10

LAPORAN PRAKTIKUM
MIKROBIOLOGI DASAR
Disusun Oleh:
Kelompok 10
FEBRIAN SALIM PRASETYO 205080300111046
AMIRA ZAKYA BUDI UTAMI 205080300111016
NAILI ZULFA MAULIDIYAH 205080300111014
FAHMI SHABRIANZAH ADI 205080301111027
TIANI AZARIA 205080301111042
LAILI NOVIA NUR AZIZA 205080301111039
RISKA VALERINA 205080301111040
ILHAM ASHABIL KAHFI 205080307111008
ALVIN ISVANDIAR 205080307111016
ALIYYAH AZZUHRAH 205080307111031
ANDINI PUTRIANSYAH 205080307111032
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

JURUSAN MANAJEMEN SUMBERDAYA PERIKANAN
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2021
LEMBAR PENGESAHAN
Laporan Praktikum Mikrobiologi Dasar disusun sebagai tugas akhir dalam
menyelesaikan Praktikum Mikrobiologi Dasar dan salah satu syarat lulus mata
kuliah Mikrobiologi Dasar.
Menyetujui,
Koordinator Asisten Asisten Laporan 1
(Siska Wahyuningtyas) (M. Fadhilah Fadhlurrohman)
NIM. 185080301111003 NIM. 185080301111024
Asisten Laporan 2 Asisten Laporan 3
(Rafifa Bunga Jashita) (Riska Sulistianti Putri)
NIM. 185080300111009 NIM. 185080300111035

KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberi petunjuk dan
bimbingan-Nya sehingga kami dapat mengerjakan dan menyelesaikan Penulisan
Laporan Praktikum Mikrobiologi Dasar. Adapun laporan ini dibuat sebagai salah
satu tugas untuk memenuhi tugas akhir praktikum Mata Kuliah Mikrobiologi
Dasar secara daring/online.
Tidak lupa kami mengucapkan terima kasih untuk Para Asisten Praktikum
Mikrobiologi dasar 2021 yang telah membantu kami dalam praktikum, kepada
rekan – rekan dan terutama pula penulis mengucapkan terima kasih kepada :
- Dr. Ir Hartati Kartikaningsih, Ms
Besar harapan kami agar kiranya laporan praktikum Mata Kuliah
Mikrobiologi Dasar ini dapat bermanfaat bagi mahasiswa dan institusi. Kami
menyadari bahwa penulisan laporan ini masih belum sempurna, untuk itu mohon
kritik dan saran yang bersifat membangun dari para pembaca agar dalam
penyusunan laporan berikutnya menjadi lebih baik. Semoga laporan ini dapat
bermanfaat bagi semua pihak.
Malang, 25 April 2021
Penulis
ii
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................................... i

KATA PENGANTAR ............................................................................................ ii
DAFTAR ISI .........................................................................................................iii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ viii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. x
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xi
MATERI 1 PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI .........................................xii
BAB I. PENDAHULUAN..................................................................................... 13
1.1 Latar Belakang .................................................................................... 13
1.2 Maksud dan Tujuan ............................................................................. 14
1.3 Waktu dan Tempat .............................................................................. 15
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA............................................................................ 16
2.1 Sterilisasi ............................................................................................. 16
2.2 Teknik Dasar Mikrobiologi.................................................................... 17
BAB III. PEMBAHASAN ..................................................................................... 18
3.1 Pengenalan Alat .................................................................................. 18
3.2 Sterilisasi Autoklaf Elektrik ................................................................... 24
3.3 Teknik Dasar Mikrobiologi ................................................................ 30
BAB IV. PENUTUP ............................................................................................ 35
4.1 Kesimpulan .......................................................................................... 35
4.2 Saran ................................................................................................... 35
DAFTAR PUSTAKA........................................................................................... 36
LAMPIRAN ........................................................................................................ 38
MATERI 2 INOKULASI MIKROBA ..................................................................... 39
1.1 Latar Belakang .................................................................................... 40
1.3 Waktu dan Tempat .............................................................................. 41
2.1 Media Tanam Mikroba ......................................................................... 42
2.1.1 Na (Nutrient Agar) ........................................................................ 42
2.1.2 PCA (Plate Count Agar)................................................................ 42
2.1.3 PDA (Potato Dextrose Agar) ......................................................... 43
iii
2.1.4 LB (Lactose Broth)........................................................................ 43
2.1.5 NB (Nutrient Broth) ....................................................................... 43
2.1.6 MHA (Mueller Hinton Agar) ........................................................... 44
BAB III. PEMBAHASAN ..................................................................................... 49
3.1 Pembuatan Media ............................................................................... 49
3.1.1 NA (Nutrient Agar) ........................................................................ 49
3.1.2 PCA (Plate Count Agar)................................................................ 50
3.1.3 PDA (Potato Dextrose Agar) ......................................................... 52
3.2 Pengenceran Sampel .......................................................................... 53
3.2.1 Ikan Asin ............................................................................................ 54
3.2.2 Air Limbah Ikan............................................................................. 57
3.2.3 Terasi ........................................................................................... 60
3.2.4 Air closet....................................................................................... 62
3.3 Metode Inokulasi ................................................................................. 63
3.3.1 Metode Agar Miring ...................................................................... 63
3.3.2 Metode Gores ............................................................................... 66
3.3.3 Metode Tebar ............................................................................... 68
3.3.4 Metode Tuang .............................................................................. 70
3.3.5 Metode Tusuk ............................................................................... 72
BAB IV. PENUTUP ............................................................................................ 74
4.1 Kesimpulan .......................................................................................... 74
4.2 Saran ................................................................................................... 74
DAFTAR PUSTAKA........................................................................................... 75
LAMPIRAN ........................................................................................................ 77
MATERI 3 PERHITUNGAN MIKROBA .............................................................. 78
1.1 Latar Belakang .................................................................................... 79
1.3 Waktu Dan Tempat .............................................................................. 80
2.1 Metode Perhitungan Mikroba ............................................................... 81
2.1.1 Metode TPC (Total Plate Count) ................................................... 81
2.1.2 Metode MPN (Most Probable Number) ......................................... 81
2.1.3 Metode Mc Farland ....................................................................... 82
2.1.4 Metode Hemocytometer ............................................................... 83
BAB III. METODELOGI ...................................................................................... 85
iv
3.1 Pembuatan Media Tanam.................................................................... 85
3.1.1 LB (Lactose Broth)........................................................................ 85
3.1.2 NB (Nutrient Broth) ....................................................................... 87
3.2 Skema Kerja Metode ........................................................................... 88
3.2.4 Metode Hemocytometer ............................................................... 95
BAB IV. PEMBAHASAN .................................................................................... 97
4.1 Data Hasil Perhitungan Praktikum ....................................................... 97
4.1.3 Metode Mc Farland ..................................................................... 101
4.1.4 Metode Hemasitometer .............................................................. 103
BAB V. PENUTUP ........................................................................................... 104
5.1 Kesimpulan ........................................................................................ 104
5.2 Saran ................................................................................................. 105
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 106
LAMPIRAN ...................................................................................................... 107
MATERI 4 ZONA HAMBAT ANTI-BAKTERI .................................................... 111
BAB I. PENDAHULUAN................................................................................... 112
1.1 Latar Belakang .................................................................................. 112
1.2 Maksud dan Tujuan ........................................................................... 113
1.3 Waktu dan Tempat ............................................................................ 113
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA.......................................................................... 114
2.1 Zona Hambat ..................................................................................... 114
2.2 Metode Cakram ................................................................................. 115
BAB III. METODOLOGI ................................................................................... 116
3.1 Pembuatan Media MHA (Muller Hinton Agar) .................................... 116
3.2 Metode Cakram ................................................................................. 117
3.2.1 Perendaman Kertas Cakram ...................................................... 117
3.2.2 Uji Daya Hambat Metode Cakram .............................................. 118
3.2.3 Pengukuran Zona Hambat Dengan Metode Cakram .................. 119
BAB IV. PEMBAHASAN .................................................................................. 121
4.1 Data Hasil Praktikum ......................................................................... 121
BAB V. PENUTUP ........................................................................................... 123
5.1 Kesimpulan ........................................................................................ 123
v
5.2 Saran ................................................................................................. 123
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 124
LAMPIRAN ...................................................................................................... 125
MATERI 5 PEWARNAAN GRAM ..................................................................... 127
BAB I PENDAHULUAN.................................................................................... 128
1.1 Latar Belakang .................................................................................. 128
1.3 Waktu dan Tempat ............................................................................ 129
2.1 Escherichia Coli ................................................................................. 130
2.2 Bacillus Sp. ........................................................................................ 131
2.3 Pewarnaan Gram .............................................................................. 132
BAB III. PEMBAHASAN ................................................................................... 134
3.1 Skema Kerja Pewarnaan Gram ......................................................... 134
3.2 Mekanisme Penyerapan Warna ......................................................... 135
3.2.1 Bakteri Gram Positif .................................................................... 136
3.2.2 Bakteri Gram Negatif .................................................................. 137
BAB IV. PENUTUP .......................................................................................... 139
4.1 Kesimpulan ........................................................................................ 139
4.2 Saran ................................................................................................. 139
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 140
LAMPIRAN ...................................................................................................... 142
MATERI 6 IDENTIFIKASI HIFA ....................................................................... 143
BAB I. PENDAHULUAN................................................................................... 144
1.1 Latar Belakang .................................................................................. 144
1.3 Waktu dan Tempat ............................................................................ 145
2.1 Fungi ................................................................................................. 146
2.2 Kapang .............................................................................................. 146
2.3 Khamir ............................................................................................... 147
2.4 Hifa .................................................................................................... 148
2.5 Slide Culture ...................................................................................... 148
BAB III. PEMBAHASAN ................................................................................... 150
3.1 Pembuatan Slide Culture ................................................................... 150
3.2 Identifikasi Hifa .................................................................................. 151
vi
BAB IV. PENUTUP .......................................................................................... 153
4.1 Kesimpulan ........................................................................................ 153
4.2 Saran ................................................................................................. 153
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 154
LAMPIRAN ...................................................................................................... 156
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Bagian-bagian Autoklaf .................................................................... 24

Gambar 2. Flowchart Cara Pengoperasian Autoklaf .......................................... 26
Gambar 3. Flowchart Pembungkusan Cawan Petri............................................ 27
Gambar 4. Flowchart Pembungkusan Pipet Serologis ....................................... 28
Gambar 5. Flowchart Pembungkusan Tabung Reaksi ....................................... 29
Gambar 6. Bukti Praktikum Materi 1 .................................................................. 38
Gambar 7. Flowchart Pembuatan Nutrien Agar ................................................. 49
Gambar 8. Pembuatan Media Plate Count Agar ................................................ 50
Gambar 9. Pembuatan Media Potato Dextrose Agar ......................................... 52
Gambar 10. Flowchart Pengenceran Ikan Asin .................................................. 54
Gambar 11. Flowchart Pengenceran Sampel Air Limbah Ikan ........................... 57
Gambar 11. Flowchart Pengenceran Sampel Terasi.......................................... 60
Gambar 13. Flowchart Pengenceran Sampel Air Closet .................................... 62
Gambar 14. Flowchart Metode Inokulasi Agar Miring ......................................... 64
Gambar 15. Gambar Metode Agar Miring .......................................................... 65
Gambar 16. Flowchart Metode Inokulasi Gores ................................................. 66
Gambar 17. Gambar Metode Gores................................................................... 67
Gambar 18. Flowchart Metode Inokulasi Tebar ................................................. 68
Gambar 19. Gambar Metode Tebar ................................................................... 69
Gambar 20. Flowchart Metode Inokulasi Tuang ................................................. 70
Gambar 21. Gambar Metode Tuang .................................................................. 71
Gambar 22. Flowchart Metode Tusuk ................................................................ 72
Gambar 23. Gambar Metode Inokulasi Tusuk .................................................... 73
Gambar 24. Bukti Praktikum Materi 2 ................................................................ 77
Gambar 25. Skema Kerja Pembuatan LB (Lactose Broth) ................................. 85
Gambar 26. Skema Kerja Pembuatan NB (Nutrient Broth) ................................ 87
Gambar 27. Skema Kerja TPC (Total Plate Count) ............................................ 88
viii
Gambar 28. Skema Kerja Pembuatan Media LB pada Metode MPN (Most
Probable Number) ............................................................................................. 90
Gambar 29. Skema Kerja Pengujian MPN (Most Probable Number) ................. 91
Gambar 30. Skema Kerja Metode Mc Farland ................................................... 93
Gambar 31. Skema Kerja Metode Hemocytometer ............................................ 95
Gambar 32. Standar Mc. Farland..................................................................... 101
Gambar 33. Biakan Bakteri Sampel Air Kloset ................................................. 102
Gambar 34. Penampakan Spora pada Mikroskop............................................ 103
Gambar 35. Hasil Hemasitometer .................................................................... 109
Gambar 36. Bukti Praktikum Materi 3 .............................................................. 110
Gambar 37. Flowchart Pembuatan Media MHA ............................................... 116
Gambar 38. Flowchart Perendaman Kertas Cakram ........................................ 117
Gambar 39. Flowchart Uji Daya Hambat Metode Cakram................................ 118
Gambar 40. Flowchart Pengukuran Zona Hambat Dengan Metode Cakram.... 119
Gambar 41. Skema kerja pewarnaan gram...................................................... 134
Gambar 41. Flowchart Pembuatan Slide Culture ............................................. 150
Gambar 41. Flowchart Identifikasi Hifa ............................................................ 151
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 1.Pengenalan Alat.................................................................................... 18

Tabel 2. Data hasil perhitungan metode TPC .................................................... 97
Tabel 3. Data hasil perhitungan metode MPN tabel seri 3 ................................. 99
Tabel 4. Data hasil perhitungan metode MPN tabel seri 5 ................................. 99
Tabel 5. Terasi 1 .............................................................................................. 107
Tabel 6. Terasi 2 .............................................................................................. 107
Tabel 7. Terasi 3 .............................................................................................. 108
Tabel 8. Terasi 4 .............................................................................................. 108
Tabel 9. Data Hasil Praktikum.......................................................................... 121
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.Screenshoot Praktikum ................................................................... 38

Lampiran 2.Screenshoot Praktikum ................................................................... 77
Lampiran 3. Tabel Hasil TPC dan Perhitungannya .......................................... 107
Lampiran 4. Perhitungan Hemositometer ......................................................... 109
Lampiran 5.Screenshoot Praktikum ................................................................. 110
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Zona Hambat Data Hasil Praktikum................. 125
xi
MATERI 1
PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI

JURUSAN MANAJEMEN SUMBERDAYA PERAIRAN
MALANG
2021
xii
13
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sterilisasi merupakan teknik menghilangkan atau membunuh semua
bentuk kehidupan seperti mikroba. Sterilisasi memiliki peran penting dalam
berlangsungnya aktivitas di laboratorium, yaitu sterilisasi pada peralatan atau
media kultur di laboratorium perlu dilakukan untuk mencegah terjadinya
kontaminasi yang tidak dingiinkan (Yoo, 2018). Teknik sterilisasi pada peralatan
laboratorium ada beberapa cara, seperti sterilisasi panas lembab (autoclave),
sterilisasi panas kering (oven), dan sterilisasi kimia gas (chemiclave). Namun,
sterilisasi peratalan paling efisienya itu menggunakan alat autoklaf. Autoklaf
merupakan alat sterilisasi dengan memanfaatkan tekanan penguapan panas dan
titik didih 121℃ untuk membunuh mikroba. Naiknya titik didih pada air yang
dipanaskan pada autoklaf akan menghasilkan suhu uap yang nantinya akan
digunakan untuk sterilisasi (Djais & Theodorea, 2019).
Alat-alat laboratorium mikrobiogi seperti tabung kaca, alat bedah, tabung
plastik, petridish, tip kuning, erlenmeyer, tabung reaksi, pipet, dan ose jarum, ose
loop, gelas ukur, cawan petri dan lain-lainnya termasuk kedalam peralatan yang
perlu disetrilisasi. Peralatan tersebut biasa digunakan untuk melakukan kultur
bakteri, kultur sel, kultur tanaman, dan penelitan biologi molekuler lainnya
(Mubarak et al., 2016). Tujuan dari dilakukannya sterilisasi pada peralatan
laboratorium adalah untuk menjaga kebersihan peralatan agar terbebas dari
mikoorganisme-mikroorganisme berbahaya yang dapat menjadi kontaminasi
pada media kultur. Hal tersebut dikarenakan sterilisasi pemanasan basah yang
14
dilakukan dapat menyebabkan denaturasi protein dan aktvitas enzim-enzim
didalam sel sehingga membunuh mikroorganisme (Istini, 2020).
Laboratorium mikrobiologi merupakan tempat dilakukannya berbagai
penelitian seperti penanaman bakteri, pengenceran, inokulasi dan lain-lainnya.
Kegiatan-kegiatan tersebut memerlukan lingkungan dan media yang bersih dan
terbebas dari aktivitas mikroorganisme untuk mencapai keberhasilan dan hasil
yang maskimal. Selain itu, pemahaman dan penggunaan alat-alat apa saja yang
diperlukan sangat penting untuk diketahui oleh seseorang yang ingin melakukan
kegiatan di laboratorium. Sterilisasi menjadi salah satu aspek penting untuk
menjaga kebersihan peralatan d ilaboratorium dari kontaminan dengan cara
membunuh atau menghilangkannya. Jika tidak dilakukan sterilisasi sebelum
melakukan aktivitas di laboratorium, maka mikroorganisme akan tumbuh dan
menyebabkan kontaminasi dan hasil percobaan yang tidak sesuai dengan hasil
yang diinginkan.
1.2 Maksud dan Tujuan
Maksud dari praktikum mikrobiologi dasar tentang materi pengenalan alat
sterilisasi dan teknik dasar mikrobiologi adalah agar praktikan dapat mengetahui
alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi dasar dan mengetahui
penggunaannya masing-masing alat serta mengetahui cara sterilisasi.
Tujuan dari praktikum mikrobiologi dasar tentang materi pengenalan alat
dan sterilisasi adalah melakukan atau mempraktikan secara langsung proses
sterilisasi dan memiliki kemampuan keterampilan menggunakan alat-alat di
laboratorium.
15
1.3 Waktu dan Tempat
Waktu dilaksanakannya Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Pengenalan
Alat Sterilisasi dan Teknik Dasar Mikrobiologi adalah hari Senin pada tanggal 19
April 2021 di rumah masing-masing praktikan pada pukul 20.30 WIB secara
daring melalui aplikasi google meet.

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Sterilisasi
Sterilisasi merupakan sebuah proses untuk membunuh mikroorganisme
yang ada. Sterilisasi dikatakan tidak sempurna apabila masih terdapat
pertumbuhan mikroorganisme. Jika sterilisasi berlangsung sempurna, maka
spora bakteri yang merupakan bentuk paling resisten dari kehidupan mikroba
akan mati (Pratomo, 2017). Sterilisasi sendiri memiliki tujuan untuk menjaga
kebersihan supaya peralatan terbebas dari mikroorganisme berbahaya sehingga
dapat terhindar dari kontaminasi dan juga menjadi jaminan keamanan,
kebersihan, dan sterilnya suatu produk agar aman digunakan oleh konsumen
(Istini, 2020).
Sterilisasi memiliki dua jenis metode, yakni sterilisasi panas basah
menggunakan autoklaf dan sterilisasi panas kering. Sterilisasi panas basah ialah
sterilisasi dengan menggunakan uap air disertai dengan tekanan. Pada sterilisasi
panas basah, udara dalam ruangan tergantikan oleh uap air, oleh karena itu
ruangannya ditutup rapat sehingga tekanan dan suhu akan mengalami
peningkatan. Sterilisasi panas kering terjadi melalui mekanisme konduksi panas,
yang mana panas yang telah terbentuk akan di absorbs oleh permukaan luar dari
alat yang disterilkan kemudian menyebar ke bagian dalam permukaan sampai
akhirnya suhu untuk sterilisasi tercapai. Sterilisasi panas kering ini digunakan
untuk alat-alat serta bahan yang steam-nya tidak dapat berpenetrasi secara
mudah dan digunakan untuk peralatan yang terbuat dari kaca (Indriyanti, 2011).
16
2.2 Teknik Dasar Mikrobiologi
Teknik dasar mikrobiologi berisi tentang uraian-uraian umum cara atau
metode awal pada kegiatan yang berkaitan dengan mikroba. Teknik dasar
mikrobiologi dapat terbagi menjadi tiga, yakni pengenceran, penanaman, dan
inokulasi. Pengenceran merupakan teknik dasar yang digunakan untuk
menumbuhkan koloni bakteri pada media yang terbatas. Hal ini disebabkan
karena tidak mungkin dilakukan perhitungan bakteri yang memiliki jumlah
puluhan ribu. Dengan kata lain pengenceran ini dimaksudkan untuk mengurangi
kepadatan bakteri yang terdapat pada sampel (Kadri et al., 2015).
Penanaman bakteri atau inokulasi adalah teknik lanjutan dari
pengenceran dan umumnya digunakan untuk isolasi bakteri. Inokulasi
merupakan kegiatan memindahkan mikroba dari medium yang lama ke medium
yang baru. Inokulasi harus dilakukan dengan tingkat ketelitian dan kesterilan
yang sangat tinggi. Dengan kata lain, inokulasi ialah upaya untuk menanamkan
mikroba (Sari, 2019).
17
BAB III. PEMBAHASAN
3.1 Pengenalan Alat
Pada praktikum mikrobiologi dasar dengan materi pengenalan alat dan
sterilisasi alat yang digunakan sebagai berikut:
Tabel 1.Pengenalan Alat

No Nama Alat Gambar Alat Fungsi
1. Erlenmeyer Sebagai tempat untuk
pembuatan media.
2. Beakerglass Untuk tempat pembuatan Na-

fis.
3. Mortal dan Untukmenghaluskansampel.

alu
4. Gelas ukur Tempat untuk mengukur

aquades.
5. Bunsen Untuk melakukan

pengkoordinasianaseptis.
18
6. Washingbott Untuk tempat aquades.
le
7. Triangel Untuk membantu meratakan

sampel bakteri pada media
biakan padat dengan metode
spread.
8. Bola hisap Untuk membantu pipet

serologis mengambil larutan.
Tombol pada bola hisap dibagi
menjadi tiga yaitu:
S:untuk mengambil larutan
E:untuk mengeluarkan larutan
A:untuk mengeluarkan udara
9. Objek glass Tempat objek yang akan
diamati dibawah mikroskop.
10. Objek glas Untuk mengamati jamur

cekung
11. Coverglass Untuk menutup objek glass.
12. Spatula Untuk menghomogenkan

larutan secara manual.
19
13. Pipet Untuk mengambil larutan
serologis dengan skala 0,1 – 1 ml.
14. Pipet Untuk mengambil larutan

volume dengan skala 1 – 10 ml.
15. Pipet tetes Untuk mengambil larutan

dalam skala kecil.
16. Ose jarum Untuk menginokulasi mikroba

dari media padat ke media
padat.
17. Ose loop Untuk menginokulasi mikroba

dari media padat ke cair atau
sebaliknya.
18. Tabung Sebagai tempat pengenceran

reaksi bertingkat.
19. Rak tabung Untuk meletakkan tabung

reaksi reaksi.
20. Sprayer Sebagai tempat alkohol 70%.
20
21. Cawan petri Sebagai tempat melakukan
penanaman mikroba.
22. Creshable Alat bantu untuk mengambil

tang benda yang panas.
23. Kaca arloji Sebagai alas pada

penimbangan media.
24. Nampan Tempat untuk meletakkan alat

dan bahan.
25. Mikropipet Alat yang digunakan untuk

memindahkan cairan
bervolume kecil, biasanya
kurang dari 1000 µL.
26. Hotplate Untuk memanaskan media
27. Mikroskop Untuk mengamati

mikroorganisme yang tidak
bisa dilhat dengan mata
telanjang.
28. Kulkas Untuk menyimpan sampel dan

media isolasi
21
29. Inkubator Untuk menginkubasi media
padat pada suhu yang bisa
ditentukan.
30. Waterbath Untuk menginkubasi bakeri

pada suhu yang bisa
ditentukan.
31. Etalase Untuk menginkubasi media

bakteri cair pada suhu ruang.
32. Oven Untuk melakukan sterilisasi

kering dengan suhu 1600C –
1700C selama 2-3 jam.
33. Autoklaf Untuk melakukan sterilisasi

basah pada suhu 1210C dan
tekanan 1 atm (0,15) selama
15-20 menit.
34. Kompor Sebagai sember pemanas
35. Kompor Sebagai sember pemanas.

elektrik
22
36. Timbangan Untuk menimbang bahan
digital dalam jumlah tertentu dengan
ketelitian 0,01 gram.
37. Colonycount Untuk menghitung jumlah

er koloni bakteri
38. Vortexmixer Untuk membantu

menghomogenkan larutan
yang berisi sampel.
39. Incase Untuk menyimpan alat-alat

yang telah disterilisasikan
40. Cooling Untuk menginkubasi media

inkubator biakan pada suhu rendah.
41. Panci Sebagai wadah perebusan

media dalam erlenmeyer.
23
3.2 Sterilisasi Autoklaf Elektrik
3.2.1 Bagian BagianAutoklaf
Gambar 1. Bagian-bagian Autoklaf
Bagian yang ditunjuk angka satu merupakan timer yang berguna untuk
mengatur waktu berapa lama proses sterilisasi sesuai dengan kebutuhan. Angka
dua menunjukkan katup pengeluaran uap yang berfungsi sebagai pengeluaran
uap air saat proses sterilisasi berlangsung. Angka tiga menunjukkan pengukur
tekanan yang memiliki fungsi untuk mengetahui tekanan uap di dalam autoklaf
saat terjadi proses sterilisasi. Angka empat menunjukkan kelep pengaman yang
berfungsi sebagai pengunci penutup autoklaf. Angka lima menunjukkan tombol
power atau tombol on/off. Tombol ini terdapat pada semua autoklaf elektrik.
Autoklaf tidak akan bekerja dengan baik apabila tombol ini tidak berfungsi
dengan baik atau terjadi kerusakan. Angka enam menunjukkan termometer yang
memiliki fungsi untuk mengetahui suhu yang dibutuhkan selama proses sterilisasi
karena setiap sterilisasi membutuhkan suhu yang berbeda-beda tergantung dari
benda yang disterilisasikan. Angka tujuh menunjukkan lempeng sumber panas.
Lempengan ini terbuat dari lilitan kawat maupun tembaga yang membantu
24
proses perubahan energi listrik menjadi energi panas. Angka delapan
menunjukkan larutan aquades. Angka sembilan menunjukkan sekrup pengaman
yang berfungsi untuk menjaga tekanan uap di dalam mesin. Angka sepuluh
menunjukkan batas penambahan air yang berfungsi untuk mengetahui batas
bagi penambahan air atau aquades yang benar (Pratomo, 2017).
25
3.2.2 Cara Pengoperasian Autoklaf
Autoklaf
Masukkan aquadest kedalam autoklaf hingga

menutupi elemen pemanas
Alat yang telah disterilkan dibungkus dengan kertas, kemudian

dibungkus lagi menggunakan plastik
Alat yang telah disteriliasi dan dibungkus dimasukkan kedalam

keranjang Autoklaf
Autoklaf ditutup secara diagonal dan ulir dikencangkan
Atur suhu sterilisasi 121℃ dan waktu selama 15-20 menit
Nyalakan autoklaf dengan menekan tombol ON
Tutup klep udara dan tunggu hingga tekanan 1 atm
Tunggu selama 15-20 menit
Matikan Autoklaf dengan menekan tombol OFF
Keluarkan keranjang Autoklaf
Alat-alat telah disetrilisasi basah dengan Autoklaf
Gambar 2. Flowchart Cara Pengoperasian Autoklaf
Autoklaf merupakan sebuah alat yang digunakan untuk melakukan
sterilisasi basah. Prinsip kerja dari autoklaf yaitu mensterilisasikan suatu alat atau
bahan dengan bantuan tekanan uap panas yang diatur pada suhu 121℃ dan
26
tekanan 1 atm selama 15-20 menit. Prosedur pengoperasian dari Autoklaf yang
pertama adalah memasukkan aquadest kedalam Autoklaf hingga menutupi
elemen pemanas. Setelah itu, memasukkan alat yang telah disetrilisasi dan
dibungkus kedalam Autoklaf menggunakan keranjang Autoklaf. Tutup Autoklaf
dengan rapat, dan pastikan tidak ada celah untuk uap keluar. Kemudian, atur
Autoklaf pada suhu 121℃ dan waktu sekitar 15-20 menit, nyalakan Autoklaf
dengan menekan tombol power ON. Jika tekanannya sudah 1 atm, tunggu
selama 15-20 menit. Selanjutnya, matikan Autoklaf dengan menekan tombol
power OFF lalu keluarkan keranjang serta alat-alat yang disetrilisasi di dalamnya.
Sterilisasi alat-alat laboratorium dengan Autoklaf dilakukan untuk membersihkan
atau menghilangkan bakteri yang terdapat pada alat tersebut agar ketika
digunakan mengurangi risiko terjadinya kontaminasi pada sampel (Istini, 2020).
3.2.3 Pembungkusan Cawan Petri
Gambar 3. Flowchart Pembungkusan Cawan Petri
27
Pembungkusan cawan petri mula-mula siapkan cawan petri yang akan
disterilisasikan dan selembar koran yang nanti akan digunakan untuk
membungkus cawan petri tersebut. Kemudian tempatkan cawan petri diatas
koran secara horizontal, lalu lakukan pembungkusan menggulung kedepan
secara perlahan-lahan. Lakukan pembungkusan hingga ujung koran dan
selipkan sisa koran kedalam lipatan yang telah terbentuk saat pembungkusan.
Cawan petri yang sudah terbungkus sudah siap untuk disterilisasikan
(Masloman, 2016).
3.2.4 Pembungkusan Pipet Serologis
Siapkan pipet serologi
Sumbat pangkal pipet serologi menggunakan kapas
Ujuk pipet serologi dimasukkan pada lipatan koran yang dilipat 2-3 kali
Ikat dengan tali
Masukkan kedalam autoklaf yang telah diisi air
Tutup autoklaf secara diagonal
Nyalakan kompor tunggu sampai tekanan 1 atm (0,15 Mpa)
Gambar 4. Flowchart Pembungkusan Pipet Serologis
28
Sebelum pembungkusan pipet serologi sebaiknya ditutup terlebih dahulu
sumbat pangkal pipet serologi dengan menggunakan kapas. Penutupan ini
bertujuan agar uap air tidak masuk kedalam pipet tersebut dan menjaga agar
pipet tersebut tetap steril. Setelah ditutup kapas, pipet serologis segera
dibungkus koran. Untuk pembungkusannya ujuk pipet serologis dimasukkan
pada lipatan koran yang dilipat 2-3 kali dengan tujuan agar pipet tersebut tidak
mudah pecah. Setelah pipet serologis terbungkus koran, lalu ikat dengan tali
agar koran tidak lepas. Kemudian beri tanda pada ujung supaya tidak terjadi
kesalahan saat pembukaan dan pengambilan pipet. Selanjutnya pipet serologi
tersebut masukkan kedalam autoklaf yang telah diisikan air hingga batas
pemanas. Kemudian tutup autoklaf secara diagonal agar tertutup rapat dan tidak
ada uap air yang keluar. Kemudian nyalakan kompor, tunggu sampai tekanan 1
atm (0,15 Mpa) tunggu selama 15-20 menit (Wulandari dan Yuni, 2016).
3.2.5 Pembungkusan Tabung Reaksi
Siapkan tabung reaksi
Tabung reaksi dicuci bersih dengan air dan

dikeringkan
Sumbat mulut tabung reaksi dengan kapas
Bungkus tabung reaksi yang sudah disumbat

dengan kertas atau alumunium foil
Masukkan tabung reaksi ke dalam autoklaf
Gambar 5. Flowchart Pembungkusan Tabung Reaksi
29
Sebelum dimasukkan kedalam autoklaf untuk disterilisasi, tabung reaksi
harus dilakukan pembungkusan terlebih dahulu. Langkah yang pertama adalah
siapkan tabung reaksi yang akan di sterilisasi. Kemudian cuci bersih tabung
reaksi menggunakan air lalu keringkan. Setelah itu, sumbat mulut tabung reaksi
menggunakan kapas. Selanjutnya bungkus tabung reaksi menggunakan kertas
atau alumunium foil. Kemudian masukkan tabung reaksi yang sudah disumbat
dan dibungkus kedalam autoklaf untuk di sterilisasi (Periadnadi, 2015).
3.3 Teknik Dasar Mikrobiologi
3.3.1 Pengenceran
Teknik dasar pengenceran sendiri dapat disefinisikan sebagai
pengenceran dari larutan stok yang mana konsentrasinya akan berkurang
dengan jumlah yang sama pada setiap langkah. Kunci penurunan pada metode
pengenceran tergantung pada pada konsentrasi larutan yang jumlah
penurunannya selalu sama secara berturut-turut. Pada teknik dasar pengenceran
diperlukan adanya larutan stok, dan aquadest. Pada teknik dasar pengenceran
ada beberapa tahapan. Tahap yang pertama yaitu buatlah larutan stok dengan
perkiraan bisa digunakan untuk 10kali pengenceran. Kemudian, buatlah 4 label
test menggunakan kode A, B, C dan D. Setelah itu, tambahkan 9 ml aquadest
pada setiap label dari A sampai D. Lalu, ambilah 1ml dari larutan stok kemudian
transferkan pada label A. Selanjutnya lakukan transfer 1ml larutandari label A ke
label B. Lakukan hal yang sama pada label C dengan mentransformasi 1ml dari
label B ke label C. Yang terakhir yaitu transformasi 1ml larutan dari label C
menuju label D. Pada setiap proses pengenceran terjadi kenaikan pada
larutannya. Pada pengenceran label A yang mendapatkan transformasi 1ml dari
larutan stok mengalami peningkatan sebanyak 1/10 atau mengalami kenaikan
menjadi minus 1 atau 10-1 . Pada pengenceran kedua pada label B terjadi
30
peningkatan konsentrasi pada label B peningkatan yang terjadi sebanyak 1/100
atau mengalami kenaikan menjadi minus 2 atau 10-2 . Pada pengenceran ketiga
di label C terjadi peningkatan 1/1.000 atau sama dengan terjadi kenaikan
sebanyak minus 3 atau 10-3 . Pada pengenceran ke empat terjadi kenaikan
konsentrasi sebanyak 1/10.000 atau setara dengan kenaikan minus 4 atau 10-4 .
Jadi, dapat diambil kesimpulan bahwa dari larutan stok yang 10kali dapat
dilakukan pengenceran dengan terjadinya kenaikan 10 pada kali 1 dan terakhir
terjadi kenaikan 10.000.
Menurut Yunita et al. (2015), tujuan dari pengenceran yaitu untuk
memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan.
Penentuan besarnya atau banyaknya tingkat pengenceran tergantung pada
perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. Digunakan perbandingan 1:9 untuk
sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, selanjutnya pengenceran
berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisme dari pengenceran sebelumnya.
Prosedur dari proses pengenceran sampel atau kultur mikroba yaitu sampel atau
kultur mikroba 20 g yang sudah dicampurkan larutan BPW (BufferedPeptone
Water) 180 ml yang berada diplastik steril kemudian dihaluskan sampai cair
menggunakan stomacher (pengenceran 10-1). Kemudian setelah diencerkan.
Ambil 1 ml hasil sampel pengenceran dengan pipet volume dan dituang ke
tabung reaksi yang berisi 9 ml aquadest (pengenceran 10-2) selanjutnya lakukan
perlakukan yang sama sampai ke perlakuan pengenceran 10-3 dan pengenceran
10-4.
3.3.2 Penanaman
Teknik penanaman terdiri atas 3 teknik dasar yang digunakan untuk
penanaman bakteri yaitu teknik swab, teknik inakulasi, dan teknik sebar. Pada
teknik sebar langkah awal yang harus dilakukan yaitu nyalakan api bunsen yang
31
bertujuan untuk mensterilkan alat. Kemudian terilisasi cawan petri dengan cara
memutar pada pijar bunsen. Kemudian tuangkan nutrien agar kedalam cawan
sebanyak 15 ml hingga merata. Selanjutnya ambil biakan mikroba pada
nutrienbrot yang berbentuk cairan. Kemudian lepas kapas penutup dengan cara
dijepitkan pada jari dan tidak diletakkan pada meja. Kemudian tuangkan pada
cawan, kemudian homogenkan pada cawan dengan menggoyahkan secara
merata. Selanjutnya sterilisasikan kembali cawan petri dengan cara diputar pada
bunsen kemudian diamkan hingga memadat. Pada teknik swab langkah awal
yang harus dilakukan yaitu ambil biakan materi pada nutrienbrot. Kemudian jepit
kapas penutup dengan jari kemudian sterilisasi dengan mulut tabung dengan
pijar bunsen. Selanjutnya sterilisasi batang swab dengan pijar bunsen. Kemudian
masukkan batang swabkedalam biakan. Selanjutnya tekan kapas swab pada
dinding tabung yang bertujuan agar biakan tidak menetes. Selanjutnya sterilisasi
lagi mulut tabung dan tutup dengan kapas. Kamudianswab kembali dipermukaan
agar yang telah memadat hingga merata. Kemudian sterilisasi batang swab
dengan pijar batang bunsen. Pada teknik gores langkah awal yang harus
dilakukan yaitu sterilisasikan jarum ose pada jarum bunsen sampai memijar.
Kemudian diamkan hingga api mereda, selanjutnya ambil biakan bakteri pada
nutrien agar miring dengan menggunakan jarum ose. Kemudian goreskan secara
zig-zag pada media agar yang sudah memadat. Selanjutnya sterilisasi cawan
petri dengan cara memutar pada pijar bunsen. Kemudian sterilisasi jarum oce
hingga memijar.
Teknik penanaman dilakukan dengan metode permukaan
(Surface/SpreadPlate). Sampel sebanyak 0,1 ml dituangkan kepermukaan media
agar steril dan padat. Sampel disebarkan ke seluruh permukaan agar dengan
cara goresan menggunakan jarum ose yang telah disterilkan. Cawan petri
diamati dan dihitung total bakteridan bakteri asam laktat setelah inkubasi selama
32
24 jam. Pengamatan fungsi dilakukan setalah diinkubasi selama tiga hari
(Sumarsih et al., 2010).
3.3.3 Inokulasi
Penggunaan teknik inokulasi bertujuan untuk mempelajari teknik inokulasi
bikan mikroorganisme menjaga agar kondisi tetap steril. Prinsip percobaan teknik
inokulasi dengan memindahkan organisme dari media satu ke media yang lain
dengan inokulasi atau step kulturing. Teknik ini merupakan hal yang penting
untuk dikuasai dalam mikrobiologi karena berfungsi untuk mempersiapkan dan
memelihara biakan mikroorganisme. Langkah awal yaitu tuliskan nama spesies
mikoorganise, tanggal inokulasi, serta nama praktikan pada tabung
reaksi.Selanjutnya taruh biakan induk kedalam tabung reaksi dan media agar
miring dan telah disterilkan pada telapak tangan kiri. Selanjutnya panaskan jarum
ose pada nyala api spiritus hingga membara. Bukalah sumbatan kapas pada
biakan induk dengan jari manis dan kelingking. Jangan sekali-kali dilepaskan
atau ditaruh dimeja agar tidak terkontaminasi. Selanjutnya lewatkan mulut tabung
2-3 kali diatas nyala api. Lalu masukkan jarum ose melalui mulut tabung dan
ambil sedikit biakan dengan ujung ose. Selanjutnya tutuplah dengan sumbatan
kapas pada biakan induk. Selanjutnya buka sumbatan kapas agar media miring
yang akan diinokulasi mikroorganisme dengan cara yang sama seperti langkah
yang sebelumnya. Kemudian geserkan jarum ose yang sudah mengandung
mikroorganisme dengan hati-hati diatas media permukaan media agar dimulai
dari dasar tabung secara zig-zag menuju kebagian atas tabung. Tutuplah sebab
kapas pada media yang telah diinokulasi. Panaskan kemabali ujung jarum ose
hingga hingga membara untuk memusnahkan mikroorganisme yang masih
menempel. Simpan biakan yang baru diinokulasi dalam inkubator.
Inokulasi atau yang biasa disebut dengan penanaman bakteri adalah
kegiatan memindahkan bakteri dari media yang lama ke media baru yang
33
bertujuan untuk meningkatkan ketelitian bakteri yang dipindahkan. Prinsip dasar
inokulasi adalah pada proses penanaman bakteri yang dilakukan dengan
medium agar yang digores atau dituang. kemudian bateri diinkubasi selama 3-5
hari pada suhu ruangan dan ditutup rapat agar tidak terjadi kontaminasi. Setelah
dilakukan inkubasi bakteri akan berkembang lebih cepat pada waktu 8 – 24 jam
akan terbentuklah sel yang dapat dilihat yang disebut koloni (Husna et al., 2016).
34
BAB IV. PENUTUP
4.1 Kesimpulan
Berdasarkan Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Sterilisasi, Pengenalan
Alat, dan Teknik Dasar Mikrobiologi didapatkan kesimpulan sebagai berikut:
 Alat-alat yang berada di laboratorium untuk melakukan berbagai
aktivitas seperti pengenceran bakteri, penanaman bakteri, inokulasi
media bakteri, dan lain-lainnya memiliki fungsi tertentu dan
penggunaannya harus sesuai dengan aktivitas yang akan dilakukan.
 Sterilisasi pada alat-alat laboratorium penting dilakukan sebelum
dilaksanakannya aktivitas praktikum untuk membersihkan atau
membunuh mikroba pada alat-alat tersebut sehingga mengurangi
risiko terjadinya kontaminasi.
 Sterilisasi basah menggunakan Autoklaf merupakan sterilisasi yang
paling umum digunakan karena kemampuan kerjanya yang lebih
efiesien untuk membunuh mikroorganisme.
4.2 Saran
Saran untuk jalan praktikum kedepannya semoga dapat dilaksanakan
secara offline agar praktikan dapat lebih memahami dan mempraktikannya
langsung di laboratorium. Selain itu, diharapkan untuk praktikum berikutnya
dapat berjalan lebih efisien dan tidak bertabrakan dengan praktikum lainnya
karena dapat mengurangi pemahaman yang diterima oleh praktikan.
35
DAFTAR PUSTAKA
Djais, A. A., &Theodorea, C. F. (2019). The effect of presto cooker as an alternative

sterilizer device for standard dental equipment. Journal of Indonesian Dental
Association, 2(1), 7-13.
Husna, A., Surahmanto, S., dan Fuskhah, E. (2016). Pengaruh penambahan air laut dan
inokulasi bakteri rhizobium terhadap produksi protein kasar dan fermentabilitas
jerami kedelai secara in vitro. Doctoraldissertation, Fakultas Peternakan &
Pertanian Undip.
Indriyati, N. (2011). Pemeriksaan sterilitas instrumen paska sterilisasi di sub instalasi

central sterile supply department (cssd) rsud dr. moewardi Surakarta. Doctoral
Dissertation, Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Istini. (2020). Pemanfaatan plastik standing pouch sebagai salah satu kemasan sterilisasi
peralatan laboratorium. Indonesian Journal of Laboratory, 2(3), 41-46.
Kadri, A. N., Gelgel, K. T. P., & Suarjana, I. G. K. (2015). Perbedaan cara

penyebaran suspensi terhadap jumlah bakteri pada media eosin
methyleneblue agar. Jurnal Indonesia MedicusVeterinus, 4(3), 205-212.
Mubarak, Z., Chismirina, S., &Daulay, H. H. (2016). Aktivitas anti bakteri ekstrak propolis
alami dari sarang lebah terhadap pertumbuhan Enterococcus faecalis. Journal of
Syiah Kuala Dentistry Society, 1(2), 175-186.
Periadnadi, Nurmiati, Agustien, A., Nasir, N., Febria, F. A., &Alamsyah, F. (2015).
Penuntun praktikum mikrobiologi. Laboratorium Mikrobiologi Jurusan Biologi
FMIPA Universitas Andalas.
Pratomo, L. L. A. (2017). Konsentrasi tepung ubi jalar (Ipomoea batatas l.)

dengan berbagai varian dan lama fermentasi terhadap pembuatan
yoghurt. Doctoral Dissertation, Undip.
Sari, L. P. (2019). Pembuatan media pertumbuhan bakteri dengan menggunakan

umbi ubi jalar cilembu (Ipomoea batatas (l.) Lam) untuk bakteri
Lactobacillus acidophilus, Salmonella typhii dan Escherichia coli. Skripsi
Fakultas Farmasi Unversitas Sumatera Utara.
Sumarsih, S., Sulistiyanto, B., Adi, H. S., dan Utama, C. S. (2010). Pengaruh aras starter
lactobacillussp terhadap performa mikrobiologi silase ikan dilihat dari total bakteri,
bakteri asam laktat dan fungi. Jurnal Kesehatan, 3(1), 43-50.
Wulandari, M. I., dan Yuni, E. H. (2016). Studi pustaka peralatan yang digunakan untuk
kultur sel. Farmaka, 14(2), 207-218.
Yoo, J. H. (2018). Review of disinfection and sterilization–back to the basics. Infection

&Chemotherapy, 50(2), 101-109.
36
Yunita, M., Hendrawan, Y., dan Yulianingsih, R. (2015). Analisis kuantitatif mikrobiologi
pada makanan penerbangan (aerofood ACS) Garuda Indonesia berdasarkan
TPC (total platecount) dengan metode pourplate. Jurnal Keteknikan Pertanian
Tropis dan Biosistem, 3(3), 237-248.
37
LAMPIRAN
Lampiran 1.Screenshoot Praktikum
Gambar 6. Bukti Praktikum Materi 1
38
MATERI 2
INOKULASI MIKROBA

MALANG
2021
39
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Teknik inokulasi menurut Badaring et al. (2020), Teknik mentransfer
budaya tertentu dari medium lama ke medium baru dengan tujuan mendapatkan
kultur murni tanpa kontaminasi dari mikroba tidak diinginkan. Beberapa metode
diketahui atau metode untuk memperoleh kultur murni dari kultur campuran. Dua
metode yang paling umum digunakan adalah metode cup scratch dan metode
pour cup. Hal tersebut didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud
untuk memperoleh spesies individu. Dengan asumsi bahwa setiap koloni dapat
dipisahkan dari jenis sel yang dapat diamati. Kultur murni diperlukan dalam
berbagai metode mikrobiologis, termasuk yang digunakan untuk mengidentifikasi
mikroba..
Media sangat penting untuk menumbuhkan mikroba, isolasi, perhitungan
jumlah mikroba, dan pengujian sifat-sifat fisik bakteri sehingga suatu bakteri
dapat diidentifikasi. Media pertumbuhan dalam berbagai bidang sangat besar
peranannya, media pertumbuhan dapat digunakan sebagai media untuk,
pembuatan antimikroba untuk membunuh virus dan jamur pada tumbuhan,
sebagai media pengembangan zat antivirus. Media yang umum digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme adalah media Nutrient agar yang merupakan
media racikan berbentuk siap pakai (Sari, 2019).
Prinsip dari teknik Inokulasi yaitu bahwa mikroorganisme dapat
dipindahkan dari media yang lama ke media yang baru. Fungsi dari Inokulasi
adalah untuk memelihara dan mempersiapkan biakan mikroba. Adapun media
yang dibutuhkan untuk menumbuhkan atau membiakan mikroba yaitu dengan
40
menggunakan media-media tertentu. Media ini digunakan bakteri untuk
pertumbuhannya selama berada pada medium biakan.
Maksud dari Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Inokulasi Bakteri adalah
agar dapat mengetahui dan memahami teknik-teknik inokulasi bakteri.
Tujuan dari Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Pembuatan Media,
Pengenceran dan Penanaman adalah agar terampil dalam melakukan teknik-
teknik inokulasi bakteri.
Pada praktikum Mikrobiologi Dasar 2021 materi 2 Inokulasi Mikroba
dilaksanakan pada hari Selasa, 20 April 2021 pukul 20.00 WIB. Praktikum
dilaksanakan di kediaman masing-masing secara daring dengan menggunakan
aplikasi Google meet.
41
2.1 Media Tanam Mikroba
2.1.1 Na (Nutrient Agar)
Media NA (nutrient agar) merupakan media yang berbentuk serbuk
berwarna putih kekuningan dan apabila setelah digunakan akan berbentuk padat
karena terdapat kandungan agar sebagai pemadatnya. Nutrisi yang diperlukan
mikroorganisme untuk pertumbuhannya menurut Listyani et al. (2019) terdiri atas
karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sulfur dan fosfor, serta unsur logam
seperti Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, dan Fe. Komposisi dalam media ini adalah
karbohidrat dan protein yang terdapat pada ekstrak daging dan pepton sesuai
dengan kebutuhan bakteri. Media nutrient agar merupakan media yang sudah
teruji secara klinis baik untuk pertumbuhan bakteri, sehingga proses metabolisme
bakteri berlangsung optimal (Anisah, 2015).
2.1.2 PCA (Plate Count Agar)
Media Plate Count Agar (PCA) merupakan media padat, yaitu media yang
mengandung agar sehingga setelah dingin media tersebut akan menjadi padat.
Pada penanaman bakteri e. coli di media PCA (Plate Count Agar) miring
mendapatkan hasil adanya pertumbuhan bakteri dipermukaan atas bekas
goresan dan berwarna putih pudar dan terkadang berwarna kuning pudar. Media
PCA terdiri dari casein enzymic hydrolisate, yeast extract, dextrose, agar. Media
PCA dilarutkan dengan aqua destilata dengan membentuk suspensi 22,5 g/L
kemudian disterilisasi pada autoklaf 15 menit pada suhu 121°C (Wati, 2018).
42
2.1.3 PDA (Potato Dextrose Agar)
PDA (Potato Dextrose Agar) merupakan media kultur yang digunakan di
laboratorium untuk budidaya mikroorganisme serta memasok nutrisi yang
dibutuhkan untuk pertumbuhan dan pemeliharaan. Media PDA (Potato Dextrose
Agar) yang lengkap akan mendukung perkecambahan spora jamur meskipun
spora berada di dalam agar. Oksigen yang terdapat di dalam media PDA (Potato
Dextrose Agar) merupakan oksigen terlarut yang jumlahnya akan berkurang
pada kedalaman tertentu.PDA digunakan sebagai media kultur umum untuk
menumbuhkan berbagai jamur dan media ini terdiri dari dekstrosa, ekstrak
kentang, dan agar (Ravimannan et al., 2014).
2.1.4 LB (Lactose Broth)
Media LB ini merupakan media untuk pemerkaya bakteri Coliform bukan
bakteri Escherichia coli. Sehingga bakteri yang tumbuh pada media LB dapat
bermacam-macam pada golongan koli. Pada uji MPN, dilakukan uji penduga dan
penegas. Pada uji penduga, digunakan media LB (Lactose broth). Selain itu
media LB memiliki manfaat dan fungsi untuk masing-masing komponennya yaitu
peptone dan beef extract. Kedua komponen tersebut merupakan sumber nutrisi
esensial untuk metabolisme bakteri (Surati dan Nurul, 2017).
2.1.5 NB (Nutrient Broth)
NB (Nutrient Broth) termasuk ke dalam media umum yang digunakan
untuk menumbuhkan biakan secara general. Kultivasi mikroba dilakukan dengan
berbagai media pertumbuhan, nutrient broth diformulasikan dengan sumber
karbon dan nitrogen supaya dapat memenuhi kebutuhan nutrisi bakteri. Media
NB (Nutrient Broth) dibuat dengan tujuan untuk mengisolasi bakteri enterik dari
sampel dimana apabila terjadi perubahan warna menjadi keruh menunjukkan
bahwa adanya pertumbuhan dari bakteri. Komposisi NB (Nutrient Broth) terdiri
43
dari beef extract sebagai sumber karbon dan juga terdiri dari pepton sebagai
sumber nitrogen pada sampel (Wahyuningsih dan Zulaika, 2018).
2.1.6 MHA (Mueller Hinton Agar)
Media dengan komposisi beef extract, casein hydrolysate, starch dan
agar adalah MHA, menurut Nofita et al. (2020), media yang digunakan pada uji
kepekaan bakteri terhadap antibiotik adalah media Mueller Hinton Agar (MHA).
MHA menunjukan hasil reproduksi yang baik, rendah sulfonamid, trimetrorpim
dan inhibitor tetrasiklin, serta mendukung pertumbuhan bakteri yang sulit tumbuh
sekalipun. Media MHA (Mueller Hinton Agar) merupakan media yang paling
banyak digunakan dalam tes sensitifitas bakteri. Bakteri anaerob, aerob, bahkan
hampir semua antikbakteri yang dapat diperiksa dapat tumbuh pada media MHA
(Mueller Hinton Agar).
2.2 Sampel Uji

2.2.1 Ikan Asin
Pengasinan ikan adalah salah satu cara pengawetan ikan agar tidak
mengalami kebusukan oleh bakteri pembusuk dengan menambahkan garam 15-
20 % pada ikan segar atau ikan setengah basah. Salah satu penyebab terjadinya
kerusakan ikan adalah terdapatnya bakteri pembusuk. Dua kelompok bakteri
yang mampu hidup dan merusak produk ikan asin yaitu kelompok bakteri halofilik
dan bakteri heterotoleran. Beberapa jenis bakteri penyebab kerusakan ikan asin
di Indonesia adalah bakteri halofilik dan bakteri heterotoleran yaitu
Halobacterium salinarum, Halococcus morhuae, Halomonas sp, Staphylococcus
xylosus,Staphylococcus sp, dan Planococcus halophylus (Yeni Salosa, 2013).
2.2.2 Air Limbah Ikan
44
Air limbah ikan menurut Radityani et al. (2020) merupakan sisa kegiatan
pemeliharaan ikan umumnya menghasilkan limbah yang berasal dari
penumpukan sisa pakan dan hasil ekskresi ikan yang dipelihara. Terdapat tujuh
isolate bakteri yang merupakan bakteri patogen dan non patogen. Lima dari tujuh
isolat bakteri yang ditemukan merupakan bakteri patogen (karena berpotensi
menyebabkan penyakit) yaitu Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa, Pseudomonas pseudomelle, Enterobacter aglomerans dan bakteri
Vibrio Chorela, yang dapat menyebabkan penyakit pada manusia. Adanya jenis
bakteri Vibrio sp yang ditemukan tersebut disebabkan karena adanya kontak
manusia dengan perairan tersebut. Dari hasil penelitian juga ditemukan bakteri
non patogen yang bermanfaat bagi lingkungan yaitu bakteri Nitrobacter sp dan
juga bakteri Bacillus subtilis (Rahmaningsih et al., 2012).
2.2.3 Terasi
Terasi menurut Romadon et al. (2018) adalah suatu jenis penyedap
makanan berbentuk pasta, berbau khas hasil fermentasi udang, ikan, atau
campuran keduanya dengan garam atau bahan tambahan lain. Terasi
merupakan produk awetan ikan-ikan kecil atau rebon yang telah diolah melalui
proses pemeraman atau fermentasi, penggilingan atau penumbukan, dan
penjemuran. Bakteri yang ditemukan pada terasi udang rebon ada 7 jenis yaitu
Bacillus sp., Staphylococcus sp., Pseudomonas sp., Erishipelothrix sp., Neisseria
sp., Listeria sp., dan Corynebacterium sp. Sedangkan pada garam jenis mikroba
yang biasanya dapat tumbuh yaitu Staphylococcus aureus, Aliivibrio fischeri dan
juga Halobacilluss halophilus (Hestiani et al., 2019)
2.2.4 Air Closet
45
Air closet adalah semua air limbah bekas urine atau feses yang masuk
ditampung dan dikoleksi lalu dibiarkan mengendap didasar tangki. Penurunan
kualitas air menyebabkan pencemaran yang ditandai adanya Escherichia Coli
pada air tanah yang berasal dari limbah tangki septik. Escherichia Coli
merupakan sekelompok jenis bakteri yang biasa ditemukan di dalam usus
manusia atau hewan berdarah panas. Escherichia Coli sebagai indikator bahwa
air telah tercemar tinja. Kehadiran Escherichia Coli dalam air sumur gali
menandakan bahwa air tersebut telah terkontaminasi oleh kotoran hewan atau
tinja manusia. Kebanyakan mikroorganisme penyebab diare disebarluaskankan
lewat jalur fekal-oral melalui makanan atau air yang terkontaminasi atau
ditularkan antar manusia dengan kontak yang erat (Achmad et al., 2020).
2.3 Metode Inokulasi

2.3.1 Metode Agar Miring
Agar miring merupakan satu bentuk medium yang digunakan untuk
membiarkan mikroba, terutama yang bersifat aerobik dan anaerobik fakultatif.
Ciri-ciri kultur antara lain pembentukan warna dan bentuk pertumbuhan kuman
yang dapat segera diamati. Inokulasi mikroba pada medium ini dilakukan dengan
cara menggoreskan jarum ose yang mengandung mikroba secara zig-zag pada
permukaan agar miring, atau bisa juga dengan cara dengan menusukkan lup ke
bagian tengah medium (Astuti, 2014).
2.3.2 Metode Gores
Metode gores dilakukan dengan cara inokolum digoreskan pada
permukaan medium agar nutrient, dalam cawan Petri dengan menggunakan
jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis goresan akan terdapat sel-sel
yang cukup terpisah-pisah sehingga dapat tumbuh menjadi kolon terpisah-pisah.
46
Metode gores (streak) bertujuan untuk mengisolasi mikroorganisme dari
campurannya atau meremajakan kultur ke dalam medium baru. Metode gores ini
ada beberapa yaitu goresan T, kuadran, radian dan sinambung (Astuti, 2014).
2.3.3 Metode Tebar
Metode tebar dilakukan dengan cara setetes inokolum diletakkan di
tengah-tengah medium agar nutrient dalam cawan petri. Dengan menggunakan
sebatang kaca bengkok steril, inokolum tersebut disebarkan di permukaan
medium. Batang yang sama dapat digunakan untuk menginokulasi pinggan
kedua untuk menjamin penyebaran sel-selnya dengan baik. Pada beberapa
pinggan akan muncul koloniyang terpisah-pisah (Astuti, 2014).
2.3.4 Metode Tuang
Metode agar tuang digunakan untuk mengencerkan mikroba yang
terdapat pada contoh dan dapat dilakukan untuk mengisolasi mikroba dari
contoh. Cara ini berbeda dengan metode goresan karena agar steril yang akan
̊ -
diinokulasikan masih dalam bentuk cair tetapi telah didinginkan sampai 45 C
̊ . Selanjutnya diinkubasikan pada suhu dan waktu tertentu, maka koloni akan
47 C
tumbuh pada permukaan dan bagian bawah agar. Pengenceran harus dilakukan
sehingga pada cawan yang terakhir tumbuh koloni yang terpisah (Astuti, 2014).
2.3.5 Metode Tusuk
Metode inokulasi tusuk digunakan untuk mempelajari mekanisme
ketahanan biokimia. Metode ini juga bias disebut dengan metode agar tegak.
Metode tusuk yaitu dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose
yang didalamnya terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media atau
medium. Metode Tusuk ini termasuk kedalam media agar tegak dan media cair
Penusukan isolate mikroba pada medium agar tegak bertujuan untuk menstimulir
47
pertumbuhan mikroba aerob maupun anaerob. Bakteri yang tumbuh pada
medium padat akan membentuk kelompok yang disebut koloni. Karakteristik
koloni berbeda-beda pada tiap spesies dan merupakan salah satu sifat yang
dapat digunakan dalam identifikasi mikroorganisme (Astuti, 2014).
48
BAB III. PEMBAHASAN
3.1 Pembuatan Media
3.1.1 NA (Nutrient Agar)
Ditimbang media NA yang diperlukan
Diukur aquades yang dibutuhkan
Dihomogenkan media dan aquades di dalam Erlenmeyer
Tutup Erlenmeyer dengan alumunium foil
Bungkus dengan kertas dan diikat
Direbus selama 15 menit
Disterilisasi menggunakan autoklaf selama 15 menit
Didapatkan media steril
Gambar 7. Flowchart Pembuatan Nutrien Agar
Pada proses Inokulasi mikroba, NA atau Nutrient Agar digunakan sebagai
media untuk Inokulasi mikroba. Terdapat beberapa langkah dalam pembuatan
media Nutrient Agar ini yaitu pertama melakukan penimbangan media NA yang
diperlukan, lalu ukur jumlah aquades yang dibutuhkan dan homogenkan media
dan juga aquades kedalam Erlenmeyer, tutup Erlenmeyer tersebut
menggunakan alumunium foil dan bungkus menggunakan kertas lalu diikat,
setelah terbungkus dan terikat dengan baik, rebus selama 15 menit dan
disterilisasikan menggunakan sterilisasi basah yaitu autoklaf selama 15 menit
49
yang bertujuan untuk membunuh kontaminasi luar agar didapatkan hasil yang
akurat dan sesuai, setelah proses sterilisasi selesai maka didapatkan media
steril.
Proses pembuatan media NA (Nutrient Agar) menurut Thohari et al.
(2019), Melarutkan 0,084 gram bubuk media NA (nutrient agar) dengan aquades
30 mL dalam erlenmeyer. Larutan dipanaskan sampai bubuk benar-benar larut
tetapi tidak sampai mendidih, selanjutnya diukur pH menggunakan kertas pH
hingga pH 7,4±2. Kemudian, disterilisasi dengan menggunakan autoclave
selama 15 menit pada suhu 121℃ dan menunggu media hingga memadat. Salah
satu media yang menggunakan ekstrak daging dan protein sebagai sumber
glukosa dan asam amino serta paling umum digunakan untuk menumbuhkan
sebagaian besar bakteri adalah media NA (Nutrient Agar).
3.1.2 PCA (Plate Count Agar)
Ditimbang media PCA yang dibutuhkan
Dihomogenkan media dan aquades di dalam erlenmeyer
Gambar 8. Pembuatan Media Plate Count Agar
50
Untuk membuat media PCA, hal pertama harus dilakukan adalah
menimbang PCA yang dibutuhkan. Lalu langkah selanjutnya setelah PCA
ditimbang ukur juga aquades yang dibutuhkan. Homogenkan antara media TCA
tersebut dan juga aquades di dalam erlenmeyer. Setelah itu bungkus kertas dan
diikat. Setelah diiikat lalu rebus selama 15 menit. Selanjutnya sterilisasi
menggunakan autoklaf selama 15 menit. Setelah semua tahap selesai dilakukan
didapatkanlah media yang steril.
Untuk membuat media plate count agar tanpa ekstrak menurut Syafira et
al. (2019) yaitu siapkan bubuk nutrient agar sebanyak 4,3 g dan aquades steril
sebanyak 250 ml. Masukkan aquades steril ke tabung erlenmeyer setelah itu
masukkan bubuk nutrient agar. Kemudian lakukan sterilisasi dengan autoclave
dengan suhu 121 °C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit. Kemudian tuang
nutrient agar ke dalam 3 cawan petri masing-masingnya 10 ml, dan diamkan
hingga padat.
51
3.1.3 PDA (Potato Dextrose Agar)
Ditimbang media PDA yang dibutuhkan
Dihomogenkan media dan aquades di dalam

erlenmeyer
Gambar 9. Pembuatan Media Potato Dextrose Agar
Untuk membuat media PDA, hal pertama harus dilakukan adalah
menimbang PDA yang dibutuhkan. Lalu langkah selanjutnya setelah PDA
ditimbang ukur juga aquades yang dibutuhkan. Homogenkan antara media PDA
tersebut dan juga aquades di dalam erlenmeyer. Setelah itu bungkus kertas dan
diikat. Setelah diiikat lalu rebus selama 15 menit. Selanjutnya sterilisasi
52
menggunakan autoklaf selama 15 menit. Setelah semua tahap selesai dilakukan
didapatkanlah media yang steril.
Pembuatan PDA menurut Jamilatun et al., (2020) adalah media PDA
sebanyak 39 g dimasukkan kedalam Erlenmeyer dan dilarutkan dengan 1000
mL aquades, kemudian dipanaskan hingga mendidih dan homogen, setelah
homogeny dibiarkan sehingga suhu larutan media menurun hingga suhu 36-
37°C, lalu pH media diukur (4.5-5.5) jika pH media kurang asam, ditambahkan
asam tartat 10% kedalam media. Erlenmeyer ditutup dengan kapas,kasa,dan
kertas kopi, kemudian media disterilkan didalam autoklaf pada suhu 121°C
selama 15 menit dengan tekanan dua atm. Larutan media ditambahkan
kloramfenikol 20 mL secara aseptis didalam laminar air flow. Kemudian media
dituangkan kedalam cawan Petri dan dibiarkan hingga memadat.
3.2 Pengenceran Sampel
Pengenceran adalah prosedur pembuatan larutan yang lebih encer dari
larutan yang lebih pekat melalui penambahan sejumlah pelarut pada larutan
dengan volume dan konsentrasi tertentu. Tujuan pengenceran yaitu untuk
mengurangi kepadatan bakteri yang ditanam. Pengenceran dilakukan untuk
menurunkan atau memperkecil konsentrasi larutan dengan menambahkan zat
pelarut ke dalam larutan sehingga volume menjadi berubah. Pengenceran
dilakukan dengan menggunakan larutan pengencer air pepton 0,1% yang
berfungsi menggiatkan kembali sel-sel bakteri yang mungkin kehilangan
vitalitasnya karena kondisi di dalam sampel yag kurang menguntungkan.
Pengenceran suspensi sampel dilakukan untuk mendapatkan koloni yang
tumbuh secara terpisah dan dapat dihitung dengan mudah, hal ini akan sangat
membantu terutama untuk sampel dengan kontaminasi yang sangat tinggi.
Tahap pencampuran dengan medium dilakukan dengan metoe inokulasi pour
plate. Medium padat yang digunakan untuk ALT adalah Nutrient Agar (NA). NA
53
adalah suatu medium yang mengandung sumber nitrogen dalam jumlah yang
cukup tetapi tidak mengandung sumber karbohidrat sehingga baik untuk
pertumbuhan bakteri, tetapi kapang dan khamir tidak dapat tumbuh (Afifi dan
Sugiarti, 2016).
3.2.1 Ikan Asin
Timbang ikan asin sebanyak 1 gram
Masukkan sampel ikan asin yang sudah ditimbang ke dalam 10 ml

larutan NaCl fisiologis
Homogenkan dengan menggunakan vortex
Lakukan pengenceran 1 ml sampel ke dalam faktor pengenceran

10-1, lakukan sebanyak 3 kali dan homogenkan
Faktor pengenceran 10-1, 10-2, dan 10-3 masing-masing berisi

larutan NaCl fisiologis sebanyak 9 ml
Isolasi dengan menggunakan metode tuang sebanyak 0,1 ml

setiap faktor pengenceran yang dituang ke dalam cawan petri
Inkubasi pada suhu ruang 25-270C selama 24 jam
Amati koloni
Gambar mikrobaPengenceran
9. Flowchart yang tumbuh Sampel
tiap cawan
Ikanpetri
Asin
Gambar 10. Flowchart Pengenceran Ikan Asin
Tahap pertama yaitu pengenceran, sampel ikan asin ditimbang sebanyk
1gram kemudian dimasukkan ke dalam 10 ml larutan NaCl fisiologis lalu
dihomogenkan dengan menggunakan vortex. Kemudian mengambil 1 mL sampel
54
kedalam faktor pengenceran 10-1 dan menghomogenkannya. Selanjutnya
memasukkan sampel 1 mL dari faktor pengenceran 10-1 ke faktor pengenceran
10-2, dan melakukan hal yang sama pada faktor pengenceran 10-3. Faktor
pengenceran 10-1, 10-2, dan 10-3 masing-masing berisi larutan NaCl fisiologis
sebanyak 9 mL. Tahap kedua yaitu isolasi, tahap ini dilakukan dengan
menggunakan metode tuang, yaitu sebanyak 0,1 mL untuk tiap faktor
pengenceran yang dituang ke dalam cawan sebelum diberi media nutrient agar.
Isolasi mikroba dari sampel ikan asin dilakukan secara duplo dengan faktor
pengenceran 10-1, 10-2, dan 10-3. Setelah itu sampel diisolasi dan diinkubasi pada
suhu ruang 25 – 27oC selama 24 jam. Tahap ketiga atau terakhir yaitu
pengamatan, koloni mikroba yang tumbuh pada tiap cawan sampel dihitung
dengan menggunakan colony counter, jumlah koloni mikroba yang dianalisis
ialah rentang jumlah anatara 30-300 koloni cfu/g. jika jumlah koloni tiap sampel
lebih dari 300 cfu/g dikategorikan turbidimetri (TBUD).
Pengenceran sampel ikan asin menggunakan media SSA sebanyak 35
gram dan EMBA sebanyak 37,5 gram yang masing-masing dilarutkan dalam 1
liter aquadest, kemudian dididihkan dan disterilkan menggunakan autoklaf
selama 30 menit pada suhu 121ºC dengan tekanan 1 atm. Dalam prosesnya
mula-mula tempat dan tangan peneliti disterilkan dengan menggunakan alkohol.
Kemudian sebanyak 10 gram sampel ikan asin yang telah dihaluskan diletakkan
pada aluminium foil, lalu dicampur dengan 90 mL aquadest steril atau pada
pengenceran tingkat 10⁻¹. Selanjutnya, kocok dengan kuat (vortex) selama
beberapa detik untuk memastikan sampel telah terlarut secara homogen.
Langkah berikutnya, ambil 1 mL larutan pada pengenceran 10⁻¹ lalu masukkan
ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 mL aquades steril yang baru atau
pengenceran 10⁻². Setelah itu, ambil 1 mL larutan suspensi sampel pada
55
pengenceran 10⁻¹ dan 10⁻² menggunakan metode tuang (pour plate) pada media
SSA dan EMBA. Kemudian, diinkubasi pada suhu 350ºC selama 24 jam.
Berikutnya, dilakukannya pengamatan terhadap koloni bakteri Escherichia coli
dan Salmonella sp. yang tumbuh pda media SSA dan EMBA. Dimana koloni
Escherichia sp. positif (+) berwarna hijau metalik dengan bintik hitam di bagian
tengahnya, sedangkan pada koloni Salmonella sp. positif (+) berwarna
transparan denga bintik hitam dibagian tengahnya. Dan langakah terakhir,
mengamati karakteristik makroskopik koloni bakteri (Fatiqin et al., 2019)
56
3.2.2 Air Limbah Ikan
Persiapan alat dan bahan
Mengambil sampel Ikan yang dari tujuh titik

yang berbeda
Ikan nila dan mujair dibersihkan isi perutnya

kemudian dicuci satu kali dengan air mengalir.
Masing-masing ikan nila dan mujair diambil

dagingnya di salah satu bagiannya,kemudian
dimasukkan ke plastik HDPE steril.
Variabel yang diamati pada penelitian ini yaitu

pengujian angka lempeng total (ALT), dan
Escherichia coli dengan menggunakan
metode tebar
Setiap seri pengenceran diambil 0,1 ml

pengenceran diambil 0,1 ml
Masukkan
pengenceran kedalam
diambil 0,1 ml petri dish
me
Diratakan dengan spreader steril
Diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu ruang
Amati hasilnya
Gambar 11. Flowchart Pengenceran Sampel Air Limbah Ikan
57
Alat yang digunakan dalam penelitian yaitu Erlenmeyer (pyrex), tabung
reaksi, cawan petri, tabung durham, batang bengkok, jarum ose, pipet ukur, pipet
tetes, gelas ukur, gelas beaker, tip kuning, tip biru, pipet mikro, labu ukur,
spatula, inkubator (Memmert), vortex (Maxi mix II), autoklaf (Hirayama), laminar
flow cabinet (Aneka lab type H.F.079F), aluminium foil, bunsen, kapas, tissue,
pisau, timbangan analitik (Scout pro dengan ketelitian 0,0001), kertas label,
plastik HDPE. Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah ikan nila
dan ikan mujair yang berada di kolam 2B dan kolam 3 di UPAL PT. ITDC Nusa
Dua, Aquades, Plate Count Agar (OXOID CM0325B), NaCl 0,85%, Lactose Broth
(OXOID CM0137B), Eosyn Methylen Blue Agar (OXOID CM0069B). Penelitian ini
dilaksanakan dengan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) pola
faktorial. Faktor pertama adalah jenis ikan (I) yang terdiri dari 2 taraf yaitu ikan
nila (I1) dan ikan mujair (I2). Faktor kedua adalah lokasi kolam (K) yang terdiri
dari 2 taraf yaitu kolam 2B (K1) dan kolam 3 (K2). Dari faktor-faktor tersebut
diperoleh 4 kombinasi perlakuan, yang dikelompokkan menjadi 4 berdasarkan
waktu pengambilan sampel sehingga diperoleh 16 unit percobaan. dianalisis
dengan sidik ragam. Bila perlakuan berpengaruh nyata dilanjutkan dengan uji
BNT (Beda Nyata Terkecil). Pengambilan Sampel Pengambilan sampel
dilakukan di tujuh titik yang berbeda dengan jarak yang relative sama. Setiap titik
diambil masing-masing 1 ekor ikan nila dan mujair sehingga total pengambilan
sampel sebanyak 7 ekor ikan nila dan mujair di kolam 2B dan kolam 3.
Pengambilan sampel pada setiap kelompok diambil pada jam yang sama.
Pengambilan sampel dilakukan dengan cara menjaring ikan nila dan mujair yang
ada di kolam 2B dan kolam 3. Sebelum mengambil ikan, tangan, timbangan, dan
box yang berisi es tube disemprot dengan alkohol 90%. Ikan yang dijadikan
sampel adalah ikan yang memiliki berat antara 200 - 250 g. Preparasi Sampel
Ikan nila dan mujair dibersihkan isi perutnya kemudian dicuci satu kali dengan air
58
mengalir. Masing-masing ikan nila dan mujair diambil dagingnya di salah satu
bagiannya, kemudian dimasukkan ke plastik HDPE steril. Setelah itu dihancurkan
dan ditimbang masing-masing 25 g. Dari 25 g sampel tersebut diambil 5 g untuk
dianalisis lebih lanjut. Variabel yang diamati pada penelitian ini yaitu pengujian
angka lempeng total (ALT), dan Escherichia coli dengan menggunakan metode
sebar.
Menurut Ni’ma, et al. (2014) pengenceran sampel limbah cair perikanan
mula-mula mengambil 1 mL air sampel kemudian dimasukkan ke dalam 9 mL
trisalt steril yang tujuannya untuk mendapatkan tingkat pengenceran 10⁻¹,
setelah itu dilakukan pemvortexan. Selanjutnya, dari pengenceran 10⁻¹ diambil 1
mL lalu dimasukkan ke tingkat pengenceran 10⁻², kemudian dilakukan
pemvortexan kembali. Berikutnya, dilakukan langkah sama hingga pada seri
pengenceran 10⁻⁵. Kemudian dari pengenceran 10⁻⁵, sampel diambil sebanyak
50 µmL untuk ditaburkan pada media, kemudian diratakan menggunakan
spreader yang disterilkan melalui proses pembakaran. Berikutnya, dilakukan
inkubasi selama 24 jam dalam posisi wadah terbalik.
59
3.2.3 Terasi
Timbang 10 gr sampel
Campur 2 L NaCl dan analisis dengan 124 gr agar MRS
Didihkan menggunakan hot plate kemudian tutup dengan kapas dan

kertas aluminium
Sterilkan menggunakan autoklaf dengan suhu 121 C selama 15 menit

pada tekanan 1 atm
Lakukan pengenceran hingga 10-7
Masukkan sampel pada pengenceran 10-4 sampai 10-7 lalu

tanam di cawan petri dan diinkubasi

Hitung jumlah koloni pada cawan petri
Kalikan jumlah bakteri dengan jumlah pengenceran
Gambar 12. Flowchart Pengenceran Sampel Terasi
Sampel terasi ditimbang sebanyak 10 g. Pembuatan media agar MRS
yaitu dengan mencampurkan 2 L NaCl pro analis dengan 124 g agar MRS.
Media tersebut dipanaskan di atas hotplate sampai mendidih. Setelah mendidih,
media ditutup menggunakan kapas yang dilapisi kertas aluminium dan disterilkan
menggunakan autoklaf pada suhu 121 oC selama 15 menit dengan tekanan 1
atm. Proses pengenceran yang digunakan yaitu 10-1 sampai 10-7 dan sampel
dimasukkan ke pengenceran 10-4 sampai 10-7 dan ditanam di cawan petri lalu
60
diinkubasi. Setelah diperoleh jumlah koloni dari setiap pengenceran, selanjutnya
dihitung total bakteri asam laktat yang tumbuh dengan cara mengalikan jumlah
koloni dengan satu per faktor pengenceran yang dipakai. Syarat koloni yang
dapat dihitung yaitu antara 25-250. Satuan yang digunakan untuk penghitungan
jumlah bakteri adalah cfu/mL.
Menurut Romadhon et al., (2018) pengenceran sampel terasi mula-mula
bakteri asam laktat diisolasi dari terasi menggunakan teknik pengenceran
taburan (dilution series-pour-plate) pada media MRS. Lalu, sampel ditimbang
sebanyak 1 gram dan dihancurkan, setelah itu disuspensikan ke dalam air steril.
Penggenceran menggunakan air laut dan aquadest steril dengan perbandingan
70% dan 30%. Sampel diencerkan 10⁻¹ sampai 10⁻⁴. Sampel diisolasi dengan
teknik pour plate dalam 20 mL MRS agar yang sudah ditambahkan dengan
CaCo₃ 1% dan Na azide 0,01%. Sampel diinkubasi secara aerob 24-48 jam pada
suhu 37ºC. Isolat yang menghasilkan asam ditandai dengan terbentuknya zona
jenih. Kemudian, isolat dimurnikan dengan cara distrike ke media agar 3 sampai
4 untuk memperoleh isolat murni. Isolat murni disimpan dalam tabung ependop
yang ditambah dengan skim milk dan gliserol dengan perbandingan 1:1,
kemudian disimpan ke dalam freezer pada suhu -80ºC.
61
3.2.4 Air closet
Ambil air sampel sebanyak 10 mL kedalam tabung reaksi yang
berisi larutan 90 mL NaCl 0.9% untuk pengenceran 10-1.
Ambil 1 mL sampel dari tabung pengenceran 10-1 lalu

masukkan ke dalam tabung reaksi berisi larutan 9 mL NaCl
0,9%
Homogenkan dengan menggunakan vortex untuk pengenceran

10-2
Ambil kembali 1 mL dari tabung pengenceran 10-2 lalu

memasukkan kedalam tabung reaksi berisi larutan 9 mL NaCl
0.9% untuk pengenceran 10-3.
Pengenceran dilakukan secara aseptic di dalam LAF ( Laminary

Air Flow)
Gambar 13. Flowchart Pengenceran Sampel Air Closet
Pengenceran sampel dilakukan dengan mengambil air sampel sebanyak
10 mL kedalam tabung reaksi yang berisi larutan 90 mL NaCl 0.9% untuk
pengenceran 10-1. Selanjutnya ambil 1 mL sampel dari tabung pengenceran 10-
1 lalu masukkan ke dalam tabung reaksi berisi larutan 9 mL NaCl 0.9% kemudian
menghomogenkan dengan menggunakan vortex untuk pengenceran10-2. dan
mengambil kembali 1 mL dari tabung pengenceran 10-2 lalu memasukkan
kedalam tabung reaksi berisi larutan 9 mL NaCl 0.9% untuk pengenceran 10-3.
masingmasing dari setiap pengenceran dipindahkan 1 mL ke dalam tabung
reaksi yang berisi tabung durham. Pengenceran dilakukan secara aseptik di
dalam LAF (Laminary Air Flow) yang berguna sebagai ruangan untuk pengerjaan
62
secara eseptis. Prinsip penaseptisan suatu ruangan berdasarkan aliran udara
keluar dengan kontaminasi udara dapat diminimalkan.
Menurut Sampson et al., (2019) pengenceran sampel air closet dimulai
pada persiapan sampel yaitu sampel air yang dikumpulkan dari WC diencerkan
dengan memindahkan 1 mL sampel ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 mL
normalsaline steril ynag berfungsi untuk membuat pengenceran 10 kali lipat
menjadi 10⁻³. Setelah itu, masuk ke tahap inokulasi yang dilakukan dengan
metode spread plate menggunakan batang kaca bengkok. Dimana, volume 0,1
mL drai sampel yang diencerkan secara serial dimasukkan ke piring yang berisi
NA (nutrient agar) dan agar MacConcey. Kemudian, disebar dengan
menggunakan batang kaca bengkok. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37ºC
selama 24 jam. Pada cawan agar MacConcey yang tidak menunjukkan
pertumbuhan atau pertumbuhan tidak memadai dibiarkan bertahan selama 48
jam.
3.3 Metode Inokulasi
3.3.1 Metode Agar Miring
63
Buat Media agar NA miring pada tabung reaksi secara duplo
dan siapkan biakan bakteri
Panaskan ose loop pada nyala api spirtus hingga membara
Panaskan leher tabung reaksi biakan bakteri pada nyala api spirtus
Ambil satu ose biakan bakteri menggunakan ose loop
Goreskan secara zig-zag diatas permukaan agar
Panaskan ujung ose loop kembali sampai membara


Bungkus hasil inokulasi bakteri dengan plastic wrap
Simpan dalam etalase selama 24 jam dan amati biakan

bakteri yang tumbuh
Gambar 14. Flowchart Metode Inokulasi Agar Miring
Dalam melakukan teknik inokulasi agar miring yang pertama yaitu
membuat media agar NA miring pada tabung reaksi secara duplo dan siapkan
biakan bakteri. Panaskan ose loop pada nyala api spirtus hingga membara, lalu
panaskan juga leher tabung reaksi biakan bakteri pada nyala api spirtus. Ambil
satu ose biakan bakteri menggunakan ose loop. Setelah itu, goreskan secara
zig – zag di atas permukaan agar. Panaskan kembali ujung ose loop sampai
64
membara. Bungkus hasil inokulasi bakteri dengan plastic wrap. Terkahir, simpan
hasil inokulasi dalam etalase bakteri selama 24 jam dan amati biakan bakteri
yang tumbuh.
Agar miring dibuat dengan memperhatikan kemiringan media yaitu luas
permukaan yang kontak dengan udara tidak terlalu sempit atau tidak terlalu lebar
serta jarak media tidak terlalu dekat dengan mulut tabung karena memperbesar
resiko kontaminasi. Media yang diisi pada tabung reaksi berkisar +1/3 bagian
dari tabung. Keuntungan media agar miring ini yaitu luas permukaan yang kecil
sehingga peluang kontaminasi rendah dan dapat memperluas bidang untuk
digunakan strain murni (indukan murni). Sedangkan kerugian metode agar miring
adalah hanya dapat memuat sedikit mikroorganisme. Pembuatan agar miring
menurut Singkoh (2011), menggunakan bahan seperti agar 2 g, nutrient agar 3,2
g, dilarutkan dalam 120 mL aquades di atas penangas setelah itu media
dituangkaan ke dalam tabung reaksi. Selanjutnya disterilkan dalam autoklaf pada
suhu 121°C selama 15 menit. Setelah proses sterilisasi, media diangkat dan
dimiringkan dengan posisi 15° dan dibiarkan mengeras. Media ini berfungsi
sebagai tempat untuk peremajaan bakteri.
Gambar 15. Gambar Metode Agar Miring
65
3.3.2 Metode Gores
Buat media agar NA pada cawan petri duplo dan siapkan biakan
bakteri
Panaskan ose loop pada nyala api spiritus hingga membara
Panaskan pinggiran cawan petri
Ambil satu ose biakan bakteri menggunakan ose loop
Goreskan secara kuadran di atas permukaan

agar
Panaskan ujung ose loop kembali sampai membara
Bungkus hasil inokulasi bakteri dengan plastik wrap
Simpan dalam etalase bakteri selama 24 jam dan amati biakan

bakteri yang tumbuh
Gambar 16. Flowchart Metode Inokulasi Gores
Untuk melakukan teknik inokulasi gores yang pertama membuat media
agar NA pada cawan petri duplo dan siapkan biakan bakteri. Panaskan ose loop
pada nyala api spirtus hingga membara, lalu panaskan pinggiran cawan petri.
Ambil satu ose biakan bakteri menggunakan ose loop. Setelah itu, goreskan
secara kuadran di atas permukaan agar. Panaskan kembali ujung ose loop
sampai membara. Bungkus hasil inokulasi bakteri dengan plastik wrap. Langkah
terakhir, simpan hasil inokulasi dalam etalase bakteri selama 24 jam dan amati
66
biakan bakteri yang tumbuh.
Dalam melakukan inokulasi metode gores menurut Sambuaga et al.,
(2018) yaitu ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadaannya
harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan penelitian atau
percobaab dalam laboratorium. Inokulasi dilakukan dakam sebuah kotak kaca
(encast) udarah yang lewat dalam kotak tersebut dilewatkan saringan melalui
suatu jalan agar terkena sinar ultraviolet. Dalam hal ini menggunakan Laminar
flow steril yang terlebih dahulu dibiarkan blower dan sinar ultraviolet menyala
dalam waktu 15- 20 menit sebelum mengerjakan inokulasi. Ujung kawat inokulasi
dibuat dari platina atau nikel ujungnya boleh lurus juga boleh berupa kolongan
yang diameternya 3 mm. Dalam melakukan penanaman atau inokulasi bakteri,
kawat ose terlebih dahulu dipijarkan dalam api nyala Bunsen, sedangkan sisa
tangkai cukup dilewatkan nyala api, setelah dingin, kembali kawat ose
disentuhkan dakam nyala api Bunsen. Biakan bakteri Aeromonas hydrophila
diambil dari stok bakteri yang diperoleh dari Balai Budidaya Air Tawar Tatelu
Minahasa Utara, diinokulasi denga metode gores zigzag dengan kawat jarum ose
steril yang telah dipijarkan dalam api Bunsen dilakukan pada media Trypticase
soy agar (TSA) padat bentuk lempeng yang telah dibuat, selanjutnya diinkubasi
pada incubator dengan suhu 28°C selama 24 jam.
Gambar 17. Gambar Metode Gores
67
3.3.3 Metode Tebar
Buat media agar PCA pada cawan petri secara duplo dan
siapkan sampel terasi
Lakukan pengenceran pada sampel terasi hingga 10-5
Ambil 0,1 mL sampel terasi dari pengenceran 10-4 dan

10-5
Panaskan pinggiran cawan petri dan masukkan sampel ke

dalam cawan petri yang berisi media PCA secara duplo
Ratakan sampel menggunakan triangle
Masukkan cawan petri yang telah diinokulasi kedalam

etalase bakteri dan inkubasi selama 24 jam pada suhu
37oC
Gambar 18. Flowchart Metode Inokulasi Tebar
Langkah dalam melakukan teknik inokulasi tebar yng pertama membuat
media agar PCA pada cawan petri secara duplo dan siapkan sampel terasi.
Lakukan pengenceran pada sampel terasi hingga 10-5. Ambil 0,1 mL sampel
terasi dari pengenceran 10-4 dan 10-5. Setelah itu, panaskan pinggiran cawan
petri dan masukkan sampel ke dalam cawan petri yang berisi media PCA secara
duplo. Ratakan sampel menggunakan triangle. Terakhir, masukkan cawan petri
yang telah diinokulasi kedalam etalase bakteri dan inkubasi selama 24 jam pada
suhu 370C.
Menurut Damayanti et al., (2020) tahapan dalam inokulasi bakteri
menggunakan metode sebar yang pertamma adalah menyiapkan sampel dan
68
encerkan menggunakan larutan NaCl fisiologis. Setelah itu, inokulasikan sampel
pada media PCA pada cawan petri menggunnakan metode sebar. Apabila
sampel sudah diletakkan pada media PCA ke dalam cawan petri maka inkubasi
sampel pada inkubator selama 24 jam. Tahap akhir adalah mekakukan
perhitungan total bakteri.
Gambar 19. Gambar Metode Tebar
69
3.3.4 Metode Tuang
Masukkan 1 ml sampel ikan asin pengenceran 10-3 menggunkan

pipet serologis ke dalam cawan petri secara duplo
Tuang media agar PDA steril pada cawan petri
Dihomogenkan dengan membentuk angka delapan
Bungkus hasil inokulasi bakteri dengan plastik wrap
Simpan dalam etalase bakteri selama 72 jam dan amati

spora jamur yang tumbuh
Gambar 20. Flowchart Metode Inokulasi Tuang
Dalam melakukan teknik inokulasi tuang Langkah yang pertama yaitu
masukkan 1 ml sampel ikan asin pengenceran 10-3 menggunakan pipet serologis
ke dalam cawan petri secara duplo. Tuang media agar PDA steril pada cawan
petri, lalu dihomogenkan dengan membentuk angka delapan. Setelah itu,
bungkus hasil inokulasi bakteri dengan plastic wrap. Simpan hasil inokulasi
dalam etalase bakteri selama 72 jam dan amati spora jamur yang tumbuh.
Metode cawan tuang merupakan metode perhitungan mikroba yang
pengenceran dan medianya disediakan lebih dahulu. Pengenenceran yang
dilakukan sebanyak 1 ml atau 0,1 ml. Pada metode cawan ini sampel telebih
dahulu dipipet ke dalam cawan petri kemudian baru dimasukan media agar.
70
Tujuan dari teknik ini adalah untuk menyebarkan sel-sel bakteri tidak hanya pada
permukaan medium agar saja melainkan sel terendam dalam medium (di dalam
agar) sehingga terdapat sel yang tumbuh dipermukaan agar yang kaya O2 dan
ada yang tumbuh di dalam agar dengan kandungan oksigen sedikit. Teknik ini
memerlukan agar yang belum padat (>45 ) untuk dituang bersama suspensi
bakteri ke dalam cawan petri lalu kemudian dihomogenkan dan dibiarkan
memadat. Keunggulan metode tuang adalah dapat digunakan untuk memperoleh
biakan murni. Sedangkan kekurangan pada metode cawan tuang adalah hasil
perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang sebenarnya, karena
beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni, mikroba yang
ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk koloni
yang kompak dan jelas, tidak menjalar, memerlukan persiapan dan waktu
inkubasi sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung. (Damayanti et al, 2020).
Gambar 21. Gambar Metode Tuang
71
3.3.5 Metode Tusuk
Buat media agar PDA pada tabung reaksi secara duplo

dan siapkan biakan jamur
Panaskan ose jarum pada nyala api spiritus hingga membara
Ambil satu ose biakan bakteri menggunakan ose jarum
Tusukkan dengan hati-hati pada agar, dimulai dari dasar tabung

Gambar 21. Flowchart Metode Inokulasi Tusuk
Dipanaskan ujung ose jarum kembali sampai membara
Bungkus hasil inokulasi dengan plastik wrap dan simpan dalam

etalase selama 72 jam
Gambar 22. Flowchart Metode Tusuk
Cara melakukan teknik inokulasi tusuk yang pertama adalah membuat
media agar PDA pada tabung reaksi secara duplo dan siapkan biakan jamur.
Panaskan jarum ose pada nyala api spirtus hingga membara. Ambil satu ose
biakan bakteri menggunakan jarum ose. Lalu tusukkan dengan hati-hati pada
agar, dimulai dari dasar tabung. Panaskan Kembali jarum ose sampai membara.
Langkah terakhir, bungkus hasil inokulasi dengan plastik wrap dan simpan dalam
etalase selama 72 jam.
Metode inokulasi dengan media tusuk dapat dilakukan dengan beberapa
tahapan. Yang pertama adalah pengambilan bakteri yaitu sterilkan tangan
menggunakan sabun antiseptk. Sterilkan jarum ose loop dan jarum ose needle
72
dengan cara dipanaskan di atas api Bunsen sampai ujung jarum membara.
Setelah itu ambil sampel biakan bakteri. Lalu tahap selanjutnya adalah inokulasi
ke media SIM dengan cara sterilkan jarum needle dengan cara memfiksasi
ujungnya. Ambil tabung yang berisi bakteri dan sterilkan mulut tabung dengan
menggunakan api Bunsen. Pengambilan bakteri dengan cara memasukkan
jarum needle ke dalam tabung yang berisi sampel bakteri. Setelah itu, ambil
tabung reaksi yang berisi mediun SIM dan sterilkan mulut tabung dengan
menggunakan api Bunsen. Masukkan bakteri ke medium SIM dengan cara
inokulasi yaitu jarum tegak menusuk media sampai menembus bawah tabung.
Lalu, sterilkan kembali mulut tabung menggunakan api Bunsen dan tutup mulut
tabung menggunakan kapas (Liss Dyah et al, 2017).
Gambar 23. Gambar Metode Inokulasi Tusuk
73
BAB IV. PENUTUP
4.1 Kesimpulan
Pada praktikum mikrobiologi dasar materi Inokulasi mikroba dapat
disimpulkan bahwa:
 Metode Inokulasi merupakan metode memindahkan mikroorganisme
dari media lama ke media yang baru.
 Terdapat berbagai macam media pertumbuhan bagi mikroorganisme
diantaranya Nutrient Agar, Potato Dextrose Agar, Lactose Broth,
Mueller Hinton agar dan Plate Count Agar.
 Terdapat berbagai macam metode Inokulasi mikroba seperti metode
agar miring, metode gores, metode tebar, metode tuang dan juga
metode tusuk.
 Semua alat dan bahan yang nantinya digunakan untuk melakukan
Inokulasi mikroba (penanaman mikroba) harus dalam keadaan steril
demi mencegah alat dan bahan tersebut terkena kontaminasi.
4.2 Saran
Saran untuk praktikum Mikrobiologi Dasar ini terutama untuk bagian
format penulisan laporan ketik yaitu pada poin Literature antar kelompok tidak
boleh sama itu dihilangkan, karena untuk mencari inti penting yang sesuai
dengan materi bagian tertentu itu tidak mudah dan juga sepertinya tiap kelompok
ada saja perbedaannya tidak semuanya sama, selebihnya sudah sangat baik.
74
DAFTAR PUSTAKA
Achmad, B. K., Jayadipraja, E. A., & Sunarsih, S. (2020). Hubungan Sistem

Pengelolaaan (Konstruksi) Air Limbah Tangki Septik Dengan Kandungan
Escherichia Coli Terhadap Kualitas Air Sumur Gali. Jurnal Keperawatan
dan Kesehatan Masyarakat Cendekia Utama, 9(1), 24-36.
Afifi, C., & Sugiarti, L. (2016). ANALISIS MIKROBIOLOGIS JAMU TUJUH ANGIN
DAN SARI ASIH PT. JAMU AIR MANCUR SURAKARTA DENGAN
METODE ALT DAN AKK. Jurnal Keperawatan dan Kesehatan
Masyarakat Cendekia Utama, 1(5).
Anisah. (2015). Media alternatif untuk pertumbuhan bakteri menggunakan
sumber karbohidrat yang berbeda. Skripsi, Universitas Muhammadiyah
Surakarta.
Arini, L. D. D., & Wulandari, R. M. (2017). Kontaminasi Bakteri Coliform pada
Saus Siomai dari Pedagang Area Kampus di Surakarta. Biomedika, 10(2),
31-46.
Astuti, L.A. (2014). Penuntun Praktikum Oral Biologi. Gowa. AGMA
Badaring, D. R., Fiqriansyah, M., & Bahri, A. (2020). Identifikasi morfologi
mikroba pada ruangan water closet jurusan biologi universitas negeri
makassar. Seminar Nasional Biologi . 1(1), 161-168.
Damayanti, N., Abadi, M., Bintari, N. (2020). Perbedaan Jumlah Bakteriuri Pada
Wanita Lanjut Usia Berdasarkan Kultur Mikrobiologi Menggunakan Teknik
Cawan Tuang dan Cawan Sebar. Jurnal Meditory, 8(1), 1-4.
Fatiqin, A., Novita, R., & Apriani, I. (2019). Pengujian Salmonella Dengan
Menggunakan Media SSA dan E. Coli Menggunakan Media EMBA Pada
Bahan Pangan. Indobiosains, 1(1).
Hestiani, H., Asnani, A., & Isamu, K. T. (2019). Pengaruh Lama Fermentasi
Terhadap Nilai Sensori, Komposisi Proksimat, Dan Total Bakteri Terasi
Ikan Bete-Bete (Leiognathus equulus). Jurnal Fish Protech, 2(2). 267-273
Jamilatun, M., Azzahra, N., & Aminah, A. (2020). Perbandingan Pertumbuhan
Aspergillus fumigatus pada Media Instan Modifikasi Carrot Sucrose Agar
dan Potato Dextrose Agar. Jurnal Mikologi Indonesia, 4(1).
Listiyani, I. L., Hayati, D. N., Amanah, R. N & Iswara, A. (2019). Koro benguk
(Mucuna pruriens) sebagai media alternatif pertumbuhan bakteri
pengganti nutrient agar. Proceeding of The URECOL, 91-94.
Ni’ma, N., & Widyorini, N. (2014). Kemampuan Apu-apu (Pistia SP.) Sebagai
Bioremediator Limbah Pabrik Pengolahan Hasil Perikanan (Skala
Laboratorium). Journal of Management of Aquatic Resources, 3(4), 257-
264.
Nofita, A. D., Wahyunita, Y. S., Siti, M., & Supriani. (2020). Uji efektivitas
antibakteri ekstrak etanolik allium cepa L. terhadap bakteri
75
staphylococcus aureus dalam media mueller hinton agar. Media
Informasi. 16(1), 1-7.
Radityani, F. A., Hariyadi, S., Suprihatin, S., & Yanto, D. H. Y. (2020). Penerapan
Teknik Elektrokoagulasi dalam Pengurangan Bahan Organik Air Limbah
Kegiatan Perikanan. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia, 25(2).
Rahmaningsih, S., Wilis, S., & Mulyana, A. (2012). Bakteri Patogen dari Perairan
Pantai dan Kawasan Tambak di Kecamatan Jenu Kabupaten Tuban.
Ekologia: Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup, 12(1), 1-5.
Romadhon, R., Rianingsih, L., & Anggo, A. D. (2018). Aktivitas antibakteri dari
beberapa tingkatan mutu terasi udang rebon. Jurnal Pengolahan Hasil
Perikanan Indonesia, 21(1), 68-77.
Ravimannan, N., Revathie, A., Sevvel, P., & Kularajani, N. (2014). Alternative
culture media for fungal growth using different formulation of protein
sources. Annals of Biological Research. 5(1), 36-39.
Sampson, T., Esheyigba, A. P., & Baridam, S. S. (2019). Bacteriological
Assessment of Toilet Seats in a Nigerian University. Journal of Advances
in Microbiology, 1-11.
Sari, P. L. (2019). Pembuatan media pertumbuhan bakteri dengan menggunakan
umbi ubi jalar cilembu (ipomoea batatas (L.) Lam) untuk bakteri
lactobacillus acidophilus, salmonella typhii dan escherichia coli. Skripsi,
Universitas Sumatera Utara.
Singkoh, M. F. O. (2011). Aktivitas Antibakteri Ekstrak Alga Laut Caulerpa
racemose Dari Perairan Pulau Nain. Jurnal Perikanan dan Kelautan
Tropis. 7(3), 123-127.
Sukmawati, S., & Hardianti, F. (2018). Analisis Total Plate Count (TPC) mikroba
pada ikan asin kakap di kota Sorong Papua Barat. Jurnal Biodjati, 3(1),
72-78.
Surati, S., & Qomariah, N. (2017). Tingkat keamanan minuman infused water
dengan diversifikasi penyimpanan yang berbeda. Jurnal Riset
Kesehatan, 6(1), 13-19.
Syafira, A. F., Masyhudi, M., & Yani, S. (2019). Efektivitas Ekstrak Etanol Daun
Beluntas Pluchea Indica (L.) Less Terhadap Bakteri Saliva Secara In
Vitro. Odonto: Dental Journal, 6(2), 68-75.
Thohari, M. N., Pestariati, & Wisnu, I. (2019). Pemanfaatan tepung kacang hijau
(vigna radiata L.) sebagai media alternatif na (nutrient agar) untuk
pertumbuhan bakteri escherichia coli. Analisis Kesehatan Sains. 8(2),
725-737
Wahyuningsih, N., & Zulaika, E. (2018). Perbandingan pertumbuhan bakteri
selulolitik pada media nutrient broth dan carboxy methyl cellulose. Jurnal
Sains dan Seni ITS. 7(2), 36-38.
Wati, R. Y. (2018). Pengaruh pemanasan media plate count agar (PCA) berulang
terhadap uji total plate count (TPC) di laboratorium mikrobiologi teknologi
hasil pertanian unand. Jurnal TEMAPELA. 1(2), 44-47.
76
LAMPIRAN
77
MATERI 3
PERHITUNGAN MIKROBA

MALANG
2021
78
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Mikroba merupakan salah satu organisme yang memiliki jumlah yang
melimpah dan memiliki ukuran renik. Mikroba hidup bebas di lingkungan,
menyebar di udara, tanah, air, makanan, bahkan mikroba yang hidup dalam
tubuh manusia. Water closet diketahui memiliki jumlah mikroba yang melimpah
dikarenakan faktor lingkungan yang memungkinkan berbagai mikroba dapat
tumbuh dan berkembang biak dengan baik. Pengamatan mikroba hanya dapat
dilakukan jika mikroba yang diamati di isolasi di tempat-tempat tertentu sehingga
mereka mudah diamati. Teknik isolasi mikroba adalah upaya menumbuhkan
mikroorganisme di luar lingkungan alaminya. Pemisahan mikroba di luar
lingkungan bertujuan untuk memperoleh kultur mikroba yang tidak lagi
bercampur dengan mikroba lain yang disebut kultur murni. Prinsip isolasi
mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang
berasal dari campuran berbagai mikroba. Ini bisa dilakukan dengan
menumbuhkannya di media padat, sel mikroba akan membentuk koloni sel yang
tetap di tempatnya (Lestari dan Hartati, 2017).
Pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan menunjukkan bahwa di
dalam produk pangan telah terjadi kontaminasi dari luar ataupun karena proses
pengolahan. Analisis kuantitatif mikrobiologi pada bahan pangan penting
dilakukan untuk mengetahui mutu bahan pangan tersebut. Beberapa cara dapat
digunakan untuk menghitung atau mengukur jumlah jasad renik di dalam suatu
suspensi atau bahan, salah satunya yaitu perhitungan jumlah sel dengan metode
hitung cawan pada suhu yang berbeda (30 °C, 35 °C dan 45 °C) (Putri et al.,
2018).
79
Bakteri yang terdapat pada permukaan makroalga hidup dalam
lingkungan yang sangat kompetitif dalam mendapatkan nutrisi. Bakteri simbion
tersebut menghasilkan senyawa antibiotik yang lebih banyak dibandingkan
dengan bakteri yang hidup bebas di air laut (Agung, 2015). Sebagai contoh,
bakteri eksosimbion yang terdapat pada alga merah dan alga coklat memiliki
aktivitas antimikroba terhadap bakteri patogen pada manusia. Bakteri yang
bersimbiosis dengan makroalga juga dapat melepaskan senyawa bioaktif yang
dapat melindungi makroalga dari fouling, yang merupakan biofilm alami di laut
(Agung, 2015).
Maksud dari praktikum Mikrobiologi Dasar materi perhitungan mikroba
adalah agar praktikan mampu menguasai berbagai metode perhitungan mikroba
baik secara langsung maupun tidak langsung. Tujuan praktikum Mikrobiologi
Dasar materi perhitungan mikroba adalah praktikan mampu menguasai teknik
perhitungan mikroba dengan Metode Total Plate Count (TPC), metode Most
Probable Number (MPN), metode Mc Farland dan memakai alat Hemositometer.
1.3 Waktu Dan Tempat
Praktikum Mikrobiologi dasar materi 3 perhitungan mikroba dilaksanakan
pada 21 April 2021. Bertempat dirumah masing masing secara daring melalui
google meet.
80
2.1 Metode Perhitungan Mikroba
2.1.1 Metode TPC (Total Plate Count)
Metode TPC merupakan analisis untuk menguji jumlah mikroba dengan
menggunakan metode pengenceran dan metode cawan tuang. Metode ini
dilakukan dengan mengencerkan sumber isolate yang telah diketahui beratnya
ke dalam 9 ml larutan garam fisiologis, larutan yang digunakan sekitar 1 ml
suspense ke dalam cawan petri steril, dilanjutkan dengan menuangkan media
penyubur (nutrient agar). NA / media penyubur merupakan nutrisi untuk makanan
mikroba. Total Plate Count (TPC) ada untuk menunjukkan jumlah mikroba yang
terdapat dalam suatu produk dengan cara menghitung koloni bakteri yang
ditumbuhkan pada media agar (Sundari et al., 2019).
Metode angka lempeng total disebut juga metode total plate count (TPC).
Pada metode TPC dilakukan pengenceran kultur terlebih dahulu, setelah itu
kultur ditumbuhkan kembali pada media dan diamati jumlah sel bakteri yang
mendekati kelipatan 10 pada setiap pengenceran. Cara ini memiliki keterbatasan,
antara lain jumlah sel yang terhitung biasanya lebih kecil dari yang sebenarnya
dan cara ini tidak dapat diaplikasikan pada bakteri yang pertumbuhannya lambat.
Kelebihan dari metode uji total plate count (TPC) adalah pengamat dapat
mengetahui jumlah mikroba yang dominan dan apabila ada mikroba jenis lain
dalam sampel (Sundari et al., 2019).
2.1.2 Metode MPN (Most Probable Number)
Metode Most Probable Number (MPN), merupakan metode perhitungan
sel terutama untuk perhitungan bakteri coliform berdasarkan jumlah perkiraan
terdekat. Perkiraan terdekat yaitu perhitungan dalam range tertentu. Dihitung
sebagai nilai duga dekat secara statistik dengan merujuk pada tabel MPN (Most
81
Probable Number) (Hartanti, 2015). Pada metode MPN dengan menggunakan
medium cair di dalam tabung reaksi. Perhitungan MPN berdasarkan pada jumlah
tabung reaksi yang positif, yakni yang ditumbuhi oleh mikroba setelah inkubasi
pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung yang positif dapat dilihat
dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas di dalam tabung
kecil (tabung durham) yang diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk jasad
renik yang membentuk gas. Untuk setiap pengenceran pada umumnya dengan
menggunakan 3 atau 5 seri tabung.
Metode Most Probable Number (MPN), merupakan metode perhitungan
sel terutama untuk perhitungan bakteri coliform berdasarkan jumlah perkiraan
terdekat. Perkiraan terdekat yaitu perhitungan dalam range tertentu. Dihitung
sebagai nilai duga dekat secara statistik dengan merujuk pada tabel MPN (Most
Probable Number) (Hartanti, 2015). Pada metode MPN dengan menggunakan
medium cair di dalam tabung reaksi. Perhitungan MPN berdasarkan pada jumlah
tabung reaksi yang positif, yakni yang ditumbuhi oleh mikroba setelah inkubasi
pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung yang positif dapat dilihat
dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas di dalam tabung
kecil (tabung durham) yang diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk jasad
renik yang membentuk gas. Untuk setiap pengenceran pada umumnya dengan
menggunakan 3 atau 5 seri tabung (Hutagaol, 2012).
2.1.3 Metode Mc Farland
Metode Mc Farland merupakan suatu bentuk skala yang memiliki ukuran
dari nomor satu hingga sepuluh, skala ini menunjukkan konsentrasi bakteri per
mili liter. Standard ini dibuat untuk memperkirakan konsentrasi bakteri Gram
negatif. Standard Mc Farland adalah penyetaraan konsentrasi mikroba dengan
menggunakan larutan BaCl21% dan H2SO4 1%. Standar kekeruhan Mc Farland
82
ini dimaksudkan untuk menggantikan perhitungan bakteri satu per satu dan untuk
memperkirakan kepadatan sel yang akan digunakan pada prosedur pengujian
antimikroba. Bakteri kultur murni yang telah diremajakan diambil 1 ml diinokulasi
dalam medium Natrium Agar dengan cara zig-zag, inkubasi suhu 37⁰ C selama
24 jam. Bakteri yang tumbuh diambil kemudian dimasukkan ke dalam tabung
reaksi yang berisi 10 mL kemudian dilakukan pengenceran. Spektrofotometer
disiapkan dengan setting panjang gelombang 540-600 nm (Standard Mc Farlan).
Blanko (medium) dan Sampel kultur (biakan cair) disiapkan masing-masing
sebanyak 2 mL ke dalam kuvet steril, run spektrofotometer dan catat hasil
Absorbansi dan setarakan dengan nilai absorbansi pada konsentrasi Mc Farland
(Arniati et al., 2015).
Larutan Mc Farland 0,5 biasa digunakan sebagai pembanding kekeruhan
biakan bakteri dalam medium cair dengan kepadatan antara 1 x 107 sel/ml - 1 x
108 sel/ml. Urutan kerja pembuatan larutan McFarland 0,5, sebanyak 0,05 ml
Barium Clorida (BaCl2) 1% dalam akuades ditambahkan 9,95 ml Asam Sulfat
(H2SO4) 1%. Kemudian disimpan di tempat yang terhindar dari cahaya matahari
langsung. Standar McFarland sensitif terhadap udara dan cahaya, oleh karena
itu pastikan tabung tertutup rapat setiap saat dan simpan pada tempat yang
gelap (Aviany et al., 2020)..
2.1.4 Metode Hemocytometer
Hemacytometer adalah metode perhitungan secara mikroskopis yang
bertujuan untuk menghitung mikroba atau biasa juga disebut suatu alat yang
dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan dapat
digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Ruang hitung terdiri dari 9 kotak
besar dengan luas 1 mm². Satu kotak besar di tengah, dibagi menjadi 25 kotak
sedang dengan panjang 0,05 mm. Satu kotak sedang dibagi lagi menjadi 16
83
kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besar tersebut berisi 400 kotak kecil.
Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm. Sel bakteri yang tersuspensi akan
memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga jumlah bakteri per satuan
volume dapat diketahui (Mikapin, 2012).
Pada metode ini, eritrosit dihitung dengan bantuan mikroskop. Namun hitung
jumlah eritrosit dengan metode ini membutuhkan waktu yang cukup lama dan
rumit. Selain itu akurasi hasil pemeriksaan dipengaruhi oleh faktor subyektif
seperti pengalaman dan keahlian dari teknisi laboratorium, dan faktor kelelahan
dari teknisi terutama jika sampel pemeriksaan dalam jumlah yang sangat besar.
Perhitungan jumlah mikroba menggunakan haemocytometer dilakukan dengan
meneteskan sampel mikroba pada bagian parit melintang di haemocytometer
dan ditutup oleh cover glassnya. Sampel yang diteteskan sebelumnya harus
udah disuspensi dan dicampur dengan zat pewarna trypan blue menggunakan
pipet. Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan haemocytometer adalah
dapat menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang sudah mati, tergantung
dari tipe pewarna yang digunakan. Kekurangan dari metode ini adalah hasil
perhitungan bersifat subjektif, prosesnya berlangsung lama, dapat terjadi
kekeliruan volumetrik karena kesalahan saat menggunakan pipet pada sampel
dan peletakan kaca penutup (Azizah et al., 2015).
84
BAB III. METODELOGI
3.1 Pembuatan Media Tanam
Media tanam mikroba adalah komponen utama yang diperlukan ketika
hendak melakukan penanaman mikroba pada sampel uji. Media tanam yang
akan digunakan harus disesuaikan dengan jenis mikroba yang hendak
ditumbuhkan. Hal itu dikarenakan dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroba
pada sampel yang akan diuji.
3.1.1 LB (Lactose Broth)
Ditimbang media LB yang dibutuhkan
Dihomogenkan media dan aquades di dalam erlenmeyer
Ambil 9 ml dengan pipet volume
Masukkan kedalam tabung reaksi
Masukkan durham dan tutup dengan kapas serta wrap
Gambar 25. Skema Kerja Pembuatan LB (Lactose Broth)
Skema kerja pada pembuatan media tanam LB (Lactose Broth) diawali
dengan proses menimbang media LB yang dibutuhkan. Kemudian mengukur
85
aquades yang akan digunakan. Selanjutnya homogenkan media dan aquades
dalam erlenmeyer. Lalu ambil 9 ml hasil penghomogenan dengan menggunakan
pipet volume. Setelah itu masukkan kedalam tabung reaksi. Kemudian masukkan
durham dan tutup dengan kapas dan wrap. Tabung durham berfungsi sebagai
indikator ada tidaknya gas yang terbentuk. Selanjutnya sterilisasikan dengan
menggunakan autoklaf selama 15 menit. Autoklaf berfungsi untuk melakukan
sterilisasi basah dengan suhu 121oC dan tekanan 1 atm (0,15 MPa) selama 15-
20 menit. Setelah itu proses sterilisasi akan didapatkan media yang steril.
Pembuatan media tanam LB (Lactose Broth) menurut Sukawaty, et al.
(2016), diawali dengan proses menimbang LB sebanyak 10,4 g, lalu ukur
aquadestilata sebanyak 800 mL, dan masukkan LB yang telah ditimbang ke
dalam Erlenmeyer. Kemudian masukkan aquadestilata sebanyak 800 mL dan
masukkan magnetic stirrer ke dalam erlenmeyer, lalu homogenkan di atas hot
plate. Selanjutya masukkan tabung durham ke dalam 160 tabung reaksi secara
terbalik, lalu masukkan larutan LB ke dalam 160 tabung reaksi dengan
menggunakan pipet volume, dimana setiap tabung reaksi berisi 5 mL larutan LB.
Setelah itu, tutup setiap tabung reaksi dengan menggunakan kertas aluminium,
lalu ikat tabung reaksi menjadi satu ikatan, dan disterilkan dengan menggunakan
autoclave selama ± 15 menit.
86
3.1.2 NB (Nutrient Broth)
Ditimbang media NB yang dibutuhkan
Dihimogenkan NB dan aquades di Erlenmeyer
Ambil 9 ml menggunakan pipet volume dan masukkan

ke dalam tabung reaksi
Tutup tabung reaksi menggunakan kapas dan plastik wrap
Media disterilisasi dalam autoklaf selama 15 menit

pada suhu 121oC
Media ditunggu sampai turun suhunya
Gambar 26. Skema Kerja Pembuatan NB (Nutrient Broth)
Skema kerja pembuatan media tanam NB (Nutrient Broth) diawali dengan
proses menimbang media NB yang dibutuhkan. Selanjutnya mengukur aquades
yang akan digunakan. NB berfungsi sebagai media isolasi, sedangkan aquades
berfungsi sebagai pelarut. Setelah itu homogenkan NB dan aquades di
erlenmeyer. Lalu ambil 9 ml hasil penghomogenan dengan menggunakan pipet
volume dan masukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian tutup tabung reaksi
dengan menggunakan kapas dan plastik wrap. Selanjutnya media disterilisasi
dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121oC. Setelah itu media ditunggu
hingga suhunya turun.
Pembuatan media tanam NB (Nutrient Broth) menurut Nuryanti, et al.
(2016), diawali dengan proses menimbang Sebanyak 3,25 gram NB. Kemudian
ditambahkan dengan aquades sebanyak 250 mL. Selanjutnya ambil media NB
87
yang telah dibuat sebanyak 30 Ml, lalu tambahkan dengan jamur Candida
albicans sebanyak 5 ose yang disetarakan dengan kekeruhan larutan standar
MC Farland. Setelah itu, kocok dan vortex agar tercampur secara merata.
Kemudian inkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC, sehingga menghasilkan
media yang agak bening.
3.2 Skema Kerja Metode
Diambil hasil inkubasi bakteri inokulasi tebar
Hitung dengan colony counter dan catat hasilnya

untuk dihitung menggunakan rumus SNI
Gambar 27. Skema Kerja TPC (Total Plate Count)
Syarat perhitungan TPC
 Jumlah koloni antara 25-250 koloni
 Tidak TBUD
 Tidak Spreader
 Rasional
Rumus perhitungan TPC menurut SNI
Keterangan:
N : Jumlah koloni (Koloni/ml)
ΣC : Jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung
n1 : Jumlah cawan pada pengenceran pertama yang dapat dihitung
n2 : Jumlah cawan pada pengenceran kedua yang dapat dihitung
88
d : Pengenceran pertama yang dapat dihitung
Skema kerja metode TPC (Total Plate Count) diawali dengan proses
pengambilan hasil inkubasi bakteri inokulasi tebar. Kemudian dilakukan
penghitungan dengan colony counter. Lalu catat hasilnya untuk dihitung dengan
menggunakan rumus SNI.
Pengujian dengan menggunakan metode TPC (Total Plate Count)
menurut Putri dan Kurnia (2018) adalah diawali dengan cara mensterilkan tangan
dan meja dengan menggunakan alkohol 70%. Langkah selanjutnya yaitu
mengambil 1 ml sampel es dung-dung. Kemudian ditambahkan 9 ml pengencer
(aquades steril) dan dihomogenkan dengan pengenceran 10-1. Selanjutnya hasil
dari pengenceran 10-1 diambil sebanyak 1 ml. Lalu ditambahkan 9 ml aquades
steril dan dihomogenkan (sebagai pengencer 10-2) dan seterusnya hingga
pengenceran 10-5. Kemudiian lakukan penanaman mikrobia pada pengenceran
(10-4 dan 10-5) dengan cara pour plate yaitu diambil suspensinya sebanyak 1 ml
masing-masing dimasukkan ke dalam cawan petri. Setelah itu masing-masing
cawan petri dituang dengan media PCA (Plate Count Agar) pada suhu 45°C, lalu
dihomogenkan, dan ditunggu hingga padat. Selanjutnya inkubasi pada suhu
37°C selama 2x24 jam. Kemudian amati pertumbuhan koloni pada masing-
masing cawan dan hitung dengan colony counter dan hitung banyaknya koloni
berdasarkan Standar Plate Count (SPC).
89
a. Pembuatan Media LB
Ditimbang media LB yang dibutuhkan
Dihimogenkan media dan aquades di dalam erlenmeyer
Ambil 9 ml dengan pipet volume
Masukkan kedalam tabung reaksi
Masukkan durham dan tutup dengan kapas serta wrap
Gambar 28. Skema Kerja Pembuatan Media LB pada Metode MPN (Most
Probable Number)
90
b. Pengujian MPN
Sampel air limbah ikan
Pengenceran bertingkat hingga 10-3
Pindahkan larutan dengan menggunakan pipet steril sebanyak 1 ml

kemsetiap tabung LB berisi tabung durham dalam 3 seri dan 5 seri
Inkubasi tabung-tabung selama 48 jam pada suhu 35°C tabung positif

ditandai dengan kekeruhan dan gelembung dalam tabung durham
Tentukan angka paling memungkinkan (APM) berdasarkan jumlah

tabung-tabung LB yang positif dengan menggunakan Angka Paling
Memungkinkan (APM) nyatakan angkanya sebagai “APM/g coliform”
Gambar 29. Skema Kerja Pengujian MPN (Most Probable Number)
Skema kerja pada metode MPN (Most Probable Number) diawali dengan
proses pembuatan media LB (Lactose Broth) kemudian dilanjutkan dengan
pengujian MPN (Most Probable Number). Pembuatan media LB diawali dengan
proses menimbang media LB yang dibutuhkan. Kemudian mengukur aquades
yang akan digunakan. Selanjutnya homogenkan media dan aquades dalam
erlenmeyer. Lalu ambil 9 ml hasil penghomogenan dengan menggunakan pipet
volume. Setelah itu masukkan kedalam tabung reaksi. Kemudian masukkan
durham dan tutup dengan kapas dan wrap. Tabung durham berfungsi sebagai
indikator ada tidaknya gas yang terbentuk. Selanjutnya sterilisasikan dengan
menggunakan autoklaf selama 15 menit. Autoklaf berfungsi untuk melakukan
sterilisasi basah dengan suhu 121oC dan tekanan 1 atm (0,15 MPa) selama 15-
20 menit. Setelah itu proses sterilisasi akan didapatkan media yang steril.
Setelah pembuatan media LB selesai tahap selanjutnya adalah pengujian MPN.
91
Pengujian MPN diawali dengan proses penyiapan sampel air limbah ikan.
Kemudian dilakukan pengenceran bertingkat hingga 10-3. Lalu pindahkan larutan
dengan menggunakan pipet steril sebanyak 1 ml ke setiap tabung LB yang berisi
tabung durham dalam 3 seri dan 5 seri. Selanjutnya inkubasi tabung-tabung
selama 48 jam pada suhu 35°C, tabung positif ditandai dengan kekeruhan dan
gelembung dalam tabung durham. Setelah itu tentukan Angka Paling
Memungkinkan (APM) berdasarkan jumlah tabung-tabung LB yang positif
dengan menggunakan Angka Paling Memungkinkan (APM), lalu nyatakan
angkanya sebagai “APM/g coliform”.
Pengujian ada tidaknya coliform dengan MPN (Most Probable Number)
menurut Putri dan Kurnia (2018), dilakukan dengan cara uji praduga (Presumtif
Test) antara lain menyiapkan sampel sebanyak 100 ml secara steril. Lalu
dihomogenkan dengan cara mengocoknya sebanyak 25 kali. Setelah itu
masukkan masing-masing sampel 10 ml, ke dalam 3 tabung reaksi yang masing-
masing berisi Lactosa Broth. Kemudian masukkan masing-masing 1 ml sampel
ke dalam 3 tabung reaksi yang masing-masing berisi Lactosa Broth. Lalu
masukkan masing-masing 0,1 ml sampel ke dalam 3 tabung reaksi yang masing-
masing berisi Lactosa Broth. Setelah itu inkubasi semua tabung pada suhu 37°C
selama 2x24 jam. Kemudian amati terbentuknya gas. Lalu catat jumlah tabung
reaksi yang terbentuk gas (positif terdapat gas) pada tiap seri tabung (10 ml, 1
ml, 0,1 ml). Setelah itu tentukan nilai MPN.
92
Media NB dimasukkan ke tabung reaksi
Sterilisasi dengan autoklaf
Dibiarkan sampai dingin
Inokulasikan 1 ose biakan bakteri
Inkubasi selama 24 jam
Hasil inkubasi dibandingkan dengan standart McFarland
Gambar 30. Skema Kerja Metode Mc Farland
Skema kerja metode Mc Farland diawali dengan proses memasukkan
media NB ke tabung reaksi. Kemudian sterilisasi dengan menggunakan autoklaf
dan biarkan hingga dingin. Setelah itu inokulasikan 1 ose biakan bakteri dan
inkubasi selama 24 jam. Lalu dilakukan pembandingan hasil inkubasi dengan
standart Mc Farland.
Skrining aktivitas antibakteri produk ekstrasel isolat bakteri eksosimbion
terhadap bakteri plankton Saureus ATCC 25923 menurut Kusuma, et al. (2015)
dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar dengan teknik perforasi.
Bakteri Saureus ATCC 25923 diinokulasi sebanyak 1 ose ke dalam 5 ml media
MHB steril. Kemudian diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam. Selanjutnya
suspensi bakteri diencerkan hingga kekeruhan suspensi bakteri sama dengan
kekeruhan Mc Farland 0,5. Setelah itu sebanyak 20 µl suspensi bakteri
dimasukkan ke dalam cawan petri steril lalu ditambahkan dengan 20 ml media
MHA steril dengan suhu 40-45ºC, dihomogenkan, lalu dibiarkan hingga
93
memadat. Kemudian lempeng agar yang telah mengandung bakteri dilubangi
dengan menggunakan perforator. Setiap lubang diisi dengan produk ekstrasel
isolat bakteri dari hari kesatu hingga hari ketujuh. Selanjutnya diinkubasikan
pada suhu 370C selama 18-24 jam. Lalu dilihat zona hambat yang terbentuk.
Hasil ini kemudian dijadikan sebagai acuan pada uji skrining aktivitas terhadap
biofilm Saureus ATCC 25923.
94
3.2.4 Metode Hemocytometer
Hasil inkubasi jamur
Masukkan twin 80 10% sebanyak 2 ml ke media PDA
Putar angka 8 selama 2 menit
Ambil 1 ml dengan pipet serologis
Masukkan ke Na-Fis steril 9 ml sebagai pengenceran 10-1
Lakukan pengenceran hingga 10-3
Masukkan ke Hemositometer
Perhitungan jumlah spora
Gambar 31. Skema Kerja Metode Hemocytometer
Skema kerja metode Hemocytometer diawali dengan proses penyiapan
hasil inkubasi jamur. Kemudian masukkan twin 80 10% sebanyak 2 ml pada
media PDA. Twin 80 berfungsi untuk melarutkan spora dalam media PDA,
sedangkan PDA berfungsi sebagai media penanaman bakteri. Lalu putar angka
8 selama 2 menit. Setelah itu ambil 1 ml dengan menggunakan pipet serologis.
Pipet serologis berfungsi untuk mengambil larutan dalam skala 0,1-1 ml.
Kemudian Masukkan ke Na-Fis steril 9 ml sebagai pengenceran 10-1. Na-Fis
steril berfungsi sebagai pengencer bertingkat. Selanjutnya lakukan pengenceran
hingga 10-3. Setelah itu masukkan ke Hemositometer. Lalu hitung jumlah
sporanya.
95
Perhitungan jumlah kontaminasi mikroba menurut Anggraini dan Rusijono
(2015), yaitu dengan menggunakan metode hitungan mikroskopis langsung.
Sampel diletakkan pada suatu ruang hitung (hemasitometer) dan jumlah sel
dapat ditentukan secara langsung dengan bantuan mikroskop. Mikrometer yang
dipakai untuk mengukur luas areal pandang mikroskop adalah mikrometer gelas
objek yang memiliki skala terkecil 0,01 mm.
96
BAB IV. PEMBAHASAN
4.1 Data Hasil Perhitungan Praktikum
Pada praktikum Mikrobiologi Dasar materi Perhitungan Mikroba dengan
menggunakan metode TPC (Total Plate Count) didapatkan hasil sebagai berikut:
Tabel 2. Data hasil perhitungan metode TPC
Jumlah Koloni Bakteri

Sampel Kode Hasil TPC
10-4 10-5
A TBUD 216 2.145 x 105
Terasi 1
B TBUD 213 cfu/ml
A SP 224 1.590 x 105
Terasi 2
B TBUD 159 cfu/ml
A SP 224 1.590 x 105
Terasi 3
B EROR 159 cfu/ml
A SP 141 110 x 104
Terasi 4
B 110 SP cfu/ml
Pengujian menggunakan metode TPC (Total Plate Count) menggunakan
sampel 4 terasi secara duplo yaitu kode A dan B dengan masing-masing
pengenceran 10-4 dan 10-5. Pada sampel Terasi 1 dengan pengenceran 10-4
kode A dan B jumlah koloni bakterinya TBUD (Terlalu Banyak Untuk Dihitung)
dan pada pengenceran 10-5 kode A dan B jumlah koloni bakterinya adalah 216
dan 213, sehingga didapatkan hasil TPC sebesar 2.145 × 105 cfu/ml. Pada
sampel Terasi 2 dengan pengenceran 10-4 kode A dan B jumlah koloni
bakterinya adalah SP (spreader) dan TBUD, sehingga tidak dapat dihitung
karena tidak memenuhi syarat perhitungan TPC. Sedangkan pada pengenceran
10-5 kode A dan B jumlah koloni bakterinya adalah 224 dan 159, sehingga
didapatkan hasil TPC sebesar 1.590 x 105 cfu/ml. Pada sampel Terasi 3
pengenceran 10-4 kode A dan B jumlah koloni bakterinya tidak memenuhi syarat
97
perhitungan TPC karena SP terletak diatas. Sedangkan pada pengenceran 10-5
kode A dan B jumlah koloni bakterinya adalah 224 dan 159, sehingga didapatkan
hasil TPC sebesar 1.590 x 105 cfu/ml. Pada sampel Terasi 4 dengan
pengenceran 10-4 kode A dan B jumlah koloni bakterinya adalah SP dan 110.
Sedangkan pada pengenceran 10-5 kode A dan B jumlah koloni bakterinya
adalah 141 dan SP, sehingga didapatkan hasil TPC sebesar 110 x 104 cfu/ml.
Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa sampel terasi dengan jumlah koloni
bakteri tertinggi adalah Terasi 1 dengan nilai TPC sebesar 2.145 x 105 cfu/ml,
sedangkan sampel terasi dengan jumlah koloni bakteri terendah adalah Terasi 4
dengan nilai TPC sebesar 110 x 104 cfu/ml.
98
menggunakan metode MPN (Most Probable Number) didapatkan hasil sebagai
berikut:
Tabel 3. Data hasil perhitungan metode MPN tabel seri 3
Jumlah Gelembung
Sampel Kode
-1
10 10-2 10-3
A 3 1 >5
Air Limbah B 1 5 1
C 3 1 1
APM 3 1 1
Pada Tabel seri 3 yang menggunakan air limbah sebagai sampel, dapat
diketahui nilai jumlah gelembung dari setiap kode. Pada pengenceran 10-1
diketahui jumlah gelembung pada kode A, B, dan C berturut-turut adalah 3, 1,
dan 3. Pada pengenceran 10-2 diketahui jumlah gelembung pada kode A, B, dan
C berturut-turut adalah 1, 5, dan 1. Pada pengenceran 10-3 diketahui jumlah
gelembung pada kode A, B, dan C berturut-turut adalah >5, 1, dan 1. Pada
pengenceran 10-1, 10-2, dan 10-3 nilai yang lebih dominan berturut-turut adalah 3,
1, dan 1. Nilai yang lebih dominan dinyatakan sebagai APM, sehingga dapat
diketahui bahwa nilai APM dari pengenceran 10-1 adalah 3, nilai APM dari
pengenceran 10-2 adalah 1, dan nilai APM dari pengenceran 10-3 adalah 1.
Berdasarkan data APM di atas, maka nilai MPN dari seri 3 adalah 75 MPN/g.
Tabel 4. Data hasil perhitungan metode MPN tabel seri 5
Jumlah Gelembung
Sampel Kode -1
10 10-2 10-3
A 1 1 5
B 1 1 1
Air Limbah
C 1 1 1
D 1 1 2
99
E 1 1 1
APM 1 1 1
Pada Tabel seri 5 yang menggunakan air limbah sebagai sampel, dapat
diketahui nilai jumlah gelembung dari setiap kode. Pada pengenceran 10-1
diketahui jumlah gelembung pada kode A, B, C, D, dan E berturut-turut adalah 1,
1, 1, 1, dan 1. Pada pengenceran 10-2 diketahui jumlah gelembung pada kode A,
B, C, D, dan E berturut-turut adalah 1, 1, 1, 1, dan 1. Pada pengenceran 10-3
diketahui jumlah gelembung pada kode A, B, C, D, dan E berturut-turut adalah 5,
1, 1, 2, dan 1. Pada pengenceran 10-1, 10-2, dan 10-3 nilai yang lebih dominan
berturut-turut adalah 1, 1, 1, 1, dan 1. Nilai yang lebih dominan dinyatakan
sebagai APM, sehingga dapat diketahui bahwa nilai APM dari pengenceran 10-1
adalah 1, nilai APM dari pengenceran 10-2 adalah 1, dan nilai APM dari
pengenceran 10-3 adalah 1. Berdasarkan data APM di atas, maka nilai MPN dari
seri 5 adalah 6,1 MPN/g.
100
Metode Mc Farland merupakan penyetaraan konsentrasi mikroba dengan
menggunakan larutan BaCl21% dan H2SO4 1%. Standar kekeruhan Mc Farland
ini dimaksudkan untuk menggantikan perhitungan bakteri satu per satu, serta
untuk memperkirakan kepadatan sel yang akan digunakan pada prosedur
pengujian antimikroba. Bakteri kultur murni yang telah diremajakan diambil 1 ml
diinokulasi dalam medium Natrium Agar dengan cara zigzag, inkubasi suhu 37⁰ C
selama 24 jam. Bakteri yang tumbuh diambil kemudian dimasukkan ke dalam
tabung reaksi yang berisi 10 mL kemudian dilakukan pengenceran.
Spektrofotometer disiapkan dengan setting panjang gelombang 540-600 nm
(Standard Mc Farland). Blanko (medium) dan Sampel kultur (biakan cair)
disiapkan masing-masing sebanyak 2 mL ke dalam kuvet steril, run
spektrofotometer dan catat hasil Absorbansi dan setarakan dengan nilai
absorbansi pada konsentrasi Mc Farland.
Gambar 32. Standar Mc. Farland
101
Gambar 33. Biakan Bakteri Sampel Air Kloset
menggunakan metode Mc Farland didapatkan hasil seperti pada Gambar 1 dan
2. Jika dibandingkan dengan standar Mc. Farland (Gambar 1), Gambar 2 (biakan
bakteri sampel air kloset) mempunyai tinggat kekeruhan yang sama dengan
standar No. 1 yang artinya jumlah bakteri pada hasil biakan bakteri tersebut
adalah 3 x 108/ml.
102
4.1.4 Metode Hemasitometer
Hemaitometer merupakan metode perhitungan secara mikroskopis yang
bertujuan untuk menghitung mikroba atau untuk melakukan perhitungan sel
secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Ruang
hitung terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm². Satu kotak besar di tengah,
dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan panjang 0,05 mm. Satu kotak sedang
dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besar tersebut
berisi 400 kotak kecil. Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm.
Gambar 34. Penampakan Spora pada Mikroskop
menggunakan metode Hemasitometer didapatkan hasil seperti pada Gambar 3.
Berdasarkan gambar penampakan spora pada mikroskop diketahui bahwa
jumlah selnya adalah 16 dan faktor delusinya adalah 3. Faktor delusi merupakan
pangkat dari pengenceran. Kemudian data tersebut dimasukkan dalam rumus
perhitungan hemasitometer yaitu jumlah sel dikalikan dengan faktor delusi dan
dibagi dengan volume sedang yaitu 4 x 10-3. Hasil perhitungan yang didapatkan
dengan menggunakan rumus tersebut adalah 18,75 x 103 mm2.
103
BAB V. PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Kesimpulan dari Praktikum Mikrobiologi Dasar materi Perhitungan
Mikroba adalah sebagai berikut:
 Semua proses penelitian dilakukan secara aseptik dengan menggunakan
api bunsen dan dilakukan dalam bilik laminar untuk mencegah
kontaminasi dari mikroorganisme lain.
 Metode TPC merupakan analisis untuk menguji jumlah mikroba dengan
menggunakan metode pengenceran dan metode cawan tuang.
 Metode Most Probable Number (MPN), merupakan metode perhitungan
sel terutama untuk perhitungan bakteri coliform berdasarkan jumlah
perkiraan terdekat.
 Standar kekeruhan Mc Farland ini dimaksudkan untuk menggantikan
perhitungan bakteri satu per satu dan untuk memperkirakan kepadatan
sel yang akan digunakan pada prosedur pengujian antimikroba.
 Hemacytometer adalah metode perhitungan secara mikroskopis yang
bertujuan untuk menghitung mikroba atau biasa juga disebut suatu alat
yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan
dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah.
 Jumlah sel yang berbeda ini disebabkan oleh intensitas cahaya
pengkulturan yang berbeda. Selain itu, jumlah sel yang berbeda juga
disebabkan oleh medium yang berbeda.
 Ada berbagai macam cara untuk mengukur jumlah sel, antara lain dengan
hitungan cawan (plate count), hitungan mikroskopis langsung (direct
microscopic count) yang menggunakan mikroskop serta ruang hitung
104
(haemositometer) atau secara elektonis dengan bantuan alat yang
disebut penghitung coulter (coulter counter).
5.2 Saran
Untuk sistem praktikum kedepannya semoga sudah bisa dilaksanakan
secara offline . Dengan praktikum secara offline dapat memahami materi lebih
mudah, serta mendapatkan pengalaman dibanding dengan praktikum secara
online karena ada beberapa kendala seperti sinyal dan praktikan tidak bisa
melakukan praktikum secara langsung.
105
DAFTAR PUSTAKA
Anggraini, M. A. Dan Rusijono. (2015). Optimasi pengawetan produk jamur tiram

segar sebagai upaya penguatan industri olahan jamur. Sains &
Matematika. 3(2), 50-55.
Arniati. (2015). "Uji antibakteri patogen ekstrak Sponge menggunakan metode

High Troughput Screening (HTS) dengan indikator MTT (3-[4,5-
dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)." Jurusan Ilmu
Kelautan 144-149.
Aviany. (2020). "Analisis efektivitas probiotik di dalam produk kecantikan sebagai

antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis." Jurnal Berkala
Bioteknologi. 25-30.
Azizah, R., Sulistianingtiyas, I., Pringgenies, D., dan Rudiyanti, S. (2016). Potensi
Rumput Laut Eucheuma sp. Terhadap Kepadatan Fitoplankton Chlorella
sp. Jurnal Kelautan Tropis. 18(3), 166-177.
Karimela, E. J., & Mandeno, J. A. (2019). Tingkat kontaminasi mikroba pada

beberapa unit pengolahan ikan asap pinekuhe di Kabupaten Sangihe.
Jurnal Teknologi Perikanan dan Kelautan. 10(1), 61-68.
Kusuma, S. A. F., Agung, M. U. K., dan Meika, J. (2015). Skrining antibakteri

produk ekstrasel eksosimbion bakteri laut pada makroalga terhadap
biofilm Staphylococcus aureus ATCC 25923. Jurnal Akuatika. 6(2), 128-
139.
Nuryanti, S., Jura, M. R., dan Wahyuni, S. (2016). Uji daya hambat ekstrak
bawang hutan (Eleutherine palmifolia (L.) merr) dari Matantimali terhadap
pertumbuhan jamur Candida albicans. 5(2), 98-102.
Putri, A. M. Dan Kurnia, P. (2018). Identifikasi keberadaan bakteri Coliform dan

total mikroba dalam es dung-dung di sekitar kampus Universitas
Muhammadiyah Surakarta. Media Gizi Indonesia. 13(1), 41-48.
Putri, R. M. S., Nurjanah, K. T., & Tarman, K. (2018). Analisis Kuantitatif

Mikrobiologi Serbuk Minuman Fungsional Lintah Laut (Discodoris sp.)
pada Suhu yang Berbeda Selama Penyimpanan. Majalah Ilmiah Biologi
BIOSFERA: A Scientific Journal. 35(3), 123-130.
Sukawaty, Y., Kamil, M., dan Kusumawati, E. (2016). Uji cemaran bakteri
Coliform pada minuman air tebu. JURNAL ILMIAH MANUNTUNG. 2(2),
248-253.
Sundari. (2019). "Uji angka lempeng total (ALT) pada sediaan kosmetik lotion x di
BBPOM Medan." Jurnal Biologica Samudra. 25-33.
106
LAMPIRAN
Lampiran 3. Tabel Hasil TPC dan Perhitungannya
Tabel 5. Terasi 1
A B
10-4 TBUD TBUD
10-5 216 213
Tabel 6. Terasi 2
A B
10-4 SP TBUD
10-5 224 159
107
Tabel 7. Terasi 3
A B
10-4 SP EROR
10-5 224 159
Tabel 8. Terasi 4
A B
10-4 SP 110
10-5 141 SP
108
Lampiran 4. Perhitungan Hemositometer
Gambar 35. Hasil Hemasitometer
109
110
MATERI 4
ZONA HAMBAT ANTI-BAKTERI

MALANG
2021
111
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Bakteri merupakan organisme kosmopolit yang dapat kita jumpai di
berbagai tempat dengan berbagai kondisi di alam ini. Bakteri dapat kita dijumpai
di mana saja. Bakteri merupakan mikroorganisme yang dapat menyebabkan
dampak positif dan negatif bagi kehidupan. Dampak negatif yang ditimbulkan
akibat adanya bakteri disebabkan oleh bakteri patogen. Zat yang digunakan
untuk pencegahan dan pengendalian yang disebabkan oleh bakteri atau
mikroorganisme disebut anti bakteri. Berdasarkan cara kerjanya antibakteri
dibedakan menjadi bakterisidal dan bakteriostatik. Antibakteri bakteriostatik
adalah zat yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri, sedangkan bakteri
bakterisidal adalah zat yang bekerja mematikan bakteri (Kurniawan et al., 2016).
Menurut Oktavia et al. (2019), metode uji cakram adalah salah satu
pengjian yang bertujuan untuk mengetahui aktivitas anti bakteri. Uji cakram
merupakan pengujian antimikroba dengan mengukur diameter daerah hambatan
yang terjadi disekitar kertas cakram yang sudah mengandung antimikroba. Uji
antibakteri dapat dilakukan dengan kertas cakram steril yang ditetesi dengan
larutan uji dengan berbagai konsentrasu, kemudian diletakkan pada media akan
yang telah memadat. Kemudian ditambahkan pelarut yang melarutkan senyawa
polar dan non polar.
Pada bakteri yang bersifat pathogen dapat merugikan bagi kehidupan.
Bakteri tersebut dapat menyebabkan penyakit bagi manusia dan hewan. Bakteri
juga dapat mengkontaminasi peralatan dan bahan makanan yang dapat
menimbulkan penyakit. Maka perlu adanya pengendalian dan pecegahan
pertumbuhan bakteri dengan adanya zat antibakteri. Antibakteri dapat diuji
menggunakan metode uji cakram. Metode ini dapat mengetahui aktivitas bakteri
112
yang ditandai dengan terbentuknya zona bening pada papre disc atau kertas
cakram.
Maksud dari praktikum Mikrobiologi Dasar materi Zona Hambat
Antibakteri adalah agar praktikan dapat mengetahui pengaruh yang bakteri yang
ada disekitar lingkungan dan bagaimana cara menghambat dan membunuh
bakteri tersebut.
Tujuan dari paktikum Mikrobiologi Dasar materi Zona Hambat Antibakteri
adalah agar praktikan mampu melakukan dan mempraktekkan uji daya hambat
kontaminasi bakteri dengan menggunakan metode uji cakram.
Praktikum Mikrobiologi Dasar materi Zona Hambat Antibakteri dilakukan
pada tanggal 21 April 2021, yang diselenggarakan di rumah masing-masing.
Praktikum dilakukan pada pukul 11.45 sampai 12.45 WIB yang dilakukan secara
daring melaui aplikasi google meet.
113
2.1 Zona Hambat
Zona hambat ialah wilayah sekitar cakram disk yang sudah tidak
ditemukan adanya pertumbuhan koloni bakteri atau zona bening yang terdapat
pada media Muller Hinton Agar (MHA). Zona hambat diukur menggunakan
jangka sorong. Zona hambat yang terbentuk di sekitar cakram kertas saring
diukur diameter vertikal dan horizontalnya dengan satuan milimeter. Zona bening
di sekitar cakram merupakan petunjuk kepekaan bakteri terhadap bahan
antibakteri yang digunakan sebagai bahan uji dan dinyatakan dengan luas zona
hambat (Cahyaningsih, 2014).
Metode uji zona hambat dibagi menjadi 2 jenis, yakni difusi dan dilusi.
Metode difusi ialah metode yang penentuan aktivitasnya didasarkan pada
kemampuan difusi dari zat antimikroba dalam lempeng agar yang sudah
diinokulasi dengan mikroba uji. Metode difusi ini dibagi lagi menjadi metode disk,
sumuran, dan parit. Tujuan dari ketiga metode difusi ini ialah untuk mengamati
diameter zona hambat terhadap bakteri uji. Metode dilusi ialah metode yang
melakukan pencampuran zat antimikroba dan media agar, lalu diinokulasikan
dengan mikroba uji dengan hasil pengamatan yang diperoleh yakni tumbuh atau
tidaknya sebuah mikroba didalam media. Metode dilusi ini dibagi menjadi broth
dilution dan agar dilution. Tujuan dari metode dilusi ini adalah untuk
mendapatkan hasil konsentrasi hambat minimal (KMH) dan konsentrasi bunuh
minimal (KBM). Perbedaan dari metode difusi dan dilusi terletak pada
penggunaan mediumnya. Pada metode difusi digunakan medium padat,
sedangkan pada metode dilusi digunakan medium cair (Prayoga, 2013).
114
2.2 Metode Cakram
Metode cakram atau cakram disk ialah metode yang menggunakan suatu
cakram kertas saring (paper disc). Cakram kertas saring (paper disc) berguna
sebagai tempat penampungan zat antimikroba. Hasil dari pengamatan
menggunakan metode cakram ini yakni ada atau tidaknya daerah bening.
Daerah bening itu sendiri biasanya terbentuk disekitar kertas cakram yang
menunjukkan zona hambat pada pertumbuhan sebuah bakteri (Prayoga, 2013).
Prinsip pada metode cakram disk ini adalah agen antibakteri yang akan
digunakan. Disk standar metronidazole ialah agen antibakteri yang akan
digunakan. Penggunaannya yakni dengan cara menempelkan pada media MRS
(de Man Regosa and Sharpe) yang sudah diinokulaskan oleh suspensi bakteri uji
dengan menggunakan kapas. Sebelum kapas digunakan, terlebih dahulu
disterilisasi agar terhindar dari semua bentuk mikroorganisme yang ada untuk
menghindari terjadinya kontaminasi (Darmika dan Somia, 2016).
115
BAB III. METODOLOGI
3.1 Pembuatan Media MHA (Muller Hinton Agar)
Ditimbang MHA yang dibutuhkan
Dihomogenkan MHA dan Aquades di dalam erlenmeyer
Tutup erlenmeyer dengan alumunium foil dan Kertas
Rebus selama 15 menit
Ditunggu hingga hangat
Tuangkan media MHA ke cawan petri
Tunggu hingga menjadi gel
Gambar 37. Flowchart Pembuatan Media MHA
Langkah pertama yang dilakukan untuk membuat media MHA (Muller
Hinton Agar) menimbang MHA (Muller Hinton Agar) dan mengukur aquades
sesuai dengan jumlah yang dibutuhkan. Kemudian, MHA (Muller Hinton Agar)
dan aquadest tersebut dihomogenkan di dalam erlenmeyer. Setelah
terhomogenkan, tutup erlenmeyer dengan alumunium foil dan kertas agar tidak
terjadi kontak dengan luar. Lakukan perebusan selama 15 menit, lalu tunggu
hingga hangat. Media MHA (Muller Hinton Agar) yang telah hangat kemudian
dipindahkan ke cawan petri, dan tunggu hingga menjadi gel. Setelah menjadi gel
maka media MHA (Muller Hinton Agar) telah siap untuk digunakan.
116
3.2 Metode Cakram
3.2.1 Perendaman Kertas Cakram
Potong kertas saring Whatman menjadi kertas cakram
Simpan pada cawan petri
Sterilisasikan di dalam autoklaf selama 20 menit pada suhu

121oC dengan tekanan udara 1 atm
Rendam kertas cakram pada uji larutan selama 15 menit
Keringkan menggunakan oven pada suhu 37oC
Gambar 38. Flowchart Perendaman Kertas Cakram
Langkah awal yang dilakukan pada perendaman kertas cakram yaitu
menyiapkan kertas saring Whatman. Selanjutnya potong kertas saring Whatman
menjadi kertas cakram. Kemudian kertas cakram disimpan di dalam cawan petri.
Langkah selanjutnya adalah cawan petri disterilisasi di dalam autoklaf selama 20
menit dengan suhu 121oC pada tekanan udara 1 atm. Selanjutnya rendam kertas
cakram pada uji larutan selama 15 menit. Setelah direndam, keringkan kembali
kertas cakram menggunakan oven dengan suhu 37oC. Pengeringan ini bertujuan
agar tidak ada cairan larutan yang menetes (Zeniusa et al., 2019).
117
3.2.2 Uji Daya Hambat Metode Cakram
Gambar 39. Flowchart Uji Daya Hambat Metode Cakram
Hal yang pertama kali dilakukan pada uji daya hambat metode cakram
ialah menyiapkan cakram kertas saring (paper disc), kemudian letakkan pada
lempeng agar yang telah diinokulasi mikroba uji. Selanjutnya inkubasilah dengan
suhu dan waktu tertentu, sesuaikan dengan kondisi optimum dari mikroba uji
yang digunakan. Pada umumnya, inkubasi menggunakan waktu selama 18-24
jam dengan suhu 37℃. Setelah selesai diinkubasi, amatilah hasilnya. Hasil
pengamatan yang diperoleh dari uji daya hambat metode cakram ialah berupa
keberadaan daerah bening yang tercipta disekitar kertas cakram tersebut yang
menentukan zona hambat pada pertumbuhan bakteri (Prayoga, 2013).
Menurut Darmika dan Somia (2016), suspensi bakteri uji yang sudah
diinokulasikan pada media, dibiarkan terlebih dahulu selama beberapa menit
guna memberikan kesempatan suspensi bakteri tersebut menyebar secara
118
merata pada media agar. Waktu yang digunakan untuk peresapan bakteri
tersebut sebelum diinkubasi ialah selama 5-11 menit guna memberikan hasil
hambatan yang paling optimal karena jika peresapan bakteri uji tidak optimal
dapat mempengaruhi optimalnya hasil pada suatu uji bakteri. Suhu dan waktu
inkubasi yang digunakan yakni 35-37℃ selama 18-24 jam. Kemudian
menghasilkan zona bening yang disebut zona hambat, yang muncul disekeliling
cakram dengan kandungan zat aktifnya yang mampu menghambat pertumbuhan
bakteri atau mikroorganisme.
3.2.3 Pengukuran Zona Hambat Dengan Metode Cakram
Tuang media NA sebanyak 15 mL ke dalam cawan petri dan

biarkan memadat
Masukkan biakan bakteri ke dalam cawan petri
Letakkan kertas cakram secara aseptik pada media NA yang

sudah diinokulasi
Inkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam
Amati zona bening di sekitar kertas cakram dan ukur zona

hambatnya
Gambar 40. Flowchart Pengukuran Zona Hambat Dengan Metode Cakram
Langkah pertama yang harus dilakukan dalam pengukuran zona hambat
dengan metode cakram adalah tuang media NA (Nutrient Agar) sebanyak 15 mL
ke dalam cawan petri dan biarkan memadat. Kemudian masukkan biakan bakteri
ke dalam cawan petri yang sudah berisi media NA. Setelah itu, letakkan kertas
cakram secara aseptik pada media NA yang sudah diinokulasi. Kemudian
119
diinkubasi semua media pada suhu 37oC selama 24 jam. Selanjutnya amati zona
bening yang terbentuk di sekitar kertas cakram. Langkah terakhir adalah ukur
zona hambatnya menggunakan penggaris (Novaryatiin et al., 2018).
Menurut Katrin et al. (2015), penentuan diameter zona hambat dilakukan
dengan cara memasukkan larutan ekstrak yang telah dibuat ke dalam cawan
petri sebanyak 20 µL pada setiap kertas cakram. Hasil pengujian aktivitas
antibakteri ekstrak daun malek (Litsea graciae vidal) pada beberapa fraksi
menunjukkan terjadinya penghambatan terhadap bakteri E. coli dan S. aureus
yang ditandai dengan adanya zona bening di sekitar kertas cakram. Pengamatan
daya hambat ekstrak terhadap kedua bakteri tersebut memperlihatkan adanya
pengaruh konsentrasi ekstrak yang diberikan. Besarnya kemampuan daya
hambat ekstrak terhadap kedua bakteri yang digunakan dapat dilihat dari
besarnya zona bening yang dihasilkan. Hasil uji aktivitas antibakteri yang telah
dilakukan pada ekstrak metanol dan masing-masing fraksi memiliki sifat
spektrum luas. Hal ini dikarenakan ekstrak daun malek dari masing-masing fraksi
dapat menghambat kedua bakteri yang digunakan.
120
BAB IV. PEMBAHASAN
4.1 Data Hasil Praktikum
Berdasarkan data yang telah diberikan pada Praktikum Mikrobiologi
Dasar Materi Zona Hambat Anti-Bakteri, didapatkan hasil pengukuran zona
hambat pada 3 sampel larutan uji sebagai berikut.
Tabel 9. Data Hasil Praktikum
No. Larutan Uji Diameter Diameter Hasil Zona

Kertas Cakram Zona Bening Hambat
(cm)
1. Alkohol 70% 0,06 2,66 2,60
2. Chloramfenikol 0,06 5,44 5,38
3. Amoxilin 0,06 4,76 4,70
Dari data hasil Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Zona Hambat Anti-
Bakteri didapatkan hasil perhitungan zona hambat dari tiap larutan uji, yaitu
alkohol 70%, Chloramfenikol, Amoxilin dengan cara diameter zona bening pada
larutan dikurangi dengan diameter kertas cakram. Pada larutan uji alkohol 70%
menggunakan kertas kertas cakram 0,06 cm dan memiliki diameter zona bening
sebesar 2,66 yang didapat setelah dilakukannya inkubasi, menghasilkan zona
hambat anti-bakteri sebesar 2,60. Pada larutan uji Chloramfenikol menggunakan
kertas kertas cakram 0,06 cm dan memiliki diameter zona bening sebesar 5,44
yang didapatkan setelah dilakukannya inkubasi, menghasilkan zona hambat anti-
bakteri sebesar 5,38. Pada larutan terakhir yaitu Amoxilin menggunakan kertas
kertas cakram 0,06 cm dan memiliki diameter zona bening sebesar 4,76 yang
didapatkan setelah dilakukannya inkubasi, menghasilkan zona hambat anti-
bakteri sebesar 4,70. Berdasarkan data zona hambat yang diperoleh dari ketiga
sampel larutan uji tersebut, larutan uji Chloramfenikol memiliki hasil zona hambat
tertinggi dibandingkan dengan kedua larutan uji lainnya, yaitu sebesar 5,38.
121
Hasil dari zona hambat yang didapatkan dari ketiga larutan uji alkohol
70%, Chloramfenikol, dan Amoxilin secara berturut-turut adalah 2,60; 5,38; dan
4,70. Ketiga larutan uji tersebut memperoleh ukuran zona hambat yang berbeda-
beda. Hal tersebut dikarenakan adanya faktor-faktor yang mempengaruhi ukuran
dari zona penghambatan pada tiap larutan. Faktor-faktor tersebut diantaranya
adalah sensivitas organisme, medium kultur, kondisi inkubasi, dan kecepatan
difusi agar. Kecepatan difusi agar juga dipengaruhi oleh beberapa faktor seperi
konsentrasi mikroorganisme, komposisi media, suhu inkubasi, dan waktu
inkubasi. Dengan demikian, pada tiap larutan memiliki hasil zona hambat yang
berbeda dikarenakan adanya perbedaan pada faktor-faktor tertentu.
122
BAB V. PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang dapatkan pada praktikum Mikrobiologi Dasar materi
Zona Hambat Antibakteri adalah sebagai berikut:
 Antibakteri adalah suatu zat yang dapat menghambat dan membunuh
aktivitas bakteri.
 Metode uji cakram merupakan metode yang digunakan untuk
mengetahui aktivitas antibakteri.
 Zona hambat adalah wilayah sekitar cakram dist yang sudah tidak
ditemukan adanya pertumbuhan koloni bakteri.
5.2 Saran
Saran untuk praktikum Mikrobiologi Dasar materi Zona Hambat
Antibakteri kedepannya sebaiknya pada saat menjelaskan materi agak
diperlambat sedikit. Agar materi yang disampaikan mudah dimengerti dan
dipahami oleh praktikan.
123
DAFTAR PUSTAKA
Cahyaningsih, R. (2014). Pengaruh daya antibakteri jus anggur (Vitis vinifera l.)
dengan konsentrasi 12, 5%, 25%, 50% dan 100% terhadap pertumbuhan
Streptococcus mutans secara In Vitro. Doctoral Dissertation, Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
Darmika, A., & Somia, I. K. A. (2016). Karakteristik penderita diare pada anak
balita di kecamatan tabanan tahun 2013. Jurnal Medika Udayana, 5(10).
Hanizar, E., & Sari, D. N. R. (2018). Aktivitas antibakteri Pleurotus ostreatus

varietas Grey Oyster pada Staphylococcus aureus dan Pseudomonas
aeruginosa. Journal Pustaka Kesehatan, 6(3), 387-392.
Katrin, D., Idiawati, N., & Sitorus, B. (2015). Uji aktivitas antibakteri dari ekstrak
daun malek (Litsea graciae Vidal) terhadap bakteri Stapylococcus aureus
dan Escherichia coli. Jurnal Kimia Khatulistiwa, 4(1), 7-12.
Kurniawan, E., Jekti, D. S. D., & Zulkifli, L. (2019). Aktivitas antibakteri ekstrak
metanol batang bidara laut (Strychnos ligustrina) terhadap bakteri
patogen. Jurnal Biologi Tropis, 19(1), 61-69.
Novaryatiin, S., Handayani, R., & Chairunnisa, R. (2018). Uji daya hambat
ekstrak etanol umbi hati tanah (Angiotepris sp.) terhadap bakteri
Staphylococcus aureus. Jurnal Surya Medika, 3(2), 23-31.
Oktavia, Y., Lestari, S. D., Lestari, S., Herpandi, & Jannah M. (2018). Optimasi
waktu inkubasi produksi protease dan amilase isolate bakteri asal terasi
ikan teri Stolephorus sp. Jurnal Ilmu dan teknologi Kelautan Tropis, 10(3),
719-725.
Prayoga, E. (2013). Perbandingan efek ekstrak daun sirih hijau (Piper betle L.)
dengan metode difusi disk dan sumuran terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.
Zeniusa, P., Ramadhian, M. R., Nasution, S. H., & Karima, N. (2019). Uji daya
hambat ekstrak etanol teh hijau terhadap Escherichia coli secara in vitro.
Majority, 8(2), 136-143.
124
LAMPIRAN
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Zona Hambat Data Hasil Praktikum
Cara Perhitungan Zona Hambat:
1. Alkohol 70%
2. Chloramfenikol
3. Amoxilin
125
126
MATERI 5
PEWARNAAN GRAM

MALANG
2021
127
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Pewarnaan igram imenurut iBulele, iet ial. (2019) iadalah ipewarnaan
iyang idigunakan iuntuk imempermudah imelihat ibakteri isecara imikroskopik,
imemperjelas iukuran idan ibentuk ibakteri, idan imelihat istruktur idalam
ibakteri. iPewarnaan igram imemiliki ikelebihan iyaitu isalah isatu imetode iyang
isederhana idan imurah iuntuk imendiagnosis ibakteri. iSedangkan ikekurangan
idari ipewarnaan igram iadalah ihanya idapat imengetahui iukuran idan ibentuk
ibakteri iserta imelihat istruktur ibakteri imenggunakan izat iwarna. iDalam
ipewarnaan igram iada idua ijenis ibakteri iyaitu ibakteri igram ipositif idan
ibakteri igram inegatif. iPada ipewarnaan igram ipada ibakteri igram ipositif
iberwarna iungu, isedangkan ipewarnaan igram ipada ibakteri igram inegative
iberwarna imerah.
Mikroorganisme imenurut iSyauqi i(2017), imerupakan imakhluk ihidup
iyang iterlalu ikecil iuntuk idilihat isecara ilangsung itanpa imenggunakan
ibantuan ialat. iMikroorganisme iyang idimaksud imeliputi ibakteri, ijamur (ragi
idan ikapang) protozoa, iganggang imikroskopik idan ivirus. iBeberapa
imikroorganisme idianggap imemiliki iefek inegative ibagi ikesehatan imanusia
idan idianggap ihanya imemiliki idampak iburuk iseperti ivirus iHIV i(human
iimmunodeficiency ivirus). iPadahal imikroorganisme iada iyang ibermanfaat
iuntuk imanusia, icotohnya iyaitu imikroba itanah iyang idapat imenjaga
ikeseimbangan itanah.
Pewarnaan igram imerupakan ipewarnaan iyang idigunakan iuntuk
imempermudah imelihat ibakteri isecara imikroskopik, imemperjelas iukuran idan
ibentuk ibakteri, idan imelihat istruktur idalam ibakteri. iBakteri imerupakan isalah
isatu ijenis idari imicroorganism. iMikroorganisme iadalah imakhluk ihidup iyang
128
itidak idapat idilihat ioleh ikasat imata. iMikroorganisme imemiliki idampak ipositif
idan idampak inegatif iuntuk ikelangsungan ihidup imanusia.
Maksud idari ipraktikum iMikrobiologi iDasar imateri iPewarnaan iGram
iadalah iagar ipraktikan imampu imemahami icara ipewarnaan igram.
Tujuan idari ipraktikum iMikrobiologi iDasar imateri iPewarnaan iGram
iadalah iagar idapat imelakukan ipewarnaan igram iserta idapat imembedakan
iantara ibakteri igram ipositif idan ibakteri igram inegatif.
Waktu pelaksanaan praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Pewarnaan
Gram dilaksanakan pada hari Kamis tanggal 22 April 2021 pada pukul 4.30-
selesai dirumah masing-masing praktikan secara daring melalui aplikasi Google
Meet.
129
2.1 Escherichia Coli
Escherichia Coli dan Staphylococcus aureus menurut Hamidah, et al.
(2019) dikategorikan sebagai bakteri pathogen yang dapat mengkontaminasi
produk perikanan yang ditemukan dalam sanitasi pengolahan produk yang
kurang baik. Bakteri pathogen adalah bakteri yang merugikan dan dapat
menimbulkan penyakit pada manusia. Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri
yang dapat menjadi penyebab infeksi. Bakteri Escherichia Coli mudah menyebar
melalui pencemaran air dan kontak langsung dengan bakteri. Escherichia coli
menyebabkan gangguan pencernaan serta mengganggu sistem kerja dari organ
lambung. Bakteri Escherichia coli menurut Suardana et al. (2016)
dikelompokkan menjadi beberapa serotype berdasarkan antigen permukaan
utamanya yaitu antigen kapsul (K), antigen somatic (O) dan antigen flagella (H).
Karakteristik bakteri Escherichia Coli menurut Ijong dan Dien (2011) yaitu dapat
memfermentasi laktosa yang menghasilkan asam dan gas, oksidase negatif,
indol dan methyl red positif. Ciri-ciri lain yang membedakannya dengan anggota
famili Enterobactericeae yang lain.
Bakteri Escherichia Coli menurut Tivani, et al. (2019), merupakan bakteri
Gram negatif. Pada bakteri Echerichia Coli jika diuji dengan zat pewarna
safranin akan menghasilkan warna merah. Perubahan warna ini disebabkan
karena struktur kimiawi pada dinding sel yang mengandung satu atau beberapa
lapis peptidoglikan dan membran luar (outer membrane). Peptidoglikan terikat
pada lipoprotein yang berada pada membran luar. Terdapat daerah periplasma
yang terletak diantara membran plasma dan membran luar. Periplasma sendiri
berisi enzim degradasi konsentrasi tinggi serta protein-protein transpor. Dinding
sel bakteri Gram negatif tidak megandung asam teikoat dan karena hanya
130
mengandung sejumlah kecil peptidoglikan, maka dinding sel bakeri Gram negatif
lebih rentan terhadap kerusakan mekanis. Inilah yang menyebabkan ketika
diberi alkohol pada pengecatan Gram, dinding sel bakteri Gram negatif
kehilangan warna, sehingga ketika diberi pewarna safranin akan tampak seperti
warna cat terakhir tersebut.
2.2 Bacillus Sp.
Bacillus Sp. menurut Djaenuddin dan Muis (2015), bakteri gram positif
yang dapat membentuk endospora. Hasil uji pewarnaan gram pada Bacillus sp
menunjukkan bahwa bakteri ini merupakan bakteri gram positif. Bakteri ini akan
menghasilkan warna ungu saat ditetesi dengan larutan KOH. Warna ungu yang
muncul saat pengujian dapat disebabkan karenakan dinding sel Bacillus sp
mampu mempertahankan zat warna kristal violet . Sel Bacillus spp. berbentuk
batang, berukuran 0,3-2,2 x 1,2-7,0 μm dan mempunyai flagel peritrikus,
memproduksi spora bentuk silinder yang tidak membengkak, bersifat aerob atau
anaerob fakultatif serta heterotrof, katalase positif, sel gerak yang membentuk
endospora elips lebih tahan daripada sel vegetatif terhadap panas, kering dan
faktor lingkungan lain yang merusak. Permukaan sel bakteri ditumbuhi merata
flagellum pristikus. Bacillus Sp. merupakan kelompok fisiologi yang berbeda dari
bakteri non-patogen, yang relatif mudah dimanipulasi secara genetika dan
sederhana dibiakkan, yang memperkuat kesesuaiannya untuk kepentingan
industry.
Berdasarkan hasil pewarnaan Gram, dan uji biokimia, isolat ENG-4
menurut Wibowo, et al. (2020), bahwa bakteri dengan genus Bacillus memiliki
ciri-ciri koloni berwarna kuning, bersifat Gram positif, motil, katalase positif,
berbentuk basil, dan memiliki formasi menyerupai rantai. Beberapa bakteri dari
genus ini diantaranya, Bacillus cereus dan Bacillus subtilis. Bacillus cereus
131
memiliki formasi bakteri yang menyatu seperti rantai, sedangkan Bacillus subtilis
memiliki formasi bakteri terpisah-pisah. Bakteri Bacillus sp. ini bersifat patogen
pada susu dapat menyebabkan keracunan makanan melalui mekanisme
pengeluaran enterotoksin yang dibentuk pada sel-sel di kolon yang dapat
menyebabkan pengeluaran sekresi cairan secara berlebihan ke dalam rongga
usus. Gejala keracunan makanan berupa mual, muntah, sakit perut dan disertai
diare.
2.3 Pewarnaan Gram
Pewarnaan igram imenurut iWibowo, iet ial. i(2020), ididefinisikan
isebagai imetode iyang idilakukan iuntuk imembedakan idua ikelompok ibakteri,
iyaitu ibakteri igram ipositif idan ibakteri igram inegatif. iTujuan idari ipewarnaan
igram iadalah iuntuk imempermudah imelihat ibakteri isecara imikroskopik,
imemperjelas iukuran idan ibentuk ibakteri, imelihat istruktur idalam ibakteri
iseperti idinding isel idan ivakuola, idan imenghasilkan isifat-sifat ifisik iserta
ikimia ikhas idari ibakteri idengan izat iwarna. iDalam ipewarnaan, ibakteri igram
ipositif iberwarna iungu isedangkan ibakteri igram inegatif iberwarna imerah.
iMekanisme ipewarnaan igram iberdasarkan ipada istruktur idan ikomposisi
idinding isel ibakteri. iBakteri igram inegatif imemiliki idinding isel iyang itipis idan
ikomposisi ilipid iyang itinggi iyaitu i11-22%. iSedangkan ibakteri igram ipositif
imemiliki idinding isel iyang itebal idan ihanya imemiliki ikandungan ilipid isebesar
i1-4%.
Mekanisme ipewarnaan igram imenurut iVirgianti idan iLuciana i(2017),
imemiliki iperbedan idimana ipada ibakteri igram ipositif idan igram inegatif iketika
iditambahkan idengan ilarutan ipeluntur. iPada ibakteri igram ipositif iwarna iakan
idipertahankan, itetapi ipada igram inegatif iakan ihilang. iOleh ikarena iitu,
132
idiperlukan ipewarna ipenutup iyang ikontras iuntuk imewarnai ibakteri igram
inegatif, iyaitu idengan ipewarna iyang iberwarna imerah. iPewarna ipenutup
iyang isering idigunakan ipada ipewarnaan igram iadalah ibasic ifuchsin iatau
isafranin. iPrinsip idasar ipewarnaan igram ididasarkan ipada iperbedaan istruktur
idinding isel ibakteri, isehingga imenyebabkan iperbedaan ireaksi idengan
ipermeabilitas izat iwarna idan ipenambahan ilarutan ipencuci. iTerdapat
ikelebihan idan ikekurangan ipada imetode ipewarnaan igram, ikelebihannya
iialah ipewarnaan igram imerupakan isalah isatu imetode ipaling isederhana idan
imurah iuntuk idiagnosis icepat iinfeksi ibakteri. iMetode iini ijauh ilebih icepat
idibandingkan idengan ikultur ibakteri, idan isebagai ipedoman iawal iuntuk
imemutuskan iterapi iantibiotik isebelum itersedia ibukti idefinitif ibakteri
ipenyebab iinfeksi isecara ispesifik. iKekurangan idari imetode iini iyaitu ihanya
idapat imengetahui iukuran idan ibentuk ibakteri iserta imelihat istruktur idalam
ibakteri idengan izat iwarna isaja. iKondisi ipewarnaan igram idan imorfologi
ibakteri ikadang-kadang iberubah ikarena iterapi ianti-mikroba.
133
BAB III. PEMBAHASAN
3.1 Skema Kerja Pewarnaan Gram
Kaca Objek
Dibersihkan dengan alkohol 70%
Koloni bakteri dalam cawan petri
Bakteri diambil dan diletakkan pada kaca obek
Diberikan Na-Fis Tidak diberikan Na-Fis
Diifiksasi diatas bunsen
Ditetesi dengan kristal ungu dan didiamkan selama 1 menit
Dibilas dengan aquades
Ditetesi iodium, didiamkan selama 2 menit
Dicuci dengan alkohol 70%
Ditetesi safranin dan diamkan selama menit
Diamati pada mikroskop
Gambar 42. Skema kerja pewarnaan gram
134
5
Sesuai dengan yang dijelaskan pada skema pewarnaan Gram di atas,
langkah pertama yang harus dilakukan untuk melakukan metode pewarnaan
gram adalah mempersiapkan kaca objek. Lalu, kaca objek dibersihkan dengan
alkohol 70%. Selanjutnya, mempersiapkan koloni bakteri yang berada dalam
cawan petri. Langkah berikutnya, bakteri diambil dan diletakkan pada kaca objek
serta diberikan dua perlakuan, yaitu perlakuan dengan Na-Fis dan perlakuan
yang tidak diberikan Na-Fis. Lalu, dilakukan fiksasi diatas bunsen. Apabila telah
dilakukan fiksasi maka selanjutnya ditetesi dengan Kristal ungu dan didiamkan
selama 1 menit. Langkah berikutnya, bilas dengan aquades dan tetesi dengan
iodium serta didiamkan selama 2 menit. Lalu, dibilas dengan aquades dan dicuci
dengan alkohol 70%. Selanjutnya, bilas kembali dengan aquades, lalu ditetesi
dengan safranin serta didiamkan selama ½ menit. Apabila sudah selesai
didiamkan maka bilas kembali dengan aquades. Langkah terakhir adalah
mengamati objek tersebut dengan mikroskop untuk melihat pewarnaannya.
3.2 Mekanisme Penyerapan Warna
Identifikasi bakteri menurut Saputri, et al. (2016), diawali pewarnaan
Gram dengan tujuan untuk mengetahui bentuk bakteri (basil, kokus atau spiril),
penentuan bakteri jenis Gram positif atau Gram negatif pada saat pengamatan di
mikroskop. Apabila warna bakteri terlihat merah, artinya bakteri bersifat gram
negatif karena sel bakteri tidak menyerap cat utama (Gram’s iodin) dengan kuat
sehingga terbilas dengan alkohol dan terwarnai dengan cat pelawan, dan jika
warna bakteri ungu atau biru artinya bakteri bersifat gram positif.
Bakteri gram negatif memiliki kandungan lipid yang tinggi dan dinding sel
yang tipis sehingga ketika mendapat perlakuan alkohol pada proses pewarnaan
gram menyebabkan terekstraksinya lipid, sehingga memperbesar daya rembes
(permeabilitas) dinding sel. Hal ini menyebabkan warna Ungu Kristal-Yodium
135
(UK-Y) terekstraksi sehingga organisme gram negatif kehilangan warna tersebut.
Sedangkan warna ungu pada bakteri gram positif setelah mendapat perlakuan
pewarnaan gram dikarenakan oleh rendahnya kandungan lipid pada dinding sel
sehingga lipid menjadi terdehidrasi selama perlakuan alkohol. Ukuran pori-pori
mengecil, permeabilitasnya berkurang dan kompleks Ungu Kristal-Yodium (UK-
Y) tidak dapat terekstraksi.
3.2.1 Bakteri Gram Positif
Pewarnaan gram menurut Irfan (2014), bertujuan untuk membedakan
bakteri menjadi dua kelompok yakni, bakteri Gram positif dan bakteri Gram
negatif. Mekanisme pewarnaan gram berdasarkan pada struktur dan komposisi
dinding sel bakteri. Pada bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan
hanya memiliki kandungan lipid sebesar 1-4%. Warna ungu pada bakteri gram
positif merupakan warna setelah bakteri tersebut mendapat perlakuan
pewarnaan gram dikarenakan rendahnya kandungan lipid pada dinding sel
bakteri gram positif sehingga lipid menjadi terdehidrasi selama perlakuan alkohol.
Pada bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan membran sel
selapis dan menahan iodine. Bakteri gram positif mempunyai protein yang
banyak dibandingkan dengan bakteri gram negatif.
Dapat dikatakan bahwa bakteri Gram Positif mampu mempertahankan zat
warna utama dalam pewarnaan Gram, yaitu Gentian Violet (ungu kristal iodium),
sehingga nampak berwarna ungu saat pengamatan dikarenakan dinding sel
kelompok bakteri ini tersusun oleh sebagian besar Peptidoglikan, yang mampu
mengikat zat warna dan tidak rusak saat dicuci dengan alkohol. Bakteri Gram
positif memiliki dinding sel relatif tebal, terdiri dari berlapis-lapis polymer
peptidoglikan (murein). Tebalnya dinding sel menahan lolosnya komplek crystal
violet-iodine ketika dicuci dengan alkohol atau aseton. Beberapa contoh dari
136
bakteri gram positif adalah Clostridium perfringens, Staphylococcus aureas, dan
Bacillus subtilis.
3.2.2 Bakteri Gram Negatif
Setelah dilakukan pengamatan dari hasil pewarnaan gram menurut
Hasanah, et al. (2018), dihasilkan isolat yang berwarna merah yang merupakan
bakteri gram negatif dengan bentuk sel basil atau batang. Sel-sel yang dapat
melepaskan kristal violet dan mengikat safranin sehingga berwarna merah-merah
muda disebut bakteri gram negatif. Kandungan lipid pada dinding sel Gram
negatif lebih tinggi (11-22%) daripada pada dinding sel bakteri Gram positif dan
peptidoglikan terdapat pada lapisan kaku. Bakteri Gram negatif mengandung
lebih sedikit peptidoglikan (10-20%), namun memiliki struktur membran yang
terdiri dari protein, fosfolipida, dan lipopolisakarida. Bakteri Gram negatif
menunjukkan hasil warna merah, disebabkan karena memiliki komposisi dinding
sel yang sebagian besar tersusun dari lapisan lipid yang mudah rusak saat dicuci
dengan alkohol, sehingga pada saat pewarnaan kurang dapat mempertahankan
zat warna gentian violet dan saat diwarnai safranin akan berwarna merah.
Sudah dijelaskan tadi bahwa bakteri Gram negatif memiliki komposisi
dinding sel yang sebagian besar tersusun dari lapisan lipid dan dinding sel yang
tipis. Hal tersebut mengakibatkan ketika mendapat perlakuan alkohol pada
proses pewarnaan gram menyebabkan terekstraksinya lipid sehingga
memperbesar daya rembes (permeabilitas) dinding sel. Peristiwa tersebut
menyebabkan warna Ungu Kristal-Yodium (UK-Y) terekstraksi sehingga
organisme gram negatif kehilangan warna tersebut. Akibatnya kelompok bakteri
ini memberikan kenampakan warna merah (warna dari zat warna ke dua:
safranin atau air fuchsin) di akhir kegiatan pewarnaan Gram. Beberapa contoh
137
bakteri gram negatif misalnya adalah Streptococcus mutans, Staphylococcus
aureus, dan Eschericia coli.
138
BAB IV. PENUTUP
4.1 Kesimpulan
Kesimpulan yang didapatkan pada laporan praktikum materi Pewarnaan
Gram adalah sebagai berikut:
 Pewarnaan gram merupakan pewarnaan yang digunakan untuk
mengelompokan bakteri gram positif dan gram negatif.
 Bakteri gram positif akan mempertahankan zat warna crystal violet dan
akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop.
 Bakteri gram negatif akan kehilangan zat warna crystal violet setelah
dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna air fucsin atau
safranin akan tampak berwarna merah.
 Perbedaan zat warna antara gram positif dengan gram negatif
disebabkan oleh perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya.
 Kelebihan dari metode pewarnaan Gram yaitu metode ini merupakan
salah satu metode paling sederhana dan murah untuk diagnosis cepat
infeksi bakteri. Metode ini jauh lebih cepat dibandingkan dengan kultur
bakteri.
 Kekurangan dari metode ini yaitu hanya dapat mengetahui ukuran dan
bentuk bakteri serta melihat struktur dalam bakteri dengan zat warna saja.
4.2 Saran
Saran untuk praktikum materi Pewarnaan Gram kedepannya agar
menjelaskan praktikumnya dengan melakukan praktek secara langsung agar
pembahasan dan langkah-langkah yang diberikan lebih mudah dipahami dan
dimengerti.
139
DAFTAR PUSTAKA
Bulele, T., Rares, F. E., dan Porotu'o, J. (2019). Identifikasi Bakteri dengan
Pewarnaan Gram pada Penderita Infeksi Mata Luar di Rumah Sakit
Mata Kota Manado. eBiomedik, 7(1), 30-36.
Djaenuddin, N., dan Muis, A. (2015). Karakteristik bakteri antagonis Bacillus

subtilis dan potensinya sebagai agens pengendali hayati penyakit
tanaman. In Prosiding Seminar Nasional Serealia (Vol. 1, pp. 489-494).
Hamidah, M. N., Rianingsih, L., dan Romadhon, R. (2019). Aktivitas antibakteri

isolat bakteri asam laktat dari peda dengan jenis ikan berbeda terhadap
e. coli dan s. aureus. Jurnal Ilmu dan Teknologi Perikanan, 1(2), 11-21.
Hasanah, I., Ihsan, Y. N., Mulyani, Y., dan Riyantini, I. (2018). Degradasi
(benzena) dengan penambahan nitrat dan bakteri dari sedimen pesisir
karangsong kabupaten indramayu. Jurnal Perikanan Kelautan, 9(1), 88-
94.
Ijong, F. G.,dan Dien, H. A. (2011). Karakteristik bakteri pereduksi merkuri
(Escherichia Coli) diisolasi dari perairan pantai teluk manado. Jurnal
Perikanan dan Kelautan Tropis, 7(3), 103-108.
Irfan, M. (2014). Isolasi dan enumerasi bakteri tanah gambut di perkebunan
kelapa sawit pt. Tambang hijau kecamatan tambang kabupaten
kampar. Jurnal Agroteknologi, 5(1), 1-8.
Saputri, R. A., Widyorini, N., dan Purnomo, P. W. (2016). Identifikasi dan
kelimpahan bakteri pada jenis karang acropora sp. di reef flat terumbu
karang pulau panjang jepara identification and abundance of bacteria in
acropora sp. at coral reef flat panjang island jepara. Saintek Perikanan:
Indonesian Journal of Fisheries Science and Technology, 12(1), 35-39.
Suardana, I. W., Putri, P. J. R. A., & Besung, I. N. K. (2016). Isolasi dan
identifikasi Escherichia coli O157: H7 pada feses sapi di Kecamatan
Petang, Kabupaten Badung-Bali. Buletin Veteriner Udayana, 8(1)30-35.
Syauqi, A. (2017). Mikrobiologi Lingkungan Peranan Mikroorganisme dan
Kehidupan. Penerbit Andi.
Tivani, I., Amananti, W., & Sunardi, A. (2019). Uji identifikasi bakteri esherichia
coli pada jamu gendong kunyit asem di kabupaten tegal. Parapemikir:
Jurnal Ilmiah Farmasi, 8(1), 31-35.
Virgianti, D. P. (2017). Penggunaan ekstrak kombinasi angkak dan daun jati
sebagai pewarna penutup pada pewarnaan gram. Jurnal Kesehatan
Bakti Tunas Husada: Jurnal Ilmu-ilmu Keperawatan, Analis Kesehatan
dan Farmasi, 17(1), 66-72.
140
Wibowo, R. H., Sipriyadi, S., Mubarik, N. R., dan Rusmana, I. (2020). Soil
chitinolytic bacteria from jambi province to produce antifungal of plant
pathogens. Jurnal Mangifera Edu, 5(1), 26-37.
141
LAMPIRAN
142
MATERI 6
IDENTIFIKASI HIFA

MALANG
2021
143
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Hifa termasuk bagian terpenting dari fungi, karena hifa berfungsi sebagai
penyerap nutrient dari lingkungan serta menjadi pembentuk sebuah struktur
untuk reproduksi. Hifa sendiri merupakan struktur fungus yang memiliki bentuk
tabung dan menyerupai seuntai benang panjang yang terbentuk dari
pertumbuhan spora atau konidia. Hifa dibedakan menjadi dua macam menurut
fungsinya, yakni hifa fertil dan hifa vegetatif. Hifa fertil memiliki fungsi untuk
membentuk sel reproduksi atau spora dan hifa vegetatif berfungsi untuk
penyerapan makanan dari substrat. Hifa dibedakan lagi menjadi dua macam
berdasarkan bentuknya, yaitu hifa tidak bersepta atau tidak bersekat dan hifa
bersepta atau bersekat. Pada hifa tidak bersepta, ia termasuk ciri fungi pada
tingkat rendah. Sedangkan hifa bersepta merupakan ciri dari fungi tingkat tinggi
(Hapsari, 2014).
Fungi termasuk organisme eukariota yang tergolong ke dalam kelompok
cendawan sejati. Fungi merupakan organisme heterotrof tetapi ia tidak seperti
heterotrof lain yang menelan makanan kemudian mencernanya sebelum diserap.
Hal tersebut disebabkan oleh bahan organik yang berada di sekeliling tempat
tumbuhnya yang diubah menjadi molekul sederhana dan langsung diserap oleh
hifa. Berdasarkan penampakkannya, fungi dikelompokkan ke dalam jamur
benang dengan nama lain kapang (moulds atau mould), khamir (yeast), dan
cendawan (mushrooms). Jamur benang atau kapang dan khamir menurut
analisis molekuler ialah organisme yang secara filogenetik memiliki sifat diverse
(Kirana, 2014).
Jamur atau fungi merupakan sel eukariotik yang tidak mempunyai klorofil,
mengalami pertumbuhan sebagai hifa, memiliki dinding sel yang mengandung
144
zat kitin, bersifat heterotroph, menyerap nutrient melalui dinding selnya, mampu
mengekskresikan enzim ekstraselular ke lingkungan dengan perantara spora,
dan bereproduksi secara seksual dan aseksual. Tubuh jamur tersusun atas
komponen-komponen dasar yakni hifa. Hifa pada jamur ada yang bersifat
parasite disebabkan karena mengalami modifikasi atau perubahan menjadi
organ penyerap makanan dari substrat yang dapat menembus jaringan substrat.
Maksud dari praktikum mikrobiologi dasar tentang materi identifikasi hifa
adalah agar praktikan mampu memahami bagaimana cara mengidentifikasi hifa
secara baik dan benar.
Tujuan dari praktikum mikrobiologi dasar tentang materi identifikasi hifa
adalah melakukan pengidentifikasian hifa yang ditanam pada media silde culture
secara langsung.
Waktu pelaksanaan Praktikum MIkrobiologi Dasar Materi Identifikasi HIfa
adalah hari Kamis pada tanggal 22 April 2021 di rumah masing-masing praktikan
pada pukul 4.38 WIB secara daring melalui aplikasi google meet.
145
2.1 Fungi
Menurut Bahaudin (2018), fungi merupakan makhluk hidup yang tidak
memiliki klorofil dan berkembang biak menggunakan spora. Fungi memperoleh
energi melalui oksidasi senyawa karbon. Dalam proses sintesis tersebut, fungi
membutuhkan metabolism sebagai pertumbuhannya. Tak hanya itu, fungi juga
membutuhkan vitamin, nitrogen, dan CO2 untuk proses perkembangan hifa dan
sebagai sumber nutrisi.
Menurut Anif (2017), berdasarkan ukurannya, fungi dibagi menjadi dua
kelompok, yaitu fungi makroskopis dan fungi mikroskopis. Fungi makroskopis
terdiri dari cendawan atau jamur dan makrofungi. Fungi mikroskopis terdiri dari
yeast dan kapang. Kelompok fungi yang tergolong ke dalam makroskopis adalah
jamur yang bisa dilihat dengan mata telanjang. Sedangkan kelompok fungi yang
tergolong mikroskopis adalah fungi yang tidak bisa dilihat secara langsung
dengan mata telanjang. Fungi mikroskopis hanya bisa dilihat menggunakan
bantuan mikroskop.
2.2 Kapang
Menurut Hermana et al. (2018), kapang merupakan mikroorganisme
eukariotik, tidak berklorofil, memiliki hifa, dinding sel, terdiri dari kitin atau
selulosa, serta berkembang biak secara seksual dan aseksual. Umumnya
kapang hidup secara anaerob, tumbuh optimal pada kisaran suhu 25-30OC dan
dapat tumbuh pada kisaran pH 2,0-8,5 meskipun pada kenyataannya lebih suka
pada kondisi asam. Spora kapang berukuran kecil dan ringan sehingga dapat
tertembus keudara dan menyebar kemana-mana. Identifikasi dapat dilakukan
berdasarkan karakteristik morfologi makroskopis sepert warna permukaan koloni,
146
warna sebalik kolini, tekstur, diameter pertumbuhan koloni, dan bentuk konidia.
kapang Identifikasi beberapa spesies kapang perusak makanan (food spoilage)
seperti Aspergilus dan Fusarium.
Menurut Nurhasanah dan Sundari (2018), kerusakan yang terjadi pada
bahan makanan biasanya diakibatkan oleh proses biodegradasi oleh jamur atau
kapang. Salah satu indikator terjadinya proses biodegradasi adalah keberadaan
mikroorganisme (bakteri, kapang, dan kamir) pada bahan makanan. Kapang
kontaminan merupakan salah satu kelompok mikroorganisme yang dapat
menyebabkan penurunan mutu bahan makanan dengan menyebabkan
kerusakan/pembusukan. Kapang kontaminan dapat tumbuh pada bahan
makanan yang aktif air atau kadar air rendah. Pada produk ikan pindang, ikan
asin dan ikan asap paling sering ditumbuhi kapang Aspergillus sp. dan
Penicillium sp. Kapang kontaminan yang dominan adalah A. flavus dan
Polypaecilum sp.
2.3 Khamir
Indonesia memiliki keragaman indigenus mikroba lokal yang sangat
beraneka ragam. Salah satunya mikroba tersebut adalah khamir. Khamir
merupakan jamur dengan eukariotik uniseluler dan dapat diklasififkasikan
berdasarkan karakteristik sel, askospora, dan koloni. Khamir dapat dibedakan
menjadi dua kelompok berdasarkan sifat metabolismenya yaitu fermentatif dan
oksidatif. Khamir yang bersifat fermentatif dapat melakukan fermentasi ethanol
dan gas. Penggunaan khamir pada produk pangan telah banyak dilakukan dan
salah satunya adalah sebagai agen fermentasi (Pratama et al., 2017).
Khamir adalah jamur bersel tunggal yang melakukan perkembangbiakan
dengan tunas atau membelah. Berdasarkan jenis perkembangbiakan khamir
dapat dibagi menjadi tiga golongan besar yaitu Ascomycetous, Basidiomycetous,
147
dan khamir imperfect. Khamir Ascomycetous melakukan perkembangbiakan
seksual dengan membentuk askospora. Khamir Basidiomycetous dengan
membentuk baisidiospora, sedangkan khamir imperfect tidak melakukan
perkembangbiakan seksual selama siklus hidupnya. Khamir banyak ditemukan di
alam dan sudah berhasil diisolasi dari berbagai macam substrat seperti
makanan, minuman, bunga, serangga, dan tanah (Kanti dan Latupapua, 2018).
2.4 Hifa
Miselium merupakan kumpulan dari beberapa filamen yang disebut hifa.
Hifa adalah beberapa jenis miselium yang terorganisasi kedalam kelompok
benang-benang yang dapat dilihat dengan mata telanjang. Hifa yang berbentuk
filamen tabung dapat tumbuh di segala arah pada substratnya. Bagian hifa yang
berfungsi untuk mendapatkan nutrisi disebut hifa vegetatif. Sedangkan bagian
jamur yang berfungsi sebagai alat reproduksi disebut hifa reproduksi atau hifa
udara (aerual hypha) (Ahmad, 2018).
Menurut Tasnim et al. (2013), morfologi hifa dibagi menjadi 3 yaitu
aseptat (coenoctytic hypha), septa hifa (hifa bersekat), dan septa. Aseptat
(coenoctytic hypha) yaitu hifa yang tidak memiliki dinding sekat (septa). Septa
hifa (hifa bersekat) dengan sel-sel unimukleat. Septa membagi hifa menjadi
ruang-ruang yang berisi satu inti dan pada tiap sekat terdapat pori-pori yang
memungkinkan perpindahan inti dari sitoplasma dari satu ruang ke ruang lainnya.
Sedangkan septa berisi lebih dari 1 inti (multinukleat).
2.5 Slide Culture
Menurut Sundari (2012), slide culture (kultur slide) merupakan teknik yang
sangat penting dalam identifikasi fungi. Slide culture adalah teknik
menumbuhkan fungi pada slide dengan perlakuan tertentu. Perlakuan yang
148
dimaksut diantaranya adalah fungi ditumbuhkan pada sepotong agar dan
diletakkan diatas kaca benda. Peletakan tusuk gigi atau batang U (U-shaped
glass rod) agar kaca benda tidak bersentuhan langsung dengan kertas tisu dan
pemberian aquades pada kertas tisu bertujuan untuk menjaga kelembaban udara
di dalam cawan petri slide culture. Tujuan slide culture adalah untuk melihat
morfologi mikroskopis fungi yang terdiri dari bentuk hifa, sporangium, konidia,
dan sebagainya.
Menurut Valencia dan Meitiniarti (2017), karakteristik isolat jamur
dilakukan secara makroskopik. Pengamatan mikroskopik dilakukan pada isolat
jamur yang ditumbuhkan dengan menggunakan teknik silde culture. Metode slide
culture dilakukan dengan cara media diteteskan secukupnya pada gelas objek
kemudian jamur dititikkan pada medium. Kemudian gelas objek ditutup dengan
gelas penutup dan diletakkan di cawan petri yang diberi kapas dan diberi batang
penahan. Kapas ditetesi sedikit aquades steril dan diletakkan di bagian kiri kanan
gelas objek dalam cawan petri untuk menjaga kelembaban didalam cawan petri.
Cawan petri dibungkus dan diinkubasi selama 3-5 hari.
149
BAB III. PEMBAHASAN
3.1 Pembuatan Slide Culture
Ambil media PDA yang telah disiapkan
Potong media PDA dengan ukuran 5cm x 5cm
Ambil potongan PDA dan letakkan di obyek glass yang telah disterilkan
Tutup dengan cover glass yang telah di steril
Tusukkan sampel jamur pada potongan PDA
Taruh kedalam cawan petri yang telah disterilkan
Beri kapas dan aquades steril
Inkubasi selama 4 ─ 7 hari
Gambar 44. Flowchart Pembuatan Slide Culture
Tahapan pertama yang perlu dilakukan untuk membuat Slide Culture
adalah mengambil media PDA (Potato Dextrose Agar) yang telah disiapkan
sebelumnya. Selanjutnya, potong media PDA (Potato Dextrose Agar) dengan
ukuran sebesar 5 cm x 5 cm seperti persegi. Kemudian, potongan PDA (Potato
Dextrose Agar) tersebut diambil dan diletakkan pada obyek glass yang telah
disterilkan. Tutup dengan cover glass yang juga telah disterilkan. Tusukkan
sampel jamur pada potongan PDA (Potato Dextrose Agar), kemudian taruh ke
dalam cawan petri yang telah disterilkan. Berikan kapas dan aquades steril,
kemudian inkubasi selama 3-7 hari.
150
3.2 Identifikasi Hifa
Ambil sampel yang telah diinkubasi selama 3-7 hari
Ambil cover
Taruh didalam objek glass yang telah disterilkan
Tambahkan lactophenol blue
Amati di bawah mikroskop
Gambar 45. Flowchart Identifikasi Hifa
Setelah dilakukannya pembuatan slide culture, tahapan selanjutnya
adalah dilakukan identifikasi hifa. Langkah pertama yaitu mengambil sampel slide
culture yang telah diinkubasi selama 3-7 hari. Kemudian, ambil cover dan
letakkan di dalam obyek glass yang telah disterilisasikan. Langkah selanjutnya
yaitu tambahkan lactophenol blue ke dalam objek glass. Kemudian, amatilah
sampel tersebut meggunakan bantuan mikroskop.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Shofiana et al. (2015), isolasi
sampel jamur endofit dilakukan dengan menggunakan media PDA (Potato
Dextrose Agar) sama seperti media yang digunakan dalam Praktikum
Mikrobiologi Dasar, tetapi waktu dilakukannya inkubasi pada sampel berbeda.
Sampel jamur endofit pada media PDA (Potato Dextrose Agar) dilakukan
inkubasi selama 5-7 hari pada suhu 25-30℃, sedangkan pada praktikum
dilakukan inkubasi sampel selama 3-7 hari. Biakan murni yang dihasilkan yaitu R.
microporus. Pengamatan dilakukan setelah biakan berumur 7 hari dan
menunjukkan ciri-ciri diantara koloni berwarna putih dan berbentuk seperti kapas,
pertumbuhannya tidak menunjukkan lingkaran konsentris, miselium lembut, dan
151
memiliki warna dasar putih. Biakan R. microcopus memenuhi cawan petri dalam
waktu 4 hari pada media PDA (Potato Dextrose Agar) dan memiliki diameter 9
cm. Hasil dari pengamatan tersebut menunjukkan hifa memiliki banyak sekat
tebal, hialin, basidiospora bulat dan hialin dengan memiliki garis tengan rata-rata
3,28 µm.
152
BAB IV. PENUTUP
4.1 Kesimpulan
Berdasarkan Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Identifikasi Hifa yang
telah dilaksanakan, didapatkan kesimpulan sebagai berikut:
 Hifa adalah bagian penting dari fungi yang berfungsi sebagai
penyerap nutrient dari lingkungan, serta menjadi pembentuk sebuah
struktur untuk reproduksi.
 Fungi merupakan organisme eukariotik yang tergolong ke dalam
kelompok cendawan senjadi, serta bersifat heterotrof.
 Fungi terbagi menjadi beberapa kelompok berdasarkan
penampakkannya, diantaranya kapang (mould), khamir (yeast), dan
cendawan (mushrooms).
 Untuk mengindentifikasi hifa dari kelompok fungi perlu menggunakan
media PDA (Potato Dextroxse Agar) karena mengandung glukosa
yang merupakan media pertumbuhan fungi.
4.2 Saran
Saran untuk jalan praktikum kedepannya semoga dapat dilaksanakan
secara offline agar praktikan dapat lebih memahami dan mempraktikannya
langsung di laboratorium. Selain itu, diharapkan untuk praktikum berikutnya
dapat berjalan lebih efisien dan tidak bertabrakan dengan praktikum lainnya
karena dapat mengurangi pemahaman yang diterima oleh praktikan.
153
DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, R. Z. (2018). Cemaran cendawan miselia steril dan pengendaliannya.

Jurnal Rekayasa Lingkungan, 5(3), 193-197.
Anif, S. (2017). Inventarisasi fungi makroskopis di kawasan hutan gunung

giribangun kelurahan girilayu kecamatan matesih kabupaten karanganyar.
Doctoral Dissertation Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Bahaudin, M. (2018). Keragaman mushroom yang berpotensi sebagai bahan

pangan di taman hutan raya raden soerjo. Doctoral Dissertation,
University of Muhammadiyah Malang.
Hapsari, A. (2014). Isolasi dan identifikasi fungi pada ikan maskoki (Carassius
auratus) di bursa ikan hias gunung sari surabaya, jawa timur. Doctoral
Dissertation, Universitas Airlangga.
Hermana, I., Kusmarwati, A., dan Yennie, Y. (2018). Isolasi dan Identifikasi
Kapang dari Ikan Pindang. JPB Kelautan dan Perikanan, 13(1), 81-92.
Kanti, A., dan Latupapua, H. J. D. (2018). Identifikasi keragaman khamir yang

diisolasi dari tanah kebun biologi wamena kabupaten jayawijaya, propinsi
papua. Jurnal Biologi Indonesia, 3(2), 150-160.
Kirana, V. N. (2014). Hubungan variasi perbandingan konsentrasi molase:

amonium nitrat terhadap pertumbuhan dan kandungan minyak Aspergillus
terreus dan Penicillium pinophilum.
Nurhasahah, & Sundari. (2018).Kapang kontaminasi pada ikan toreh

(Hyporhamphus affinis) yang dijual di pasar tradisional kota ternate
maluku utara. Biogenesis, 6(2), 75-79.
Pratama, A., Fitriani, A., Chairunnisa, H., dan Tyas, T. (2017). Isolasi dan
screnning yeast isolat lokal dari dendeng sapi dan ayam yang memiliki
potensi fermentasi glukosa)(isolation dan screening of local yeast from
beef and chicken jerkey as glucose fermentation potential. Jurnal Ilmu
Ternak Universitas Padjadjaran, 17(1), 10-13.
Shofiana, R. H., Sulistyowati, L., & Muhibuddin, A. (2015). Eksplorasi jamur

endofit dan khamir pada tanaman cengkeh (Syzygium aromaticum) serta
uji potensi antagonismenya terhadap jamur akar putih (Rigidoporus
microporus). Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan, 3(1), pp-75.
Sundari (2012). Suatu model pengembangan media pembelajaran slide culture

untuk pengamatan struktur mikroskopis kapang pada mata kuliah
psycologi. Jurnal Bioedukasi, 1(1), 39-47.
Tasnim, S., Kawuri, R., & Astiti, N. P. A. (2013). Efektifitas daya hambat bakteri
streptomyces sp terhadap erwinia sp penyebab penyakit busuk rebah
pada tanaman lidah buaya (aloe barbadensis mill). Simbiosis. 1(1), 21-27.
154
155
Valencia, P. E., & Meitiniarti, V. I. (2017). Isolasi dan karakterisasi jamur

ligninolitik serta perbandingan kemampuannya dalam biodelignifikasi.
Scripta Biologica, 4(3), 171-175.
156
LAMPIRAN

10

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

10

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN PRAKTIKUM

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

Laporan Praktikum Mikrobiologi Dasar disusun sebagai tugas akhir dalam

kuliah Mikrobiologi Dasar.

(Siska Wahyuningtyas) (M. Fadhilah Fadhlurrohman)

NIM. 185080301111003 NIM. 185080301111024

Asisten Laporan 2 Asisten Laporan 3

(Rafifa Bunga Jashita) (Riska Sulistianti Putri)

NIM. 185080300111009 NIM. 185080300111035

bimbingan-Nya sehingga kami dapat mengerjakan dan menyelesaikan Penulisan

Dasar secara daring/online.

- Dr. Ir Hartati Kartikaningsih, Ms

Besar harapan kami agar kiranya laporan praktikum Mata Kuliah

bermanfaat bagi semua pihak.

Malang, 25 April 2021

LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................................... i

Gambar 1. Bagian-bagian Autoklaf .................................................................... 24

Tabel 1.Pengenalan Alat.................................................................................... 18

Lampiran 1.Screenshoot Praktikum ................................................................... 38

PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

1.1 Latar Belakang

Sterilisasi merupakan teknik menghilangkan atau membunuh semua

bentuk kehidupan seperti mikroba. Sterilisasi memiliki peran penting dalam

berlangsungnya aktivitas di laboratorium, yaitu sterilisasi pada peralatan atau

media kultur di laboratorium perlu dilakukan untuk mencegah terjadinya

laboratorium ada beberapa cara, seperti sterilisasi panas lembab (autoclave),

sterilisasi peratalan paling efisienya itu menggunakan alat autoklaf. Autoklaf

merupakan alat sterilisasi dengan memanfaatkan tekanan penguapan panas dan

digunakan untuk sterilisasi (Djais & Theodorea, 2019).

Alat-alat laboratorium mikrobiogi seperti tabung kaca, alat bedah, tabung

perlu disetrilisasi. Peralatan tersebut biasa digunakan untuk melakukan kultur

(Mubarak et al., 2016). Tujuan dari dilakukannya sterilisasi pada peralatan

laboratorium adalah untuk menjaga kebersihan peralatan agar terbebas dari

mikoorganisme-mikroorganisme berbahaya yang dapat menjadi kontaminasi

dilakukan dapat menyebabkan denaturasi protein dan aktvitas enzim-enzim

didalam sel sehingga membunuh mikroorganisme (Istini, 2020).

Laboratorium mikrobiologi merupakan tempat dilakukannya berbagai

penelitian seperti penanaman bakteri, pengenceran, inokulasi dan lain-lainnya.

Kegiatan-kegiatan tersebut memerlukan lingkungan dan media yang bersih dan

terbebas dari aktivitas mikroorganisme untuk mencapai keberhasilan dan hasil

kegiatan di laboratorium. Sterilisasi menjadi salah satu aspek penting untuk

menjaga kebersihan peralatan d ilaboratorium dari kontaminan dengan cara

membunuh atau menghilangkannya. Jika tidak dilakukan sterilisasi sebelum

melakukan aktivitas di laboratorium, maka mikroorganisme akan tumbuh dan

1.2 Maksud dan Tujuan

Maksud dari praktikum mikrobiologi dasar tentang materi pengenalan alat

alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi dasar dan mengetahui

penggunaannya masing-masing alat serta mengetahui cara sterilisasi.

Tujuan dari praktikum mikrobiologi dasar tentang materi pengenalan alat

dan sterilisasi adalah melakukan atau mempraktikan secara langsung proses

sterilisasi dan memiliki kemampuan keterampilan menggunakan alat-alat di

1.3 Waktu dan Tempat

Waktu dilaksanakannya Praktikum Mikrobiologi Dasar Materi Pengenalan

daring melalui aplikasi google meet.

Sterilisasi merupakan sebuah proses untuk membunuh mikroorganisme

yang ada. Sterilisasi dikatakan tidak sempurna apabila masih terdapat

pertumbuhan mikroorganisme. Jika sterilisasi berlangsung sempurna, maka

kebersihan supaya peralatan terbebas dari mikroorganisme berbahaya sehingga

dapat terhindar dari kontaminasi dan juga menjadi jaminan keamanan,

Sterilisasi memiliki dua jenis metode, yakni sterilisasi panas basah

ruangannya ditutup rapat sehingga tekanan dan suhu akan mengalami

peningkatan. Sterilisasi panas kering terjadi melalui mekanisme konduksi panas,

alat yang disterilkan kemudian menyebar ke bagian dalam permukaan sampai