UJIAN PRAKTEK KERJA LAPANG

PENGUJIAN PENYAKIT REPRODUKSI RUMINANSIA

DI BALAI VETERINER BANJARBARU

R.RR.DIAH NIBRAS I.M.P

125130100111038

Dosen Pembimbing Dosen Penguji

Prof. Dr. Aulanni’am, drh.,DES
Drh. Wawid Purwatiningsih, M. Vet
Drh. Aulia Firmawati, M. Vet

PROGRAM KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA
2016
LATAR BELAKANG
Penyakit Hewan Menular Strategis

IBR

DIAGNOSA
Pemeriksaan Lab.
Peta Situasi Brucellosis di Indonesia Tahun 2013
(Sumber: Direktorat Kesehatan Hewan, 2013)
Gambaran Serologis IBR di Sumatera Barat Tahun 2008-2013
(Sumber: Yulfitria dkk., 2013)
Seroepidemiologi BVD pada sapi di Indonesia
(Sumber: Sudarisman, 2011)

Jenis Sapi Jumlah Sampel Positif BVD Prevalensi

Sapi Perah 60 46 7%
Sapi Potong 90 25 28%
Sapi BIB 110 41 37%
Sapi BET 11 5 45%
Total 271 117 43,2%
RUMUSAN MASALAH
Bagaimanakah metode diagnosa untuk menentukan penyakit reproduksi pada
ruminansia melalui pemeriksaan laboratorium di Balai Veteriner Banjarbaru?

TUJUAN
Mengetahui metode diagnosa penyakit reproduksi pada ruminansia
secara laboratoris yang diterapkan di Balai Veteriner Banjarbaru.
MANFAAT

MAHASISWA

INFORMASI

EVALUASI
WAKTU,TEMPAT DAN METODE PKL

Januari hingga Februari 2016 Metode pengumpulan data:

Observasi lapang, partisipasi langsung,
wawancara dan data sekunder

Balai Veteriner Banjarbaru,

Kalimantan Selatan
Hasil Kegiatan

Instalasi
Lab.
Hewan
Bakteriologi
Percobaan

Lab. Lab.
Virologi Serologi
PENGUJIAN BRUCELLOSIS METODE RBT (Rose Bengal Test)

Jumlah Sampel Jenis Sampel Asal Sampel Hasil Pengujian (RBT) Keterangan

101 Serum kambing PE P0516033 Negatif (semua) Antigen: Pusvetma

(1:3), diuji lanjutan CFT

150 Serum sapi Bali Batola Negatif (semua) Antigen: Pusvetma;

Serum kontrol: IBASS
P0516012
BBVET Maros
149 Serum sapi Bali Sintang Negatif (semua) Antigen: Pusvetma;
Serum kontrol: IBASS
A0516015
BBVET Maros
85 Serum sapi Bali A0516023 Negatif (semua) Antigen: Pusvetma;
Serum kontrol: IBASS
BBVET Maros
Alat dan Bahan RBT (Rose Bengal Test)
 Hasil RBT (Rose Bengal Test)

Hasil negatif pengujian sampel Kontrol Positif RBT IBASS BBVET Maros
PENGUJIAN BRUCELLOSIS METODE CFT (Complement Fixation Test)

Prosedur pengujian:
• Pembuatan Red Blood Cell (RBC) 3% dan Hemolisin
• Pembuatan Antigen 1:100
• Titrasi Komplemen
• Persiapan Sampel
• Pengujian CFT
• Interpretasi Hasil
Pembuatan Red Blood Cell (RBC) 3% dan Hemolisin

Alsever Darah domba RBC PBS Hemolisin RBC 3%

Pembuatan Antigen 1:100

• Sebanyak 20 µL antigen ditambahkan 1980 µL PBS komer (antigen dari

Pusvetma)
Titrasi Komplemen

Darah marmut Serum marmut PBS RBC 3% dan

Hemolisin
Hasil titrasi komplemen gagal karena
terjadi endapan eritrosit pada semua
sumuran
PENGUJIAN BRUCELLOSIS METODE CFT (Complement
Fixation Test) Maros

Prosedur pengujian:
• Pembuatan Red Blood Cell (RBC) 3% dan Hemolisin
• Titrasi Komplemen
• Titrasi Hemolisin
• Persiapan Antigen
• Persiapan Sampel
• Pengujian CFT
• Interpretasi Hasil
Pembuatan Red Blood Cell (RBC) 3% dan Hemolisin

Alsever Darah domba RBC PBS Hematokrit 94%

Titrasi Komplemen

Complement
Diluent VBS
(stock)
10 µL 50 µL 450 µL
15 µL 67 µL 933 µL
25 µL 46 µL 955 µL
34 µL 30 µL 970 µL
56 µL 20 µL 980 µL
76 µL 13 µL 987 µl
111 µL 18 µL 1982 µL
171 µL 12 µL 1988 µL
256 µL 16 µL 3984 µL
399 µL 10 µL 3980 µL
555 µL 0 µL 4991 µL
Titrasi Hemolisin

Diluent Hs VBS
1 : 500 4 µL (stock) 1996 µL
1 : 1000 1000 (1 : 500) 1000 µL
1 : 2000 1000 (1 : 1000) 1000 µL
1 : 3000 1000 (1 : 2000) 1000 µL
1 : 4000 600 (1 : 2000) 300 µL
1 : 6000 500 (1: 3000) 500 µL
1 : 8000 400 (1 : 4000) 400 µL
Ø Tanpa hemolisin 400 µl
Persiapan Antigen

• Antigen = 1 bagian antigen + 99 bagian pengencer

= 300 µl antigen + 29700 µl VBS
Titrasi Komplemen dan Hemolisin
Komplemen 

 Hemolisin
Perhitungan Titrasi Komplemen dan Hemolisin
Perhitungan Titrasi Komplemen, Hemolisin dan Antigen

• Komplemen: 76; Hemolisin: 3000

• Komplemen:
76:5 = 15 C
C15 = 1 ml komplemen + 14 ml VBS
• Hemolisin
1/3000 : 2 = 1/1500
1/1499 = 10 µl Hs + 14990 µl VBS + 15 ml RBC 3%
• Antigen
1/100 = 1/99 = 300 µl antigen + 29700 µl VBS
Persiapan Sampel
• Inaktivasi sampel serum kambing P0516033
• Plate 1: 4029, 4017, 4006, 3983, 4206
• Plate 2: 4004, 4050, 3926, 3965, 4099
• Plate 3: 3988, 3880, 4040, 4013, 4009
• Plate 4: 4163, 4002, 4254, 4129, 3895
• Plate 5: 4056, 3971, 3946, 3498, 4201
• Plate 6: 4072, 4093, 4078, 4084, 4135
• Plate 7: 4102, 3974, 3956, 4007, 3979
• Plate 8: 4081, 3992, 3958, 4075, 4046
• Plate 9: 4096, 4020, 4272, 4242, 4008
• Plate 10: 3854, 4131, 4097, 3982, 4300
Pengujian CFT

• Pembacaan hasil CFT 10 plate, gagal karena kontrol positif dan negatif
sama (endapan) sehingga dilakukan titrasi ulang
Pengujian CFT (Titrasi Ulang)

• Titrasi komplemen dibuat C15 dan C11 sedangkan hemolisin dicoba pada 1/1000,
1/2000 dan 1/3000 pada 6 plate masing-masing plate 5 sampel
C15 dan 1/1000, 5 sampel
C11 dan 1/1000, 5 sampel
C15 dan 1/2000, 5 sampel
C11 dan 1/2000, 5 sampel
C15 dan 1/3000, 5 sampel
C11 dan 1/3000, 5 sampel
Pengujian CFT (Titrasi Ulang)

• Hasil titrasi berhasil pada C11 dan hemolisin 1/1000 dan 5 sampel menunjukkan
hasil negatif yaitu 4029, 4017, 4006, 3983, 4206
PENGUJIAN IBR (Infectious Bovine Rhinotracheitis) METODE ELISA

Kode/ Hasil Kode/ Hasil Kode/ Hasil

Kit ELISA (Infectious Bovine Rhinotracheitis
No. Urut No. Urut No. Urut
Virus (BHV1) gB Antibody Test Kit Hercheck 1 Negatif 10 Negatif 109 Negatif
IBR gB IDEXX
2 Negatif 101 Negatif 110 Negatif
3 Negatif 102 Negatif 111 Negatif
Serum sapi A0516007 dari Marabahan 4 Negatif 103 Negatif 112 Negatif
5 Negatif 104 Negatif 113 Negatif
6 Negatif 105 Negatif 114 Negatif
7 Negatif 106 Negatif 115 Negatif
8 Negatif 107 Negatif
9 Negatif 108 Negatif
PENGUJIAN BVD (Bovine Viral Diarrhea) METODE ELISA

No. Urut Hasil No. Urut Hasil No. Urut Hasil

1 Negatif 42 Negatif 89 Negatif
Kit ELISA (Antigen/ Serum Plus IDEXX Switzer
2 Negatif 43 Negatif 90 Negatif
land, Stationstrasse 12, 3097 Liebefeld-Bern,
5 Negatif 44 Negatif 91 Negatif
Switzerland)
6 Negatif 45 Negatif 92 Negatif
7 Negatif 46 Negatif 93 Negatif
Sampel serum sapi A0516023 dari Batola
8 Negatif 47 Negatif 121 Negatif
9 Negatif 48 Negatif 122 Negatif
10 Negatif 49 Negatif 123 Negatif
10 Negatif 50 Negatif 124 Negatif
11 Negatif 86 Negatif 125 Negatif
12 Negatif 87 Negatif 126 Negatif
41 Negatif 88 Negatif
TERIMA KASIH
Biosafety Level
TUGAS DAN FUNGSI BVET

Berdasarkan Peraturan Menteri Pertanian Republik Indonesia Nomor 61/Permentan/Ot.140/5/20

13, tanggal 24 Mei 2013 Tentang Organisasi Dan Tata Kerja Balai Veteriner (B-Vet) menyatakan b
ahwa Balai Veteriner yang selanjutnya disebut B-Vet adalah unit pelaksana teknis di bidang peter
nakan dan kesehatan hewan yang berada di bawah dan bertanggung jawab kepada Direktur Jend
eral Peternakan dan Kesehatan Hewan, dan secara teknis dibina oleh Direktur Kesehatan Hewan d
an Direktur Kesehatan Masyarakat Veteriner dan Pascapanen. B-Vet mempunyai tugas melaksana
kan pengamatan dan pengidentifikasian diagnosa, pengujian veteriner dan produk hewan
Visi dan Misi BPPV Regional V Banjarbaru

Visi :
Terwujudnya pelayanan penyidikan, pengujian dan diagnosa yang prima
dan profesional

Pengertian prima adalah :

BPPV Regional V Banjarbaru sebagai laboratorium kesehatan hewan yang memiliki wilayah pelaya
nan di seluruh Kalimantan dituntut untuk dapat melaksanakan fungsi pelayanan dalam hal penyidi
kan, pengujian penyakit hewan secara cepat, akurat dan efisien.

Pengertian professional adalah :

Dalam pelaksanaan fungsi penyidikan, pengujian dan diagnosa penyakit hewan harus didasarkan
atas kaidah ilmiah dan berbicara berdasarkan atas fakta yang ada, tanpa terpengaruh oleh kepenti
ngan tertentu.
Visi dan Misi BPPV Regional V Banjarbaru

Misi :

Meningkatkan dan memelihara kecepatan, ketepatan dalam penyidikan, surveilans, pengujian dan
diagnosa penyakit hewan.

Meningkatkan profesionalisme dalam perencanaan, pelaksanaan dan evaluasi kegiatan penyidikan,

surveilans, pengujian dan diagnosa penyakit hewan.

Melindungi sumberdaya hewan dan manusia dari penyakit eksotis, strategis, zoonosis maupun en
demis.

Meningkatkan kualitas sumberdaya manusia untuk dapat memanfaatkan sumberdaya laboratoriu

m berdayaguna.
Tarif Pengujian
 Hematokrit
• Hematokrit atau volume eritrosit yang dimampatka
n (Packed Cell Volume, PCV) adalah persentase vol
ume eritrosit dalam darah yang dimampatkan den
gan cara diputar pada kecepatan tertentu dan dala
m waktu tertentu
• Tujuan dilakukannya uji ini adalah untuk mengetah
ui konsentrasi eritrosit dalam darah
 TITRASI KOMPLEMEN CFT

1 2 3 4 5 6

A 2 4 8 16 32 64
B 3 6 12 24 48 96
C 4 8 16 32 64 128

Perhitungan pengenceran:

maka 1 bagian komplemen: (x-1)

 RBC 3% CFT MAROS
Perhitungan RBC 3%:
C1 x V1 = C2 x V2

Keterangan:
C1= hasil pembacaan mikro hematokrit (%)
V1= volume RBC awal
C2= 3%
V2= volume pengencer yang akan ditambahkan
Maka;
94% x 5 ml = 3% x V2
V2 = (94x5)/3
= 470/3
= 156,67 ml pengencer
Titrasi Kompelemen Marmut CFT Maros

1 2 3 4 5

2 4 8 16 32

3 6 12 24 48

4 8 16 32 64

Perhitungan pengenceran:

Maka pengenceran komplemen berdasarkan hasil titrasi adalah 1 µl komplemen

dalam 5 µL VBS (terlalu lemah)
Species Biovar/ Natural Host Human
Serovar Pathogen
B. abortus 1-6, 9 cattle yes
B.melitensis 1-3 goats, sheep yes

B. suis 1, 3 swine yes

2 hares yes
4 reindeer, caribou yes

5 rodents yes
B. canis none Dogs yes

B. ovis none Sheep no

B. neotomae none Desert wood rat no

B. maris (?) marine mammals ?

 Transmission to Humans
• Conjunctiva or broken skin on contact with infected tissues
– Blood, urine, vaginal discharges, aborted fetuses, placentas
• Ingestion
– Raw milk & unpasteurized dairy products (Cheese)
– Rarely through undercooked meat
 Transmission to Humans
• Inhalation of infectious aerosols
– Pens, stables, slaughter houses
• Inoculation with vaccines
– B. abortus strain 19, RB-51
– B. melitensis Rev-1
– Conjunctival splashes, injection
• Person-to-person transmission is rare
• Incubation varies
– 5 days to three months
 Diagnosis in Humans
• Isolation of organism
– Blood, bone marrow, other tissues
• Serum agglutination test
– Four-fold or greater rise in titer
– Samples 2 weeks apart
• Immunofluorescence Method
– Organisms in clinical specimens
• PCR
Blood cultures in trypticase soya br
oth (Castaneda’s method): Biphasic
medium. Sample inoculated bottle has t
o be tilted to flow the broth over solid
medium and keep it upright position at
370C.
The growth of brucellae is extremely slo
w.
Bone marrow cultures are more sensitiv
e than blood.
Demonstration of IgM , IgG and Ig A

ELISA is the best method.

Standard tube agglutination test:

Anti -O-polysaccharide of LPS. Killed strains of B. abortus as antigen.
Not useful for B.canis.

Modified Tube agglutination test: 2-mercaptoethanol is added to

serum before testing which causes disruption of IgM and only IgG ar
e detected.

Problems with TA test: Prozone phenomenon, Presence of blocking o

r non-agglutinating antibodies. False positives with cholera, tularemia
,yersinia or vaccination.
Contd…..
Castaneda strip test: Strip with colored brucella antigen. On addition of patients seru
m, if antibodies are present, prevents the flow of serum.
Brucellin Skin test: Delayed hypersensitivity.
Molecular techniques: PCR
Radiology: Alterations in infected vertebrae; Pedro Pons sign ( erosion of antero-s
uperior corner of lumbar vertebrae) and marked osteophytosis are suspecious of bru
cellic spondylitis.
 Diagnosis in Animals
Culture of urine and Milk.
Rapid latex agglutination test,
Rose Bengal card test. (Rose Bengal + B.abortus + Sodium azide)

Contd….
Milk Ring Test: Frequently used test.
A drop of colored brucella antigen (B.abortus/B.melitensis w
ith hematoxylin) is added to milk in a test tube, incubated i
n a water bath at 700C for 40-50 minutes.
Positive: Blue ring at the top leaving the milk unstained.
Negative: No ring. Milk remains uniformly blue.
 Transmission in Animals
• Ingestion / contact with infected tissues or
body fluids
– Mucous membranes, injections
• Venereal
– Swine, sheep, goats, dogs
– Fomites