MAKALAH PEMISAHAN KIMIA DAN ANALISIS INSTRUMENTASI

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR

DOSEN PENGAMPU :

Dr. Dra. Hj. Hayuni Retno Widarti, M.Si

Dr. Yudhi Utomo, M.Si

DISUSUN OLEH :

1. Ken Regar (180331616

2. Laras Pratiwi (180331616035)
3. Nafi’ Wahyu Hayati (180331616014)

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS NEGERI MALANG
2020
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang maha Esa atas limpahan rahmat dan hidayah-Nya,
sehingga makalah ini dapat terselesaikan dengan tepat waktu. Penyusunan makalah ini
dimaksudkan untuk memenuhi tugas. Makalah ini disusun dan dibuat berdasarkan materi-
materi yang ada pada mata kuliah Pemisahan Kimia dan Analisis Instrumentasi . Materi ini
bertujuan agar dapat menambah wawasan dan pemahaman diri tentang Kromatografi kolom
cair.

Semoga makalah ini berguna bagi pembaca dan penulis dalam pemahaman materi yang
penulis sajikan. Mohon maaf apabila penulis terdapat kekurangan baik dari segi penulisan
maupun isi makalah tersebut.

Disadari bahwa makalah ini masih kurang sempurna oleh karena itu kritik dan saran dari
semua pihak sangat diharapkan guna penyempurnaan makalah ini. Semoga makalah ini dapat
bermanfaat.

Malang, 3 Maret 2020

 3. Metode Pertukaran Ion

Banyak lempeng alami yang dapat berfungsi sebagai penukar ion karena bahan polimer
tidak larut dan banyak ion yang dapat diganti. Pertukaran ion terjadi terus-menerus antara
lempeng yang melewatinya. Proses terperinci dimodifikasi dan dipersulit oleh kandungan
karbonat air. Tanah liat memiliki propertik yang bervariasi dan tidak terduga dan hanya dengan
pertukaran ion sintetik yang dapat diproduksi. Resin penukar ion modern pertama kali digunakan
pada tahun 1935 oleh Adams. Resin ini terdiri dari jaringan tiga dimensi rantai polimer yang
dihubungkan dengan rantai pendek yang mengandung gugus fungsi yang dapat terionisasi.
Dengan demikian, ada fase dengan ionik tetap dari suatu muatan, sedangkan yang sebaliknya
adalah fase untuk bergerak di pelarut dan digantikan oleh ion muatan lainnya, asalkan
elctroneutrality dipertahankan. Resin-resin ini dapat digunakan baik dalam proses untuk
pertukaran ion yang dikemas dalam kolom dan digunakan secara kromatografi. Mereka memiliki
ikatan yang sangat berharga dalam pemisahan zat ionik dengan perilaku kimia yang hampir
sama.

Jenis-jenis resin. Resin khas dibuat dengan polimerisasi divinylbenzene terhadap styrene

Struktur diatas diulangi dalam tiga dimensi, dengan jumlah ikatan silang ditentukan oleh
rasio divinylbenzene terhadap styrene. Meningkatkan ikatan silang akan meningkatkan kekuatan,
mengurangi pembengkakan, mengurangi porositas dan mengurangi kelarutan struktur polimer.
Biasanya sekitar 10% divinylbenzene digunakan, tetapi persentase yang lebih tinggi dan lebih
rendah tersedia dalam resin komersial. Ukuran partikel produk ditentukan sebagian besar oleh
tingkat agitasi mekanis selama reaksi, sehingga manik-manik resin dari berbagai ukuran dinilai
tersedia.
Penukar Kation. Gugus fungsional asam mudah diperkenalkan untuk misalnya, dengan
sulfonasi di mana gugus asam sulfonat melekat pada hampir setiap inti aromatik. Asam sulfonat
adalah asam kuat dengan proton yang sepenuhnya terdisosiasi, meskipun proton ini tidak bebas
meninggalkan resin kecuali diganti oleh ion positif lainnya. Pertukaran kation asam lemah
disiapkan dengan memperkenalkan gugus fungsional asam karboksilat pada matriks asam
poliakrilat. Jumlah total ekuivalen proton yang dapat diganti per satuan volume resin
menentukan kapasitas pertukaran resin. Untuk resin penukar ion yang lemah, kapasitasnya
adalah fungsi dari Pertukaran Anionik pH.

Penukar Anion. Jika kelompok fungsional dasar diperkenalkan, resin dapat mengubah anion
daripada kation. Penukar anion yang kuat disiapkan dengan amina tersier, menghasilkan
kelompok amonium kuaterner kuat. Penukar anionik yang lebih lemah dapat disiapkan dengan
amina sekunder, menghasilkan amina tersier basa lemah.

Tabel Resin Penukar Ion Terpilih

Pembengkakan. Proporsi tinggi gugus polar di dalam resin memberinya karakter higroskopis.
Dalam resin tersulfonasi, seseorang dapat mempertimbangkan bahwa ion SO₃¯, dan H⁺ larut
dalam air yang terserap menghasilkan larutan konsentrasi tinggi. Karena ion tidak dapat
berdifusi, ada kecenderungan air berdifusi untuk menyamakan konsentrasi, tetapi jumlah air
yang dapat berdifusi dibatasi oleh ruang yang tersedia di celah struktur resin. Meski begitu,
sejumlah besar air, hingga gram per gram resin kering, mampu menembus bagian dalam
menyebabkan distorsi struktur dan pembengkakan manik-manik resin. Kekuatan osmotik yang
mendorong air dari bagian luar ke bagian dalam manik-manik resin menyebabkan tekanan
internal yang sangat besar. Manik-manik kering tidak boleh dibiarkan membengkak saat
dikemas dalam kolom, dan bahkan perubahan sifat pelarut dapat mengakibatkan "ledakan"
kolom kaca yang padat. Sebelum sampel dimasukkan, kolom biasanya dikonversi seluruhnya
menjadi bentuk asam, HR, dengan mencuci dengan larutan asam klorida. Sifat-sifat penting
yang menentukan perilaku resin dapat diringkas:
 1. Ukuran partikel-tingkat pertukaran dan permeabilitas kolom yang dikemas.
2. Tingkat kekakuan lintas silang, porositas, pembengkakan.
3. Sifat gugus fungsi-jenis ion yang dipertukarkan.
4. Kekuatan distribusi kelompok fungsional.
5. Jumlah kelompok fungsional - kapasitas resin.

Prinsip-prinsip Teoritis

Pertukaran Ion. Hasil bersih dari reaksi pertukaran ion bisa dinyatakan sebagai pengganti
jumlah setara ion yang bermuatan serupa:

HR+Na⁺ NaR + H⁺

2HR + Ca²⁺ CaR₂ + 2H⁺

RCl + OH ROH + Cl¯

Tidak ada teori yang memadai untuk mengobati koefisien aktivitas larutan terkonsentrasi dari
elektrolit kuat seperti yang ada dalam resin, ketika konsentrasi orde 2 hingga 8 M ditemui.
Koefisien aktivitas fase resin bahkan lebih sulit untuk diobati. Akibatnya, ada pilihan selain
menggunakan konstanta kesetimbangan, atau rasio konsentrasi. Selektivitas. Koefisien mereka,
didefinisikan dengan mengabaikan koefisien aktivitas, ditentukan secara empiris dan cukup
konstan untuk kondisi tertentu. Pengamatan eksperimental telah dirumuskan ke dalam sejumlah
aturan yang berguna:

1. Koefisien selektivitas mendekati kesatuan ketika cross-linking menurun

2. Pertukaran ion yang menyebabkan ekspansi resin kurang disukai pada pertukaran yang tidak
kecenderungan untuk resin
3. Semakin besar mengisi daya semakin besar afinitas untuk resin
4. Afinitas ion organik berat molekul tinggi dan beberapa kompleks anionik ion logam sangat
tinggi, karena gaya elektrostatik ditambah oleh adsorpsi jarak pendek (Van der Waal's)

Untuk perkiraan pertama, aturan ini memprediksi urutan afinitas yang diamati untuk kelompok
ion:
 di atas sering menunjukkan inversi karena perubahan pH, konsentrasi relatif, sifat resin,
pembentukan kompleks, kekuatan ionik, dll. Teori lempeng, yang dikembangkan oleh Martin
dan Synge untuk kromatografi partisi, bisa diterapkan langsung ke kolom pertukaran ion dengan
hanya perubahan terminology. Kami akan mendefinisikan rasio distribusi, D, sebagai:

jumlah sampel dalam resin dari jumlah plat

D=
jumlah sampel dalamlarutan interstitial dari plat yang sama

Pengaruh pH Eluent. Tingkat disosiasi asam dan basa lemah, dan hidrolisis garam dan ion
logam dikendalikan oleh pH medium. Dengan demikian muatan listrik pada suatu spesies dapat
meningkat, menurun, atau bahkan dibalik dengan perubahan pH. Dengan cara ini, kami
memiliki cara yang halus namun kuat untuk mempengaruhi distribusi, atau mencegah pertukaran
sama sekali. Perilaku ini sangat penting dalam pemisahan asam amino yang dapat membawa
muatan bersih positif, negatif, atau tidak tergantung pada pH eluen. Eluen yang disangga jelas
diindikasikan untuk pemisahan jenis ini, tetapi orang tidak boleh lupa bahwa konstituen ionik
dari buffer juga dapat ditukar dengan resin sehingga pH di dalam kolom mungkin tidak
berhubungan dengan apa yang disiapkan. Efek pH pada elusi asam lemah khas.

Pengaruh Agen Pengompleks. Ligan yang merupakan molekul netral tidak berpengaruh pada
muatan ion, tetapi mengubah konstanta kesetimbangan pertukaran. Banyak ion logam
dikomplekskan oleh anion yang menghasilkan ion kompleks bermuatan negatif. Dengan
demikian, kation logam tanah jarang yang dipisahkan dengan buruk oleh penukar kationik, dapat
dikomplekskan dan dipisahkan dengan cukup baik oleh penukar anionik.

Sebagian besar zat pengompleks yang berguna adalah mengandung asam lemah, basa lemah,
atau anion atau kationnya. Jadi pH dan kompleks efek sering saling tergantung. Meskipun ada
kontrol sensitif dari pemisahan, kesetimbangan multiple yang dihasilkan agak rumit bahwa
prediksi teoritis sedikit nilainya karena perkiraan yang diperlukan.

Teknik Kromatografi Pertukaran Ion

Seleksi dan Persiapan Resin. Berbagai macam resin tersedia secara komersial di mana
seseorang harus memilih ukuran mata jaring yang sesuai, ikatan silang, dan kualitas. Resin kelas
analitik (AG) lebih disukai karena mereka telah lebih hati-hati diukur dan dicuci untuk
menghilangkan bahan organik dan anorganik asing. Mungkin perlu untuk mengubah resin dari
satu bentuk ke bentuk lainnya; misalnya, bentuk hidrogen dapat diubah menjadi bentuk natrium
dengan mencuci secara ekstensif dalam kolom dengan larutan natrium klorida yang kuat sampai
efluennya netral. Resin bekas "dibuat ulang" dengan cara ini.

Jika penting untuk mengetahui berat resin .disimpan, itu harus dikeringkan atau dibawa ke kadar
uap air yang diketahui dalam hygrostat (terkontrol dan konstan, dan kelembaban). Dalam hal
apa pun, sebelum pengemasan, harus diseimbangkan dengan air dengan perendaman proion.
Setelah resin telah menetap.
Mengemas Kolom. Kolom sederhana dibuat dari tabung kaca dengan reservoir di bagian atas
untuk sumbat wol kaca di bagian paling atas untuk menopang lapisan resin. Biasanya bagian
bawah kolom ditarik ke diameter dan ditekuk dalam bentuk U-ganda sehingga lebih tinggi dari
bagian atas tempat resin. Ini mencegah gelembung udara bocor ke dalam kolom. Resin
dikemas sebagai bubur berair dan dibiarkan mengendap dengan sesekali. Setelah dikemas,
tingkat cairan tidak boleh dibiarkan mengalir lebih rendah dari bagian atas resin atau gelembung
udara akan terperangkap. Cara terbaik untuk menghilangkan gelembung udara atau menyalurkan
adalah dengan menyiram kembali kolom dengan aliran air. serat kertas atau kaca yang
ditempatkan di atas akan meminimalkan gangguan resin saat menambahkan sampel.

Kapasitas Total dari Kolom. Total kapasitas pertukaran mempengaruhi ukuran sampel
maksimum dan digunakan untuk memeriksa stabilitas jangka panjang dari resin. Kapasitas resin
dalam mili-ekuivalen per gram resin kering biasanya ditandai pada botol oleh pabrik. Secara
eksperimental, ini paling mudah ditentukan dengan mengubah resin seluruhnya menjadi bentuk
hidrogen (jika bersifat kationik), dan kemudian dielusi dengan larutan natrium klorida sampai
sepenuhnya dikonversi ke bentuk natrium. Efluen kemudian harus mengandung asam klorida
dalam jumlah yang setara dengan kapasitas kolom mudah ditentukan dengan titrasi dengan
natrium hidroksida. Resin biasa memiliki kapasitas 1 hingga 5 meq / ml atau sekitar 1 hingga 5
N dalam asam basa.

Metode Deteksi . Kesulitan mendeteksi sejumlah kecil komponen sampel. di hadapan

konsentrasi besar ion elusi adalah salah satu utama metode pertukaran ion. Perekaman kontinu
tidak umum, meskipun dalam aplikasi tertentu, penyerapan cahaya, indeks bias, pH,
radioaktivitas, atau pengukuran polar telah digunakan. Praktik yang paling umum adalah
mengumpulkan banyak fraksi volume kecil yang setara dan menganalisis setiap fraksi untuk
spesies yang dicari.

Beberapa Aplikasi

Penghapusan Ion. "Pelembut air" rumah tangga mungkin merupakan contoh pertukaran ion
yang paling umum. Kalsium, magnesium, zat besi, dan semua kation yang bermuatan berlipat
diganti dengan ion natrium. Air yang melunak kemudian mengandung garam natrium yang tidak
berbahaya dalam sistem pipa dan untuk sebagian besar penggunaan di rumah. Sodium dipilih
karena tidak berbahaya di dalam air dan karena resin dapat segera diregenerasi dengan larutan
garam biasa yang kuat. Air yang sepenuhnya terionisasi disiapkan dengan melewatkan air
mentah melalui penukar kation yang menggantikan semua kation dengan ion hidrogen, dan
kemudian melalui penukar anion yang menggantikan semua anion dengan ion hidroksida.
Akibatnya, garam diganti dengan ion air. Kedua resin tersebut dapat digabungkan dalam satu
bedengan campuran sehingga air tidak pernah menjadi terlalu asam atau basa karena mungkin
jika melewati kedua resin secara terpisah. Air terdeionisasi yang memiliki konduktivitas kurang
dari 10¯⁶ mho / cm disiapkan lebih mudah dengan pertukaran ion daripada dengan destilasi.
Namun, proses deionisasi tidak menghilangkan nonelektrolit, dan dengan demikian air mungkin
masih tidak murni. Pertukaran ion menawarkan metode yang mudah dan efektif untuk
menghilangkan garam larutan campuran organik atau biokimia. Penghapusan satu atau lebih ion
pengganggu dengan mengganti yang tidak berbahaya untuk proses atau prosedur tertentu adalah
aplikasi yang jelas. Penentuan kadar garam total suatu larutan disederhanakan dengan konversi
ion hidrogen kation atau ion anion hidroksida, diikuti dengan titrasi asam sederhana.

Konsentrasi Konstituen Jejak. Bilamana sejumlah kecil ion diisolasi atau dipekatkan dari
larutan berair dalam volume besar, salah satu metode pilihan adalah menghilangkannya dengan
penukar ion diikuti dengan elusi ke dalam voiume kecil dari eluen. Ini adalah langkah umum
dalam penentuan jejak bertemu di keringanan. tembaga dalam susu, atau pemulihan logam
mulia. Mungkin contoh spektakuler terjadi dalam isolasi dan identifikasi pertama dari
mendelevium. Sepuluh ribu atom einsteinium pada foil gold menyerang dengan partikel alpha
energi tinggi. Target dengan cepat larut dengan aqua regia dan emas diekstraksi dengan etil
asetat. Fase berair yang mengandung einsteinium dan setiap mendelevium yang dihasilkan,
terpisah dengan kolom penukar ion miniatur. Pada satu titik, seluruh dunia tentang 17 atom)
dari unsur yang baru ditemukan ini terkandung dalam satu manik resin

Persiapan Reagen. Larutan penentu asam kuat dan basa tidak mudah disiapkan karena
kurangnya reagen standar primer. Pada pita lainnya, natrium standar atau kalium klorida standar
primer sudah tersedia dan solusinya stabil tanpa batas. Aliquot dari solusi ini, ketika dilewatkan
melalui resin dalam bentuk hidrogen atau hidroksida, akan menghasilkan jumlah asam atau basa
yang setara. Banyak solusi lain yang sulit dipersiapkan atau distandarisasi dapat dibuat dengan
cara yang serupa.

Pemisahan Logam. Pertukaran ion sangat menguntungkan untuk pemisahan ion logam dengan
sifat yang sangat mirip dimana metode spesifik tidak tersedia. Sebagai contoh, logam alkali dan
alkali tanah selalu sulit untuk menentukan dalam campuran, tetapi dapat dengan mudah
dipisahkan dalam kolom pertukaran ion. Pemisahan tanah jarang adalah masalah klasik yang
sebelumnya hanya dilakukan oleh kristalisasi fraksional yang membosankan. Koefisien
selektivitas untuk ion logam tanah jarang hampir identik satu sama lain, tetapi dengan
penambahan zat penggerak seperti EDTA, koefisien selektivitas diubah ke berbagai tingkat.
Dengan demikian pemisahan menjadi lebih sederhana. Kolom pertukaran ion sekarang
menyediakan senyawa tanah jarang murni pada skala komersial.

Pemisahan Asam Amino. Mungkin contoh yang paling mengesankan dari fleksibilitas dan
potensi metode pertukaran ion adalah pemisahan asam amino kompleks yang ditemukan dalam
biokimia. Sifat amfoterik dari gugus asam ini memungkinkan untuk mengubah tanda muatan
atau menghilangkan muatan bersih sehingga asam yang diberikan dapat ditukar dengan resin
kationik atau anionik, atau tidak sama sekali, dengan mengendalikan pH larutan. Dengan
demikian, pada pH yang diberikan, campuran asam amino dapat dipisahkan menjadi tiga
kelompok sesuai dengan poin mereka dengan melewatkannya melalui dua jenis resin secara
berturut-turut. Setelah mengubah pH, kelompok dapat dibagi lagi sebanyak yang diinginkan.
Sebagai alternatif, campuran asli dapat diselesaikan dalam satu kali melewati resin yang sesuai
dengan teknik elusi bertingkat di mana pH eluen secara meningkat bertahap. Moore dan Stein
mampu memisahkan asam amino dengan teknik ini. Kondisi untuk pemisahan ini diberikan di
bawah diagram pada Gambar 5-6. Baik pH dan suhu direbus selama elusi. Baru-baru ini asam
amino telah dipisahkan dengan resin yang mengandung ion logam yang tidak bergerak
(misalnya: Cu²⁺, Cd²⁺). Ion logam kemudian bertindak sebagai situs pertukaran untuk ligan,
khususnya untuk asam amino. Jika campuran asam amino dilewatkan melalui resin seperti itu,
berbagai gugus amina bersaing dalam pembentukan kompleks dengan ion logam dan muncul
dalam rangka meningkatkan stabilitas kompleks.