i

DAFTAR PUSTAKA
DAFTAR TABEL .................................................................................................. iii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. iv
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................... v
BAB 1. PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Tujuan ............................................................................................................ 2
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 3
2.1 Definisi Protein.............................................................................................. 3
2.2 Bahan Yang Digunakan................................................................................. 3
2.2.1 BSA (Bovine Serum Albumin) ............................................................... 3
2.2.2 Kacang Tanah ......................................................................................... 4
2.2.3 Kacang Kedela ........................................................................................ 5
2.2.4 Aquades .................................................................................................. 6
2.2.5 Biuret ...................................................................................................... 7
2.3 Metode Biuret ................................................................................................ 7
2.4 Pengaruh Konsentrasi Bahan Terhadap Kadar Protein ................................. 8
2.5 Faktor Yang Mempengaruhi Pengukuran Kadar Protein .............................. 8
BAB 3. METODOLOGI PRAKTIKUM ................................................................ 9
3.1 Alat dan Bahan .............................................................................................. 9
3.1.1 Alat.......................................................................................................... 9
3.1.2 Bahan ...................................................................................................... 9
3.2 Skema Kerja dan Fungsi Perlakuan ............................................................. 10
3.2.1 Skema Kerja .......................................................................................... 10
3.2.2 Fungsi Perlakuan................................................................................... 12
BAB 4. HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN .................................. 14
4.1 Hasil Pengamatan ........................................................................................ 14
4.1.1 Absorbansi BSA ................................................................................... 14
4.1.2 Absorbansi Kacang Tanah .................................................................... 14
4.1.3 Absorbansi Kacang Kedelai.................................................................. 14
4.2 Hasil Perhitungan ........................................................................................ 15
4.2.1 Konsentrasi BSA................................................................................... 15

i
 ii

4.2.2 Kadar Protein Kacang Tanah ................................................................ 15

4.2.3 Kadar Protein Kacang Kedelai ............................................................. 15
BAB 5. PEMBAHASAN ...................................................................................... 16
5.1 BSA ............................................................................................................. 16
5.2 Kacang Tanah .............................................................................................. 18
5.3 Kacang Kedelai ........................................................................................... 18
BAB 6. PENUTUP ............................................................................................... 20
6.1 Kesimpulan .................................................................................................. 20
6.2 Saran ............................................................................................................ 20
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 21
LAMPIRAN .......................................................................................................... 25

ii
 iii

DAFTAR TABEL
Tabel 2.2. 1 Syarat Mutu Kacang Tanah (01-3921-1995) ..................................... 5
Tabel 2.2. 2 Syarat Mutu Kacang Kedelai (SNI 01-3922-1995)........................... 6
Tabel 4.1. 1 Absorbansi BSA ............................................................................... 14
Tabel 4.1. 2 Absorbansi Kacang Tanah................................................................ 14
Tabel 4.1. 3 Absorbansi Kacang Kedelai ............................................................. 14
Tabel 4.2. 1 Konsentrasi BSA .............................................................................. 15
Tabel 4.2. 2 Kadar Protein Kacang Tanah ........................................................... 15
Tabel 4.2. 3 Kadar Protein Kacang Kedelai ......................................................... 15

iii
 iv

DAFTAR GAMBAR
Gambar 5. 1 Larutan Kurva Standar BSA .................................................................. 16
Grafik 5. 2 Kurva Standar BSA .................................................................................... 17

iv
 v

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran. 1 Dokumentasi BSA .......................................................................... 25
Lampiran. 2 Dokumentasi Sampel Kacang Tanah .............................................. 25
Lampiran. 3 Dokumentasi Sampel Kacang Kedelai ........................................... 26

v
 BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Protein merupakan salah satu zat makanan yang sangat penting dalam tubuh
manusia. Protein adalah komponen gizi yang sangat penting dalam proses
metabolisme dan perkembangan tubuh. Selain itu, protein juga berfungsi sebagai
enzim, alat pengangkut dan penyimpan, regulator gerakan, pendukung mekanis,
pertahanan atau imunisasi tubuh, media penyebaran impuls saraf, dan pengendali
pertumbuhan. Kekurangan protein dapat menyebabkan berbagai masalah
kesehatan, seperti kelemahan otot, stunting pada anak-anak, dan sistem kekebalan
tubuh yang lemah (Amalia, 2018).
Protein dibagi menjadi 2 bagian, yaitu protein hewani dan protein nabati.
Protein yang berasal dari hewan disebut protein hewani, sedangkan yang berasal
dari tumbuhan disebut protein nabati. Protein hewani tergolong sebagai protein
berkualitas tinggi atau juga disebut juga sebagai protein lengkap karena
mengandung semua asam amino essensial. Sementara itu, sebagian besar nabati
berkualitas rendah atau disebut juga protein tidak lengkap, sebab karena protein
nabati mengandung 1 atau lebih asam amino esensial dalam jumlah yang sangat
kurang (Suryana, 2019).
Industri makanan terus berkembang pesat, menuntut inovasi dan
optimalisasi proses produksi. Analisis protein menjadi sorotan penting dalam ranah
ini. Protein, sebagai komponen vital pangan, tak hanya mempengaruhi kualitas
akhir produk tapi juga fungsinya. Dengan memahami struktur dan karakteristik
protein, para peneliti dapat mengembangkan teknik pengolahan yang tepat. Ini
berujung pada peningkatan nilai gizi, tekstur, dan umur simpan makanan, serta
penciptaan produk pangan baru yang fungsional.
 2

1.2 Tujuan
Tujuan dari praktikum pengetahuan bahan agroindustri acara analisi proteiin
adalah sebagai berikut:

1. Agar mahasiswa mengetahui cara mengukur kadar protein kacang tanah dan
kedelai dengan menggunakan metode biuret .
2. Agar mahasiswa mengetahui hubungan konsentrasi bahan dengan kadar
protein.

2
 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Definisi Protein

Protein merupakan salah satu dari biomolekul raksasa, selain polisakarida,
lipida, dan polinukleotida, yang mempakan penyusun utama makhluk hidup. Selain
itu, protein mempakan salah satu molekul yang paling banyak diteliti dalam
biokimia. Protein ditemukan oleh Jons Jakob Berzelius pada tahun 1838.
Biosintesis protein alami sama dengan ekspresi genetik. Kode genetik yang dibawa
DNA ditranskripsi menjadi RNA, yang berperan sebagai cetakan bagi translasi
yang dilakukan ribosoma. Sampai tahap ini, protein masih "mentah", hanya
tersusun dari asam amino proteinogenik. Melalui mekanisme pascatranslasi,
terbentuklah protein yang memiliki fungsi penuh secara biologi (Khotimah, 2021).
Protein yang dibentuk dengan hanya menggunakan satu polipeptida
dinamakan sebagai protein monomerik dan yang dibentuk oleh beberapa
polipeptida contohnya hemoglobin pula dikenali sebagai protein multimerik.
Protein (akar kata protos dari bahasa Yunani yang berarti "yang paling utama")
adalah senyawa organik kompleks berbobot molekul tinggi yang merupakan
polimer dari monomer-monomer asam amino yang dihubungkan satu sama lain
dengan ikatan peptida. Molekul protein mengandung karbon, hidrogen, oksigen,
nitrogen dan kadang kala sulfur serta fosfor. Selain itu, Protein berperan penting
dalam struktur dan fungsi semua sel makhluk hidup dan virus. Kebanyakan protein
merupakan enzim atau subunit enzim (khotimah, 2021).

2.2 Bahan Yang Digunakan

2.2.1 BSA (Bovine Serum Albumin)
Bovine Serum Albumin (BSA) adalah protein albumin yang diperoleh dari
sapi dengan kandungan albumin dalam senyawa BSA adalah 100 mg/mL
(Amrullah, 2020). Albumin merupakan molekul protein yang terrdiri dari rantai
tunggal polipeptida yan memiliki berat molekul 66 kDa dan tersusun atas 585 asam
amino. Asam – asam amino dalam molekul albumin saling berikatan melalui ikatan

3
 4

disulfida yaitu terdapat 17 ikatan (Zulfatur, 2017). BSA termasuk dalam kelompok
protein globular dengan berat molekul 66000 Da. Bovine Serum Albumin (BSA)
merupakan salah satu protein yang mempunyai kandungan protein yang berlimpah
dalam plasma dengan konsentrasi 5g/500 ml, di samping itu, BSA mempunyai
komposisi asam amino sebayak 20 macam (Suryanatha, 2019).
Dalam praktikum kali ini, bahan BSA telah digantikan dengan putih telur,
yang merupakan alternatif yang lebih ekonomis dan mudah diperoleh. Telur, yang
kaya akan protein dan mengandung semua asam amino esensial, sering dijadikan
acuan dalam menilai kualitas protein dari berbagai bahan makanan (Arlini, 2022).
Putih telur, juga dikenal sebagai albumen atau glair, adalah cairan putih yang
terdapat di dalam telur. Putih telur didominasi oleh protein sederhana, dengan
sekitar 11 jenis, sementara protein konjugasi lebih banyak ditemukan di kuning
telur.
2.2.2 Kacang Tanah
Kacang tanah merupakan tanaman polong yang berasal dari Amerika
Selatan. Kacang tanah dengan nama latin arachis hypogeae, adalah salah satu
tumbuhan yang tergolong dalam tumbuhan biji tertutup (Angiospermae). Kacang
tanah termasuk dalam ordo Fabales. Ordo Fabales, juga dikenal sebagai
leguminales, adalah kelompok besar tanaman berbunga yang menghasilkan polong-
polongan. Beberapa contoh tanaman lain dalam ordo Fabales termasuk kacang
polong, lentil, buncis, kedelai, dan alfalfa (Tampaty, 2019). tanaman kacang tanah
termasuk ke dalam tanaman leguminose dan berikut ini dalah taksonomi kacang
tanah diklasifikasikan kedalam: Kingdom, Plantae, Diviso: Tracheopyta, Kelas :
Magnoliophyta,Ordo Fabales, Famili: Fabaceae, Genus: Arachis, Spesies:
(Arachis hypogaea L.).
Kacang tanah (Arachis hypogaea L.) merupakan sumber protein nabati yang
penting, terutama di negara berkembang. Protein kacang tanah memiliki kandungan
asam amino esensial yang lengkap dan seimbang, menjadikannya alternatif protein
hewani yang baik. Kandungan yang terdapat didalam kacang tanah adalah berupa
protein 25 - 30%, karbohidrat 12%, lemah 40 - 50%, dan vitamin B1 sehingga
memposisikan kacang tanah setelah kedelai dalam hal mencukupi gizi. Namun,

4
 5

kandungan protein kacang tanah dapat bervariasi tergantung varietas, kondisi

pertumbuhan, dan pasca panen. (Mualfah, 2023).
Tabel 2.2. 1 Syarat Mutu Kacang Tanah (01-3921-1995)
Persyaratan Mutu
Jenis Uji Satuan
I II III
Kadar air (maks.) % 6 7 8
Butir belah (maks.) % 1 5 10
Butir rusak (maks.) % 0 1 2
Butir warna lain* (maks.) % 0 2 3
Butir keriput (maks.) % 0 2 4
Kotoran (maks.) % 0 0,5 3
Diameter mm 8 7 6
Sumber: Badan Standarisasi Nasional, 1995
2.2.3 Kacang Kedela
Kedelai (Glycine max) merupakan tanaman polong-polongan yang kaya
protein dan berperan penting dalam ketahanan pangan global. Kedelai berasal dari
Manshukuo (Cina Utara) dan telah dibudidayakan oleh manusia sejak 2500 SM.
Kedelai berasal dari Manshukuo (Cina Utara) dan telah dibudidayakan oleh
manusia sejak 2500 SM. Tanaman kedelai merupakan tanaman polong-polongan
terpenting di Indonesia dan tanaman pangan ketiga terpenting setelah padi dan
jagung, dan juga kedelai mengandung lemak, vitamin dan mineral (Listiana, 2020).
Klarifikasi kacang kedelai:
Divisio Spermatophyta
Classis Dicotyledoneae
Ordo Rosales
Familia Papilionaceae
Genus Glycine
Species Glycine Max (L.) Merill
Kedelai merupakan sumber protein nabati yang kaya akan gizi. Dalam
100gram biji kedelai terkandung 331,0 kalori, 34,9gram protein, 18,1gram lemak,
34,8gram karbohidrat, 4,2gram serat, 227,0 mg kalsium, 585,0 mg fosfor, 8,0 mg
besi, dan 1 mg vitamin B1 (Bakhtiar et al., 2020). Kedelai tidak hanya kaya protein,
tetapi juga mengandung berbagai vitamin dan mineral penting lainnya. Vitamin
yang terdapat dalam kedelai termasuk vitamin A, E, dan K. Sedangkan mineralnya

5
 6

meliputi kalium (K), zinc (Zn), dan fosfor (P). Kedelai juga kaya akan antioksidan
dan isoflavon yang bermanfaat bagi kesehatan. Kandungan gizi yang lengkap dalam
kedelai menjadikannya bahan pangan yang sangat bermanfaat untuk kesehatan.
Kedelai dapat membantu mencegah berbagai penyakit, seperti osteoporosis,
penyakit jantung, dan kanker (Taringan, 2024).
Tabel 2.2. 2 Syarat Mutu Kacang Kedelai (SNI 01-3922-1995)
Persyaratan
Kreteria Uji Satuan
I II II IV
Kadar air % Maks 13 Maks 14 Maks 14 Maks 16
Butir belah % Maks 1 Maks 2 Maks 3 Maks 5
Butir rusak % Maks 1 Maks 2 Maks 3 Maks 5
Butir warna % Maks 1 Maks 3 Maks 5 Maks 10
Kotoran % Maks 0 Maks 1 Maks 2 Maks 3
Butir keriput % Maks 0 Maks 1 Maks 3 Maks 5
Sumber: Badan Standarisasi Nasional, 1995
2.2.4 Aquades
Aquades, atau H2O, merupakan air hasil kondensasi yang diperoleh dari
proses distilasi (penyulingan). Distilasi adalah suatu metode pemisahan bahan
kimia berdasarkan kemudahan menguap (volatilitas) suatu zat, atau teknik
pemisahan kimia yang memanfaatkan perbedaan titik didih untuk memperoleh
senyawa murninya. Pada umumnya, distilasi digunakan untuk memisahkan
senyawa-senyawa dalam satu fase, yaitu fase cair-cair. Senyawa-senyawa dalam
campuran akan menguap pada saat mencapai titik didih masing-masing. Dalam
konteks ini, distilasi digunakan untuk memurnikan air mineral (Wahyudi et al,
2017).
Aquades merupakan pelarut yang jauh lebih unggul dibandingkan hampir
semua cairan yang umum dijumpai. Senyawa yang mudah larut dalam aquades
mencakup berbagai senyawa organik netral yang memiliki gugus fungsional polar,
seperti gula, alkohol, aldehida, keton. Kelarutan ini disebabkan oleh kecenderungan
molekul aquades untuk membentuk ikatan hidrogen dengan gugus hidroksil pada
gula dan alkohol, atau gugus karbonil pada aldehida dan keton. Aquades adalah air
hasil penyulingan yang bebas dari zat pengotor, sehingga bersifat murni dalam
laboratorium. Aquades berwarna bening, tidak berbau, dan tidak memiliki rasa.

6
 7

Aquades biasa digunakan untuk membersihkan alat-alat laboratorium dari zat

pengotor (Khotimah dkk., 2017).

2.2.5 Biuret
Biuret terbentuk oleh kombinasi dua molekul urea dengan melepaskan satu
molekul amonia. Struktur biuret mirip dengan urea. Reaksinya terjadi pada tekanan
rendah dan waktu pemanasan yang cukup lama. Identifikasi keberadaan biuret
pertama kali dilakukan oleh Wiedmannpada tahun 1848, setelah memanaskan urea
nitratpada pada 150oC -170oC. Ketika urea dipanaskan di atas titik leburnya, maka
akan terjadi laju reaksiyang tidak diinginkan sehingga memicu pertumbuhanzat
yang berbeda, termasuk biuret dan turunan urea lainnnya (Septiani dkk., 2020).
Uji buiret digunakan untuk menganalisis kadar protein dalam suatu sampel.
Protein tersusun atas ikatan peptida. Semakin panjang rantai peptida atau semakin
tinggi kadar protein dalam sampel, semakin intensif warna ungu yang dihasilkan
dari reaksi dengan larutan biret. Uji biuret bersifat umum untuk protein dan
memberikan hasil positif untuk semua senyawa yang mengandung dua atau lebih
ikatan peptida (Monika, 2021).

2.3 Metode Biuret

Analisis kadar protein secara kualitatif dapat dilakukan dengan berbagai
metode salah satunya dengan reaksi biuret, Larutan protein dibuat alkalis dengan
NaOH kemudian ditambahkan larutan CuSO4 encer. Uji ini untuk menunjukkan
senyawa-senyawa yang mengandung gugus amida asam yang berada bersama
gugus amida yang lain. Uji ini memberikan reaksi positif yang ditandai dengan
timbulnya warna merah violet atau biruviolet (Sylvia, & Apriliana, 2021).
Metode biuret merupakan metode kolorimetri yang umum digunakan untuk
analisis protein dalam berbagai sampel, termasuk produk pertanian. Metode ini
didasarkan pada reaksi kompleksasi antara ion Cu²⁺ dari larutan biuret dengan
ikatan peptida dalam protein. Reaksi ini menghasilkan warna ungu yang
intensitasnya berbanding lurus dengan kadar protein dalam sampel. Metode biuret
ini merupakan metode yang baik untuk menentukan kandungan larutan protein
karena seluruh protein mengandung ikatan peptida (Purnama dkk., 2019).

7
 8

2.4 Pengaruh Konsentrasi Bahan Terhadap Kadar Protein

Konsentrasi bahan merupakan salah satu faktor penting yang dapat
mempengaruhi kadar protein dalam analisis protein. Peningkatan konsentrasi bahan
dapat meningkatkan kadar protein yang terukur dalam sampel. Hal ini disebabkan
oleh semakin banyaknya protein yang tersedia untuk diikat oleh reagen dalam
metode analisis. kondisi analisis, Jenis bahan, Metode analisis dapat mempengaruhi
hubungan antara konsentrasi bahan dan kadar protein (Larasati, 2017).

2.5 Faktor Yang Mempengaruhi Pengukuran Kadar Protein

Penetapan kadar protein dilakukan agar dapat menentukan nilai gizi dari
suatu makanan karena protein merupakan salah satu parameter yang penting dalam
menentukan niilai gizi. Semakin besar kandungan protein dalam suatu bahan
makanan maka semakin tinggi pula nilai gizinya.Faktor-faktor yang mempengaruhi
tinggi rendahnya persentase kadar protein yaitu temperatur, waktu dan jumlah
optimum perbandingan antara air dan kolagen serta banyaknya proses pengolahan
yang dilakukan (Herliyana dkk., 2021).

8
 9

BAB 3. METODOLOGI PRAKTIKUM

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat
Alat yang digunakan pada praktikum pengetahuan bahan agroindustri
acara protein yaitu spektrofotometer, tabung reaksi, aluminium foil, neraca analitik,
beaker glass, vortex, cuvet, pipet volume, bulp dan kapas.
3.1.2 Bahan
Bahan yang digunakan pada praktikum pengetahuan bahan agroindustri
acara analisis protein yaitu kacang tanah, kacang kedelai, BSA (Bovine Serum
Albumin), arutan Biuret, aquades.

9
 10

3.2 Skema Kerja dan Fungsi Perlakuan

3.2.1 Skema Kerja
a. Kurfa Standart

BSA (putih telur)

Pengambilan BSA ke dalam tabung reaksi

(0.1 Ml, 0.2 mL, 0.4 Ml, 0.6 mL, 0.8 mL, 1 mL)

Aquades Penambahan aquades hingga 4 mL

Reagen biuret Penambahan biuret sebanyak 6 mL

Tutup tabung reaksi menggunakan

aluminium foil

Pencampuran menggunakan vortex

Hingga homogen

Penyimpanan tabung reaksi

(T = 30ºC, T= 30 menit)

Pengukuran absorbansi pada

Panjang gelombang 520 nm

Pembuatan kurva standart

Kurva standart

10
 11

b. Preparasi Sampel

Kacang tanah
dan kacang kedelai

Penghalusan sampel Menggunakan blender

Penimbangan sampel masing -masing

Sebesar 10 gram.

Aquades Penamabahan aquades Sebanyak 50 mL

Pengadukan hingga larut

Pengambilan sampel ke dalam tabung reaksi

(0.2 mL, 0.4 mL, 0.6 mL, 0.8 mL, 1mL)

Aquades Panambahan aquades Hingga 4 mL

Reagen biuret Panambahan biuret hingga 6 mL

Tutup tabung reaksi menggunakan

aluminium foil

Pencampuran menggunakan vortex

hingga homogen

Penyimpanan tabung reaksi

(T=30ºC, t=30 menit)

Pengukuran absorbansi pada

Panjang gelombang 520 nm

Interpolasikan absorbansi pada

Persamaan y= ax+b

Perhitungan kadar protein

Masing – masing sampel

Kadar protein kacang tanah

dan kacang kedelai

11
 12

3.2.2 Fungsi Perlakuan

a) Kurva Standart
Untuk menetapkan kurva standar protein, diperlukan peralatan dan materi
sebagai berikut: Peralatan yang diperlukan meliputi tabung reaksi, aluminium foil,
mikropipet dan tabung, spektrofotometer, neraca analitik, gelas beaker, vortex,
kuvet, pipet volume dan bulp, serta kapas. Sementara itu, bahan yang diperlukan
termasuk BSA, larutan biuret, kacang tanah, kacang kedelai, dan aquades.
Peralatan yang digunakan dalam eksperimen ini memiliki fungsi dan
karakteristik yang beragam. Blender digunakan untuk meratakan sampel bahan.
Tabung reaksi berfungsi sebagai tempat reaksi untuk kurva standar. Aluminium foil
digunakan untuk melapisi tabung reaksi guna mencegah kontaminasi bahan.
Mikropipet dan tabung digunakan untuk mengambil sampel dengan presisi tinggi.
Vortex berperan dalam melarutkan bahan-bahan dengan cara memutar tabung
reaksi dengan kecepatan tinggi. Pipet volume digunakan untuk mengambil cairan
yang diperlukan untuk analisis protein, sementara spatula digunakan untuk
mengambil dan mencampur sampel bahan.
Bahan yang digunakan dalam eksperimen ini meliputi putih telur yang
dijadikan sebagai kurva standar karena kandungan proteinnya yang tinggi. Aquades
digunakan untuk melarutkan putih telur. Larutan biuret berfungsi sebagai indikator
kadar protein dalam putih telur.
Langkah awalnya adalah memasukkan BSA yang digantikan dengan putih
telur ke dalam tabung reaksi yang berbeda masing-masing (0,1 ml, 0,2 ml, 0,4 ml,
0,6 ml, 0,8 ml, dan 1 ml). Kemudian tambahkan aquades sebanyak 4 ml ke setiap
sampel. Tutup dengan aluminium foil untuk mencegah kontaminasi. Selanjutnya,
tambahkan larutan biuret hingga 6 ml dan aduk setiap tabung reaksi menggunakan
vortex hingga larut. Simpan tabung reaksi pada suhu (30ºC) selama 30 menit.
Langkah terakhir adalah mengukur absorbansi pada setiap sampel menggunakan
spektrofotometer dengan panjang gelombang 520 nm.

12
 13

b) Preparasi Sampel

Peralatan yang dipergunakan dalam proses pembuatan preparasi sampel

termasuk tabung reaksi, aluminium foil, mikropipet dan tabung, spektrofotometer,
neraca analitik, gelas beaker, vortex, kuvet, pipet volume dan bulp, spatula, serta
blender. Sedangkan bahan yang digunakan mencakup kedelai, kacang tanah,
aquades, dan larutan biuret.

Prosedur awalnya adalah menyiapkan sampel yang akan digunakan untuk

praktikum dan menghaluskan bahan dengan menggunakan blender. Tambahkan
aquades sebanyak 50 ml dan aduk hingga homogen. Selanjutnya, persiapkan tabung
reaksi yang telah dilapisi aluminium foil, ambil sampel dengan volume (0,2 ml, 0,4
ml, 0,6 ml, 0,8 ml, dan 1 ml), kemudian tambahkan aquades sebanyak 4 ml pada
setiap sampel, dan tambahkan larutan biuret sebanyak 6 ml. Lakukan pengadukan
pada setiap sampel menggunakan vortex hingga homogen sepenuhnya. Simpan
tabung reaksi pada suhu kamar (30ºC) selama 30 menit. Ukur absorbansi
menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 520 nm. Selanjutnya,
interpolasikan absorbansi pada persamaan y=ax+b. Langkah terakhir adalah
menghitung kadar protein pada masing-masing sampel.

13
 14

BAB 4. HASIL PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

4.1 Hasil Pengamatan

4.1.1 Absorbansi BSA
Tabel 4.1. 1 Absorbansi BSA

VOLUME BSA (mL) Absorbansi

0,1 0,413
0,2 0,613
0,4 0,903
0,6 0,904
0,8 0,919
1 0,938

4.1.2 Absorbansi Kacang Tanah

Tabel 4.1. 2 Absorbansi Kacang Tanah

Volume Absorbansi
(ml)
0,2 0,316
0,4 0,550
0,6 0,684
0,8 1,069
1 1,189

4.1.3 Absorbansi Kacang Kedelai

Tabel 4.1. 3 Absorbansi Kacang Kedelai
Volume Absorbansi
(ml)
0,2 0,865
0,4 1,324
0,6 1,849
0,8 1,816
1 2,255

14
 15

4.2 Hasil Perhitungan

4.2.1 Konsentrasi BSA
Tabel 4.2. 1 Konsentrasi BSA
VOLUME BSA (mL) Konsentrasi
(mg/mL)
0,1 0,05
0,2 0,10
0,4 0,20
0,6 0,30
0,8 0,40
1 0,50
4.2.2 Kadar Protein Kacang Tanah
Tabel 4.2. 2 Kadar Protein Kacang Tanah
Volume Kadar Protein
(ml) (mg)
0,2 -9,39
0,4 1,82
0,6 8,24
0,8 26,68
1 32,43

4.2.3 Kadar Protein Kacang Kedelai

Tabel 4.2. 3 Kadar Protein Kacang Kedelai
Volume Kadar Protein
(ml)
0,2 16,91
0,4 39,75
0,6 64,04
0,8 62,45
1 83,49

15
 16

BAB 5. PEMBAHASAN

5.1 BSA
Pada tahap pembuatan kurva standar BSA disiapkan tujuh tabung reaksi,
tabung pertama diisi larutan blanko sedangkan pada tabung yang lain diisi larutan
BSA dengan konsentrasi yang telah ditentukan, kemudian diukur dengan panjang
gelombang 520 nm. Tujuan pembuatan kurva standar yaitu untuk memperoleh
suatu persamaan regresi linear yang digunakan untuk menghitung dan menetapkan
kadar zat analit. Masing-masing serapan larutan dengan berbagai konsentrasi
diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara serapan dengan
konsentrasi.

Gambar 5. 1 Larutan Kurva Standar BSA

Berdasarkan ilustrasi pada gambar 5.1, dapat disimpulkan bahwa semakin
tinggi konsentrasi larutan BSA, intensitas warna dari senyawa kompleks Cu2+ akan
semakin meningkat. Data mengenai intensitas warna tersebut kemudian diukur
absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
520 nm. Absorbansi akan tergantung pada jumlah zat yang terkandung dalam
larutan; semakin tinggi konsentrasi zat dalam sampel, semakin banyak molekul
yang menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu. Oleh karena itu, nilai
absorbansi akan meningkat seiring dengan peningkatan konsentrasi zat dalam
sampel (Amananti dkk., 2017). Penggunaaan panjang gelombang 520 nm dipilih

16
 17

berdasarkan warna spektrum cahaya tampak dan warna komplementer dari senyawa
kompleks Cu2+ (Azhar dkk., 2019).
Grafik 5. 2 Kurva Standar BSA

Dari grafik yang terdapat pada gambar 5.1, dapat diperoleh persamaan
regresi linear yang menghubungkan konsentrasi larutan standar dengan absorbansi.
Persamaan linear yang diperoleh adalah y = 1,0439x + 0,512, dengan R2 sebesar
0,6983. Di sini, y mengacu pada absorbansi, dan x merupakan konsentrasi,
sedangkan koefisien korelasi adalah 0,6983. Namun, berdasarkan hasil data yang
diperoleh, ternyata kurva standar protein yang diperoleh dari spektrofotometri UV-
Vis belum memenuhi syarat korelasi yang ditetapkan, yaitu 0,9 <R2 < 1. Oleh
karena itu, kurva tersebut belum dapat dijadikan sebagai kurva penentuan kadar
sampel kacang tanah dan kacang kedelai (Sinambela dkk., 2014).
Berdasarkan penentuan konsentrasi BSA pada larutan standar putih telur,
ditemukan bahwa konsentrasi BSA dihitung dengan membandingkan molalitas
akhir, yaitu 5 kali massa awal (0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; dan 1 ml), dengan molalitas
(konsentrasi y) dikali dengan massa akhir, yaitu 10. Melalui perhitungan
menggunakan rumus V1 x M1 = V2 x M2, konsentrasi dari masing-masing volume
BSA secara berurutan adalah 0,05; 0,10; 0,20; 0,30; 0,40; 0,50. Setelah itu, larutan
dengan masing-masing volume BSA 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 ml diukur
menggunakan alat spektrofotometri UV-Vis, dan nilai absorbansinya berturut-turut
adalah 0,413; 0,613; 0,903; 0,904; 0,919; dan 0,938.
Hasil data menunjukkan bahwa semakin besar volume BSA yang
digunakan, semakin tinggi pula jumlah molekul yang menyerap cahaya pada

17
 18

panjang gelombang tertentu, sehingga nilai absorbansi meningkat sejalan dengan

konsentrasi BSA dalam larutan. Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya (Aini,
2015) dan Hukum Lambert Beer yang menyatakan bahwa serapan cahaya akan
meningkat sejalan dengan konsentrasi larutan yang dilewati oleh sinar.

5.2 Kacang Tanah

Hasil pengamatan warna dari sampel pertama hingga keenem menunjukkan
bahwa sampel pertama, yang memiliki volume protein kacang tanah sebesar 0,1
mL, memiliki intensitas warna dan konsentrasi terendah. Di sisi lain, sampel
kelima, dengan volume protein kacang tanah paling besar, yaitu 1 mL,
menunjukkan intensitas warna ungu yang paling tinggi atau pekat, hal ini
disebabkan oleh nilai absorbansi yang tertinggi dibandingkan dengan sampel
lainnya.

Berdasarkan penentuan kadar protein pada sampel kacang tanah didapatkan

bahwa, sampel kacang tanah dengan volume 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 ml yang diukur
menggunakan alat spektrofotometri UV-Vis memperoleh nilai absorbansi secara
berturut-turut 0,316; 0,550; 0,684; 1,069; 1,189. Hasil kadar protein dari setaip
sampel secara berturut-turut turut -9,39; 1,82; 8,24; 26,68; 32,43 mg. Berdasarkan
hasil data yang diperoleh, menunjukkan bahwa semakin banyak volume sampel
protein kacang tanah yang digunakan, maka semakin banyak molekul yang akan
menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu sehingga nilai absorbansi
semakin besar atau dengan kata lain nilai absorbansi akan berbanding lurus dengan
konsentrasi dan kadar protein kacang tanah yang terkandung. Hal tersebut sesuai
dengan pernyataan (Noviastuti, 2015) yang menyatakan bahwa, absorbsi atau
serapan akan berbanding lurus dengan ketebalan atau konsentrasi larutan yang
tinggi. Menurut Yuniarsih (2017) perbedaan konsetrasi pemberian cekaman air
dapat mempengaruhi kandungan protein.

5.3 Kacang Kedelai

Hasil pengamatan warna dari sampel pertama hingga keenem menunjukkan
bahwa sampel pertama, yang memiliki volume protein kacang kedelai sebesar 0,1

18
 19

mL, .Di sisi lain, sampel kelima, dengan volume protein kacang kedelai paling
besar, yaitu 1 mL, , hal ini disebabkan oleh nilai absorbansi yang tertinggi
dibandingkan dengan sampel lainnya.
Berdasarkan penentuan kadar protein pada sampel kacang kedelai
didapatkan bahwa, sampel kacang kedelai dengan volume 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 ml
yang diukur menggunakan alat spektrofotometri UV-Vis memperoleh nilai
absorbansi secara berturut-turut 0,865; 1,324; 1,849; 1,816; 2,255. Hasil kadar
protein dari setiap sampel secara berturut-turut 16,90; 39,75; 64,04; 62,45; 83,49
mg. Absorbsi dipengaruhi oleh beberapa faktor, seperti kontaminasi yang terjadi,
faktor suhu, dan variasi perlakuan yang berbeda. Ketika terjadi kontaminasi, dapat
memengaruhi hasil absorbsi secara signifikan (Nadea dkk., 2023). Menurut Saeroji
dkk., (2023) Variasi suhu juga dapat memengaruhi absorbsi, karena suhu yang
berbeda dapat mengubah karakteristik larutan. Selain itu, berbagai perlakuan yang
diberikan pada sampel juga dapat mempengaruhi absorbsi, menghasilkan
perubahan yang dapat diamati dalam intensitas absorbsi.

19
 20

BAB 6. PENUTUP

6.1 Kesimpulan
Praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan:
1. Pengukuran kadar protein memiliki tiga tahap, tahap pertama yaitu pembuatan
larutan biuret, tahap kedua yaitu pembuatan kurva standar BSA untuk
mendapatkan persamaan regresi linear, tahap ketiga yaitu mencari absorbansi
larutan sampel yang kemudian disubstitusikan ke persamaan regresi linear untuk
mendapatkan konsentrasi larutan sampel, selanjutnya konsentrasi larutan sampel
dikalikan dengan jumlah pelarut untuk mendapatkan kadar protein dari sampel.
2. Berdasarkan hasil pengujian metode biuret pada sampel kacang tanah (Arachis
hypogaea) dan kacang kedelai (Glycine max) positif mengandung protein,
ditandai dengan berubahnya warna biru menjadi ungu. Hubungan antara
konsentrasi dengan warna yang dihasilkan dari setiap sampel yaitu semakin
pekat warna suatu larutan semakin tinggi konsentrasi proteinnya.
6.2 Saran
Kandungan protein pada bahan sangat perlu diperhatikan karena dapat
mempengaruhi kualitas produk pangan. Praktikum merupakan salah satu metode
pembelajaran yang efektif dalam mempelajari kandungan protein bahan.
Pengamatan yang dilakukan harus sesuai dengan prosedur untuk meminimalisir
kecelakaan dan keberhasilan sebuah pengamatan.

20
 21

DAFTAR PUSTAKA

Arlini, F. (2022). Skor dan indeks asam amino esensial udang windu, Penaeus
monodon yang mengonsumsi pellet mengandung multi-enzim dan
dipelihara pada kolam terpal resirkulasi plus faecal chamber (Doctoral
dissertation, Universitas Hasanuddin).

Amrullah, M. F. (2020). Studi tentang Pengaruh Durasi Inkubasi Sexing

Spermatozoa Menggunakan Metode Sedimentasi Putih Telur terhadap
Kualitas Semen Sapi Bali (Disertasi Doktor, Universitas Hasanuddin).

Azhar, F. F., Elvinawati, dan Nurhamidah. 2019. Perbandingan Sensitivitas

Nanopartikel Perak Dengan Reduktor Albumin dari Telur Ayam dan
Bebek untuk Analisis Merkuri. Jurnal Pendidikan dan Ilmu Kimia. 3(2):
213-224

Amananti, W., Tivani, I., & Riyanta, A. B. (2017, May). Uji Kandungan Saponin
pada Daun, Tangkai Daun dan Biji Tanaman Turi (Sesbania grandiflora).
In Politeknik Tegal: Seminar Nasional 2nd IPTEK Terapan (SENIT).
DOI:(http://ejournal.poltektegal.ac.id/index.php/SENIT2017/article/view/
565).

Amalia, 2018. Kualitas telur dan pengetahuan masyarakat tentang penanganan telur
di tingkat rumah tangga. Indonesia Medicus Veterinus, 1(5), 607-620.

AINI, F .N. (2015). PENGGUNAAN SPEKTROFOTO METEGUNA

MENENTUKAN KADAR β-KAROTEN PADA DAUN SINGKONG (The use
of spectrophotometer to determine the levels of β-karoten on cassava
leaves) (Doctoral dissertation, Undip).

Bachtiar, M. Ghulamahdi, M. Melati, D. Guntoro, dan A. Sutandi. 2016. Kebutuhan

Nitrogen Tanaman Kedelai pada Tanah Mineral dan Mineral Bergambut
dengan Budi Daya Jenuh Air. Universitas Gorontalo.

Herliyana, Salmahaminati, dan B. A. Wismono. 2021. Analisis Kadar Air dan

Protein Pada Produk Sosis di PT. Jakarana Tama Bogor. IJCR-Indonesian
Journal of Chemical Research. 6(2): 111-117.

21
 22

Khotimah, D. F., Faizah, U. N., & Sayekti, T. (2021, December). Protein sebagai
zat penyusun dalam tubuh manusia: tinjauan sumber protein menuju sel.
In PISCES: Proceeding of Integrative Science Education Seminar (Vol. 1,
No. 1, pp. 127-133).

Khotimah, H., E. W. Anggraeni, dan A. Setianingsih. 2017. Karakterisasi Hasil

Pengolahan Air Menggunakan Alat Destilasi. Jurnal Chemurgy. 1(2): 34-
38.

LISTIANA, S. (2020). EFEKTIVITAS PEMBERIAN SUSU KEDELAI

(SOYBEAN MILK) TERHADAP KELANCARAN ASI (STUDI
LITERATUR) (Doctoral dissertation, Poltekkes Tanjungkarang).

Larasati, K., Patang, P., & Lahming, L. (2017). Analisis kandungan kadar serat dan
karakteristik sosis tempe dengan fortifikasi karagenan serta penggunaan
tepung terigu sebagai bahan pengikat. Jurnal Pendidikan Teknologi
Pertanian, 3(1), 67-77.

Mualfah, D., Sandi, G. H., & Fuad, E. (2023). Sistem Monitoring pH dan
Kelembaban Tanah pada Tanaman Kacang Tanah Berbasis IoT. Jurnal
Aplikasi Teknologi Informasi dan Manajemen (JATIM), 4(2), 138-147

Monika, A. 2021. Uji Biuret Tes Biuret. Jurnal universitas syiah kuala.

Nadea, N. S. W. P., Indrayati, A., & Leviana, F. (2023). Potensi Ekstrak Kasar
Enzim dari Tempe Kedelai Hitam (Glycine soja (L.) Merr.) sebagai Obat
Fibrinolitik Alami dengan Metode Clot Lysis In Vitro: Potential of Crude
Enzymes from Black Soybean Tempeh (Glycine soja (L.) Merr.) as a
Natural Fibrinolytic Medicine with Clot Lysis In Vitro Method. Jurnal
Sains dan Kesehatan, 5(2), 115-125.

NOVIASTUTI, N. (2015). PENGGUNAAN SPEKTROFOTOMETER VISIBLE

UNTUK PENENTUAN KADAR β-KAROTEN PADA PAPRIKA (Capsicum
annum L.) Use of Visible Spectrophotometer for Determination of β-
Karoten Content from Paprika (Capsicum annum L.) (Doctoral dissertation,
Undip).

Sylvia, D., & Apriliana, V. (2021). Analisis Kandungan Protein yang Terdapat
dalam Daun Jambu Biji (Psidium Guajava L.) Menggunakan Metode Kjeldahl &
Spektrofotometri Uv-vis. Jurnal Farmagazine, 8(2), 64-72.

22
 23

Saeroji, S., Slamet, A., & Kanetro, B. (2023, June). Pengaruh Variasi Rasio Labu
Kuning (Cucurbita moschata), Tapioka Dan Tempe Serta Suhu Pengeringan
Terhadap Sifat Fisik, Kimia, Dan Tingkat Kesukaan Bubur Instan.
In Prosiding Seminar Nasional Mini Riset Mahasiswa (Vol. 2, No. 1, pp.
99-112).

Suryana, E. A., Martianto, D., & Baliwati, Y. F. (2019). Pola konsumsi dan
permintaan pangan sumber protein hewani di Provinsi nusa tenggara barat
dan nusa tenggara timur. Analisis Kebijakan Pertanian, 17(1), 1-12.

Suryanatha, I. M. A., Bebas, W., & Laksmi, D. N. D. I. (2019). Penambahan Bovine

Serum Albumin pada Pengencer Beltsville Thawing Solution terhadap
Motilitas dan Daya Hidup Spermatozoa Babi Landrace. Buletin Veteriner
Udayana Volume, 11(2), 176-181.

Sinambela, S.D., S. Ariswoyo, dan H. R. Sitepu. 2014. Menentukan Koefisien

Determinasi Antara Estimasi M dengan Type Welsch dengan Least Trimmed
Square Dalam Data yang Mempunyai Pencilan. Saintia Matematika. 2(3):
225–235.

Tarigan, E. P. (2024). Respon Tanaman Kedelai (Glycine Max L.) Terhadap Tinggi
Muka Air Pada Budidaya Jenuh Air (Doctoral dissertation, Universitas
Jambi).

Tampaty, R. T. (2019). PERANCANGAN MESIN PENGUPAS KULIT

KACANG TANAH BERKAPASITAS 20 KG/JAM. In Prosiding SoBAT
(Seminar Sosial Politik, Bisnis, Akuntansi dan Teknik) Universitas Sangga
Buana YPKP (Vol. 1, No. 1, pp. 300-310). LPPM Universitas Sangga Buana
YPKP.

Wahyudi, T., R, Faruq, F., I., Kurniawan, I., Susandy. A.,S. (2017). RANCANGAN
ALAT DISTILASI UNTUK MENGHASILKAN KONDENSAT
DENGAN METODE DISTILASI SATU TINGKAT. Jurnal Chemurgy,
1(2).

Yuniarsih, D. (2017). Pengaruh cekaman air terhadap kandungan protein kacang

kedelai. In Prossiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Biologi.
Jurusan Pendidikan Biologi. Fakultas MIPA. Univrsitas Negeri Yogyakarta.
Yogyakarta

23
 24

Zulfatur, rohmaniah. 2017. Kajian Adsorpsi Serum Albumin Pada Selulosa Hasil
Hidrolisis. Skripsi. Jember. Universitas Jember.

24
 25

LAMPIRAN

Lampiran. 1 Dokumentasi BSA

Gambar 1. Memasukkan Gambar 2. Penambahan Gambar 3. Pengambilan 6

putih telur kedalam tabung aquades ml biuret
reaksi

Gambar 4. Sampel yang Gambar 5. Homogenisasi Gambar 6. Pengukuran

telah ditambahkan dengan sampel absorbansi
biuret

Lampiran. 2 Dokumentasi Sampel Kacang Tanah

Gambar 1. Penimbangan Gambar 2. Menghaluskan Gambar 3. Menimbang

sampel sampel sampel yang telah
dihaluskan

25
 26

Gambar 4. Pelarutan sampel Gambar 5. Gambar 6. Penambahan

dengan air Memasukkan sampel aquades
kedalam tabung reaksi

Gambar 4. Penambahan Gambar 5. Gambar 6. Pengukuran

biuret Homogenisasi absorbansi

Lampiran. 3 Dokumentasi Sampel Kacang Kedelai

Gambar 1. Penimbangan Gambar 2. Menghaluskan Gambar 3. Menimbang

sampel sampel sampel yang telah dihaluskan

Gambar 4. Pelarutan sampel Gambar 5. Gambar 6. Penambahan

dengan air Memasukkan sampel aquades
kedalam tabung reaksi

26
 27

Gambar 5. Gambar 6. Pengukuran

Gambar 4. Penambahan absorbansi
Homogenisasi
biuret

27