Treponema pallidum HemaAglutination (TPHA) Test For Syphilis

Tujuan :
mendeteksi antibodi spesifik Treponema pallidum dalam serum/sampel untuk mendiagnosa sipilis.
Prinsip kerja :
Antibodi spesifik untuk T.pallidum yang ada dalam serum pasien akan beraglutinasi dengan awetan
eritrosit dalam TPHA test kit yang dilapisi dengan komponen antigenik patogen T.pallidum hasilnya akan
menunjukkan pola aglutinasi pada sumur mikrotitrasi
Alat dan bahan :
1. Mikropipet + tip
2. Microplate
3. Serum
4. Reagen
5. TPHA test kit (R1=test sel,R2=control sel,R3=diluent,R4=control+,R5=control-)
Prosedur kerja :
a. Uji kualitatif
1. Alat dan bahan disiapkan
2. Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan dengan suhu ruangan
3. Semua reagen dihomogenkan perlahan
4. Diluent ditambahkan sebanyak 190 µl dan sampel ditambahkan sebanyak 10 µl pada sumur 1
lalu homogenkan
5. Campuran pada sumur 1 dipipet sebanyak 25 µl dan ditambahkan pada sumur 2 dan 3
6. Control sel sebnayak 75µl ditambahkan pada sumur 2 lalu homogenkan
7. Test sel sebanyak 75µl ditambahkan pada sumur 3 dan homogenkan
8. Sumur dinkubasi pada suhu ruangan selama 45-60 menit
9. Aglutinasi yang terjadi diamati
10. Sampel yang menunjukkan hasil aglutinasi + lilanjutkan ke semi kuantitaif
Note : Setiap control + dan control – selalu disertakan dalam setiap uji tanpa perlu diencerkan
b. Uji semi kuantitaif
1. Alat dan bahan disiapkan
2. Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar
3. Semua reagen dihomogenkan perlahan
4. Sumur mikrotitrasi disiapkan dan diberi label no.1 sampai 8
5. Pengenceran sampel dibuat pada sumur yang berbeda dengan sumur mikrotitrasi dengan
mencampur 190 µl diluent dan 10µl sampel.
6. Sumur mikrotitrasi no.1 dikosongkan
7. Sumur mikrotitrasi no.2 sampai 8 ditambahkan 25 µl diluent
8. Pada sumur mikrotitrasi no.1 dan 2 ditambahkan 25 µlsampel yang telah diencerkan
9. Campuran pada sumur 2 dipipet 25 µl dan ditambahkan ke sumur 3, lalu homogenkan. Begitu
seterusnya sampai sumur 8
10. Campuran pada sumur 8 dipipet 25 µl dan dibuang
11. Control sel sebanyak 75µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no.1 lalu homogenkan
12. Tes sel sebanyak 75µl ditambahkan pada sumur no.2 sampai 8 lalu homogenkan
13. Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45-60 menit
14. Aglutinasi yang terjadi dibaca dan tentukan titernya
Interpretasi hasil :
a. Uji kualitatif
Hemaglutinasi positif ditandai dengan adanya bulatan berwarna merah dipermukaan sumur,
hasil negatif terlihat seperti titik berwarna merah pada dasar sumur.
 Tingkatan aglutinasi
+4 : bulatan merah merata pada seluruh permukaan sumur
+3 : bulatan merah terdapat di sebagian besar permukaan sumur
+2 :bulatan merah yang terbentuk tidak besar dan tampak seperti cincin
+1 : bulatan merah kecil dan tampak cincin terang
+/- : tampak cincin bulatan merah yang samar
- :tampak titik berwarna merah di dasar sumur
b. Uji semi kuantitatif
Pengenceran yang masih menunjukkan aglutinasi
Sumur 1 : control cell
Sumur 2 : 1/80
Sumur 3 : 1/160
Sumur 4 : 1/320
Sumur 5 : 1/640
Sumur 6 : 1/1280
Sumur 7 : 1/2560
Sumur 8 : 1/5120