PEMERIKSAAN

HEMATOLOGI
 Pemeriksaan Hemoglobin
(Sianmethemoglobin)

Prinsip:
• Pengenceran darah ke dlm larutan yang
mengandung kalium sianida & kalium ferisianida
• Semua Hb kecuali sulfhemoblobin diubah menjadi
hemiglobinsianida (HiCN)
• resapan larutan (HiCN) ini diukur dgn spektrofotometer
pada panjang gelombang 540 nm
 1. HEMOGLOBIN concentration
Siapkan 2 tabung (Cyanmethemoglobin)
1. Cuci dg pipet 3-5 x
reagensia
5.0 ml 2. Campur
+ Reagen 20 uL
+ Darah
3. Diamkan pd temp kamar
(3 menit)
HiCN utuh

Tube 1 2 baca

Baca dg
Tube 2 spektrofotometer
1 540 nm

5.0 ml Set OD at 0.0

+ Reagen catat
HiCN Dipakai sbg
3
blangko

OD
Tube 2
Hb g/dl
Kurve standard kadar Hb
(Cyanmethemoglobin)
 3. Hitung jumlah eritrosit

• Prinsip:
Untuk menghitung & mencegah eritrosit
lisis, darah utuh diencerkan dengan
larutan pelarut isotonik
Bilik hitung (hemositometer)
IMPROVED NEUBAUER counting chamber

E E
R

E
R

ER R
E
Tidak
dihitung
 PEMERIKSAAN HEMATOKRIT (Hmt)

• Nilai hematokrit adalah :

Besarnya volume sel2 eritrosit seluruhnya didlm 100 mm3
darah & dinyatakan dalam %.

• Prinsip pemeriksaan :
Darah dgn antikoagulan diputar / disentrifuge 15.000 rpm
selama 5 menit, kemudian dibandingkan panjang kolom
merah dgn kolom total

• Terdapat 2 metoda pemeriksaan :

1. Makro Hematokrit tabung Wintrobe
2. Mikro Hematokrit tabung kapiler
 Hematokrit/Hct
(microhematocrit method)

 Prinsip:
– Darah utuh disentrifus untuk mendapatkan mampatan
eritrosit. Mampatan eritrosit tsb diukur & disajikan dlm %
sebagai hematokrit/packed red cells

Ditutup/disumbat dg ‘lilin’
/sabun padat
Plasma

Buffy trombosit
coat
lekosit
disentrifus
(5 menit)
eritrosit

Letakkan darah utuh Packed red cell /hct/hmt diukur

Ke dlm tabung mikrohematokrit dgn microhematocrit tube reader
 MIKRO HEMATOKRIT

Alat :
- Alat untuk memperoleh drh vena / kapiler
- Pipet Hematokrit : Panjang 7,5 cm
Diameter 1,2 mm
- Lampu spiritus / vaselin
- Sentrifuge yg dpt memutar dgn kecepatan 6.000 rpm
- Skala pembaca hematokrit

Reagensia :
Heparin (biasanya sdh melapisi lumen pipet kapiler Hmt)

Bahan :
Darah vena / darah kapiler
Cara pemeriksaan :
Bila menggunakan darah kapiler :

1. Lakukan pengambilan drh kapiler

2. Isi tabung kapiler dgn drh

sampai ¾ tabung

3. Bakar ujung tabung dgn

lampu spiritus atau
disumbatdgn vaselin, hingga
benar-benar tertutup
4. Sentrifuge dgn kecepatan
15.000 rpm selama 5 menit
Ujung tabung yang disumbat,
diletakkan disisi luar

5. Baca dgn skala Hematokrit

panjang kolom merah

Bila tdk punya skala Hmt

dipakai perhitungan :

Hmt = Panjang kolom merah x 100 %

Panjang total kolom
 Microhematocrit tube reader
(Microhematocrit tube reading device)
 %

Hmt (%)
 Keuntungan
mikrohematokrit :
• Cepat, mudah
• Kesalahan lebih kecil
• Volume drh lebih sedikit

Sumber kesalahan : Nilai rujukan menurut Dacie :

• Sentrifuge tdk benar Pria : 47 ± 7%

Wanita : 42 ± 5%
• Lupa mengocok sampel
Bayi baru lahir : 54 ± 10%
• Penutupan ujung kapiler tdk 3 bulan : 38 ± 6%
rapat 3 – 6 bulan : 40 ± 4-5%
• Antikoagulan tdk tepat 10-12 tahun : 41± 4%
• Tabung kapiler tdk tertera
PEMERIKSAAN JUMLAH TROMBOSIT APUSAN

• Pre analitik
Pemeriksaan jumlah trombosit
• Obyek glass harus bersih dari kotoran, air,
dan lemak
• Sesegera mungkin membuat apusan
setelah mengambil darah (tidak boleh
ditunda), krn trombosit mudah & cepat
adesi dan agregasi
• Terlambat : juml trombosit turun
• Hindari kelembaban
• Apusan ta. daerah kepala, badan, dan ekor
• Periksa di daerah ideal
 Pemeriksaan jumlah trombosit

Pre analitik

• Pengecatan sesuai aturan, terutama waktu fiksasi

(lihat cara kerja)
• Cat kotor  sebelumnya disaring lebih dahulu
terutama apabila larutan cat hampir habis
• Cat kotor (dlm bentuk preparat apus), cara
membersihkan:
– Genangi preparat apus dengan cat beberapa
saat (dalam detik) kemudian bersihkan cat tsb
dgn cara meneteskan air perlahan sambil
obyek glas dimiringkan
 Pemeriksaan jumlah trombosit

Pre analitik

• Indikator pengecatan yang baik  lihat

granula eosinofil:
– Baik : berwarna merah/oranye
kecoklatan
– Kurang baik : terlalu merah/oranye
menyolok (terlalu asam) atau abu-
abu (terlalu basa)
 Darah kapiler
Tanpa antikoagulan

Agregasi trombosit

Darah vena
Tanpa antikoagulan

agregasi trombosit
ringan
 Cara Kerja
• Buat apusan darah tepi dengan pewarnaan Giemsa
• Periksa di bawah mikroskop (100x) dg minyak imersi
• Cari area ideal (daerah badan dekat ekor), eritrosit
tidak mengelompok, tersebar sendiri-sendiri dgn area
kepucatan di tengah
• Amati trombosit
• Hitung trombosit sampai 20 lapang pandang (lp) dan
jumlahkan
• Hitung dengan rumus N dlm 20 lp x 1000
• N = trombosit yang terhitung
• Satuan: mmk
 Cara penghitungan jumlah trombosit metode apusan darah tepi

N dlm 20 lp x 1000

N = juml trombosit
terhitung dlm apusan

lp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

 5 6 4 6 8 9 7 8 9 5 8 9 6 7 8 6 9 8 9 7
n = 5+6+4+6+8+9+7+8+9+5+8+9+6+7+8+6+9+8+9+7 = 144

Jumlah trombosit = 144 x 1000 = 144.000/mmk

 PEMERIKSAN TROMBOSIT
dengan bilik hitung

Cara kerja :

 Pipetlah darah dengan pipet eritrosit sampai

tanda 0,5 & encerkan dgn larutan pengencer
sampai tanda 101 (pengenceran 200 x)

 Mulai saat ini trombosit harus selesai dihitung

dlm waktu 30 menit agar tidak terjadi disintegrasi
sel-sel trombosit.
 Kocoklah pipet tsb 3 –5 menit.
Bersihkan bilik hitung
 Siapkan cawan petri, bgn dlm dasar & tutupnya
ditempeli kertas yg ukurannya sama &
sebelumnya telah dibasahi air.
 Setelah pipet tsb dikocok, buanglah 4 tetes pertama
& tetesan ke 5 isikan ke dlm bilik hitung. Masukkan
bilik hitung tsb ke dlm cawan petri yg telah
disiapkan tadi. Biarkan selama 15 menit, agar
trombosit mengendap & tdk terjadi penguapan.

 Letakkan bilik hitung di bawah mikroskop dgn

pembesaran 10x obyektif & kemudian perbesar 40x,
trombosit tampak refraktil & mengkilat berwarna
biru muda / lila lebih kecil dr eritrosit serta
berbentuk bulat, lonjong atau koma tersebar atau
bergerombol. Hitunglah semua trombosit dlm kedua
kotak besar pada sudut bilik.

 Metode tabung: pipet diganti dengan tabung,

pengenceran sama
 BILIK HITUNG IMPROVED NEUBAUER trombosit

Luas seluruh bilik terdapat :

• Kotak besar : 1 x 1 mm2

• Kotak sedang ada 2 macam:

Ditengah : 1/5 x 1/5 mm2
Diempat sudut: ¼ x ¼ mm2

• Kotak kecil : 1/20 x 1/20 mm2

Tinggi / dalam : 0,1 mm

• Kotak sedang
Leukosit (1,3,7,9) : ¼ x ¼ mm2
Eritrosit (%) : 1/5 x 1/5 mm2

trombosit
 PERHITUNGAN

Hitung trombosit / mmk =

Jumlah sel yg dihitung

= x pengenceran
Volume kotak yg dihitung

Jumlah sel yg dihitung

= x 200
2 x 1 x 1x 0,.1
= jumlah sel yg dihitung x 1.000 /mmk