TEST METHODOLOGY 3-5.

PROSEDUR PEMELIHARAAN KESEIMBANGAN

Dengan setiap penggunaan: bersihkan penimbangan (posisi dipegang), dan gunakan kuas bersih
untuk membersihkan sisa-sisa debu atau bahan kimia ke dalam penimbangan. periksa apakah
penimbangan bebas dari debu dan sidik jari sebelum digunakan. Pastikan penempatanya bebas dari
getaran, pada area bebas udara dan sinar matahari secara langsung. Sesuaikan panjang kaki skrup
tengah menggunakan banyaknya gelembung, seperti yang tersedia. Atur keseimbangan menjadi
zero atau nol dengan menempatkan wadah kosong. Tempatkan wadah atau kertas penimbangan di
atas timbangan dan sesuaikan tombol tare menjadi zero untuk mengurangi berat wadah. Selalu
tempatkan wadah penimbangan dalam mode siap sebelum menambahkan bobot pada wadah
penimbang.
Tiap tiga bulan: Periksa akurasi dan presisi keseimbangan dengan menimbang bobot NIST kelas
S (50, 100, 200, 500, 2000, dan 4000 mg) sebanyak tiga kali, untuk merawat dan menangani bobot
standar dengan sarung tangan katun bersih atau alat bantu seperti penjepit agar terlindung.

Tabel 3-5
LEMBAR KERJA VERIFIKASI KESEIMBANGAN KALIBRASI

Laboratorium Bulan Tahun

Keseimbangan Model pembuatan
Verifikasi per tiga bulan
Massa dari NIST CLASS S
0,050 g 0. 100 g 0.200 g
1. 1. 1.
2. 2. 2.
3. 3. 3.
4. 4. 4.
5. 5. 5.
Rata- Rata- Rata-
rata rata rata
Massa dari NIST kelas S
0.500 g 2,00 g 4,00 g
1. 1. 1.
2. 2. 2.
3. 3. 3.
4. 4. 4.
5. 5. 5.
Rata- Rata- Rata-
rata rata rata
Ak urasi keseimbangan : Masa yang diinginkan
(masa yang diinginkan
y ang diperoleh . x 100%
0.050 g 0. 100 g 0.20 g
P resisi keseimbangan:
(Standard deviasi x 100%)
Rata-
rata
0.050 g 0. 100 g 0.200 g 0.500 g 2,00 g 4,00 g
untuk akurasi dan presis asarkan spesifikasi dari
pabrik.
 Kasus 3-3 MENIMBANG BERATMASSA
Tindak lanjut
Setelah menentukan bahwa 5,5 g garam kobalt klorida diperlukan, siswa CLS menggunakan timba

Centrifuse
Tujuan centrifuge di laboratorium klinis adalah untuk memisahkan zat dengan massa
atau kepadatan yang berbeda y. Gaya sentrifugal adalah gaya luar ketika sampel
diputar pada tingkat kecepatan tinggi. Centrifuge mempercepat pemisahan alami
yang terjadi oleh gravitasi dari waktu ke waktu. Misalnya, sentrifugasi dapat
memisahkan serum dengan cepat dari darah yang menggumpal atau plasma yang
menggumpal dapat dipisahkan dari sel darah antikoagulasi . Centrifuge juga dapat
digunakan untuk memisahkan endapan dari supernatan dalam larutan. Kecepatan
sentrifugal diukur dalam putaran per menit (rpm). Penggunaan ypical T untuk
centrifuge termasuk menghasilkan 1200 rpm selama 10 hingga 12 menit untuk serum
dari sel, 12.000 rpm untuk mikrohematocrit, atau 100.000 rpm untuk chylomicron
pelepasan. Selain itu, gaya yang dihasilkan dalam sentrifugasi penting karena
memperhitungkan efek gravitasi (g) selama sentrifugasi. Misalnya, biasanya perlu
menghasilkan 14.000 g untuk mikrohematosrit atau 178.000 g untuk pemisahan
chylomi- cron. Gaya ini disebut gaya sentrifugal relatif (RCF) dan juga dikenal
sebagai gaya gravitasi . RCF, dalam satuan g, untuk gaya gravitasi , berhubungan
dengan putaran per menit berdasarkan ukuran jari-jari centrifuge dalam sentimeter.
Jari-jari, atau r, ditentukan dengan mengukur jari-jari lengan centrifuge dari tengah ke
ujung lengan centrifuge . Rumusnya adalah

RCF 1.12 10 5
r rpm2

RCF dihitung ketika membandingkan dua sentrifugal berbeda yang digunakan

untuk tujuan yang sama. Faktor ini sangat membantu untuk mengkalibrasi putaran
per menit antara dua sentrifugal sehingga putaran per menit yang benar dapat
ditentukan untuk setiap centrifuge.
Ada tiga jenis utama sentrifugal: horizontal-head, angle-head, dan
ultracentrifuges. Sentrifugal kepala horizontal adalah jenis ember ayun di mana
tabung centrifuge dipegang dalam posisi vertikal ketika tidak bergerak tetapi hori-
zontal ketika centrifuge sepenuhnya bergerak. Mereka menghasilkan kecepatan
rendah saja tetapi dapat menghasilkan sel endapan atau gumpalan di bagian bawah
tabung yang erat. Jenis centrifuge ini direkomendasikan untuk perangkat pemisah
serum. Centrifuge kepala sudut memiliki sudut tetap 25 hingga 40 derajat di mana
tabung ditahan selama trifugasi. Sedimen dikemas pada sudut tetapi tidak sekencang
dengan centrifuge kepala horizontal. Jenis centrifuge ini cukup untuk pe sel, tetapi
karena sedimen terbentuk pada suatu sudut dan tidak dikemas dengan rapat, dekanasi
tidak direkomendasikan
Jenis centrifuge ketiga adalah ultracentrifuge. Generasi centrifuge ini memiliki
kecepatan tertinggi. Kepala centrifuge dipegang pada sudut tetap tetapi menghasilkan
tombol sedimen yang erat karena kecepatan tinggi yang dihasilkan. Untuk mengurangi
panas yang dihasilkan oleh gesekan yang dihasilkan oleh kecepatan sentrifugal tinggi,
ultrasentrifug didinginkan. 1 Jenis centrifuge ini sangat berguna untuk pemisahan
lipoprotein karena pendinginan meningkatkan pemisahan. Ultrasentrifugasi juga
digunakan dalam uji pengikatan obat, seperti memisahkan obat bebas dari obat yang
terikat protein, karena ultrasentrifugasi berhasil dalam sedimentasi protein. 1 Tahun 1

Pertimbangan keselamatan
dalam sentrifugasi
Ada beberapa pertimbangan keselamatan penting mengenai pengoperasian cen-
trifuges. Salah satu pertimbangan terpenting adalah menyeimbangkan beban. Jika
centrifuge dibiarkan menghasilkan kecepatan ketika beban tidak seimbang, itu dapat
menyebabkan getaran serius yang dapat merusak tabung reaksi, menumpahkan
isinya. Jika ketidakseimbangan menghasilkan kekuatan yang cukup , centrifuge
dapat jatuh dan menyebabkan kerusakan serius dan membahayakan orang-orang di
sekitarnya. Pertimbangan keamanan lain yang kurang jelas tetapi sama berbahayanya
adalah generasi aerosol, atau mikrodroplet sampel. Mikrodroplet ini dapat dihirup
atau masuk ke dalam selaput mukosa mulut, mata, atau hidung dengan kemungkinan
konsekuensi penyakit beracun atau menular. Aerosol dapat dihasilkan selama
guncangan kuat, ketika ruang hampa dilepaskan , dan selama sentrifugasi. However,
aerosol dapat dicegah dengan menjaga sampel tetap tertutup selama sentrifugasi dan
dengan menjaga tutup centrifuge tertutup selama operasi sampai kepala berhenti
total. Begitu, sebuah tabung pecah selama sentrifugasi, tetesan dapat terkandung di
dalam centrifuge dan tidak disemprotkan ke sekitar ruangan. Beberapa lapis sarung
tangan dan pinset mungkin diperlukan untuk menghilangkan pecahan kaca dengan
aman dan sambil menyeka tumpahan di centrifuge. Saat membuka tabung evakuasi
sentrifugasi, mungkin perlu untuk membukanya dalam kotak penahanan aerosol atau
membungkus beberapa lapis kain kasa di sekitar bagian atas membuka ketika
membukanya untuk menangkap aerosol apa pun yang dilepaskan dengan ruang
hampa udara. 2.
Perawatan juga diperlukan untuk menjaga centrifuge berfungsi dengan baik.
Menjaga centrifuge tetap bersih dan memeriksa rem adalah aspek penting dari
operasi centrifuge utama yang aman. Aspek utama dari fungsi yang diperiksa
adalah kecepatan yang dihasilkan dan perangkat waktu. Putaran per menit dapat
Diperiksa dengan tachometer, cahaya strobo kecil dengan fotodetektor yang
tachometer - perangkat yang
menentukan berapa banyak putaran per menit yang dihasilkan oleh centrifuge.
measures kecepatan dalam
Test Metodologi 3–6 menjelaskan prosedur pemeliharaan centrifuge . revolutions per minute
mampu 3-6 adalah
bentuk untuk merekam pemeliharaan centrifuge .

TEST METHODOLOGY 3-6

Prosedur pemeliharaan sentrifugasi
tiap bulan atau dua mingguan tergantung pada penggunaan: Bersihkan dalam komponen terior dengan sabun dan air yang ditambahkan pem

lanjut
 TEST METHODOLOGY 3-6.PEMELIHARAAN CENTRIFUGE
PROCEDURE (lanjutan)
Bulanan: Tempatkan dua tabung yang sama seimbangnya ke dalam centrifuge, tutup, dan operasikan pada k
Tiga bulan : Periksa kemasan dan periksa apakah ada kecacatan, dan periksa kait penutup dari segel. Periksa
(setela mencapai kecepatan stabil) menggunakan tachometer yang ditujukan pada strip reflective dilihat mela

INSTRUMENTATION
Seorang individu yang memasuki laboratorium kimia klinis hari ini akan menghadapi
sejumlah besar peralatan dan suara elektronik. Setiap peralatan memiliki tempat yang
unik dalam menilai penanda biokimia.
Setiap uji kimia dalam peralatan mewakili tiga prinsip instrumentasi:
1 . reaksi kimiawi substrat, enzim, dan kofaktor
2 . metodologi mendeteksi titik akhir reaksi
substrate - reactsemut
dalam enzim-catalyzed 3. otomatisasi yang menyinkronkan semua aspek pengujian
reaction yang converted to Dalam mencoba mengatur perawatan dan pemeliharaan peralatan, mahasiswa
product teknologi medis akan menemukan bahwa instrumentasi didasarkan pada beberapa
prinsip dasar yang dapat diterapkan untuk banyak jenis instrumen.

MAMPU 3-6
Daftar Periksa Prosedur Pemeliharaan sentrifuse
Bulan
tahun mingguan: bulanan: tiga bulan:
Cek Saldo Timer Cek 1, Cek rpm untuk
dan Brake 5, 10, dan 15 1500 dan 3000 Pelumasan
Bersihkan Interior Termasuk Menit Kuas (daftar waktu) (daftar rpms) (jika )
perlu
minggu 1
minggu 2
minggu 3
minggu 4
tanggal dan tanda tangani setiap sel t able ketika dilakukan n.
pengeceka
SKENARIO CASE 3-4
Spektrofotometri: Bagaimana cara kerjanya ?
Siswa itu masuk ke laboratorium kimia klinis pada hari pertamanya
rotasi klinisnya . Dia dihadapkan dengan banyak mesin dan suara elektronik. Instrumen tersebut tidak terlihat seperti instrumen yang di
Supervisor memperkenalkannya kepada mentor selama seminggu kemudian. "Ini adalah Hercules III," kata teknologi laboratorium, "in
keesokan paginya siswa datang lebih awal untuk menonton perawatan harian. pada dasarnya Hercules III menggunakan teknologi spek

elektroda ion-selective (ISE) - memilihrode yang measuresaktivitassatu ion better daripada others

SPECTROPHOTOMETRY
Spektrofotometri adalah andalan laboratorium kimia klinis otomatis.
Spektrofotometri didasarkan pada dua prinsip: (1) zat menyerap cahaya pada menyerap - ke take in atau receive denga
panjang gelombang yang unik dan (2) jumlah cahaya yang sebanding diserap
dengan jumlah zat yang didapat. Absorbansi sama dengan absorptivitas constant
yang unik untuk zat atau molekul kali panjang jalur cahaya melalui zat kali
konsentrasi dari substansi. Prinsip-prinsip ini diringkas ke dalam hukum Beer:
absorptivity – jumlah
A abc absorbansi specific fatau
di mana A absorbansi, konstanta absorptivitas untuk zat, b panjang jalur cahaya certain substance
melalui zat, dan c konsentrasi substansi Absorbansi mungkin terkait dengan transmisi, T, jumlah cahaya yang
ditransmisikan melalui zat di mana Cahaya ditransmisikan melalui larutan uji mengirimkan jumlahnya
dan Ion total kemungkinan cahaya yang akan ditransmisikan dari berkas insidensi: cahaya tidak retained tetapi
lulus dalam solusi
A –log Is/Io –log T
Since A log (1/T)
A log 100 – log %T
Then, A 2 – log %T abc
Dengan memilih panjang gelombang cahaya yang optimal untuk penyerapan sub-
stance, unit penyerapan mewakili cahaya yang diserap oleh zat itu dan tidak ada yang
lain Zat. Peningkatan atau penurunan cahaya yang diserap adalah proportional
terhadap konsentrasi zat . Persentase transmisi (%T) konsentrasi versus fungsi
nonlinier . Ketika %T versus konsentrasi diplot pada grafik linier paper, respons
lengkung diperoleh. Gambar 3-6 ilustrasi hubungan ini. %T hanya digunakan ketika
diplot pada kertas semilog untuk mendapatkan garis lurus. Garis lurus yang
diperoleh dapat digunakan untuk menentukan konsentration sampel yang tidak
diketahui . Absorbansi versus konsentrasi adalah fungsi linier, sebagai
 100

75

50

25

%
0
0 1 2 3 4 5
Konsentrasi
Gambar 3–6. Hubungan antara concentration dan percentage transmittance.

ditunjukkan pada Gambar 3–7. Garis lurus yang diperoleh dari hubungan ini dapat
digunakan untuk menentukan konsentrasi sampel yang tidak diketahui . 3 Tahun
Spektrofotometri sederhana telah digunakan selama bertahun-tahun dalam
analisis kimia klinis. Jenis reaksi kimia tertentu yang diukur dengan
spektrofotometri akan dibahas nanti dalam chapter ini. Ada beberapa variasi analisis
spektrofotometriric yang didasarkan pada prinsip-prinsip yang didefinisikan oleh
Beer's law. Jenis spektrofotometri ini akan dibahas secara lebih rinci dimulai dengan
aplikasi spektrofotometri yang lebih sederhana (titik akhir, kinetik, dan turbidimetri)
dan berlanjut ke spektroskopi serapan atom y, nephelometry, chemiluminescence,
dan fluorometry .

COMPONEN SPEKTOFOTOMETER

Karena spektrofotometri adalah proses untuk mengukur jumlah cahaya yang diserap
oleh suatu zat, yang berkaitan dengan konsentrasi zat itu, spektrofotomi- ter adalah
instrumen yang mengukur cahaya dari gelombang panjang tertentu. Ini adalah com-
ponents dari spektrofotometer: sumber cahaya, monochromator, sample holder,
photodetector, perangkat readout, dan sumber daya. Gambar 3–8 mengilustrasikan
com- ponents dari spektrofotometrisederhana r.
Lampu, atau sumber cahaya, memberikan panjang gelombang cahaya dalam
kisaran terlihat atau ultra-violet (UV). Lampu tungsten digunakan untuk
panjang gelombang yang terlihat perkiraan

0.6

0.5

0.4
Absorba

0.3

0.2

0.1
0
0 1 2 3 4 5 6
Konsentrasi
Gambar 3–7. Hubungan antara konsenration dan absorbansi.
 Detekto Meter
Monokromatater r foto
Sistem Celah Kel Kuvet
Colimatin pintu uar
g masuk dari
Lampu cela
h
Gambar 3–8. Komponen spektrophotometer.

mately 380 hingga 750 nm). Deuterium atau lampu busur merkuri digunakan untuk menghasilkan
Sinar UV. Monochromator, seperti filter, prisma, atau kisi difraksi , digunakan untuk menghilangkan gelombang
panjang cahaya yang tidak diinginkan dan memungkinkan cahaya yang diinginkan mencapai sampel.
Dudukan sampel memegang kuvet yang berisi larutan uji. Fotodetektor mendeteksi cahaya yang ditransmisikan
melalui sampel (karena tidak diserap) dan mengubah energi cahaya menjadi energ listrik y.
Perangkat readout menunjukkan absorbansi atau bahkan konsentrasi berdasarkan
perhitungan seperti yang ditunjukkan di atas. Sumber daya menyediakan energi
yang stabil untuk komponen spec- trophotometer. Prosedur untuk melakukan
pemeliharaan spektrofotometer sederhana ditemukan dalam Metodologi Test 3-
7.

TEST METHODOLOGY 3-7.

Prosedur pemeriksaan spektofotometer
akurasi panjang gelombang dapat diperiksa dengan filter komersial, seperti didymium filter (puncak pada 585 nm), atau dengan menyiapkan la
Linearitas fotometrik dapat diperiksa dengan menjalankan perbedaan konsentrasi dari solusi yang sama. Variasi pengenceran larutan yang di
Accuracy fotometrik dapat diperiksa dengan larutan nikel sulfate pada 510 nm atau spe- cial filters. Corrections atau masalah dengan akurasi f
 TEST METHODOLOGY 3-7.
PROSEDUR PEMELIHARAAN SPEKTOFOTOMETRI (lanjutan)
4. Cahaya Stray dapat diperiksa dengan larutan natrium nitrite, yang seharusnya memiliki 0.
1% T pada
355 nm. Correction fatau miskin stray cahaya results umumnya melibatkan pembersihan
debu off f optik surfaces, termasuk mirrors, prisma, gr r atings, dan lamp. Hapus sumber
cahaya asing yang datang melalui instrumen penutup. Jika tindakan ini tidak benarkan
miskin stray cahaya results, mungkin perlu untuk mengganti excitor lamp.
5. Baseline stabilitas detects excess baseline drift. Seharusnya observed dengan
mengatur sembarang panjang gelombang dan observing %T perubahan lebih dari
1 minute. Drift dari beberapa
2% T indicates bahwa lampu excitor bermasalah.

Tiga Tipe dari metode Spectrophotometric

colorimetric – pencegahan analit dariSpektrofotometer mengukur
lampu absorbsi produk warna penyerapan cahaya dari salah satu komponen reaksi
kimia. Tiga contoh jenis reaksi kimia umum yang diukur dengan spektrofotometer
adalah reaksi kolorimetri titik akhir, enzimatik titik akhir, dan kinetik (mampu 3-
7). Reaksi Jaffe untuk kreatinin adalah contoh reaksi kolorimetri titik akhir . Reaksi
heksokinase dengan glucose adalah contoh reaksi enzimatik titik akhir di mana enzim
catalyze - untuk akselerasi rate dari reaksi kimia tanpa dikonsumsi
mengkatalisasi reaksi untuk mengukur analit. Contoh metode kinetik , yang
menggunakan substrat dan koenzim untuk mengukur aktivitas enzim, adalah
pengukuran transaminase alanin (ALT) menggunakan alanin, alfa-ketoglutarat, dan
piridoksil-5'-fosfat.
aktivitas - kemampuan untuk produce gerakan atau energy; atau example, aktivitas enzim adalah kemampuan enzim dalam fluence rate dari re
Titik Akhir Spektrofotomet Kolorimetri
Yang pertama dari ketiga jenis reaksi kimia spektrofotometri ini adalah reaksi
spektrofotometri titik akhir simple. Reaksi Jaffe untuk analisis kreatinin adalah
contoh dari metode ini. Dalam metode spektrofotometri titik akhir , produk
berwarna atau bentuk kromogen yang diukur dengan kemampuannya untuk
chromogen - colored product formedmenyerap cahayareac-
in a colorimetric vis-tion
ible. Urutan reaksinya dijelaskan dengan dua urutan reaksi
lainnya dalam Tmampu 3-8.

Endpoint Enzymatic Spectrophotometry

Beberapa metode titik akhir juga menggunakan enzim untuk mengkatalisasi reaksi
kimia. Produk akhir seringkali merupakan koenzim yang menyerap cahaya dengan
kuat pada panjang gelombang yang lebih rendah

MAMPU 3-7
Types Umum Dari Reaksi Kimia Diukur
Dengan Spectrophotometry
Reaksi Kimia Type Apa yang Diukur Bagaimana Absorbansi Diukur*
Titik akhir Chromogen Satu reading
colorimetric Endpoint Koenzim tidak Satu reading
Kinetic enzimatik berwarna Koenzim Beberapa absorbansi readings
*Spectrophotometer is first set to 100% T/zero absorbance with a reference n.
solutio
 TMAMPU 3-8
Contoh Urutan Reaksi

JAFFE REACTION

Asam pikrat NaOH creatinine → kekuningan-brsendiri chromogen

HEXOKINASE METHOD FATAU MEASUREMENT DARI GLUCOSE
Glukosa ATP hexokinase→glucose 6-fosfate ADP Dengan
pelonggaran r kedua
Glukosa 6-fosfate NADP G6PD→ 6-fosfogluconate NADPH H
KINETIC MPELONGGARAN LANINE TRANSAMINASE

Alanin -ketoglutarate → pyruvate

ALT/pyridoxal-5 -phosphate
glutamate
Pelonggaran r kedua adalah
Pyruvate NADH H LD
→ lactate NAD

dalam spektrum r-UV yang terlihat atau nea. Metode heksokinase untuk immunoassay karena sifat
pengukuran glukosa dalam cairan tubuh adalah prosedur seperti itu ; analit dalam antigeniknya. Kuantifikasi
reaksi kompleks ini adalah glukosa. Artinya , glukosa adalah zat yang harus diukur. enzim dalam cairan tubuh
Glukosa menyerap cahaya pada banyak panjang gelombang. Metode pengujian yang
bertujuan untuk secara langsung mengukur absor- bance glukosa akan mengalami
banyak jenis gangguan dan tidak akan spesifik untuk glukosa. Oleh karena itu,
reaksi kimia seperti metode hexokinase telah dikembangkan di mana reaksi kimia
yang melibatkan glukosa, enzim,
dan zat lain digunakan untuk menghasilkan NADP. NADP adalah zat yang diukur
oleh spektrofotometer karena menyerap cahaya secara unik pada 340 nm dan tidak
mengalami banyak jenis gangguan. Konsentrasi glukosa adalah propor- tional
untuk
konsumsi koenzim dalam reaksi.

Kinetic
Spectrophotometry
Jenis reaksi kimia terakhir yang diukur dengan spektrofotometri yang akan dikutuk
adalah reaksi kinetik. Seperti yang dijelaskan sebelumnya, reaksi enzymat
berurutan gabungan yang menghasilkan NAD atau NADP biasanya digunakan untuk
pengukuran bahan kimia lain dalam reaksi sejak perubahan absorbansi pada 340 nm
adalah sim- ple dan relatif bebas dari gangguan. Baik konsumsi NADH atau
produksi NAD terionisasi (NAD ) dapat diukur sebagai cerminan dari kon- sentrasi
bahan kimia lain dalam reaksi. Mengukur sifat katalitik enzim sering dilakukan
dengan analisis spektrofotometri produk yang terbentuk sebagai perubahan
penyerapan cahaya tampak atau UV per menit. Reaksi enzimatik gabungan adalah
reaksi kimia yang memiliki perantara yang sama. Produk reaksi satu digunakan
sebagai substrat dalam reaksi dua. Ini mungkin melibatkan analisis NAD atau NADP
karena perubahan penyerapan pada 340 nm selama reac- tion molekul-molekul ini
sederhana dan relatif bebas dari gangguan. Aktivitas enzim ditentukan berdasarkan
kondisi reaksi standar .
Enzim adalah protein. Mereka dapat dengan mudah diukur dengan sabu-sabu
NADP - nikotinamida adenin dinukleotida fosfatte

digabungkan - kimia reactions yang share

NAD - nikotinamida adenin dinukleotida

NADH - mengurangi
nicotinamide dinucleotide
adenine
phos- phate