Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi 2017; 5 (2): 1211-1218
E-ISSN: 2320-7078
P-ISSN: 2349-6800
JEZS 2017; 5 (2): 1211-1218
© 2017 JEZS
Diterima: 10-01-2017
Diterima: 11-02-2017
Program Magister
Melissa Palma-Jiménez
di Universitas Kosta Rika. San
Pedro de Montes de Oca, San
José, Kosta Rika
Departemen Agronomi
Mónica Blanco-
Meneses , CIPROC,
Laboratorium Fitopatologi
Molekuler, Universitas Kosta
Rika. San Pedro de Montes de
Oca, San José, Kosta Rika
Korespondensi
Program Magister
Melissa Palma-Jiménez
di Universitas Kosta Rika. San
Pedro de Montes de Oca, San
José, Kosta Rika
Identifikasi morfologi dan molekuler dari
Dysmicoccus brevipes (Hemiptera: Pseudococcidae)
di Kosta Rika
Melissa Palma-Jiménez dan Mónica Blanco-Meneses
Abstrak
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi spesies kutu putih dari Rebusca Farm di
Sarapiquí, Kosta Rika. Mikroskop cahaya dan analisis molekuler dilakukan. Analisis mikroskopis dilakukan
di Pusat Penelitian Struktur Mikroskopik, dan analisis molekuler dilakukan di Laboratorium Fitopatologi
Molekuler, di Universitas Kosta Rika. Setelah dianalisis serangga, dimungkinkan untuk mengaitkannya
dengan spesies Dysmicoccus brevipes Cockerell, karena: morfologi tubuh, bagian mulut, segmen antena,
adanya pori-pori tembus pandang, deskripsi kaki belakang, ostioles, circulus dan cerarii. Dalam data
molekuler, hit BLAST dari GenBank mengungkapkan kesamaan antara 92-100% dengan spesies D.
brevipes dengan gen yang dipelajari (18S, EF-1ÿ dan COXI).
Sampai saat ini, spesies ini telah dikaitkan dengan tanaman nanas. Studi ini membuktikan risiko OPT
untuk menyebar dan mencari inang lain untuk makanan.
Kata kunci: Amerika Tengah, Musa sp., taksonomi, gen nuklir, gen ribosom, gen mitokondria
1. Perkenalan
Mealybugs adalah serangga kecil bertubuh lunak yang ditutupi dengan lapisan tepung halus, yang
sering memanjang ke lateral membentuk serangkaian filamen pendek [1]. Mereka termasuk dalam
famili Pseudococcidae, salah satu dari sekitar 20 famili dalam superfamili serangga skala Coccoidea.
Tiga dari genus kutu putih terbesar: Pseudococcus Westwood; Trionymus Westwoodia dan
Dysmicoccus Williams, termasuk di sini [2].
Kutu putih Dysmicoccus sp. dianggap sebagai ancaman utama bagi produksi pertanian secara umum
[3]. Hal ini mempengaruhi nilai estetika tanaman, menyebabkan layu, produk transmisi patogen dan/
atau racun selama makan. Ini juga bisa menjadi masalah serius karena cara penyebarannya dan
kondisi ekologi yang berlaku [4].
Menurut Carter (1932) [5], kutu putih spesies Dysmicoccus brevipes Cockerell, sebelumnya disebut
sebagai Pseudococcus brevipes, berasal dari Amerika tropis, dan telah menyebar ke semua wilayah
zoogeografis, terutama di daerah tropis dan subtropis [6]. Ini mungkin salah satu kutu putih paling
umum di Amerika Tengah dan Selatan [7].
Ada sejumlah spesies dalam genus Dysmicoccus , tetapi D. brevipes adalah yang paling mirip
dengan D. neobrevipes Beardsley, asli Amerika tropis dan memiliki distribusi pantropis, dengan
sejumlah kecil catatan dari daerah subtropis atau Mediterania [8]. Hal ini diketahui telah diperkenalkan
ke Cina, Jepang, Sri Lanka dan Lithuania [9]. Beardsley (1992) [10] mengumpulkan beberapa sampel
di Hawaii dan oleh karena itu, ia dapat mendefinisikan mereka sebagai dua spesies terpisah, bentuk
merah muda (D. brevipes) dan bentuk abu-abu (D. neobrevipes).
Distribusi kutu putih ini di negara-negara tropis telah dipelajari. Di Kosta Rika, kutu putih ini terdapat
di berbagai tanaman inang, antara lain: nanas, kopi, tebu, padi, palem, pisang raja, dan pisang [1].
Khususnya di perkebunan pisang, Dysmicoccus sp. telah dilaporkan di beberapa negara produsen.
Kondo dkk. (2008) [11] mengidentifikasi Dysmicoccus (neobrevipes, brevipes dan texensis Tinsley,
di perkebunan Kolombia. Sementara itu Blanco et al. (2002) [12] mengidentifikasi Dysmicoccus
(alazon Williams; bispinosus Beardsley dan brevipes) di Kuba. Williams dan Matile- Ferrero [13]
melaporkan Dysmicoccus (brevipes dan grassii Leonardi) di perkebunan pisang di Ethiopia.Navasero
[14] melaporkan di Filipina D. neobrevipes dan D. brevipes Beardsley.
Fernandez dkk. (2001) [15] mengidentifikasi D. grassi di Las Palmas, Kepulauan Canary. Di
Mindanao, Filipina mengidentifikasi spesies D. neobrevipes [16].
~ 1211 ~
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi
Di perkebunan pisang komersial Sri Lanka ditemukan terinfestasi dan
kebun rumah skala kecil ke kutu putih D. neobrevipes [4]. Sirisena dkk.
(2013) [17], menyebutkan bahwa D. neobrevipes adalah introduksi yang
tidak disengaja baru-baru ini di Sri Lanka dan tingkat infestasinya pada
pisang tergolong tinggi.
D. neobrevipes dan D. brevipes dapat saling membingungkan karena
morfologi eksternal yang serupa. Karakteristik seperti: pori-pori diskoid
dekat mata, pori-pori multilokular ventral terbatas pada segmen VI, VII
dan VIII, pori-pori tembus pandang pada femur belakang dan tibia, dan
tidak adanya duktus tubulus oral rim, dimiliki bersama [1].
Pada D. neobrevipes sklerotisasi ventral lobus anal memanjang,
sedangkan pada D. brevipes area ini berbentuk persegi.
Beardsley (1992) [10] juga mencatat bahwa D. brevipes memiliki
beberapa setae panjang di kedua sisi sumbu mid-dorsal segmen perut
VIII, yang berkisar antara 45-80 m, sedangkan pada D. neobrevipes
setae terpanjang di daerah ini panjangnya sekitar 15 m, tidak lebih
panjang dari setae dorsal lainnya [9].
Penulis Yan-Biao et al. (2014) [18] menjelaskan bahwa sklerotisasi
ventral lobus anal dan panjang setae pada
dorsum abdomen, merupakan ciri utama yang digunakan untuk
membedakan D. neobrevipes dari D. brevipes. Namun, tidak selalu
mudah untuk mengidentifikasi. Kondo dkk. (2008) [11]
menyebutkan pentingnya spesialis serangga skala.
Identifikasi dan klasifikasi serangga yang benar, merupakan langkah
awal dalam mengembangkan metode pengendalian [19]. Itulah sebabnya
penggunaan penanda DNA menjadi strategi paling umum untuk
mengukur perbedaan antara spesies dari genus yang sama dan antar
populasi. Di antara penanda molekuler yang digunakan dalam studi
serangga, disebutkan gen ribosom, nuklir dan mitokondria [20]. Informasi
fauna daerah penting untuk membandingkan dan membedakan ada
tidaknya spesies kutu putih [21].
Hubungan antara garis keturunan molekuler dalam spesies D. brevipes
mengungkapkan pola biogeografis mereka sendiri. Membandingkan
urutan molekul D. brevipes, disarankan bahwa spesies ini di dalam
genus Dysmicoccus mungkin memiliki kompleks, yang mencakup garis
keturunan samar [18].
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari morfologi dan
melakukan analisis molekuler kutu putih Dysmicoccus
Tabel 1: Informasi primer yang digunakan untuk amplifikasi PCR dari: 18S ribosom, Nuclear Elongation Factor 1ÿ (EF-1ÿ) dan mitokondria sitokrom c oksidase
subunit I (COXI).
gen Primer Urutan primer
18S-2880 CTGGTTGATCCTGCCAGTAG
18S
18S-B CCGCGGCTGCTGGCACCAGA
EF EF-1_M51.9 CACATYAACATTGTCGTSATYGG
1ÿ 5' EF-1_rcM53-2 CTTGATGAAATCYCTGTGTCC
C1-J-2183 CAACATTTATTTTTGATTTTTTGG
COXI
C1-N-2568 GCWACWACRTAATAKGTATCATG
Untuk semua reaksi PCR, larutan 1x (ul) digunakan: 13,5 L H2O, 2,5 L
buffer (10x), 2 L dNTPs (2 mM), masing-masing 1,5 L untuk setiap
pasangan primer (10ÿ M), 0,3 L Dream Taq polimerase (5/ÿL) menjadi
23 L master mix per tabung eppendorf, semua reagen Fermentas, dan
terakhir menambahkan 2 L DNA (10 g/mL). Reaksi amplifikasi dilakukan
menggunakan profil termal berikut: predenaturasi awal pada 94
°C selama 4 menit, diikuti oleh 30 siklus denaturasi pada 94 °C selama
1 menit, annealing selama 1 menit pada suhu yang ditentukan di setiap
pasangan primer (Tabel 2), pemanjangan rantai pada 72 °C selama 1
menit dan 30 detik, diikuti dengan perpanjangan akhir pada 72 ° C selama 4
~ 1212 ~
brevipes tanaman pisang (Musa sp.) dari pertanian Rebusca di Sarapiquí,
Kosta Rika, Amerika Tengah.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1 Koleksi sampel Kutu
putih betina dari Musa sp. tanah di pertanian Rebusca, Sarapiquí,
provinsi Heredia dekat dengan wilayah Karibia dari Kosta Rika, Amerika
Tengah dikumpulkan pada tahun 2010.
Dua puluh kutu putih dikumpulkan dalam tabung Eppendorf 1,5 mL
dengan etanol 95%. Koordinatnya adalah: Lintang 10° 29'00.00"N dan
Bujur 84°01'00.00"O. Analisis morfologi dilakukan di Pusat Penelitian
Struktur Mikroskopik (CIEMic, akronim dalam bahasa Spanyol) pada
tahun 2012 dan analisis molekuler dilakukan di Laboratorium Fitopatologi
Molekuler di Pusat Penelitian Perlindungan Tanaman CIPROC (akronim
dalam bahasa Spanyol) Kosta Rika , berakhir pada tahun 2014, keduanya
di University of Costa Rica, San Pedro, Montes de Oca.
2.2 Pengamatan di bawah mikroskop cahaya
Sepuluh serangga diproses. Protokol yang dijelaskan oleh Williams dan
Granara de Willink (1992) [1] digunakan.
Untuk mengidentifikasi struktur tembus cahaya, serangga diperiksa
dengan peralatan mikroskop cahaya, menggunakan peningkatan 4x,
10x, 20x dan 40x dan difoto dengan mikroskop terbalik (model IX51,
Olympus Optical Co., Jepang).
Struktur yang dianalisis dengan mikroskop cahaya sesuai dengan yang
berikut: bentuk tubuh, jumlah segmen antena, pori-pori tembus pandang
di sekitar mata, bagian mulut dan stilet, deskripsi metacoxas (kaki
posterior) dan keberadaan
pori-pori tembus pandang, deskripsi sirkulus, ostium, duktus tubulus rim
oral, lobus anal dan cerarii.
2.3 Amplifikasi DNA genomik Protokol
oleh Murray dan Thompson (1985) [22] digunakan.
Satu serangga digunakan untuk setiap ekstraksi DNA. DNA genom yang
diekstraksi diamplifikasi dengan PCR. Awalnya, lima pasang primer
digunakan untuk mengamati mana yang memiliki polimorfisme yang
menarik dalam sub-sampel DNA ribosom, nuklir, dan mitokondria kutu
putih. Pada akhir pengujian, tiga pasang primer ini dipilih (Tabel 1).
Ukuran
Kondisi PCR Sumber utama
amplikon (bp)
94 °C, 4 menit; 30 menit 94 °C 1 menit, 67 °C 1 [20, 23]
673
menit, 72 °C 1 menit, 30 detik; 72 °C 4 menit
94 °C, 4 menit; 30 menit 94 °C 1 menit,
[23]
62 °C 1 menit, 72 °C 1 menit, 30 detik; 72 374
°C 4 menit 94 °C, 4 menit; 30 menit 94
°C 1 menit, 45 °C 1 menit, 72 °C 1
[20]
menit, 30 detik; 72 °C 4 menit 370
menit Reaksi dan kondisi siklus dilakukan dalam thermocycler otomatis
Eppendorf Mastercycler pro.
Produk PCR dipisahkan pada gel agarosa (agar + 0,5X buffer TBE).
Produk PCR dicerna dengan Exonuclease I (ExoI) dari Fermentas.
Sekuensing dilakukan pada produk PCR yang dimurnikan pada
konsentrasi 50 ng/ÿL oleh perusahaan Macrogen, Inc. (Korea Selatan).
2.4 Penjajaran urutan dan analisis filogenetik
Urutan di kedua arah diperoleh. Kualitas urutan dikonfirmasi dalam
penyelarasan dua arah dan oleh
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi

perbandingan kromatogram menggunakan program BioEdit Williams. Asal individu diverifikasi menurut tanaman inang dan
v7.0.5 [24]. Untuk menentukan spesies menurut hasil negara-negara: Amerika Serikat, Brasil, Cina, Afrika Selatan,
sekuensing, laporan GenBank sebelumnya digunakan [25]. India dan Prancis, yang sesuai dengan satu-satunya laporan
Semua urutan diselaraskan dengan program ClustalW versi sejauh ini dengan hubungan yang lebih baik menurut urutan
1.60 [26]. penelitian (Tabel 2). Analisis pohon filogenetik dilakukan
Untuk menguatkan variasi yang mungkin ada dalam populasi dengan menggunakan program MEGA versi 7.0 (Molecular
dari Kosta Rika, pengurutan diulang pada tiga individu yang Evolutionary Genetic Analysis) [27]. Sejarah evolusi disimpulkan
berbeda, kecuali gen mitokondria, dan dengan menggunakan metode Kemungkinan Maksimum (ML)
dibandingkan dengan pertandingan tertinggi di GenBank. Data berdasarkan model Tamura-Nei. Persentase pohon, di mana
hasil dilaporkan ke GenBank dan urutan disimpan di bawah taksa terkait mengelompok bersama, ditampilkan di sebelah
nomor aksesi: KP402186, KP402187 y KP402192. cabang (parameter acak 2000 ulangan). Pohon untuk pencarian
heuristik diperoleh secara otomatis dengan menerapkan
Untuk analisis filogenetik, urutan dimasukkan dari spesies yang algoritma Neighbor-Join dan BioNJ ke matriks jarak berpasangan
sebelumnya dilaporkan oleh GenBank untuk ketiga gen yang yang diestimasi menggunakan pendekatan Maximum Composite
dipelajari, seperti: Dysmicoccus brevipes, D. neobrevipes, D. Likelihood, dan kemudian memilih topologi dengan nilai
texensis, Pseudococcus viburni Signoret; dan kelompok luar kemungkinan log yang superior. Semua posisi yang
adalah: Planococcus minor Maskell, dan Phenacoccus baccharidis mengandung celah dan data yang hilang dihilangkan.

Tabel 2: Kutu putih yang digunakan untuk pembuatan pohon filogenetik: Spesies, tanaman inang, negara asal dan nomor aksesi GenBank.

Nomor aksesi GenBank EF-1ÿ

Jenis Tanaman Inang Negara Asal ribosom 18S COXI
* AY426037 - -
Dysmicoccus brevipes Amerika Serikat

* Cina JF965399 - -
D. brevipes D.
* Bolivia AY426046.1 - -
brevipes D.
brevipes Ananas comosus Malaysia KU891790.1 - -
* Cina JF965400.1 - -
Dysmicoccus neobrevipes
* U20429.1 - -
D. neobrevipes Amerika Serikat

Pseudococcus elisae Musa sp. Kosta Rika KX639737.1 - -

P. jackbeardsleyi Musa sp. Kosta Rika KT956119.1 - -
Planococcus minor** * Cina JF965404.1 - -
Dysmicoccus sp. Lechea sessiliflora Amerika Serikat
- AY427240.1 -
* - AY427227.1 -
D. brevipes Amerika Serikat: Hawaii
* AY427208.1
D. neobrevipes Amerika Serikat: Hawaii

Pseudococcus elisae Musa sp. Kosta Rika - KP402191.1 -

P. jackbeardsleyi Musa sp. Kosta Rika - KT956120.1 -

Planokokus kecil** *
Trinidad dan Tobago - EU25049.1 -
* - - EU267214,1
D.brevipes Amerika Serikat

* - - LC121502.1
D.brevipes Jepang
* - - EU267213.1
D.neobrevipes Amerika Serikat

* - - LC121499.1
D.neobrevipes Jepang
* Cina - - KJ187532.1
D.neobrevipes
Phenacoccus baccharidis** * Brazil - - KJ530632.1
Spesies tidak dilaporkan (*). Kelompok luar (**).

3. Hasil
3.1 Karakterisasi morfologi Hasil ini
sesuai dengan anatomi kutu putih yang dipelajari yang
dijelaskan melalui teknik mikroskop cahaya.
Tubuh: Bentuk tubuh sesuai dengan tipe oval lebar (2,2 x 2
mm) (Gbr. 1). Tubuh setae memiliki ukuran yang sama.
Pori-pori diskoid di tepi mata: Memiliki tiga pori di tepi mata
yang berhubungan dengan tepi sklerotik (Gbr. 1 F).
Circulus: Dibagi dengan garis antara segmen III dan IV (Gbr.
1 G).
Bar lobus anal: Tidak ada (Gbr. 1. H).

Duktus tubular rim oral: Tidak ada. Dicontohkan oleh daerah
kepala kutu putih, yang mana struktur ini diamati pada genus
lain dengan karakteristik yang sama seperti Pseudococcus
(Gbr. 1B).
Mulut: Tiga stilet diamati (Gbr. 1 C).
Pori-pori translucent di metacoxas: Terletak di dua bagian
metacoxas: femur dan tibia dengan banyak pori-pori tembus
(Gbr. 1. D).
Ostioles: Struktur khas ostium yang diamati adalah berbentuk
bibir dan memiliki pori-pori trilokular di dalamnya (Gbr. 1 H).
Cerarii: 17 pasang cerarii dihitung. Tercatat pola setae berflagel
mengelilingi setae berbentuk kerucut. Kehadiran dasar sklerotik
ringan di lobus cerarii annal disajikan. Selanjutnya, diamati
bahwa dasar cerarii lobus anal menyediakan dua setae
berbentuk kerucut (Gbr. 1 H) dan
anterior pada perut empat setae kerucut diamati dengan dasar
melingkar (Gbr. 1 I).

Antena: Delapan segmen diamati (Gbr. 1 E).

~ 1213 ~
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi

Gambar 1: Karakter morfologi dianalisis untuk mengidentifikasi kutu putih Dysmicoccus brevipes dari tanaman pisang dari pertanian Rebusca di Kosta Rika
dengan mikroskop cahaya. Kutu putih dikumpulkan pada tahun 2010. A. Tubuh serangga: tipe oval lebar dengan 17 pasang cerarii. B. Kepala wilayah. C. Mulut
dengan tiga stilet. D. Adanya pori-pori translucent pada femur dan tibia metacoxa, pori-pori translucent tidak pada trokanter. E. Antena dengan delapan segmen.
F. Tiga pori-pori tembus pandang di tepi mata yang terkait dengan tepi sklerotik. G. Membagi garis sirkulus pada ruas III dan IV.
H. Daerah posterior abdomen yang menunjukkan ostiole, cerarii C1-C3 dan tidak adanya anal bar (C1). I. Cerarii C2 dan C3 dengan empat setae berbentuk
kerucut.

3.2 Deskripsi molekul
Semua spesimen secara morfologis diidentifikasi sebagai
Dysmicoccus brevipes. Kami memperoleh hit BLAST dari urutan
GenBank; untuk gen 18S mengungkapkan kesamaan 100%
dengan D. brevipes dan 99% dengan D. neobrevipes; untuk gen
EF-1ÿ hit dengan kemiripan 95% adalah untuk D. brevipes dan
93% dengan D. neobrevipes; untuk COXI hits dengan kemiripan
95% adalah untuk D. neobrevipes dan 92% untuk D. brevipes.
Pada pohon filogenetik kemungkinan maksimum, wilayah
genomik ribosom 18S menunjukkan clade dengan taksa D.
singkatan CR 1, 2 dan 3 yang terkait dengan berikut:
spesies: D. brevipes (AY426037.1) dari Amerika Serikat, Bolivia
(AY426046.1), Cina (JF965399.1) dan Malaysia (KU891790.1)
hingga 89%. Clade lain dibentuk oleh spesies paling mirip yang
terkait dengan D. brevipes dalam penelitian kami: Pseudococcus
elisae Borchsenius dari Kosta Rika (KX639737.1), D. neobrevipes
dari AS (U20429.1) dan China (JF965400.1), dan Pseudococcus
jackbeardsleyi dari Kosta Rika (KT956119.1); yang dikelompokkan
berbagi bootstrap 60%. Planococcus minor (JF965404.1)
digunakan sebagai outgroup (Gbr. 2).

~ 1214 ~
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi

Gambar 2: Analisis Filogenetik Molekuler dengan metode Maximum Likelihood, dihitung dari jumlah selisih antar wilayah genom
ribosom 18S. Persentase pohon di mana taksa terkait mengelompok bersama ditampilkan di sebelah cabang (Nilai bootstrap 2000
ulangan). Planococcus minor (JF965404.1) digunakan sebagai outgroup.

Gambar 3 menunjukkan pohon filogenetik kemungkinan maksimum ke
wilayah genetik Faktor Pemanjangan-1ÿ. Clade dari 61% bootstrap
ditunjukkan. Ia memiliki groping yang dibentuk oleh D. brevipes CR 1,
yang memiliki hubungan bootstrap 96% dengan spesies P. elisae
(KP402191.1) dan P. jackbeardsleyi (KT956120.1), keduanya dari Kosta
Rika. Dismikokus sp. dari
USA (AY427240.1) dan D. brevipes CR 2 adalah bagian dari clade
bootstrap 61%. Hubungan 98% dengan D. brevipes CR
3 dan D. brevipes dari USA (AY427227.1) ditunjukkan. D. neobrevipes
(AY427208.1) dari USA tidak memiliki hubungan dalam pohon filogenetik.
Planokokus minor
(EU250499) digunakan sebagai outgroup.

Gambar 3: Analisis Filogenetik Molekuler dengan metode Maximum Likelihood, dihitung dari jumlah perbedaan antar wilayah genom
Faktor Perpanjangan-1ÿ. Persentase pohon di mana taksa terkait mengelompok bersama ditampilkan di sebelah cabang (Nilai bootstrap
2000 ulangan). Planococcus minor (EU250499) digunakan sebagai outgroup.

Pohon filogenetik kemungkinan maksimum untuk wilayah genom Spesies ini memiliki hubungan 99% dengan D. brevipes dari Jepang
mitokondria COXI menentukan bootstrap 58% untuk spesies D. brevipes (LC121502.1). Phenacoccus baccharidis
CR, terkait dengan D. neobrevipes dari AS (EU267214.1), Jepang (KJ530632.1) digunakan sebagai outgroup (Gbr. 4).
(LC121499.1) dan China (KJ187532.1) .

Gambar 4: Analisis Filogenetik Molekuler dengan metode Maximum Likelihood, dihitung dari jumlah selisih antara genomic region
mitokondria (COIX). Persentase pohon di mana taksa terkait mengelompok bersama ditampilkan di sebelah cabang (Nilai bootstrap 2000
ulangan). Phenacoccus baccharidis (KJ530632.1) digunakan sebagai kelompok luar.

4. Diskusi neobrevipes dalam literatur [28]. Membandingkan data molekuler yang

Analisis morfologi memungkinkan mengidentifikasi Dysmicoccus terdaftar di GenBank (2016) [25], nilai bootstrap yang berbeda
brevipes sebagai contoh penelitian. Sebuah hubungan dekat didirikan ditunjukkan pada tiga pohon filogenetik dari gen yang dipelajari. Filogeni
sesuai dengan deskripsi spesies D. menghubungkan spesies D.
~ 1215 ~
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi
brevipes dari Kosta Rika ke spesies D. brevipes dari wilayah geografis
lain dan kemiripan yang lebih sedikit terbukti berasosiasi dengan
spesies D. neobrevipes dari negara lain.
Hanya gen mitokondria (COXI) yang menunjukkan spesies D. brevipes
tidak berhubungan langsung dengan spesies penelitian.
Gen ribosomal 18S menunjukkan kesamaan 99-100% mengenai hit
terbesar dari spesies yang dilaporkan di GenBank. Spesies yang paling
terkait adalah: D. brevipes, D. neobrevipes, P. elisae, P. jackbeardsleyi,
P. viburni, Pseudococcus baliteu, antara lain. Hal ini membuktikan
rendahnya tingkat spesifisitas gen.
Persentase gen Elongation Factor 1ÿ menunjukkan perbedaan yang
besar pada tingkat genetik antara 89-95% identitas dengan spesies
yang dilaporkan di GenBank. Persentase ini mewakili 18-39 dasar yang
berbeda antara spesies penelitian dan yang ditemukan oleh alat Blast.
Dua haplotipe yang berbeda diidentifikasi dengan variasi dalam urutan
dari nukleotida 10 hingga nukleotida 370 dari amplikon rata-rata 374
bp, menunjukkan bahwa ada variasi antara spesimen pada satu
peternakan penelitian. Salah satu asosiasi terkait dengan
spesies P. elisae dan P. jackbeardsleyi, dan asosiasi lainnya dicocokkan
dengan spesies D. brevipes. Keduanya berbagi kelompok filogenetik
yang sama dengan bootstrap 61%.
Hasil yang diperoleh dari gen COXI menunjukkan nilai identitas antara
91-96% (hingga 16 basa berbeda) terkait dengan spesies yang
berasosiasi di GenBank. Dalam hit tertinggi, spesies D. brevipes tidak
dilaporkan karena disajikan dalam dua gen lainnya (ribosom dan nuklir).
Dalam hal ini, spesies dengan persentase identitas yang lebih tinggi
adalah
D. neobrevipes dan kurang terkait D. brevipes.
Informasi DNA yang diekspos di pohon filogenetik, menunjukkan tidak
ada variasi di antara spesimen dari Kosta Rika dalam gen 18S, tetapi
sedikit variasi dalam EF-1a dan juga dalam data COI ditunjukkan.
Hasilnya tidak berarti diferensiasi filogenetik yang tinggi di antara
sampel Kosta Rika. Namun, dibandingkan dengan negara lain, ini
menunjukkan populasi dengan karakteristik yang melekat dari wilayah
geografis ini sesuai dengan perbedaan identitas genetik.
Garis keturunan mitokondria kutu putih Dysmicoccus sp. dari Cina
mengungkapkan pola biogeografis yang sebelumnya tidak diketahui
[29]. Para peneliti menemukan haplotipe yang berbeda, satu di Cina
Daratan, dua di pulau Hainan, sedangkan kutu putih yang dikumpulkan
di provinsi Yunnan, Guangxi dan Fujian memiliki haplotipe yang sama,
menunjukkan variasi genetik terbatas dari kutu putih di lokasi lain ini. secara ekonomi, seperti Dysmicoccus, untuk menguji monofili generik
Penulis menjelaskan bahwa Dysmicoccus sp. bisa menjadi kompleks
spesies, yang mencakup setidaknya dua garis keturunan samar,
spesies saudara atau mungkin beberapa taksa kompleks. Beardsley (1965) [30]
menampilkan kompleks kutu putih Dysmicoccus dengan karakteristik
morfologi yang sama dalam spesies yang terkait erat: D. neobrevipes,
D. brevipes dan D. texensis.
Spesies Pseudococcus dan Dysmicoccus, memiliki hubungan filogenetik
yang tinggi. Hal ini dapat dijelaskan memanggil homoplasy dalam urutan
yang berbeda ini [23]. Itu menjelaskan mengapa kami memiliki hubungan
yang kuat dari D. brevipes dari Kosta Rika dengan spesies P. elisae
dan P. jackbeardsleyi. Downie dan Gullan (2004) [23] menjelaskan
bahwa karakter molekuler kutu putih dipengaruhi oleh homoplasy, dan
tidak ada satu gen pun yang dianalisis dapat membentuk hubungan
yang didukung kuat dalam filogeni kutu putih. Juga Palma-Jiménez dan
Blanco-Meneses (2016) [31] menyebutkan bahwa homoplasy membuat
interpretasi yang salah dalam analisis filogenetik.
Lingkungan geografis merupakan faktor penting yang melibatkan iklim
wilayah; juga tanaman inang adalah penentu untuk memahami efek
dalam molekul
hubungan seperti yang ditemukan dalam hasil molekuler. Gen 18S dan
Elongation Factor mengasosiasikan D. brevipes CR dengan P. elisae
dan P. jackbeardsleyi, baik dari Kosta Rika maupun dari inang Musa sp.
Menurut Williams dan Granara de Willink (1992) [1], salah satu
perbedaan morfologi yang paling penting adalah tidak adanya duktus
tubulus mulut pada Dysmicoccus sp. Selain itu, Granara de Willink
(2009) [32] menjelaskan bahwa perbedaan morfologi antara spesies
dari genus ini, seperti: D. neobrevipes
dan D. brevipes minimal dan dalam beberapa kasus mungkin merupakan
variasi dari spesies yang sama. Disebutkan juga bahwa kutu putih D.
neobrevipes dapat dikacaukan dengan spesies D. brevipes untuk ciri-
ciri seperti: 17 pasang cerarii, lobus anal dengan dua setae berbentuk
kerucut, dua pasang ostiloles, pori-pori diskoid di tepi mata, pori-pori
multilokular terbatas pada segmen VI, VII dan VIII dari area frontal, pori-
pori tembus pandang di femur dan tibia dari metacoxae, dan tidak
adanya duktus tubular rim oral. Namun, D. neobrevipes dapat dibedakan
dengan tidak adanya setae dorsal yang lebih panjang pada segmen VII
dan VIII dan dengan cara yang sama karena adanya sirkulus yang
besar. Dalam D. brevipes sirkulus adalah subquadrate [6]. Kedua
spesies memiliki empat sampai tujuh setae berbentuk kerucut pada
cerarii lobus anal, D. neobrevipes memiliki area sclerotized pada setiap
cerarii lobus anal [33], sedangkan D. brevipes tidak memiliki area
sclerotized [1]. Di sini kami melihat area sclerotized ringan.
Granara de Willink (2009) [32] menyebutkan bahwa solusi untuk
perbedaan kecil ini, selain dari studi DNA, adalah bahwa studi lain harus
dilakukan, seperti studi biologi untuk
mempertimbangkan besarnya variasi. Biao dkk. (2012)
[29], menjelaskan bahwa dampak potensial untuk perluasan kutu putih
pada populasi pertanian yang berbeda di seluruh dunia tergantung
pada taksonomi dan biologi yang menunjukkan haplotipe yang berbeda,
yang akan memerlukan banyak penelitian tambahan.
5. Kesimpulan
Dalam penelitian ini, studi data morfologi menentukan bahwa spesies
yang paling dekat kekerabatannya berkorespondensi dengan D.
brevipes. Studi yang didukung oleh data molekuler, memungkinkan
pemahaman variasi genetik tingkat tinggi, mengidentifikasi populasi
dengan karakteristik molekuler yang melekat dari wilayah geografis ini.
Seperti yang disebutkan Downie dan Gullan (2004) [23] , penting untuk
mengambil sampel lebih banyak spesies dari genera besar dan penting
dan sinonim spesies.
Sampai saat ini, identifikasi D. brevipes di Kosta Rika telah dikaitkan
dengan tanaman nanas [34]. Oleh karena itu, penelitian ini memberikan
wawasan tentang kemampuan penyebaran hama polifag ini, yang ada
di Kosta Rika pada tanaman yang berbeda. Oleh karena itu,
kemungkinan karena pengaruh lingkungan, serangga ini cenderung
mencari inang lain untuk makanan dan perbanyakan sebagai bagian
dari biologinya. Sejauh ini, laporan D. brevipes di Musa sp. telah di
negara-negara seperti: Kolombia [35], Kuba [12], Ethiopia [13] dan
Filipina [14].
Hubungan filogenetik yang ditemukan di kutu putih selalu terbuka untuk
pertanyaan. Penting untuk mempertimbangkan hubungan berdasarkan
morfologi jantan dewasa, bahkan geografi dan inang tanaman juga
seperti yang disebutkan beberapa penulis [36].
6. Ucapan Terima Kasih
Penulis berterima kasih kepada César Guillén, ahli entomologi dari
CORBANA, yang telah menyediakan koleksi kutu putih yang digunakan
dalam penelitian ini. Penulis berterima kasih kepada semua staf CIEMic,
terutama kepada Alcides Sánchez atas bimbingannya selama
pelaksanaan proyek dan Laboratorium Fitopatologi Molekuler untuk
~ 1216 ~
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi
ketersediaan peralatan. Juga, terima kasih kepada Ricardo Palma,
karena presentasi gambarnya. Penelitian ini didukung oleh Wakil
Rektorat Riset Universitas Kosta Rika, kode proyek: 813-B1-273 dan
beasiswa 810-B2-232.
7. Referensi
1. Williams DJ, Granara de Willink M. Mealybugs dari Amerika Tengah
dan Selatan. Edn 1. CAB Internasional, Wallingford 1992, 1-635.
2. Hardy NB, Gullan PJ, Hodgson CJ. Klasifikasi kutu putih tingkat
subfamili (Hemiptera: Pseudococcidae) berdasarkan data molekuler
dan morfologi terintegrasi.
Entomologi Sistematis. 2008; 33:51-71.
3. Culik MP, Gullan PJ. Hama baru tomat dan catatan kutu putih lainnya
(Hemiptera: Pseudococcidae) dari Espírito Santo, Brasil. Zootaxa.
2005; 964:1-8.
4. Muthulingam P, Vinobaba M, Gnaneswaran R.
Insiden kutu putih dari tanaman Pisang dan pisang raja (Musa sp)
di Distrik Jaffna, Sri Lanka. Makalah Prosiding Agri Hewan. 2013;
1:556-575.
5. Carter W. Kutu Daun Nanas (Pseudococcus (CM.)) dan Layu Nanas.
brevipes
Fitopatologi.1932; 20(12)::996-997.
6. Ben-Dov Y, Miller DR, Gibson GAP. Scale Net: Database Sistematis
Serangga Skala Dunia dalam Katalog Kehidupan Kemitraan:
Dysmicoccus. Penelitian Pertanian Amerika Serikat, Israel dan
Kanada. http://www.sel.barc.usda.gov/scalenet/scalenet.htm. 10
Juni 2014.
7. KABI. Dysmicoccus brevipes (kutu putih nanas).
Wallingford. Inggris: TAKSI Internasional.
http://www.cabi.org/isc/datasheet/20248. 26 Set, 2015.
8. Kessing JLM, Mau RFL. Dysmicoccus neobrevipes
(Beardsley). Tanaman Guru Pengetahuan. http://
www.extento.hawaii.edu/kbase/crop/type/d_neobre
.htm. 17 Agustus 2014.
9. KABI. Dysmicoccus neobrevipes (kutu putih nanas).
Wallingford. Inggris: TAKSI Internasional.
http://www.cabi.org/isc/datasheet/20251. 26 Set, 2015.
10. Beardsley JW. Kompleks kutu putih nanas; taksonomi, distribusi dan
hubungan host.
Simposium Nanas Internasional. 1992; 334:383-386.
11. Kondo T, Gullan P, Williams DJ. Koksidologi. Studi tentang serangga
skala (Hemiptera: Sternorrhyncha: Coccoidea). Boletin del Museo
de Entomología de la Universidad del Valle. 2008; 9(1):29-53.
12. Blanco RE, Pérez VI, Rodríguez CAM. Encuesta de los
pseudocóccidos de Cuba. Hasil del período 2001-
2002. Fitosanidad. 2003; 7(2):31-36.
13. Williams DJ, Matile-Ferrero D. Spesies baru dari genus kutu putih
Cataenococcus ferris dari Ethiopia pada ensete ventricosum,
tanaman yang terinfeksi virus (Hemiptera, Pseudococcidae;
Musaceae). Revzie fiunfaise d'Entondogie. 1999; 21(4):145-149.
14. Navasero MM. Agen biokontrol potensial terhadap kutu putih dan
kutu daun yang menyerang pisang. Universitas Filipina Baños.
pada kalah
http://www.pcaarrd.dost.gov.ph/home/joomla/index.php?
option=com_content&task=view&id=1714&Itemid=457.
17 Set, 2013.
15. Fernández JML, Ayala CP, Bethencout CDL.
Seguimiento de la dinámica poblacional de Dysmicoccus grassi
(Leonardi) (Homoptera: Pseudococcidae) en Musa acuminata
Colla, subgrupo Cavendish cv. Pequeña
~ 1217 ~
enana. Boletín de sanidad Plagas tumbuhan. 2001; 27:85-
101.
16. Aguilar CH, Lasalita-Zapico F, Namocatcat J, Fortich A, Bojadores
RM. Persepsi Petani Tentang Hama Serangga Pisang dan
Pengendalian Hama Terpadu (PHT)
Sistem di SocSarGen, Mindanao, Filipina.
Konferensi Internasional tentang Pertanian Cerdas. 2014; 63:22-27.
17. Sirisena U, Watson GW, Hemachandra KS, Wijayagunasekara HNP.
Kutu putih (Hemiptera: Pseudococcidae) spesies pada tanaman
buah ekonomis penting di Sri Lanka. Penelitian Pertanian Tropis.
2013; 25(1):69-82.
18. Yan-Biao H, Ying-Hong L, Ru-Lin Z, Zai-Fu X, Guang Ming S, Yan-
Long Z dkk. Keberadaan dua spesies kutu putih nanas (Dysmicoccus
spp.) (Hemiptera: Pseudococcidae) di Cina dan hubungan
genetiknya berdasarkan sekuens rDNA ITS. Kariologi. 2014;
67(1):36-44.
19. Estrada HA, Alvarado E, Tabora P, Castillo H.
Evaluasi insektisida naturales para el control de la cochinilla
harinosa, Dysmicoccus brevipes. Tierra Tropis. 2009; 5(2):159-168.
20. Malausa T, Fenis A, Warot S, Germain JF, Ris N, Prado E dkk.
Penanda DNA untuk menguraikan kompleks taksa samar pada kutu
putih (Hemiptera: Pseudococcidae).
Jurnal Entomologi Terapan. 2011; 135: 142-155.
21. Gullan P, Martin J. Sternorrhyncha (kutu tanaman lompat, lalat putih,
kutu daun dan serangga skala). Dalam Ensiklopedia Serangga. Edn
1. Diedit oleh Cardaé RT, Resh VH.
Pers Akademik/Ilmu Elsevier, New York, 2003, 1079-1089.
22. Murray MGY, Thompson WF. Isolasi cepat DNA tanaman dengan
berat molekul tinggi. Penelitian Asam Nukleat.
1985; 8(19):4321-4325.
23. Downie DA, Gullan PJ. Analisis filogenetik kutu putih (Hemiptera:
Coccoidea: Pseudococcidae) berdasarkan urutan DNA dari tiga
gen nuklir, dan tinjauan klasifikasi yang lebih tinggi. Entomologi
Sistematis. 2004; 29:238-259.
24. Aula TA. BioEdit: Editor penyelarasan urutan biologis dan program
analisis yang mudah digunakan untuk Windows 95/98/NT. Seri
Simposium Asam Nukleat. 1999; 41:95-98.
25. BKN. Pusat Nasional Informasi Bioteknologi.
Basis tanggal: BLAST Nukleotida. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. 2
Februari 2016.
26. Thompson JD, Higgins DG, Gibson TJ. Clustal W: meningkatkan
sensitivitas penyelarasan urutan berganda progresif melalui
pembobotan urutan, penalti celah khusus posisi, dan pilihan matriks
bobot.
Penelitian Asam Nukleat. 1994; 22:4673-4680.
27. Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: Analisis Genetika
Evolusioner Molekuler versi 7.0 untuk kumpulan data yang lebih
besar. Biologi dan Evolusi Molekuler. 2016; 33:1870-1874.
28. Miller DR, Anak Tangga A, Venable GL, Gill RJ. Skala Bersih.
Serangga Skala: Alat identifikasi, gambar, dan informasi diagnostik
untuk spesies penting karantina.
USDA-ARS.
http://www.sel.barc.usda.gov/scalekeys/ScaleInsectsHom
e/ScaleInsectsHome.html. 15 Juni 2013.
29. Biao HY, Wu WX, Hong LY, Guang SM, Lin ZR.
COI mitokondria dari Dysmicoccus brevipes
(Hemiptera: Pseudococcidae) Menyarankan Silsilah Cryptic
Machine Translated by Google
Jurnal Studi Entomologi dan Zoologi

dan Menunjukkan Sumber Perkenalan ke Cina.

Ahli Entomologi Florida. 2012; 95(1):183-191.
30. Beardsley JW. Catatan tentang kompleks kutu putih nanas,
dengan deskripsi dua spesies baru.
Prosiding Masyarakat Entomologi Hawaii. 1965; 19:55-68.

31. Palma-Jiménez M, Blanco-Meneses M. Catatan pertama

identifikasi morfologi dan molekuler kutu putih Pseudococcus
jackbeardsleyi (Hemiptera: Pseudococcidae)
Jurnal di Kosta
Universal Penelitian
2016; Rika.
Pertanian.
4(4):125-133.

32. Granara de Willink MC. Dysmicoccus dari Daerah Neotropis

(Hemiptera: Pseudococcidae).
Revista de la Sociedad Entomológica Argentina. 2009;
68(1-2):11-95.
33. Soysouvanh P, Soo-Jung S, Ki-Jeong H. Studi Faunistik
Keluarga Pseudococcidae (Hemiptera) dari Kamboja dan
Laos. Jurnal Terapan Korea
Ilmu serangga. 2015; 54(3):199-209.
34. Miranda AV, Blanco MH. Control de Dysmicoccus brevipes
(Hemiptera: Pseudococcidae), en el fruto de piña, San
Carlos, Kosta Rika. Agronomia Costarricense. 2013;
37(1):103-11.
35. Kondo T, Ramos-Portilla AA, Vergara-Navarro EV.
Daftar kutu putih dan putoid yang diperbarui dari Kolombia
(Hemiptera: Pseudococcidae dan Putoidae). Boletín del
Museo de Entomología de la Universidad del Valle. 2008;
9(1):29-53.
36. Palma-Jiménez M, Blanco-Meneses M. Catatan pertama
identifikasi morfologi dan molekuler kutu putih Pseudococcus
jackbeardsleyi (Hemiptera: Pseudococcidae)
Jurnal di Kosta
Universal Penelitian
2016; Rika.
Pertanian.
4(4):125-133.

~ 1218 ~