Machine Translated by Google

Regulasi timbal balik ekspresi gen gastrin dan somatostatin

antral oleh aklorhidria yang diinduksi omeprazole.
Merek SJ, D Stone
J Clin Invest. 1988;82(3):1059-1066. https://doi.org/10.1172/JCI113662.

Artikel Penelitian

Asam lambung memberikan penghambatan umpan balik pada sekresi gastrin dari sel G antral. Penelitian ini mengkaji apakah
ekspresi gen gastrin juga diatur oleh perubahan pH lambung. Achlorhydria diinduksi pada tikus oleh penghambat H+/K+ ATPase
lambung, omeprazole (100 mumol/kg). Hal ini menghasilkan peningkatan empat kali lipat dalam serum gastrin (dalam 2 jam) dan
tingkat mRNA gastrin (setelah 24 jam). Sel somatostatin D antral mungkin bertindak sebagai kemoreseptor untuk asam lambung untuk
memediasi penghambatan parakrin pada sekresi gastrin dari sel G yang berdekatan. Aklorhidria yang diinduksi omeprazole mengurangi
aktivitas sel-D seperti yang ditunjukkan oleh penurunan tiga kali lipat tingkat mRNA somatostatin antral yang dimulai setelah 24 jam.
Pemberian eksogen dari SMS analog somatostatin 201-995 (10 mikrogram/kg) mencegah baik hipergastrinemia maupun peningkatan
kadar mRNA gastrin yang disebabkan oleh aklorhidria yang diinduksi omeprazole. Somatostatin eksogen, bagaimanapun, tidak
mempengaruhi penurunan tingkat mRNA somatostatin antral terlihat dengan achlorhydria. Oleh karena itu, data ini mendukung hipotesis
bahwa sel D antral bertindak sebagai kemoreseptor untuk perubahan pH lambung, dan memodulasi sekresi dan sintesis somatostatin
untuk memediasi penghambatan parakrin pada ekspresi gen gastrin di sel G yang berdekatan.

Temukan versi terbaru:

https://jci.me/113662/pdf
Machine Translated by Google

Regulasi Resiprokal Ekspresi Gen Antral Gastrin dan Somatostatin _

oleh Omeprazole-induced Achlorhydria
Stephen J. Brand dan Deborah Stone
Departemen Kedokteran, Sekolah Kedokteran Harvard dan Rumah Sakit Umum Massachusetts , Unit Gastrointestinal , Boston, Massachusetts

Abstrak Bukti substansial mendukung hipotesis bahwa asam lambung

Asam lambung memberikan penghambatan umpan balik pada sekresi _ _
gastrin dari sel G antral . Penelitian ini mengkaji apakah pelepasan gastrin ( 11). Sel D antral memiliki proyeksi
ekspresi gen gas trin juga diregulasi oleh perubahan di dalam lambung
sitoplasma khas ke sel G ( 12 , 13 ) yang dapat bertindak sebagai a
pH. Aklorhidria diinduksi pada tikus oleh H +/K+ . lambung
Penghambat ATPase , omeprazol (100 gmol/kg). Hal ini mengakibatkan
peningkatan empat kali lipat di kedua serum gastrin (dalam 2 jam) dan
tingkat mRNA trin gas (setelah 24 jam).
Sel somatostatin D antral mungkin bertindak sebagai kemoreseptor
asam lambung untuk memediasi penghambatan parakrin pada _ _ _
sekresi gastrin dari sel G yang berdekatan . Diinduksi omeprazol
achlorhydria mengurangi aktivitas sel D seperti yang ditunjukkan oleh tiga kali lipat
penurunan kadar mRNA somatostatin antral yang dimulai setelah _
24 jam. Pemberian analog somatostatin secara eksogen _
SMS 201-995 (10 gg/kg) mencegah baik hipergastrin emia maupun
peningkatan kadar mRNA gastrin yang disebabkan oleh beberapa
aklorhidria yang diinduksi prazol . Somatostatin eksogen , bagaimanapun ,
tidak mempengaruhi penurunan somatostatin antral _ _
tingkat mRNA terlihat dengan achlorhydria.
Oleh karena itu , data ini mendukung hipotesis bahwa D . antral
sel bertindak sebagai kemoreseptor untuk perubahan pH lambung , dan
memodulasi sekresi dan sintesis somatostatin untuk memediasi a
penghambatan parakrin pada ekspresi gen gastrin di _
sel G.
asam menghambat sekresi gastrin melalui pelepasan somatostatin
dari sel D antral (9, 10). Somatostatin adalah penghambat yang kuat
jalur penghambatan parakrin oleh somatostatin . Sejak lambung
asam merangsang pelepasan somatostatin (14-16), sekresi gastrin
diperkirakan dihambat oleh somatostatin yang dilepaskan secara lokal dari _
proses sitoplasma ini . Penghambatan sekresi gastrin _
oleh somatostatin antral dengan demikian merupakan contoh kemungkinan _
regulasi parakrin . Pengukuran perubahan somatostatin _
Tingkat mRNA dengan perubahan pH lambung mungkin bernilai dalam _ _ _
mengevaluasi peran sel D sebagai regulator parakrin G . antral _ _
sel, karena tingkat mRNA ini secara langsung mencerminkan aktivitas sel D.
Meskipun aksi penghambatan somatostatin pada sekresi
gastrin telah diketahui dengan baik , tidak diketahui apakah
statin somato juga menghambat ekspresi gen gastrin . Di hipofisis ,
di mana somatostatin juga memediasi siklus umpan balik yang serupa
dalam melibatkan penghambatan sekresi hormon ( 17 ), jangka pendek
inkubasi dengan somatostatin tidak menghambat transkripsi
gen hormon pertumbuhan (18 ) . Hal ini menunjukkan disosiasi
antara kemampuan somatostatin untuk menghambat sekresi
hormon hipofisis dan efeknya pada sintesis hormon . _ _ Akibatnya,
somatostatin mungkin tidak selalu menghambat ekspresi gen gastrin
meskipun efeknya dijelaskan dengan baik pada sekresi gastrin .

pengantar

Sekresi gastrin dihambat oleh asam lambung , dan ini berfungsi _

Metode
sebagai kontrol umpan balik negatif yang mencegah sekresi asam
pengobatan omeprazol . Tikus Sprague-Dawley jantan dengan berat 180-220 g
berlebih ( 1 ). Achlorhydria, seperti yang terlihat pada gastritis atrofi , melepaskan
diberi makan chow ad lib laboratorium reguler . Omeprazol dilarutkan dalam 100
sel gastrin antral (sel G ) dari penghambatan ini dan
,gmol/kg PEG 2000 (konsentrasi 20 mg/ml) disuntikkan secara
akibatnya menyebabkan hipergastrinemia dan hiperplasia intraperito dua kali sehari pada interval 12 jam (0,2 ml PEG dalam 1 ml 0,15%
sel G ( 1-3 ). Operasi ablasi sekresi asam lambung pada tikus dengan _
NaHCO3). Tikus kontrol menerima suntikan intraperitoneal 0,2 mls _
fundektomi menghasilkan perubahan serupa (4 ) dan juga telah PEG saja dalam 1 ml NaHCO3. Setelah puasa semalam , tikus dibius
ditunjukkan untuk merangsang sintesis gastrin (5). Blokade kronis _ dengan eter , diambil darahnya 1,5 ml dengan tusukan jantung , _ _ _
sekresi asam dengan antagonis H +/K+ ATPase omeprozole dan kemudian mereka dibunuh . Antrum dipotong , dan yang serupa _
menyebabkan hipergastrinemia dan, dengan pengobatan jangka panjang , berat korpus dari kelengkungan yang lebih besar yang berdekatan
Hiperplasia sel G (6-8). Hasil ini menunjukkan bahwa achlorhy dengan margin korpus saccus dipotong . Duodenum, tidak termasuk pelek 2 mm
dria juga dapat merangsang ekspresi gen gastrin dalam sel G. berdekatan dengan pilorus, juga telah dihapus . Tisu segera _
ditempatkan dalam buffer lisis guanidium thiocyanate (18) dan dihomogenkan
Menginduksi achlorhydria dengan cepat dengan omeprazole memungkinkan ini
menggunakan politron ( Brinkmann Instruments Co., Westbury, NY).
pertanyaan yang harus ditangani tanpa komplikasi sel G _ _
persiapan RNA . RNA disiapkan dengan metode pengendapan
hiperplasia dan , oleh karena itu, harus menerangi kondisi fisiologis
litium klorida dari Cathala et al . _ _ ( 19 ) dan konsentrasi RNA
mekanisme yang mengatur ekspresi gen gastrin . diukur secara spektrofotometri dengan absorbansi pada 260 A _ _
efisiensi pemulihan RNA , ditentukan dengan menambahkan SP6 . berlabel 3H
rasa gastrin cRNA, adalah antara 80-85%.
Diterima untuk publikasi 13 Juli 1987 dan dalam bentuk revisi I Maret sintesis probe RNA . Probe RNA berlabel 32P telah disintesis
1988. menggunakan SP6 RNA polimerase (20) ditranskripsi dari gastrin tikus (21) dan
somatostatin (22) template cDNA . Oligonukleotida sintetik yang
1. Singkatan yang digunakan dalam makalah ini : POMW, proopiomelanocortin. melengkapi mRNA aktin tikus ( TGCTGCAGTCTAGAGGATCC
GAATTCG ) dan RNA ribosom subunit 18S diberi label akhir dengan
J.klin . Menginvestasikan.
32p y ATP menggunakan polinukleotida kinase (108 cpm/lg sp tindakan).
© Masyarakat Amerika untuk Investigasi Klinis , Inc. Kuantitas mRNA gastrin dan somatostatin dengan analisis dot-
0021-9738/88/09/1059/08 $2,00 blot sis . Total RNA diimobilisasi pada filter nitroselulosa ( Schleicher _
Jilid 82, September 1988, 1059-1066 & Schuell, Inc., Keene, NH) menggunakan prosedur dot-blot (23) . sebagai _

Regulasi Ekspresi Gen Gastrin oleh Gastric Achlorhydria 1059

Machine Translated by Google

koreksi internal untuk variasi pemuatan RNA , filter dot - blot dihibridisasi penentuan mRNA . Pengobatan dengan omeprazol menghasilkan
dengan oligonukleotida sintetis berlabel 32P yang melengkapi RNA hipergastrinemia yang nyata ( Gbr. 1 A), serum gastrin menjadi lima kali
ribosom 18S . Filter yang dipanggang diprahibridisasi pada suhu 430C lipat lebih tinggi pada tikus yang diobati dengan omeprazol . Pengobatan
selama beberapa jam dalam kantong plastik tertutup yang mengandung
omeprazole juga meningkatkan kadar mRNA gastrin seperti yang
5 ml standar saline sitrat (SSC), 0,2 % Ficoll, 0,2% polivinil pirolin , 0,2%
ditunjukkan oleh analisis Northern blot (Gbr. 1 C) dan kuantisasi dot-blot ( Gbr. 2 B).
BSA, 50 mM buffer natrium fosfat , pH 7,0, 1% SDS, dan DNA sperma
salmon tersonikasi natrium pirofosfat 0,1% (100 ug/ml). Probe berlabel
Analisis blot utara RNA antral (Gbr. 1 C) menunjukkan spesies
32P ditambahkan ( 106 cpm / ml ) dan campuran dihibridisasi pada 550C mRNA gastrin tunggal ( -570 nukleotida ) . Intensitas hibridisasi
selama 15 jam . Filter kemudian dicuci dalam 0.2X SSC , 1% SDS pada mRNA gastrin meningkat pada RNA dari tikus yang diberi
550C tiga kali selama 20 menit setiap kali. Filter terkena film x - ray omeprazole dibandingkan dengan kontrol . Kuantisasi
(Kodak AR - IO) selama 6 dan 18 jam. Film yang diekspos dikembangkan densitomet ric menunjukkan bahwa omeprazole menginduksi
dan fluorogram dikuantifikasi dengan memindai dengan densitometer peningkatan kadar mRNA gastrin . _ Tingkat mRNA gastrin
laser ( LKB Instruments , Inc. , Gaithersburg, MD) menggunakan adalah 0,1 1±0,05 unit OD untuk RNA kontrol dan 0,66±0,07
integrator area . Probe RNA ribosom kemudian dilebur dengan unit OD untuk RNA yang diberi omeprazole , mean±SE, n = 10,
memanaskan noda pada 950C dalam 0 , 1 X SSC selama 15 menit .
P < 0,01. Untuk menentukan apakah peningkatan mRNA
Bercak itu kemudian diekspos semalaman untuk mengkonfirmasi pencairan probe . _ _ _
gastrin yang diinduksi oleh omeprazole spesifik, tingkat mRNA
Dot blot kemudian direhibridisasi dengan probe RNA SP6 berlabel
32P yang melengkapi gastrin tikus atau mRNA somatostatin . _ aktin diukur pada sampel RNA yang diblotkan yang sama
Bridisasi dan hibridisasi prahibridisasi dilakukan seperti di atas ( Gbr . 1 B). Berbeda dengan mRNA gastrin , tingkat mRNA
dengan pengecualian berikut : larutan hibridisasi mengandung 50% aktin tidak meningkat secara signifikan pada RNA dari tikus
formamida, dan 0,1% SDS , suhu prahibridisasi adalah 450C , dan yang diberi omeprazole . Tingkat mRNA aktin adalah 0,29±0,03
suhu hibridisasi adalah 650C . Setelah hibridisasi selama 15 jam, unit OD untuk RNA kontrol vs. 0,33±0,08 unit OD untuk RNA
filter dicuci dengan 0.IX SSC dan 0,1 % SDS tiga kali selama 20 menit setiap kali diberi
yang . omeprazole (rata-rata±SE, n = 10). Rasio terhitung
Filter kemudian diekspos selama 6 dan 18 jam pada suhu kamar . kadar mRNA gastrin dan aktin dalam RNA dari kelompok yang
Titik - titik individu kemudian dipotong dan radioaktivitas ditentukan diobati dengan omeprazole adalah 2,39±0,56 unit OD , yang
dengan spektrometri kilau . _ _ Autoradiogram kemudian diukur
secara signifikan lebih besar daripada kelompok kontrol ,
dengan pemindaian densitometrik . _
0,35±0,08 unit OD ( rata - rata+SE, n = 10, P<0,01).
Analisis noda utara . Sampel RNA didenaturasi, ( 24) kemudian
Untuk mengukur lebih akurat perubahan tingkat mRNA
dielektroforesis pada gel formaldehida agarosa 1,4% (24, 25) dan
kemudian dipindahkan ke filter nitroselulosa ( 26). Setelah transfer Utara ,
gastrin dengan pengobatan omeprazole , RNA antral dari 14
tikus yang diberi prazole ome dikuantifikasi dengan analisis dot-
filter nitroselulosa dipanggang dalam oven vakum pada suhu 80 ° C selama 2 jam.
Bercak dihibridisasi seperti di atas dengan probe gastrin dan somato statin blot dan dibandingkan dengan kontrol ( Gbr. 2). 10, 5 , dan 2,5
berlabel 32P pada 65 ° C selama 16 jam. Bercak dicuci dalam 0,2X SSC , ug dari total RNA antral diimobilisasi pada nitroselulosa dan
0,1% SDS pada 65 ° C tiga kali selama 20 menit setiap kali. dihibridisasi ke probe gastrin cRNA . Sebuah autoradiogram
Gastrin RIA. Gastrin diukur menggunakan antiserum kelinci 2604 representatif ditunjukkan pada Gambar . 2 A. Sebagai kontrol
( pengenceran 1/100.000 ) yang dibangkitkan terhadap gastrin heptodekapeptida untuk hibridisasi nonspesifik dari probe RNA ke RNA ribosom ,
manusia sintetis (gastrin 17) (27). Pelacak gastrin 17 manusia monoiodinasi
RNA corpus juga dihapus dan dihibridisasi dalam filter yang
tirosin digunakan di semua pengujian ( 28 ) dan gastrin 17 manusia sintetis
sama . _ Tidak ada ikatan yang signifikan dari probe gastrin ke
digunakan sebagai standar . RIA menggunakan 2604 bereaksi dengan
corpus RNA di bawah kondisi hibridisasi dan pencucian yang
komponen I, gastrin 34, dan gastrin 17, sulfat dan nonsulfated, dengan potensi yang sama .
Somatostatin RIA. Somatostatin diekstraksi dari jaringan digunakan ( Gbr . 2 A). Hibridisasi probe gastrin ke sampel RNA
seperti yang dijelaskan oleh Patel dan Reichlin ( 29 ). Ekstrak encer antral dikuantifikasi baik dengan memindai autoradiogram
diinkubasi dengan antiserum somatostatin dan 3.000 cpm 251I - dengan soft laser den sitometer ( Instrumen LKB ) dan dengan
Tyr1 ' somatostatin (lM161; Amersham Corp., Arlington Heights, langsung mengukur radioaktivitas 32P yang terikat pada filter
IL) dalam 50 mM buffer natrium fosfat , pH 7,2, mengandung 0,3% dengan penghitungan Cherenkov dalam pencacah kilau cair . _
BSA dan 10 mM EDTA pada 4°C semalam. Antiserum somatostatin _ _ _ _ Kedua metode memberikan hasil yang hampir sama
dibeli dari Amersham Corp. ( cat no N 1611 ) dan diencerkan untuk peningkatan mRNA gastrin dengan pengobatan
mengikuti instruksi pemasok . Kerusakan < 7 % dan pengikatan omeprazole . _ Jumlah hibridisasi mRNA gastrin berbanding
tanpa adanya peptida yang bersaing adalah 60 % . Konsentrasi
lurus dengan jumlah RNA total yang terikat pada filter . _ _ _ _ _
somatostatin dinormalisasi dengan konsentrasi protein yang diukur
dengan metode Bradford ( 1976 ) ( 30 ) . Pada semua jumlah RNA terikat , tingkat mRNA gastrin secara
Imunohistokimia. Jaringan antral dikeluarkan dari omeprazole dan tikus signifikan lebih besar pada tikus yang diberi omeprazole (- 3,5
yang diberi perlakuan kontrol, direndam dalam OCT 4583 ( Miles Scientific kali lipat lebih tinggi). Untuk mengecualikan perbedaan sistematis
Div ., Naperville, IL), dan dibekukan pada -70 °C. Bagian jaringan beku dalam pengikatan omeprazole dan sampel RNA kontrol ke filter ,
dipotong , difiksasi, dan kemudian diinkubasi dengan antiserum spesifik oligonukleotida sintetis berlabel 32p_ yang melengkapi subunit 1
gastrin (2604) pada pengenceran 1/100 setelah itu diinkubasi dengan protein 8S RNA ribosom dihibridisasi ke filter sebelum hibridisasi dengan
A berlabel FITC ( KPL 125000, Cat F51-5 ) . Setidaknya 15 bidang yang probe gastrin . _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Gambar 2 C mengilustrasikan
berdekatan dihitung pada bagian serial yang diwarnai dengan antisera autoradiogram dari probe ribosom 1 8S yang dihibridisasi ke
gastrin . Kepadatan area dinyatakan sebagai jumlah sel per sentimeter mukosa . _ _ _ _ _
filter yang ditunjukkan pada Gambar 2 A. Hibridisasi dikuantisasi
Analisis statistik . Data dianalisis untuk perbedaan yang signifikan
dengan memindai dengan densitometer dan diplot terhadap
menggunakan uji t Student tidak berpasangan . Tingkat kepercayaan adalah P < 0,01 .
jumlah RNA yang dimuat . _ _ _ _ RNA ribosom terikat secara
kuantitatif ke nitroselulosa dan kadar RNA ribosom yang terikat
Hasil
pada sampel yang diberi omeprazole tidak lebih besar daripada
Tikus Sprague-Dawley jantan diobati dengan omeprazole ( 100 gmol/ sampel RNA kontrol . Ini menyiratkan bahwa konsentrasi transkrip
kg) dua kali sehari selama 5 hari, secara paralel dengan kontrol mRNA gastrin lebih besar pada tikus yang diberi omeprazole .
yang cocok yang disuntik dengan pembawa PEG saja . Pada kedua Peningkatan mRNA gastrin yang diamati ini dapat
kelompok darah diambil untuk gastrin RIA dan RNA diisolasi untuk _ _ diakibatkan oleh peningkatan jumlah sel gastrin ( hiperplasia sel G ) atau

1060 S.J. Brand dan D. Stone _

Machine Translated by Google

SEBUAH
1200- * SEBUAH
B
4-
KOR--
3-
Omeprozol Kontrol
0
E.800- _
0* * * D2- _
.* <~~~~
.-
.0Io
Saya* #6*-a Di:"
0 40 dan 0 <I
CD
OO 000 ,
0 .* ..

# j* saya.

0 2.5 5 10

iu RNA
D
C
KONSEP TENTANG
KOR--

Omeprozol Kontrol 2

B *** 0* 0
JALUR 1 2 3 4 56 78 9
*00* 0-o

U)2i-.
-0 -

0 0 0.0*0
:000
18S
0 2.5 5 10
saya RNA

.2#stx - w o 'I Gambar 2. (A) Autoradiogram dari dot blot yang menghitung gastrin
I:j tw tingkat mRNA dalam RNA antral yang diisolasi dari tikus yang diobati dengan omeprazole
dan kontrol . 10, 5, dan 2,5 ug dari total RNA antral tidak dapat bergerak
CD 0.28 0.31 0.26 0,63 0,28 0,33 0.27 ke filter nitroselulosa , hibridisasi dengan cRNA gastrin 32P- tikus
0.32 0,18 probe dalam 50% formamida 5X SSC, 0,1 % SDS pada 650C selama 16 jam, dan
dicuci pada 650C dalam 0,2X SSC, 0,1% SDS tiga kali masing- masing selama 20 menit
(
waktu. Filter diekspos selama 2 jam . Ditampilkan di inset ( COR) adalah IO mg
JALUR 1 2 3 4 5678 9 RNA corpus tikus diimobilisasi pada filter seperti yang ditunjukkan oleh
anak panah. (B) Kuakstasi densitometrik dari autoradiogram yang ditampilkan dalam A
^
-_ bersama dengan tiga sampel RNA tambahan lainnya di setiap kelompok.
Autoradiogram dipindai dengan densitombter laser lunak LKB . _
18 S Hasil dinyatakan sebagai unit absorbansi sewenang - wenang, mean±SE, n
= 14. *, omeprazol; o, kontrol; *, P < 0,01. (C),Ai'utoradiogram dari
RNA dot blot antral yang ditunjukkan pada Gambar . 2 A setelah dihibridisasi _
*^ 1Z* * dan * disesuaikan dengan coinplementary probe synthetficoigonucleotide berlabel a32P
ke RNA ribosom 18S pada 55'C dalam 5X SSC selama 16 jam dan washel pada
550C dalam 0.2X SSC. Paparan adalah 12 jam pada -70'C. Ditampilkan di sisipan _
(COR) adalah 10 ,g RNA corput tikus yang diimobilisasi ke filter seperti
yang ditunjukkan oleh panah . ( D ) Kuantisasi densitometrik tingkat RNA
DARI 0,08 0,15 0,68 0,43 0.72 ribo somal 18S dalam RNA antral dari autoradiogram yang ditunjukkan pada C.
0,04 0,15 0,58 0,96 Mean±SE, n = 14. *, omeprajole; o, kontrol.

Gambar 1. (A) Konsentrasi gastrin serum pada tikus yang diobati dengan 5-d
kursus injeksi omeprazole , 100 Mmol/kg bis die, ip (OM).
Tikus kontrol ( CON) disuntik dengan pembawa PEG saja ( 0,2
ml/ lml). Rata-rata±SE, n = 14. *P < 0,01. (B) Analisis blot utara
tingkat mRNA aktin dalam RNA antral total 20 Mg diisolasi dari beberapa
tikus yang diberi prazole ( jalur 5-9) dan tikus kontrol (jalur 1-4). Blot adalah
hibridisasi dengan oligonukleotida berlabel 32P yang melengkapi
cDNA aktin tikus dalam 5X SSC , 10 % SDS selama 16 jam pada 550C . Itu
blot dicuci dalam 0,2 SSC, 1 % SPS pada 550C tiga kali selama 20 menit
setiap kali. Paparan adalah selama 8 jam. Aktin mRNA dikuantifikasi dengan _
pemindaian densitometri dari autoradiogram dan ditunjukkan di bawah ini
setiap lajur dalam satuan serapan sewenang -wenang. (C) Analisis blot utara dari
kadar mRNA gastrin . Filter yang ditunjukkan pada B direbus dalam air hingga _
melelehkan probe aktin . _ Filter dihibridisasi dengan gastrin tikus _ _ _
cRNA probe dalam 50% formamida, 5X SSC, 0,1% SDS pada 650C selama 16
h. Blot dicuci pada 650C dalam 0,2 SSC, 0,1 % SDS tiga kali selama 20
menit setiap kali. Paparan adalah selama 2 jam. Tingkat mRNA gastrin
ditentukan oleh pemindaian densitometrik dari autoradiogram dan _ _ _ _
ditunjukkan di bawah setiap lajur dalam satuan absorbansi sewenang -wenang.
dari peningkatan jumlah transkrip mRNA gastrin per G _ _
sel (peningkatan ekspresi gen ). Studi sebelumnya telah menunjukkan
bahwa pengobatan omeprazol yang berkepanjangan (10 minggu) menghasilkan sel G
hiperplasia (6). Untuk menentukan apakah pengobatan omeprazol
selama < 1 minggu mengakibatkan hiperplasia sel G , jumlah sel G
ditentukan oleh imunohistokimia kuantitatif . Antral
Jumlah sel G tidak meningkat secara signifikan setelah 5 hari
pengobatan dengan omeprazole (445±83 sel/cm panjang mukosa )
vs. kontrol (415±60 sel/cm panjang mukosa , mean±SE, n
= 5 tikus, 15 bidang per hewan). Ini berarti bahwa omeprazol
pengobatan selama 5 hari meningkatkan mRNA gastrin dengan
merangsang ekspresi gen gas trin daripada dengan merangsang
hiperplasia G -cep .
Berbeda dengan peningkatan sekresi dan sintesis gastrin ,
pengobatan omeprazol selama 5 hari menghasilkan penurunan _ _ _ _ _ _
ekspresi gen somatostatin antral . RNA dari kontrol dan

Regulasi Ekspresi Gen Gastrin oleh Gastric Achlorhydria 1061

Machine Translated by Google

tikus yang diobati dengan omeprazole menjadi sasaran analisis Northern SEBUAH

Gambar 4. (A) Kuantitas

blot dengan hibridisasi dengan probe cRNA somatostatin tikus (Gbr. 3d ) . densitometrik dari autoradio X
3
3A ). Spesies mRNA tunggal dari 670 nukleotida terdeteksi , _ gram dot - blot mengukur somatostatin
tingkat mRNA dalam iso- RNA antral .
yang konsisten dengan pengamatan sebelumnya ( 31). Intensitas
-2 / * latasi dari omeprazole- (5 hari, 100
hibridisasi somatostatin terhadap RNA dari tikus yang diberi
Myg mol/kg, ip, bis die) dan con-
omepra zole lebih rendah dibandingkan dengan sampel RNA kontrol . _
/ /* ; <g- tikus yang diberi trol . 2.5, 5, dan 10 ,g
(Gbr. 3 B) seperti yang diukur dengan pemindaian densitometrik . dari total RNA diimobilisasi _
Untuk menentukan apakah penurunan somatostatin mRNA (
25 lb10 ke nitroselulosa dan hibridisasi
spesifik , tingkat mRNA aktin pada filter yang sama juga RNA dengan cRNA somatostatin tikus 32P _
.dan

ditentukan . _ _ _ _ _ Tingkat mRNA somatostatin untuk setiap sampel adalah

B _ probe pada 650C dalam formamida 50%
dinyatakan sebagai rasio tingkat mRNA aktin yang sesuai _ _ .0- 5X SSC, 0,1% SDS, dan sebelumnya

untuk setiap sampel (Gbr. 3 8). Somatostatin mRNA menjadi aktin _ dicuci pada 65 ° C dalam 0,2 SSC, 0,1%

Rasio mRNA hampir tiga kali lipat lebih rendah pada RNA dari beberapa tikus yang SD. Filter diekspos selama 8 jam _
diobati dengan prazole dibandingkan dengan RNA dari tikus yang diobati dengan kontrol C
10
/ < pada -70 °C. Autoradiogram adalah
- dikuantifikasi dengan memindai densitomi-
tikus. Penurunan sintesis somatostatin juga ditunjukkan
oleh penurunan konsentrasi somatostatin peptida di _ _ _ 0,5- 0,0 n / y ~~~~~~etry.*, Omeprazole-treated; Hai,
diperlakukan dengan kontrol. Rata-rata±SE, n
ekstrak antral . (Gbr. 3C ). Analisis dot - blot digunakan untuk = 14, *P 0,01. (B) Densitometrik
mengukur kadar mRNA somatostatin secara lebih tepat (Gbr. 4). Di sana kuantisasi 18 ribosom _
0 2
adalah hubungan linier antara jumlah RNA yang _ _ _ _ Tingkat RNA di titik RNA antral _
RNA MQ
dimuat dan tingkat mRNA somatostatin . Pada semua jumlah _ blot yang ditunjukkan pada B hibridisasi menjadi a

RNA dimuat, tingkat mRNA somatostatin secara signifikan Oligonukleotida sintetik berlabel 32P komplementer dengan RNA ribo
lebih rendah dalam RNA dari tikus yang diobati dengan omeprazole dibandingkan dengan somal 18S seperti pada Gambar 2. Paparan selama 12 jam pada 70'C . *,
Omepra zole diobati ; o, kontrol diperlakukan. Rata-rata±SE, n = 14. *P < 0,01.

SEBUAH
kontrol. Ini bukan karena ikatan RNA yang kurang sistematis _
1 2 3 4 56 7 8
ke filter karena tingkat ikatan RNA ribosom adalah _ _ _
agak lebih tinggi pada sampel yang diobati dengan omeprazol .
185 -
Perubahan mRNA gastrin dan somatostatin dengan _ _
pengobatan omeprazol terbatas pada antrum , karena tidak ada
perubahan tingkat mRNA gastrin duodenum dan somatostatin _
-'saya diamati (Gbr. 5 ) dengan pengobatan omeprazole . Ini
menyiratkan bahwa efek omeprazole pada gastrin antral dan
sintesis matostatin adalah konsekuensi dari achlorhydria _ _ _ _ _ _
daripada efek langsung pada sel - sel endokrin . Berbeda dengan an
B C
1.2
SEBUAH

B
1.0
6

5- 10

DAN

C4- 8
0

KONSEP TENTANG
.03- 6-

.04
2 4
Gambar 3. (A) Autoradiogram dari Northern blot mengukur somato statin mRNA
sebuah

dalam 20 Mg total antral RNA yang diisolasi dari omeprazole yang diberi
perlakuan (jalur 4-6), dan tikus yang diberi perlakuan kontrol (jalur 1-3). Jalur 7 dan
8 menunjukkan RNA antral dari tikus yang diobati dengan omeprazole
dan analog matostatin SMS 201-995 , 10 Mg /kg bis die (OM dan SMS ).
Blot dihibridisasi selama 16 jam dengan probe cRNA somatostatin tikus di _
65 °C dalam 50% formamida, 5X SSC dan dicuci 0,2X SSC 0,1% SDS pada
65 °C. Blot diekspos selama 12 jam pada suhu kamar . (B )
rasio somatostatin terhadap tingkat mRNA aktin dalam RNA antral yang diisolasi
dari tikus yang diberi omeprazole (OM) dan tikus kontrol (CON). Bercak
utara dihibridisasi seperti pada Gambar . 1 ke probe actir tikus dan kemudian _ _
autoradiografi. Setelah mencairkan probe aktin , filternya _ _ _
kemudian dihibridisasi dengan probe cRNA somatostatin tikus dan
kemudian diradiografi ulang . Tingkat mRNA somatostatin dan aktin
dikuantifikasi dengan memindai densitometri . _ Rasio somatostatin terhadap aktin tikus
tingkat di setiap sampel RNA dihitung . Hasil dinyatakan sebagai _
mean±SE, n = 10. * P < 0,01. (C) Konsentrasi somatostatin
peptida dalam ekstrak antral dari omeprazole- ( OM ) dan kontrol-
(CON) tikus yang diberi perlakuan (mean±SE, n = 14) *P < 0,01.
0
0 2.5 5 10 0 2.5 5 10
iu RNA 4g RNA
Gambar 5. (A) Tingkat mRNA gastrin duodenum dalam total RNA yang diisolasi
dari tikus omeprazole (.) dan kontrol (o) yang diukur dengan dot-blot
analisis; 2,5, 5, 10 Mg total RNA yang diimobilisasi pada nitroselulosa adalah
hibridisasi dengan probe cRNA gastrin tikus dan dicuci seperti pada Gambar . _
2 A. Autoradiogram diekspos selama 3 hari pada -70 ° C. Autoradiogram
diukur dengan pemindaian densitometrik . Hasil dinyatakan dalam _
unit absorbansi sewenang-wenang , rata- rata ± SE. (B) Somatostatin duodenum
Level mRNA dalam RNA yang diisolasi dari omeprazole- (-) dan control- (o)
_ _ diperlakukan dikuantifikasi dengan analisis dot-blot . Filter duplikat dari Gambar .
3 A dihibridisasi dengan probe cRNA somatostatin tikus 32P dan _ _ _
dicuci di bawah kondisi yang dibahas pada Gambar . 2 A. Autoradiograms
diekspos selama 12 jam dan diukur dengan pemindaian densitometrik .
Hasil dinyatakan dalam unit absorbansi arbitrer ; rata-rata ± SE.

1062 S.J. Brand dan D. Stone _

Machine Translated by Google

trum , sel endokrin duodenum ' tidak terkena asam _ SEBUAH

3-
lingkungan , pH isi duodenum dipertahankan _ _
mendekati netralitas oleh sekresi bikarbonat pankreas . Oleh
karena itu , aklorhidria yang diinduksi omepra zole tidak mungkin 2-
ff1
4)
berpengaruh pada pH duodenum , karena penurunan keasaman lambung _ _ Q

isi yang kosong ke duodenum diseimbangkan dengan Saya *

di
* * Gambar 7. Perjalanan waktu _
pengurangan stimulasi bikarbonat pankreas yang diperantarai sekretin _ saya -

perubahan somatostatin (A )
sekresi. dan tingkat mRNA gastrin (B)
Untuk menentukan perjalanan waktu stimulasi gastrin _ _ _ _ dalam mRNA antral dengan
sekresi dan sintesis yang diinduksi oleh omeprazole, serum gastrin 0- aklorhidria yang diinduksi omepra
0 |
2
zole . Sebuah RNA tral diisolasi dari _
dan tingkat mRNA gastrin ditentukan pada tikus yang diobati dengan B hari
omeprazole selama 1, 2, 4, dan 12 jam setelah pemberian intravena tunggal 7 tikus 4 dan 12 jam setelah ome _

injeksi atau 12 jam setelah kursus intraperitoneal 1, 2, atau 5 hari injeksi prazole (100l mol/
6-
kg, iv, bis die) dan 1, 2, 3,
suntikan diberikan dua kali sehari (8 pagi dan 5 sore). Tingkat _ _
5- dan 5 hari setelah omeprazol
gastrin dan somatostatin mRNA dalam RNA antral
.l0O-dan, bis die intraperitoneal
04.
dikuantifikasi oleh analisis Northern blot ( Gbr. 6) dan dot-blot ( Gbr
0 4- injeksi, dan dibandingkan dengan
7). Meskipun serum gastrin meningkat 2 jam setelah satu _ _ * Tingkat mRNA dalam yang tidak diobati
D0u 3-
injeksi omeprazole , lebih dari 24 jam diperlukan untuk _ _ kontrol. tingkat mRNA adalah
peningkatan yang signifikan dalam tingkat mRNA gastrin (Gbr. 6 dan 7 B). 2- dikuantifikasi dengan hibridisasi dot -blot
Jika f i

Penurunan kadar mRNA somatostatin di antrum adalah _ _ _ seperti yang dijelaskan pada Gambar. 2 A

juga tertunda, terjadi 24 jam setelah aklor hidria yang diinduksi

1 dan Gambar. 4 B, masing-masing.
0 Setelan ulang dinyatakan sebagai _
omeprazole (Gbr. 6 B dan 7 A). D02 itu
hari mean±SE, n = 4. *P < 0,01.

B Jika penurunan pelepasan somatostatin menyebabkan peningkatan _

1 2345678 kadar mRNA gastrin terlihat dengan aklor hidria yang diinduksi
SOMATOSTATI N
omeprazole , kemudian pemberian sejumlah eksogen sehingga
matostatin cukup untuk meningkatkan kadar somatostatin lokal _
harus mencegah peningkatan mRNA gastrin . _ Untuk menguji ini
SEBUAH.
DARI
hipotesis, tikus yang diberi omeprazole dan kontrol disuntik
800 dengan SMS analog somatostatin kerja lama 201-995 (10
DAN -
Saya
S18 rRNA
ag/kg dua kali sehari selama 5 hari) (32). RNA antral diisolasi dan _
J
sebuah
600- tingkat mRNA gastrin ditentukan dengan analisis titik-titik
Saya Saya
titatif Utara dan kuantitatif . Somatostatin eksogen dicegah
.dari 400-
baik peningkatan serum gastrin dan mRNA gastrin yang _ _
Saya

Saya

Saya Saya

' 200- 0D 1.4 1.2 1.5 1.4 1.4 1.2 1.1 1.1
dihasilkan dari pengobatan omeprazole (Gbr. 8). Somatostatin
0n
dalam suntikan, bagaimanapun, tidak mengubah konsentrasi
0-
0 4 812 3 5
GASTRIN serum- gastrin atau tingkat mRNA gastrin pada tikus kontrol . Lebih-lebih lagi,
Jam hari
Waktu somatostatin eksogen tidak mencegah penurunan antral _ _ _

Asia somatostatin mRNA (Gbr. 3 A, jalur 7 dan 8) atau tingkat peptida

DARI 0.43 0.54 1.b
065 095 2.0
Gambar 6. (A) Konsentrasi gastrin serum pada durasi yang berbeda
pengobatan omeprazol . Gastrin serum ditentukan 1 , 2, 4, dan
12 jam setelah injeksi intravena tunggal 100 gmol / kg omeprazole
atau 12 jam setelah pemberian injeksi intraperitoneal dua kali sehari selama 1, 2,
atau 5 hari ( pukul 8 pagi dan 6 sore). Hasil dinyatakan sebagai mean ±SE, *P
< 0,01. n = 4 untuk 1, 2, dan 4 jam. n = 8 untuk hari 1, 2, dan 5. ( B)
Autora diogram of a Northern blot 20 ,g total antral RNA dari tikus
diobati dengan omeprazole (100 ,g/kg bis die) selama 1 hari (jalur 3 dan 4),
2 d (jalur 5 dan 6), dan 5 d (jalur 7 dan 8) dibandingkan dengan yang tidak diberi perlakuan
kontrol (jalur 1 dan 2). Blot dihibridisasi pertama dengan probe somato statin cRNA ( kondisi
seperti yang dibahas pada Gambar . 4 A ) dengan paparan 12 jam pada -70'C , kemudian diulang
dengan ribosomal 18S _ _
Probe RNA (kondisi seperti yang dibahas pada Gambar. 2 C) , dengan eksposur
16 jam pada -70 ° , kemudian diperiksa dengan cRNA gastrin tikus di bawah _
kondisi seperti yang dibahas pada Gambar. 2 A. Eksposur berlangsung selama 5 jam pada
suhu kamar . Kuantisasi densitas metrik somatostatin , ribo somal , dan tingkat RNA gastrin
ditunjukkan di bawah setiap autoradiogram
dan dinyatakan dalam satuan absorbansi arbitrer .
(Gbr. 8 C) terlihat setelah pengobatan omeprazole . Ini tidak termasuk
penjelasan sepele untuk penghambatan ekspresi gen gastrin _
1.6
2.1 oleh somatostatin eksogen setelah pengobatan omeprazole ,
yaitu bahwa somatostatin mencegah omeprazole-induced
achlorhydria, efek yang dilaporkan oleh de Graefet al . (33).
Diskusi
Meskipun regulasi sekresi gastrin dipahami dengan baik _ _
(1) , beberapa penelitian telah menyelidiki faktor fisiologis yang
mengontrol ekspresi gen gastrin . Sebuah studi sebelumnya menyarankan
bahwa aklorhidria yang diinduksi pembedahan merangsang tesis
biosintesis gastrin dan juga meningkatkan sekresi gastrin (5). Yang cepat dan
blokade lengkap sekresi asam lambung dengan omeprazol _
menawarkan pendekatan yang nyaman dengan efek short _ _ _
Istilah achlorhydria pada ekspresi gen gastrin dapat
dibuktikan . _ Aklorhidria yang diinduksi omeprazol
merangsang peningkatan spesifik ekspresi gen gastrin antral tanpa _ _
mempengaruhi kadar mRNA gastrin duodenum . Meskipun sekresi
gastrin dirangsang dalam waktu 2 jam setelah injeksi omeprazol , _

Regulasi Ekspresi Gen Gastrin oleh Gastric Achlorhydria 1063

Machine Translated by Google

SEBUAH
B
4'
kepadatan sel D antral dan kandungan jaringan somatostatin
800*
mungkin melalui penurunan stimulasi oleh asam lambung ( 6, 7). Di sana
3- juga menurunkan pelepasan somatostatin dari perut tikus yang diisolasi
600I
0
B4.~~~~ per leburan yang diobati dengan omeprazole selama 10 minggu ( 35 ) .
.5
cx400- * Hubungan timbal balik antara somatostatin dan gastrin ini
c dengan pengobatan omeprazole kronis menunjukkan bahwa penurunan
'
8200A
Saya

penghambatan sehingga matostatin menyebabkan hipergastrinemia tersebut .

Namun , penelitian lain menunjukkan bahwa memblokir asam lambung
2.5
KONTAK TENTANG TENTANG
+ +
0 5
sekresi dapat menyebabkan hipergastrinemia tanpa dibuktikan
SMS SMS
.dan RNA
perubahan somatostatin antral . Penekanan yang kurang lengkap dari
C 1.2 Sekresi asam lambung oleh ranitadine menghasilkan trinemia
hipergas kronis tanpa mengurangi kepadatan sel D mukosa atau jaringan
kandungan somatostatin ( 6). Pengurangan aktivitas sel D hanya
terlihat dengan semakin tingginya pH lambung yang disebabkan oleh _
achlorhydria yang diinduksi oleh omeprazole ( 6). Lebih jauh lagi,
penelitian yang menggunakan pengobatan omeprazole jangka pendek memiliki
menunjukkan bahwa perubahan aktivitas sel G mendahului efek pada sel D
aktivitas. Koop dkk . (35) melaporkan bahwa pengobatan omeprazol
selama 7 hari menghasilkan peningkatan pelepasan gastrin tanpa penurunan _ _ _
SMS SMS
pelepasan somatostatin yang distimulasi . Jensen dkk . (1987 ) juga
Gambar 8. (A) Konsentrasi gastrin serum setelah pengobatan 5 hari dengan meneliti efek perubahan pH lambung pada gastrin dan
omeprazole saja (100 umol/kg bis die, ip) saja (OM), PEG 4000
konsentrasi matostatin dalam darah vena dengan mengeringkan _ _ _ _
pembawa saja (CON), atau , dikombinasikan dengan analog somatostatin
antrum pada subjek manusia yang dibius dan mengalami atropin selama
SMS 201-998 (10 jg/kg ke ip), ( CON + SMS dan OM
pembedahan (36). Meskipun penurunan keasaman meningkatkan trin
+ SMS). Rata-rata±SE, n = 6. *P < 0,01. (B) Tingkat mRNA gastrin di
RNA antral setelah pengobatan dengan omeprazole saja (-) atau omepra zole gas vena , dan peningkatan keasaman mengurangi kadar gastrin , ini adalah
plus somatostatin ( v) dibandingkan dengan car rier PEG yang diobati dengan tidak digabungkan dengan perubahan timbal balik dalam kadar somatostatin dalam

kontrol saja (o) atau dikombinasikan dengan somatostatin (A). 2.5, 5, dan 10 ,Rg darah vena . Hal ini menunjukkan bahwa perubahan pH lambung dapat mengubah
RNA total diteteskan ke nitroselulosa , dihibridisasi ke tikus _ _ sekresi gastrin melalui jalur yang tidak selalu melibatkan _
probe gastrin cRNA seperti pada Gambar. 2, dan dikuantifikasi dengan densitometric somatostatin. Kesulitan dengan jenis studi ini , bagaimanapun, adalah
pemindaian autoradiogram . Hasil dinyatakan dalam unit penyerap bahwa konsentrasi somatostatin vena tidak secara langsung
sewenang - wenang . Rata-rata±SE, n = 6. *P < 0,01. (C) Somatostatin antral mengukur pelepasan parakrin somatostatin ke dalam ekstraseluler _ _
konsentrasi peptida setelah pengobatan 5 hari dengan omeprazole saja ruang angkasa. Hal ini ditekankan oleh kegagalan dalam penelitian ini untuk mengamati _
(100 ,umol/kg bis die, ip) (QM), PEG 4000 carrier saja (CON), atau
perbedaan antara konsentrasi somatostatin arteri dan vena _
dikombinasikan dengan somratostatin analog SMS 201-998 ( 10 Ag/kg
percobaan. Hal ini dipertanyakan apakah perubahan rilis paracring
bis die) (CON + SMS dan CM + qMS). Rata-rata ± SE. *P < 0,01.
dengan perubahan pH lambung dapat diukur pada pasien ini .
Berbeda dengan pekerjaan di atas , penelitian ini menyarankan _
peningkatan mRNA gastrin hanya terlihat setelah 24 jam achlorhy bahwa bahkan aklorhidria jangka pendek yang diinduksi oleh omeprazole
merangsang sekresi gastrin dan ekspresi gen melalui
dria . _ _ Penundaan serupa dalam peningkatan proopiomelanocortin _ _ _
(POMG) ' tingkat mRNA bila dibandingkan dengan stimulasi pengurangan penghambatan somatostatin aktivitas sel G. _ Omeprazol
Sekresi hormon adrenokortikotropik juga terlihat pada pengobatan menyebabkan penurunan dua kali lipat dalam somatostatin mRNA
kortikotrof hipofisis ketika dilepaskan dari glukokortikoid . _ _ _ _ tingkat di mukosa antral terkait dengan peningkatan _ _ _
penghambatan oleh adrenalektomi (34). Namun demikian, gen POMC kadar mRNA gastrin . Uplike mengukur perubahan vena _
transkripsi secara maksimal meningkat dalam 1 jam dari tingkat somatostatin , perubahan mRNA somatostatin ini secara
adrenalec tomy (34) , yang menyiratkan bahwa stimulasi aktivitas genlangsung mencerminkan penurunan aktivitas sel D dan menyiratkan bahwa ada
terjadi bersamaan dengan peningkatan sekresi . yang lambat penurunan sintesis dan pelepasan somatostatin dengan achlorhy
akumulasi mRNA dihasilkan dari fakta bahwa gen _ _ _ dria . Selanjutnya berbeda dengan Koop et al . (35) , omepranya
tingkat transkripsi kecil dibandingkan dengan stabilitas _ _ _ _ penurunan kadar mRNA somatostatin yang diinduksi zole terjadi
kumpulan sitoplasma POMC mRNA . Meskipun studi lebih lanjut bersamaan dengan peningkatan kadar mRNA gastrin . _ _ _ _ Lagi
diperlukan untuk menunjukkan bahwa achlorhydria merangsang transkripsi bukti langsung bahwa somatostatin mengatur gen gastrin antral
gen gas trin dan ini bersamaan dengan _ _ _ _ ekspresi disediakan oleh pengamatan dalam penelitian ini bahwa _ _
sekresi yang distimulasi , kemungkinan kenaikan gastrin yang tertunda _ _ somatostatin eksogen mencegah stimulasi gastrin _ _
Level mRNA juga mencerminkan stabilitas dan ukuran sel _ _ _ kadar mRNA oleh omeprazole.
kumpulan mRNA gastrin . Ada juga kemungkinan bahwa peningkatan _ _ _ Meskipun penurunan sintesis somatostatin yang diamati ini
mRNA gastrin dengan aklorhidria dihasilkan dari peningkatan konsisten dengan berkurangnya penghambatan sel G , penurunan sehingga
selektif dalam stabilitas mRNA gastrin . _ kadar mRNA matostatin hanya terlihat setelah timbulnya _ _ _
Pengurangan penghambatan oleh somatostatin dapat memediasi hipergastrinemia. Namun , hubungan antara _
peningkatan kadar mRNA gastrin yang dihasilkan dari aklorhidria timbulnya peningkatan sekresi sel G dan penurunan somatostatin _ _
terinduksi omeprazole . _ _ Seperti yang diulas di atas, bukti substansial tingkat mRNA tidak langsung. Model parakrin yang diusulkan
menunjukkan bahwa asam lambung menghambat sekresi gastrin melalui menyatakan bahwa aklorhidria menghasilkan penurunan
merangsang pelepasan somatostatin lokal . _ Aklor hidria kronis sekresi statin somato dan penurunan transkripsi gen somatostatin . _ _
yang diinduksi oleh pengobatan omeprazole selama 4 minggu menurun Ini adalah kinetika penurunan sekresi somatostatin yang _ _ _ _

1064 S.J. Brand dan D. Stone _

Machine Translated by Google
menentukan perjalanan waktu efek sel G. _ Perjalanan waktu
perubahan mRNA somatostatin , di sisi lain , ditentukan oleh
penurunan transkripsi dan waktu paruh mRNA somato statin . _ _
_ _ _ _ Seperti mRNA yang mengkode peptida pengatur lainnya ,
waktu paruh mRNA gastrin dan somatostatin panjang . _ _ Dalam
garis sel pulau yang mengekspresikan gastrin dan somatostatin ,
studi pengejaran aktinomisin telah menunjukkan bahwa waktu
paruh mRNA adalah > 12 jam ( pengamatan tidak dipublikasikan ).
Akibatnya , penurunan kadar mRNA somatostatin dengan ome
prazole tidak terlihat sampai setelah 24 jam . _ _ Selanjutnya ,
waktu paruh mRNA somatostatin dan gastrin adalah variabel
independen ; _ perjalanan waktu dari dua mRNA hanya
berhubungan secara tidak langsung satu sama lain , meskipun
perubahan transkripsi gen dapat terjadi pada waktu yang sama . _ _ _
Oleh karena itu , penelitian ini menunjukkan bahwa
somatostatin secara khusus menghambat akumulasi mRNA
gastrin serta sekresi gastrin dalam sel G antral , dengan mengatur
transkripsi gen gastrin atau stabilitas mRNA . Berbeda dengan
penghambatan sekresi hormon , efek somatostatin pada ekspresi
gen belum dijelaskan dengan baik . _ _ _ _ Baringa dkk . (18 ) ,
bagaimanapun , melaporkan bahwa somatostatin tidak
menghambat transkripsi gen hormon pertumbuhan yang
dirangsang oleh faktor pelepas hormon pertumbuhan meskipun
somatostatin menghambat baik sekresi hormon pertumbuhan dan
peningkatan cAMP yang ditunjukkan untuk merangsang transkripsi
gen hormon pertumbuhan . Hal ini menunjukkan bahwa efek
penghambatan somatostatin pada sekresi mungkin belum tentu
terkait dengan efeknya pada transkripsi gen . _ Ada banyak
perbedaan antara penelitian ini dan Baringa et al . _ sehubungan
dengan penjelasan kami tentang berbagai efek somatostatin pada ekspresi
Baringa dkk . mempelajari perubahan transkripsi gen hormon
pertumbuhan hanya setelah paparan singkat terhadap somatostatin .
_ Sebaliknya , penelitian ini meneliti efek somatostatin pada ekspresi
gen gastrin setelah pengobatan untuk waktu yang lebih lama. Terlebih
lagi , penelitian in vivo saat ini tidak dapat menentukan apakah
perubahan kadar mRNA gastrin disebabkan oleh efek langsung
somatostatin pada sel G atau apakah itu merupakan konsekuensi
tidak langsung dari somatostatin yang menghambat pelepasan
rangsangan sel G ( seperti pelepasan gastrin ) . peptida) dari terminal
saraf mukosa . Oleh karena itu , penelitian lebih lanjut diperlukan
untuk menunjukkan apakah statin somato menghambat ekspresi gen
gastrin melalui aksi seluler langsung dan untuk menentukan peristiwa
intraseluler yang memediasi efek matostatin pada ekspresi gen gastrin . _ hubungan fungsional peptida antral . _ Saya. J. Fisiol. 238:495-501.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Dr. Kurt J. Isselbacher atas dukungan dan dorongannya .
Kami berterima kasih kepada AB Hassle yang dengan murah hati menyediakan omeprazole yang
digunakan dalam penelitian ini dan Sandoz untuk SMS - 210-995.
Penelitian ini didukung oleh AGA Industry (Searle) Scholar Award
kepada S. J. Brand , dan hibah dari National Institutes of Health AM
-01292 ( untuk Kurt J. Isselbacher).
Referensi
1. Walsh, J. H., dan M. I. Grossman. 1975. Gastrin. N. Inggris. J.
Dengan. 292:1324-1377.
2. McGuigan, J. E., dan W. L. Traudeau. 1971. Gastrin serum
konsentrasi pada anemia pernisiosa . N. Inggris. J. Med. 282:358-361.
3. Creutzfeld, W., R. Arnold, W. W. Creutzfeld, dan H. Ketterer.
1971. Gastrin dan sel G di mukosa antral pasien dengan perni _ _
anemia berat , akromegali dan hiperparatiroidisme dan pada tumor
pankreas Zollinger Ellison . _ Eur. J.klin . Menginvestasikan. 1: 161-179.
4. Almets, J., H. A. Munshid, R. Hakanson, J. Hedenbro, G.
Liedberg , J. Oscarson J, J. F. Rehfeld , F. Sundler, dan S. Vallgren. 1980.
Proliferasi sel gastrin setelah stimulasi kronis ; pengaruh saraf
vagal pada operasi lambung pada tikus . _ _ J. Fisiol. 198:557-569.
5. Merek, S.J. , T.W. Schwartz, Y. Klarlund , dan J.F. Rehfeld .
1984. Biosintesis gastrin tirosin - O-sulfat . J.Biol . Kimia
259:13246-13252.
6. Allen, J. M., A. E. Bishop, M. J. Daly, H. Larsson, E. Carlsson,
J. M. Polak, dan S. R. Bloom. 1986. Pengaruh penghambatan sekresi
asam pada peptida pengatur di perut tikus . _ _ _ _ Gastroenterologi.
90:970-977.
7. Larsson, H., E. Carlsson, H. Mattson, L. Lundell, F. Sundler, G.
Sundell, B. Wallmark, T. Watanabe, dan R. Hakanson. 1986. Gastrin
plasma dan aktivasi dan proliferasi sel seperti enterochromaffin
lambung . Gastroenterologi. 90:391-399.
8. Ryberg, B., H. Mattsson, F. Sundler, R. Hakanson, dan E.
Carlsson. 1986. Efek penghambatan sekresi asam lambung pada tikus
pada kadar gastrin plasma dan kepadatan sel seperti enterokromafin di
mukosa oksintik . _ _ _ Suplemen; simposium internasional keenam
tentang hormon gas trointestinal . Bisa. J. Fisiol. farmasi. 110:34-35.
9. Larsson, L. I. 1980. Jalur sekresi peptida di saluran GI :
kontribusi sitokimia untuk fisiologi regulasi usus . Saya. J.
Fisiol. 239:237-246.
10. Yamada, T. 1987. Tindakan regulasi lokal peptida
gastrointestinal . Dalam Fisiologi Saluran Gastrointestinal . _ L.R.
Johnson , editor. Raven Press, New York. 131-142.
11. Bloom, S. R., C. H. Mortimer, dan M. D. Thorner. 1974.
Penghambatan sekresi gastrin dan asam lambung oleh hormon pertumbuhan
melepaskan hormon penghambat . Lanset. ii: 1106-1109.
12. J. Alumets , H. A. Ekelund, E. Munshin, R. Hakansson, I .
Loren,gendan gastrin dan hormon
F. Sundler. pertumbuhan
1978. Topografi sel. _somatostatin
_ di
perut tikus . _ _ _ Jaringan Sel Res. 202:177-188.
13. Larsson, L. I., N. Goltermann, L. DeMagistris, J. F. Rehfeld ,
dan T. W. Schwartz. 1979. Proses sel somatostatin sebagai jalur
untuk aksi parakrin . Sains (Cuci. DC). 205:1393–1395.
14. Gustavsson, S., dan G. Lunquist. 1978. Partisipasi
somatostatin antral dalam regulasi lokal pelepasan gastrin . _ Akta
Endokrinol. 88:339-346.
15. Schusdziarra, V., V. Harris, J. M. Conlon, A. Arimura, dan R.
Unger. 1978. Pelepasan somatostatin pankreas dan lambung sebagai respons
terhadap nutrisi intragastrik dan intraduodenal dan HCO pada anjing . J.klin .
Menginvestasikan. 62:509-518.
16. Saffouri, B., G. C. Weir, K. Bitar, dan G. Makhlouf. 1980.
Sekresi gastrin dan somatostatin oleh perfusi perut tikus ;
17. Schonbrunn, A., L. J. Dorflinger, dan B. D. Koch. 1985.
Mekanisme Aksi Somatostatin pada Sel Hipofisis pada Somatostatin Y. C. _ _
Patel dan G.S. Tannenbaum , editor. Plenum Publishing Corp., New
York. 305-324.
18. Barinaga, M., L. M. Bilezikjian, W. W. Vale, M. G. Rosenfeld, dan R. M. Evans. 1985. Efek
independen dari faktor pelepasan hormon pertumbuhan pada pelepasan hormon pertumbuhan dan
transkripsi gen . Alam ( London .). 314:279-281.
19. Cathala, G., J. F. Savouret, B. Mendez, B. L. West, M. Karin,
J. A. Martial, dan J. D. Baxter. 1983. Sebuah metode untuk isolasi
asam ribonukleat aktif translasi intacL . DNA. 2:329-335.
20. Melton, D. A., P. A. Krieg, R. Rebagliati, T. Maniatis, dan
M. R. Green. 1984. Sintesis in vitro RNA yang aktif secara biologis ,
dan hibridisasi RNA yang efisien dari plasmid yang mengandung
promotor bakteriofag SP6 . Asam Nukleat Res. 12:7035-7056.
21. Fuller, P. J., D. Stone, dan S. J. Brand. 1987. Kloning molekuler
dan pengurutan asam cleic deoxyribonu deoxyribonu komplementer
preprogastrin tikus . mol. Endokrinol. 1:306-311.
22. Goodman, R. H., D. C. Aron, dan B. A. Roos. 1983. Kloning
tikus presomatostatin . J.Bio . Kimia 258:5570-5573.
Regulasi Ekspresi Gen Gastrin oleh Gastric Achlorhydria _ 1065
Machine Translated by Google
23. Putih, B. A., dan F. C. Bancroft. 1982. Hibridisasi titik
sitoplasma . J.Biol . Kimia 257:8569-8572.
24. Dobner, P. R., E. S. Kawasaki, K. Y. Yu, dan F. C. Bancroft.
1981. Hormon tiroid atau glukokortikoid menginduksi mRNA hormon pra -
pertumbuhan dan kemungkinan prekursor nuklirnya dalam sel hipofisis tikus .
Prok. Dilahirkan akad. Tahu Amerika Serikat 78:2230-2234.
25. Maniatis, T., E. F. Fritsch, dan J. Sambrook. 1982. Molekuler
Kloning. Laboratorium Pelabuhan Mata Air Dingin , Pelabuhan Mata Air Dingin , Baru
York.
26. Thomas, P. S. 1983. Hibridisasi RNA terdenaturasi yang
ditransfer atau diteteskan ke kertas nitroselulosa . Metode Enzim. 100:255- pada sekresi asam lambung pada anjing. Gastroenterologi. 91:333-337.
266.
[ PubMed ] 27. Rehfeld, J. R., F. Stadil, dan B. Rubin. 1972. Produksi dan
evaluasi antibodi untuk radioimmunoassay gastrin . _ _ Pindai.
J.klin . Laboratorium. Menginvestasikan. 30:342-360.
28. Stadil, F., dan J. R. Rehfeld. 1972. Pembuatan label '25m
gastrin manusia sintetis I untuk radioimunoanalisis. Pindai. J.klin .
Laboratorium. Menginvestasikan. 30:361-368.
29. Patel, Y. C., dan S. Reichlin. 1979. Somatostatin dalam Metode _
Radioimmunoassay Hormon . edisi ke- 2 B. M. Jaffe dan H. R. Behr
man, editor. Academic Press, Inc., New York. 77-100.
30. Bradford , M. 1976. Metode cepat dan sensitif untuk quan _
1066 S.J. Brand dan D. Stone _
titrasi jumlah mikrogram protein menggunakan prinsip _ _ _ _
pengikatan pewarna protein . dubur. Biokimia. 72:248-254.
31. Zigg, H., R. H. Goodman, dan J. H. Habener. 1984.
Mengembangkan regulasi mental gen somatostatin tikus . _ Endokrinologi.
115:90-94.
32. Bauer, W., V. Briner, W. Doepfner, R. Haller, R. Huguenin, P.
Marback, T. J. Petcher, dan J. Plese. 1982. SMS 201-995, yang sangat ampuh
dan analog octapeptide selektif dari somatostatin dengan perpanjangan waktu
tindakan. Ilmu Kehidupan . 31:1133-1140.
33. DeGraef, J., dan M. C. Woussen Colle. 1986. Pengaruh _ _
keadaan stimulasi sel parietal pada efek penghambatan omeprazol _
34. Birnberg, N. C., J. C. Lissitzky, M. Hinman, dan E. Herbert.
1983. Glukokortikoid mengatur ekspresi gen proopromelanocastrin
in vivo pada tingkat transkripsi dan sekresi . _ Prok. Natal akad.
Sains Amerika Serikat. 80: 6982-6986.
35. Koop, H., S. Willemer, F. Steinback, R. Eissele, K. Tuch, dan
R.Arnold . 1987. Pengaruh aklorhidria yang diinduksi obat kronis oleh
menggantikan benzimidazol pada lambung endokrin pada tikus .
Enterologi Gastro . 92:406-413.
36. Jensen, S. L., J. J. Holst, L. A. Christiansen, M. H. Shokouh amri, M.
Lorentsen, H. Beck, dan H. E. Jensen. 1987. Pengaruh pH intra lambung
pada pelepasan gastrin dan somatostatin antral pada pasien yang dibius,
pasien dan kontrol ulkus duodenum atropinisasi . Usus. 28:206-209.