BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Gemfibrozil (Permata), 5-(2,5-dimethylphenoxy)-2,2-dimethylpentanoic acid,

adalah turunan benzena dari asam valerat (struktur kimia yang disediakan dalam data
tambahan) milik kelompok obat yang dikenal sebagai fibrat. Ini telah menjadi pilihan
klinis untuk hiperlipidemia (tipe III) dan hipertrigliseridemia (tipe IV) dan telah
ditemukan untuk menurunkan trigliserida serum dan lipoprotein-kolesterol densitas
sangat rendah dan untuk meningkatkan lipoprotein-kolesterol densitas tinggi oleh
mengaktifkan reseptor aktif proliferator peroksisom (PPARs), bertindak terutama pada
isoform PPARα . Karena sifat fisikokimianya Gem adalah molekul kecil dengan
kelarutan air yang buruk, sekitar 0,01 mg mL−1 dan laju disolusi yang rendah di saluran
pencernaan, yang membatasi penyerapan dan bioavailabilitas efektifnya setelah
pemberian oral. Dengan demikian, dapat diasumsikan bahwa rendahnya bioavailabilitas
Permata secara oral disebabkan oleh keterbatasan kelarutan dan disolusinya .Saat ini,
bentuk farmasi Gem yang beredar di pasaran adalah tablet dan kapsul.
Dalam penelitian kami sebelumnya , sistem penghantaran obat self-
nanoemulsifying (SNEDDS) digunakan untuk mengatasi tantangan meningkatkan tingkat
dan tingkat penyerapan Permata, di mana bahan aktif dimuat dalam fase berminyak.
SNEDDS Permata ini menunjukkan banyak kesulitan untuk dianalisis melalui teknik
yang paling banyak dilaporkan, kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dengan deteksi
ultraviolet pada 276 nm karena eksipien yang termasuk dalam formulasi. SNEDDS
adalah campuran isotropik obat, lipid dan surfaktan, biasanya dengan satu atau lebih ko-
pelarut hidrofilik atau ko-emulsifier yang membentuk minyak halus dalam nanoemulsi air
pada agitasi ringan dalam media berair dengan ukuran tetesan berkisar 20-200 nm.
Proporsi curah yang berbeda dari komponen campuran dan sifat fisiknya (seperti ukuran
partikel) dan penggunaan bahan yang berbeda (seperti eksipien yang berbeda)
menghasilkan perubahan sinyal dari bahan aktif .
Spektrofluorometri telah lama diterapkan di bidang analisis farmasi dari banyak
obat, menjadi syarat yang diperlukan untuk suatu senyawa berfluoresensi sehingga ia
menyerap cahaya di daerah spektrum UV atau tampak. Sebagian besar aditif atau eksipien
yang ditemukan dalam sediaan farmasi tidak bersifat fluoresen, tetapi senyawa yang
memiliki sistem elektron terkonjugasi dapat memberikan emisi kembali energi yang
diserap secara efisien. Dalam konteks ini, karakteristik fluoresensi Permata
memungkinkan penggunaan spektrofluorometri sebagai teknik deteksi. Ini adalah teknik
berdasarkan pengukuran intensitas fluoresen relatif dan distribusi panjang gelombang
cahaya fluoresen yang dipancarkan dari molekul tereksitasi melalui penyerapan energi
radiasi memberikan metodologi yang menarik karena sensitivitas, kecepatan, dan
kesederhanaan, memiliki rendah biaya dan memungkinkan penentuan Permata dengan
keandalan yang cukup. Farmakope Amerika Serikat (USP) ,dan Konferensi Internasional
tentang Harmonisasi (ICH) memberikan deskripsi yang jelas tentang prosedur analitis
yang mengatur parameter validasi, yang perlu dievaluasi. Parameter tersebut adalah:
akurasi, presisi (pengulangan, presisi menengah), spesifisitas, batas deteksi, batas
kuantifikasi, linieritas dan jangkauan. Oleh karena itu, tujuan dari pekerjaan ini adalah
untuk mengembangkan metode spektrofluorometrik yang akurat, spesifik dan dapat
direproduksi untuk penentuan Permata dalam bentuk sediaan farmasi SNEDDS yang
sedang dipelajari dengan sensitivitas yang baik, preparasi sampel yang relatif sederhana,
dan waktu jangka pendek.

1.2 Rumusan Masalah

1. Apa pengertian dan bagian-bagian dari Metode spektrofluorometri
2. Bagaimana Metode spektrofluorometrik tervalidasi untuk penentuan gemfibrozil
dalam sistem penghantaran obat nanoemulsifikasi diri (SNEDDS)
1.3 Tujuan
Untuk mengetahui pengertian dan bagian-bagian dari Metode Spektrofluorometri dan
mengetahui cara dan hasil dari penentuan gemfibrozil dalam sistem penghantaram obat
nanoemulsifikan diri(SNEDDS) menggunakan metode spektrofluorometri.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Definisi Spektrofluorometri

Spektrofluorometri fluorosensi adalah merupakan suatu metode yang

menggunakan pengukuran intensitas cahaya fluorosensi dengan membandingkan
intensitas cahaya fluorosensi yang dipancarkan oleh zat uji dan oleh suatu baku
pembanding tertentu. Spektrofluorometri adalah instrumen yang memanfaatkan sifat
fluoresen dan beberapa senyawa yang berfluoresensi untuk memberi informasi mengenai
konsentrasi dan lingkungan kimia dalam sampel. Panjang gelombang eksitasi tertentu
dipilih untuk mendapatkan panjang gelombang emisi. Setelah dapat satu panjang
gelombang emisi yang baik maka emisi dapat teramati dengan baik pada panjang
gelombang tersebut. Sehingga dapat didapatkan intensitas panjang gelombang eksitasi
versus emisi yang dapat disebut dengan spektrum emisi (Lakowicz, 2006).

Pada Spektrofluorometri, spektrum eksitasi dan spektrum emisi dapat direkam

keduanya karena memiliki dua detektor. Spektrum emisi adalah distribusi panjang
gelombang dari suatu emisi yang diukur pada panjang gelombang eksitasi konstan
tunggal. Sebaliknya, sebuah spektrum eksitasi adalah ketergantungan intensitas emisi,
diukur pada panjang gelombang emisi tunggal, setelah dipindai panjang gelombang dari
eksitasi. Spektrum semacam itu dapat disajikan pada skala panjang gelombang atau skala
wavenumber.

Cahaya energi yang diberikan dapat digambarkan dalam istilah panjang gelombang
(λ), frekuensi (ν), atau wavenumber (Lakowicz, 2006). Pada umumnya emulsi hanya
dapat dilakukan oleh molekul-molekul yang bersifat luminesense. Namun, pada senyawa
yang nonluminense dapat berfluorosensi apabila direaksikan oleh senyawa tertentu yang
dapat menghasilkan senyawa luminense. Cahaya yang diemisikan oleh larutan
berfluorosensi mempunyai intensitas maksimun pada panjang gelombang radiasi eksitasi
(gelombang pita penyerapan sinar yang membangkitkannya).

Instrumentasi pegukuran intensitas fluorosensi dapa dilakukan dengan suatu

fluorometer filter sederhana. Instrument yang digunakan bermacam-macam mulai dari
yang paling sederhana (filter fluorometer) sampai ke yang sangat kompleks yaitu
spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995). Fluorosensi adalah energi yang dihasilkan
dari emisi. Fluorosensi berbeda dengan fosforosensi. Fluorosensi memiliki waktu hidup
yang lebih singkat dibanding dengan fosforosensi, karena fluorosensi dapat dihentikan
apabila cahaya fluorosensi dipadamkan (Lakowicz, 2006).

2.2 Prinsip Kerja Alat Spektrofluorometri

Interaksi antara senyawa dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang yang
sesuai yaitu antara 200-800 nm. Saat cahaya pada berbagai panjang gelombang menyinari
suatu zat, hanya cahaya pada panjang gelombang tertentu yang dapat diserap oleh zat
yaitu panjang gelombang yang sesuai. Serapan cahaya tersebut dapat mempengaruhi
gerak-gerak elektron pada suatu zat. Jika suatu zat menyerap cahaya UV atau sinar
tampak, akan terjadi perpindahan elektron zat tersebut ke tingkat energi yang lebih tinggi.
Elektron yang pada awalnya pada keadaan diam (good state) akan berpindah ke keadaan
tereksitasi (excited state). Keadaan ini dinamakan transisi elektronik. Prinsip lain menurut
Jablonski adalah energi emisi lebih rendah dibandingkan denganeksitasi. Ini berarti
bahwa emisi fluoresensi yang lebih tinggi terjadi pada panjang gelombang dari
penyerapan (eksitasi). Perbedaan antara eksitasi dan panjang gelombang emisi dikenal
sebagai pergeseran stoke(Vaberg, 2006).

2.3 Bagian-bagian Alat Spektrofluorometri

1. Sumber Energi Eksitasi

Banyak terdapat sumberradiasi. Lampu merkurirelatif stabil dan memancarkan

energi terutama pada panjang gelombang diskret. Lampu tungsten memberikan energi
kontinyu di daerah tampak. Lampu pancar xenon bertekanan tinggi sering kali digunakan
pada spektrofluorometer karena alat tersebut merupakan sebuah sumberdengan
intensitastinggi yang menghasilkan energi kontinyu dengan intensitas tinggi dari
ultraviolet sampai inframerah pendek digunakan kuvet dari silika. Kuvet tidak boleh
berfluoresensi dan tidak boleh tergores karena dapat menghamburkan.

2. Detektor

Pada umumnya, fluorometer menggunakan tabung-tabung fotomultiplier sebagai

detektor, banyak tipe dari jenis tersebut yang tersedia dan masing-masing mempunyai ciri
khusus yang berkenaan dengan daerah spektral dengan kepekaan maksimum,
menguntungkan dan derau secara elektrik. Arus foto diperbesar dan dibaca pada sebuah
meter atau perekam. Seperti pada spektrofotometri,detektor yang biasa digunakan adalah
‘fotomultiplier tube’ atau ‘thermocouple’. Pada umumnya, detektor ditempatkan di atas
sebuah poros yang membuat sudut 90˚Cdengan berkas eksitasi. Geometri sudut siku
inimemungkinkan radiasieksitasi menembus specimen ujitanpa mengkontaminasi sinyal
luaran yang diterima oleh detektor fluoresensi. Akan tetapi tidak dapat dihindarkan
detektor menerima sejumlah radiasi eksitasi sebagai akibat sifat menghamburkan yang
ada pada larutan itu sendiri atau jika adanya debu atau padatan lainnya. Untuk
menghindari hamburan ini maka digunakan instrument yang bernama filter.

3. Monokromator.

Filter pertama hanya meneruskan cahaya ultraviolet dari sumber cahaya yaitu
radiasi dengan panjang gelombang yang cocok untuk eksitasi specimen uji. Filter kedua
meloloskan hanya panjang gelombang yang sesuai dengan fluoresensi maksimum dari zat
yang diperiksa dan menahan setiap cahaya eksitasi yang terhambur. Jenis filter kedua ini
biasanya yang menahan panjang gelombang pendek. Persoalan yang dihadapi pada
pemilihan filter yaitu panjang gelombang yang lebih panjangyangditeruskan
olehfilterpertama juga lolospada daerahpanjang gelombang yang lebih pendek dari filter
kedua, sehingga menghasilkan blangko yang tinggi. Disamping itu sukar untuk
mendapatkan filter dengan panjang gelombang luas karena geseran Stokes dan adanya
dua monokhromator yang dapat dipakai, atau untuk spectrum yang mengenai sampel dan
yang lain untuk spectrum fluroresensi yang timbul. Untuk fluorimetri tidak diperlukan
kuvet pembanding(referensi) tapi kurva kalibrasi tetap harus dibuat.

2.4 Panjang Gelombang Spektrofluorometri

2.5 Gemfibrozil

Gemfibrozil (Gem), 5- (2,5-dimethylphenoxy)-2,2-dimethylpentanoic Asam,

merupakan turunan benzena asam valerat, kelompok obat yang dikenal sebagai fibrat.
Sifat fisikokimia Gem adalah molekul kecil dengan kelarutan air yang buruk, sekitar 0,01
mg mL-1 dan tingkat kelarutan rendah di saluran pencernaan, yang membatasi kefektifan
penyerapan dan bioavailabilitas setelah pemberian oral. Saat ini, Gem farmasi Bentuk
ditemukan di pasar adalah tablet dan kapsul.

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Analisis Spektrofluorometri

Teknik ini didasarkan pada pengukuran intensitas relatif fluoresensi dan distribusi
panjang gelombang cahaya fluoresensi yang dipancarkan dari molekul melalui
penyerapan energi radiasi. Keunggulan metode ini memiliki sensitivitas, kecepatan, dan
kesederhanaan, biaya rendah dan memungkinkan penentuan Gem dengan reliability yang
cukup. Dalam penelitian sebelumnya teknik yang sering dipakai yaitu Kromatografi cair
kinerja tinggi (HPLC) UV pada panjang gelombang 276 nm.

3.2 Instrument

Pengukuran Spektrum Fluoresensi dilakukan pada MHL 25 kontron

spektrofluorometri dilengkapi dengan sinar optik ganda, panjang gelombang 1,0 nm dan
panjang gelombang presisi 0,1 nm. Digunakan pengukuran 1,0 cm kuarsa dan lampu
xenon, dengan eksitasi dan emisi panjang gelombang 276 nm dan 304 nm. Analisis ini
dilakukan pada suhu 23± 1oC. Fase gerak (campuran larutan reagen metanol dan asam
asetat glasial 1 % v/v), untuk kurva kalibrasi dan fase gerak ditambahkan bahan pengisi
untuk analisis sampel. Pada tegangan 320 V.

3.3 Parameter Validasi

Farmakope Amerika (USP) dan International Konferensi Harmonisasi (ICH)

menjelaskan deskripsi prosedur analitis yang mengatur validasi. Parameter yang
dievaluasi meliputi akurasi, presisi (pengulangan, presisi menengah), spesifisitas, batas
deteksi, batas kuantifikasi, linearitas dan range.

3.4 Preparasi Sampel

Timbang tepat Gem lalu campur dengan minyak lemon esensial dalam gelas vial.
Lalu ditempatkan ke water bath menggunakan sirkulasi terbuka MP-5 pada 40o C selama
20 menit dengan pengadukan sampai Gem larut dengan campurannya. Cremophor® EL
dan Capmul® MCM-C8 ditimbang tepat, ditambahkan campuran minyak menggunakan
pipet. Semua ditimbang dengan menggunakan PJ 360 Delta Rentang neraca analitik.
Formulasi diaduk perlahan dengan menggunakan batang pengaduk magnet dan magnetic
stirer palte MELB1719 sampai homogen. Hasil formulasi Gem SNEDDS diteliti
mengandung minyak esensial Lemon sebagai fase minyak, Cremophor® EL sebagai
surfaktan dan Capmul® MCM-C8 sebagai ko-surfaktan. Didapatkan Gem 300 mg.

Self-nanoemulsifying drug delivery system (SNEDDS) adalah campuran isotropik

obat, lipid dan surfaktan, biasanya dengan satu atau lebih hidrofilik co-pelarut atau co-
emulsifier bahwa bentuk minyak baik di nanoemulsions air setelah agitasi ringan media
air dengan ukuran tetesan mulai 20-200 nm.

3.5 Hasil

Hasil menunjukan hubungan linier dengan koefisien korelasi yang baik (r2> 0,999)
tidak ada perbedaan yang signifikan (p>0,05). Seperti ditunjukan Gambar 1. Kurva
kalibrasi larutan stock gemfibrozil.
 Kemudian, batas rendah deteksi (LOD) adalah 0,075 µg mL-1. Dan nilai batas
kuantifikasi (LOQ ) adalah 0,226 µg mL-1 dengan tingkat kepercayaan 10 dengan nilai
RSD 98,8 % (Tabel 2).

Recovery keseluruhan Gem adalah 98,46% dan relatif standar penyimpangan mulai
dari 3,28% menjadi 4,63%. Ketepatan metode ini ditentukan dengan pengulangan dalam
hari, dengan menggunakan tiga konsentrasi yang berbeda dari SNEDDS Gem. Hasilnya
RSD kurang dari 3% menunjukan hasil yang memuaskan. Stabilitas Gem ditentukan
dengan formulasi yang berbeda digunakan untuk menunjukkan bahwa analit stabil dalam
dua siklus beku-cair. Larutan dari keduanya terbukti stabil bila disimpan pada -50o C.
Dalam Waktu pengujian stabilitas, tidak ada kerusakan Gem untuk setiap tes stabilitas,
standar dan sampel kontrol berada dalam ± 10% setiap presisi lainnya dan (n = 3) adalah
dalam ± 15%.

3.6 Kesimpulan

Penentuan Pelepasan Gem dari formulasi SNEEDS menggunakan

spektrofluorometry mendapatkan hasil yang memuaskan. Kemudian spektrofluorometri
memiliki prosedur yang sederhana dalam analsis Gem. Dengan metode ini menunjukkan
hasil yang optimal dalam linearitas, sensitivitas, akurasi, presisi dan robustness dan dan
stabilitas yang baik.
 DAFTAR PUSTAKA

A.M. Sierra Villar et al. (2013). Validated spectrofluorometric method for

determination of gemfibrozil in self nanoemulsifying drug delivery systems (SNEDDS).
Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy 113, 22–27.

Gandjar, I.G., Rohman, A., 2007. Kimia Analisis Farmasi. Hal.456, 465-466, 469-
470. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.

Lakowicz, J.R., 2006. Princples of Fluorescence Spectroscopy. Edisi 3, h 529-533.

Singapore: Springer.

Mulja, M., dan Suharman. 1995. Analisis Instrumen. Cetakan 1, 26-32

Surabaya:Airlangga University Press.

http://nurul-fauziah-ali-fst14.web.unair.ac.id/artikel_detail-165591
FLUOROMETRI-FLUOROMETRI.html(Diakses pada 20 Maret 2020, 07:12)

http://dxpyo.blogspot.com/2016/01/analisis-ibuprofen-sirup secara.html?
m=1(Diakses pada 20 Maret 2020)

https://id.scribd.com/doc/79545957/Analisis-Kuantitatif-Sediaan-Obat Dgn-
Spektrofluorometri(Diakses pada 20 Maret 2020)