.21±0.01b 0.15±0.01c 0.31±0.03a

Fiber(g/100 g of powder ) 16.00±1.00c23.46±2.00ab 19.04±1.90bc 28.42±3.20a

Yield (% , g powder/100 g fresh fruits or skin, pulp, seed) 13.00±1.00b24.04±3.20a 12.02±2.50b 13.28±1.80b
Minerals (mg/100 g of powder)

Na - 15.40±1.40ab 16.30±1.00a13.20±0.70b Mg - 136.60±8.30c 170.60±6.00b 243.60±10.50ª K -

3892.30±190.70b4975.70±213.00a4073.20±214.70b Ca - 247.90±21.80a 133.03±3.60b 111.20±8.20b Fe -
2.70±0.10b2.10±0.70b4.40±0.20a
35
Cu - 0.20±0.01c 0.50±0.02b 0.70± 0.02ª Zn - 0.80±0.04b1.00±0.06ab 1.90±0.03a 829
830 The protein, sugars, fat and all phytochemical concentrations are expressed in 100 g of 831
powder obtained from whole fruits, skin, pulp or seeds according to the fruit part 832 analyzed.
ND: no detected. Different letters (a, b, c, d) in the same line in 833 phytochemical analysis and
(a,b,c) in the mineral analysis show significant differences 834 in the content among each part of
fruits according to Tukey's test (p ≤ 0.05). 835
836
 36
837
838 Table 2: Effect of polyphenols enriched extract of seeds, pulp and skin powder from 839

Argentinean Solanum betaceumbefore and after simulated gastroduodenal 840 digestion(GD)and

reference compounds on enzymes related to carbohydrate 841 metabolism, fat metabolism and

oxidative processes.

842

S. betaceumfl our IC50(µg GAE/mL) SC50 (µg GAE/mL)

IC50 (µg GAE/mL)

Enzyme of metabolicsíndrome ABTS AAPH

α amylase α glucosidase
Lipase

Seeds Before GD After GD 7.0±1.5A 13.5±0.4A 4.6±0.3A 5.80±0.03 A

19.4±2.0b5.1±0.5a 5.3±0.5a 1.38±0.05c 0.91±0.05b 1.21±0.02ª

Pulp Before GD 15.0±1.0a11.0±1.1b 14.0±1.4 c 1.09±0.10b0.40±0.03a

After GD 22.5±1.0 B 17.4±0.9B 15.2±1.6 B 1.20±0.07 B 0.52±0.06b

Skin Before GD 0.8±0.1a 0.50±0.0a After GD 18.1±1.3 C

13.5±1.2a10.5±1.0b 11.7±1.1 b 17.5±0.8B 7.9±0.9C 0.70±0.03 C
0.87±0.01c

Reference compound Acarbose Acarbose Orlistat BHT BHT

0.65±0.01 843 (µg/mL) 25.00 ± 1.00 0.08±0.0 1 55.00±0.1 0
IC50 1.25±0.1 0

844 SC50: Concentration of polyphenolic extract necessary to scavenge 50% of ABTS; 845 IC 50 :
Concentration of polyphenolic extract necessary to inhibit 50% of oxidative 846 hemolysis or
enzyme activity. Different letters (a, b, c or A, B,C) in the same column in
37
847 each assay show significant differences among effect of polyphenols on enzyme activity 848
according to Tukey's test (p ≤ 0.05). 849
850
851

852

853

38
854
855 Table 3.Tentative identification of phenolics in Argentinean Solanum betaceumfruit 856 pulp,

skin and seedpowder extracts.

 Peak Rt(min) [MH]- MS2 Tentativeidentification 1 5.5 341 179 (100), 161 (27) Caffeoylhexoside

2 8.0 689 515 (100), 353 (25), 173 (100) Dicaffeoylquinicacidderivative 3 9.9 341 179 (100) Caffeoylhexoside 4
17.5 353 191 (100), 179 (42) Caffeoylquinicacid

5 17.6-20.1 515 455 (40), 425 (36), 353 (100), 191 (21) Caffeoylquinicacidhexoside

6 18.3 419 387 (80), 287 (100), 255 (60) Dihydrokaempferolpentoside 7 18.4 583 385 (100) Unkwon

8 19.5 677 353 (100), 191 (5) Caffeoylquinicaciddihexoside

9 20.3 353 191 (100), 179 (19), 173 (3) Caffeoylquinicacid 10 20.6 341 179 (100), 135 (17)
Caffeoylhexoside

11 21.0-23.3 353 353 (100), 191 (92) 3-Caffeoyl quinicacid * 12 23.4 401 269 (100), 160 (44)
Apigeninpentoside 13 23.6 353 191 (100) Caffeoylquinicacid

14 24.2 341 179 (100) Caffeoylhexoside 15 24.2 375 179 (100) Hydroxyrosmarinicacid 16 25.8 401 353 (100)

Caffeoylquinicacidderivative

17 26.8 385 247 (56), 223 (100), 205 (21) Synapoylhexoside 18 44.6 683 521 (100), 359 (100)
Rosmarinicaciddihexoside

19 44.8-44.9 447 301 (100) Quercetinrhamnoside 20 45.6-46.0 609 301 (100) Rutin (Quercetinrutinoside)* 21

45.8-46.5 521 359 (100) Rosmarinicacidhexoside 1 22 47.2-47.5 521 359 (100) Rosmarinicacidhexoside 2 23

47.3-47.4 505 343 (100) Isorinic acid hexoside 24 47.3-47.4 637 521 (100), 359 (11)

Malonylrosmarinicacidhexoside 25 48.2 463 301 (100) Quercetinhexoside 26 48.4 593 285 (100)

Kaempferolrutinoside 27 48.6 477 301 (100) Quercetinglucuronide 28 49.0 521 359 (100)

Rosmarinicacidhexoside 29 55.1-56.0 719 359 (100), 197 (18), 179 (27), 161 (100) 2M-H, Rosmarinicacid*

39
30 63.3 727 565 (100), 359 (26) Rosmarinicacidhexosidederivativ e
31 64.0 343 179 (100) Isorinicacid

857 *Identified by comparison with standards.

858

859
 40
860 Figure 1. 25

861
Intens.
5
x10 12-16 0

862 863 3
Intens. 866 x105

1.5
2
6 7 8 9 10 20
864
A 19
45
3 18
B
26-28
1
11
29

17 21 22 23 24
1
23 24
2 865
867 11
29
1.0 19
868 2 21 22 25
1 45
3 18 17
12-16

0.5 2 13-16 21
869 6 7 8 9 10 20 26-28
0.0
870
Intens. [mAU]

871 1000 11

872 29
19
C
500 1 3
873 0 12
23-28 22 6 7 8 9 10 20
874 17
4 518

10 20 30 40 50 875

876

877

878

879

880
 41
881 Lyophilized powder from skin, pulp and seed of Solanum betaceum were investigated 882

The nutritional composition was assessed by standard methods 883 The extracts were evaluated

on key enzymes to metabolic syndrome 884 The main phenolics were rosmarinic acid and

caffeic acid derivatives 885 The phenolic-enriched extracts inhibited the α-glucosidase, α-

amylase and lipase 886

887

888

889

890

891

892

893

42