Nama : Nadiyah Atikah Della Putri

NIM : 15-01-01-066

Kelas : S1 B

Metode Uji Kadar Kromatografi Cair Kinerja Tinggi untuk Penentuan

Lidokain pada Serum Manusia
Lidocaine (juga dikenal sebagai 2- (diethylamino) -N- (2,6-dimethylphenyl)
acetamide) umumnya digunakan sebagai obat anestesi lokal dan antiaritmia. Lidocaine
bukanlah obat baru, dan karenanya banyak metode tersedia untuk kuantitasi dalam spesimen
biologi. Metode yang tersedia luas, seperti GC-MS, UV, LC-MS/MS, FLURORESCENCE
OF DERIVATIVE. Bahan yang digunakan adalah Lidocaine HCl (0,4% dalam dekstrosa 5%
untuk injeksi), Etil eter, asetonitril, air (semua HPLC grade), trietilamina, kalium fosfat
(monobasic) dan asam sulfat.
Obat stok 0,4% lidokain HCl dalam dekstrosa 5% untuk injeksi. Larutan standar kerja
disiapkan setiap hari dari larutan stok dengan pengenceran serial dengan air kelas HPLC
untuk memberikan konsentrasi akhir 40, 4 dan 0,4 μg/ mL lidokain. Larutan stok standar
internal (SI) disiapkan dengan melarutkan 17 mg procainamide HCl dalam 100 mL air.
Semua larutan stok didinginkan di antara penggunaan. Untuk pembangunan kurva standar,
sampel (0,25 mL) disiapkan dengan menambahkan lidocaine HCl setara dengan 50, 125, 250,
500, 1000, 2000, 2500 dan 5000 ng/ mL. Pemulihan ditentukan dengan konsentrasi lidocaine
HCl 50 dan 1000 ng / mL dan dengan konsentrasi IS 0,17 mg / mL dalam serum manusia.
Untuk kurva standar dan sampel validasi, serum diperoleh dari dua individu yang sehat pada
dua kesempatan terpisah. Untuk dua sampel, setiap individu diminta untuk tidak
mengkonsumsi makanan atau minuman yang mengandung kafein selama 24 jam sebelum
pengambilan sampel.
Uji ini divalidasi, umumnya menggunakan pedoman yang diterbitkan oleh EMA.
Kurva kalibrasi dihitung dengan menggunakan rasio tinggi puncak lidocaine HCl (rentang
konsentrasi dari 50 hingga 5000 ng / mL) untuk IS versus konsentrasi lidokain nominal.
Validasi intra-hari dinilai pada empat konsentrasi lidokain HCl berbeda (50, 250, 500 dan
2000 ng / mL) per hari dalam lima kali ulangan. Langkah ini diulang pada tiga hari terpisah
untuk penentuan validasi antar-hari. Untuk setiap operasi harian, satu set sampel kalibrasi
kurva independen disiapkan. Keakuratan dan ketepatan dinilai dengan menggunakan rata-rata
persentase kesalahan intra-dan antar-hari dan koefisien persen variasi (CV%), masing-
masing. Untuk setiap operasi harian, satu set sampel kalibrasi terpisah dari sampel validasi
disiapkan untuk memungkinkan kuantifikasi puncak rasio ketinggian lidokain menjadi IS.
Presisi dinilai dengan koefisien persentase variasi (CV%), sementara akurasi diwakili dengan
menentukan kesalahan persentase intra-atau antar-hari rata-rata.
Rata-rata pemulihan adalah 97,7 ± 21% dan 81,0 ± 2,4% untuk 50 dan 1000 ng / mL
lidocaine HCl dalam serum, masing-masing. Pengambilan ekstraksi rata-rata untuk IS pada
konsentrasi yang digunakan dalam pengujian adalah 55,4 ± 4,1%. Ada hubungan linier yang
sangat baik (> 0,9995) yang tercatat antara rasio tinggi puncak dan konsentrasi HCl lidokain
pada kisaran 50–5000 ng / mL serum. Dari analisis regresi konsentrasi vs rasio tinggi puncak
lidokain menjadi IS, rata-rata lereng dan intersepsi yang diamati adalah 0,00024 dan 0,0011,
masing-masing. Koefisien korelasi rata-rata regresi (r2) untuk kurva standar serum adalah
0,9995. CV penilaian intra dan inter-day kurang dari 15% . Kesalahan antar-hari rata-rata
dalam serum manusia kurang dari 9%.
Sistem kromatografi terdiri dari pompa air sistem pengiriman multi-pelarut Waters
(Milford, MA, USA) 600 E, autosampler dengan katup injeksi variabel (Waters 717), dan
detektor absorbansi merable UV-visible (Waters 486). Kromatogram direkam menggunakan
perangkat lunak EZStart (Perangkat Lunak Ilmiah, Pleasanton, CA, USA) dalam sistem
komputer berbasis Windows untuk pengumpulan dan pemrosesan data. Pemisahan
kromatografi lidocaine dan procainamide (standar internal) dicapai menggunakan 150 × 4,6
mm id, ukuran partikel 3,5 μm Alltima C18-kolom (Alltech, Deerfield, IL, USA) yang
melekat pada kolom pra-penjaga (Grace Alltech All-GuardTM Guard Cartridges, 7,5 mm 5
μm, Deerfield, IL, USA). Fase gerak terdiri dari campuran larutan asetonitril dan fosfat (25
mM KH2PO4-3 mM asam sulfat-3,6 mM trietilamina) dalam rasio 12:88 (v / v). Fase gerak
direduksi sebelum digunakan dengan menyaringnya di bawah tekanan vakum melalui 0,45
μm filter nilon ukuran pori, kemudian dipompa pada laju alir 0,9 mL / menit pada suhu
kamar. Segera setelah injeksi, panjang gelombang deteksi UV ditetapkan pada 277 nm (UV
Maksimum untuk procainamide). Pada 4 menit setelah injeksi, detektor UV diprogram untuk
beralih ke panjang gelombang 210 nm (UV maksimum untuk lidokain). Total waktu proses
analitis adalah <13 menit. Metode HPLC yang diuraikan di sini merupakan cara yang akurat
dan tepat untuk menentukan konsentrasi lidokain dalam 0,25 mL volume serum manusia.
Volume serum yang dibutuhkan berada di ujung bawah volume yang digunakan oleh metode
analitis lainnya. Selain itu, batas kuantisasi yang dilaporkan divalidasi lebih sering dari 50 ng
/ mL. Konsentrasi kuantitatif tervalidasi terendah ditemukan dalam literatur menjadi 10 ng /
mL, meskipun volume serum 1 mL diperlukan.

Kromatogram HPLC-UV serum kosong (bebas obat) dari sukarelawan yang sehat,
serum relawan berduri dengan 1000 ng / mL lidokain, dan serum diperoleh 1 jam setelah
suntikan lidokain 200 mg. Puncak dalam sampel pasien yang muncul pada 6,8 menit pada
sampel pasien diduga menjadi metabolit lidocaine, monoethylglycinexylidide (MEGX).
Puncak pada 6,4menit dianggap berasal dari komponen makanan yang dicerna oleh
sukarelawan yang tidak berpuasa. Waktu retensi kromatografi adalah 10 menit untuk lidokain
dan 2,5 menit untuk IS. Kromatografi menampilkan bentuk puncak simetris dan spesifisitas
tinggi, dengan resolusi dasar IS dan lidokain. Untuk kedua analit, ada tidak adanya gangguan
dari komponen endogen dalam serum.

Jadi, dapat disimpulkan metode ini menunjukkan kaliber sensitivitas dan selektivitas
yang tinggi untuk memantau konsentrasi lidokain dalam serum manusia. Metode ini tidak
rumit dalam hal persiapan sampel dan ekstraksi. Itu tepat dan akurat dan terbukti memiliki
utilitas sebagai sarana untuk mengukur konsentrasi lidocaine sebagai bagian dari studi
farmakokinetik.

Daftar Pustaka :
Nebaihi, H.M.A., Primrose, M., Green, J.S., dan Brocks, D.R. (2017). A high-performance
liquid chromatography assay method for the determination of lidocaine in human
serum. Pharmaceutics, 9(52): 2-8. doi: 10.3390/pharmaceutics9040052.