Validasi Metode Analisis Kimia - Hanifah N Lioe

VALIDASI METODE ANALISIS LIMIT
KIMIA DAN KRITERIANYA DETEKSI
HASIL ANALISIS
Hanifah Nuryani Lioe
Feri Kusnandar
Dedi Fardiaz
Data yang kita laporkan: harus
Magister Keamanan Pangan
Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fateta, di atas limit deteksi alat
IPB University
ITP-IPB hanifahlioe@apps.ipb.ac.id
Dept. ITP, Fateta, IPB 2012 ITP-IPB hanifahlioe@apps.ipb.ac.id
Dept. ITP, Fateta, IPB 2012
1 2
1
TUJUAN VALIDASI
Menentukan:
• Instrumen • Metode
• Limit deteksi metode (MDL)
• Limit deteksi instrumen (IDL)
• Linearitas metode (R>0.995)
• Linearitas instrument (R>0.995)
• Repetabilitas metode
• Range kalibrasi instrument
• Reprodusibilitas metode
• Repeatabilitas instrumen
• Sensitivitas Instrumen • Method ruggedness
• Presisi • Method accuracy ((Recovery

Test) → mendekati 100%
• Repeatability of Standard
• Reproducibility of Standard • Applicable measurement
range of method
• Presisi luas area (< 2%)
• Selectivity, confirmation
• Presisi waktu retensi (< 2%)
• Method uncertainty
3 4
2
Presisi RELIABILITAS DATA
Accuracy VS Precision
x = 10
S.D. = 4.3
4, 6, 8, 10, 12, 14, 16
% CV = 43%
x = 10
S.D. = 1.0
% CV = 10%
4, 6, 8, 10, 12, 14, 16
x = 10
S.D. = 3.1
% CV = 31%
4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 Accuracy &
Accuracy good Precision good
Precision
Precision bad Accuracy bad good
5 6
3
Analytical Result
Kesalahan sistematik
true value error
Bias
systematic error random error

(bias)
Xtrue Xresults TRUENESS PRECISION

Nilai benar diketahui dari spiking
(untuk uji rekoveri) atau dari
sertifikat CRM (bila menggunakan Analysis of CRM duplicate or
certified reference material)
or spiked sample triplicate analysis
7 8
4
Analytical Procedure Pengambilan Sampel
sample lot
Catatan:
SAMPLING ⚫ Umumnya sumber kesalahan sistematik
laboratory sample ⚫ Umumnya sama sekali tidak diduga oleh analis
SAMPLE PREPARATION
Menghindari kesalahan, perlu memperhitungkan:
Analytical Method
test sample
⚫ Kestabilan sampel
ANALYTE EXTRACTION
⚫ Homogenitas/Keseragaman
analytical sample ⚫ Kontaminasi: mikrobiologi dan kimia (dari
ANALYTE DETERMINATION kemasan)
⚫ Matriks sampel berbeda memberikan hasil yang
analytical result
berbeda (terutama dalam uji rekoveri)
9 10
5
Signal-to-noise Ratio (S/N ratio)
Noise{
LOD = S/N = 3
LOQ = S/N = 3.3

LOQ = S/N = 10/3
S x S 1
= =
N s N RSD
11 12
6
KAPAN VALIDASI METODE
DIPERLUKAN Guidance on Method Validation
⚫ Validasi diperlukan apabila International regulatory bodies:
metode analisis tidak standar
⚫ Eurachem
⚫ Atau apabila metode standar
tersebut berubah sistemnya ⚫ IUPAC
⚫ AOAC PVM (Peer Verified Method)
- Berubah jenis metodenya ⚫ FDA
- Berubah konsentrasi analatnya
⚫ FAO/WHO: Codex/CCMAS (Codex
- Berubah matriks sampelnya
- Berubah SOP/prosedurnya Committee on Methods of Analysis and
Sampling)
13 14
7
Parameter Validasi Metode Akurasi atau Ketepatan
⚫ Precision (presisi)
⚫ Trueness (ketepatan) ⚫ Seberapa dekat antara nilai yang
⚫ Selectivity/specificity (selektivitas) dihasilkan dengan nilai yang
⚫ Linearity (linearitas)
sebenarnya atau nilai referens.
⚫ Operating range (range konsentrasi)
⚫ Recovery (uji rekoveri)
⚫ Limit of detection (LOD) (IDL) ⚫ Akurasi dapat diuji dengan
⚫ Limit of quantification (LOQ) (MDL) menggunakan sampel yang dispike
⚫ Sensitivity (sensitivitas) dengan analat standar yang diketahui
⚫ Ruggedness/robustness jumlahnya (uji rekoveri)
15 16
8
Akurasi
1. Uji rekoveri dengan sampel yang dispike
dengan standar yang diketahui Persen Rekoveri
konsentrasinya (7-10 ulangan) Diperoleh dari percobaan analisis blank
2. Uji rekoveri dengan CRM sample yang dispike dengan analat yang
diketahui jumlahnya
3. Analisis menggunakan sampel yang
telah diketahui jumlah analatnya (dari konsentrasi yang terbaca x 100 %
uji sebelumnya) % Rekoveri = konsentrasi yang dispike
4. Membandingkan hasil analisis dengan

hasil yang diperoleh dari laboratorium
lain (uji banding)
17 18
9
Acceptable Recovery Percentages
Analyte (%) Unit Mean recovery (%)
100 100% 98-102 Recovery or spiking studies

10 10% 98-102
1 1% 97-103
0.1 0.10% 95-105 ⚫ Performed for different types of matrices
0.01 100 ppm 90-107
0.001 10 ppm 80-110 ⚫ For each matrix type: at different levels of
0.0001 1 ppm 80-110 analyte concentration
0.00001 100 ppb 80-110
0.000001 10 ppb 60-115
0.0000001 1 ppb 40-120
19 20
10
Presisi
Presisi
⚫ Diketahui dengan melakukan 7-10 kali ⚫ Repeatabilitas menunjukkan presisi pada
kondisi operasi yang sama dalam selang
ulangan analisis: repeatabilitas dan
waktu yang pendek (satu hari atau kurang
reprodusibilitas dari 1 minggu)
⚫ Intermediate Precision (WLR = within-lab
Repeatability reproducibility or intra-lab reproducibility) :
(Within-Lab Precision) different days, different analysts, different
equipment, etc.
Reproducibility
⚫ Reproducibility expresses the precision
(Between-Lab Precision) between laboratories.
ITP-IPB Dept. ITP, Fateta, IPB 2012 ITP-IPB hanifahlioe@apps.ipb.ac.id
21 22
11
Acceptable RSD values LOD
Unit Horwitz AOAC PVM
% RSD %RSD ⚫ The limit of detection atau limit deteksi instrumen
100% 2 1.3 ⚫ Konsentrasi analat terkecil dalam sampel yang masih
10% 2.8 2.8 bisa dideteksi tetapi tidak dapat dikuantifikasi secara
akurat.
1% 4 2.7
0.10% 5.7 3.7 ⚫ LOD dapat berhubungan dengan signal instrumen yaitu
LOD = S/N = 3
100 ppm 8 5.3
10 ppm 11.3 7.3 ⚫ LOD = 3 SD, dimana SD diperoleh dari pengujian 7-10
1 ppm 16 11 kali pengukuran larutan analat standar yang terendah
konsentrasinya
100 ppb 22.6 15
10 ppb 32 21 ⚫ Detection or Quantification is impossible below the
LOD
1 ppb 45.3 30
24 25
12
Quantitation Limit (LOQ)
6
5
⚫ Konsentrasi analat terkecil dalam sampel
4
y = 4.7452x + 0.5542 yang masih dapat ditentukan secara
S/N = 3 kuantitatif dengan akurasi dan presisi yang
S/N
3
baik.
2
1 LOD
⚫ LOQ = (10/3) *LOD
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Spiked amount
26 27
13
LOQ Specificity and selectivity
⚫ Limit of determination or limit of ⚫ Specificity means 100% selectivity
quantification ⚫ A method must first show high specificity, before
true quantification can be performed
⚫ LOQ selalu lebih besar daripada LOD
⚫ Specificity: produce a response for a single
⚫ LOQ = S/N = 10 analyte only
⚫ LOQ = 10 SD (untuk LOD = 3 SD) ⚫ Selectivity: produce responses for different

analytes/chemicals which can be distinguished
⚫ Kuantifikasi di bawah batas LOQ masih from each other
memungkinkan tetapi tidak reliable.
28 29
14
Linearitas (mg/ml) Response
2.0 20.95 20.55 17.17
⚫ penetapan kemampuan metode untuk
3.0 30.02 33.92 29.89
mendapatkan hasil pengujian yang
proporsional pada konsentrasi analat 4.0 42.60 36.92 38.90
5.0 48.91 50.22 52.52
6.0 61.08 58.22 60.20
Ukur respon (paling sedikit 3 kali) pada paling
sedikit 6 level konsentrasi 7.0 70.14 70.43 68.31
8.0 83.91 81.06 77.58
30 31
15
✓ Plot konsentrasi analit yang berbeda-beda (X)
Linearity and Range
terhadap respon instrumen (Y)
✓ R2 > 0.990 ⚫ Linearity supposes that the intercept is not
significantly different from zero.
✓ R > 0.995
100
⚫ A linear curve is repeatable from day to day.
80
Y = 10.034* X –0.0012
⚫ Linear ranges may be different for different
matrices.
Response
60
40
R2 > 0.990 ⚫ For a certain matrix, the slope of the calibration

curve is compared with the slope of the usual
20
Ada 7 titik konsentrasi
0
calibration function. If curves are parallel, there
is no matrix effect.
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
Concentration (mg/ml)
32 33
16
Sensitivitas 0.70
A is more sensitive than B! A

Sensitivitas metode adalah perubahan
0.60
⚫
respon karena perubahan yang bersamaan 0.50
Slope:
Absorbance Units
dalam konsentrasi (= slope dari kurva 0.40 0.2 AU
B
kalibrasi) 0.30
0.20 0.1 AU
⚫ Metode disebut Sensitif : jika terjadi 0.10
perubahan kecil dalam konsentrasi analat 0.00

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
akan memberikan perubahan yang Concentration (mg/ml)
signifikan dalam responnya

34 35
17
Thank You
36
18

Validasi Metode Analisis Kimia - Hanifah N Lioe

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Validasi Metode Analisis Kimia - Hanifah N Lioe

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

VALIDASI METODE ANALISIS LIMIT

KIMIA DAN KRITERIANYA DETEKSI

• Presisi • Method accuracy ((Recovery

systematic error random error

Xtrue Xresults TRUENESS PRECISION

LOQ = S/N = 3.3

4. Membandingkan hasil analisis dengan

100 100% 98-102 Recovery or spiking studies

⚫ LOQ = 10 SD (untuk LOD = 3 SD) ⚫ Selectivity: produce responses for different

R2 > 0.990 ⚫ For a certain matrix, the slope of the calibration

A is more sensitive than B! A

⚫ Metode disebut Sensitif : jika terjadi 0.10

perubahan kecil dalam konsentrasi analat 0.00

akan memberikan perubahan yang Concentration (mg/ml)

signifikan dalam responnya

Anda mungkin juga menyukai