VALIDASI METODE ANALISIS OFLOKSASIN DALAM

PLASMA IN VITRO SECARA KROMATOGRAFI CAIR

KINERJA TINGGI-FLUORESENSI MENGACU PADA
EUROPEAN MEDICINES AGENCY GUIDELINE
KELOMPOK 4
 BAHAN YANG DIGUNAKAN :

1. ofloksasin (USP),
2. siprofloksasin HCl (USP),
3. metanol HPLC grade (Merck),
4. asetonitril HPLC grade (Merck),
5. aquabidestilata (Ikapharmindo),
6. asam fosfat 85% analytical grade (Merck),
7. trietilamin (Merck),
8. plasma darah (Palang Merah Indonesia).
 AIR KI NER JA TI
FI C N GG
RA I
G P) YA N G TERD
D V IR

(SH
ATO
A

IMA
KROM

ID
0
LC-2

ARI

DZU,
Pompa

Autosampler
(Prominence, SIL-20A),

Kolom C18 (Waters, SunfireTM 5

Detektor fluoresensi
μm; 250 x 4,6 mm)
(Shimadzu RF-10A XL)

Pengolah data pada

komputer
 BAHAN YANG DIGUNAKAN MELIPUTI :

ofloksasin (USP) aquabidestilata

(Ikapharmindo)
siprofloksasin HCl (USP)
asam fosfat 85%
metanol HPLC grade (Merck) analytical grade (Merck)
asetonitril HPLC grade (Merck) plasma darah
trietilamin (Merck) (Palang Merah Indonesia)
 MATRIKS PENELITIAN
Matriks biologi apakah yang digunakan dalam pengujian dan berasal dari mana ?
Kandungan senyawa ofloksasin dalam plasma

INTERNAL STANDARD
Internal standard apakah yang digunakan ?
Larutan standar ofloksasin 1000,0 µg/mL

METODE SELEKKTIVITAS
Bagaimana metode selektivitas ?
Digunakan metode LLOQ sebesar 21,40 ng/mL. Diuji menggunakan 6 plasma
yang berbeda. Didapatkan nilai KV sebesar 11,10% serta % diff sebesar - 19,89% -
13,28%. Pengujian tersebut tidak melebihi persyaratab yang ditentukan (< 20%).

 PRESISI
Presisi %dif
(pengujian interday) KV presisi
KV keberterimaan Rendah = 7,10 %
didapat data sebesar

14.49 % - 14,67 % Rendah = 4,81 %

Sedang = 4,90 %

Memenuhi persyaratan Sedang = 4,31 %

tidak lebih (+/- 15%), LLOQ

Tinggi = 4,81 %
tidak lebih dari +/- 20% Tinggi = 2,11 %

 perolehan kembali
KV akurasi
AKURASI Rendah = 88,51 % - 111,08 %
keberterimaan 88,27 % - 96,21 %
Rendah = 2,56 %

Sedang 2,18 %

sedang = 86,94 % - 100,24 % Tinggi = 2,02 %

kberterimaan 88,03 % - 88,96 %

Memenhuhi persyaratan (+-

Tinggi = 89,54 % - 102,86 % 15%),LLOQ tidak lebih dari +-20 %
KV keberterimaan keberterimaan 53,93 % - 61,87 %

Rendah = 4,81 %

Sedang = 4,31 %

Tinggi = 2,11 %
Kurva baku dan linearitas metode
 STABILITAS SAMPEL
DAN
KONSENTRASI YANG DIGUNAKAN
Uji stabilitas ofloksasin dalam plasma dilakukan dengan menganalisis pada tiga kali siklus beku-cair,
penyimpanan pada suhu kamar selama 24 jam, penyimpanan pada freezer -20°C untuk jangka panjang,
dan penyimpanan pasca preparasi dalam autosampler selama 24 jam. Analisis stabilitas dilakukan pada
konsentrasi rendah (QCL) dan tinggi (QCH). Pada uji stabilitas beku dan cair dilakukan penyimpanan
pada suhu -20°C minimal 12 jam dan dicairkan kemudian disimpan kembali pada suhu -20°C. Nilai %
diff untuk konsentrasi rendah dan tinggi yaitu berkisar antara -6,37% – 7,35% dan -8,10% – 1,56%.
Pada uji stabilitas jangka pendek diperoleh nilai % diff untuk konsentrasi rendah dan tinggi yaitu
berkisar antara -7,73% – 9,51% dan -3,14% – 2,38%