ISOLASI DAN IDENTIFIKASI

Ari Indriana Hapsari

Isolasi
Isolasi
kegiatan pemisahan suatu kultur mikroba dari
campuran biakan mikroba di alam sel individu
terpisah
Syarat
1.sampel (mikroba) apa yang akan diambil dari
alam?
2.lokasi (habitat) ?
3.media apa yang akan digunakan ?

Contoh
Padat (tanah, serpihan batu, kayu dll)
1. Diambil dengan menggunakan spatula atau
pinset steril
2. Penyimpanan menggunakan kantong plastik steril
cairan atau semi cair (air, lumpur dll)
1. Diambil menggunakan pipet steril
2. Penyimpanan contoh menggunakan botol atau
tabung polipropilen steril
Contoh segera dibawa ke laboratorium (bila jarak jauh, gunakan es batu
pada wadah penyimpanan)

Sampel biasanya segera dipakai atau disimpan pada suhu dingin

(kulkas)

Teknik isolasi
1.
2.
3.
4.
5.

Penggoresan (Streak-plate)
Penyebaran (Spread-plate)
Penuangan (Pour-plate)
Kultur Yang Diperkaya (Enrichment Culture)
Pengenceran Berseri (Serial-dilution)

1.

Teknik Penggoresan (Streak-plate) & Penyebaran

(Spread-plate)
Untuk mikroba yang tidak berhasil ditumbuhkan pada media
padat dan hanya dapat tumbuh pada media cair
Untuk bakteri paling sesuai menggunakan agar cawan
Sampel
Pengenceran berseri dg larutan
garam fisiologis (0,85 %)
Penggoresan (jarum Ose) atau penyebaran
(batang gelas) pada media agar koloni tumbuh
menyebar
Penggoresan dilakukan berulang, sehingga
Diperoleh kultur murni
1 sel 1 koloni

Cara Penggoresan Kultur pada Agar Cawan ;

1. Goresan Langsung
2. Goresan Kuadran
3. Goresan Radian

Goresan Kuadran
http://www.personal.psu.edu/faculty/k/h/khb4/enve301/301labs/301lab
graphics/streak.gif

Metode Penggoresan
Dengan penggoresan terjadi pengenceran sel secara gradien
Goresan langsung
Goresan radian (unt
Unt mengkultur mikroba)
mengkultur
mikroba)

Goresan Kuadran (isolasi koloni tunggal untuk

mempelajari mikroba)
http://www.studentsguide.in/microbiology/microbiology-tools-techniques/special-methods-of-isolation-ofpure-culture.html

2. Teknik Penyebaran (Spread-plate)

Batang gelas

http://www.studentsguide.in/microbiology/microbiology-tools-techniques/special-methods-of-isolation-ofpure-culture.html

2. Teknik Penyebaran (Spread-plate)

Merupakan prosedur rutin untuk isolasi bakteri

& menggunakan peralatan yang sederhana
Kelemahan : hanya sejumlah kecil contoh yang
dapat digunakan/disebarkan pada media
Dua sel dapat bergabung menjadi membentuk
satu koloni
Contoh : bakteri yang menghasilkan lendir &
yang tidak pencegahan dengan
menambahkan deterjen

3. Teknik Penuangan (Pour-plate)

Prinsip : pengenceran contoh dengan

media agar cair (+/- 450C) dalam tabung
reaksi, sehingga distribusi sampel merata
dituang ke petri dish & dibiarkan
mengeras pada suhu ruang, lalu diinokulasi
Tidak cocok untuk isolasi mikroba psikrofilik
(suhu 0 30C, optimum 15C) ex:
Pseudomonas

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap06/lecture5.ht

4. Kultur Yang Diperkaya

Untuk mengisolasi bakteri yang mempunyai sifat fisiologis

yang khusus (jumlah kecil & tumbuh lambat)

Prinsip : menggunakan komposisi media dan kondisi

inkubasi tertentu, sehingga yang tumbuh hanya bakteri
tertentu
1

Media cair dgn substrat khusus

Contoh : bakteri tanah

(+)

(-)

Verifikasi

5. Teknik Pengenceran Berseri (Serial-dilution)

Digunakan jika mikroba dlm kultur campuran terdapat

dalam jumlah lebih besar dari pada mikroba lain.
Contoh : S. lactis dalam susu asam

Dengan tingkat pengenceran tinggi, sampel hanya

mengandung 1 galur mikroba

Perlu dicek kemurnian kultur

Teknik Pengenceran
Berseri (Serialdilution)

Isolasi Berhasil

Kultur murni : sel-sel mikroba yang ada

sejenis
Mikroba tampak mirip secara mikroskopis dan
menunjukkan hasil pewarnaan yang sama
Pada saat ditanam pada agar cawan, semua
koloni menunjukkan kesamaan

Identifikasi

Merupakan penggunaan kriteria yang ditetapkan

untuk klasifikasi dan nomenklatur untuk
mengidentifikasi mikroba dengan
membandingkan dengan ciri-ciri/ karakteristik
yang ada

Metode untuk identifikasi mikroba:

secara morfologi yaitu pengamatan ukuran,
bentuk dan susunan sel dengan bantuan
mikroskop, baik dengan pewarnaan maupun tidak

E. coli

Batang (basil)
40x
ungu

Bentuk & Susunan Sel

Sel
Bakteri

http://content.answers.com/main/content/img/elsevier/dental/f0396-02.jpg

Karakteristik Kultural
Tampilan pertumbuhan pada media padat
(bentuk koloni, tepi koloni, permukaan koloni dll)

Kultur pada Agar Miring

Pemeliharaan kultur murni

Tujuan :
1.Menjaga sampai periode tertentu mikroba tetap dalam
kondisi hidup (viable)
2.mencegah terjadinya perubahan genetik & tidak
terkontaminasi
Prosedur :
1.Kultur mikroba secara periodik dipindahkan ke media
baru/segar, contoh : media agar miring dan disimpan pada
suhu dingin (50C)
2.bakteri 2-3 minggu, fungi 3-4 minggu