Nama : Naurah Nazhifah

NPM : 200110210075

Dosen : Dr. Ir. Eulis Tanti Marlina, S.Pt., MP., IPM

Laporan Praktikum Sementara Ekologi

Daftar alat dan bahan yang digunakan pada identifikasi bakteri menggunakan API 20E test

 The plastic test strip contains 20 microtubes containing.

 A bacterial suspension
 Mineral oil
 A plastic humidity tray
 Petri plate
 Loop inokulasi
 A tube containing
 Reagen VP1 dan VP2
 Reagen kovacs

Prosedur identifikasi bakteri menggunakan API 20E test :

1. Isi divot yang ada pada plastic humidity tary dengan air dan tuang dengan lembut, setiap
ketegangan permukaan akan menahan air di dalam divot,
2. Petri plate yang sudah digores dengan hasil gram negative bacillus,
3. Dengan loop inokulasi steril untuk memindahkan salah satu koloni bakteri dari pedri plate ke
tabung yang berisi 5 ml saline steril ,
4. Untuk menghomogenkan loop tadi suspensi dengan meletakkannya di atas api,
5. Simpan pedri plate untuk dipakai nanti,
6. Lalu strip api dilepaskan dari kemasan steril dan letakkan di dalam humidity tray
7. Posisikan strip miring di dalam humidity tray tersebut untuk memudahkan dalam mengisi
suspense te tiap stripnya.
8. Masukan suspense bakeri disetiap tabungnya menggunakan pipet dan jika terdapat ada
gelembung di dalam tabungnya normalkan dengan mengetuk perlahan strip API di bangku lab
atau dengan hati-hati remas dasar tabung mikro
9. Gunakan pipet yang berbeda tiap memasukkan pada tabung strip
10. Dan masukkan juga mineral oil ke tiap tabung untuk mencegah oksigen memasuki media,
11. Lalu tutup humidity tray dengan plastic bening dan inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37
derajat Celsius,
12. Selama masa inkubasi, ambil beberapa koloni dari petri plate dan melakukan test oksidase,
13. Kultur tetap menjadi warna krem dan menandakan bahwa itu negative, test ini tidak termasuk ke
dalam test strip API 20E oleh karenanya dinamakan tes ke-21 sistem API 20e . ini dilakukan
untuk catatan dalam sampel.
14. Setelah inkubasi beberapa media tabung mikro telah berubah warna yang menunjukkan
perubahan dimana itu hasil apakah negative atau positif,
 15. ONPG bewarna kuning yang menunjukkan bahwa positif, hasil ADH juga kuning tetapi dalam
ADH hal ini menandakan hasil negative , lisin dekarboksilase (LDC) bewarna merah yang
merupakan hasil positif , ODC bewarna kuning yang merupakan hasil negative , CIT bewrna
hijau muda merupakan negative, hydrogen sulfide tidak bewarna dan urease bewarna kuning ini
semua negative, TDA, IND, VP dilewat. Untuk gel tidak menunjukkan difusi pigmen hitam yang
menu berarti negative, Sembilan test terakhir yang ditafsirkan sama kuning adalah positif dan biru
(INO, SAC, AMY) adalah negative dan keenam tes lainnya bewarna kuning dan positif.
16. Beberapa reagen tambahan dapat diinterpretasikan.
17. Tambahkan satu tetes masing-masing VP 1 dan VP 2 reagen ke tabung mikro proskauer VOC ,
18. Reagen harus bereaksi dalam 10 menit, sebelum membaca hasilnya atur menggunakan timer,
19. Dan sambil menunggu hasil reaksi proskauer selesai, tambahkan satu tetes reagen TDA ke TDA
20. Tabung TDA tetap kuning yang menandakan negative
21. Selanjutnya tambahkan satu tetes reagen kovacs ke tabung mikro IND dan ternyata berubah
menjadi pink yang menunjukkan hasil positif,
22. VP yang tadi diuji setelah 10 menit ternyata tidak ada perubahan yang menandakan bahwa hasil
negatif .
23. Setelah mencatat semua kemudian dihitung dengan nomor profil tujuh digit berdasarkan hasil
tersebut , nomor profil ini digunakan untuk mengidentifikasi bakteri yang tidak diketahui.
Pemberitahuan bahwa 21 test dikelompokan menjadi 7 bagian, masing-masing tiga bagian uji
digunakan untuk menghitung satu digit nomor profil.
24. Menuliskan skor 1 untuk test pertama disetiap bagian jika hasilnya positif , dan yang lainnya
ditulis dengan angka 0
25. Menuliskan skor 2 untuk test ke 2 jika hasilnya positif, dan untuk test ketiga menerapkan angka 4
jika positif dan menambahkan skor 3 bersama-sama disetiap bagian dan akan memberikan angka
7 yang membentuk nomor profil.
26. Setelah mendapatkan nomor profil maka dapat mengidentifikasi spesies bakteri dengan
mencarinya di buku atau data yang ada di komputer .
27. Bakteri yang sama dapat memiliki nomor profil yang berbeda .

Hasil test
Test ONPG ADH LDC ODC CTI H2S URE TDA IND
Color Kuning kuning Merah Kuning Hijau Kuning Ku- Kuning Pink
muda ning
Result + - + - - - - - +
Score 1 0 4 0 0 0 0 0 4
profile 5 0 4

VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX

Tidak No kuning kuning biru Kuning kuning biru kuning Biru kuning Krem
Bewarna diff
- - + + - + + - + - + -

0 0 4 1 0 4 1 0 4 0 2 0

4 5 5 2