LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM

PENGANTAR BIOTEKNOLOGI

OLEH :

IKA WAHYUNINGSIH

2006126296

JURUSAN AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS RIAU

PEKANBARU

2021
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan segala nikmatNya
sehingga saya diberi kesempatan untuk menyelesaikan laporan akhir praktikum ini
dengan tepat waktu.

Adapun penyusunan laporan ini adalah dengan maksud untuk memenuhi

tugas praktikum mata kuliah Pengantar Bioteknologi. Terimakasih kepada dosen
dan terimakasih juga saya ucapkan kepada seluruh asisten dosesn yang telah
membimbing dalam praktikum.

Saya menyadari bahwa laporan yang saya buat ini masih jauh dari kata
sempurna baik dari segi penyusunan, Bahasa, maupun penulisannya. Oleh karena
itu, saya sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua
pembaca guna menjadai acuan agas saya bisa menjadi lebih baik di masa
mendatang.

Semoga laporan ini bisa menambah wawasan para pembaca dan bisa
bermanfaat untuk pengembangan ilmu pengetahuan.

Pekanbaru, November 2021

Ika Wahyuningsih

ii
 DATAR ISI

KATA PENGANTAR… ...................................................................................... ii

DATAR ISI ............................................................................................................ iii
DAFTAR GAMBAR ...............................................................................................v
I. PENDAHULUAN ............................................................................................1
1.1 Latar Belakang ...............................................................................................1
1.2 Tujuan .............................................................................................................2
II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................................3
2.1 Bioteknologi ...................................................................................................3
2.2 Pembuatan Kompos ........................................................................................4
2.4 Pengenalan Alat Dan Bahan Serta Pembuatan Media ....................................6
2.5 Sterilisasi Dan Penanaman Media ..................................................................7
2.6 Subkultur Dan Pengamatan Kultur Jaringan ..................................................8
2.7. Aklimatisasi ...................................................................................................9
Ⅲ METODOLOGI ................................................................................................10
3.1 Waktu Dan Tempat.......................................................................................10
3.2 Alat Dan Bahan ............................................................................................10
3.2.1 Asistensi .................................................................................................10
3.2.2 Pembuatan Kompos ...............................................................................10
3.2.3 Pembuatan Larutan Stok Media .............................................................10
3.2.4 Pengenalan Alat dan Bahan serta Pembuatan Media .............................10
3.2.5 Sterilisasi dan Penanaman Media ..........................................................11
3.2.6 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan ..........................................11
3.2.7 Aklimatisasi ...........................................................................................11
3.3 Cara Kerja .....................................................................................................11
3.3.1 Asistensi .................................................................................................11
3.3.2 Pembuatan Kompos ...............................................................................12
3.3.3 Pembuatan Larutan Stok Media .............................................................12
3.3.4 Pengenalan Alat dan Bahan serta Pembuatan Media .............................13
3.3.5 Sterilisasi dan Penanaman Media ..........................................................14
3.3.6 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan ..........................................14
3.3.7 Aklimatisasi ...........................................................................................15
Ⅳ HASIL DAN PEMBAHASAN.........................................................................16
4.1 Hasil..............................................................................................................16
4.2 Pembahasan ..................................................................................................17
iii
 4.2.1 Pembuatan Kompos ...............................................................................17
4.2.2 Pembuatan Larutan Stok Media .............................................................18
4.2.3 Pengenalan Alat dan Bahan Serta Pembuatan Media Perbanyakan
Kultur Jaringan ...............................................................................................19
4.2.4 Sterilisasi dan Penanaman Eksplan ........................................................20
4.2.5 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan ..........................................21
4.2.6 Aklimatisasi ...........................................................................................22
Ⅴ PENUTUP ..........................................................................................................24
5.1 Kesimpulan ...................................................................................................24
5.1.1 Pembuatan Kompos ...............................................................................24
5.1.2 Pembuatan Larutan Stok Media .............................................................24
5.1.3 Pengenalan Alat dan Bahan serta Pembuatan Media .............................24
5.1.4 Sterilisasi dan Penanaman Esksplan ......................................................24
5.1.5 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan ..........................................24
5.1.6 Aklimatisasi ...........................................................................................25
LAMPIRAN ...........................................................................................................28
1. Pembuatan Larutan Stok .................................................................................28
2. Komposisi Larutan Media Perliter ..................................................................31
3. Dokumentasi ...................................................................................................31

iv
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Eksplan terkontaminasi jamur ....................................................................... 30

Gambar 2. Eksplanter kontaminasi bakteri ..................................................................... 30
Gambar 3. Eksplan terkena browning ............................................................................. 31
Gambar 4. Praktikum online ........................................................................................... 31

v
 I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Bioteknologi adalah terapan biologi yang melibatkan displin ilmu
mikrobiologi, biokimia, genetika, dan biologi monokuler. Definisi bioteknologi
secara klasik ataukonvensional adalah teknologi yang memanfaatkan agen hayati
atau bagian-bagiannya untukmenghasilkan barang dan jasa dalam skala industri
untuk memenuhi kebutuhan manusia.Sedangkan jika ditinjau secara modern,
bioteknologi adalah pemanfaatan agen hayati atau bagian-bagian yang sudah
direkayasa secara in vitro untuk mrenghasilkan barang dan jasa pada skala
industri.

Bioteknologi dikembangkan untuk meningkatkan nilai bahan mentahdengan

memanfaatkan kemampuan mikroorganisme atau bagian-bagiannya misalnya
bakteridan kapang. Selain itu bioteknologi juga memanfaatkan sel tumbuhan atau
sel hewan yangdibiakkan sebagai bahan dasar sebagai proses industri. Penerapan
bioteknologi padaumumnya mencakup produksi sel atau biomassa dan perubahan
atau transformasi kimia yangdiinginkan. Misalnya saja pada pembuatan donat
dengan melibatkan suatu organisme patogenseperti mikroorganisme. Salah satu
bahan baku donat yang paling penting dalam proses pembuatan adalah ragi atau
yeast. Ragi adalah mikroorganisme hidup yang berkembang biakdengan cara
memakan gula. Fungsi utama ragi adalah mengembangkan adonan.Pengembangan
adonan terjadi karena ragi menghasilkan gas karbondioksida (CO2)
selamafermentasi. Gas ini kemudian terperangkap dalam jaringan gluten yang
menyebabkan donat bisa mengembang.

Penggunaan Bioteknologi sebagai ilmu maupun sebagai alat yang

bertanggungjawab dalam meningkatkan kemajuan secara cepat dalam berbagai
bidang kehidupan. Pesatnya perkembangan ilmu dan teknologi menjadikan
Bioteknologi menjadi salah satu bidang ilmu dalam biologi yang harus dikuasai
bangsa Indonesia, termasuk para mahasiswa. Hal tersebut dikarenakan selain
banyak terkait langsung dengan kehidupan sehari-hari, juga dapat dikaitkan
dengan aspek ‘life skill’.

1
1.2 Tujuan
1.2.1 Tujuan Praktikum 1
Praktikum pertama ini bertujuan untuk memberikan pemahaman dan
penjelasan kepada praktikan dalam melakukan praktikum bioteknologi seperti
kontrak praktikum dan sebagainya.

1.2.2 Tujuan Praktikum 2

Tujuan dilaksanakannya praktikum kedua adalah untuk mengetahui
salah satu metode pemanfaatan bioteknologi tradisional yaitu pembuatan
biofertilizer dan biodekomposer dengan memanfaatkan limbah pertanian dan
limbah rumah tangga.

1.2.3 Tujuan Praktikum 3

Tujuan pada praktikum ketiga yaitu agar praktikan mengetahui dan
memahami berbagai peralatan laboratorium dan untuk mengetahui prosedur
pembuatan media asertif yang tepat untuk digunakan sebagai media
perbanyakan tanaman dengan kultur jaringan, kultur arther dan embrio
rescue.

1.2.4 Tujuan Praktikum 4

Tujuan dari praktikum ke-4 adalah untuk mengetahui teknik
perbanyakan pada tanaman jeruk dan papaya.

1.2.5 Tujuan Praktikum 5

Bertujuan untuk mengetahui bagaimana proses kultur dan kultur
jaringan serta mampu menganalisis data pengamatan dalam proses kultur
jaringan.

1.2.6 Tujuan Praktikum 6

Praktikum ini bertujuan agar praktikan dapat mengetahui bagaimana
tahapan aklimatisasi dan mengetahui apa itu aklimatisasi.

2
 II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bioteknologi
Bioteknologi adalah cabang ilmu biologi yang mempelajari tentang
penggunaan teknik atau cara pemanfaatan mahkluk hidup serta komponen-
komponennya dalam hal meningkatkan kesejahteraan hidup manusia. Menurut
Bull et al. (1982), bioteknologi merupakan penerapan asas-asas sains (ilmu
pengetahuan alam) dan rekayasa (teknologi) untuk pengolahan suatu bahan
dengan melibatkan aktivitas jasad hidup untuk menghasilkan barang dan/atau
jasa. Bioteknologi dikenal sebagai ilmu yang bersifat multidispliner dan aplikatif
sehingga membutuhkan penguasaan konsep-konsep dasar yang cukup, dan
perkembangannya sangat pesat karena manfaat Bioteknologi bersentuhan
langsung dengan peningkatan taraf hidup manusia (Purwaningsih, 2009). Salah
satu perkembangannya yaitu dengan penemuan PCR (Polymerase Chain
Reaction) sebagai teknik atau alat perbanyakan segmen DNA yang menghasilkan
ratusan bahkan jutaan kali segmen DNA yang dapat diperbanyak bahkan
dimodifikasi sesuai yang diinginkan. Pengetahuan mengenai penggunaan PCR
serta penerapannya menjadi kompetensi yang harus dikuasai mahasiswa dalam
mempelajari materi Isolasi, Amplifikasi dan Visualisasi DNA pada mata kuliah
Bioteknologi.

Pada perguruan tinggi, bioteknologi merupakan mata kuliah wajib, salah

satunya seperti di jurusan agroteknologi Universitas Riau. Banyaknya
keterbatasan pada mata kuliah Bioteknologi seperti kurangnya media, buku, LKS,
terlebih belum diselenggarakannya praktikum dan belum ada penuntun praktikum
serta sarana dan prasarana yang seharusnya mendukung terciptanya pembelajaran
bioteknologi yang ideal, membuat mahasiswa kesulitan mempelajari materi
bioteknologi. Kompetensi pada matakuliah Bioteknologi yaitu mahasiswa mampu
memahami prinsip dasar Bioteknologi dan pemanfaatan Bioteknologi dalam
kehidupan dan. Salah satu indikator pembelajaran yang ingin dicapai adalah
mahasiswa dapat menguasai prinsip -prinsip biologi sebagai ilmu dasar dan
teknologinya dengan cara memanfaatkan ilmu terapan bidang biologi serta
mampu menguasai fenomena alam dengan pendekatan Bioteknologi.

3
2.2 Pembuatan Kompos
Kompos adalah hasil penguraian parsial/tidak lengkap dari campuran bahan-
bahan organik yang dapat dipercepat secara artifisial oleh populasi berbagai
macam mikroba dalam kondisi lingkungan yang hangat, lembab, dan aerobik atau
anaerobik (Modifikasi dari J.H. Crawford, 2003).Pengomposan adalah proses
dimana bahan organik mengalami penguraian secara biologis, khususnya oleh
mikroba-mikroba yang memanfaatkan bahan organik sebagai sumber energi.
Proses pengomposan akan segera terjadi dan berlangsung setelah bahan-bahan
mentah tercampur. Proses pengomposan secara sederhana dapat dibagi menjadi
dua tahap, yaitu tahap aktif dan tahap pematangan. Selama tahap awal, oksigen
dan senyawa-senyawa lainnya yang muda terdegradasi akan segera dimanfaatkan
oleh mikroba mesofik, sehingga suhu pada tumpukan kompos akan meningkat
dengan cepat, diikuti dengan meningakatnya pH pada kompos. Pada saat proses
dekomposisi berlangsung maka suhu akan meningkat diatas 500-70oC. Suhu ini
akan tetap tinggi selama waktu tertentu, dan mikroba yang aktif pada kondisi suhu
tinggi ini adalah mikroba Termofik. Pada saat inilah terjadi proses
dekomposisi/penguraian bahan-bahan organic sangat aktif oleh mikroba. Dengan
bantuan oksigen mikrobamikroba yang berada didalam tumpukan kompos
menguraikan bahan organic menjadi CO2, uap air sehingga tumpukan kompos
menjadi panas.
Setelah sebagian besar bahan terurai, maka suhu secara berangsur-angsur akan
mengalami penurunan, dan pada saat inilah terjadi proses pematangan kompos.
Pematangan kompos tingkat lanjut akan membentuk kompleks liat humus.
Proses pengomposan yang terjadi secara alami berlangsung lama hingga 3
bulan. Sehingga di akhir-akhir ini banyak dikembangkan pupuk organik yang
dibuat secara cepat dengan sengaja menambahkan mikroba dekomposer yang
telah diketahui sifat-sifatnya. Mikroba tanah juga berperan penting dalam proses
pelarutan mineral-mineral yang tadinya berada dalam bentuk senyawa kompleks
menjadi bentuk ion, maupun garam-garam yang dapat diserap oleh akar. Sebagai
contoh unsur fosfor dalam senyawa kompleks batuan akan terlarutkan oleh
kelompok pelarut fosfat sehingga menjadi tersedia bagi tanaman (Nyoman P.
Aryantha.dkk,2010).

4
2.3 Pembuatan Larutan Stok Media
Dalam pembuatan media, langkah pertama adalah membuat stok dari media
terpilih. Penggunaan larutan stok menghemat pekerjaan menimbang bahan yang
berulang–ulang setiap kali membuat media.“Untuk membuat medium kultur
jaringan, biasanya menimbang setiap komponen bahan kimia yang terdapat pada
resep medium dasar. Langkah ini kurang praktis karena memakan banyak waktu
dan mengurangi kecepatan. Selain itu timbangan yang digunakan untuk
menimbang sejumlah kecil bahan kimia kadang-kadang tidak tersedia. Kendala ini
dapat dibatasi dengan pembuatan larutan stok terlebih dahulu, kecuali untuk unsur
mikronya. Jadi perlu membuat larutan stok untuk unsur mikro, besi, vitamin,
hormon, dan mio-inositol (Hendaryono dan Wijayani, 2007)“. Setiap larutan stok
dapat dipergunakan sampai 100 liter media, bahkan larutan stok mikro dapat
dipergunakan sampai 100 liter media. Larutan stok dapat disimpan ditempat yang
bertemperatur rendah dan gelap.
Larutan stok merupakan larutan yang berisi satu atau lebih komponen
media yang konsentrasinya lebih tinggi daripada konsentrasi kompenen tersebut
dalam formulasi media yang akan dibuat. Larutan stok biasanya dibuat dengan
konsentrasi 10, 100 atau 1000 kali lebih pekat. Jika larutan stok dibuat, pembuatan
media dapat dilakukan dengan cara mengambil sejumlah larutan stik sehingga
konsentrasinya menjadi sesuai dengan yang terdapat pada formulasi media yang
dikehendaki (Yusnita, 2003).
Dalam pembuatan larutan stok, yang perlu diperhatikan adalah
penyatuan beberapa komponen media sekaligus dalam suatu larutan stok dan
harus mempertimbangkan kecocokan dan kestabilan dari sifat kimianya. Dalam
larutan stok yang berisi beberapa komponen media jangan sampai ada endapan.
Hal ini erat kaitannya dengan ketersediaan hara dalam media eksplan atau
tanaman yang dikulturkan. Setelah larutan stok dibuat, pengambilanya untuk
media dapat dilakukan dengan cara memipet atau menakarnya dengan gelas ukur
(Yusnita, 2003). Selain itu hal yang perlu diperhatikan dalam pembuatan larutan
stok adalah penyimpanan (daya simpan) larutan. Larutan yang sudah mengalami
pengendapan, tidak dapat digunakan lagi.

5
2.4 Pengenalan Alat Dan Bahan Serta Pembuatan Media
Ketrampilan dalam menggunakan alat laboratorium sangat diperlukan. Hal
tersebut harus dibarengi dengan ketelitian dalam melakukan suatu percobaan
ataupun penelitian sehingga didapatkan hasil yang maksimal. Penggunaan alat-
alat laboratorium merupakan suatu cara untuk mengetahui nama dan fungsi alat-
alat laboratorium. Dalam menggunakan alat-alat laboratorium, sebaiknya
pengguna melakukan sterilisasi alat-alat laboratorium yang akan digunakan.
Sterilisasi merupakan kegiatan yang dilakukan untuk menghilangkan mikroba
yang tidak di inginkan (Suriawi dan Unus, 2005).
Pemilihan larutan stok pada medi terpilih merupakan langkah awal
pembuatan media. Penggunaan larutan stok menghemat pekerjaan menimbang
bahan yang berulang–ulang setiap kali membuat media. Untuk membuat medium
kultur jaringan, biasanya menimbang setiap komponen bahan kimia yang terdapat
pada resep medium dasar. Langkah ini kurang praktis karena memakan banyak
waktu dan mengurangi kecepatan. Selain itu, timbangan yang digunakan untuk
menimbang sejumlah kecil bahan kimia kadang-kadang tidak tersedia. Kendala ini
dapat dibatasi dengan pembuatan larutan stok terlebih dahulu, kecuali untuk unsur
mikronya. Jadi perlu membuat larutan stok untuk unsur mikro, besi, vitamin,
hormon, dan mio-inositol (Hendaryono dan Wijayani, 2007).
Alat dan bahan yang digunakan dalam kegiatan di laboratorium
memerlukan perlakuan khusus sesuai sifat dan karakteristik masing-masing.
Perlakuan yang salah dalam membawa, menggunakan dan menyimpan alat dan
bahan di laboratorium dapat menyebabkan kerusakan alat dan bahan, terjadinya
kecelakaan kerja serta dapat menimbulkan penyakit. Cara memperlakukan alat
dan bahan di laboratorium secara tepat dapat menentukan keberhasilan dan
kelancaran kegiatan. Adapun perlakuan terhadap alat-alat di laboratorium seperti
membawa alat sesuai petunjuk penggunaan, menggunakan alat sesuai petunjuk
penggunaan, menjaga kebersihan alat dan menyimpan alat (Yuwono triwibowo,
2008).
Pembuatan media dikelompokan berdasarkan jenis bahan kimia yang
digunakan, sehingga jika bahan kimia tersebut dicampur tidak terjadi interaksi
yang menghasilkan senyawa baru. Biasanya pengelompokan dilakukan
berdasarkan stok hara makro, stok hara mikro, vitamin dan stok hormone,
6
terutama jika larutan stok tidak disimpan terlalu lam. Stok hara baik mikro maupu
makro dapat disimpan dalam waktu yang relative lam yaitu 4-8 minggu,
sedangkan stok hormone biasanya disimpan dalam jangka waktu 2-4 minggu
(Marlin dkk, 2007).

2.5 Sterilisasi Dan Penanaman Media

Sterilisasi merupakan upaya yang dilakukan untuk menghilangkan semua
mikroorganisme (bakteri, jamur, parasit, dan virus) termasuk endospora bakteri
dari benda-benda mati atau instrument yang menempel (Sursilah, 2010).
Sterilisasi adalah proses untuk mematikan atau menonaktifkan spora dan
mikroorganisme sampai ke tingkat yang tidak memungkinkan lagi berkembang
biak atau menjadi sumber kontaminan selama proses perkembangan berlangsung.
Faktor-faktor yang perlu diperhatikan untuk keberhasilan kultur jaringan
yaitu bahan sterilisasinya, kandungan unsur kimia dalam media, hormone yang
digunakan, substansi organik yang ditambahkan dan terang atau gelapnya saat
inkubasi. Teknik aseptik merupakan salah satu kunci keberhasilan dalam kutur
jaringan. Keaseptikan harus dijaga dalam proses pengkulturan, selain itu juga
termasuk sterilisasi bahan tanaman (eksplan). Pada tahap ini dilakukan berbagai
perlakuan untuk membersihkan kotoran yang ada di permukaan bahan tanaman
(disinfestasi) (Hadioetomo,1985). Proses sterilisasi yang tidak sempurna akan
menimbulkan adanya kontaminasi. Kontaminasi yang umum terjadi adalah
kontaminasi oleh cendawan dan bakteri.
Prinsip dasar sterilisasi eksplan adalah mensterilkan eksplan dari berbagai
mikroorganisme, tetapi eksplannya tidak ikut mati. Setiap tanaman memerlukan
perlakuan khusus sehingga sebelum mengulturkan tanaman baru perlu melakukan
percobaan sterilisasi. Eksplan adalah bagian tanaman yang akan dikulturkan.
Bahan eksplan dapat berupa organ, jaringan, maupun sel. Eksplan dari organ lebih
mudah dikulturkan, misalnya daun, batang, akar. Metode sterilisasi setiap eksplan
berbeda, tergantung pada jenis tanamannya, bagian tanaman yang digunakan,
morfologi permukaannya, umur tanamannnya, dan kondisi tanamannnya, musim
saat pengambilan, dan lingkungan tumbuhnya. Pada prinsipnya, sterilisasi eksplan
adalah mensterilkan dari kontaminasi mikroorganisme, tanpa mematikan
eksplannya (Edhi Sandra, 2013).

7
2.6 Subkultur Dan Pengamatan Kultur Jaringan
Subkultur adalah usaha untuk menggantikan media dalam kultur jaringan
dengan media yang baru, sehingga kebutuhan nutrisi untuk pertumbuhan
kalus dapat terpenuhi. Subkultur merupakan salah satu tahap dalam perbanyakan
tanaman melalui kultur jaringan. Pada dasarnya subkultur adalah memotong,
membelah dan menanam kembali eksplan yang telah tumbuh sehingga jumlah
tanaman akan bertambah banyak. Waktu pelaksanaan subkultur tergantung pada
beberapa hal, misalnya eksplan yang ada dalam botol sudah tumbuh setinggi
botol, atau eksplan tersebut sudah berada lama di dalam botol sehingga
pertumbuhannya sudah mulai berkurang akibat mulai kekurangan hara
(Yuwono,2008).

Penggunaan media tumbuh yang cocok merupakan salah satu faktor yang
menentukan keberhasilan perbanyakan tanaman dengan teknik kultur
jaringanmelalui teknik subkultur media murashige dan Skoog (MS)
yang merupakanmedia yang dasar untuk tanman. Kunci keberhasilan baik pada
tahapi n d u k s i maupun elongasi pada tunas Dalam
p r o s e s i n d u k s i u m u m n y a menggunakan zat pengatur tumbuh
golongan sitokinin seperti Benzylaminopurine (BAP) media kultur dapat dibuat
lebih padat dengan penambahan agar dan gula serta pH media pada 5,8. Esplan
yang sudah menjadi planlet dengan ukuran 1-2 cm . Indikasi pada tahap
induksi yang dapat digunakan untuk tahap selanjutnya dengan
terbentuknya kalus kompak pada bagian dasar batan g umur biakan pada
tahap induksi tunas (planlet) berumur sekitar 3 minggu. Pada umur t e r s e bu t
s ud a h b e r ad a p ad a k on di s i o pt im a l u nt uk di pin d ah k an p a d a
t a h ap elongasi untuk dapat dilakukan proses subkultur (Rossa, 2011).
Teknik dalam subkultur adalah untuk memisahkan, memotong,membelah,
dan menanam kembali eksplan yang telah tumbuh sehingga jumlah tanamannya
dapat bertambah banyak. Pada teknik subkultur mempunyai tujuan supaya kultur
atau planlet mendapatkan unsur hara atau nutrisi dalam rangka pertumbuhannya.
Sehingga subkultur mempunyai tahapan yang lebih mudah dibandingkan tahapan
lain dalam dibandingkan tahapan lain dalam kultur jaringan (Hendaryono dan
Wijayani, 1997).

8
2.7. Aklimatisasi
Media aklimatisasi sendiri harus baik agar tanaman dapat menyesuaikan diri
dan tidak mati, hal tersebut sesuai dengan literatur Wardani (2009), Media tumbuh
bagi bibit merupakan lingkungan baru dalam proses aklimatisasi. Menurut Deden
(2003), hal lain yang perlu diperhatikan dalam proses aklimatisasi adalah faktor
lingkungan, seperti sinar matahari, kelembaban nisbi, dan temperatur serta
pemeliharaan. Sehingga plantlet perlu diperhatikan pemeliharaannya agar
lingkungan aklimatisasi tidak terlalu berbeda jauh dengan lingkungan yang
terdapat dalam botol kultur.
Aklimatisasi dalam kultur in-vitro adalah suatu proses adaptasi dari tanaman
hasil kultur in-vitro (plantlet) terhadap cekaman lingkungan baru sebelum ditanam
di lapang. Kondisi lingkungan baru tersebut meliputi suhu, cahaya dan
kelembaban. Tahap aklimatisasi ini juga merupakan tahap yang krusial dalam
kultur jaringan. Kematian plantlet setelah aklimatisasi seringkali terjadi sehingga
tahap ini perlu dilakukan secara hati-hati.
Aklimatisasi merupakan salah satu tahapan penting dalam penelitian yang
melibatkan kultur in vitro (Husni et al. 2004a). Pada tanaman tertentu, seperti padi
dan tanaman obat (daun dewa dan tangguh), aklimatisasi relatif mudah dan
berhasil memperoleh persentase tanaman hidup yang tinggi, yaitu lebih dari 90%
(Lestari et al. 1999 ; Lestari dan Purnama Ningsih 2005). Namun, tata cara
aklimatisasi tanaman yang ada tidak berlaku umum ; masing-masing tanaman
hasil regenerasi.

Pada tahap ini (aklimatisasi) diperlukan ketelitian karena tahap ini

merupakan tahap kritis dan seringkali menyebabkan kematian planlet. Kondisi
mikro planlet ketika dalam botol kultur adalah dengan kelembaban 90-100 %.
Beberapa sumber menuliskan penjelasan yang berkaitan dengan hal tersebut.Bibit
yang ditumbuhkan secara in vitro mempunyai kutikula yang tipis dan jaringan
pembuluh yang belum sempurna (Wetherell, 1982).

9
 Ⅲ METODOLOGI

3.1 Waktu Dan Tempat

Kegiatan praktikum bioteknologi ini dilaksanakan setiap hari Senin mulai
dari tanggal 27 September hingga 8 November 2021, pada pukul 08.00 sampai
dengan selesai. Kegiatan praktikum bioteknologi dilaksanakan di laboratorium
bioteknologi fakultas pertanian Universitas Riau dan dirumah praktikan yang
berlokasi di Jalan Sawai No.06, Kota Pekanbaru.

3.2 Alat Dan Bahan

3.2.1 Asistensi
Adapun alat yang digunakan dalam kegiatan praktikum asistensi ini adalah
handphone ataupun laptop, alat tulis, dan buku. Sedangkan yang menjadi bahan
dalam kegiatan asistensi adalah buku penuntun praktikum bioteknologi.

3.2.2 Pembuatan Kompos

Adapun alat yang digunakan dalam kegiatan praktikum pembuatan
kompos dan aktivator adalah wadah tertutup, alat komposer yang dapat berupa
drum, plastik sampah, terpal, serta alat cangkul.

Sedangkan untuk bahan yang digunakan dalam pembuatan aktivator

adalah 1 liter bioaktivator EM4, 1 kg gula merah, 1 liter air kelapa, 1 liter air
cucian beras, 1,5 kg terasi. Sedangkan dalam pembuatan kompos memerlukan
bahan yang diantaranya adalah 10-15 kg sampah rumah tangga maupun limbah
pertanian, larutan aktivator EM4, serta 5-10 kg sekam padi/serbuk gergaji.

3.2.3 Pembuatan Larutan Stok Media

Adapun alat yang digunakan dalam pembuatan larutan stok media MS
adalah Erlenmeyer, timbangan anlitik, spatula, aluminium foil, gelas beaker,
magnetic stirrer, magnetic bar, plastik wrap, dan gelas ukur. Sedangkan bahan
yang diperlukan ialah aquades dan NH4NO3.

3.2.4 Pengenalan Alat dan Bahan serta Pembuatan Media

Adapun alat-alat yang digunakan dalam kegiatan praktikum ini adalah
gelas beaker, gelas ukur, labu ukur, Erlenmeyer, eksplan kultur jaringan, botol

10
kultur, cawan petri, pipet tetes, lampu Bunsen, lumpang dan alu, peralatan diseksi,
hotplate, magnetic bar, timbangan analitik, Laminar Air Flow Cabinet (LAFC),
enkas, rak kultur, autoclave, dan lemari pendingin/kulkas.

Sedangkan untuk bahan yang digunakan dalam kegiatan praktikum ini

adalah aquades, larutan stok, eksplan, spiritus,larutan stok MS, gula pasir dan
agar-agar.

3.2.5 Sterilisasi dan Penanaman Media

Adapun alat yang digunakan dalam kegiatan praktikum sterilisasi adalah
gelas ukur, magnetic stirrer, dan juga timbangan. Sedangkan untuk bahan yang
digunakan dalam proses sterilisasi dan penanaman adalah fungisida dan
bakterisida, air , desinfektan dan iodine. Sedangakan dalam pembuatan eksplan,
alat yang diperlukan adalah petridish, skapel, pinset, gunting, lampu Bunsen, hand
spryer, tisu dan masker. Sedangkan untuk bahan yang digunakan adalah tanaman
kentang, media MS tanpa zat pengatur tumbuh (MSO), alkohol 96%, dan spiritus
70%.

3.2.6 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan

Adapun alat yang digunakan dalam kegiatan praktikum ini adalah
perangkat digital yang dapat berupa handphone dan laptop, serta media video
converence yang berupa google meet ataupun zoom meeting, Sedangkan untuk
bahan yang digunakan adalah ekslplan 1 mst yang berasal dari biji jeruk.

3.2.7 Aklimatisasi
Adapun alat dan bahan yang digunakan dalam kegiatan praktikum
aklimatisasi ialah berupa botol eksplan, eksplan yang akan diaklimatisasi, erta
media tanam baru untuk proses aklimatisasi.

3.3 Cara Kerja

3.3.1 Asistensi
Asistensi dilakukan dengan cara asisten praktikum memberikan
pemaparan terkait dengan kegiatan praktikum yang akan dijalani selama satu
semester. Pemaparan yang diberikan sesuai dengan diktat praktikum pengantar
bioteknologi pertanian yang dipaparkan melalui video conference zoom meeting.

11
 3.3.2 Pembuatan Kompos
Adapun cara kerja dalam kegiatan praktikum pembuatan kompos dan
aktivator adalah sebagai berikut:
1. Campurkan bahan – bahan aktivator dalam wadah tertutup
2. Simpan kurang lebih selam 12 jam (overnight)

Pembuatan kompos
1. Siapkan berbagai peralatan dan bahan yng dibutuhkan untuk membuat kompos
2. Cacah limbah pertanian dan rumah tangga menggunakan pisau atau gunting ,
lalu tambahkan sekam atau bubuk gergaji dalam wadah
3. Aduk bahan kompos, lalu semprotkan atau tuangkan larutan aktivator EM4
yang sudah diaktifkan
4. Masukkan sampah sayuran kedalam komposer ( luabng atau drup/ kantong)
lalu tutup dengan rapat.
5. Bahan kompos diaduk setiap 2 hari sekali
6. Jika sedikit berbau, semprotkan sesekali bahan dengan larutan EM4
7. Kompos dapat dipanen setelah 14 – 21 hari. Tergantung jenis sampah dan
kandungan bahan yang digunakan

3.3.3 Pembuatan Larutan Stok Media

Adapun cara kerja dalam kegiatan praktikum pembuatan larutan stok
media adalah sebagai berikut:
1. Siapkan semua bahan kimia yang diperlukan untuk membuat media.

2. Siapkan wadah larutan stok (erlen meyer) sebanyak jenis atau macam larutan
stok.
3. Timbang bahan kimia yang telah ditentukan sesuai dengan kebutuhan. Misal,
untuk membuat stok G (vitamin) :Sediakan erlenmeyer sesuai ukuran (100ml),
tambahkan akuades steril 50 ml. Timbang Tiamin-HCl, Asam nikotinat dan
Pyrodoxin-HCl masingmasing 0,005 g. Masukkan ke dalam erlen meyer. Aduk
hingga larut. Tambahkan akuades steril hingga dicukupkan menjadi 100 ml
(volume larutan stok). Tutup dengan aluminium foil dan beri label. Simpan
stok pada lemari pendingin.

4. Lakukan prosedur yang sama untuk semua kelompok larutan stok

12
3.3.4 Pengenalan Alat dan Bahan serta Pembuatan Media
Adapun langkah kerja dalam pengenalan alat ialah, dengan cara
memperlihatkan setiap alat-alat yang terdapat didalam laboratorium kultur
jaringan melalui zoom meeting. Untuk pembuatan media dalam perbanyakan
tanaman secara kultur jaringan, adapun langkah kerja yang dilakukan sebagai
berikut:

a. Sterilisasi Botol Kultur

Botol kultur setelah dicuci bersih dengan sabun cair, dimasukan ke dalam
autoclave dalam posisi terbalik. Jika menggunakan autoclave listrik otomatis
dilakukan selama 1 jam pada suhu 1210C tekanan 17.5 psi (dengan mengeset
timer, suhu, tekanan).

b. Pembuatan Media MS (1 Liter)

1. Larutkan 30 gram gula dengan menambah akuades sebanyak 50 ml dan
campurkan dengan larutan stok yang telah di pipet. Masukkan ke dalam labu
takar 1 liter
2. Tambahkan larutan stok A dan B masing-masing 20 ml, larutan stok C, stok
D dan Stok E masing-masing 5 ml, larutan stok F, Myo dan Vitamin
masing-masing 10 ml.
3. Tambahkan media ke dalam tempat yang volumenya + 2 liter, lalu
tambahkan 7-8 gram agar – agar. Panaskan media sampai agar – agar larut
(sambil diaduk).
4. Masukkan media ke dalam botol kultur sebanyak 25 ml dan tutup botol
dengan plastic lalu diikat dengan karet gelang. Setiap kelompok membuat
sebanyak 15 botol media (5 botol untuk media perbanyakan kentang, 5 botol
untuk media kultur anthe pepaya, dan 5 botol untuk media embryo rescue).
5. Beri kode pada plastik dan kode kelompok dengan huruf yang kecil.
Sterilkan media dengan autoclave selama 20 menit pada suhu 1210C
tekanan 17.5 psi. Media yang telah steril disimpan diruang kultur pada suhu
200C

13
3.3.5 Sterilisasi dan Penanaman Media
Adapun langkah kerja dalam kegiatan praktikum sterilisasi dan penanaman
media adalah sebagai berikut:

Langkah Sterilisasi
1. Cucilah eksplan dengan air mengalir dan gunakan detergen
2. Kemudian rendam dan kocok eksplan dalam larutan klorox
3. Rendam dan kocok pada larutan klorox 30 0/0 dan ditambahkan 3 – 5 tetes
tulen
4. Rendam dalam fungisisda
5. Bilas dengan aquades steril

Langkah – langkah penanaman eksplan adalah:

1. Nyalakan blower dari kotak pidah( lamianr Air Flow Cabinet) terlebih dahulu
kemudian beri ruangan laminar dan alkohol
2. Masukkan alat – alat botol berisi media dan bahan tanaman
3. Nayalakn bunsen dan bakar alat – alat tenaman secara sekilas
4. Potonglah bahan tanaman dan ambil bagian menggunakan pingset sebelum
itu pingsetnya dibakar dulu sekilas
5. Tanaman dipotong – potong dengan gunting dan dimasukkan ke media tanam
6. Letak anatar botol dengan lampu bunsentidak boleh terlalu jauh, sebelum
memasukkan eksplan kedalam media kepala botol dan eksplan dibakar
terlebih dahulu
7. Setelah itu dilakban serapat mungkin dan diletakkan di ruang isolasi

3.3.6 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan

Adapun langkah kerja dalam kegiatan praktikum subkultur dan
pengamatan kultur jaringan adalah sebagai berikut:
1. Celupkan pingset dan scapel di alkohol
2. Masukkan pingset dan scalpel ke air steril
3. Potong – potong eksplan
4. Siapkan media, Buka tutup botol
5. Oleskan mulut botol dengan larutan iodine
6. Tanam eksplan dalam media, buka mulut botol

14
 7. Tutup dan ikat rapat
Untuk pengamatan kultur jaringan dilakukan sesuai data kelompok yang telah
dibagikan kepada masing masing praktikan.

3.3.7 Aklimatisasi
Adapun langkah kerja dalam proses aklimatisasi adalah sebagai berikut:

1. Tahapan pertama penyiapan planlet pada medium ½ MS vitamin penuh

2. Tahap hardening plantlet diruang kaca/kasa 1 – 4 minggu tergantung kondisi
tanaman
0
3. Alat dan bahan aklimatisasi planlet, media, bak plastik, larutan 1 /0
fungisisda dan bakterisida, air bersih, pingset tumpul 15 cm dll
4. Tahapan pengambilan planlet dimasukkan ke dalam bak berisi air bersih
diikuti dengan pencucian akar dan pangkal batang. Daun – daun berwarna
coklat dan mati juga dibersihkan. Diakhiri dengan kegiatan diperoleh planlet
yang bersih dan siap direndam pada larutan pestisida.
5. Tahp perendaman planlet bersih dalam alarutan 10/0 fungisisda + bak terisida
selama 3 menit dan penirisan planlet diatas kertas
6. Tahap penanamn planlet model berkelompok pada bak plastik berisi media
potongan pakis dan penyiraman larutan 10/0 fungisida dan bakterisida
7. Tahao pembungkusan plastik 1 – 4 minggu
8. Planlet 100 0/0 tumbuh baik.

15
 Ⅳ HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil
Botol Kondisi Jenis Kondisi Eksplan Waktu Jumlah Jumlah
ke botol Eksplan 1 MST muncul tunas baru buku
setelah 1 tunas 4 MST baru 4
minggu baru (per botol) MST
(HST)
1 Embrio
Steril Hijau 10 3 7
jeruk
2 Embrio
Steril Hijau 10 3 10
jeruk
3 Embrio
Steril Hijau 7 2 7
jeruk
4 Embrio
Steril Hijau 7 1 6
jeruk
5 Embrio
Steril Hijau 8 3 4
jeruk
6 Terdapat Embrio
miselium jeruk Kuning 13 1 5
putih
7 Embrio
Steril Kuning 10 2 6
jeruk
8 Embrio
Steril Kuning 10 2 7
jeruk
9 Embrio
Steril Kuning 9 3 5
jeruk
10 Embrio
Steril Kuning 7 1 6
jeruk
11 Embrio
Steril Bersih 7 2 7
jeruk

16
 12 Embrio
Steril Bersih 10 3 3
jeruk
13 Embrio
Steril Bersih 13 3 5
jeruk
14 Embrio Eksplan terdapat
Steril - - -
jeruk miselium putih
15 Embrio Eksplan terdapat
Steril - - -
jeruk miselium putih
Table 1Pengamatan Kelompok 10

4.2 Pembahasan
4.2.1 Pembuatan Kompos

17
4.2.2 Pembuatan Larutan Stok Media

4.2.3 Pengenalan Alat dan Bahan Serta Pembuatan Media Perbanyakan

Kultur Jaringan

4.2.4 Sterilisasi dan Penanaman Eksplan

4.2.5 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan

4.2.6 Aklimatisasi

18
 Ⅴ PENUTUP

5.1 Kesimpulan
5.1.1 Pembuatan Kompos

5.1.2 Pembuatan Larutan Stok Media

5.1.3 Pengenalan Alat dan Bahan serta Pembuatan Media

5.1.4 Sterilisasi dan Penanaman Esksplan

5.1.5 Subkultur dan Pengamatan Kultur Jaringan

19
5.1.6 Aklimatisasi

20
 DAFTAR PUSTAKA

Crawford. J.H. Composting of Agricultural Waste. In Biotechnology Applications

and Research, Paul N, Cheremisinoff and R. P.Ouellette (ed). p. 68-77.
FFTC (Food and Fertilizer Technology Center). 2003. Bioactivator do
Decompose Agricultural Waste. Soil and fertilizer PT 2003 – 23. Jurnal
Sains dan Teknologi 7 (2), september 2008: 58-61.

Darmono, DW. 2003. Menghasilkan Anggrek Silangan. Jakarta : Penebar

Swadaya.

Edhi Sandra .2013. Cara Mudah Memahami dan Menguasai Kultur Jaringan. IPB
Press. Bogor.

George E F dan Sherrington P D 2010. Plant Propagation by Tissue Culture.

Handbook and Directory of Commercial Laboratories. England: Exegetics
Limited.

Hadioetomo, R.S. 1985.Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. PT.Gramedia. Jakarta

Hendaryono, D.P.S dan A. Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Jakarta :

Kanisius.

Hendaryono, D.P.S dan A. Wijayani. 2002. Teknik Kultur Jaringan. Jakarta :

Kanisius.

LAMPIRAN

1. Pembuatan Larutan Stok

Buatlah larutan stok F2 dengan kepekatan 250!
• Kl ►Kebutuhan bahan kimia/l
= 0,83Kepekatan = 250
Volume air yang digunakan = 100 ml
(a) Kebutuhan bahan kimia = Kebutuhan bahan kimia/l × Kepekatan
= 0,83 mg × 250
= 207,5 mg
21
 = 0,2075 gr
(b) Kebutuhan larutan stok = Kebutuhan bahan kimia/l × Volume air yang
digunakan
= 0, 2075 × 100 ml
= 20,75 Kl untuk 25 liter media
(Yang dipipet untuk setiap 1 liter media
adalah 4ml)
• CoCl2. 6H2O ►Kebutuhan bahan kimia/l = 0,025
Kepekatan = 250
Volume air yang digunakan = 100 ml
(a) Kebutuhan bahan kimia = Kebutuhan bahan kimia/l × Kepekatan
= 0,025 mg × 250
= 6,25 mg
= 0,00625 gr
(b) Kebutuhan larutan stok = Kebutuhan bahan kimia/l × Volume air yang
digunakan
= 0,00625 × 100 ml
= 0,625 CoCl2. 6H2O untuk 25 liter media
(Yang dipipet untuk setiap 1 liter media
adalah 4ml)

22
• CuSO4.5H2O ►Kebutuhan bahan kimia/l = 0,025
Kepekatan = 250
Volume air yang digunakan = 100 ml

23
(a) Kebutuhan bahan kimia = Kebutuhan bahan kimia/l × Kepekatan
= 0,025 mg × 250
= 6,25 mg
= 0,00625 gr
(b) Kebutuhan larutan stok = Kebutuhan bahan kimia/l × Volume air yang
digunakan
= 0,00625 × 100 ml
= 0,625 CuSO4.5H2O untuk 25 liter media
(Yang dipipet untuk setiap 1 liter media adalah 4ml)
• Na2MoO4.2H2O ►Kebutuhan bahan kimia/l = 0,25 mg
Kepekatan = 250
Volume air yang digunakan = 100 ml
(a) Kebutuhan bahan kimia = Kebutuhan bahan kimia/l × Kepekatan
= 0,25 mg × 250
= 62,5 mg
= 0,0625 gr
(b) Kebutuhan larutan stok = Kebutuhan bahan kimia/l × Volume air yang
digunakan
= 0,0625 × 100 ml
= 6,25 Na2MoO4.2H2O untuk 25 liter media
(Yang dipipet untuk setiap 1 liter media adalah 4ml)

24
 2. Komposisi Larutan Media Perliter
Berikut komposisi Medium Murashige dan Skoog (MS) / 1 liter.

3. Dokumentasi

Gambar 1. Eksplan Gambar 2. Eksplan

terkontaminasi jamur terkontaminasi bakteri

25
 Gambar 3. Eksplan Gambar 4. Praktikum online
mengalami browning

KESAN DAN PESAN

Saya mengucapkan terimakasih kepada seluruh asisten yang telah berkenan

menyampaikan ilmunya pada praktikum bioteknologi pada semester ini. Saya juga
mohon maaf jika ada kata kata ataupun perilaku saya yang kurang berkenan di hati
kakak-kakak sekalian. Saya harap kedepannya ilmu yang saya sampaikan dalam
praktikum ini bisa bermanfaat. Aammin ya Rabbal Alamin. Walaupun menurut
saya praktikum secara online kurang efisien tapi asisten tetap berusaha yang
terbaik.

26
33