LAPORAN PRAKTIKUM

LABORATORIUM BIOTEKNOLOGI LINGKUNGAN

(TEL 1204)
MODUL 2 (PREPARASI MEDIA)

KELOMPOK 14

M. ICHSAN FEBRIANSYAH (220407045)

QANITA CAHYA TAMIANG (220407059)
DEA ESRA AMBARITA (220407064)
JORDAN KEVIN LIASATE UJUNG (220407066)

DOSEN:
Ir. NETTI HERLINA, M.T.
Dra. NUNUK PRIYANI, M.Sc.
YASMINE ANGGIA SARI, S.Si., M.T.

PROGRAM STUDI TEKNIK LINGKUNGAN

FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2023
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI ......................................................................................................................ii

DAFTAR GAMBAR .........................................................................................................iii
DAFTAR TABEL ..............................................................................................................iv
BAB I PENDAHULUAN ..................................................................................................I-1
1.1 Latar Belakang ...............................................................................................................I-1
1.2 Rumusan Masalah .........................................................................................................I-2
1.3 Tujuan Praktikum ..........................................................................................................I-2
1.4 Manfaat Praktikum ........................................................................................................I-2
1.5 Ruang Lingkup Praktikum ............................................................................................I-2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................................II-1
2.1 Definisi Media ...............................................................................................................II-1
2.2 Preparasi Media .............................................................................................................II-1
2.3 Pembagian Media ..........................................................................................................II-2
2.3.1 Media Berdasarkan Susunan Kimia .........................................................................II-2
2.3.2 Media Berdasarkan Sifat Fisik .................................................................................II-2
2.3.3 Media Berdasarkan Tujuan ......................................................................................II-2
2.4 Prinsip Dasar Preparasi..................................................................................................II-3
2.5 Fungsi Media .................................................................................................................II-4
2.6 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Preparasi Media ....................................................II-4
BAB III METODOLOGI PRAKTIKUM .......................................................................III-1
3.1 Alat ................................................................................................................................III-1
3.1.1 Alat Perlindung Diri .................................................................................................III-4
3.2 Bahan .............................................................................................................................III-4
3.3 Prosedur Praktikum .......................................................................................................III-6
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ...........................................................................IV-1
4.1 Hasil Percobaan .............................................................................................................IV-1
4.2 Pembahasan ...................................................................................................................IV-1
BAB V PENUTUP .............................................................................................................V-1
5.1 Kesimpulan ....................................................................................................................V-1
5.2 Saran ..............................................................................................................................V-1
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................................... v
ii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 3.1 Neraca Analitik ................................................................................................III-1

Gambar 3.2 Kompor Listrik ...............................................................................................III-1
Gambar 3.3 Panci ................................................................................................................III-1
Gambar 3.4 Cawan Petri ......................................................................................................III-2
Gambar 3.5 Gelas Ukur .......................................................................................................III-2
Gambar 3.6 Beaker Glass ....................................................................................................III-2
Gambar 3.7 Bunsen .............................................................................................................III-2
Gambar 3.8 Spatula .............................................................................................................III-3
Gambar 3.9 Tisu .................................................................................................................III-3
Gambar 3.10 Aluminium Foil ..............................................................................................III-3
Gambar 3.11 Alat Pelindung Diri ........................................................................................III-4
Gambar 3.12 Aquades .........................................................................................................III-4
Gambar 3.13 Potato Dextrose Agar (PDA) ........................................................................III-5
Gambar 3.14 Nutrient Agar (NA) .......................................................................................III-5
Gambar 3.15 Alcohol 70%...................................................................................................III-5
Gambar 3.16 Diagram Alir Prosedur Preparasi Media........................................................III-6

iii
 DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Hasil Percobaan Preparasi Media ........................................................................I-1

iv
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Mikrobiologi adalah cabang ilmu biologi yang mempelajari tentang mikroorganisme yang
dapat diobservasi di bawah mikroskop. Mikroorganisme atau mikroba atau jasad renik adalah
kelompok organisme yang dapat diamati secara mikroskopis di bawah mikroskop (Talaro &
Chess, 2018 dalam Harahap, 2021). Kebanyakan dari kita tidak menyadari jika di sekeliling
kita terdapat mikroorganisme atau mikroba. Mikroorganisme atau mikroba dapat kita temukan
di udara, di dalam air, di tanah, dan debu. Bahkan mikroorganisme atau mikroba dapat juga
kita temukan pada makanan atau pada jaringan tubuh manusia, seperti selaput lendir dan kulit
(Munir, 2006; Putri et al., 2017 dalam Harahap dkk, 2021).

Media merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme baik dalam mengkultur bakteri, jamur, dan mikroorganisme
lain. Suatu media dapat menumbuhkan mikroorganisme dengan baik bila memenuhi
persyaratan antara lain kelembapan yang cukup, pH yang sesuai, kadar oksigen baik, media
steril dan media harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan mikroorganisme.
Unsur-unsur yang dibutuhkan mikroorganisme untuk pertumbuhan meliputi karbon, nitrogen,
unsur non logam seperti sulfur dan fosfor, unsur logam seperti Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg,
dan Fe, vitamin, air, dan energi. Adapun jenis media pertumbuhan dapat berupa media cair,
media kental (padat), dan media semi padat (Dwidjoseputro, 2005 dalam Putra dkk, 2021).
hanya sebagian kecil sel hidup dalam komunitas mikroba yang dapat ditumbuhkan
menggunakan media pertumbuhan agar atau agen pembentuk gel lainnya (Tanaka dkk, 2014).

Pada praktikum Mikrobiologi Lingkungan dengan judul Preparasi Media ini, terlebih dahulu
melakukan prosedur sterilisasi. Pada preparasi media dilakukan percobaan untuk membuat
media tempat pertuumbuhan mikroba yang akan diamati. Media yang digunakan adalah
media Nutrient Agar (NA) dan Potato Dextrose Agar (PDA). Media yang digunakan harus
mengandung nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba seperti karbohidrat dan
protein. Dengan mengikuti praktikum ini, praktikan dapat mengidentifikasikan media yang
baik digunakan dalam pertumbuhan mikroba.
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

1.2 Rumusan Masalah

Rumusan masalah dalam pelaksanaan praktikum ini sebagai berikut:
1. Apa fungsi media dalam pertumbuhan mikroba?
2. Bagaimana pembagian media dalam pertumbuhan mikroba?
3. Bagaimana kriteria penggunaan media dalam pertumbuhan mikroba?
4. Apa prinsip dasar preparasi?
5. Apa perbedaan agar komersil dengan agar teknis?

1.3 Tujuan Praktikum

Tujuan dalam pelaksanaan praktikum ini sebagai berikut:
1. Untuk mengetahui fungsi media.
2. Untuk mengetahui pembagian media.
3. Untuk mengetahui kriteria penggunaan media.
4. Untuk mengetahui prinsip dasar preparasi.
5. Untuk mengetahui perbedaan agar komersil dengan agar teknis.

1.4 Manfaat Praktikum

Manfaat dalam pelaksanaan praktikum ini sebagai berikut:
1. Sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan nilai akhir mata kuliah Mikrobiologi
Lingkungan.
2. Agar praktikan dapat meningkatkan keterampilan-keterampilan dasar dalam bereksperimen
di Laboratorium.
3. Kegiatan praktikum mendorong pemahaman materi pembelajaran.

1.5 Ruang Lingkup Praktikum

Ruang lingkup dalam pelaksanaan praktikum ini sebagai berikut:
1. Praktikum dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Lingkungan Gedung Teknik
Lingkungan Universitas Sumatera Utara.
2. Praktikum dilakukan dengan menggunakan media Nutrient Agar (NA) dan media Potato
Dextrose Agar (PDA).

I-2
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Definisi Media
Media merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme baik dalam mengkultur bakteri, jamur, dan mikroorganisme
lain (Putra dkk, 2021). Media pertumbuhan adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran
nutrient atau zat makanan yang dipakai untuk menumbuhkan mikroorganisme yang meliputi
proses isolasi, peremajaan, perbanyakan mikroorganisme, perhitungan, serta untuk pengujian
sifat fisiologis dan biokimia suatu mikroorganisme (Munawwarah, 2021).

2.2 Preparasi Media

Penggunaan media dalam cabang ilmu biologi yaitu mikrobiologi sangat penting untuk
menumbuhkan, isolasi, perhitungan jumlah, dan pengujian sifat-sifat fisik bakteri sehingga
suatu bakteri dapat diidentifikasi. Nutrisi yang dibutuhkan mikroorganisme untuk
pertumbuhannya meliputi karbon, nitrogen, unsur non logam seperti fosfor, unsur logam
seperti Ca, Na, Fe, vitamin, air, dan energi. Untuk itu, media pertumbuhan bakteri harus
memenuhi syarat nutrisi yang dibutuhkan (Khaerunnisa dkk, 2019).

Nutrient Agar (NA) adalah salah satu contoh media instan yang sering digunakan untuk
isolasi dan pertumbuhan bakteri. Harga Nutrient Agar yang cukup mahal yaitu ± Rp
1.500.000,- untuk setiap 500 gram mendorong para peneliti untuk membuat media
pertumbuhan bakteri yang berasal dari alam dengan biaya yang lebih ekonomis. Bahan yang
digunakan harus mengandung nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri seperti dari
bahan-bahan yang kaya akan karbohidrat dan protein (Khaerunnisa dkk, 2019).

Media semi sintetik yang umumnya digunakan untuk cendawan yaitu media Potato Dexstrose
Agar (PDA). Media PDA termasuk kedalam kelompok media semi sintetik yang tersusun dari
tiga bahan utama yang terdiri atas bahan sintetik dan bahan alami yaitu kentang, dextrosa dan
agar. Kentang berfungsi sebagai sumber karbohidrat, vitamin dan energi. Dextrose sumber
energi tambahan sedangkan agar sebagai bahan pemadat media PDA. Semua bahan ini
dibutuhkan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan cendawan (Nirhalimah, 2020).
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

2.3 Pembagian Media

2.3.1 Media Berdasarkan Susunan Kimia
Menurut (Atmanto dkk, 2022), adapun pembagian media berdasarkan susunan kimia sebagai
berikut:
1. Media alami/non sintetis merupakan media yang disusun dari bahan-bahan alami
dimana komposisinya tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung
diekstrak dari bahan dasarnya seperti: kentang, tepung, daging, telur, ikan sayur, dan
sebagainya. Contohnya: Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic
Extract.
2. Media Semi Sintesis merupakan media yang disusun dari bahan-bahan alami dan
bahan-bahan sintesis. Contohnya: Potato Dextrose Agar (PDA) yang mengandung
agar, dekstrosa dan ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, tidak dapat
diketahui secara detail tentang komposisi senyawa penyusunnya.
3. Media sintesis yaitu media yang disusun dari senyawa kimia yang jenis dan
takarannya diketahui secara pasti. Contohnya: Mac Conkey Agar.
2.3.2 Media Berdasarkan Sifat Fisik
Menurut (Atmanto dkk, 2022), adapun pembagian media berdasarkan sifat fisik sebagai
berikut:
1. Media Padat/ Solid merupakan media yang mengandung agar 15% sehingga setelah
dingin media menjadi padat, contoh nya yaitu media Nutrient Agar.
2. Media Semi Padat/ Semi Solid merupakan media yang mengandung agar 0,3-0,4%
sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semi solid
dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media
tetapi tidak mengalami percampuran sempurna jika tergoyang.
3. Media Cair merupakan media yang tidak ditambahi bahan pemadat, umumnya
digunakan untuk pertumbuhan mikroalga, contohnya adalah Nutrient Broth (NB),
Lactose Broth (LB).
2.3.3 Media Berdasarkan Tujuan
Menurut (Roviati dkk, 2020), adapun pembagian media berdasarkan tujuan sebagai berikut:
1. Media untuk isolasi, mengandung semua senyawa esensial untuk pertumbuhan
mikroba, misalnya Nutrient Broth, Blood Agar.
2. Media selektif/penghambat, selain mengandung nutrisi juga ditambah suatu zat
tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan

II-2
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

merangsang pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Contohnya adalah Luria Bertani

medium yang ditambah Ampiciline untuk merangsang E.coli resisten antibotik dan
menghambat kontaminan yang peka, Ampiciline. Salt broth yang ditambah NaCl 4%
untuk membunuh Streptococcus agalactiae yang toleran terhadap garam.
3. Media diperkaya (enrichment), media yang mengandung komponen dasar untuk
pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti darah, serum, kuning
telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu, misalnya Blood
Tellurite Agar, Bile Agar, Serum Agar, dan lain-lain.
4. Media untuk peremajaan kultur, Media umum atau spesifik yang digunakan untuk
peremajaan kultur.
5. Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik. Media ini digunakan unutk
mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba. Contohnya adalah
Koser’s Citrate Medium, yang digunakan untuk menguji kemampuan menggunakan
asam sitrat sebagai sumber karbon.
6. Media untuk karakterisasi bakteri. Media yang digunakan untuk mengetahui
kemampuan spesifik suatu mikroba. Kadang-kadang indikator ditambahkan untuk
menunjukkan adanya perubahan kimia. Contohnya adalah Nitrate Broth, Lactose
Broth, Arginine Agar.
7. Media diferensial, Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari
campurannya berdasar karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial,
misalnya Triple Sugar Iron Agar (TSIA) yang mampu memilih Enterobacteria
berdasarkan bentuk, warna, ukuran koloni dan perubahan warna media di sekeliling
koloni.

2.4 Prinsip Dasar Preparasi

Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi pada media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit
untuk menyusun komponen sel nya. Mikroorganisme yang berbeda membutuhkan material
nutrisi yang berbeda pula. Oleh karena itu, media kultur bervariasi dalam bentuk dan
komposisi, tergantung pada jenis spesies yang dikembangbiakkan. Media kultur tersebut
maka dapat diidentifikasi mikroorganisme. Identifikasi mikroorganisme dari media kultur
dapat diperiksa dengan mikroskop cahaya dengan terlebih dahulu dilakukan pembuatan
pulasan bakteri tanpa pewarnaan atau dengan pewarnaan (Atmanto dkk, 2022).

II-3
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

2.5 Fungsi Media

Tujuan utama dari membuat media kultur mikroorganisme adalah untuk menyediakan
keseimbangan campuran Nutrient yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroorganisme yang
baik. Media kultur menyediakan lingkungan buatan yang stimulasi kondisi alami yang
penting untuk pertumbuhan (Atmanto dkk, 2022).

Media adalah suatu bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba yang terdiri atas
campuran nutrisi atau zat-zat makanan. Selain untuk menumbuhkan mikroba, media dapat
juga digunakan untuk isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan
jumlah mikroba (Ramadhani dan Wahyuni, 2020).

Menurut (Munawwarah, 2021), adapun syarat-syarat agar organisme dapat tumbuh dengan
baik dalam suatu media adalah sebagai berikut:
1. Mengandung nutrisi yang mudah untuk digunakan mikroorganisme,
2. Mempunyai tekanan osmosis, tegangan muka, dan Ph yang sesuai,
3. Tidak mengandung zat penghambat pertumbuhan mikroorganism,.
4. Media harus steril.

2.6 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Preparasi Media

Menurut (Rachmawaty, 2020 dalam Fachrial, 2022), adapun faktor-faktor yang
mempengaruhi Preparasi Media Sebagai berikut:
1. Susunan Makanan
Unsur-unsur yang diperlukan dalam media meliputi air, sumber karbon, sumber
nitrogen, sumber mineral, vitamin dan gas. Bakteri peka terhadap kekeringan sehingga
perlu air yang cukup untuk menjaga kondisi tetap lembab. Untuk sumber karbon
dapat digunakan senyawa karbon sederhana seperti CO2, CH4 atau senyawa karbon
kompleks seperti gula (misal: glukosa, laktosa, sukrosa, dan lain sebagainya).
Senyawa nitrogen dapat berasal dari senyawa nitrogen sederhana seperti NH3 atau
nitrogen yang lebih kompleks seperti pepton dan asam amino. Mineral yang sering
dibutuhkan dalam media adalah K, Mg, Na, Zn, P, S dan Cl. Beberapa bakteri
membutuhkan vitamin K (misal: Bacteroides melanogenicus) dan juga gas (misal:
Gonococcus) yang membutuhkan CO2, namun ada juga bakteri yang justru mati jika ada
oksigen (bakteri anaerob).

II-4
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

2. Temperatur
Bakteri agar dapat tumbuh optimal membutuhkan suhu tertentu. Umumnya bakteri
pathogen membutuhkan suhu sekitar 37°C sesuai dengan suhu tubuh manusia walaupun
ada juga bakteri yang membutuhkan suhu tinggi seperti Camphylobacter (42°C).
3. Tekanan Osmosis
Secara umum untuk pertumbuhannya, bakteri membutuhkan media isotonik. Apabila
media bersifat hipotonis, maka bakteri akan mengalami plasmoptysis dan apabila bersifat
hipertonik, bakteri akan mengalami plasmolysis.
4. Derajat Keasaman (pH)
Sebagian besar bakteri membutuhkan pH netral. Namun beberapa bakteri butuh
perlakuan khusus sebagai contoh bakteri Vibrio, yang membutuhkan pH alkali sekitar 8-
10 untuk tumbuh optimal.
5. Sterilisasi
Sterilisasi merupkan hal yang mutlak dibutuhkan untuk melakukan pemeriksaan
mikrobiologi. Jika media yang digunakan tidak steril maka tidak dapat dibedakan apakah
yang tumbuh merupakan bakteri yang dibutuhkan atau hanya merupakan bakteri
kontaminan.

II-5
 BAB III
METOLOGI PRAKTIKUM

3.1 Alat
Berikut alat-alat yang digunkan dalam praktikum sebagai berikut :
1. Neraca Analitik : berfungsi untuk menimbang benda atau zat yang akan digunakan.

Gambar 3.1 Neraca Analitik

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
2. Kompor Listrik : berfungsi sebagai alat pemanas NA dan PDA.

Gambar 3.2 Kompor Listrik

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
3. Panci : berfungsi sebagai wadah memanaskan NA dan PDA.

Gambar 3.3 Panci

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

4. Cawan Petri : berfungsi sebagai wadah pembiakan mikroorganisme.

Gambar 3.4 Cawan Petri

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
5. Gelas Ukur : berfungsi untuk mengukur volume larutan atau zat cair dengan tepat.

Gambar 3.5 Gelas Ukur

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
6. Beaker Glass : berfungsi sebagai wadah dari NA, PDA dan aquades saat dipanaskan.

Gambar 3.6 Beaker Glass

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
7. Bunsen : berfungsi sebagai alat yang menghasilkan api untuk menjaga kondisi aseptis.

Gambar 3.7 Bunsen

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023

III-2
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

8. Spatula : berfungsi untuk mengambil zat-zat kimia padat yang berukuran kecil.

Gambar 3.8 Spatula

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
9. Tisu : berfungsi sebagai alat untuk membersihkan meja kerja.

Gambar 3.9 Tisu

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
10. Aluminium Foil : berfungsi sebagai penutup alat praktikum sehingga bakteri tidak masuk
serta sebagai wadah NA dan PDA saat ditimbang.

Gambar 3.10 Aluminium Foil

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023

III-3
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

3.1.1 Alat Pelindung Diri

Berikut alat pelindung diri yang digunakan pada praktikum ini yaitu sebagai berikut :
1. Sarung Tangan : berfungsi sebagai pelindung tangan selama kegiatan praktikum.
Melindungi tangan dari bahan-bahan kimia, percikan api, arus listrik, dan sebagainya
agar tidak terjadi resiko pada tangan.
2. Masker : berfungsi untuk melindungi organ pernapasan dari hirupan bahan-bahan kimia
yang berbahaya.
3. Jas Laboratorium : berfungsi untuk melindungi tubuh dari paparan atau percikan bahan-
bahan kimia di laboratorium.

Gambar 3.11 Alat Pelindung Diri

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
3.2 Bahan
Berikut bahan yang digunkan dalam praktikum sebagai berikut :
1. Aquades : berfungsi sebagai pelarut NA dan PDA.

Gambar 3.12 Aquades

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
2. NA : Nutrient Agar (NA) merupakan media yang paling umum digunakan untuk
pertumbuhan sebagian besar bakteri. Nutrient agar mengandung zat pemadatan. Nutrient
Agar (NA) adalah salah satu contoh media instan yang sering digunakan untuk isolasi dan
pertumbuhan bakteri (Khaerunnisa dkk, 2019).
III-4
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

Gambar 3.13 Nutrient Agar (NA)

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
3. PDA : Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang sering digunakan untuk
menumbuhkan dan mengembangbiakan jamur. Media PDA termasuk kedalam kelompok
media semi sintetik yang tersusun dari tiga bahan utama yang terdiri atas bahan sintetik
dan bahan alami yaitu kentang, dextrosa dan agar (Nirhalimah, 2020).

Gambar 3.14 Potato Dextrose Agar (PDA)

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023
4. Alcohol 70% : berfungsi untuk membersihkan meja kerja agar untuk menciptakan
keadaan yang aseptis.

Gambar 3.15 Alcohol 70%

Sumber: Praktikum Mikrobiologi Lingkungan, 2023

III-5
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

3.3 Prosedur Praktikum

Adapun prosedur Preparasi Media yang dilakukan saat praktikum sebagai berikut:
Mulai

Bersihkan meja kerja menggunakan alcohol dan tisu

Timbang NA sebanyak 2 gr dan PDA sebanyak 3,9 gr dineraca

analitik menggunakan aluminium foil dan spatula

Ukur larutan aquades sebanyak 100 ml kedalam gelas

ukur berukuran 250 ml

Masukkan bubuk NA dan PDA kedalam beaker glass

berukuran 250 ml

Masukkan 100 ml aquades kedalam beaker glass

Pemanasan dilakukan dengan metode water bath menggunakan

panci dan kompor listrik

Tunggu cairan hingga serbuk media terlarut sempurna dan

warnanya menjadi bening (diaduk sesekali)

Setelah mendidih dan tercampur rata, tuang media NA kedalam

cawan petri secara aseptis

Bersihkan kembali meja kerja menggunakan alcohol 70%

Selesai

Gambar 3.15 Diagram Alir Prosedur Preparasi Media

Sumber: Modul Praktikum Mikrobiologi Teknik Lingkungan, 202

III-6
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil
Setelah percobaan, diperoleh hasil sebagai berikut:
Tabel 4.1 Hasil Percobaan Preparasi Media

Nama Media Gambar Jenis Media Jenis Agar

Nutrient Agar (NA) Jenis media yang Bahan yang digunakan
digunakan yaitu: adalah bubuk Nutrient
1. Media Semi Sintesis Agar dan aqua agar
2. Media Padat komersil. Kandungannya
berupa 2 gr bubuk NA dan
100 ml aquades

Potato Dextrose Jenis media yang Bahan yang digunakan

Agar (PDA) digunakan yaitu: adalah bubuk Potato
1. Media Semi Sintesis Dextrose Agar dan aqua
2. Media Padat agar komersil gula
kentang. Kandungannya
berupa 3,9 gr bubuk PDA
dan 100 ml aquades

4.2 Pembahasan
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang digunakan
untuk membiakkan mikroba. Media terdapat bermacam-macam yang dapat digunakan untuk
isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba maupun
untuk transport specimen dari suatu tempat ke tempat pemeriksaan mikrobiologi. Pembagian
media dalam pertumbuhan mikroba dapat dibagi menjadi 3 yaitu media berdasarkan susunan
kimia, media berdasarkan sifat fisik, dan media berdasarkan tujuan. Keberhasilan preparasi
media dipengaruhi oleh beberapa faktor, diantaranya susunan makanan atau unsur yang
digunakan dalam media, tidak mengandung zat penghambat pertumbuhan mikroorganisme
sehingga media harus dalam keadaan steril, serta adanya faktor lingkungan seperti temperatur,
tekanan osmosis, derajat keasaman (pH), kelembaban dan intensitas cahaya.
 Praktikum Mikrobiologi Lingkungan (TEL 1204)

Media Nutrient Agar merupakan media yang digunakan untuk pertumbuhan bakteri. Dalam
pembuatan media NA ini perlu dipersiapkan alat dan bahan yang sudah disterilisasi terlebih
dahulu sebelum digunakan. Timbang bubuk NA sebanyak 2 gr menggunakan neraca analitik,
setelah ditimbang masukkan bubuk NA ke dalam beaker glass. Lalu ukur aquades sebanyak
100 ml dan campur ke bubuk NA dan aduk dengan spatula menggunakan metode water bath
sehingga larutan homogen. Setelah mendidih tuang media NA kedalam cawan petri dan
bungkus agar tetap aseptis.

Media Potato Dextrose Agar merupakan media yang digunakan untuk pertumbuhan jamur.
Dalam pembuatan media PDA ini perlu dipersiapakan alat dan bahan yang sudah disterilisasi
terlebih dahulu sebelum digunakan. Timbang bubuk PDA sebanyak 3,9 gr menggunakan
neraca analitik, setelah ditimbang masukkan bubuk PDA kedalam beaker glass. Lalu ukur
aquades sebanyak 100 ml dan campur ke bubuk PDA dan aduk dengan spatula menggunakan
metode water bath sehingga larutan homogen. Setelah mendidih tuang media NA kedalam
cawan petri dan bungkus agar tetap aseptis.

IV-2
 BAB V
PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Adapun kesimpulan pada praktikum ini adalah
1. Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang
digunakan sebagai tempat tumbuhnya atau membiakan mikroba. Media juga berfungsi untuk
memperbanyak jumlah, menguji sifat-sifat fisiologi dan perhitungan mikroba, dimana
pembuatannya harus di sterilisasikan dan menerapkan metode aseptis.
2. Pembagian media dalam pertumbuhan mikroba dibagi menjadi 3 yaitu media berdasarkan
susunan kimia, media berdasarkan sifat fisik, dan media berdasarkan tujuan.
3. Kriteria penggunaan media pada pertumbuhan mikroba yaitu mengandung nutrisi yang
mudah untuk digunakan mikroorganisme; harus mengandung unsur-unsur karbon, nitrogen,
fosfat inorganic, sulfur, logam, air dan mineral; mempunyai tekanan osmosis, tegangan muka
dan pH yang sesuai; tidak mengandung zat penghambat pertumbuhan mikroorganisme serta
media harus steril sebelum digunakan.
4. Prinsip dasar preparasi yaitu pembiakan mikroba di laboratorium memerlukan medium
yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai dengan mikroorganisme.
Secara garis besar beberapa teknis dalam preparasi yaitu melakukian sterilisasi terlebih
dahulu, mencampur bahan-bahan, menyaring, menentukan dan mengatur pH, dan melakukan
sesuai prosedur.
5. Perbedaan agar komersil dengan agar teknis terletak pada kandungan bahan-bahan yang
digunakan dalam agar tersebut. Agar komersil tidak mengandung pati, gelatin dan protein
sedangkan agar teknis mengandung pati, gelatin, dan protein.

5.2 Saran
Adapun saran untuk praktikum ini adalah
1. Sebaiknya laboratorium melengkapi alat-alat laboratorium dalam praktikum
2. Sebaiknya kakak dan abang asisten lebih sabar menghadapi praktikan saat berlangsungnya
praktikum
3. Sebaiknya praktikan memahami materi untuk praktikum.
4. Sebaiknya praktikan bersikap sopan dan tenang saat berlangsungnya praktikum.
5. Sebaiknya praktikan memahami prosedur dan tata tertib laboratorium.
6. Sebaiknya praktikan menjaga meja kerja agar tetap steril.
 DAFTAR PUSTAKA

Atmanto, Y. K. A. A., Asri, L. A., & Kadir, N. A. (2022). Media Pertumbuhan Kuman.
Makassar; Jurnal Medika Hutama, 4, 3069-3075.
Fachrial, E. (2022). Pengantar Teknik Laboratorium Mikrobiologi Dan Pengenalan Bakteri
Asam Laktat. Medan; PUBLISH BUKU UNPRI PRESS ISBN.
Harahap, D. G. S., Noviantari, A., Hidana, R., Yanti, N. A., Nugroho, E. D., Nurdyansyah, F.,
Estikomah, S. A., dkk (2021). Dasar-Dasar Mikrobiologi Dan Penerapannya.
Jawa Barat; Penerbit Widina Bhakti Persada Bandung.
Khaerunnisa, R., Kurniati, I., Nurhayati, D., & Dermawan, A. (2019). Pemanfaatan Air
Rebusan Umbi Kuning Dan Ungu Sebagai Media Alternatif Pertumbuhan
Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Bandung; Jurnal Riset Kesehatan
Poltekkes Depkes Bandung, 11(1), 269-276.
Munawwarah, F. A. (2021). Uji Daya Hambat Sari Daun Kemangi (Ocimum basilicum L)
Terhadap Pertumbuhan Bakteri Neisseria Gonorrhoeae (Doctoral dissertation,
Poltekkes Kemenkes Kendari).
Nirhalimah, N. (2020). Pembuatan Media Dari Tepung Umbi Gadung (Dioscorea hispida
Dennst) Sebagai Alternatif Pengganti Media PDA (Potato Dextrose
Agar) (Doctoral dissertation, UIN Raden Fatah Palembang).
Putra, S. F., Fitri, R., & Fadilah, M. (2021). Pembuatan Media Tumbuh Bakteri Berbasis
Lokal Material. Padang; In Prosiding Seminar Nasional Biologi 2021. 1(2), 1043-
1050.
Ramadhani, I., & Wahyuni. (2020). Dasar-Dasar Praktikum Mikrobiologi. Jawa Tengah;
CV. Pena Persada.
Roviati, E., Nujanah, L., Umami, M., & Sahrir, D. C. (2020). Panduan Praktikum
Mikrobiologi Berbasis Argumentasi. Cirebon; Laboratorium Biologi Unit
Laboratorium MIPA Institut Agama Islam Negeri (IAIN) Syekh Nurjati.
Tanaka, T., Kawasaki, K., Daimon, S., Kitagawa, W., Yamamoto, K., Tamaki, H., Kamagata,
Y., dkk (2014). A hidden pitfall in the preparation of agar media undermines
microorganism cultivability. Indiana USA; Applied and environmental
microbiology, 80(24), 7659-7666.