PATOLOGI KLINIK

Minggu, 15 Januari 2023 13.50

by: caka

BLOOD GROUPING
INDEKS ERITROSIT
 Prinsip
Didasarkan pada prinsip aglutinasi.  Komponen indeks eritrosit: Mean Corpuscular Volume (MCV), Mean
Corpuscular Hemoglobin (MCH), dan Mean Corpuscular Hemoglobin
 Reagen dan peralatan Consentration (MCHC).
○ Anti-A dengan asam berwarna biru (paten biru) pewarna,  Indeks digunakan sebagai bantuan dalam diagnosis dan membedakan
Anti-B adalah berwarna dengan asam (tatrazine) pewarna anemia
kuning, dan Anti-A, B tidak berwarna. Reagen ini
mengandung natrium azida 0,1% sebagai pengawet dan  Mean Corpuscular Volume (MCV)
harus digunakan sebagai disediakan. MCV dihitung dari jumlah RBC dan hematokrit dan menunjukkan volume
○ Pen lancet rata-rata RBC di femtoliters (FL)
○ Lancet
Rumusnya:
 Prosedur
○ Sampel darah perifer diambil di ujung jari menggunakan
lancet
○ Darah ditempatkan di tiga tempat yang berbeda (sisi
kanan – tengah – kiri)
○ Teteskan reagen anti-A, anti-B, dan anti A,B pada masing-
masing tempat Normal MCV: 80-100 fL
○ Aduk tetesan masing – masing serum dengan darah
tersebut  Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH)
○ Diamati hasilnya setelah 2 – 3 menit, apakah terjadi MCH dihitung dari HB dan RBC count, menunjukkan berat rata-rata Hb di
penggumpalan darah atau tidak. RBC, dan harus selalu berkorelasi dengan MCV dan MCHC.

 Interpretasi Hasil Rumus:

Normal MCH: 27-31 pg

 Uji serologi yang dapat digunakan dalam perbankan darah:
○ Enzim immunoassay (ELAS) dan immunoassays
chemiluminescent (CLIAS)
○ Serologi virus hepatitis B
○ Pemeriksaan veneral disease research laboratory (VDRL)
atau cerebrospinal fluif
 Mean Corpuscular Hemoglobin Consentration (MCHC)
MCHC dihitung dari Hb dan Hct dan merupakan ekspresi dari konsentrasi
rata-rata Hb di RBC
Rumus:

BLEEDING TIME

 Metode Ivy
Normal MCHC: 31%-36% atau 31-36 g/dL
 Prinsip
manset tekanan darah ditempatkan pada lengan pasien di atas siku,
inflasi, dan dipertahankan pada tekanan konstan sepanjang prosedur.
 Faktor yang mempemgaruhi nilai indeks eritrosit:
Membuat sayatan pada permukaan lengan. Lama waktu yang
Jumlah eritrosit, kadar Hb, nilai hematokrit
diperlukan untuk menghentikan pedarahan dicatat sebagai waktu
perdarahan.

 Reagen dan peralatan TROMBOSIT COUNT

○ Sphygmomanometer
○ Stopwatch  Metode: Rees-Ecker
○ Perangkat saat pendarahan
○ Kertas filter circular  Fx trombosit: hemostasis dan menjaga integritas kapiler
○ Pen lancet & lancet
○ Alkohol swab  Prinsip
Darah diencerkan dengan larutan yang mengandung Biru cresyl Brilliant
 Prosedur sehingga trombosit tampak biru cerah. Trombosit kemudian dihitung
○ Cari area untuk waktu perdarahan. Daerah bagian otot dari menggunakan hemositometer. Hasil digandakan diperiksa dengan
permukaan Volar lengan bawah, 5 cm di bawah lipatan dalam siku pemeriksaan trombosit pada Pap Wright / Giemza ternoda.
○ Bersihkan daerah dengan alkohol swab dan biarkan kering
○ Tempatkan manset tekanan darah pada lengan pasien di atas siku.  Spesimen: Whole blood (1 mL), menggunakan EDTA sebagai antikoagulan
Pompa sampai 40 mmHg dan tahan tekanan ini tepat untuk
seluruh prosedur.  Reagen dan peralatan
○ Tusuk dengan lancet kira-kira 3 jari dari lipatan siku ○ Rees-Ecker (untuk mencairkan trombosit
○ Hidupkan stopwatch saat darah mulai keluar ▪ Sodium sitrat 3,8 g

BLOK 9 Page 1
 ○ Tempatkan manset tekanan darah pada lengan pasien di atas siku.
Pompa sampai 40 mmHg dan tahan tekanan ini tepat untuk
seluruh prosedur.  Reagen dan peralatan
○ Tusuk dengan lancet kira-kira 3 jari dari lipatan siku ○ Rees-Ecker (untuk mencairkan trombosit
○ Hidupkan stopwatch saat darah mulai keluar ▪ Sodium sitrat 3,8 g
○ Hisap darah dengan kertas saring setiap 30 detik ▪ Brilliant cresyl biru 0,1 g
▪ Formaldehid 40% 0,2 mL
○ Hentikan stopwatch pada waktu darah tidak dapat diisap lagi dan
▪ Air suling 100 Ml
catat waktunya
○ Pipa eritrosit
 Interpretasi Hasil ○ Hemositometer
○ Normal : 3-6 menit ○ Obyek kaca, wright/giemsa stain
○ Mikroskop
 Metode duke : tidak ada pembendungan ○ Cawan petri
○ Kertas saring

 Prosedur
HEMOGLOBIN
A. Metode Cyanmethemoglobin
 Prinsip
Seluruh darah ditambahkan ke reagen Cyanmethemoglobin (HiCN).
Kalium ferricyanide di reagen mengubah besi ferro (Fe2+) ke besi ferri
(Fe3+) untuk membentuk methemoglobin (Hi) yang kemudian dengan
potasium sianida membentuk pigmen yang stabil, Cyanmethemoglobin
(HiCN).
○ Mengambil darah sampai tanda 0,5 dengan pipet thoma, lalu pipet
rees ecker sampai tanda 101 sehingga membuat 1:200 pengenceran
darah
○ Homogenkan dengan cara menggoyangkannya kedepan dan
kebelakang
○ Kemudian teteskan pada ruang hitung dalam 2 kotak besar untuk
trombosir diberi label W
○ Diamkan selama 3 menit
○ Lihat pada mikroskop dengan perbesaran 10X untuk melihat lapang
pandang; 40X untuk menghitung trombosit
○ Hitung jumlah trombosit/L dengan rumus:

 Spesimen
Whole blood, menggunakan EDTA sebagai antikoagulan.

 Reagen dan alat

○ Cyanmethemoglobin/reagen drabkin,berisi
- Potasium sianida (50 mg)  Nilai normal : 150.000 - 450.000/mL darah
- Potasium ferricyanide (200 mg)
- Potasium dihidrogen fosfat (140 mg)  Keadaan trombosit meningkat: autoimun disease, neoplasma
- Detergen non ionik (1 mL) mieloproliferatif kronis
 Keadaan trombosit menurun: anemia, leukimia, infeksi virus
○ Tabung uji
○ Pipet
○ Spektrofotometer (540 nm)

 Prosedur
PERHITUNGAN RETIKULOSIT
○ Blanko: isi reagen drubkin 5 ml
○ Sampe: isi reagen drubkin 5 ml + sampel darah 20 uL,
 Tahap perkembangan sel darah merah
homogenkan
Sel pronormoblast, normoblast basofilik, normoblast orthochromic,
○ Diamkan 3 menit
retikulosit, dan sel darah merah matang
○ Spektrofotometer 540 nm
 Jumlah retikulosit merupakan alat diagnostik yang penting. Karena
!! Rumus : (abs.sampel - abs.blanko) x faktor 36,8 merupakan cerminan dari jumlah produksi sel darah merah yang efektif
! Blanko > sampel → langsung abs.blanko x 36,8 terjadi di sumsum tulang
B. Metode Sahli  Prinsip
Setelah normoblast orthochromic kehilangan intinya, sejumlah kecil RNA
 Prinsip
tetap dalam sel darah merah, dan sel ini dikenal sebagai sebuah
Hemoglobin darah diubah menjadi asam hematin dengan bantuan retticulocyte. Untuk mendeteksi keberadaan RNA, sel-sel darah merah
larutan HCl, lalu kadar asam hematin diukur dengan pengenceran harus ternoda saat mereka masih hidup. Proses ini disebut pewarnaan
sambil membandingkan warna yang terjadi dengan warna standar supravital.
memakai mata biasa.
 Reagen dan peralatan
 Tujuan ○ Larutan metilen biru yang baru
Menetapkan kadar hemoglobin ▪ Metilen biru yang baru 1.0 g
▪ Sodium klorida 0,89 g
 Alat
▪ Air suling 100 mL
○ Gelas berwarna sebagai standar
○ Brilliant cresyl biru
○ Tabung hemometer, dengan pembagian skala putih 2 sampai ▪ Brillian cresyl biru 1,0 g
dengan 22, sedangkan skala merah untuk hematokrit ▪ Natrium klorida 0,85% 99 mL
○ Pengaduk gelas
○ Kaca slide
○ Pipet sahli volume 20 uL
○ Tabung mikrohematokrit
○ Pipet pasteur
○ Tabung uji kecil
○ Kertas saring
○ Mikroskop
 Reagen
 Spesimen
○ Larutan HCl 0,1 N
Whole blood (1 mL), menggunakan EDTA sebagai antikoagulan
○ Akuades
 Prosedur
 Prosedur ○ Masukkan ke dalam tabung reaksi 3 tetes larutan zat warna BCB atau
○ Tabung hemometer diisi dengan HCl sampai garis 2

BLOK 9 Page 2
 ○ Larutan HCl 0,1 N
Whole blood (1 mL), menggunakan EDTA sebagai antikoagulan
○ Akuades
 Prosedur
 Prosedur ○ Masukkan ke dalam tabung reaksi 3 tetes larutan zat warna BCB atau
○ Tabung hemometer diisi dengan HCl sampai garis 2 NMB yang telah saring.
○ Tambahkan sampel darah 20 uL ○ Tambahkan darah yang akan diperiksa dalam jumlah sama banyak (3
○ Diamkan 3-5 menit untuk pembentukan asam hematin tetes)
○ Tambahkan akuades(pengenceran) sampai warna berubah dan ○ Dicampur baik-baik, lalu ditutup dan diinkubasi pada 37oC selama
sama dengan warna standar 30 – 60 menit
○ Setelah diinkubasi, campurkan lagi kemudian diambil 1 tetes untuk
dibuat apusan
 Nilai normal ○ Dibiarkan kering diudara, tak boleh difiksasi atau dipulas tanding
○ Laki-laki : 14-18 g/dl ○ Diperiksa dibawah mikroskop.
○ Perempuan : 12-16 g/dl ○ Hitung retikulosit menggunakan rumus

 Rumus

Retikulosit = % dalam 1000 sel darah merah/ 10

RBC COUNT
 Nilai normal retikulosit: 0,5% - 1,5% dari jumlah eritrosit

 Prinsip
Darah keseluruhan diencerkan dengan cairan isotonik untuk
memudahkan perhitungan dan mencegah lisisnya sel darah merah
MORFOLOGI DARAH TEPI
 Reagen dan peralatan
○ Thoma merah  Alat dan reagen
○ Solusi hayem (count merah menipiskan cairan) ○ Kaca Slide/Objek Glass
▪ Sodium sulfat 2,4 g ○ Metanol
▪ Sodium klorida 0,5 g ○ Giemsa
▪ Merkuri klorida 0,25 g ○ Phosphat buffer saline
▪ Aquades 100 mL ○ Mikroskop
○ Mikroskop ○ Minyak Emersi
○ Kasa bersih
○ Hemositometer & kaca penutup  Spesimen
Whole blood, menggunakan dipotassium ethyIene diaminetetraacetic
 Spesimen asam (EDTA) sebagai antikoagulan
Whole blood, menggunakan EDTA atau heparin sebagai antikoagulan
 Prosedur
 Prosedur Apusan harus diperiksa di bawah daya yang rendah untuk menilai
○ Mengambil darah sampai tanda 0,5 dalam pipet hitungan dan kualitas dari persiapan, jumlah dan distribusi, dan pewarnaan sel, serta
encerkan sampai tanda 101 dengan hayem solution, sehingga untuk mencari daerah di mana sel-sel merah yang merata dan tidak
membuat 1:200 pengenceran darah terdistorsi.
○ Campur darah yang telah diencerkan selama 3 menit
○ Bersihkan ruang penghitungan ERITROSIT
○ Mengisi ruang hitung
○ Amati sel darah merah menggunakan mikroskop  Pada penyakit, kelainan pada sel darah merah berasal dari empat
○ Hitung jumlah RBC penyebab utama:
○ Abnormal eritropoiesis
 Rumus ○ Tidak memadai sintesis hemoglobin
○ Kerusakan pada sel setelah meninggalkan sumsum tulang
○ Upaya oleh sumsum tulang untuk mengkompensasi anemia dengan
mempercepat eritropoiesis.

 Yang diperiksa pada pemeriksaan darah tepi sel darah merah

○ Ukuran dan bentuk
○ Relatif isi hemoglobin
 Nilai normal ○ Polychromatophilia
Wanita : 3,6 - 5,6 x 1012/L ○ Inklusi
Pria : 4,2 - 6,0 x 1012/L ○ Pembentukan rouleaux atau aglutinasi
Bayi baru lahir: 5,0 - 6,5 x 1012/L
 Berdasarkan ukuran
 Kesahalan umum yang terjadi ○ Anisocytosis: variasi dalam ukuran. Ini adalah penemuan yang
○ Jumlah darah yang dihisap ke dalam pipet tidak tepat umum dan tidak spesifik
○ Memakai pipet basah ○ Normositik: ukuran normal. Mean diameter sel (MDC) = 7,2 im
○ Terjadinya gelembung udara dalam pipet pada waktu menghisap ○ Makrositik: lebih besar dari biasanya. Mungkin menunjukkan
darah/larutan pengencer perubahan megaloblastik atau retikulositosis
○ Terjadinya bekuan darah karena lambat bekerja ○ Mikrositik: lebih kecil dari biasanya. Anemia mikrositik termasuk
○ Pengocokkan darah tidak sempurna defisiensi Fe dan talasemia
○ Cairan terbuang sedikit pada waktu mencabut karet penghisap
○ Kamar hitung/kaca penutup kotor  Berdasarkan warna
○ Meja mikroskop tidak horizontal ○ Normokromik: warna sel normal (pucat di tengah lebar
○ .Kaca penutup tergeser karena disentuh dengan lensa mikroskop ○ Hipokromik: kurangnya warna (pucat >1/3 rd lebar). Defisiensi Fe
○ Menghitung leukosit memakai lensa objektif 10 x sehingga kurang adalah yang paling umum tetapi tidak satu-satunya penyebab
teliti hasilnya ○ Polychromasia: warna biru abu-abu. Mencerminkan adanya
retikulosit yang mengandung RNA basofilik
 Keadaan dimana eritrosit meningkat: polisitemia, anemis akibat

BLOK 9 Page 3
 ○ .Kaca penutup tergeser karena disentuh dengan lensa mikroskop
○ Menghitung leukosit memakai lensa objektif 10 x sehingga kurang
teliti hasilnya
 Keadaan dimana eritrosit meningkat: polisitemia, anemis akibat
perdarahan, berada di dataran tinggi
 Keadaan dimana eritrosit menurun: anemia
HEMATOKRIT (HCT)
 Prinsip
Whole darah disentrifugasi untuk kemasan sel darah merah
maksimum. Ruang yang ditempati oleh sel-sel darah merah diukur dan
dinyatakan sebagai persentase dari volume darah.
 Metode: Mikrohematokrit
 Spesimen
Whole blood, menggunakan EDTA sebagai antikoagulan.
 Reagen dan peralatan
○ Tabung Mikrohematokrit, yang berukuran sekitar 75 mm dengan
lubang bagian dalam sekitar 1,2 mm
○ Seperti tanah liat darah penyegelan tabung mikrohematokrit
○ Mikrohematokrit centrifuge
○ Tabung pembaca mikrohemtokrit
 Prosedur
○ Masukkan darah ke tabung mikrohematokrit sampai memenuhi
dua pertiga tabung
○ Tutup salah satu ujung tabung dengan bahan tanah liat
○ Sentrifugasi kecepatan 13.000 rpm selama 7 menit
 Nilai normal
Laki-laki: 40-48%
Perempuan: 37-43%
 Kesalahan yang mungkin terjadi
○ Penggunaan antikoagulan lebih dari kadar 1,5 mg/mL darah
mengakibatkan eritrosit mengerut sehingga nilai hematokrit akan
rendah.
○ Bahan pemeriksaan (specimen) yang ditunda lebih dari 6 jam akan
meningkatkan nilai hematokrit
○ Spesimen darah yang tidaka dicampur hingga homogeny sebelum
pemeriksaan dilakukan
○ Pemakaian mikro-sentrifuse dalam waktu lama mengakibatkan
alat menjadi panas sehingga dapat mengakibatkan hemolisis
 Keadaan klinis hematokrit meningkat: dehidrasi, polisitemia
 Keadaan klinis hematokrit menurun: anemia
BLOK 9 Page 4
○ Hipokromik: kurangnya warna (pucat >1/3 rd lebar). Defisiensi Fe
adalah yang paling umum tetapi tidak satu-satunya penyebab
○ Polychromasia: warna biru abu-abu. Mencerminkan adanya
retikulosit yang mengandung RNA basofilik
 Relatif shape
○ Poikilocytosis: Variasi dalam bentuk. Panjang non spesifik. Mungkin
mencerminkan dyserythropoiesis atau kerusakan pada sirkulasi sel.
○ Ovalocytosis: berbentuk oval atau telur, misalnya keturunan
ovalocytosis. Macrocytes oval fitur pada anemia megaloblastik
○ Elliptocytosis: Sel adalah elips (berbentuk cerutu), misalnya
keturunan elliptocytosis. "sel pensil " terlihat pada defisiensi Fe
○ Sferositosis: keturunan bulat atau akibat dari kerusakan sel,
misalnya luka bakar hemolisis, kekebalan atau sepsis
○ Schistocytosis: fragmentasi (fragmen kurang dari setengah volume
sel merah normal), misalnya kerusakan mekanis
○ Stomatocytes: sel memiliki celah-seperti daerah pucat pusat,
misalnya keturunan jenis, penyakit hati dan sindrom Rhnull.
○ Sasaran sel: patri daerah Pusat. Relatif kelebihan membran
terhadap isi sel. Penyakit hati, Hb-pathies
○ Sel tear drop: pear berbentuk memanjang dengan titik tunggal atau
ekor. Fitur ekstra-medullar eritropoiesis
○ Helm Sel / Sel Bite: satu permukaan yang tidak teratur dengan
proyeksi penunjuk (tanduk) pada satu atau kedua ujungnya
○ Sickle cell: sel merah berbentuk sabit, karakteristik penyakit sel
sabit, misalnya HbSS, HbSC, HbSD
LEUKOSIT
 Leukocytes shift (pergeseran leukosit). Istilah left to the shift dan shift to
the right mengacu pada tingkat Iobulatio neutrofil.
○ Basofil : 0-1 %
○ Eosinofil : 1-3%
○ Neutrofil batang : 2-6%
○ Neutrofil segmen: 50-70%
○ Limfosit: 20-40%
○ Monosit: 2-8%
TROMBOSIT
 Perkiraan jumlah
 Pemeriksaan untuk kelainan morfologi
IMMUNOCHROMATOGRAPHY (ICT)
 Uji aliran lateral juga dikenal sebagai uji imunokromatografi aliran lateral,
adalah alat uji sederhana yang dimaksudkan untuk mendeteksi ada (atau
tidak adanya) analit target (antigen atau antibodi) dalam sampel (matriks)
tanpa memerlukan peralatan khusus dan mahal.
 Tes lain yang menggunakan metode ICT:
○ Rapid HbsAg
○ Rapid anti HIV
○ Rapid IgG-IgM Dengue
○ Rapid anti HCV
○ Tes Urin narkoba
 Prinsip
Tes kualitatif menggunakan two site sandwich immunoassay.
 Interpretasi Hasil
○ Negatif: hanya timbul satu garis berwarna merah pada kontrol
○ Positif: timbul 2 garis merah (satu pada kontrol dan satu pada tes)
○ Invalid: tidak ada garis merah pada kontrol maupun tes atau ada
garismerah pada tes tetapi tidak ada pada kontrol _ ulangi tes dengan
striptes yang baru