LAPORAN PRAKTIKUM

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI LINGKUNGAN

(TEL 1204)
MODUL 2 (PREPARASI MEDIA)

KELOMPOK 5
ADE GUSTINA HAZAR NASUTION (210407010)

GALUH BUNAYA IRVANI (210407054)

DWITA VIDI ASWARA (210407063)

MUHAMMAD HIRZI AULIA (210407073)
SAMUEL IVANDER SIRAIT (210407100)

DOSEN PEMBIMBING
Ir. Netti Herlina, M.T. Dra.
Nunuk Priyani, M.Sc.
Prof. Dr. Termala Alexander Barus, M.S.c.

PROGRAM STUDI TEKNIK LINGKUNGAN

FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2022
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kami panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa karena hanya dengan rahmat
dan karunia-Nya lah kami dapat menyelesaikan Laporan Praktikum Mikrobiologi Lingkungan ini
sesuai dengan waktu yang telah ditentukan. Adapun tujuan dari penulisan laporan ini adalah untuk
memenuhi tugas mata kuliah Mikrobiologi Lingkungan. Selain itu, penulisan laporan ini juga
bertujuan untuk menambah wawasan mengenai preparasi media bagi para pembaca dan penulis.

Dalam penulisan laporan ini, kami banyak mendapatkan bimbingan dan bantuan dari berbagai
pihak. Secara khusus kami meyampaikan ucapan terimakasih kepada:

1. Ibu Ir. Netti Herlina, M.T., Ibu Dra. Nunuk Priyani, M.Sc., dan Bapak Prof. Dr. Termala
Alexander Barus, M.Sc., selaku dosen mata kuliah Mikrobiologi Lingkungan.
2. Bapak Dr. Eng. Ir. Hafizhul Khair AM S.T., M.T., selaku kepala laboratorium Bioteknologi
Lingkungan.
3. Kakak dan abang asisten, orangtua serta semua pihak yang telah memberikan banyak bantuan
selama proses pengerjaan laporan ini hingga selesai.

Dalam penyusunan laporan ini, kami menyadari bahwa laporan kami masih jauh dari kata
sempurna. Oleh karena itu, kami menerima kritik dan saran yang membangun dari para pembaca
guna penyempurnaan laporan ini di masa yang akan datang. Akhir kata, kami berharap agar
laporan praktikum Mikrobiologi Lingkungan ini dapat memberikan manfaat untuk semua. Sekian
dan terimakasih.

Medan, Mei 2022

Kelompok 5

i
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ............................................................................................................... i

DAFTAR ISI ............................................................................................................................. ii
DAFTAR TABEL ....................................................................................................................iii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................................... iv
LAMPIRAN A ........................................................................................................................ vi
LAMPIRAN B ....................................................................................................................... vii
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................................... I-1
1.1 Latar Belakang ..............................................................................................................I-1
1.2 Rumusan Masalah .........................................................................................................I-2
1.3 Tujuan Praktikum ..........................................................................................................I-2
1.4 Manfaat Praktikum ........................................................................................................I-2
1.5 Ruang Lingkup Praktikum ............................................................................................I-2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................................... II-1
2.1 Defenisi Media ............................................................................................................ II-1
2.2 Preparasi Media ........................................................................................................... II-1
2.3 Pembagian Media ........................................................................................................ II-2
2.4 Prinsip Dasar Preparasi ............................................................................................... II-4
2.5 Fungsi Media ............................................................................................................... II-4
2.6 Faktor-Faktor Yang Memengaruhi Preparasi Media ................................................... II-5
BAB III METODOLOGI PRAKTIKUM ....................................................................... III-1
3.1 Alat ............................................................................................................................. III-1
3.2 Bahan .......................................................................................................................... III-2
3.3 Prosedur Praktikum .................................................................................................... III-5
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................... IV-1
4.1 Hasil Percobaan .......................................................................................................... IV-1
4.2 Pembahasan ................................................................................................................ IV-1
BAB V PENUTUP ............................................................................................................... V-1
5.1 Kesimpulan .................................................................................................................. V-1
5.2 Saran ............................................................................................................................ V-1
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................................. v
ii
 DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Pengamatan Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar ........................................ IV-1

iii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 3.1 Aluminium foil ..................................................................................................III-1

Gambar 3.2 Timbangan .........................................................................................................III-1
Gambar 3.3 Panci ..................................................................................................................III-2
Gambar 3.4 Dandang .............................................................................................................III-2
Gambar 3.5 Aqua.................................................................................................................. III-2
Gambar 3.6 Tepung Agar-Agar ............................................................................................ III-3
Gambar 3.7 Aqua.................................................................................................................. III-3
Gambar 3.8 Tepung Agar-Agar ............................................................................................ III-3
Gambar 3.9 Kentang ............................................................................................................. III-4
Gambar 3.10 Gula ................................................................................................................ III-4
Gambar 3.11 Diagram Alir Prosedur Pembuatan Nutrient Agar ......................................... III-5
Gambar 3.12 Diagram Alir Prosedur Pembuatan Potato Dextrose Agar ............................. III-6

iv
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Menurut Yudistara (2019), Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri
dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya.
Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul- molekul kecil yang dirakit untuk
menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme
menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya.

Menurut Rachmawaty (2021), Pembiakan mikroorganisme dalam laboratorium memerlukan media

yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai bagi mikroorganisme. Media
pertumbuhan adalah media nutrisi yang disiapkan untuk menumbuhkan bakteri. Beberapa bakteri
dapat tumbuh dengan baik pada setiap media dan beberapa bakteri membutuhkan media khusus.
Media harus dapat menyediakan energi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri. Pertumbuhan
bakteri pada media dapat digunakan untuk isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-sifat fisiologi,
dan perhitungan jumlah mikroba.

Upaya pembiakan mikroorganisme memerlukan kondisi lingkungan yang sesuai agar bakteri dapat
berkembang dengan baik. Dalam pertumbuhannya, mikroorganisme memerlukan bahan-bahan
organik dan ion-ion pendukung sebagai sumber energi dan katalis. Faktor-faktor yang penting bagi
proses pembiakan mikroorganisme yaitu nutrisi, oksigen dan gas lain, kelembaban, pH media,
suhu, serta kontaminan. Media yang baik untuk pembiakan mikroorganisme harus mengandung
unsur-unsur seperti karbon, nitrogen, fosfat anorganik, sulfur, logam, air, dan mineral (Zimbro
dkk, 2009).

Menurut Cappucino (2014), nutrisi yang dibutuhkan mikroorganisme untuk pertumbuhannya

meliputi sumber karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sulfur dan fosfor, unsur logam seperti
Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, dan Fe, vitamin, air, dan energi .Media merupakan salah satu bahan
yang digunakan untuk membiakkan mikroba dengan menggunakan nutrien yang tercampur dari
bahan-bahan zat hara. Setiap mikroorganisme memerlukan bahan organik serta ion dalam
perkembangan dan pertumbuhannya. Berdasarkan hal di atas, maka dilakukan praktikum ini untuk
mengetahui dan mempelajari mengenai fungsi media dan prinsip dasar preparasi media.

I-1
1.2 Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah dalam praktikum mikrobiologi modul preparasi media adalah sebagai
berikut:
1. Apa fungsi dari media?
2. Apa saja pembagian dalam media?
3. Apa saja kriteria penggunaan media?
4. Bagaimana prinsip dasar preparasi media?
5. Apa perbedaan dari agar komersil dengan agar teknik?

1.3 Tujuan Praktikum

Adapun tujuan praktikum dari pelaksanaan praktikum mikrobiologi modul preparasi media adalah
sebagai berikut:
1. Untuk mengetahui fungsi media
2. Untuk mengetahui pembagian media
3. Untuk mengetahui kriteria penggunaan media
4. Untuk mengetahui prinsip dasar preparasi
5. Untuk mengetahui perbedaan agar komersil dengan agar teknis

1.4 Manfaat Praktikum

Adapun manfaat dilakukannya praktikum ini adalah untuk:
1. Bidang ilmu pendidikan, dapat digunakan sebagai bahan pembelajaran laboratorium, terutama
pembelajaran mikrobiologi.
2. Praktikan, dapat digunakan sebagai latihan dalam menyusun laporan dan pembelajaran
mengenai proses preparasi media.

1.5 Ruang Lingkup Praktikum

Adapun ruang lingkup pada pelaksanaan praktikum ini adalah sebagai berikut:
1. Praktikum di rumah masing-masing praktikan dikarenakan adanya pandemi Covid-19,
sehingga tidak memungkinkan untuk melakukan praktikum di laboratorium.
2. Praktikum menggunakan media Nutrient Agar (NA) dan Potato Dextrose Agar (PDA).

I-2
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Defenisi Media

Menurut Yusmaniar (2017), media adalah campuran nutrien atau zat makanan yang dibutuhkan
oleh mikroorganisme untuk pertumbuhan. Media selain untuk menumbuhkan mikroba juga
dibutuhkan untuk isolasi dan inokulasi mikroba serta untuk uji fisiologi dan biokimia mikroba.
Media yang baik untuk pertumbuhan mikroba adalah yang sesuai dengan lingkungan pertumbuhan
mikroba tersebut, yaitu susunan makanannya dimana media harus mengandung air untuk menjaga
kelembaban dan untuk pertukaran zat atau metabolisme, juga mengandung sumber karbon,
mineral, vitamin dan gas, tekanan osmosis yaitu harus isotonik. Derajat keasaman/pH umumnya
netral tapi ada juga yang alkali, temperatur harus sesuai dan steril.

Media adalah substansi dengan kadar tertentu dalam bentuk cair, setengah padat atau padat yang
mengandung bahan alami dan/atau buatan untuk mendukung perkembangbiakan mikroorganisme.
Media yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme harus
sesuai susunannya dengan kebutuhan mikroorganime yang bersangkutan. Pada media itulah
mikroorganisme akan melakukan aktivitas pertumbuhannya. Untuk pertumbuhan mikroorganisme,
diperlukan campuran beberapa bahan yang mengandung nutrien. Nutrien tersebut dibutuhkan
untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroba. Nutrien tersebut berupa molekul karbon (C),
hidrogen (H), oksigen (O), nitrogen (N) dan beberapa mineral serta vitamin untuk pertumbuhan,
reproduksi dan memproduksi hasil metabolisme (Luklukyah dkk, 2019).

2.2 Preparasi Media

Pembuatan media memerlukan bahan-bahan yang dapat disediakan dari bahan alami atau yang
sudah dibuat secara teknis. Pada dasarnya, bahan-bahan untuk pembuatan media dikelompokkan
menjadi 3 macam, yaitu bahan dasar (air dan agar atau bahan sejenisnya), unsur-unsur makanan
(sumber karbon, sumber nitrogen, garam/mineral serta vitamin) dan bahan tambahan (indikator
serta antibiotik) (Luklukyah dkk, 2019).

Media yang baik untuk pertumbuhan mikroba adalah yang sesuai dengan lingkungan pertumbuhan
mikroba tersebut, yaitu susunan makanannya dimana media harus mengandung air untuk menjaga
kelembaban dan untuk pertukaran zat atau metabolisme, juga mengandung sumber karbon,
mineral, vitamin dan gas, tekanan osmosis yaitu harus isotonik (Yusmaniar, 2017).

II-1
2.3 Pembagian Media
Adapun macam-macam media dapat dibagi berdasarkan komposisi, sifat fisik dan, tujuannya yaitu
sebagai berikut:

A. Media Berdasarkan Susunan Kimia (Komposisi)

Berdasarkan komposisinya, media dapat dibagi menjadi media sintesis, semi sintesis, dan non
sintesis.
1. Media Sintetis
Menurut Pradhika (2018), media sintesis adalah media yang seluruh komposisinya diketahui.
Media sintetik digunakan dalam uji metabolisme suatu mikroorganisme.

2. Media Semi Sintetis

Menurut Pradhika (2018), media semi sintetis atau media kompleks adalah media yang sebagian
komposisinya tidak diketahui dengan pasti. Media kompleks seringkali dibutuhkan karena
kebutuhan nutrisi dari beberapa bakteri yang tidak diketahui sehingga media sintesis tidak dapat
dibuat untuk keperluan ini. Seringkali satu jenis media kompleks dapat cukup kaya untuk
kebutuhan banyak jenis bakteri. Media ini dapat mengandung bahan yang tidak diketahui pasti
komposisinya seperti peptone, meat extract dan yeast extract.

3. Media Non Sintetis

Menurut Harumayanti (2019), media non sintetis atau media alami yaitu media yang disusun oleh
bahan-bahan alami seperti kentang, telur, dan daging. Pada saat ini media alami yang banyak
digunakan adalah dalam bentuk kultur jaringan tanaman atau hewan. Contoh penggunaan media
alami adalah telur yang digunakan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan virus.

B. Media Berdasarkan Sifat Fisik

Berdasarkan sifat fisiknya media dibagi menjadi media cair, media semi padat, dan media
padat.
1. Media Cair
Menurut Yusmaniar (2017), media cair digunakan untuk pembenihan diperkaya sebelum
disebarkan ke media padat, tidak cocok untuk isolasi mikroba dan tidak dapat dipakai untuk
mempelajari koloni kuman. Contoh media cair Nutrient Broth (NB), Pepton Dilution Fluid (PDF),
Lactose Broth (LB), Mac Conkey Broth (MCB), dan lain-lain. Pepton merupakan protein yang
diperoleh dari peruraian enzim hidrolitik seperti pepsin, tripsin, pepton. Pepton mengandung.

II-2
Nitrogen dan bersifat sebagai larutan penyangga, beberapa kuman dapat tumbuh dalam larutan
pepton 4%.

2. Media semi padat

Menurut Harumayanti (2019), media setengah padat dibuat dengan bahan sama dengan media
padat, akan tetapi yang berbeda adalah komposisi agarnya. Media ini digunakan untuk melihat
gerak kuman secara mikroskopik.

3. Media padat
Menurut Yusmaniar (2017), media padat mengandung komposisi agar sebesar 15 %. Media padat
digunakan untuk mempelajari koloni kuman, untuk isolasi dan untuk memperoleh biakan murni.
Contoh media padat Nutrient Agar (NA), Potato Detrose Agar (PDA), dan Plate Count Agar
(PCA).

C. Media Berdasarkan Tujuan/Kegunaannya

Berdasarkan tujuan/kegunaannya, media dapat dibagi menjadi 5, yaitu: media untuk isolasi, media
selektif, media diperkaya, media untuk karakterisasi bakteri, dan media diferensial.
1. Media untuk Isolasi
Menurut Rachmawaty (2020), media yang dipergunakan untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakan satu atau lebih kelompok mikroba secara umum. Misalnya agar kaldu nutrisi
untuk bakteri, dan agar kentang dekstrosa untuk jamur.

2. Media Selektif/Penghambat
Menurut Rachmawaty (2020), media pembiakan selektif mendukung pertumbuhan
mikroorganisme jenis tertentu dan menghambat pertumbuhan flora campuran lain. Selektifitas ini
diperoleh dengan menambahkan bahan kimia, pewarna, atau antibiotik pada media. Contoh media
ini adalah Selective Strep Agar dengan 5% darah domba, media Thiosulfate Citrate Bile Salt
Sucrose (TCBS) merupakan media selektif untuk bakteri Vibrio colera, Media Salmonella &
Shigella Agar (SSA), media ini digunakan untuk menyeleksi bakteri Salmonella dan Shigella.

3. Media Diperkaya (Enrichment)

Menurut Rachmawaty (2020), media diperkaya/media kaya adalah media yang ditambahkan zat-
zat organik yang diperoleh dari makhluk hidup misalnya darah, telur dan lain-lain. Media ini
dipergunakan untuk pertumbuhan bakteri yang tidak dapat tumbuh pada media sederhana misalnya
Gonococcus, Streptococcus dan Pneumococcus.

II-3
4. Media untuk Karakterisasi Bakteri
Menurut Rachmawaty (2020), media yang digunakan untuk pengujian senyawa tertentu dengan
bantuan mikroba. Misalnya media penguji vitamin, antibiotik, residu pestisida.

5. Media Diferensial
Menurut Zimbro dkk (2009), media diferensial adalah media yang mengandung unsur yang
memungkinkan untukmengidentifikasi mikroorganisme jenis tertentu dari kultur murni atau
campuran. Identifikasi ini biasanya berdasarkan penampakan dari mikroorganisme, seperti warna
koloni atau adanya presipitat. Contoh media ini adalah sebagai berikut:
a. Media Mac Conkey: pada media ini dapat dibedakan bakteri yang memfermentasikan laktosa
dan yang tidak memfermentasikan laktosa.
b. Media Klinger Iron Agar (KIA): pada media ini dapat diketahui bakteri yang
memfermentasikan laktosa dan glukosa serta pembentukan H₂S.
c. Triple Sugar Iron Agar (Agar TSI): media ini digunakan untuk mengidentifikasi organisme
intestinal gram negatif berdasarkan kemampuannya untuk memfermentasikan dektrosa,
laktosa, dan sukrosa, serta menghasilkan sulfida.

2.4 Prinsip Dasar Preparasi

Preparasi media merupakan proses persiapan yang dilakukan untuk membuat lingkungan buatan
sebagai tempat berkembang biaknya bakteri. Pembuatan media dalam praktikum mikrobiologi
perlu memerhatikan bahan atau nutrisi yang digunakan agar dapat menunjang kehidupan bakteri
yang ingin dikembangbiakkan. Media yang dibuat perlu memerhatikan beberapa hal, seperti:
mengandung air untuk menjaga kelembaban dan untuk pertukaran zat atau metabolisme, sumber
karbon, mineral, vitamin dan gas, tekanan osmosis (isotonik), derajat keasaman/pH (umumnya
netral ataupun alkali), temperatur harus sesuai dan steril (Suanda, 2018).

2.5 Fungsi Media

Fungsi dari suatu media yaitu secara kualitatif digunakan untuk isolasi dan identifikasi
mikroorganisme, sedangkan secara kuantitatif digunakan untuk perbanyakan dan perhitungan
jumlah mikroorganisme. Fungsi dari media dibedakan berdasarkan sifat fisiknya, seperti medium
cair berfungsi untuk mengetahui karakter suatu mikroba berdasarkan kebutuhan oksigen, medium
setengah padat berfungsi agar mikroba dapat menyebar ke seluruh media tanpa mengalami
pencampuran sempurna jika dilakukan agitasi atau penggoyangan, dan medium padat berfungsi
untuk memudahkan penghitungan koloni mikroba (Luklukyah dkk, 2019).

II-4
Media adalah campuran nutrien atau zat makanan yang dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk
pertumbuhan. Media selain untuk menumbuhkan mikroba juga dibutuhkan untuk isolasi &
inokulasi mikroba serta untuk uji fisiologi dan biokimia mikroba. Media yang baik untuk
pertumbuhan mikroba adalah yang sesuai dengan lingkungan pertumbuhan mikroba tersebut,
yaitu susunan makanannya di mana media harus mengandung air untuk menjaga kelembaban dan
untuk pertukaran zat atau metabolisme, juga mengandung sumber karbon, mineral, vitamin dan
gas, tekanan osmosis yaitu harus isotonik, derajat keasaman/pH umumnya netral tapi ada juga
yang alkali, temperatur harus sesuai dan steril. Media harus mengandung semua kebutuhan untuk
pertumbuhan mikroba, yaitu: sumber energi misalnya gula, sumber nitrogen, juga ion anorganik
essensial dan kebutuhan yang khusus, seperti vitamin serta unsur makro dan unsur mikro
(Yusmaniar, 2017).

2.6 Faktor-Faktor Yang Memengaruhi Preparasi Media

Menurut Juariah (2018), Faktor-faktor yang mempengaruhi preparasi media adalah sebagai
berikut:
a. Susunan Makanan
Unsur-unsur yang diperlukan dalam media meliputi air, sumber karbon, sumber nitrogen, vitamin,
mineral dan gas. Bakteri peka terhadap kekeringan sehingga perlu air yang cukup sehingga kondisi
tetap selalu lembab. Untuk sumber karbon dapat digunakan senyawa karbon sederhana seperti
CO2, CH4 atau senyawa karbon kompleks seperti gula (glukosa, laktosa, sukrosa dan lain
sebagainya). Senyawa nitrogen dapat berasal dari senyawa nitrogen sederhana seperti NH3 atau
nitrogen yang lebih kompleks seperti pepton dan asam amino. Mineral yang sering dibutuhkan
dalam media adalah K, Mg, Na, Zn, P, S dan Cl. Beberapa bakteri membutuhkan vitamin K
(misal: Bacteriodes melanogenicus) dan juga gas (misal: Gonococcus membutuhkan CO2), namun
ada juga bakteri tertentu justru mati jika ada oksigen (bakteri anaerob).

b. Temperatur
Bakteri agar dapat tumbuh optimal membutuhkan suhu tertentu. Umumnya bakteri patogen
membutuhkan suhu sekitar 37oC sesuai dengan suhu tubuh manusia walaupun ada juga bakteri
yang membutuhkan suhu tinggi seperti Camphylobacter (42oC).

c. Tekanan Osmosis
Secara umum untuk pertumbuhannya, bakteri membutuhkan media isotonik. Apabila media
bersifat hipotonik maka bakteri akan mengalami plasmoptysis dan apabila bersifat hipertonik,
bakteri akan mengalami plasmolysis.
II-5
d. Derajat Keasaman (pH)
Sebagian besar bakteri membutuhkan pH sekitar netral. Namun beberapa bakteri butuh perlakuan
khusus sebagai contoh bakteri vibrio yang membutuhkan pH alkali sekitar 8-10 untuk dapat
tumbuh optimal.

e. Sterilitas
Sterilitas merupakan hal yang mutlak dibutuhkan untuk melakukan pemeriksaan mikrobiologi,
karena bakteri yang diharapkan tumbuh adalah bakteri penyebab. Jika media yang digunakan tidak
steril maka tidak dapat dibedakan apakah yang tumbuh merupakan bakteri yang dibutuhkan atau
hanya sekedar bakteri kontaminan.

II-6
 BAB III
METODOLOGI PRAKTIKUM

3.1. Alat
Adapun alat-alat yang digunakan pada kegiatan praktikum mikrobiologi lingkungan modul
preparasi media ini adalah sebagai berikut:
1. Alat-alat yang digunakan pada modul 1 sterilisasi
Adapun alat-alat yang digunakan pada modul sterilisasi sebelumnya diantaranya, mangkuk plastik,
kawat, dandang, gelas ukur, spatula/sendok, batang pengaduk dan gelas keramik.

2. Aluminium Foil
Fungsi: untuk menutup bagian atas gelas keramik ketika dikukus agar media yang dibuat tetap
steril.

Gambar 3.1. Aluminium Foil

Sumber: detikFood, 2020

3. Timbangan
Fungsi: sebagai alat untuk mengukur takaran bahan-bahan praktikum.

Gambar 3.2. Timbangan

Sumber: Mega Plastik, 2020

III-1
4. Panci
Fungsi: digunakan untuk merebus kentang dan agar-agar.

Gambar 3.3. Panci

Sumber:Ikea.co.id, 2021

5. Dandang
Fungsi: sebagai alat untuk mengukus alat dan bahan pada praktikum.

Gambar 3.4. Dandang

Sumber: Logamjawa, 2021

Di samping itu, untuk mendukung proses pelaksanaan praktikum prepasi media sesuai dengan
prosedur, beberapa alat tambahan yang digunakan sebagai pelengkap berupa :
1. Tissue
2. Serbet
3. Alat pelindung diri (APD)

3.2. Bahan
A. Nutrien Agar (NA)
Berikut ini adalah bahan-bahan yang digunakan untuk media Nutrient Agar (NA):
1. Aqua
Pada praktikum ini aqua berfungsi sebagai bahan cair untuk melarutkan agar-agar. Media nutrient
agar menggunakan aqua sebanyak 400 ml.

Gambar 3.5 Aqua

Sumber: Shopee.com, 2021

III-2
2. Tepung Agar-Agar
Agar-agar adalah zat berupa gel yang diolah dari rumput laut atau alga dan bisa dimakan, dalam
bidang medis digunakan sebagai pembiak bakteri di laboratorium.

Gambar 3.6 Tepung Agar-Agar

Sumber: Blibi.com, 2020

B. Potato Dextrose Agar (PDA)

Berikut ini adalah bahan-bahan yang digunakan untuk media Potato Dextrose Agar (PDA):
1. Aqua
Pada praktikum ini aqua berfungsi sebagai bahan cair untuk melarutkan agar-agar. Media nutrient
agar menggunakan aqua sebanyak 400 ml.

Gambar 3.7 Aqua

Sumber: Shopee.com, 2021

2. Tepung Agar-Agar
Agar-agar adalah zat berupa gel yang diolah dari rumput laut atau alga dan bisa dimakan, dalam
bidang medis digunakan sebagai pembiak bakteri di laboratorium.

Gambar 3.8 Tepung Agar-Agar

Sumber: Blibi.com, 2020

III-3
3. Kentang
Kentang adalah tanaman berumbi yang tinggi karbohidrat.

Gambar 3.9. Kentang

Sumber: detikFood, 2020

4. Gula
Gula yang digunakan pada pembuatan media ini sebanyak 5 gram, berfungsi sebagai pengganti
dextrose.

Gambar 3.10. Gula

Sumber: Kompas.com, 2021

III-4
3.3 Prosedur Praktikum
A. Prosedur Pembuatan Nutrient Agar

Mulai

Siapkan alat dan bahan yang

digunakan untuk media Nutrient Agar

Masukkan tepung agar-agar ke dalam panci

latambahkan aqua

Aduk menggunakan sendok

Masak agar-agar sampai mendidih sambil terus diaduk

Setelah mendidih, masukkan kedalam gelas keramik

Tutup bagian atas gelas dengan menggunakan aluminium foil

Kukus NA dengan menggunakan dandang selama 10 menit

Setelah 10 menit, angkat NA lalu tuang kedalam 3 buah wadah

Tutup wadah dan tunggu sampai NA mengeras

Berikan label di setiap tutup wadah (NA1, NA2, NA3)

Selesai

Gambar 3.11. Diagram Alir Prosedur Pembuatan Nutrient Agar

Sumber: Modul Praktikum Mikrobiologi Online, 2022

III-5
B. Prosedur Pembuatan Potato Dextrose Agar

Mulai

Siapkan alat dan bahan yang

digunakan untuk media Potato Dextrose Agar

Kupas kentang dan potong kecil-kecil berbentuk dadu

Rebus kentang sampai mendidih lalu saring kentang

dam ambil air rebusan kentang

Masukkan ekstrak kentang ke dalam gelas keramik

lalu tambahkan gula dan tepung agar-agar

Aduk menggunakan sendok dan tambahkan air

panas sampai gelas penuh

Tutup bagian atas gelas dengan aluminium foil

Kukus PDA dengan menggunakan dandang selama 10 menit

Setelah 10 menit, angkat PDA lalu tuang kedalam 3

buah wadah

Tutup wadah dan tunggu sampai PDA mengeras

Berikan label disetiap tutup wadah (PDA1, PDA2, PDA3)

Selesai

Gambar 3.12. Diagram Alir Prosedur Pembuatan Potato Dextrose Agar

Sumber: Modul Praktikum Mikrobiologi Online, 2022

III-6
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Percobaan

Tabel 4.1 Pengamatan Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar

Nama Media Foto Agar Jenis Media Jenis Agar

- Media Padat - Agar-agar
Nutrient Agar swallow
(NA)

- Media Padat - Kentang +

Potato Dextrose Agar-agar
Agar (PDA) swallow +
Gula

Sumber: Aswara, 2022

4.2 Pembahasan
Menurut Rachmawaty (2020), media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara
(nutrient) yang digunakan untuk membiakkan mikroba. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi
media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Pada pecobaan
ini media yang digunakan adalah Nutrient Agar (NA) dan Potato Dextrose Agar (PDA).

Nutrient Agar (NA) adalah salah satu contoh media yang sering digunakan untuk menumbuhkan
dan mengembangbiakkan bakteri (Wachidah, 2016). Media ini dibuat dari tepung agar sebanyak
4 gram dan 450 ml akuades. Agar pada NA berfungsi sebagai pemadat medium dan akuades
sebagai bahan pelarut dalam pembuatan medium dan sebagai sumber O₂.

Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang sering digunakan untuk menumbuhkan dan
mengembangbiakkan jamur dan kapang. Media ini dibuat dari 125 gram kentang yang direbus
untuk diambil sari sarinya. Kemudian larutan kentang yang sudah disaring ditambahkan 4 gram
tepung agar, 5 gram gula pasir, dan akuades secukupnya. Kentang menjadi sumber karbon,
karbohidrat, dan nutrisi bagi mikroba. Dextrose sebagai sumber energi dan sebagai sumber
karbon. Agar sebagai bahan pemadat medium. Akuades sebagai bahan pelarut dalam pembuatan
medium dan sebagai sumber O₂.

IV-1
 BAB V
PENUTUP

5.1 Kesimpulan
Adapun kesimpulan pada praktikum ini antara lain:
1. Menurut Yusmaniar dkk. (2017), media adalah campuran nutrien atau zat makanan yang
dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk pertumbuhan. Media juga dibutuhkan untuk isolasi &
inokulasi mikroba serta untuk uji fisiologi dan biokimia mikroba. Media yang baik untuk
pertumbuhan mikroba adalah yang sesuai dengan lingkungan pertumbuhan mikroba tersebut.
2. Adapun macam-macam media dapat dibagi berdasarkan komposisi, sifat fisik dan, tujuannya.
Berdasarkan komposisinya, media dapat dibagi menjadi media sintesis, semi sintesis, dan
nonsintesis. Berdasarkan sifat fisiknya media dibagi menjadi media cair, media semi padat,
dan media padat. Berdasarkan tujuan, media dapat dibagi menjadi 5, yaitu: media untuk
isolasi, media selektif, media diperkaya, media untuk karakterisasi bakteri, dan media
diferensial.
3. Media harus memenuhi semua kriteria untuk pertumbuhan mikroba, yaitu sumber energi
misalnya gula, sumber nitrogen, juga ion anorganik essensial, dan seperti vitamin. Media
pertumbuhan mengandung unsur makro yang dibutuhkan mikroba seperti karbon (C),
hydrogen (H), oksigen (O), nitrogen (N), dan fosfor (P) dan mikro seperti besi (Fe) dan
magnesium (Mg).
4. Perbedaan antara agar komersil dan teknis adalah dari kandungan bahan- bahan yang
digunakan dalam agar tersebut. Agar komersil tidak mengandung pati, gelatin, dan protein.
Agar teknis memiliki kandungan pati, gelatin, protein, gelisat, dan sebagainya yang memenuhi
syarat bakteriologi.

5.2 Saran
Adapun saran pada praktikum ini antara lain:
1. Sebaiknya praktikan ke depannya dapat memahami terlebih dahulu prosedur kerja percobaan
dengan baik sebelum melakukan kegiatan praktikum.
2. Sebaiknya praktikan selanjutnya lebih mengecek alat-alat yang digunakan pada percobaan
sudah steril agar tidak terjadi kontaminasi dengan mikroorganisme yang lain.
3. Sebaiknya praktikan ke depannya melakukan prosedur percobaaan praktikum dengan baik.

V-1
 DAFTAR PUSTAKA

Cappuccino, J.G. & Sherman, N. 2014. Manual Laboratorium Biologi. EGC: Jakarta, Indonesia.

Harumayanti, D.M. 2019. Media Alternatif Pertumbuhan Bakteri. Politeknik Kesehatan:

Denpasar.

Juariah, S. 2018. Pemanfaatan Limbah Cair Industri Tahu Sebagai Media Alternatif Pertumbuhan
Bacillus sp. Akademi Analis Kesehatan Yayasan Fajar Pekanbaru: Pekanbaru

Luklukyah, Z., Sermalia, N.P., Mujtahidah, T., 2019. Mikrobiologi Dasar. Universitas Tidar: Jawa
Tengah.

Pradhika, I. 2018. Laboratorium Mikrobiologi Standar.Jakarta.

Rachmawaty, F.J. 2021. Media Mikrobiologi. Universitas Islam Indonesia: Yogyakarta.

Yudistara, R. 2019. Perbedaan Jumlah Koloni Candida Albicans Pada Media Emb (Eosin
Methylen Blue) Dan Sda (Sabouroud Dextrose Agar). Undergraduate thesis, Universitas
Katolik Musi Charitas: Palembang.

Yusmaniar, Wardiyah, Nida, K., 2017. Mikrobiologi dan Parasitologi. Kementerian Kesehatan
Republik Indonesia.

Zimbro, M.J., David A.P., Sharon M.M., George E.W., and Julie A.J., 2009. DifcoTM & BBLTM
Manual: Manual of Microbiological Culture Media, Second Edition. Becton, Dickinson and
Company: Maryland.

v
 LAMPIRAN A
DOKUMENTASI

Foto Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar Foto Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar
Sumber: Aswara, 2022 Sumber: Nasution, 2022

Foto Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar Foto Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar
Sumber: Irvani, 2022 Sumber: Aulia, 2022

Foto Nutrient Agar dan Potato Dextrose Agar

Sumber: Sirait, 2022

vii
 LAMPIRAN B
APLIKASI DALAM KEHIDUPAN SEHARI-HARI

“PEMANFAATAN LIMBAH CAIR INDUSTRI TAHU SEBAGAI

MEDIA ALTERNATIF PERTUMBUHAN Bacillus sp”

Beberapa peneliti melakukan penelitian untuk menemukan media alternatif salah satunya dengan
sumber karbohidrat. Berbagai sumber protein lain juga berhasil digunakan sebagai media alternatif
pertumbuhan mikroorganisme. Seperti yang dilakukan oleh Jauriah (2018) yang menggunakan
beberapa biji dari suku Leguminoseae yaitu kacang tunggak, kacang hijau, kacang kedelai hitam,
dan kedelai untuk pertumbuhan berbagai macam bakteri seperti Escherichia coli, Bacillus sp.,
Staphylsococcus sp., Klebsiella sp. dan Pseudomonas sp. Selain bakteri, bahan- bahan tersebut
juga dapat digunakan sebagai media pertumbuhan jamur. Limbah ampas tahu selama ini hanya
dijadikan makanan ternak. Setiap kilogram kedelai akan menghasilkan limbah cair berkisar antara
1,5 – 2 liter. Oleh karena itu limbah cair industri tahu dapat digunakan sebagai media alternatif
pertumbuhan bakteri seperti Bacillus sp. Limbah tahu masih memiliki kandungan organik yaitu
protein (40%- 50%), karbohidrat (25%- 50%), dan lemak (10%).

Bahan yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah limbah cair industri tahu yang berada di
jalan Lilin dan strain Bacillus sp. Jenis penelitian yang akan dilakukan adalah experiment
laboratory yakni melihat pertumbuhan Bacillus sp. pada media alternatif dari limbah ampas tahu
dengan variasi konsentrasi yaitu 6%, 7%, 8%, 9% dan 10% dan diinkubasi dalam waktu 24 jam
dan 48 jam. Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah oven, ose, lampu spritus, tabung
reaksi dan rak, erlenmeyer, hot plate beaker glass, petridisk dan alat gelas lainnya. Bahan yang
digunakan dalam penelitian ini : ialah limbah cair tahu, agar batang, Media NA (Nutrient Agar),
NaCl 0,9 %, suspensi Bacillus sp. yang instan, alkohol, kapas, pH kertas, aluminium foil dan
aquadest.

Pada penelitian ini yang dilakukan adalah pengamatan karakteristik fisik media pertumbuhan dan
total koloni Bacillus sp. pada media limbah cair tahu dan Nutrient Agar dengan variasi kosentrasi
6%, 7%, 8%, 9% dan 10%. Metode yang di gunakan adalah spread plate atau metode sebar, dan
inkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C.

Pada penelitian ini, koloni pada media Nutrient Agar terlihat lebih besar dan mudah diamati.
Sedangkan pada media limbah cair tahu terlihat lebih kecil tetapi masih bisa di amati. Hal ini
dikarenakan media Nutrient Agar merupakan media yang sudah teruji secara klinis untuk

vii
pertumbuhan bakteri, sehingga proses metabolisme bakteri berlangsung optimal. Hasil
pertumbuhan Bacillus sp. pada media limbah cair tahu kosentrasi 8% menunjukkan bahwa
pertumbuhan Bacillus sp. pada pengenceran 10-4 dengan total koloni yaitu 102 x 10-4 CFU/mL.
menjadi rata-rata tertinggi pertumbuhan koloni pengulangan pertama dan kedua pada media
limbah cair tahu. Hasil dari pertumbuhan koloni di media Nutrient Agar dan limbah cair tahu
berbeda, pada media Nutrient Agar koloni yang tumbuh lebih besar dan jelas. Sedangkan pada
media limbah cair tahu koloni yang tumbuh kecil dan bisa dilihat. Hal tersebut di sebabkan oleh
nutrisi yang terdapat pada media Nutrient Agar dan media limbah cair tahu berbeda. Berdasarkan
uraian diatas, media alternatif yang paling efektif dari limbah cair tahu untuk pertumbuhan
Bacillus sp. adalah media dengan kosentrasi 8% karena pertumbuhan populasi bakteri dikatakan
baik, penyebaran merata dan mendekati jumlah koloni pada kontrol positif.

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan maka diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
Pertumbuhan Bacillus sp. pada media Nutrient Agar pada pengenceran 10-4 yaitu 221x10-4 besar,
sangat mudah dilihat dengan mata telanjang sedangkan pertumbuhan pada media limbah cair
industri tahu pada kosentrasi 6% bakteri yang tumbuh 24x10-4 , kosentrasi 7% bakteri yang
tumbuh 27x10-4 , kosentrasi 8% bakteri yang tumbuh 102x10-4 , kosentrasi 9% yang tumbuh
46x10-4 , kosentrasi 10% yang tumbuh 62x10-4 . bakteri yang tumbuh kecil,tetapi masih bisa
dilihat oleh mata (Juariah, 2018).

i viii