LAPORAN AKHIR

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

OLEH:
MYSEL DARA ZULIA
NIM. 2206113489

AGROTEKNOLOGI - A

JURUSAN AGROTEKNOLOGI
FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS RIAU
PEKANBARU
2023

i
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang hingga saat ini masih memberikan

kita nikmat iman dan kesehatan. Sehingga atas berkat-Nya penulis diberi

kesempatan yang luar biasa ini yaitu kesempatan untuk menyelesaikan Laporan

Akhir Praktikum Mikrobiologi ini.

Dalam menyusun laporan ini, tentunya banyak sekali hambatan yang telah

penulis rasakan. Oleh sebab itu, penulis sangat berterima kasih kepada beberapa

pihak yang telah memberikan dukungan kepada penulis terutama dosen pengampu

mata kuliah mikrobiologi, Ibu Ir. Yetti Elfina S., M.P. dan Bapak Ir. Muhammad

Ali, M.Sc. beserta Kakak dan Abang asisten praktikum mikrobiologi yang telah

memberikan arahan dan ilmu yang sangat bermanfaat dalam proses penyusunan

laporan ini.

Penulis juga menyadari bahwa pada laporan ini dapat ditemukan banyak

sekali kekurangan serta jauh dari kesempurnaan. Oleh sebab itu, penulis benar-

benar menanti kritik dan saran untuk perbaikan laporan ini, sebab sekali lagi

penulis menyadari bahwa tidak ada sesuatu yang sempurna tanpa disertai saran

yang konstruktif. Semoga laporan ini dapat memberikan manfaat.

Pekanbaru, Juni 2023

Mysel Dara Zulia

ii
 DAFTAR ISI

Halaman

KATA PENGANTAR.............................................................................................ii
DAFTAR ISI..........................................................................................................iii
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................vi

I. JUDUL............................................................................................................1
1.1 Pengenalan Alat Laboratorium......................................................................1
1.2 Mikroskop.......................................................................................................1
1.3 Sterilisasi........................................................................................................1
1.4 Pembuatan Media NA dan PDA.....................................................................1
1.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba......................................................1
1.6 Pewarnaan Bakteri..........................................................................................1
1.7 Metode Perhitungan Mikroba.........................................................................1

II. TUJUAN.........................................................................................................2
2.1 Pengenalan Alat Laboratorium.......................................................................2
2.2 Mikroskop.......................................................................................................2
2.3 Sterilisasi........................................................................................................2
2.4 Pembuatan Media NA dan PDA.....................................................................2
2.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba......................................................2
2.6 Pewarnaan Bakteri..........................................................................................2
2.7 Metode Perhitungan Mikroba.........................................................................3

III. CARA KERJA................................................................................................4

3.1 Pengenalan Alat Laboratorium.......................................................................4
3.2 Mikroskop.......................................................................................................4
3.3 Sterilisasi........................................................................................................4
3.3.1 Pemijaran...............................................................................................4
3.3.2 Udara Kering (Oven).............................................................................4

iii
 3.3.3 Autoklaf.................................................................................................5
3.4 Pembuatan Media NA dan PDA.....................................................................5
3.4.1 Pembuatan PDA (Potato Dextrose Agar).............................................5
3.4.2 Pembuatan NA (Nutrient Agar)............................................................6
3.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba......................................................6
3.5.1 Metode Agar Tuang..............................................................................6
3.5.2 Metode Gores........................................................................................7
3.6 Pewarnaan Bakteri..........................................................................................7
3.7 Metode Perhitungan Mikroba.........................................................................8

IV. TINJAUAN PUSTAKA...............................................................................10

4.1 Pengenalan Alat Laboratorium.....................................................................10
4.2 Mikroskop.....................................................................................................12
4.3 Sterilisasi......................................................................................................14
4.4 Pembuatan Media NA dan PDA...................................................................16
4.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba....................................................18
4.6 Pewarnaan Bakteri........................................................................................20
4.7 Metode Perhitungan Mikroba.......................................................................21

V. HASIL DAN PEMBAHASAN....................................................................24

5.1 Pengenalan Alat Laboratorium.....................................................................24
5.2 Mikroskop.....................................................................................................31
5.3 Sterilisasi......................................................................................................33
5.4 Pembuatan Media NA dan PDA...................................................................35
5.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba....................................................37
5.6 Pewarnaan Bakteri........................................................................................41
5.7 Metode Perhitungan Mikroba.......................................................................43

VI. PENUTUP....................................................................................................45
6.1 Kesimpulan...................................................................................................45
6.1.1 Pengenalan Alat Laboratorium...........................................................45
6.1.2 Mikroskop...........................................................................................45

iv
 6.1.3 Sterilisasi.............................................................................................45
6.1.4 Pembuatan Media NA dan PDA.........................................................46
6.1.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba...........................................46
6.1.6 Pewarnaan Bakteri..............................................................................46
6.1.7 Metode Perhitungan Mikroba.............................................................47
6.2 Saran.............................................................................................................47
6.2.1 Pengenalan Alat Laboratorium...........................................................47
6.2.2 Mikroskop...........................................................................................47
6.2.3 Sterilisasi.............................................................................................48
6.2.4 Pembuatan Media NA dan PDA.........................................................48
6.2.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba...........................................48
6.2.6 Pewarnaan Bakteri..............................................................................48
6.2.7 Metode Perhitungan Mikroba.............................................................48

DAFTAR PUSTAKA............................................................................................49

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman
1. Kapang tempe....................................................................................................31
2. Kapang tempe...................................................................................................31
3. Hasil pengamatan Lactobacillus casei yakult...................................................32
4. Saccharomyses sp. tapai...................................................................................32
5. Media PDA.......................................................................................................35
6. Media NA.........................................................................................................35
7. Isolasi mikroba menggunakan larutan induk hari ke-1.....................................37
8. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-1 hari ke-1........................................37
9. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-2 hari ke-1.....................................38
10. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-3 hari ke-1......................................38
11. Isolasi mikroba menggunakan larutan induk hari ke-2...................................38
12. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-1 hari ke-2......................................38
13. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-2 hari ke-2...................................38
14. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-3 hari ke-2......................................38
15. Isolasi mikroba menggunakan larutan induk hari ke-3...................................39
16. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-1 hari ke-3......................................39
17. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-2 hari ke-3...................................39
18. Isolasi mikroba menggunakan larutan 10-3 hari ke-3......................................39
19. Isolasi Mikroba dengan metode gores............................................................39
20. Hasil pewarnaan bakteri Bacillus sp...............................................................41
21. Hasil perhitungan mikroba menggunakan colony counter..............................43

vi
I. JUDUL

1.1 Pengenalan Alat Laboratorium

1.2 Mikroskop

1.3 Sterilisasi

1.4 Pembuatan Media NA dan PDA

1.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

1.6 Pewarnaan Bakteri

1.7 Metode Perhitungan Mikroba

1
II. TUJUAN

2.1 Pengenalan Alat Laboratorium

Tujuan dari praktikum pengenalan alat laboratorium ini adalah untuk

memperkenalkan berbagai macam-macam alat yang ada di laboratorium beserta

kegunaannya yang dapat memperlancar kegiatan praktikum.

2.2 Mikroskop

Tujuan dari praktikum mikroskop ini adalah untuk mempelajari bagian-

bagian mikroskop beserta cara menggunakan dan fungsinya

2.3 Sterilisasi

Tujuan dari praktikum sterilisasi ini adalah untuk mempelajari bagian-

bagian mikroskop beserta cara menggunakan dan fungsinya

2.4 Pembuatan Media NA dan PDA

Tujuan dari praktikum pembuatan media NA dan PDA ini adalah untuk
mengetahui cara pembuatan media NA dan PDA.

2.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

Tujuan dari praktikum pengenalan mikroba dan isolasi mikroba ini adalah

untuk mengetahui bentuk dan jenis dari mikroba serta untuk mengetahui berbagai

cara isolasi mikroba dan pengaplikasiannya.

2.6 Pewarnaan Bakteri

Tujuan dari praktikum pewarnaan bakteri ini adalah untuk mengetahui tata

cara pewarnaan bakteri sehingga praktikan mampu melakukan pewarnaan bakteri

guna mengamati bakteri yang mempunyai sel dengan ukuran relatif kecil.

2
2.7 Metode Perhitungan Mikroba

Tujuan dari praktikum metode perhitungan mikroba ini adalah untuk

mempelajari dan mengetahui metode-metode yang digunakan untuk perhitungan

mikroba sehingga praktikan dapat mengaplikasikannya.

3
III. CARA KERJA

3.1 Pengenalan Alat Laboratorium

1. Diperlihatkan alat-alat labor beserta namanya.

2. Dijelaskan kegunaan dari alat-alat labor yang diperlihatkan.

3. Dijelaskan cara menggunakan alat-alat labor yang diperlihatkan.

4. Dicatat semua penjelasan yang sudah diterangkan.

3.2 Mikroskop

1. Disiapkan 3 kaca preparat dan dibersihkan kaca preparat dengan

menggunakan alkohol lalu dilap hingga kering.

2. Diteteskan yakult dan air tapai ke masing-masing kaca preparat yang

sudah disiapkan.

3. Diambil sedikit kapang tempe, lalu ditetesi aquades.

4. Diletakkan spesimen pengamatan di bawah mikroskop dan diamati

secara bergantian.

5. Difoto hasil mikroskopi pengamatan tempe, yakult, dan tapai yang

didapatkan.

3.3 Sterilisasi

3.3.1 Pemijaran

1. Ujung jarum ose dicelupkan ke dalam alkohol

2. Dihidupkan api bunsen

3. Dipijari jarum ose atau peralatan lain hingga pijar

3.3.2 Udara Kering (Oven)

1. Dicuci alat yang akan disterilisasi dengan sabun

4
 2. Direndam alat yang akan disterilisasi dalam larutan bayclin semalaman

3. Direbus alat yang akan disterilisasi menggunakan dandang selama satu

jam

4. Dibungkus dengan kertas alat-alat yang ingin disterilisasi. Disumbat

bagian atas erlenmeyer dengan kapas

5. Dimasukkan alat-alat yang ingin disterilisasi ke dalam oven. Diatur

waktu selama 2 jam dan suhu 150 derjat.

3.3.3 Autoklaf

1. Dikeluarkan udara dari ruangan autoklaf dan diisi dengan air

2. Dipilih waktu sterilisasi

3. Dikeluarkan uap air dari autoklaf setelah sterilisasi selesai

4. Dikeringkan dan didinginkan bahan dan alat yang disterilkan

3.4 Pembuatan Media NA dan PDA

3.4.1 Pembuatan PDA (Potato Dextrose Agar)

1. Dikupas kulit kentang dan dipotong 2 x 2 cm lalu dicuci

2. Dimasukan ke dalam bekker glass yang berisi 500 ml aquades dan

direbus sampai lunak

3. Disaring dan diambil air kentang yang sudah direbus dan dimasukan ke

dalam erlenmeyer yang berisi agar, dextrose, dan amoxicillin

4. Ditambahkan aquades hingga 1 liter, diaduk rata, lalu dimasak sampai

mendidih dan berbuih sambil terus diaduk

5. Ditutup menggunakan aluminium foil setelah mendidih

5
3.4.2 Pembuatan NA (Nutrient Agar)

1. Dimasukkan NA ke dalan erlenmeyer dan dimasukkan aquades 1 liter

2. Direbus hingga mendidih

3. Ditutup menggunakan aluminium foil

3.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

3.5.1 Metode Agar Tuang

1. Dibuat suspensi yakult dengan disiapkan tabung reaksi, gelas ukur pipet

tetes, aluminium foil, dan rak tabung reaksi.

2. Dibuat larutan induk dengan dicampurkan 9 ml aquades dan 1 ml yakult

ke dalam tabung reaksi lalu dihomogenkan dengan tangan/vortex.

3. Dibuat pengenceran bertingkat di mana pada tabung reaksi pertama

merupakan larutan 10-1, tabung larutan kedua 10-2, dan tabung ketiga

larutan 10-3.

4. Dimasukkan 9 ml aquades pada tabung reaksi pertama dan ditambah 1

ml larutan induk lalu dihomogenkan

5. Dimasukkan 9 ml aquades pada tabung reaksi kedua dan ditambah 1 ml

larutan 10-1 lalu dihomogenkan

6. Dimasukkan 9 ml aquades pada tabung reaksi ketiga dan ditambah

larutan 10-2 lalu dihomogenkan

7. Disiapkan 4 cawan petri, dimasukkan 1 ml larutan induk, larutan 10 -1,

larutan 10-2, dan larutan 10-3 ke dalam masing-masing cawan petri.

8. Dituang NA ke dalam masing-masing cawan petri, ditutup, lalu

digoyang dengan metode 8

9. Ditunggu hingga padat lalu diberi plastic wrap dan label.

6
 10. Diamati hingga hari ke-3

3.5.2 Metode Gores

1. Dikeruk bakteri menggunakan jarum ose

2. Digoreskan pada media padat

3. Diinkubasikan cawan dengan posisi terbalik pada suhu 30-32 oC selama

2-3 hari

3.6 Pewarnaan Bakteri

1. Dinyalakan bunsen dan disterilkan kaca preparat dengan disemprot

alkohol lalu dilap dengan tisu dan dibakar di atas bunsen

2. Disterilkan jarum ose hingga pijar, lalu diteteskan aquades pada jarum

ose

3. Digoreskan jarum ose pada kaca preparat membentuk pola bulat

4. Diambil bakteri dengan jarum ose dan dioleskan pada kaca preparat

yang

sudah diberi aquades

5. Dibakar kaca preparat di atas bunsen

6. Diteteskan kristal violet di atas preparat hingga menggenang dan

ditunggu hingga lebih kurang 1 menit

7. Dibilas dengan aquades dan ditetesi lugol lalu ditunggu hingga lebih

kurang 1 menit

8. Dibilas dengan aquades dan ditetesi alkohol lalu ditunggu lebih kurang

5-10 detik

9. Dibilas dengan aquades dan ditetesi sapranin lalu ditunggu hingga lebih

7
 kurang 1 menit

10. Ditunggu hingga kering dan diamati menggunakan mikroskop

3.7 Metode Perhitungan Mikroba

1. Dibuat suspensi yakult dengan disiapkan tabung reaksi, gelas ukur pipet

tetes, aluminium foil, dan rak tabung reaksi.

2. Dibuat larutan induk dengan dicampurkan 9 ml aquades dan 1 ml yakult

ke dalam tabung reaksi lalu dihomogenkan dengan tangan/vortex.

3. Dibuat pengenceran bertingkat di mana pada tabung reaksi pertama

merupakan larutan 10-1, tabung larutan kedua 10-2, tabung ketiga larutan

10-3, hingga tabung keenam larutan 10-6.

4. Dimasukkan 9 ml aquades pada tabung reaksi pertama dan ditambah 1

ml larutan induk lalu dihomogenkan

5. Dimasukkan 9 ml aquades pada tabung reaksi kedua dan ditambah 1 ml

larutan 10-1 lalu dihomogenkan

6. Diulangi langkah-langkah tersebut hingga terbentuk larutan bertingkat

10-6

7. Disiapkan 7 cawan petri, dimasukkan 1 ml larutan induk, larutan 10 -1,

larutan 10-2, larutan 10-3, larutan 10-4, larutan 10-5, dan larutan 10-6 ke

dalam masing-masing cawan petri.

8. Dituang NA ke dalam masing-masing cawan petri, ditutup, lalu

digoyang dengan metode 8

9. Ditunggu hingga padat lalu diberi plastic wrap dan label dan dibiarkan

selama 1-2 hari.

8
10. Diletakkan cawan yang telah ditumbuhi bakteri di bawah colony

counter dan dihitung jumlah koloni yang terbentuk

9
 IV. TINJAUAN PUSTAKA

IV.1 Pengenalan Alat Laboratorium

Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari tentang mikroba, jasad renik.

Mikrobiologi adalah salah satu cabang ilmu dari biologi, dan memerlukan ilmu

pendukung kimia, fisika, dan biokimia. Mikrobiologi sering disebut ilmu praktek

dari biokimia. Dalam mikrobiologi diberikan pengertian dasar tentang sejarah

penemuan mikroba, macam-macam mikroba di alam, struktur sel mikroba dan

fungsinya, metabolisme mikroba secara umum, pertumbuhan mikroba dan faktor

lingkungan, mikrobiologi terapan di bidang lingkungan dan pertanian.

Mikrobiologi lanjut telah berkembang menjadi bermacam-macam ilmu yaitu

virologi, bakteriologi, mikrobiologi pangan, mikrobiologi tanah, mikrobiologi

industri, dan sebagainya yang mempelajari mikroba spesifik secara lebih rinci atau

menurut kemanfaatannya (Fifendy, 2017).

Jasad hidup yang ukurannya kecil sering disebut sebagai mikroba atau

mikroorganisme atau jasad renik. Jasad renik disebut sebagai mikroba bukan

hanya karena ukurannya yang kecil, sehingga sukar dilihat dengan nmata biasa,

tetapi juga pengaturan kehidupannya yang lebih sederhana dibandingkan dengan

jasad tingkat tinggi. Mata biasa tidak dapat melihat jasad yang ukurannya kurang

dari 0,1 mm. Ukuran mikroba biasanya dinyatakan dalam mikron (µ), 1 mikron

adalah 0,001 mm. Sel mikroba umumnya hanva dapat dilihat dengan alat

pembesar atau mikroskop. walaupun demikian ada mikroba yang berukuran besar

sehingga dapat dilihat tanpa alat pembesar (Fifendy, 2017).

Menurut Jawetz et al. (2004), bakteri hidup berkoloni dan tidak memiliki

selubung inti namun mampu hidup dimana saja. Bakteri pada umumnya

10
merupakan makhluk hidup yang juga memiliki DNA, akan tetapi DNA bakteri

tidak berada pada nukleus yang juga tidak mempunyai membran sel. DNA

ekstrakromosomal dari bakteri tergabung menjadi satu plasmid yang berbentuk

kecil dan sirkuler.

Antony Van Leeuwenhoek (1632- 1732) ialah orang yang pertama kali

mengetahui adanya dunia mikroorganisme itu. Dengan mikroskop ciptaannya ia

dapat melihat bentuk makhluk-makhluk kecil yang sebelumnya itu tidak diduga

sama sekali keadaannya (Dwidjoseputro, 2005). Alat-alat laboratorium

mikrobiologi seperti lemari pengeram (inkubator), autoklaf, rak dan tabung reaksi,

beker glass, pipet hisap, pipet ukur, pinset, cawan petri, lidi kapas steril, lampu

spritus, ose (Selian, et al., 2013).

Pengujian total mikroba dilakukan dengan menggunakan metode cawan.

Metode hitungan cawan palig banyak digunakan untuk menghitung jumlah

mikroba pada bahan pangan. Medium yang digunakan antara lain, medium plate

count agar (PCA), tabung reaksi, cawan petri, pipet, inkubator (Safitri dan

Swarastuti, 2011). Pembakar Bunsen, untuk mensterilkan peralatan seperti ose,

jarum, dan spatula dengan cara membakar ujung peralatan tersebut di atas api

bunsen sampai berpijar. Oven, untuk mensterilkan cawan petri dan pipet volume.

Penggunaan alat ini dengan memasukkan alat-alat tersebut kedalam oven dan

dipanaskan dengan suhu 160 – 170 oC selama 1-2 jam. Autoklaf, untuk

mensterilkan tabung reaksi bertutup dan erlenmeyer. Penggunaan alat ini dengan

memasukkan alat-alat tersebut kedalam autoklave yang ditutup dengan rapat dan

nyalakan autoklave dengan temperature 121 oC dan tekanan antara 15-17,5 psi

(pound per square inci) atau 1 atm selama 1 jam (Kharisma dan Abdul, 2012).

11
Autoklaf atau dikenal dengan metode sterilisasi panas basah biasanya sterilisasi

yang menggunakan bantuan alat autoklaf dengan tekanan bersaturasi. Berikut ini

merupakan siklus (cycle) yang akan menjamin proses sterilisasi di dalam autoklaf

menjadi efektif: 3 menit pada suhu 134 oC; 10 menit pada suhu 126 oC; 15 menit

pada suhu 121 oC; 25 menit pada suhu 115 oC (Zahid, 2010).

4.2 Mikroskop

Mikroskop alat yang sering digunakan peneliti untuk melihat benda yang

berukuran kecil atau struktur dari material. Salah satu mikroskop tersebut adalah

mikroskop optik dan Transmition Electron Microskopy (TEM). Cara kerja dari

mikroskop optik adalah dari cahaya lampu yang dibiaskan oleh lensa condenser,

setelah melewati lensa kondenser sinar mengenai spesimen dan diteruskan oleh

lensa objektif. Lensa objektif ini merupakan bagian yang paling penting dari

mikroskop karena dari lensa ini dapat diketahui perbesaran yang dilakukan

mikroskop. Sinar yang diteruskan oleh lensa objektif ditangkap oleh lensa okuler

dan diteruskan pada mata atau kamera. Pada mikroskop ini mempunyai batasan

perbesaran yaitu dari 400 X sampai 1400 X (Respati, 2008).

Mikroskop pertama kali ditemukan pada abad ke-16. Mikroskop tersebut

sangat sederhana karena hanya memiliki satu lensa. Dengan ditemukanya

mikrossop, banyak sekali pengetahuan dan penemuan yang diperoleh manusia.

Mikroskop berasal dari kata micro yang berarti kecil dan scapium yang berarti

penglihatan. Jadi, mikroskop adalah alat yang digunakan untuk melihat benda

yang berukuran sangat kecil. Mikroskop yang digunakan saat ini tergolong

mikroskop majemuk yang terdiri atas dua lensa atau lebih. Mikroskop banyak

digunakan dalam laboratorium biologi (Widiyatmoko, 2008).

12
 Orang yang pertama kali mengetahui bahwasannya ada dunia

mikroorganisme ialah Antony Van Leeuwenhoek (1632- 1732). Beliau

menciptakan sendiri suatu alat yang mana ia dapat melihat bentuk-bentuk dari

makhluk-makhluk kecil tersebut yang sebelumnya itu sama sekali tidak diduga

keadaannya (Dwidjoseputro, 2005).

Sebagaimana layaknya mikroskop dalam dunia ilmu pengetahuan lain,

mikroskop pedagogik berfungsi sebagai alat pembesar citra objek yang sedang

diteliti sehingga struktur, sifat dan/atau perilaku objek tersebut dapat dikenali.

Pengenalan mendalam atas objek ini diperlukan bagi perumusan perlakuan-

perlakuan atau keputusankeputusan yang lazimnya diperlukan bagi peningkatan

kualitas objek tersebut atau subjek yang memerlukan objek tersebut. Begitulah

konsep mikroskop pedagogik (yang selanjutnya akan disingkat menjadi MP) telah

dikembangkan untuk membantu para penyelenggara pendidikan, terutama guru,

dan para pemerhati serta peminat pendidikan dalam menganalisis kualitas PBM

yang berlangsung melalui pembesaran citra aspek-aspeknya serta karakteristik

aspek-aspek tersebut (Suherdi, 2009).

Bagian-bagian mikroskop dikelompokan menjadi 3 bagian, yaitu bagian

optik, penerangan, dan mekanis. Bagian optik berkaitan dengan lensa yang dapat

membuat bayangan benda menjadi lebih besar sesuai keperluan. Pada bagian ini

terdapat dua jenis lensa, yaitu lenssa objektif (yang dekat dengan benda) dan lensa

okuler (yang dekat dengan mata). Bagian penerangan berhubungan dengan

pencahayaan agar dapat melihat objek dengan jelas. Sementara, bagian mekanis

berfungsi untuk menggerakkan dan mengatur fokus saat mengamati objek. Pada

bagian ini menjadikan pemakai mikroskop merasa nyaman karena kemudahannya

13
saat memakai alat ini (Suparti, 2019).

4.3 Sterilisasi

Makna harfiah kata sterilisasi adalah: "menghancurkan semua bentuk

kehidupan". Sterilisasi diklasifikasikan menjadi dua macam yaitu secara fisik dan

secara kimia dan bahan sterilan dapat berbentuk cairan, gas atau radiasi

elektromagnetik. Klasifikasi tersebut tidak mutlak karena sterilisasi secara fisik

pun dapat menghasilkan bahan kimia yang letal, dan membentuk panas serta

tekanan osmotik. Cara sterilisasi tertua adalah destruksi dengan pemanasan baik

menggunakan api bebas maupun panas yang ditimbulkan oleh uap air sehingga

dapat dikatakan bahwa media sterilisasi klasik adalah panas dan air (basah) yang

meliputi air mendidih dan uap air panas. Air mendidih (boiling water) dianggap

kurang baik karena tidak memiliki tekanan sehingga penetrasi ke dalam material

lambat dan suhunya relatif rendah, oleh karena itu, uap air bertekanan tinggi

paling banyak digunakan sampai sekarang (Ma’at, 2009).

Menurut Ma’at (2009) sterilisasi adalah suatu proses pemusnahan semua

bentuk mikroorganisme, baik yang berbentuk vegetatif maupun yang berbentuk

spora. Mikroorganisme yang dimaksud dapat berupa kuman, virus, ricketsia

maupun jamur. Ada beberapa macam cara proses sterilisasi, vaitu sterilisasi

dengan pamanasan secara kering, sterilisasi dengan pamanasan secara basah,

sterilisasi dengan penambahan zat tertentu, sterilisasi dengan penyinaran,

sterilisasi dengan memakai penyaring bakteri.

Untuk kebanyakan benda, panas merupakan metode sterilisasi yang paling

praktis dan efisien. Jumlah panas yang diperlukan untuk mematikan berbeda dari

satu organisme ke organisme lain, yang harus diperhatikan adalah banyaknya

14
panas (suhu) yang harus dipergunakan dan lamanya waktu yang diperlukan benda

yang disterilkan untuk dipanaskan pada suhu tertentu. Kesulitan yang dihadapi

dalam sterilisasi panas antara lain adalah adanya endospora bakter, yang

merupakan bentuk kehidupan yang paling resisten (bertahan hidup pada suhu air

mendidih 100 °C pada permukaan laut untuk beberapa jam). Tidak ada pola

standard ketahanan terhadap panas untuk endospora, karena ketahanannya

beraneka bukan saja dari jenis ke jenis tetapi juga di dalam jenis yang sama dalam

kondisi umur dan pertumbuhan yang berbeda (Cahyani, 2009).

Formaldehida dan metil bromida merupakan contoh agen‐agen kimia yang

dapat digunakan untuk sterilisasi tanah. Formaldehida berupa cairan yang larut

air tak berwarna, membuat pedih/ iritasi terhadap mata dan membran mucous,

digunakan terutama untuk pengendalian fungi. Metil bromida yang digunakan

berupa gas (fumigasi), bersifat letal terhadap manusia dan hewan tetapi tidak

berbahaya untuk tanaman, digunakan untuk pengendalian nematoda, fungi,

insekta, benih rumput‐rumputan (Williamson, 1973).

Sterilisasi merupakan suatu proses untuk membunuh mikroorganisme

sampai ke spora-sporanya, yang terdapat di dalam bahan makanan. Proses ini

dilakukan dengan cara memanaskan makanan sampai temperatur 12 oC, selama

watu 15 menit. Salah satu contoh alat untuk melakukan sterilisasi adalah

Autoclave. Pada alat Autoclave ini, bahan makanan dipanaskan sampai temperatur

121-134 oC. makanan diproses selama 15 menit, untuk temperatur 121 oC, atau

pada temperatur 134 oC selama 3 menit. Setelah pemanasan ini, dilakukan

pendinginan secara perlahan untuk menghindari over-boiling ketika tekanan

diberikan pada makanan.

15
4.4 Pembuatan Media NA dan PDA

Meskipun persyaratan nutrien mikroorganisme amat beragam, namun

sebagai makhluk hidup mereka mempunyai kebutuhan dasar yang sama, meliputi

air, karbon, energi, mineral, dan faktor tumbuh. Untuk menumbuhkan

mikroorganisme dengan sebaik-baiknya, pertama kali harus memahami kebutuhan

dasarnya lalu mencoba memformulasikan suatu medium yang memberikan hasil

terbaik. Di mana yang dimaksudkan dengan medium disini ialah bahan yang

digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya.

Konsistensi medium dapat dibuat bermacam-macam bergantung kepada

keperluannya. Misalnya, medium cair seperti kaldu nutrien atau kaldu glukosa

yang dapat digunakan untuk keperluan pembiakan organisme dalam jumlah besar,

penelaahan fermentasi, dan berbagai macam uji (Rahayu, 2008)

Bila diinginkan medium padat, dapat ditambahkan bahan pemadat ke dalam

kaldu di mana medium padat biasanya digunakan untuk mengamati penampilan

atau morfologi koloni dan mengisolasi biakan murni sedangkan medium dengan

konsistensi pertengahan disebut medium setengah padat, kegunannya antara lain

untuk menguji ada tidaknya motilitas dan kemampuan fermentasi. Medium

setengah padat mengandung gelatin maupun agar namun dalam konsentrasi lebih

kecil daripada medium padat. Sebagai bahan untuk membuat medium menjadi

padat dapat dipakai agar. Meskipun bahan utama agar ialah galaktan, yang

diekstraksi dari alga laut Gelidium, namun sebagian besar mikroorganisme tidak

dapat menggunakannya sebagai makanan sehingga agar dapat berlaku semata-

mata sebagai bahan pemadat. Agar menjadi larut atau cair bila dipanaskan pada

16
suhu hampir 1000 oC dan tetap berbentuk cair bila didinginkan sampai kurang

lebih 430 oC (Hadioetomo, 1990).

Nutrient agar merupakan suatu medium yang berbentuk padat, yang

merupakan perpaduan antara bahan alamiah dan senyawa-senyawa kimia.

Nutrient agar terbuat dari campuran ekstrak daging dan pepton dengan

menggunakan agar sebagai pemadat. Dalam hal ini agar digunakan sebagai

pemadat, karena sifatnya mudah membeku dan mengandung karbohidrat yang

berupa galaktam sehingga tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Dalam

hal ini ekstrak beef dan pepton digunakan sebagai bahan dasar karena merupakan

sumber protein, nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh

mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang (Fatmariza et al., 2017).

Berdasarkan komposisinya PDA termasuk dalam media semi sintetik karena

tersusun atas bahan alami (kentang) dan bahan sintesis (dextrose dan agar).

Kentang merupakan sumber karbon (karbohidrat), vitamin dan energi, dextrose

sebagai sumber gula dan energi, selain itu komponen agar berfungsi untuk

memadatkan medium PDA. Masing-masing dari ketiga komponen tersebut sangat

diperlukan bagi pertumbuhan dan perkembangbiakkan mikroorganisme terutama

jamur (Octavia dan Wantini, 2017).

Komposisi PDA salah satunya adalah ekstrak kentang yang merupakan

sumber karbohidrat, sehingga dilakukan alternatif yang komposisinya hampir

sama dengan kentang, yakni dengan menggunakan singkong (Manihot esculenta

Crantz). Umbi singkong merupakan sumber energi yang kaya karbohidrat. Selain

umbi akar singkong banyak mengandung glukosa dan dapat dimakan mentah.

Rasanya sedikit manis, ada pula yang pahit tergantung pada kandungan racun

17
glukosida yang dapat membentuk asam sianida (Sadjad, 1999).

4.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

Trichoderma dan Penicillium merupakan fungi filamen dengan anggota

spesies yang memiliki potensi bioteknologi yang tinggi. Hal ini karena

kemampuan berbagai spesiesnya untuk menghasilkan enzim-enzim industri,

maupun untuk kemampuannya menghasilkan berbagai senyawa bioaktif. Usaha

bioprospecting untuk mengisolasi galur-galur baru Trichoderma dan Penicillium

terus dilakukan, karena kemampuan yang sangat beragam, baik dari segi

kwantitas maupun sifat enzim yang dihasilkan. Salah satu kawasan yang potensial

untuk menemukan galur atau species baru Trichoderma dan Penicillium penghasil

enzim karbohidrase tinggi adalah tanah hutan gambut yang kaya selulosa dan sisa-

sisa serangga (Yanuartono et al., 2019).

Bakteri adalah kelompok organisme mikroskopis yang pada umumnya

bersel tunggal, dan tidak memiliki membran inti sel. Pada umumnya organisme

ini memiliki dinding sel namun tidak berklorofil. Walaupun berukuran kecil

bakteri berperan penting dalam kehidupan sehari-hari, beberapa kelompok bakteri

dikenal bermanfaat untuk kehidupan, antara lain bakteri telah digunakan dalam

sektor industri pangan. Namun ada juga bakteri yang merugikan, seperti bakteri

yang membusukkan bahan-bahan makanan dan bahkan menyebabkan infeksi dan

penyakit bagi manusia (Febriza et al., 2021).

Di dalam lautan terdapat bermacammacam makhluk hidup baik berupa

tumbuhan air maupun hewan air. Salah satu makhluk hidup yang tumbuh dan

berkembang di laut adalah alga. Ditinjau secara biologi, alga merupakan

kelompok tumbuhan berklorofil yang terdiri dari satu atau banyak sel dan

18
berbentuk koloni. Di dalam alga terkandung bahanbahan organik seperti

polisakarida, agarosa, hormon, vitamin, mineral, dan juga senyawa bioaktif.

Agarosa merupakan jenis agar yang digunakan pada percobaan dan penelitian di

bidang bioteknologi dan mikrobiologi (Munifah, 2008).

Protozoa dapat mewakili setengah (50%) dari total biomassa mikroba dalam

rumen dan memiliki kontribusi secara signifikan terhadap fermentasi anaerobik

serta berperan dalam membantu mencerna serat yang berasal dari pakan hijauan

pada ruminansia. Meskipun nilai biologis protein bakteri dan protozoa dianggap

sama, akan tetapi kecernaan protein protozoa jauh lebih besar jika dibandingkan

dengan protein bakteri. Selain sumber protein, protozoa juga menyumbang sekitar

7 –15% dari total lemak dalam digesta rumen dan juga merupakan sumber asam

lemak tidak jenuh yang cukup signifikan (Sucitrayani et al., 2014).

Isolasi mikroba ialah memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari

lingkungan alamiahnya dan menumbuhkannya pada media buatan sehingga

diperoleh kultur murni. Kultur murni adalah kultur yang sel-sel mikrobanya

berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Kultur murni sangat berguna di

dalam mikrobiologi yaitu untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme

dan menumbuhkannya sebagai biakan murni dalam media buatan. Ada beberapa

isolasi mikroba menurut Wati dan Rukmanasari (2013) yakni metode gores atau

streak plate menggunakan loop ose dan menggoreskannya ke permukaan media

agar dengan pola tertentu, metode tuang atau pour plate yaitu mencampur

suspensi bakteri dengan medium agar pada suhu 50 °C dan menuangkannya pada

cawan petri dan metode sebar atau spread plate dilakukan dengan menuangkan

suspensi bakteri ke atas medium agar kemudian menyebarkannya secara merata

19
menggunakan trigalski atau L glass.

4.6 Pewarnaan Bakteri

Mikroorganisme sulit dilihat dengan mikroskop cahaya, karena tidak

mengadsorpsi ataupun membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat

warna digunakan untuk mewarnai mikroorganisme ataupun latar belakangnya. Zat

warna mengadsorpsi dan membiaskan cahaya sehingga kontras mikroorganisme

disekelilingya ditingkatkan. Penggunaan zat warna memungkinkan pengamatan

struktur sel seperti spora dan bahan infeksi yang mengandung zat pati dan granula

fosfat. Pewarnaan yang digunakan untuk melihat salah satu struktur sel disebut

pewarnaan khusus. Sedangkan pewarnaan yang digunakan untuk memilahkan

mikroorganisme disebut pewarnaan diferensial yang memilahkan bakteri menjadi

kelompok gram positif dan gram negatif. Pewarnaan diferensial lainnya ialah

pewarnaan ziehl neelsen yang memilihkan bakterinya menjadi kelompok-

kelompok tahan asam dan tidak tahan asam (Dwidjoseputro, 1998).

Metode pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian Gram pada tahun

1884. Dengan metode ini bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua yatu, bakteri

gram positif dan bakteri gram negatif yang didasarkan dari reaksi atau sifat bakteri

terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi

dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bias dilakukan pada

mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp

(Waluyo, 2004).

Berhasil tidaknya suatu pewarnaan sangat ditentukan oleh waktu pemberian

warna dan umur biakan yang diwarnai (umur biakan yang baik adalah 24 jam).

Umumnya zat warna yang digunakan adalah garam-garam yang dibangun oleh

20
ion-ion yang bermuatan positif dan negatif dimana salah satu ion tersebut

berwarna. Zat warna dikelompokkan menjadi dua, yaitu zat pewarna yang bersifat

asam dan basa. Jika ion yang mengandung warna adalah ion positif maka zat

warna tersebut disebut pewarna basa. Dan bila ion yang mengandung warna

adalah ion negatif maka zat warna tersebut disebut pewarna negatif (Hadiutomo,

1990).

Zat warna yang digunakan dalam pewarnaan bersifat basa dan asam. Pada

zat warna basa bagian yang berperan dalam memberikan warna disebut disebut

kromofor dan memiliki muatan positif. Sebaliknya, pada zat warna asam bagian

yang berperan memberikan zat warna mempunyai muatan negatif zat warna basa

lebih banyak digunakan karena muatan negatif banyak ditemukan didinding sel,

membran sel dan sitoplasmasewaktu proses pewarnaan muatan positif pada zat

warna basa akan berkaitan dengan muatan negatif dalam sel, sehingga

mikroorganisme lebih jelas terlihat (Dwidjoseputro, 1998).

4.7 Metode Perhitungan Mikroba

Perhitungan jumlah bakteri merupakan salah satu cara yang dilakukan untuk

bisa mengetahui berapa banyak koloni bakteri yang terdapat pada suatu media,

baik itu koloni sel yang hidup maupun koloni sel bakteri yang mati. Metode yang

digunakan adalah perhitungan secara langsung dan perhitungan secara tidak

langsung. Perhitungan jumlah bakteri secara langsung digunakan untuk

menentukan jumlah bakteri keseluruhan baik yang mati maupun yang hidup.

Sedangkan perhitungan bakteri secara tidak langsung digunakan untuk

menentukan jumlah bakteri yang hidup saja.

Setiap perhitungan jumlah bakteri baik secara langsung maupun tidak

21
langsung memiliki kelemahan masing-masing. Jumlah bakteri masih belum

mendekati hasil maksimal dikarenakan perhitungan yang melibatkan sel hidup

maupun sel mati bakteri, keterbatasan alat dan bahan saat perhitungan, keperluan

persiapan alat dan bahan yang cukup panjang, ketelitian penelitian oleh peneliti

dan lain-lain (Wibowo dan Andrivani, 2017)

Perhitungan bakteri secara turbidimetri (kekeruhan) dengan memakai alat

spektrofotometer adalah contoh perhitungan jumlah bakteri secara tidak langsung.

Fungsi alat Spektrofotometer dalam laboratorium adalah mengukur transmitan

atau absorbans suatu contoh yang dinyatakan dalam fungsi panjang gelombang.

Oleh karena itu perlu dilakukan pengembangan metode spektrofotometer yang

digunakan untuk perhitungan jumlah bakteri di laboratorium mikrobiologi

(Wahyuningsih dan Zulaika, 2018).

Metode turbidimetri merupakan cara yang cepat untuk menghitung jumlah

bakteri dalam suatu larutan dengan menggunakan alat spektrofotometer

Digunakan untuk uji antibakteri, dimana jumlah bakteri nya dihitung dengan

membandingkan kekeruhan suspensi bakteri dengan menggunakan larutan standar

McFarland. Larutan McFarland standar digunakan sebagai referensi untuk

menyesuaikan kekeruhan bakteri suspensi sehingga jumlah bakteri dalam kisaran

yang diberikan untuk membakukan mikroba pengujian (Fitri et al., 2015).

Metode Most Probable Number (MPN) merupakan metode perhitungan sel,

terutama untuk perhitungan bakteri Coliform berdasarkan jumlah perkiraan

terdekat yaitu perhitungan dalam range tertentu dengan merujuk pada tabel MPN.

Metode MPN digunakan secara luas di lingkungan sanitasi untuk menentukan

jumlah koloni Coliform di dalam air, susu dan makanan lainnya. Metode MPN

22
menggunakan medium cair di dalam tabung reaksi, dimana prinsipnya adalah

menghitung jumlah tabung positif yang ditandai dengan timbulnya kekeruhan dan

gas di dalam tabung durham. Metode MPN dilakukan dengan tiga tahap pengujian

yaitu uji penduga, uji penguat, dan uji pelengkap (Yusmaniar et al., 2017).

23
V. HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Pengenalan Alat Laboratorium

No Nama Alat Gambar Alat Fungsi Alat

.

1. Hot plate Untuk memanaskan atau

stirer menghangatkan
sekaligus mencampurkan
atau menghomogenkan
larutan kimia.

2. Gelas piala Untuk memanaskan dan

memprsiapkan bahan
kimia atau aquades
dalam pembuatan media
pembiakan mikroba atau
media lainnya.

3. Cawan petri Digunakan untuk

menumbuhkan
mikroorganisme.

24
4. Gelas ukur Untuk menakar aquades
dan bahan kimia yang
digunakan.

5. Batang Digunakan untuk

pengaduk mengaduk larutan kimia.

6. Pipet tetes Untuk mengambil larutan

bahan kimia,
menetralkan pH, atau
untuk keperluan lainnya.

7. Pinset Untuk memegang atau

mengambil bahan-bahan
yang bersifat padat.

25
8. Jarum ose Untuk menginokulasi
mikroba dari satu media
ke media lainnya.

9. Erlenmeyer Berfungsi sebagai tempat

dan sarana untuk
menuangkan aquades,
media, dan bahan-bahan
kimia.

10. Kaca Sebagai tempat objek

preparat atau preparat yang akan
diamati sehingga
objek akan lebih jelas
ketika diamati.

11. Timbangan Digunakan untuk

analitik menimbang sampai
satuan yang sangat kecil
(miligram).

26
12. Gunting Digunakan untuk
menggunting.

13. Kaca Berfungsi

pembesar untuk memperbesar suatu
benda atau obyek

14. Tabung Untuk wadah

reaksi menyimpan
mikroorganisme dalam
bentuk medium cair atau
padat, sebagai alat
pengenceran dan untuk
pengujian mikrobiologi.

15. Rak tabung Digunakan sebagai

reaksi tempat untuk meletakkan
tabung reaksi.

27
16. Botol kaca Digunakan untuk
menyimpan cairan dan
inkubasi mikroba dengan
cairan.

17. Sprayer Digunakan untuk

menyemprotkan cairan
untuk sterilisasi.

18. Oven Digunakan untuk

sterilisasi.

19. Entkas Digunakan untuk isolasi

mikroorganisme agar
tetap steril.

28
20. Spiritus Digunakan sebagai alat
pembakar.

21. Cork borrer Digunakan untuk

inokulasi dan juga
pelubang media.

22. Bunsen untuk pemanasan atau

pembakaran sebagai
bagian dari proses
analisa terhadap reaksi
senyawa tertentu.

23. Plastic wrap Untuk menutup atau

membungkus alat/media
praktikum.

29
24. Batang L Digunakan untuk
meratakan cairan di
permukaan media.

25. Mikroskop Untuk melihat sel

mikroba yang
sedemikian kecil
ukurannya melalui suatu
sistem lensa pembesar.

26. Vortex mixer Digunakan untuk

mencampur larutan.

27. Micro pipet Digunakan untuk

mengambil dan/atau
memindahkan cairan
dalam jumlah kecil
secara akurat.

30
 28. Penutup Untuk penutup objek
preparat atau preparat yang akan
diamati
sehingga ketika
dilakukan pengamatan
objek tidak
terkontaminasi dengan
media luar.

29. Colony Digunakan untuk

counter mempermudah
penghitungan koloni
yang tumbuh setelah
diinkubasi di dalam
cawan karena adanya
kaca pembesar.

5.2 Mikroskop

Gambar 1. Kapang tempe (dokumentasi Gambar 2. Kapang tempe (Budiono, 2016)

pribadi, 2023)

31
 Gambar 3. Hasil pengamatan Lactobacillus Gambar 4. Saccharomyses sp. tapai
casei yakult (Mawaddana, 2015) (Kurniasari et al., 2019)

Kapang (Mold) adalah fungi multiseluler yang mempunyai filamen, dan

pertumbuhannya pada substrat mudah dilihat karena penampakannya yang

berserabut seperti kapas. Pertumbuhannya mula-mula berwarna putih, tetapi jika

spora telah timbul akan terbentuk berbagai warna tergantung dari jenis kapang

(Ali, 2005). Menurut Fardiaz (1992) kapang terdiri dari suatu thallus yang

tersusun dari filamen yang bercabang yang disebut hifa. Kumpulan dari hifa

membentuk suatu jalinan yang disebut miselium.

Dari hasil pengamatan tempe, diperoleh hasil bahwa Rhizopus yang hifanya

membentuk rhizoid menempel pada substrat. Rhizopus adalah genus jamur benang

yang termasuk filum Zygomycota ordo Mucorales. Miselium dari Rhizopus yang

juga disebut stolon menyebar diatas substratnya karena aktivitas dari hifa

vegetatif.

Hasil pengamatan mikroskopik yakult menunjukkan bahwa bakteri

berbentuk batang (basil) dan bakteri tersebut berwarna biru-ungu yang

menunjukkan bakteri tersebut merupakan bakteri gram positif. Lactobacillus casei

memiliki bentuk basil dan merupakan bakteri gram positif (Breed, 1957). Hasil

dari pengamatan air tape adalah didapatkan khamir (fungi bersel satu yang

mikroskopis) yang menyebar merata dan berjumlah banyak dan merupakan

32
khamir Saccharomyces cerevisiae. Ada 2 bentuk yang didapat, yaitu oval dan

bulat namun lebih dominan bentuk bulat. Khamir tidak mempunyai flagella

sehingga tidak dapat melakukan gerakan aktif (Natsir, 2008).

5.3 Sterilisasi

Sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara, yaitu sterilisai secara fisik,

sterilisasi secara mekanik, dan sterilisasi dengan cara kimia. Sterilisasi secara fisik

dapat dilakukan dengan pemijaran, dengan udara kering, dan dengan uap panas

bertekanan. Sterilisasi mekanik dilakukan dengan cara penyaringan (filtrasi).

Sementara sterilisasi dengan cara kimia dapat dilakukan dengan penggunaan

alkohol 70-90% dan formaldehida.

Untuk pemijaran dapat digunakan api gas tidak berwarna atau pembakar

spiritus. Caranya sangat sederhana, cepat dan menjamin sterilitas dari bahan yang

disterilkan. Namun, penggunaannya sangat terbatas hanya pada beberapa alat saja.

Alat-alat yang dapat disterilkan dengan cara ini adalah yang terbuat dari logam.

Bagian alat yang terbuat dari besi dipanggang di atas api bunsen hingga pijar dan

sebelum dipijari, bagian logam yang akan disterilisasi dicelupkan ke dalam larutan

alkohol terlebih dahulu agar lebih steril.

Sterilisasi dengan pemanasan kering dapat dilakukan dengan menggunakan

lemari pengering atau oven. Menurut Ma’at (2009) hal-hal yang perlu

diperhatikan dalam penggunaan lemari pengering adalah sebagai berikut.

a. Jika mensterilkan alat gelas, proses pemanasan dan pendinginan harus

dikerjakan berangsur-angsur supaya tidak pecah

b. Panas kerng ini penetrasinya sangat lambat terhadap bahan yang berbentuk

bubuk atau minyak, oleh karena itu, untuk bubuk sebaiknya hanya

33
 mempunyai ketebalan 0,5 cm dalam wadah yang tidak lebih dari 30 ml,

sedangkan bahan berupa minyak disterilkan dalam wadah-wadah kecil.

c. Supaya aliran udara tidak terlambat sebaiknya alat sterilisator ini tidak diisi

terlalu penuh

d. Besarnya lemari pengering disesuaikan dengan jumlah bahan yang akan

disterilkan karena udara panas merupakan penghantar panas yang buruk.

e. Menurut pernyelidikan, sterilisasi dengan udara kering, tidak selalu boleh

dianggap bahwa suhu dalam lemari merata ke seluruh bagian, artinya suhu

yang terbaca pada termometer luar tidak selalu sama dengan suhu vang

ada di dalamnva. Oleh karena itu dianjurkan terutama untuk alat yang

tahan panas untuk menambah suhu sterilisasi dengam 20 OC.

f. Dianjurkan untuk meletakkan alat yang disterilkan tegak lurus dengan arah

memancarnya udara panas dan didirikan terbalik sehingga udara dingin

dapat keluar dan pehanasan dapat tercapai lebih efisien daripada jika alat

dibaringkan.

Cara sterilisasi lain yang lebih efektif ialah dengan uap panas bertekanan.

Cara ini dilakukan dengan menggunakan alat yang disebut autoklaf. Pada

sterilisasi dengan cara ini selalu diusahakan agar uap air tidak bercampur dengan

udara karena kapasitas kalor udara sangat kecil sehingga apabila tercampur

kapasitas campuran tersebut akan menjadi kecil pula.

Di samping itu, kadar air (kelembapan) juga akan menurun jika bercampur

dengan udara, jadi semata-mata bukan karena menurunnya suhu saja. Manfaat uap

air dalam cara sterilisasi ini hanya tampak apabila uap air kontak langsung dengan

bahan/alat yang akan disterilkan. Masalah utama pada pemakaian autoklaf adalah

34
pembuangan udara, terjadinya panas yang berlebihan, bahan yang disterilkan

menjadi basah dan kemungkinan terjadin kerusakan bahan.

Keberhasilan sterilisasi dengan autoklaf sangat bergantung pada kualitas

uap air. Kualitas uap air adalah berat dari uap yang terdapat dalam campuran dari

uap air jenuh dan air. Jika kualitas uap 97%, campuran uap terdiri atas 3 bagian

berat air jenuh dan 97 bagian berat uap jenuh. Uap yang ideal untuk sterilisasi

adalah 100% uap jenuh. Penyebab menurunnya kualitas uap adalah kualits boiler,

perangkat uap yang kurang baik dan terjadinya kondensasi pada pipa yang dilalui

oleh uap air. Kualitas uap memengaruhi hasil sterilisasi dan kondisi bahan yang

disterilkan (Ma’at, 2009).

5.4 Pembuatan Media NA dan PDA

Gambar 5. Media PDA Gambar 6. Media NA

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas berbagai campuran nutrisi (zat

makanan atau nutrient) yang dipakai untuk menumbuhkan dan

mengembangbiakan, mengisolasi, memperbanyak, menguji sifat-sifat firiologis

dan menghitung jumlah mikroba. Pada praktikum ini, kegiatan yang dilakukan

adalah pembuatan media PDA (Potato Dextrose Agar) dan NA (Nutrient Agar).

35
PDA dan NA sendiri merupakan media padat di mana dilakukan penambahan

agar-agar.

Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang umum digunakan

untuk menumbuhkan jamur yang terbuat dari bahan utama kentang dan dextrose

sebagai nutrisi utama pertumbuhan jamur. Potato dextrose agar merupakan salah

satu media yang baik digunakan untuk membiakkan suatu mikroorganisme, baik

itu berupa cendawan/fungsi, bakteri, maupun sel mahluk hidup. Potato dextrose

agar merupakan paduan yang sesuai untuk menumbuhkan biakan.

Menurut Octavia dan Wantini (2017) berdasarkan komposisinya, PDA

termasuk dalam media semi sintetik karena terususun atas bahan alami kentang

dan bahan sintetik dextrose dan agar. Kentang mengandung karbohidrat, vitamin,

dan mikronutrien lain yang dapat dimanfaatkan oleh cendawan, sedangkan

dextrose sebagai karbohidrat sederhana menjadi sumber energi yang dapat segera

digunakan. Komponen agar dalam media berfungsi sebagai bahan pemadat.

Masing-masing dari ketiga komponen tersebut sangat diperlukan bagi

pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme terutama cendawan. Selain itu,

pada pembuatan PDA dalam praktkum ini juga digunakan amoxicillin yang

berfungsi sebagai antibiotik untuk menghambat pertumbuhan bakteri dan

menghindari terjadinya kontaminasi dengan nikroba di sekitar.

Selain membuat PDA, pada praktikum ini media padat lain yang dibuat

adalah NA (Nutrient Agar). NA (Nutrient Agar) merupakan medium pertumbuhan

umum yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengisolasi berbagai jenis

mikroorganisme dengan beragam sifat yang tidak terlalu membutuhkan banyak

nutrisi. Nutrient agar terbuat dari campuran ekstrak daging dan pepton dengan

36
menggunakan agar sebagai pemadat. Dalam hal ini agar digunakan sebagai

pemadat, karena sifatnya mudah membeku dan mengandung karbohidrat yang

berupa galaktam sehingga tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme dan

ekstrak beef dan pepton digunakan sebagai bahan dasar karena merupakan sumber

protein nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh

mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang (Fatmariza et al., 2017).

Perbedaan PDA dan NA ialah PDA merupakan media yang sering digunakan

untuk menumbuhkan dan mengembangbiakan yeast dan kapang, sedangkan NA

merupakan media yang sering digunakan untuk menumbuhkan dan

mengembangbiakan bakteri.

5.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

Gambar 7. Isolasi mikroba menggunakan Gambar 8. Isolasi mikroba menggunakan

larutan induk hari ke-1 (Dokumentasi pribadi, larutan 10-1 hari ke-1 (Dokumentasi pribadi,
2023) 2023)

37
 Gambar 9. Isolasi mikroba menggunakan Gambar 10. Isolasi mikroba menggunakan
larutan 10-2 hari ke-1 (Dokumentasi pribadi, larutan 10-3 hari ke-1 (Dokumentasi pribadi,
2023) 2023)

Gambar 11. Isolasi mikroba menggunakan Gambar 12. Isolasi mikroba menggunakan
larutan induk hari ke-2 (Dokumentasi pribadi, larutan 10-1 hari ke-2 (Dokumentasi pribadi,
2023) 2023)

Gambar 13. Isolasi mikroba menggunakan Gambar 14. Isolasi mikroba menggunakan
larutan 10-2 hari ke-2 (Dokumentasi pribadi, larutan 10-3 hari ke-2 (Dokumentasi pribadi,
2023) 2023)

38
 Gambar 15. Isolasi mikroba menggunakan Gambar 16. Isolasi mikroba menggunakan
larutan induk hari ke-3 (Dokumentasi pribadi, larutan 10-1 hari ke-3 (Dokumentasi pribadi,
2023) 2023)

Gambar 17. Isolasi mikroba menggunakan Gambar 18. Isolasi mikroba menggunakan
larutan 10-2 hari ke-3 (Dokumentasi pribadi, larutan 10-3 hari ke-3 (Dokumentasi pribadi,
2023) 2023)

Gambar 19. Isolasi Mikroba dengan metode gores (Dokumentasi pribadi, 2023)

Pada praktikum ini, dilakukan uji isolasi mikroba menggunakan metode

agar tuang. Metode agar tuang pada dasarnya adalah menginokulasikan agar steril

yang telah didinginkan sampai suhu 45-50 oC di mana agar masih dalam bentuk

cair dengan suspensi bahan yang mengandung bakteri dan selanjutnya dituangkan

39
ke dalam cawan petri. Bahan yang digunakan adalah NA dengan uji menggunakan

larutan induk dari yakult dan larutan yang dibuat dari pengenceran bertingkat.

Pada saat pengisolasian, uji dilakukan di dalam entkas guna menjaga kesterilan

alat dan bahan uji. Hal ini sesuai dengan pendapat Alam et al. (2013) yang

menyatakan bahwa pada pemindahan bakteri dari media lama ke media baru

diperlukan ketelitian dan kesterilan pada alat-alat yang digunakan supaya dapat

dihindari terjadinya kontaminasi. Pada pemindahan bakteri ke media cawan petri

yang baru, maka setelah itu, cawan petri tersebut harus dibalik, hal ini berfungsi

untuk menghindari adanya tetesan air yang mungkin melekat pada dinding tutup

cawan petri.

Pada hari pertama, sample uji belum menunjukkan adanya perubahan, masih

berwarna kuning keruh. Pada hari ke-2, cawan mulai memiliki uap-uap air di

mana pada cawan dengan isolasi menggunakan larutan induk memiliki lebih

banyak uap dan mulai muncul bintik-bintik putih pada media. Pada hari-3, uap

yang muncul semakin banyak dan bintik-bintik putih yang menandakan adanya

mikroba mulai terlihat jelas. Pada cawan dengan isolasi menggunakan larutan 10 -3

bintik-bintik putih terlihat lebih jelas dan lebih banyak daripada bintik putih pada

cawan uji lain.

Metode Cawan Tuang (Pour Plate) merupakan teknik lain yang

dapat digunakan untuk mendapatkan koloni murni mikrooganisme.

Kelemahan metode ini adalah membutuhkan waktu dan bahan yang lama dan

banyak, akan tetapi tidak memerlukan keterampilan tinggi. Biarkan campuran

diencerkan dengan menggunakan medium agar yang telah dicairkan dan

didinginkan (Angelia, 2020).

40
 Pada pengujian dengan metode gores, terdapat koloni-koloni bakteri yang

membentuk warna putih mengikuti bekas goresan yang dilakukan pada media

sebelumnya. Hal ini sesuai dengan pendapat Jutono et al. (1980) yang

menyatakan bahwa setelah inkubasi maka pada bekas goresan akan tumbuh

koloni-koloni terpisah yang mungkin berasal dari satu sel mikroba sehingga dapat

dikultur lebih lanjut. Cara ini pada dasarnya ialah menggoreskan suspensi bahan

yang mengandung mikroba pada permukaan medium agar yang sesuai pada

cawan petri.

5.6 Pewarnaan Bakteri

Gambar 20. Hasil pewarnaan bakteri Bacillus sp. (Dokumentasi pribadi, 2023)

Pada praktikum ini, pewarnaan bakteri dilakukan pada isolat bakteri

Bacillus sp. dengan menggunakan zat warna kristal violet, dan safranin.

Pewarnaan yang dilakukan menghasilkan mikroskopi bakteri Bacillus sp. yang

terlihat berwarna ungu. Hal tersebut menandakan bahwa bakteri Bacillus sp.

merupan bakteri gram positif. Menurut Farida et al. (2009) secara garis besar

berdasar pengecatan gram, bakteri dikelompokkan menjadi 2, yaitu gram positif

dan gram negatif. Bakteri gram positif adalah bakteri yang

41
mempertahankan zat warna gram A yang mengandung kistal violet, sewaktu

proses pewarnaan gram. Bakteri jenis ini akan berwarna ungu di bawah

mikroskop, sedangkan bakteri gram negatif akan berwarna merah atau merah

muda, karena warna ungu dapat dilunturkan kemudian mengikat cat gram D

sebagai warna kontras.

Perbedaan klasifikasi antara kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan

pada perbedaan struktur dinding sel bakteri. Pada bakteri gram positif

susunan lebih sederhana terdiri atas 2 lapis, tetapi memiliki lapisan

peptidoglikan yang tebal sementara pada dinding sel bakteri lebih kompleks

terdiri atas 3 lapis namun lapisan peptidoglikan tipis (Beveridge, 1999).

Pewarnaan bakteri dapat digolongkan menjadi empat, yaitu pewarnaan sederhana,

pewarnaan diferensial, pewarnaan struktural, dan pewarnaan untuk menguji

adanya komponen-komponen tertenetu di dalam sel. Pewarnaan yang paling

mudah dan yang paling sering dilakukan yakni pewarnaan gram yang termasuk ke

dalam pewarnaan diferensial dan pewarnaan endsopsora yang merupakan

pewarnaan struktural. Menurut Rostinawati (2008) pewarnaan gram digunakan

untuk mengetahui morfologi sel bakteri serta untuk membedakan bakteri gram

positif dan gram negatif.

42
5.7 Metode Perhitungan Mikroba

Gambar 21. Hasil perhitungan mikroba menggunakan colony counter (Dokumentasi pribadi, 2023)

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Jumlah 344 246 233 284 201 164

Koloni

Pada praktikum ini, penghitungan bakteri dilakukan terlebih dahulu dengan

membuat isolat bakteri melalui pengenceran larutan bertingkat hingga didapat 6

isolat yang sudah membentuk koloni-koloni bakteri. Perhitungan mikroba

dilakukan dengan menggunakan colony counter. Colony Counter adalah

perangkat atau alat yang digunakan untuk menghitung jumlah koloni

mikroorganisme yang tumbuh dalam suatu medium. Alat ini biasa digunakan

dalam bidang mikrobiologi untuk mengukur keberhasilan pembiakan

mikroorganisme, menentukan jumlah mikroorganisme dalam sampel, atau

mengevaluasi efektivitas suatu proses sterilisasi.

Pada isolat perhitungan isolat pertama yang dibuat dengan pengenceran

larutan bertingkat 10-1 jumlah koloni bakteri yang ditemukan yakni sebanyak 344

koloni, pada isolat kedua dengan pengenceran 10 -2 jumlah koloni bakteri yang

ditemukan sebanyak 246 koloni, pada pengenceran 10 -3 jumlah koloni yang

43
ditemukan yakni sebanyak 233 koloni, pada pengenceran 10 -4 jumlah koloni yang

ditemukan yakni sebanyak 284 koloni, pada pengenceran 10 -5 jumlah koloni yang

ditemukan yakni sebanyak 201 koloni, dan pada pengenceran 10 -6 jumlah koloni

yang ditemukan yakni sebanyak 164 koloni. Namun, cawan yang digunakan

dalam perhitungan yakni cawan yang memiliki 30-300 koloni sehingga cawan

pertama dengan pengenceran 10-1 tidak dimasukkan ke dalam perhitungan pada

praktikum ini. Menurut Natsir (2003) jumlah bakteri setiap cawan petri antara 30-

300 koloni, jika tidak ada koloni yang memenuhi kriteria maka dipilih yang

jumlahnya mendekati 300.

Menurut Sukmawati dan Hardianti (2018) jumlah koloni bakteri semakin

berkurang bersamaan dengan tingkat pengenceran yang tinggi. Jumlah koloni

tersebar pada tiap sampel berdasar pada prinsip pengenceran, yaitu semakin tinggi

faktor pengenceran maka semakin rendah jumlah koloni bakteri, dan semakin

rendah faktor pengenceran, maka semakin tinggi jumlah bakteri. Namun, pada

perhitungan bertambah dratis menjadi 284 koloni sedangkan pada pengenceran

10-3 jumlah koloni yang ditemukan sebanyak 233 koloni. Pada pengenceran 10 -5

jumlah koloni kembali menurun menjadi sebanyak 201 koloni begitu pula pada

pengenceran 10-6. Hal tersebut diduga terjadi karena adanya alat yang tidak atau

kurang steril pada saat dilakukannya isolasi mikroba.

44
VI. PENUTUP
VI.1 Kesimpulan

VI.1.1 Pengenalan Alat Laboratorium

Terdapat berbagai macam-macam alat yang digunakan di laboratorium yang

gunanya menunjang semua kegiatan praktikum yang sedang kita dilakukan. Dari

pengenalan alat laboratoriun tersebut kita lebih memahami fungsi-fungsi serta

tentunya memahami bagaimana penggunaan alat-alat tersebut. Serta tak lupa pula

alat-alat laboratorium tersebut haruslah kita jaga kebersihannya.

VI.1.2 Mikroskop

Mikroskop adalah alat yang sering digunakan peneliti untuk melihat benda

yang berukuran kecil atau struktur dari material. Bagian-bagian mikroskop

dikelompokan menjadi 3 bagian, yaitu bagian optik, penerangan, dan mekanis.

Dari hasil pengamatan tempe, diperoleh hasil bahwa Rhizopus yang hifanya

membentuk rhizoid menempel pada substrat. Dari hasil pengamatan yakult

didapatkan adanya bakteri Lactobacillus casei yang merupakan bakteri gram

positif. Hasil dari pengamatan air tape adalah didapatkan khamir (fungi bersel satu

yang mikroskopis) yang menyebar merata dan berjumlah banyak dan merupakan

khamir Saccharomyces cerevisiae.

VI.1.3 Sterilisasi

Sterilisasi adalah suatu proses pemusnahan semua bentuk mikroorganisme,

baik yang berbentuk vegetatif maupun yang berbentuk spora. Sterilisasi dapat

dilakukan dengan 3 cara, yaitu sterilisai secara fisik, sterilisasi secara mekanik,

dan sterilisasi dengan cara kimia. Sterilisasi secara fisik dapat dilakukan dengan

pemijaran, dengan udara kering, dan dengan uap panas bertekanan. Sterilisasi

45
mekanik dilakukan dengan cara penyaringan (filtrasi). Sementara sterilisasi

dengan cara kimia dapat dilakukan dengan penggunaan alkohol 70-90% dan

formaldehida.

VI.1.4 Pembuatan Media NA dan PDA

Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang umum digunakan

untuk menumbuhkan jamur yang terbuat dari bahan utama kentang dan dextrose

sebagai nutrisi utama pertumbuhan jamur. NA (Nutrient Agar) merupakan

medium pertumbuhan umum yang digunakan untuk menumbuhkan dan

mengisolasi berbagai jenis mikroorganisme dengan beragam sifat yang tidak

terlalu membutuhkan banyak nutrisi. PDA digunakan untuk menumbuhkan dan

mengembangbiakan yeast dan kapang, sedangkan NA digunakan untuk

menumbuhkan dan mengembangbiakan bakteri.

VI.1.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

Metode Cawan Tuang (Pour Plate) merupakan teknik lain yang

dapat digunakan untuk mendapatkan koloni murni mikrooganisme.

Kelemahan metode ini adalah membutuhkan waktu dan bahan yang lama dan

banyak, akan tetapi tidak memerlukan keterampilan tinggi. Berdasarkan hasil

percobaan, disimpulkan bahwa semakin tinggi larutan bertingkat yang digunakan,

semakin efektif larutan tersebut untuk digunakan sebagai media isolasi.

VI.1.6 Pewarnaan Bakteri

Pewarnaan berfungsi untuk mengamati struktur bagian dalam sel yang

ukuran selnya relatif kecil. Pada pewarnaan isolat bakteri Bacillus sp. didapati

bakteri tersebut berwarna ungu yang menandakan bahwa bakteri tersebut

46
termasuk ke dalam bakteri gram positif. Secara garis besar berdasar pengecatan

gram, bakteri dikelompokkan menjadi 2, yaitu gram positif dan gram negatif.

Bakteri gram positif akan berwarna ungu di bawah mikroskop, sedangkan

bakteri gram negatif akan berwarna merah atau merah muda.

VI.1.7 Metode Perhitungan Mikroba

Perhitungan jumlah bakteri merupakan salah satu cara yang dilakukan untuk

bisa mengetahui berapa banyak koloni bakteri yang terdapat pada suatu media,

baik itu koloni sel yang hidup maupun koloni sel bakteri yang mati. Metode yang

digunakan adalah perhitungan secara langsung dan perhitungan secara tidak

langsung. Perhitungan jumlah bakteri secara langsung digunakan untuk

menentukan jumlah bakteri keseluruhan baik yang mati maupun yang hidup.

Sedangkan perhitungan bakteri secara tidak langsung digunakan untuk

menentukan jumlah bakteri yang hidup saja.

VI.2 Saran

VI.2.1 Pengenalan Alat Laboratorium

Saran dalam praktikum kali ini yaitu diharapkan kepada praktikan agar lebih

memperhatikan alat-alat yang ada dilaboratorium supaya tidak terjadi kerusakan

serta praktikan harus sudah memahami tentang bagaimana cara menggunakan

peralatan yang ada dilaboratorium sehingga praktikum dapat berjalan dengan

lancar.

VI.2.2 Mikroskop

Penulis menyarankan sebaiknya di dalam praktikum semua bahan

praktikum yang disediakan diperiksa kembali untuk menghindari kesalahan

47
sehingga tidak mengganggu proses praktikum dan pengamatan dapat berjalan

dengan lancar.

VI.2.3 Sterilisasi

Penulis menyarankan agar saat kegiatan sterilisasi dilakukan, langkah-

langkah sterilisasi dilakukan dengan cermat dan teliti sehingga dapat menghindari

terkontaminasinya alat-alat yang sudah disterilisasi.

VI.2.4 Pembuatan Media NA dan PDA

Penulis menyarankan agar saat pembuatan media dilakukan, praktikan

memperhatikan kesterilan bahan-bahan dan alat-alat yang digunakan untuk

membuat medium sehingga medium yang dibuat tidak terkontaminasi.

VI.2.5 Pengenalan Mikroba dan Isolasi Mikroba

Penulis menyarankan agar saat proses pengisolasian dilakukan, semua alat

dan bahan yang digunakan dipastikan kesterilannya sehingga bakteri yang

diisolasi tidak terkontaminasi oleh bakteri lain.

VI.2.6 Pewarnaan Bakteri

Adapun saran terhadap praktikum ini yakni saat melakukan pewarnaan

bakteri, sterilisasi yang dilakukan benar-benar steril sehingga tidak terdapat

bakteri yang masih hidup saat dilakukan pewarnaan dan diamati.

VI.2.7 Metode Perhitungan Mikroba

Adapun saran terhadap praktikum ini yakni saat melakukan perhitungan,

praktikan memastikan bahwa semua koloni yang terbentuk sudah terhitung

sehingga data yang didapatkan benar-benar sesuai.

48
 DAFTAR PUSTAKA

Alam, M. S., P. R. Sarjono dan A. L. N. Aminin. 2013. Isolasi bakteri selulolitik

termofilik kompos pertanian Desa Bayat, Klaten, Jawa Tengah.

Cheminfo. 1 (1): 190-193.

Ali, A. 2005. Mikrobiologi Dasar Jilid I. State University of Makassar Press.

Makassar.

Angelia, I. O. 2020. Penggunaan metode cawam tuang terhadap uji mikroba pada

tepung kelapa. Journal Agritech of Science. 4 (1): 43-51.

Beveridge, T. J. 1999. Structure of gram-negative cell walls and their derived

membrane vesicles. Journal Bacteriol. 181 (16): 472-533.

Breed, R. S., E. G. D. Murray dan N. R. Smith. 1957. Bergey's Manual of

Determinative Bacteriology. The Williams & Wilkins Company. US.

Budiono, R. A. 2016. Pengaruh Jenis Kapang terhadap Aktivitas Fermentasi

TempeSaga Pohon (Adenantera pavonina L.). Skripsi (Tidak

dipublikasikan). UniversitasIslam Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta.

Cahyani, V. R. 2009. Pengaruh metode sterilisasi tanah terhadap status hara,

populasi mikrobiota, potensi infeksi mikorisa dan pertumbuhan

tanaman. Jurnal Ilmiah Ilmu Tanah dan Agroklimatologi. 6 (1): 43-52.

Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Deepublisher. Jakarta.

Dwidjoseputro, D. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Malang.

Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. PT Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.

Farida, J. R., D. A. Citra dan B. Nirwani. 2009. Manfaat sirih merah (Piper

procatum) sebagai agen anti bakterial terhadap bakteri gram positif dan

49
 gram negatif. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia. 6 (2): 234-

243.

Fatmariza, M., N. Inayati dan Rohmi. 2017. Tingkat kepadatan media nutrien

agar terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal

Analis Medika Bio Sains. 4 (2): 69-73.

Febriza, M. A., Q. J. Adrian dan A. Sucipto. 2021. Penerapan air dalam media

pembelajaran klasifikasi bakteri. Jurnal Program Studi Pendidikan

Biologi. 11 (1): 10-18.

Fifendy, M. 2017. Mikrobiologi Edisi Pertama. Kencana. Depok.

Fitri. K. S. A., M. U. K. Agung J. dan Meika. 2015. Larutan McFarland standar

digunakan sebagai referensi untuk menyesuaikan kekeruhan bakteri

suspensi sehingga jumlah bakteri dalam kisaran yang diberikan untuk

membakukan mikroba pengujian. Jurnal Akuatika. 6 (2): 128-139.

Hadioetomo, R. S. 1990. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. PT Gramedia.

Jakarta.

Hadiutomo. 1990. Mikrobiologi Dasar Jilid I. Erlangga.Jakarta.

Hendrawati, T. Y. dan S. Utomo. 2017. Optimasi suhu dan waktu sterlisasi

padakualitas susu segar di Kabupaten Boyolali. Jurnal Teknologi. 9 (2):

98-101.

Jawetz, E., J. Melnick dan Adelberg. 2004. Mikrobiologi Kedokteran (Edisi 23).

EGC. Jakarta.

Jutono, J. Spedarsono, S. Hartadi, S. Kabirun dan D. Suhardi. 1980. Pedoman

Praktikum Mikrobiologi Umum. UGM Press. Yogyakarta.

50
Kharisma, A. dan M. Abdul. 2012. Kelimpahan bakteri Vibrio sp. Pada air

pembesaran udang vannamei (Litopenaeus vannamei) sebagai dekteksi

dini serangan penyakit vibriosis. Jurnal Ilmiah Perikanan dan

Kelautan. 4 (2): 129-134.

Kurniasari, D., C. R. Iswana, V. A. Tus, A. P. Sari, S. N. Qomariyah, A. D.

Marita dan D. Oktaviana. 2019. Pengamatan Mikroskopis Khamir,

Kapang, dan Mikroba Air Tercemar. Laporan penelitian (Tidak

dipublikasikan). Akademi Farmasi Surabaya. Surabaya.

Ma'at, S. 2009. Sterilisasi dan Disinfeksi. Airlangga University Press. Surabaya.

Mawaddana, Q. 2015. Uji Viabilitas Mikroenkapsulasi Lactobacillus casei

Menggunakan Matrik Natrium Alginat. Skripsi (Tidak dipublikasikan).

UIN Syarif Hidayatullah. Jakarta.

Munifah, I. 2008. Prospek pemanfaatan alga laut untuk industri. Squalen. 3 (2):

58-62.

Natsir. 2003. Mikribiologi Farmasi Dasar. Universitas Hasanuddin. Makassar.

Octavia, A. dan S. Wantini. 2017. Perbandingan pertumbuhan jamur Aspergillus

flavus pada media PDA (Potato Dextrose Agar) dan media alternatif

singkong (Manihot esqulenta Crantz). Jurnal Analis Kesehatan. 6 (2):

625-631.

Raharjo. 2017. Pengelolaan alat bahan dan laboratorium kimia. Jurnal Kimia

Sains dan Aplikasi. 20 (2):99-104.

Rahayu, U. 2008. Pengujian agar sebagai media mikrobiologi. Buletin Teknik

Litkayasa Akuakultur. 7 (1): 73-78.

51
Respati, S. M. B. 2008. Macam-macam mikroskop dan cara menggunakannya.

Moementum. 4 (2): 42-44.

Rostinawati, T. 2008. Skrining dan Identifikasi Bakteri Penghasil Enzim Kitinase

dari Air Laut di Perairan Pantai Pondok Bali. Laporan Penelitian (Tidak

dipublikasikan). Universitas Padjajaran. Jatinagor.

Sadjad. 1999. Parameter Pengujian Vigor Benih dan Komparatif ke Simulatif.

Grasino. Jakarta.

Safitri, M. F. dan Swarastuti, A. 2011. Kualitas kefir berdasarkan konsentrasi

kefir grain. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan. 2 (2): 11-15.

Selian, L. S., Warganegara, E. dan Apriliana, E. 2013. Uji Most Probable Number

(MPN) dan Deteksi Bakteri Koliform Dalam Minuman Jajanan yang

dijual Di Sekolah Dasar Kecamatan Sukabumi Kota Bandar Lampung.

Laporan Penelitian (Tidak dipublikasikan). Universitas Lampung.

Lampung.

Sucitrayani, P. T. E., I. B. M. Oka dan M. Dwinata. 2014. Prevalensi infeksi

protozoa saluran pencernaan pada kucing lokal (Felis catus) di

Denpasar. Buletin Veteriner Udayana. 6 (2): 153-159.

Suherdi, D. 2009. Mikroskop Pedagogik. Divisi Penerbitan CELTICS. Bandung.

Sukmawati dan F. Hardianti. 2018. Analisis total plate count (TPC) mikroba pada

ikan asin kakap di Kota Sorong Papua Barat. Jurnal Biodjati. 3 (1): 72-

78.

Suparti. 2019. Mikroskop. ALPRIN. Semarang.

Waluyo, L. 2004. Mikrobiologi Umum. UMM Press. Malang.

52
Wahyuningsih, N., dan E. Zulaika. 2018. Perbandingan pertumbuhan bakteri

selulolitik pada media nutrient broth dan carboxy methyl cellulose.

Jurnal Sains dan Seni ITS. 7 (2): 36- 38.

Wati, D. S. dan Rukmanasari. 2013. Pembuatan Biogas dari Limbah Cair Industri

Bioetanol Melalui Proses Anaerob. Universitas Diponegoro Press.

Semarang.

Wibowo, A. P. W. dan R. Andrivani. 2016. Perhitungan jumlah bakteri

Escherichia coli dengan pengolahan citra melalui metode thresholding

dan counting morphology. Jurnal Ilmiah Teknologi Informasi Terapan.

2 (3): 235-243.

Widiyatmoko, A. 2008. Mengenal Laboratorium Biologi. ALPRIN. Semarang.

Williamson, C. E. 1973. Control of soul-inhabiting pest of the garden.

Handbookon soils. 12 (1): 51-59.

Yanuartono, H. Purnamaningsih, S. Indarjulianto, A. Nururrozi, S. Raharjo dan N.

Haribowo. 2019. Perlakuan biologis dengan memanfaatkan fungi untuk

meningkatkan kualitas pakan ternak asal hasil samping pertanian.

Jurnal Peternakan Sriwijaya. 8 (2): 18-34.

Yusmaniar, Wardiyah dan K. Nida. 2017. Mikrobiologi dan Parasitologi. Pusdik

SDM Kesehatan. Jakarta.

Zahid, M. 2010. Pemilihan Bahan Kimia yang Tepat untuk Dekontaminasi di

Dalam Laboratorium. Puspa Swara. Depok.

53