Nama : Meisya Mersilia Balaba

NIM : 2006541021
M. Kuliah : Patogen Tumbuhan (Tanah)

RINGKASAN CARA ISOLASI BAKTERI DAN CENDAWAN

A. Isolasi Bakteri
Mengisolasi suatu mikroba didefinisikan sebagai proses memisahkan
mikroba dari lingkungannya di alam dan menumbuhkannya sebagai biakan murni
dalam medium buatan (Jutono dkk, 1980). Macam-macam cara mengisolasi dan
menanam mikrobia adalah: 1). Spread plate method (cara tebar/sebar), 2). Streak
plate method (cara gores), 3). Pour plate method (cara tabur).
1. Spread Plate Method (Metode cawan tebar/sebar)
Teknik spread plate merupakan teknik isolasi mikroba dengan cara
menginokulasi kultur mikroba secara pulasan/sebaran di permukaan media
agar yang telah memadat.
Cara kerja :
• Pindahkan 0,1 mL suspensi berisi bakteri secara aseptis ke permukaan
media yang telah memadat dalam cawan petri menggunakan pipet.
• Sterilisasi spreader/batang bengkok/batang Drigalsky dengan cara
dicelupkan dalam alkohol 70% kemudian dibakar dengan dilewatkan
diatas api, biarkan spreader dingin.
• Tebarkan/sebarkan kultur bakteri dengan spreader secara merata dan
biarkan sampai permukaan agar mengering.
• Setelah permukaan agar mengering, selanjutnya inkubasikan secara
terbalik selama 24 jam pada suhu kamar ataupun inkubator dan amati
pertumbuhannya.
2. Pour Plate Method (Metode cawan tuang)
Tujuan dari teknik ini adalah untuk menyebarkan sel-sel bakteri
tidak hanya pada permukaan medium agar saja melainkan sel terendam
dalam medium (di dalam agar) sehingga terdapat sel yang tumbuh
dipermukaan agar yang kaya O2 dan ada yang tumbuh di dalam agar
dengan kandungan oksigen sedikit. Teknik ini memerlukan agar yang
belum padat (>45oC) untuk dituang bersama suspensi bakteri ke dalam
cawan petri lalu kemudian dihomogenkan dan dibiarkan memadat.
Cara kerja :
 • Teteskan 1 ml suspensi sel kedalam cawan petri kosong yang telah
steril secara aseptis.
• Tuangkan media agar yang hangat (suhu 45 – 50oC) ke cawan yang
telah berisi suspensi bakteri tersebut dan tutup.
• Homogenkan campuran media dan suspensi dengan cara goyangkan
atau putar cawan petri secara perlahan membentuk angka delapan (8)
di atas meja yang rata dalam kondisi aseptis.
• Setelah agar memadat cawan petri diinkubasi dengan posisi terbalik
pada suhu kamar ataupun inkubator selama 24 jam. Amati
pertumbuhannya.
3. Streak Plate Method (Metode cawan gores)
Teknik penanaman mikroba dengan goresan bertujuan untuk
mengisolasi mikroorganisme dari campurannya atau meremajakan kultur
ke dalam medium baru. Cara gores umumnya digunakan untuk mengisolasi
koloni mikroba pada medium-agar sehingga didapatkan koloni terpisah
dan merupakan biakan murni. Cara ini dasarnya ialah menggoreskan
suspensi bahan yang mengandung mikroba pada permukaan medium-agar
yang sesuai pada cawan petri. Setelah inkubasi maka pada bekas goresan
akan tumbuh koloni-koloni terpisah yang mungkin berasal dari 1 sel
mikroba, sehingga dapat dikultur lebih lanjut (Jutono dkk, 1980).
Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang
terpisah. Bakteri yang memiliki flagella seringkali membentuk koloni yang
menyebar terutama bila digunakan medium yang basah. Pencegahan
terjadinya penhyebaran koloni harus digunakan lempengan agar yang
benar-benar kering permukaannya (Lay, 1994).
Cara Kerja :
• Perhatikan teknik transfer aseptis / memindahkan biakan mikroba
secara aseptis. Panaskan jarum ose hingga memijar di atas bunsen,
kemudian beri jarak dari bunsen dan diamkan hingga dingin.
• Gunakan ose yang telah dingin untuk mengambil kultur murni bakteri
(ambil sebanyak 1 ose).
• Goreskan pada permukaan medium-agar dimulai dari satu ujung
(Perhatikan teknik / tipe penggoresan). Hati-hati saat menggores,
jangan sampai medium rusak. Ose yang disentuhkan pada permukaan
medium sebaiknya tidak ditekan terlalu dalam.
• Setiap kali menggoreskan ose untuk kuadran berikutnya, pijarkan ose
terlebih dahulu dan biarkan dingin.
 • Inkubasikan cawan petri berisi mikroba dengan posisi terbalik pada
suhu ruang atau pada suhu tertentu dalam incubator selama 24-48 jam
dan amati pertumbuhannya.

B. Isolasi Cendawan
Isolasi cendawan merupakan suatu proses memperoleh cendawan dalam
bentuk biakan murni untuk pertama kalinya.
• Isolasi cendawan patogen dilakukan dengan cara memotong bagian
yang terinfeksi dengan ukuran sekitar 2x2 cm.
• Kemudian dicelupkan ke dalam beaker glass yang berisi alkohol 70%
selama 2 menit untuk menghilangkan kontaminasi pada bagian
luarnya.
• Setelah itu, dibilas dengan cara mencelupkan ke dalam akuades steril
sebanyak 3 kali.
• Letakkan pada permukaan media Potato Dextrose Agar (PDA) dan
diinkubasikan selama 5 hari pada suhu 27oC-28oC. Miselium jamur
yang tumbuh selanjutnya direisolasi pada media PDA baru hingga
diperoleh bakan murni.
• Biakan murni cendawan patogen diremajakan pada media PDA, dan
diinkubasi selama 5-7 hari pada suhu ruang. Isolat yang telah tumbuh
pada media, diamati ciri-ciri makroskopiknya dengan menggunakan
mikroskop, kemudian disesuaikan ciri-cirinya dengan buku identifikasi
fungi untuk mengetahui ciri mikroskopik fungi tersebut.