TRANSLITE JURNAL

RESPON DAN ADAPTASI STRES SALINITAS TERHADAP MEKANISME MIKROALGA HIJAU

EUKARIOTIK

Abstrak: Salinitas yang tinggi merupakan tekanan lingkungan yang menantang bagi
organisme untuk diatasi. Uniseluler mikroalga fotosintesis sangat rentan karena mereka
harus bergulat tidak hanya dengan ionik ketidakseimbangan dan tekanan osmotik tetapi
juga dengan spesies oksigen reaktif (ROS) yang dihasilkan mengganggu fotosintesis.
Tinjauan ini mencoba untuk membandingkan dan membedakan mekanisme yang alga,
khususnya mikroalga Chlamydomonas eukariotik, dipamerkan untuk segera merespons
kondisi yang keras disebabkan oleh salinitas yang tinggi. Tinjauan ini juga menyusun
mekanisme adaptasi ganggang ganggang air tawar dalam kondisi garam tinggi yang
persisten. Memahami respons alga jangka pendek dan jangka panjang salinitas tinggi
merupakan bagian integral dari penelitian mendasar lebih lanjut dalam biologi alga dan
bioteknologi.

Kata kunci: cekaman garam tinggi; ganggang hijau; adaptasi; transkriptom; salinitas;
Chlamydomonas
1. PENDAHULUAN

Alga mengacu pada kelompok luas mikroorganisme dan makroorganisme yang

mampu melakukan fotosintesis oksigen, namun menunjukkan perbedaan yang
mencolok dibandingkan dengan tumbuhan darat. Definisi alga tradisional dan umum
termasuk cyanobacteria prokariotik dan ganggang eukariotik milik filogenetik yang
sangat berbeda clades. Mikroalga eukariotik berasal dari polifiletik dan memiliki relung
ekologi yang luas dan sejarah evolusi. Mereka ada di mana-mana di sebagian besar
lingkungan sebagai produsen utama, termasuk lingkungan ekstrim seperti panci soda
dan danau garam. Wajan soda sangat asin, dangkal, dan sistem perairan intermiten yang
sangat basa karena tingginya konsentrasi natrium dan ion karbonat. Danau asin
merupakan contoh bagus lain dari lingkungan hipersalin di mana hijau alga tumbuh, dan
dalam beberapa kasus, berkembang pesat [1]. Lingkungan ini memiliki garam yang lebih
besar dan sering berubah konsentrasinya dibandingkan air laut. Terlepas dari kondisi
ekstrem ini, ganggang hijau eukariotik tetap ada produsen utama dalam ekosistem ini
bersama cyanobacteria dan euglenophytes [2]. Eukariotik alga memiliki plastisitas dan
kemampuan beradaptasi yang besar terhadap sebagian besar tekanan abiotik. Beberapa
spesies yang termasuk dalam genus yang sama mampu tumbuh baik di air tawar
maupun air asin.
Namun, sebagian besar galur air tawar menunjukkan penurunan pertumbuhan
dan kelangsungan hidup di lingkungan salinitas tinggi dan umumnya tidak dapat
bertahan hidup di luar ambang batas salinitas yang rendah. Dalam ulasan ini kami akan
menggunakan terminologi alga peka garam untuk merujuk pada ganggang ganggang air
tawar yang memiliki viabilitas terbatas di bawah stres garam tinggi dan ganggang toleran
garam untuk merujuk pada ganggang laut atau payau yang dapat dengan mudah
mengatasinya dengan salinitas tinggi. Nanti di review kita juga akan membahas tentang
adaptasi salt sensitive strain dengan kondisi salinitas tinggi dan kami akan menyebutnya
sebagai strain yang beradaptasi dengan garam. Kami mengusulkan untuk menggunakan
terminologi terpadu ini karena beberapa studi menggunakan terminologi yang berbeda
sedang dibahas dan dibandingkan dalam ulasan ini.
Mempelajari sifat-sifat spesies alga toleran garam adalah langkah pertama yang
baik dalam memahami bagaimana organisme fotosintesis mengatasi garam tinggi. Ini
karena tidak seperti rekan-rekan mereka di air tawar, mesin untuk mengatasi salinitas
terukir dalam genom ganggang laut sebagai hasil seleksi evolusi selama berabad-abad.
Sebaliknya, spesies air tawar harus merancang mekanisme untuk mengatasi tekanan
salinitas tinggi yang tidak biasa mereka alami. Ini membutuhkan perubahan drastis
dalam morfologi dan konsentrasi osmolit dalam jangka pendek dan akumulasi mutasi
yang menguntungkan dalam jangka panjang. Lebih dari empat dekade penelitian telah
membentuk pemahaman kita tentang bagaimana mikroalga merespons, menyesuaikan
diri, dan tumbuh di bawah tekanan yang begitu menantang. Namun, ada beberapa
ulasan yang mentabulasi semua banyak perubahan yang terjadi. Selanjutnya, beberapa
dari perubahan ini sangat spesifik spesies. Dengan demikian, perbandingan antar spesies
yang berbeda dapat memberikan peta yang lebih lengkap dari berbagai mekanisme yang
digunakan. Akhirnya, banyak produk yang layak secara komersial diproduksi oleh
mikroalga untuk meningkatkan kelangsungan hidup mereka di bawah kondisi yang
sangat salin. Eksploitasi mekanisme ini sangat dicari di berbagai bidang. Namun,
eksploitasi yang berhasil hanya dapat terjadi dengan pemahaman menyeluruh tentang
mekanisme ini dan kecenderungan mekanisme untuk berubah di bawah adaptasi jangka
panjang.
Sayangnya, hanya beberapa spesies Chlamydomonas toleran garam yang
dijelaskan. Chlamydomonas pulsatilla adalah spesies laut yang diisolasi di Kanada. Studi
pertumbuhan untuk spesies ini telah menunjukkan salinitas dari 10% air laut buatan
(ASW) menjadi optimal untuk laju pertumbuhan tinggi, sementara laju pertumbuhan
yang berkurang adalah diamati pada salinitas yang lebih tinggi. Tingkat pertumbuhan
pada 200% ASW adalah 69% dari tingkat pertumbuhan pada 10% ASW [3]. Strain ini
dapat memanfaatkan asetat sebagai sumber karbon, tetapi tidak mampu memanfaatkan
nitrat atau urea sebagai sumber nitrogen. Namun, dapat memanfaatkan beberapa asam
amino yang berbeda untuk nitrogen [4]. toleran garam strain laut adalah model yang
berharga untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi gen yang terkait dengan
resistensi salinitas. Chlamydomonas W80 adalah spesies Chlamydomonas laut, diisolasi
dari pantai Jepang [5]. Sebuah angka studi menggunakan perpustakaan cDNA yang
dibangun dari C. W80 telah berhasil mengkarakterisasi sekelompok kecil gen yang
memberikan peningkatan toleransi salinitas dalam sel E. coli yang ditransformasi. Gen
dari eukariotik mikroalga yang secara eksperimental dicirikan sebagai gen yang
berhubungan dengan toleransi garam ditunjukkan pada Tabel 1.

Tabel 1. Gen dengan respons fungsional yang diamati secara eksperimental terhadap
stres garam.

2. Pengaruh Konsentrasi Garam Tinggi pada Alga Hijau

Ada beberapa perubahan morfologi dan molekuler yang terjadi secara
bersamaan yang meningkatkan kelangsungan hidup ganggang sensitif garam di bawah
tekanan garam tinggi. Ini dijelaskan secara lebih rinci di bawah ini.
2.1. Perubahan Morfologi Dasar
Stres yang disebabkan oleh konsentrasi garam yang tinggi memperlambat
pembelahan sel, mengurangi ukuran, menghentikan motilitas, dan memicu
pembentukan palmelloid pada spesies Chlamydomonas [13-16]. Tingkat pertumbuhan
segera dan terkena dampak langsung dan dapat dengan mudah dideteksi. Sel
Chlamydomonas reinhardtii di bawah tekanan garam tinggi memiliki tingkat
pertumbuhan yang lebih rendah dibandingkan dengan sel yang tidak diobati. Sel alga
sensitif garam yang tidak diobati (kontrol) tercapai kepadatan optik (OD) 1 pada 750 nm
dalam empat hari sementara sel yang diberi garam membutuhkan enam hari untuk
mencapai OD yang sama. Sel-sel yang lebih kecil dalam tahap membagi di semua
konsentrasi garam [16]. Peningkatan konsentrasi garam berdampak negatif terhadap
pertumbuhan spesies alga air tawar lainnya seperti seperti Chlorella vulgaris, Chlorella
salina, Chlorella emersonii [17], dan Scenedesmus opoliensis [18]. Gambar 1
memberikan gambaran dari semua respon aklimatisasi jangka pendek yang terjadi ketika
Chlamydomonas adalah terkena kondisi hipersalin.

Gambar 1. Gambar konseptual merinci perubahan morfologi yang terjadi ketika sel
normal (A) terkena kondisi salin (B-G). (A) Sel C. reinhardtii tanpa tekanan, (B) Upregulasi
protein transpor membran, (C) Akumulasi zat terlarut osmoregulasi, (D) Degradasi
kompleks pemanenan ringan, (E) Pembentukan palmloid, (F) Kehilangan flagel dan
penurunan motilitas, (G) Akumulasi lipid.

Sel Chlamydomonas yang terpapar kondisi yang tidak menguntungkan memasuki tahap
sementara yang disebut sebagai: "palmelloid". Beberapa perubahan struktural terjadi
dalam bentuk palmelloid termasuk (i) hilangnya flagella, (ii) pengelompokan sel dengan
minimal dua sel per cluster, (iii) peningkatan sekresi dari eksopolisakarida (EPS), (iv) sel
yang dikelilingi oleh matriks EPS yang berbagi membran yang sama, dan (v) penebalan
dinding sel individu (Gambar 1). Palmeloid terus bertambah jumlahnya sampai 24 jam
setelah terpapar salinitas tinggi. Analisis proteomik mengidentifikasi expansin, Wall
Stress-responsive Protein domain komponen (WSC), pheophorin-C5, Protein kaya
Protein Penyimpanan Vegetatif (VSP4), dan protein seperti Cathepsin-Z yang diduga
terkait dengan pembentukan palmelloid [14]. pohon palem struktur C. reinhardtii sangat
menarik, struktur multiseluler dapat divisualisasikan dengan jelas di bawah mikroskop
(Gambar 2-4, data internal yang tidak dipublikasikan).

Gambar 2. Gambar mikroskop optik Chlamydomonas reinhardtii cc124 dalam kondisi

normal (A) dan kondisi tekanan garam (150 mM NaCl) (B) (data internal tidak
dipublikasikan).

Gambar 3. Gambar mikroskop elektron Chlamydomonas reinhardtii cc124 dalam kondisi

normal (A) dan kondisi tekanan garam (150 mM NaCl) (B) (data internal tidak
dipublikasikan).

Gambar 4. Gambar mikroskopis confocal Chlamydomonas reinhardtii cc124 dalam

kondisi normal (A) dan kondisi tekanan garam (150 mM NaCl) (B). Calcofluor white
menodai selulosa dan kitin dan berwarna biru sedangkan fotosistem II tereksitasi dan
divisualisasikan dalam warna merah. Gambar-gambar ini menunjukkan peningkatan
polisakarida sebagai peristiwa integral dari pembentukan palmelloid (tidak
dipublikasikan in-house data)
 Dalam kondisi yang menguntungkan, matriks EPS terdegradasi dan sel
terdisosiasi dari bentuk palmeloid untuk masuk ke dalam medium. Akumulasi protein
dengan domain seperti PAN/APPLE di media yang dihabiskan pasca-stres [14]
mendukung fenomena ini karena domain tersebut memfasilitasi interaksi protein-
karbohidrat [19]. Tren yang sama diamati untuk Metalloproteinases Matrix
Metallopeptidase 13 (MMP13) dan Matrix Metallopeptidase 3 (MMP3), yang
bergantung pada kalsium endopeptidases yang terlibat dalam degradasi matriks EPS
seperti lendir [20].
Meskipun matriks EPS terdiri dari polisakarida yang berbeda, komposisi yang
tepat dari EPS bervariasi dari spesies ke spesies dan kondisi lingkungan. Produksi EPS
membutuhkan energi yang intensif. Namun, perlindungan yang ditawarkan oleh matriks
EPS memungkinkan sel yang tertekan untuk bertahan hidup di bawah kondisi yang
merugikan kondisi dengan mengasingkan sel-sel stres dari lingkungan. Chlamydomonas
sensitif garam sel ditempatkan dalam media dengan 100-150 mM NaCl menghasilkan 3-
6 kali lipat lebih EPS dibandingkan dengan yang di medium tanpa penambahan garam
[14]. Ini menyiratkan bahwa peningkatan salinitas memodulasi peningkatan produksi
EPS.
Genera alga seperti Dunaliella dan Chlorella tidak membentuk palmelloids dan
menunjukkan perbedaan mekanisme untuk mengatasi stres garam. Sel Chlorella
memiliki dinding sel yang kaku, sehingga membatasi kemampuannya untuk mengubah
volume sel. Oleh karena itu, osmoregulasi melalui produksi zat terlarut organik dan
akumulasi ion anorganik digunakan untuk mempertahankan homeostasis osmotik.
Selanjutnya, kation dalam media adalah terikat dalam ruang intraseluler mengurangi
aktivitas osmotik [21]. Sebaliknya, Dunaliella tidak memiliki dinding sel kaku yang
memungkinkan sel untuk dengan cepat mengubah volume selama tekanan salinitas
tinggi dengan menyesuaikan ion intraseluler dan konsentrasi gliserol akhirnya
mengembalikan tekanan turgor sel [22]. Sebuah studi tentang perubahan ukuran sel
pada D. salina yang disebabkan oleh stres garam yang tinggi menunjukkan volume sel
terus menerus berfluktuasi selama sepuluh hari, akhirnya stabil pada ukuran sel yang
sedikit lebih besar dibandingkan tanpa tekanan kondisi [23].

2.2. Produksi Zat terlarut Osmoregulator

Sel alga dengan dinding sel kaku memiliki kemampuan terbatas untuk
mengubah volume sel dan dengan demikian bergantung pada sangat pada zat terlarut
organik untuk osmoregulasi. Zat terlarut ini, juga disebut sebagai zat terlarut
kompatibel, adalah: biasanya molekul organik kecil dengan muatan netral dan toksisitas
rendah pada konsentrasi tinggi [24]. Selanjutnya, zat terlarut yang kompatibel pada
konsentrasi tinggi memungkinkan fungsi yang efisien dari berbagai enzim. Zat terlarut
yang kompatibel menumpuk di sitosol dan menyeimbangkan tekanan osmotik antara
media luar dan sitosol.
Gliserol adalah contoh yang baik dari zat terlarut kompatibel yang umum tetapi
efektif yang diproduksi oleh sebagian besar spesies alga sensitif garam di bawah tekanan
salin tinggi. Gliserol sangat larut dan inert secara kimia, oleh karena itu tidak beracun. Ini
adalah metabolit produk akhir dan dengan demikian produksi dan akumulasi tidak tidak
mengganggu jalur metabolisme lainnya. Akhirnya, produksi gliserol dari pati tidak mahal
energik dan tidak tergantung nitrogen [25].
 Dalam Chlamydomonas HS-5, akumulasi gliserol berhubungan dengan
konsentrasi garam dengan garam yang lebih tinggi konsentrasi menyebabkan kandungan
gliserol yang lebih tinggi [26]. Efek serupa dicatat untuk C. reinhardtii [27], C. mexicana
[28], Chlamydomonas sp. JSC4 [29], dan C. pulsatilla [4]. Sebuah studi di euryhaline
Chlorella autotrophica menunjukkan peningkatan serupa dalam kandungan gliserol
dalam menanggapi peningkatan salinitas [21]. Gliserin memainkan peran serupa dalam
berbagai spesies Dunaliella, Scenedesmus, dan Micrasterias di antara eukariotik lainnya
mikroalga. Sel Dunaliella stres garam mengakumulasi sejumlah besar gliserol dan tingkat
gliserol intraseluler ditemukan proporsional dan secara osmotik setara dengan garam
eksternal konsentrasi [30]. Konsentrasi gliserol yang tinggi juga memungkinkan sel
Dunaliella yang stres garam untuk melanjutkan volume sel asli bahkan di bawah tekanan
garam yang ekstrim. Akhirnya, degradasi pati berhubungan erat dengan akumulasi
gliserol di C. pulsatilla menunjukkan bahwa gliserol disintesis melalui degradasi pati [31].
Biosintesis gliserol (Gambar 5) dapat terjadi melalui degradasi pati atau dengan
menggunakan produk fotosintesis [32]. Glukosa yang dihasilkan melalui fotosintesis atau
hidrolisis pati diubah menjadi fruktosa 1,6-bifosfat dan di samping dihidroksiaseton-
fosfat (DHAP), yang diubah menjadi gliserol-3-fosfat (G3P) oleh gliserol-3-fosfat
dehidrogenase (G3PDH). G3PDH adalah enzim yang paling baik dipelajari dalam jalur
biosintetik ini. G3PDH mengurangi DHAP untuk menghasilkan G3P, yang diubah menjadi
gliserol oleh aksi fosfatase G3P (GPP) atau berpotensi melalui reaksi reversibel dari
gliserol kinase [33]. Ada lima isoform enzim G3PDH pada C. reinhardtii. Dari jumlah
tersebut, GPDH2 dan GPDH3 memainkan peran integral dalam produksi gliserol dan
sintesis lipid [34].

Gambar 5. Diagram skema sintesis Gliserol dan TAG. Metabolit: G1P- glukosa 1-fosfat,
G6P- glukosa 6-fosfat, F6P- fruktosa 6-fosfat, FBP-, DHAP- dihidroksiaseton fosfat, GA3P-
gliseraldehida 3- fosfat, G3P- gliserol 3-fosfat, RuBP- ribulosa 1,5-bifosfat
karboksilase/oksigenase, 3PGA- 3-fosfogliserat, LPA-, PA-, DAG-, TAG-. Enzim: AMY -
amilase, SP-pati fosforilase, PGM- phosphoglucomutase, PGI- phosphoglucoisomerase,
GPDH- gliserol 3-fosfat dehidrogenase, GPAT- gliserol-3-fosfat asiltransferase, LPAAT
asam lisofosfatidat asiltransferase, PAP- fosfatidat fosfatase, DGAT- Diasilgliserol
acyltransferase, MCAT- Malonyl CoA-acyl carrier protein transacylase, ACCase- AcCoA
carboxylase, PDH- piruvat dehidrogenase, PFOR- piruvat-feredoksin oksidoreduktase,
GK- gliserol kinase, GPP gliserol-3-fosfat fosfatase. Lainnya: Asam lemak bebas FA bebas,
Co-A- Coenzyme A.
 Sementara sebagian besar strain menghasilkan gliserol dan
mempertahankannya di dalam sel, beberapa memiliki kapasitas untuk terus menerus
membocorkan gliserol dalam jumlah yang signifikan ke lingkungan sekitarnya.
Melepaskan besar jumlah produk fotosintesis menyebabkan peningkatan laju
fotosintesis pada tumbuhan tingkat tinggi. Arabidopsis dengan pembuluh darah
pengekspor gula yang sangat besar dapat melipatgandakan kapasitas fotosintesisnya.
Jadi, itu sepertinya ada interaksi antara laju fotosintesis dan kemampuan organisme
yang terbatas untuk menggunakan, mengekspor, atau menyimpan karbon yang
terfiksasi secara fotosintesis [35,36]. NADPH terus dikonsumsi untuk menebus gliserol
yang dilepaskan, dengan demikian, setiap penghambatan dalam laju fotosintesis karena
akumulasi NADPH dan gliserol dicegah. Selanjutnya, produksi dan pelepasan gliserol
berbanding lurus intensitas cahaya dan eksudasi gliserol menyebabkan peningkatan laju
pertumbuhan C. reinhardtii [37]. Ini adalah jalur lain yang dapat digunakan ganggang
untuk melawan tekanan garam yang tinggi dan diamati terutama di sel Chlamydomonas
air tawar dan laut [5,37] dan dalam spesies Dunaliella tunggal [38].
Prolin adalah zat terlarut osmoregulasi lain yang secara linier meningkat
konsentrasinya dengan peningkatan salinitas di seluruh tanaman tingkat tinggi dan alga
[39,40]. Seperti gliserol, berat molekulnya rendah, bermuatan netral dan sangat larut.
Aplikasi eksogen prolin mengurangi efek merugikan dari salinitas tinggi dengan
mengurangi akumulasi Na+ dan Cl− di C. reinhardtii [41] dan tanaman [42]. Selain prolin,
asam amino lain seperti lisin dan leusin telah terlibat dalam mendorong pertumbuhan
Chlamydomonas dalam kondisi salin tinggi [4]. Namun, tidak banyak penelitian yang
dilakukan tentang peran spesifik asam amino ini dalam osmoregulasi. Up-regulasi gen
yang terlibat dalam sintesis prolin telah dicatat untuk Picochlorum oklahomensis [43]
serta Picochlorum SE3 [44] selama stres garam. Berbeda dengan Chlamydomonas sp.
dan D. salina, di mana osmolit utama adalah gliserol dan degradasi pati meningkat,
prolin adalah osmolit utama dalam spesies Picochlorum dan sintesis pati diregulasi
sementara degradasi pati terbatas [44-46].
Selain prolin dan gliserol, trehalosa juga memiliki peran yang mapan dalam
stabilisasi protein dengan cara: meningkatkan suhu transisi protein dan sebagai molekul
osmoregulasi [47]. garam tinggi stres di Chlamydomonas [48], Chlorella, dan Scytonema
terbukti menyebabkan peningkatan produksi dari trehalosa [49]. Pada jagung, trehalosa
diamati untuk mengurangi efek negatif dari salinitas tinggi stres sebagai osmoprotektan
[50]. Poliol lain seperti sorbitol dan manitol juga penting dalam osmoregulasi [44].
Platymonas suecica adalah alga toleran garam dan menunjukkan manitol terakumulasi
linier dengan meningkatnya kadar salinitas [51]. Stichococcus chloranthus dan
Stichococcus bacillaris keduanya menunjukkan akumulasi sorbitol dengan meningkatnya
salinitas [40,52]. Sorbitol dan manitol belum terdeteksi dalam jumlah yang cukup besar
pada spesies alga lain yang menunjukkan bahwa ini mungkin suatu mekanisme khusus
untuk spesies ini.

2.3. Reorganisasi Protein Transpor Membran

 Penyerapan dan ekspor ion yang efisien melalui membran sel adalah strategi
penting lainnya untuk mengatasi stres garam yang tinggi dengan menjaga keseimbangan
ion intraseluler. Menurut studi tertentu pada tanaman, konsentrasi Na+ yang tinggi
dapat mengganggu penyerapan kation lain, terutama K+ [53,54]. Karena K+
berpartisipasi dalam banyak fungsi fisiologis pada tanaman, K+ merupakan bagian
integral untuk mempertahankan rasio K+/Na+ sitosol dalam kondisi salin tinggi.
Upregulasi protein transpor membran dapat memberikan toleransi terhadap
salinitas tinggi pada halotolerant spesies alga dengan secara aktif mengangkut ion K+
melalui protein transpor membran. Garam disesuaikan mutan C. reinhardtii
menunjukkan peningkatan ekspresi dari beberapa protein transpor membran [55]. Gen
untuk transpor ion K+ secara signifikan diregulasi ketika sel C. reinhardtii sensitif
terhadap garam berada di bawah tekanan garam [48], mungkin mengkompensasi
gangguan dalam penyerapan K+ yang disebabkan karena tingginya konsentrasi ion Na+.
Data kandungan ion intraseluler mengungkapkan bahwa C. pulsatilla memiliki
kapasitas yang luar biasa untuk meningkat natrium dan klorida, dan, pada tingkat lebih
rendah, kalium dan magnesium sebagai respons terhadap peningkatan salinitas,
meskipun akumulasi gliserol tetap menjadi pendekatan utama untuk mengatasi salinitas
stres [3]. Lebih lanjut, galur Dunaliella yang toleran garam mempertahankan konsentrasi
Na+ intraseluler di bawah bahwa dari media luar [56]. Antiporter Na+/H+ mengkatalisis
influks Na+, diikuti oleh ekspor Na+ melalui Na+-ATPase dan sistem transpor elektron
membran plasma. Jadi, Na+ . ini ekstrusi di Dunaliella adalah mekanisme adaptif yang
berkembang di lingkungan hipersalin untuk mempertahankan konsentrasi Na+ di dalam
sel. Dengan demikian, tampaknya tidak seperti ganggang laut atau hipersalin, air tawar
atau strain sensitif garam tidak dapat mempertahankan konsentrasi ion intraseluler
dengan mencegah penyerapan Na+, dengan mengumpulkan K+ atau memompa keluar
ion Na+ untuk mengembalikan sel ke keadaan normal atau hampir keadaan homeostatik
normal.
Selain protein transpor membran, jumlah dua protein membran plasma P150
dan P60 sangat meningkat dengan meningkatnya konsentrasi garam di D. salina [57,58].
Selain itu, segera setelah syok hiperosmotik yang drastis, induksi protein ini bertepatan
dengan peningkatan pertumbuhan yang menunjukkan peran mereka dalam
memberikan toleransi garam. P150 adalah protein membran plasma mirip transferin 150
kD yang terlibat dalam penyerapan zat besi, sehingga membantu sel mengatasi
kemungkinan keterbatasan ketersediaan zat besi di bawah salinitas tinggi [58]. Namun,
protein ini tidak terdeteksi pada alga lain dan protein yang paling mirip hanya ditemukan
pada hewan. Kami juga melakukan analisis ledakan dasar menggunakan urutan Cdna
dari P150 (nomor aksesi: AAF72064.1, data tidak ditampilkan) dan tidak menemukan
kecocokan pada spesies alga lainnya, yang menunjukkan bahwa protein dan mekanisme
ini sepenuhnya spesifik untuk D. salina. Namun, protein yang terkait dengan penyerapan
zat besi diregulasi dalam C. reinhardtii CC-503 yang diadaptasi garam yang menunjukkan
bahwa penyerapan zat besi di bawah tekanan garam tinggi mungkin juga membatasi C.
reinhardtii [55]. P60 adalah jenis baru dari karbonat anhidrase dan berpotensi terlibat
dalam fiksasi CO2 dalam sel yang tumbuh di bawah kondisi hipersalin [57]. Peningkatan
regulasi tiga jenis karbonat anhidrase diamati pada Chlorella pyrenoidosa 820 yang
toleran terhadap garam [59]. Namun, tidak ada hubungan seperti itu yang dilaporkan
pada semua jenis spesies Chlamydomonas, meskipun terdapat 12 anhidrase karbonat
yang berbeda di Chlamydomonas reinhardtii [60].
2.4. Akumulasi Lipid

Kebanyakan ganggang hijau di bawah tekanan garam menunjukkan akumulasi

karakteristik lipid. Sebenarnya, tanggapan ini salinitas tinggi telah dipelajari untuk
produksi biofuel [28]. Lipid diproduksi sebagai energi tinggi senyawa penyimpanan,
disintesis ketika sel alga berada di bawah kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan.
Setelah sel alga dipindahkan ke kondisi optimal, molekul lipid ini digunakan. Lipid adalah
disintesis dengan mengasimilasi karbon dari tiga jalur metabolisme yang berbeda dan
diatur secara independen. Yang pertama adalah penggabungan langsung CO2 yang
terfiksasi secara fotosintesis ke dalam asam lemak di dalam kloroplas. Yang kedua
melibatkan degradasi pati. Yang ketiga adalah melalui degradasi lipid polar [61]. Namun,
tidak ada penelitian yang mengukur kontribusi jalur ini dalam kondisi normal.
Chlamydomonas sp. JSC4 adalah galur toleran garam yang diisolasi dari
lingkungan laut dan menunjukkan akumulasi lipid yang tinggi di bawah tekanan garam
yang tinggi. Strain ini digunakan untuk mengidentifikasi mekanisme biosintesis lipid di
bawah tekanan garam tinggi [29,62]. Chlamydomonas sp. JSC4 menunjukkan sakelar
yang sangat spesifik dari sintesis pati ke sintesis lipid di bawah tekanan garam [29].
Agaknya, warisan air payau dari Chlamydomonas sp. JSC4 memilih dan mengadaptasi
strain alga ini untuk mengatasi salinitas yang lebih tinggi sebagai regangan berpindah
dari air payau ke kondisi laut. Peralihan dari pati ke sintesis lipid memastikan
pemeliharaan cadangan energi, sehingga memastikan kelangsungan hidup jangka
panjang. Degradasi dari akumulasi pati mengarah pada produksi prekursor produksi lipid
yang sangat penting; G3P [62]. G3P juga merupakan prekursor yang sangat penting
untuk sintesis gliserol pada alga hijau eukariotik, seperti yang dibahas sebelumnya.
Akhirnya, semua gliserol yang terakumulasi juga dapat diubah kembali menjadi G3P
melalui gliserol kinase [63]. Namun, sejauh ini belum ada penelitian yang menyelidiki
kemungkinan ini pada ganggang hijau.
Namun, penting untuk dicatat bahwa akumulasi lipid bukanlah strategi yang
diidentifikasi secara keseluruhan alga. Ini terutama berlaku untuk ganggang yang
beradaptasi dengan garam. Beberapa penelitian telah mengeksplorasi evolusi resistensi
garam pada ganggang hijau di bawah kondisi salin yang semakin meningkat. Strategi
pemilihan ini digunakan untuk menghasilkan mutan adaptasi garam dari C. reinhardtii
yang sensitif terhadap garam [64], Chlorella yang sensitif terhadap garam sp. AE10 [65],
dan Chlamydomonas JSC4 laut yang toleran garam [66]. Analisis transkriptom dari
semua mutan yang diadaptasi menunjukkan penurunan akumulasi lipid. Selanjutnya
garam disesuaikan (aslinya garam toleran) Chlamydomonas JSC4 juga kehilangan
kemampuan peralihannya dari sintesis pati ke sintesis lipid. Hanya ada satu percobaan
adaptasi di mana adaptasi terhadap salinitas tinggi juga menyebabkan peningkatan lipid
akumulasi. Schizochytrium sp yang toleran garam. disesuaikan dengan peningkatan
tekanan garam, dan adaptasi mutan menunjukkan peningkatan akumulasi lipid [67].
Studi-studi ini dengan jelas menunjukkan bahwa adaptasi garam dapat terjadi dalam
berbagai cara yang berbeda, spesies tertentu.

2.5. Dampak Stres Garam Tinggi pada Fotosintesis

 Kebanyakan organisme fotosintesis menunjukkan penurunan yang signifikan
dalam aktivitas fotosintesis di bawah tekanan garam yang tinggi. Pengurangan aktivitas
fotosintesis ini dapat dikaitkan dengan defisiensi kation yang berbeda, produksi spesies
oksigen reaktif (ROS) dan tekanan osmotik, yang mengganggu berbagai proses biokimia
dan fisiologis [68]. Analisis pigmen pada C. reinhardtii telah menunjukkan bahwa
kompleks pemanenan cahaya (LHCs) fotosistem I (PSI) dirusak oleh spesies oksigen
reaktif (ROS) pada kondisi garam tinggi, dan protein fotosistem II (PSII) yang terlibat
dalam evolusi oksigen juga terganggu [ 16,69]. Stres salinitas tampaknya mengalihkan
sumber daya dari pergantian protein D1 PSII ke proses intensif mempertahankan
homeostasis sel [16]. Studi transkriptom pada C. reinhardtii telah menunjukkan
gangguan fotosintesis, dengan beberapa gen PSI LHC diatur secara signifikan, misalnya,
gen kompleks pemanen cahaya PSI LHCA2, LHCA3, dan LHCA5. Selain itu, tingkat
sebagian besar transkrip yang dikodekan kloroplas (misalnya, psaA, B, C, J, M) di PSI
relatif tidak berubah sementara gen nuklir (misalnya, psaD, E, G, F, H) diatur ke bawah.
di bawah kondisi yang sangat salin [48].
Beberapa penelitian transkriptomik telah mengarah pada implikasi bahwa sel-sel
yang stres garam meningkatkan regulasi gen yang berbeda untuk menahan kondisi yang
keras dan kehilangan aktivitas fotosintesis. Studi transkriptom sel C. reinhardtii yang
stres garam menunjukkan peningkatan regulasi gen yang signifikan yang terlibat dalam
menghilangkan ROS termasuk plastid Fe superoksida dismutase 1 (SOD), thioredoxins,
glutathione transferase, dan heat protein pengikat faktor syok [64]. Pigmen seperti
karotenoid memainkan peran fungsional penting sebagai: antioksidan. Karotenoid
adalah antioksidan yang larut dalam lemak dan terutama terletak di dalam kloroplas
amplop dan melindungi LHC terhadap kerusakan yang diinduksi ROS. Dunaliella sp.
adalah contoh yang baik dari strain alga yang dapat menghasilkan karotenoid dalam
jumlah tinggi sebagai respons terhadap stres garam dan telah industri dieksploitasi
untuk produksi karotenoid [70]. Studi lain tentang C. reinhardtii yang sensitif terhadap
garam dan C. vulgaris menunjukkan peningkatan produksi karotenoid pada tingkat stres
garam sedang (0,05 M-0,15 M).
Spesies lain mengatasi stres garam dengan cara yang berbeda. Sel-sel D. salina
toleran garam meningkat aktivitas fotosintesis dengan meningkatkan kandungan
Klorofil-a (Chl a) secara signifikan sebagai respons terhadap garam stres [17]. Hal ini
sesuai dengan penelitian lain pada D. salina toleran garam yang menunjukkan rasio Chl
a/b sedikit meningkat dengan meningkatnya konsentrasi garam (3 M NaCl) [71]. Pada C.
vulgaris yang sensitif terhadap garam, kandungan klorofil meningkat pada konsentrasi
garam yang lebih rendah (0,2 M) tetapi berkurang pada garam yang lebih tinggi
konsentrasi (0,3 M-0,4 M) yang memperlambat pertumbuhan [72]. Sedikit peningkatan
aktivitas fotosintesis hanya terlihat di bawah tingkat stres garam sedang dan mungkin
dilakukan untuk meningkatkan energi generasi untuk menghasilkan molekul yang sangat
mahal yang dapat melindungi sel-sel stres garam (misalnya, EPS dan pigmen), atau untuk
mendorong pengeluaran Na+ yang sangat mahal atau untuk meningkatkan jumlah
penyimpanan molekul seperti lipid. Dengan demikian, galur peka garam dan galur
toleran garam tampaknya memiliki perbedaan mekanisme penanggulangan stres garam.
Peningkatan aktivitas fotosintesis untuk strain toleran garam pada salinitas yang cukup
meningkat kemungkinan merupakan respons regulasi karena strain ini sering kali perlu
ditangani dengan tingkat salinitas yang bervariasi.
2.6. Glikolisis (SADIKIN REVISI)

Glikolisis memiliki peran penting dalam pengembangan dan adaptasi tanaman

terhadap beberapa tekanan abiotik, seperti dingin, garam, dan kekeringan. Studi
transkriptom garam menekankan C. reinhardtii, ekspresi gen yang berpartisipasi dalam
metabolisme meningkat secara signifikan karbohidrat, seperti pati, sukrosa, gula larut,
dan glukosa diamati. Selanjutnya, garam sel-sel yang stres menunjukkan peningkatan
regulasi 31 gen yang terlibat dalam proses glikolitik, termasuk plastidic piruvat kinase
PKP-ALPHA dan PKP-BETA. Ini konsisten dengan hasil yang diamati pada garam Chlorella
sp. S30 dan dalam studi tanaman dimana stres garam tinggi secara signifikan
meningkatkan kandungan karbohidrat utama. Stres salin yang tinggi berdampak negatif
pada efisiensi fotosintesis dalam sel sensitif, yang seringkali menghambat transportasi
karbohidrat menyebabkan akumulasi kelebihan pati atau sukrosa. C. reinhardtii
meningkatkan glikolisis untuk mengurangi akumulasi karbohidrat dalam sel, yang akan
meningkatkan metabolisme respirasi dan transpor elektron mitokondria. Karbon dari
glikolisis digunakan dalam produksi lipid dan ATP yang dihasilkan dapat diarahkan ke
mekanisme intensif energi yang dijelaskan di atas untuk meningkatkan kelangsungan
hidup di bawah tekanan garam.

2.7. Peran Asetat

Studi telah menunjukkan penggunaan asetat dalam media sebagai sumber
energi alternatif untuk mengkompensasi penurunan efisiensi dalam fotosintesis [76].
Studi transkriptom garam tinggi sel C. reinhardtii yang tertekan menunjukkan
peningkatan regulasi gen penyandi asetil-CoA sintetase, yang menggabungkan asetat
dan CoA untuk membentuk asetil-KoA [64]. Upregulasi gen terkait metabolisme asetat
seperti asetil-KoA karboksilase dan dehidrogenase a juga diamati dalam studi
transkriptomik halophyte Prymnesium parvum, bersama dengan homolog sintase
poliketida Tipe I dan Tipe III [77]. Mutan C. reinhardtii yang teradaptasi garam
menunjukkan pertumbuhan yang lebih baik, ketika sel-sel stres garam tumbuh dengan
asetat. Lebih penting lagi, penurunan pertumbuhan yang lebih besar diamati ketika
mutan ditumbuhkan tanpa asetat dalam media bebas garam. Selanjutnya ada
peningkatan regulasi TCA . yang signifikan gen terkait [64]. Hasil ini menunjukkan bahwa
asetat dimasukkan ke dalam jalur pembangkit energi seperti siklus TCA dalam sel alga
stres garam untuk mengkompensasi pengurangan fotosintesis.

3. Pengembangan Alga Air Tawar yang Toleran terhadap Garam (SADIKIN REVIS)

Toleransi garam dikembangkan oleh siklus 1255 dan oleh siklus ke-46 di C.
reinhardtii dan Chlorella sp. AE10 masing-masing. Data transkriptomik mengungkapkan
bahwa respons terhadap stres garam berbeda dalam nenek moyang yang sensitif
terhadap garam dan mutan berevolusi yang beradaptasi dengan garam. C. reinhardtii
yang sensitif terhadap garam nenek moyang sel menunjukkan pengurangan fotosintesis,
peningkatan regulasi pensinyalan gliserofosfolipid, dan upregulasi mesin transkripsi dan
translasi. Sebaliknya, sel C. reinhardtii yang mengadaptasi garam menunjukkan
penurunan regulasi gen yang bertanggung jawab untuk akumulasi lipid dan transkripsi /
terjemahan mekanisme. Transformasi gen yang memberi toleransi garam adalah cara
yang layak untuk meningkatkan galur air tawar kemampuan untuk mengatasi stres
garam yang tinggi.
Metode lain seperti pengmbiakan seksual selektif juga telah berhasil digunakan
untuk mengembangkan ganggang ganggang yang beradaptasi dengan garam. Ini adalah
alternatif yang menjanjikan untuk menghasilkan ganggang yang beradaptasi dengan
garam dengan cepat. Sejauh ini hanya satu penelitian yang menggunakan pendekatan ini
untuk menghasilkan galur C. reinhardtii yang diadaptasi dari garam dengan
membandingkan genom galur adaptasi garam yang baru berevolusi dengan genom galur
sensitif garam induknya, gen yang mungkin memberikan perlindungan di bawah tekanan
garam dapat diidentifikasi. Jalur perkembangbiakan seksual diidentifikasi dalam
berbagai spesies Scenedesmus], Chlamydomonas, dan Dunaliella]. Menggabungkan
pendekatan mutagenesis acak bersama dengan pemuliaan seksual mutan terpilih adalah
metode kombinasi yang menjanjikan untuk mengembangkan galur yang beradaptasi
dengan garam dalam banyak galur yang penting secara bioteknologi. Hal ini terutama
merupakan hasil dari strategi pemuliaan selektif bahwa saat ini kami memiliki kumpulan
tanaman pertanian yang beragam dengan toleransi terhadap tekanan abiotik yang
berbeda. Teknik-teknik ini dapat diterapkan pada spesies alga juga untuk menghasilkan
varian alga yang ekonomis.

4. Perspektif Pemanfaatan Stres Garam dalam Aplikasi Bioteknologi

Stres garam dapat dimanfaatkan untuk menghasilkan sejumlah besar produk
berharga. Berbagai penelitian telah dilakukan pada eksploitasi kondisi salinitas tinggi
sebagai metodologi untuk meningkatkan produksi lipid alga. Secara keseluruhan, stres
garam meningkatkan produksi lipid dan -karoten yang merupakan fenomena yang dapat
dieksploitasi dan dikomersialkan. Fenomena tersebut diamati untuk produksi -karoten di
D. salina [70,84]. Diamati bahwa pasangan kekurangan nitrogen dan stres garam tinggi
bisa menjadi cara yang layak untuk meningkatkan produksi gliserol menggunakan
mikroalga [85].
Namun, penting untuk membedakan antara proses yang terjadi pada ganggang
yang peka terhadap garam, mutan yang beradaptasi dengan garam, dan galur yang
toleran terhadap garam. Penelitian telah menunjukkan bahwa pola ekspresi gen
berubah ketika ganggang beradaptasi dengan tekanan garam yang tinggi. Lebih jauh,
pola ekspresi gen di bawah tekanan garam tinggi sangat berbeda pada ganggang yang
toleran garam dan mutan yang beradaptasi dengan garam. Seperti disebutkan
sebelumnya, mutan C. reinhardtii yang teradaptasi garam tidak menunjukkan respon
akumulasi lipid yang khas terhadap cekaman garam yang tinggi seperti yang diamati
pada galur yang peka terhadap garam dan pada galur yang toleran terhadap garam.
Pengamatan ini menunjukkan bahwa ada berbagai jalur adaptasi terhadap stres garam
tinggi. Selanjutnya, adaptasi terhadap cekaman garam adalah spesies spesifik dan sangat
bergantung pada riwayat hidup strain. Dalam banyak kasus, ganggang yang beradaptasi
dengan garam mungkin bukan kandidat yang cocok untuk aplikasi bioteknologi seperti
produksi biodiesel, karena adaptasi dari strain penghasil lipid yang sensitif terhadap
garam mungkin hanya menghasilkan mutan yang toleran terhadap garam tetapi
mungkin kehilangan kapasitas akumulasi lipidnya. Dengan demikian, kami mengusulkan
untuk memanfaatkan galur yang toleran garam yang digabungkan dengan pendekatan
pemuliaan seksual untuk meningkatkan produksi lipid daripada memanfaatkan adaptasi
galur yang peka terhadap garam. Pendekatan pemuliaan seksual mungkin lebih cocok
untuk memilih dan melestarikan jalur akumulasi lipid alga dibandingkan dengan
pendekatan mutasi non-spesifik. Banyak budidaya alga komersial lebih memilih teknik
budidaya dalam ruangan dan tertutup untuk menghindari kontaminasi fatal, sehingga
sangat meningkatkan biaya budidaya dan teknologi yang dibutuhkan. Penggunaan
salinitas sebagai mekanisme perlindungan tanaman juga layak. Ini telah diterapkan
sebagai metode perlindungan yang efektif untuk mengurangi kontaminan mikroba
dalam kultur alga hijau air tawar atomus Picochlorum (Nannochloris) [86].
Ketergantungan pada salinitas sebagai ukuran kontrol memungkinkan
pemanenan biomassa berkualitas tinggi, yang mengurangi kerugian ekonomi yang
berkaitan dengan pembentukan kembali budaya dan kehilangan produk akhir.
Picochlorum SE3, diisolasi dari laguna air payau mesofilik dangkal, dapat mentolerir
lingkungan hipervariabel menjadikannya kandidat yang cocok untuk budidaya tambak
terbuka skala besar [44]. Demikian pula, berbagai ganggang hijau eukariotik mutan
dengan fitur toleransi garam berkembang [65,66] dapat tumbuh di media garam tanpa
pengurangan biomassa, sehingga mengurangi ketergantungan pada sumber air tawar.
Oleh karena itu, biomassa alga berkualitas tinggi dengan kontaminasi terbatas dapat
dibudidayakan menggunakan strain alga yang toleran terhadap garam dan yang
beradaptasi dengan garam.

5. Kesimpulan
Lebih dari empat dekade penelitian telah secara drastis memperkaya
pemahaman kita tentang berbagai mekanisme yang digunakan oleh mikroalga untuk
mengatasi stres garam. Studi awal yang mengeksplorasi akumulasi konsentrasi osmolit
memberi kita pemahaman tentang jenis osmolit apa yang terakumulasi (seperti gliserol)
dan mengapa osmolit ini penting. Perubahan fisiologis seperti sel C. reinhardtii
memasuki tahap palmelloid atau peningkatan produksi EPS dan perubahan ukuran sel
semuanya integral untuk lebih meningkatkan osmoregulasi. Studi ekspresi diferensial
kontemporer telah mulai menyelidiki jalur yang diatur secara berbeda di bawah kondisi
tekanan garam yang optimal dan tinggi. Kebanyakan sel alga menunjukkan akumulasi
karakteristik lipid di bawah tekanan garam. Lipid bertindak sebagai cadangan
penyimpanan untuk sel stres garam dan dapat segera terdegradasi ketika sel stres
diperkenalkan ke kondisi optimal. Studi-studi ini juga telah meningkatkan pemahaman
kita tentang bagaimana produk dari jalur seperti glikolisis, jalur Kennedy, dan siklus
Calvin semuanya digunakan untuk meningkatkan produksi osmolit dan cadangan
molekul penyimpanan, sebagian besar lipid (Gambar 5). Mempelajari beragam spesies
alga seperti Prymnesium parvum [77] dan mutan adaptasi garam dari C. reinhardtii [64]
menunjukkan bahwa alga dapat beradaptasi dengan hilangnya efisiensi fotosintesis
dengan mengambil asetat untuk meningkatkan pembangkitan energi dan asimilasi
karbon. Akhirnya, studi analisis ekspresi diferensial juga telah meningkatkan
pemahaman kita tentang bagaimana protein transpor terlibat dalam osmoregulasi.
Namun, ada banyak hal yang belum terungkap dalam memahami bagaimana
ganggang memberi sinyal satu sama lain untuk memulai rangkaian jalur yang akan
mengarah pada peningkatan kelangsungan hidup. Salah satu contohnya adalah studi
tentang senyawa organik volatil (VOC) yang dilepaskan ketika sel alga berada di bawah
tekanan. Sebuah studi pendahuluan telah menunjukkan bahwa VOC seperti heksanal
dan longifolene dilepaskan dari sel C. reinhardtii stres garam. Ketika senyawa ini
dikumpulkan dan diekspos ke sel alga yang tumbuh di bawah kondisi optimal,
penurunan kepadatan sel, sedikit peningkatan klorofil dan peningkatan aktivitas enzim
antioksidan diamati [87]. Agaknya, VOC memberi sinyal pada sel-sel yang tidak stres
untuk bersiap menghadapi kondisi stres yang akan datang. Dengan demikian, penelitian
di masa depan perlu berkonsentrasi pada jalur pensinyalan yang memulai kaskade
perubahan fisiologis dan metabolisme yang dijelaskan dalam ulasan ini. Lebih lanjut,
sementara ada beberapa penelitian tentang evolusi eksperimental terarah untuk
meningkatkan toleransi garam, tidak satu pun dari penelitian ini yang mengkarakterisasi
perubahan yang terjadi pada genom organisme yang diadaptasi ini. Studi semacam itu
digabungkan dengan strategi pengurutan generasi berikutnya dan pendekatan evolusi
eksperimental terarah akan terus meningkatkan dan memperdalam pemahaman kita
tentang bagaimana alga merespons dan beradaptasi dengan kondisi stres.